Orientador: Caio Mauricio Mendes de Cordova. / A Ficha Catalográfica apresentada nessa Dissertação foi confeccionada pela Biblioteca Universitária - FURB, porém desconfigurou ao ser anexada. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional Blumenau, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Programa de Pós-Graduação em Química.

Orientador: Henry França Meier. / Coorientador: Vinicyus Rodolfo Wiggers. / Dissertação (Mestrado em Engenharia Química) - Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Centro de Ciências Tecnológicas, Universidade Regional de Blumenau, Blumenau.

O desenvolvimento de fungos do gênero Aspergillus e Penicillium em uvas destinadas a produção de vinho pode levar a contaminações por Ocratoxina A (OTA), uma micotoxina internacionalmente conhecida como nefrotóxica e possivelmente carcinogênica para humanos. O experimento realizado avaliou a presença de ocratoxina A, através da Cromatografia em Camada Delgada (CCD) com Detector de Carga Acoplada (DCA), em 88 vinhos da região Sul do Brasil, referentes à safra 2009. As amostras estavam divididas em 75 oriundas do Rio Grande do Sul, 9 de Santa Catarina e 4 do Paraná, 56 da variedade Cabernet Sauvignon e 32 da variedade Merlot. A OTA foi determinada através de imagens adquiridas sob luz UV e quantificada através da utilização do software ImageJ. Duas formas de limpeza foram testadas para recuperação. A média de recuperação com coluna de imunoafinidade foi de 82,33%. Recuperação média para análise com limpeza por NaHCO3 1,25% foi de 76,95%. Os limites de quantificação e detecção foram 0,8 μg/L e 0,2 μg/L, respectivamente. Os resultados apresentaram 5 amostras contaminadas por OTA, com incidência de 5,68%. A variedade Cabernet Sauvignon apresentou 3 amostras positivas e a Merlot 2 amostras. A maior concentração encontrada foi de 0,84 μg/L, em uma das 3 amostras positivas do Rio Grande do Sul. Santa Catarina e Paraná apresentaram 1 amostra positiva cada, e suas concentrações estavam abaixo do limite de quantificação. / The presence of fungi from Aspergillus and Penicillium genera in grapes for wine production can lead to Ochartoxin A (OTA) contaminations, a mycotoxin internationally recognized as nephrotoxic and possibly carcinogen to humans. The experiment evaluated the presence of OTA trough Thin Layer Chromatography (TLC) with Charge Coupled Detector (CCD) in 88 wines from the south region of Brazil, 2009 vintage. Samples were divided in 75 originated from Rio Grande do Sul state, 9 from Santa Catarina and 4 from Paraná, 56 made from Cabernet Sauvignon and 32 from Merlot. OTA was determined trough analysis of acquired images and quantified with the software ImageJ. Two different clean-up were tested for recovery verification. The mean recovery with immunoaffinity column (IAC) was 82.33%. The mean recovery for analysis with NaHCO3 1.25% clean-up was 76.95. The quantification and detection limits were 0.8 μg/L e 0,2 μg.L-1, respectively. The results shown 5 OTA contaminated samples, with 5.68% incidence. Cabernet Sauvignon variety had 3 positive samples and Merlot had 2. The highest concentration found was 0.84 μg.L-1, in one of three positive samples from Rio Grande do Sul. Santa Catarina e paraná had one positive sample each, and concentrations below the quantification limit.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2011 / Bibliografia: f. 63-73 / Muitas pessoas que sofrem de doença renal Crônica, DRC, são submetidas a terapias renais substitutivas dentre elas a hemodiálise, a mais aceita e utilizada, que é um tratamento intermitente realizado três vezes por semana em sessões com duração entre três / Many people that have chronic kidney disease are subjected to renal therapies, among them, the hemodialysis, the most accepted and use being a treatment performed three times per week in sessions periods between three and four hours. The blood lines used

GOIS, Roberto Wagner da Silva. Estudo químico e avaliação biológica de Bauhinia acuruana Moric. 2015. 218 f. Tese (Doutorado em química)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-10-11T17:25:31Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_rwsgois.pdf: 7198772 bytes, checksum: 661dca62d02387220a2ff6ec267d54f4 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-10-11T23:52:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_rwsgois.pdf: 7198772 bytes, checksum: 661dca62d02387220a2ff6ec267d54f4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T23:52:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_rwsgois.pdf: 7198772 bytes, checksum: 661dca62d02387220a2ff6ec267d54f4 (MD5) Previous issue date: 2015 / The present work reports the chemical research of the roots, stem and leaves from Bauhinia acuruana. In this study were obtained the extracts in hexane, ethyl acetate and methanol of the leaves and ethanol extracts of the roots and stems. The chromatographic fractionation of extracts allowed the isolation of sesquiterpenes 1β, 6α- dihydroxy 4-(14)-eudesmene (BA-1) and aromadendrane-4β,10α-diol (BA-2); the steroid glycosylated sitosterol (BA-4); the bibenzys 2-hydroxy-2’,3’,5’- trimethoxybybenzyl (BA-5) and 2-hydroxy-3’,5'-dimethoxybybenzyl (BA-6); the oxepin derivatives pacharin (BA-7) and bauhiniastatin 1 (BA-8); the flavonoids quercitrin (BA-3), (-)-fisetinidol (BA-9), (2R, 3S)-2-(3’,4’-dihydroxiphenyl)-5-methoxycroman-3,7-diol (BA-10), (2R,3S)-2-(3’,4’-dihydroxiphenyl)-5-methoxy-6-methylcroman-3,7-diol (BA-11) and astilbin (BA-13), as well as the steroidal mixture sitosterol and stigmasterol (BA-12). It is worth noting that the secondary metabolites BA-1 and BA-2 are unprecedented in the genus, while BA-5 and BA-11 unprecedented in the literature and BA-10 unpublished as natural product. The structures of the compounds were elucidated through spectroscopic techniques (IV, NMR 1D and 2D), mass spectrometry and comparison with data reported in literature. Ethanol extracts of the roots and of the stems were evalueted for antioxidant activity, showing significant activity at concentrations of 0.1 mg/mL and 1.0 mg/mL, respectively. BA-7 was evaluated for its larvicidal activity against Aedes aegypti and presented LC50 value of 78.9 ± 1.8 µg/mL. In addition, BA-5, BA-7, BA-8, BA-9, BA-10 and BA-11 were submitted to evaluation of cytotoxic activity and BA-5, BA-7 and BA-8 presented significant cytotoxic activity. / O presente trabalho relata a investigação química das raízes, do caule e das folhas de Bauhinia acuruana. Nesse estudo foram obtidos os extratos em hexano, em acetato de etila e em metanol das folhas e os extratos em etanol das raízes e do caule. O fracionamento cromatográfico destes extratos permitiu o isolamento dos sesquiterpenos 1β, 6α-diidróxi-4(14)-eudesmeno (BA-1), aromadendrano-4β,10α-diol (BA-2); do esteroide sitosterol glicosilado (BA-4); dos bibenzis 2-hidroxi-2’,3’,5’-trimetoxibibenzila (BA-5) e 2-hidroxi-3’,5’-dimetoxibibenzila (BA-6); dos derivados oxepínicos pacharina (BA-7) e bauhiniastatina 1 (BA-8); dos flavonoides quercitrina (BA-3), (-)-fisetinidol (BA-9), (2R, 3S)-2-(3’,4’-diidroxifenil)-5-metoxicromano-3,7-diol (BA-10), (2R, 3S)-2-(3’,4’-diidroxifenil)-5-metoxi-6-metilcromano-3,7-diol (BA-11) e astilbina (BA-13); bem como da mistura dos esteroides sitosterol e estigmasterol (BA-12). Cabe ressaltar que os metabólitos secundários BA-1 e BA-2 são inéditos no gênero, enquanto BA-5 e BA-11 são inéditos na literatura e BA-10 é inédito como produto natural. As estruturas dos compostos foram elucidadas através de técnicas espectroscópicas (IV, RMN 1D e 2D), espectrometria de massas e comparação com dados descritos na literatura. Os extratos em etanol das raízes e dos caules foram submetidos a testes de atividade antioxidante, apresentando atividades significativas nas concentrações de 0,1 mg/mL e 1,0 mg/mL. BA-7 foi avaliado quanto à sua atividade larvicida sobre Aedes aegypti e apresentou valor de CL50 igual a 78,9±1,8 µg/mL. Por outro lado, BA-5, BA-7, BA-8, BA-9, BA-10 e BA-11 foram submetidos à avaliação de atividade citotóxica frente a seis linhagens tumorais (HCT 116, SF 295, OVCAR, MCF-7, NCIH292 e HL60). BA-5, BA-7 e BA-8 apresentaram atividade citotóxica significativa.

Made available in DSpace on 2015-02-05T21:21:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 331103.pdf: 1619905 bytes, checksum: 083bd2d2e884edeec88e8b5cddb5e931 (MD5) Previous issue date: 2014 / A intensa busca por novos biomarcadores de doenças com intuito de melhorar o diagnóstico e acompanhar a evolução da doença tem feito os pesquisadores reavaliar compostos antes ignorados, como a citrulina. Este aminoácido não proteico que faz parte do ciclo da ureia ganhou destaque nos últimos anos como marcador da função intestinal, auxiliando na rejeição ao transplante. A citrulina quando associada com outros marcadores também tem sido utilizada para acompanhar o desenvolvimento de algumas doenças, dentre elas a sepse e falência renal. Apesar de bastante avaliada, não há uma padronização metodológica para análise desse aminoácido, havendo necessidade do desenvolvimento de metodologias que sejam simples, baratas e que possam ser implementadas em exames de rotina. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver e validar metodologias por cromatografia líquida e alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC), capazes de identificar e quantificar o aminoácido citrulina em plasma. Foi possível desenvolver métodos para quantificar a citrulina por CLAE e EC sem a utilização de agentes de derivatização. Ambas as metodologias atenderam os parâmetros de precisão, com coeficiente de variação inferior a 4%, e exatidão, respectivamente, de 75 e 95%. A faixa de linearidade obtida apresentou coeficientes de determinação de 0,9905 e 0,996, e limites de detecção de 4,07 e 2,25 µg.mL-1 e quantificação de 12,34 e 6,88 µg.mL-1, respectivamente, para CLAE e EC. A quantificação da citrulina por ambas as técnicas mostrou ser possível, porém, a EC apresentou resultados mais promissores.<br> / Abstract: The intense search for new biomarkers of disease with the aim of improving diagnosis and monitor disease progression has made researchers reevaluate compounds previously ignored, such as citrulline. This non-protein amino acid that is part of the urea cycle has gained prominence in recent years as a marker of intestinal function, aiding in transplant rejection. Citrulline when associated with other markers have also been used to monitor the development of some diseases such as sepsis and renal failure. Despite being fairly analyzed there is no standardization for the analysis of this amino acid, there is need to develop methodologies that are simple, cheap and can be implemented in routine analysis. This study aimed to develop and validate methodologies for HPLC and CE can identify and quantify citrulline in plasma. It was possible to develop methods for quantifying citrulline by HPLC and CE without the use of derivatizing agents. Both methodologies met the precision data with a coefficient of variation less than 4%, the accuracy found was 75 and 95%. The range of linearity obtained exhibited correlation coefficients of 0.9905 and 0.996 and detection limits 4.07 and 2.25 µg/mL and quantification of 12.34 and 6.88 mg/mL, respectively for HPLC and CE. The quantification of the citrulline showed to be possibleby both techniques, but CE was the technique that showed more promising results.

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-04-05T15:46:52Z No. of bitstreams: 1 ANÁLISE DE COMPOSTOS FENÓLICOS E ATIVIDADE ANTIOXIDANTE EM CACHAÇAS BAIANAS.pdf: 4100281 bytes, checksum: 4265e8fdfa5b40b40c53c7ad938405af (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-05-10T18:02:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ANÁLISE DE COMPOSTOS FENÓLICOS E ATIVIDADE ANTIOXIDANTE EM CACHAÇAS BAIANAS.pdf: 4100281 bytes, checksum: 4265e8fdfa5b40b40c53c7ad938405af (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-10T18:02:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ANÁLISE DE COMPOSTOS FENÓLICOS E ATIVIDADE ANTIOXIDANTE EM CACHAÇAS BAIANAS.pdf: 4100281 bytes, checksum: 4265e8fdfa5b40b40c53c7ad938405af (MD5) / CAPES / A presença de compostos fenólicos em amostras de cachaça deve-se principalmente à etapa de envelhecimento. Esses compostos são responsáveis pela cor, sabor e aroma destas bebidas, além de possuírem propriedades antioxidantesque podem proporcionar efeitos benéficos a saúde humana. Neste trabalho foi desenvolvido um método de extração em fase sólida de substâncias fenólicas presentes em cachaça não envelhecidas para posteriordeterminação da atividade antioxidante, quantificação de fenólicos e flavonoides totais e da composição defenólicos por Cromatografia Líquida de Ultra Rápida com detectores de fluorescência e arranjo de diodos (UFLC-DAD-RF). Foram estudados 3 recheios para cartuchos de SPE no preparo de amostras e a otimização foi realizada utilizando a metodologia de Folin Ciocalteau com auxílio de ferramentas quimiométicas. Os resultados possibilitaram escolha daespuma de poliuretano como fase sólida dos cartuchos pois recuperações superiores a 74,94% foram obtidas onde, para todos os cartuchos a mistura de acetonitrila e metanol proporcionaram maiores valores de recuperação de 97,04%, 83,24%, 79,20%, 57,70%, 68,60% para EPU, XAD2, XAD7, C18 e Stracta X respectivamente. Para análises cromatográficas um cromatógrafo líquido ultrarápido foi utilizado na separação de 16 compostos fenólicos em apenas 12 minutos, com LOD e LOQ na faixa de 0,004 a 0,011 e de 0,008 a 0,036 mg L-1respectivamente, repetitividade e a precisão intermediária apresentaram desvio padrão relativo (RSD) variando de 0,16 a 13,92 % e 0,40 a 12,07% respectivamente.Teste de comparação das médias de Tukey permitiu avaliar similaridades das tanto na quantificação dos compostos fenólicos analisados por cromatográfica quanto nos métodos espectrofotométricos. A análise dos componentes principais foi aplicada à análise cromatográfica separando dois grupos de amostras envelhecidas e não envelhecida, já nas análises espectroscópicas um terceiro grupo foi separado as amostras de cachaça orgânica. Foram obtidos espectros UV/Vis das diferentes amostras o que possibilitou através análise multivariada, com uma taxa de sucesso 78,21% ao nível de 95% de confiança, a separação de dois grupos de cachaças envelhecidas e não envelhecidas. A espectrofotometria foi aplicada nas análises de atividade antioxidante foram aplicadas metodologias de sequestro de radicais livres (ABTS+• e DPPH•) e de transferência de elétrons (FRAP) o que permitiu avaliar a correlação dos resultados obtendo correlações significativas de acordo com a tabela de valores críticos do coeficiente de correlação r de Pearson. Os ensaios espectrofotométricos aliados à análise dos componentes principais possibilitou a explicação de 90,65% referente á separação de três grupos de amostras destacando a cachaça orgânic / The presence of phenolic compounds in the cachaça is mainly due to the aging step. These compounds are responsible for the color, flavor and aroma of these drinks, in addition to having antioxidant properties that may be beneficial to human health. This work developed a method of solid phase extraction of phenolic substances in cachaça not aged for later determination of antioxidant activity, quantification of total phenolic and flavonoid and phenolic composition by Ultra Fast Liquid Chromatography with fluorescence and arrangement diodes detectors (UFLC-DAD-RF). 3 fillings for SPE cartridges were studied in the sample preparation and the optimization was performed using the method of Folin Ciocalteu with the aid of chemometric tools. It was possible to choose the polyurethane foam as the cartridges for solid phase to 74.94% higher recoveries were obtained, where, for all cartridges mixture of acetonitrile and methanol yielded higher recoveries from 97.04% 83.24% , 79.20%, 57.70%, 68.60% for UPC XAD2, XAD7, C18 and Stracta X respectively. In one chromatographic analysis ultrafast liquid chromatograph was used for separation of phenolic compounds 16 in only 12 minutes with LOD and LOQ in the range from 0.004 to 0.011 and 0.008 to 0.036 mg L-1, respectively, intermediate precision and repeatability showed relative standard deviation (RSD) ranged from 0.16 to 13.92%, and 0.40 to 12.07%, respectively. Test comparison of Tukey's possible to evaluate similarities of both the quantification of phenolic compounds analyzed by chromatography as in spectrophotometric methods. The principal component analysis was applied to chromatographic analysis separating two groups of aged samples and not aged since spectrophotometric analysis in a third group was separated samples of organic cachaça.Were obtained UV / Vis spectra of different samples which enabled through multivariate analysis, with a success rate 78.21% at 95% confidence, the separation of two groups of aged cachaça and not aged. Spectroscopy was applied in the analysis of antioxidant activity were applied scavenging free radicals methodologies (ABTS+• and DPPH•) and electron transfer (FRAP) allowing to evaluate the correlation of the results obtained significant correlations according to the table of values Critics of the correlation coefficient r of Pearson. The spectrophotometric assays combined with principal component analysis allowed the explanation of 90.65% relative separation will of three groups of samples highlighting the organic cachaça.

O desenvolvimento de fungos do gênero Aspergillus e Penicillium em uvas destinadas a produção de vinho pode levar a contaminações por Ocratoxina A (OTA), uma micotoxina internacionalmente conhecida como nefrotóxica e possivelmente carcinogênica para humanos. O experimento realizado avaliou a presença de ocratoxina A, através da Cromatografia em Camada Delgada (CCD) com Detector de Carga Acoplada (DCA), em 88 vinhos da região Sul do Brasil, referentes à safra 2009. As amostras estavam divididas em 75 oriundas do Rio Grande do Sul, 9 de Santa Catarina e 4 do Paraná, 56 da variedade Cabernet Sauvignon e 32 da variedade Merlot. A OTA foi determinada através de imagens adquiridas sob luz UV e quantificada através da utilização do software ImageJ. Duas formas de limpeza foram testadas para recuperação. A média de recuperação com coluna de imunoafinidade foi de 82,33%. Recuperação média para análise com limpeza por NaHCO3 1,25% foi de 76,95%. Os limites de quantificação e detecção foram 0,8 μg/L e 0,2 μg/L, respectivamente. Os resultados apresentaram 5 amostras contaminadas por OTA, com incidência de 5,68%. A variedade Cabernet Sauvignon apresentou 3 amostras positivas e a Merlot 2 amostras. A maior concentração encontrada foi de 0,84 μg/L, em uma das 3 amostras positivas do Rio Grande do Sul. Santa Catarina e Paraná apresentaram 1 amostra positiva cada, e suas concentrações estavam abaixo do limite de quantificação. / The presence of fungi from Aspergillus and Penicillium genera in grapes for wine production can lead to Ochartoxin A (OTA) contaminations, a mycotoxin internationally recognized as nephrotoxic and possibly carcinogen to humans. The experiment evaluated the presence of OTA trough Thin Layer Chromatography (TLC) with Charge Coupled Detector (CCD) in 88 wines from the south region of Brazil, 2009 vintage. Samples were divided in 75 originated from Rio Grande do Sul state, 9 from Santa Catarina and 4 from Paraná, 56 made from Cabernet Sauvignon and 32 from Merlot. OTA was determined trough analysis of acquired images and quantified with the software ImageJ. Two different clean-up were tested for recovery verification. The mean recovery with immunoaffinity column (IAC) was 82.33%. The mean recovery for analysis with NaHCO3 1.25% clean-up was 76.95. The quantification and detection limits were 0.8 μg/L e 0,2 μg.L-1, respectively. The results shown 5 OTA contaminated samples, with 5.68% incidence. Cabernet Sauvignon variety had 3 positive samples and Merlot had 2. The highest concentration found was 0.84 μg.L-1, in one of three positive samples from Rio Grande do Sul. Santa Catarina e paraná had one positive sample each, and concentrations below the quantification limit.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Pós-Graduação em Química, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-05-28T16:04:36Z No. of bitstreams: 1 2013_EricaPachecoSilva.pdf: 4969485 bytes, checksum: 976df8dcaaf53e3fccc2efe29f301d35 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-06-05T15:35:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_EricaPachecoSilva.pdf: 4969485 bytes, checksum: 976df8dcaaf53e3fccc2efe29f301d35 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-05T15:35:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_EricaPachecoSilva.pdf: 4969485 bytes, checksum: 976df8dcaaf53e3fccc2efe29f301d35 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi otimizar e validar métodos multirresíduos para determinação por LC-MS/MS de resíduos de 19 medicamentos veterinários, incluindo 4 metabólitos de nitrofuranos, em amostras de leite e ovos. Na etapa de otimização, as condições ideais de extração foram determinadas empregando planejamento experimental 2n com ponto central. No procedimento baseado no método QuEChERS para determinação de 15 medicamentos em ambas matrizes, 10 mL de acetonitrila acidificada foram adicionados a 10 g de amostra, 4 g de MgSO4 e 1 g de NaAc. O sobrenadante foi submetido à etapa de clean up com 150 mg de MgSO4 e 50 mg de PSA para cada mL de extrato, filtrado e analisado por LC-MS/MS. O procedimento utilizando extração líquido-líquido com purificação em baixa temperatura (ELLPBT) em amostras de leite foi feito com 8,0 mL de acetonitrila/4 g de amostra, ultrassom por 15 minutos e congelamento por 16 h. Nas amostras de ovos, acrescentou-se 0,8 g de NaCl junto com 8 mL de acetonitrila e o tempo de ultrasson foi de 5 minutos. A determinação de nitrofuranos envolveu hidrólise ácida destes medicamentos na amostra, derivatização dos metabólitos com 2- nitrobenzaldeído (2-NBA) por 16 h/40 ºC e ELL com acetato de etila. Para leite, fez-se necessário adicionar 1,25 g de NaCl e resfriar o extrato para diminuir a formação de emulsão. Os métodos QuEChERS e ELL para nitrofuranos otimizados foram satisfatoriamente validados, com LOQ entre 0,30 (cloranfenicol) a 5,0 ng/g ou mL (QuEChERS) e 0,50 ng/g ou mL (nitrofuranos). No total, 51 amostras de ovos coletadas no comércio foram analisadas. Duas amostras foram positivas, uma continha lincomicina (110 ng/g), substância sem limite máximo de resíduo (LMR) estabelecido no país, e outra sulfametazina (242 ng/g), em níveis acima do LMR (10 ng/g). A avaliação do risco indicou ser improvável que a ingestão desses compostos pelo consumo de ovos represente um risco para a saúde. Porém, é necessário um monitoramento mais efetivo desses medicamentos em produtos de origem animal pelos órgãos competentes, incluindo carne e leite, para garantir o uso de boas práticas pelos produtores e uma avaliação da eposição na dieta mais completa. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this work was to optimize and validate multiresidue methods for the LC-MS/MS analysis of 19 veterinary drugs residues, including 4 nitrofuran metabolites in milk and eggs. The optimal method conditions were selected using experimental planning. The QuEChERS method, used to determine the 19 drugs in both matrices, was conducted using extraction of 10 g sample with 10 mL of acidic acetonitrile, 4 g MgSO4 and 1 g NaAc, followed by a clean-up step with150 mg of MgSO4 and 50 mg of PSA per mL of the extract, which was filtered and analyzed by LC-MS/MS. The procedure for milk using liquid–liquid extraction with purification at low temperature (LLE-LTP) was conducted with 8 mL acetonitrile/4 g sample, ultrasound for 15 min and freezeing for 16 hours. For egg samples, further addition of 0.8 g of NaCl and 5 min of ultrasound were necessary. The method for nitrofurans involved the acid hydrolysis of the drug present in 1 g sample, derivatization of the metabolites with 2-nitrobenzaldehyde (2-NBA) for 16 h/ 40 ºC and ELL with 8 mL of ethyl acetate. For milk, the addition of 1.25 g of NaCl during the extraction and cooling of the sample extract were needed to decrease emulsion formation. The QuECHERS and nitrofurans methods were satisfactorily validated, with LOQ ranging from 0.3 (chloramphenicol) to 5 ng/g or mL (QuECHERS) and 0.5 ng/g or mL (nitrofurans). In total, 51 samples of eggs were analyzed. Two samples were positive, one containing lincomycin (110 μg/kg), substance with no established MRL in Brazil, and the other sulfamethazine (242 μg/kg), at levels above the MRL (10 ng/g). The risk assessment indicated that it is unlikely that the intake of these compounds from the consumption of eggs represents a human risk to consumers. However, government authorities should monitor more effectively these veterinary drugs in animal products, including also milk and mean, to garanttee the application of good practices by food producers and allow a more complet dietary exposure assessment.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-07-05T13:19:18Z No. of bitstreams: 1 2013_HarryMoralesDuque.pdf: 4746729 bytes, checksum: ed7f8beb39d7b64ee26f813c8d6ac30a (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-07-08T14:11:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_HarryMoralesDuque.pdf: 4746729 bytes, checksum: ed7f8beb39d7b64ee26f813c8d6ac30a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-08T14:11:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_HarryMoralesDuque.pdf: 4746729 bytes, checksum: ed7f8beb39d7b64ee26f813c8d6ac30a (MD5) / As peçonhas escorpiônicas têm sido alvo de pesquisas por possuírem componentes com diversas atividades biológicas, as quais são responsáveis pelas alterações fisiológicas observadas no escorpionismo. Dentre esses componentes, estão as toxinas que agem em canais para potássio (KTxs), as quais têm sido caracterizadas e divididas em subfamílias segundo a sua estrutura primária. O objetivo desta pesquisa foi procurar novas KTxs na peçonha do escorpião colombiano Tityus sp. utilizando duas estratégias: a transcritômica e a proteômica. Uma biblioteca de cDNA foi construída, a partir da glândula de peçonha do escorpião e da sua peçonha foram isoladas e caracterizadas KTxs por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF/TOF e tipo ESI. Os peptídeos isolados foram testados por meio da técnica eletrofisiológica de patch clamp (whole cell). A partir da biblioteca de cDNA, foram caracterizadas cinco sequências precursoras que codificam prováveis KTx: três delas são pertencentes à subfamília α-KTx15, uma à subfamília α-KTx12 e uma à subfamília α-KTx18. Da peçonha, foram sequenciadas outras quatro KTxs com massas moleculares de 2430, 3590, 3640 e 4171 Da. Estas KTxs foram + capazes de diminuir a corrente de K em células do gânglio dorsal de ratos. A caracterização destas novas KTxs reflete o amplo espectro de expressão deste tipo de toxinas e as variadas estratégias moleculares utilizadas pelos escorpiões para produção de componentes neuroativos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The venom scorpions have been object of investigations by its different activities biological from components, which are responsible by the physiologic alterations observed in the scorpionism. Within these components, the toxins that target potassium channels (KTxs) are present, which have been characterized and divided according primary structure. The aim was search new KTxs in the Colombian scorpion Tityus sp. venom using two strategies: the transcriptomic and proteomic. The scorpion venom gland a cDNA library was constructed, and from venom, KTxs were characterized using high performance liquid chromatographic (HPLC), mass spectrometry MALDI-TOF/TOF and ESI type technical. The isolated peptides were tested with patch clamp (whole cell) electrophysiological technique. Four precursors likely KTxs were characterized: three α-KTx15, one α-KTx12 and one α-KTx18 like subfamilies. Additionally, four KTxs-like were sequenced from scorpion venom with molecular masses 2430, 3590, 3640 and 4171 Da. These slightly decreased levels potassium current on dorsal root ganglion. The characterization these new KTxs reveals a wide spectrum of KTxs-type toxins and one varied molecular strategy for neuroactive compounds production also.