Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissGRRMS.pdf: 1511728 bytes, checksum: 7d61e2ac2b83bcccf28d5a1ace492dca (MD5) Previous issue date: 2007-02-27 / Financiadora de Estudos e Projetos / Cysteine proteases are enzymes found in many organisms and are characterized by the presence of cysteine residue in their active site. These proteases play an important role in the organism metabolism. In pathogenic organisms, for example, cysteine proteases may be involved in the pathogenicity process by unbalancing of the biological functions of the host (biochemical and physiological regulation). Since they are involved in several diseases, these enzymes have been considered of great interest for many researchers. The current work aims to express in E. coli a recombinant form of an ORF XAC2853 predicted to be a cysteine protease by annotation of the genome of Xanthomonas axonopodis pv citri. This bacterium is responsible for citrus canker, an infection affecting citrus species which can be evidenced by superficial lesions and early fall of leaves and fruits, thus resulting in significant losses to world agriculture. After expression, the protein was purified by nickel column affinity chromatography and inclusion body solubilization, inasmuch as this protein is almost fully insoluble. The purified protein was used to investigate the activity against such synthetic substrates as Z-FR-MCA and Z-RR-MCA, and no proteolytic activity was found. However, studies in vivo using clones of E. coli expressing the recombinant protein evidenced proteolytic activity against casein. In an attempt to demonstrate the involvement of this probable protease in the pathogenicity of Xac, the knockout of the cromossomal gene in Xac was performed. A mutant having the disrupted gene was obtained and characterized. The assays of the mutant growth, when compared with the wild strain, indicate that the cysteine protease may be involved in the pathogenicity of Xac, since the inactivation of its gene by the transposon insertion resulted in a less virulent strain. In this sense, this protein may be a promising target for the combat of citrus canker. / As cisteíno proteases são enzimas presentes nos diferentes organismos e são caracterizadas pela presença de um resíduo de cisteína em seu sítio ativo. Essas proteases apresentam relevante papel no metabolismo desses organismos. No caso de organismos patogênicos, por exemplo, podem estar envolvidas no processo de patogenicidade por gerar o desequilíbrio das funções biológicas do hospedeiro (regulação bioquímica e fisiológica). Por esta razão, essas enzimas tem sido alvo de grande interesse por parte dos pesquisadores, uma vez que se encontram envolvidas em diversas doenças. Neste trabalho visamos à expressão em E. coli da forma recombinante de uma ORF XAC2853 predita como uma cisteíno protease na anotação do genoma de Xanthomonas axonopodis pv citri. Esta bactéria é responsável pelo cancro cítrico, uma infecção que afeta citros, caracterizando-se pelo aparecimento de lesões superficiais e queda precoce de folhas e frutos, resultando em grandes perdas para a agricultura mundial. Uma vez expressa a proteína, a mesma foi purificada por afinidade em coluna de níquel assim como pela solubilização dos corpos de inclusão, pois esta proteína encontra-se quase que exclusivamente insolúvel. A proteína purificada foi utilizada nos estudos de atividade contra os substratos sintéticos Z-FR-MCA e Z-RR-MCA não sendo verificada atividade proteolítica. No entanto, estudos de atividade realizados in vivo, com clones de E. coli expressando a proteína recombinante, demonstraram atividade proteolítica contra a caseína. Na busca de demonstrar o envolvimento desta provável protease na patogenicidade de Xac, foi realizado o nocaute do gene cromossomal que a codifica na bactéria. Um mutante com o gene inativado pela inserção de um transposon foi obtido e caracterizado, e os ensaios de crescimento desse mutante, comparado com o crescimento da linhagem selvagem, permitem concluir que a cisteíno protease estudada pode estar envolvida na patogenicidade de Xac, uma vez que a inativação do seu gene pela inserção do transposon gerou uma linhagem menos virulenta. Desta forma, esta proteína pode ser um alvo promissor para o combate ao cancro cítrico.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1613.pdf: 2733672 bytes, checksum: 5d28936faff68884f2e78dbc12f2ebcb (MD5) Previous issue date: 2007-04-27 / Financiadora de Estudos e Projetos / Chromosomes of distinct species of Triportheus (Characiformes, Characidae) from different hydrographic basins in Brazil, as well as in Argentina, were analyzed in the present work. Triportheus nematurus, from Piracicaba River (São Paulo State, Brazil), was analyzed for the first time, using conventional cytogenetic techniques, base-specific fluorochromes and physical mapping of 18S rDNA and 5S rDNA. The diploid number found in all species was 2n= 52 chromosomes, in both males and females. Females presented a pair of quite differentiated heteromorphic chromosomes, characterizing a ZZ/ZW sex chromosome system. The Z chromosome is the largest in the karyotype, bearing constitutive heterochromatin at pericentromeric and telomeric regions. The W chromosome is mostly heterochromatic, showing a heterogeneous heterochromatin, composed of GC- and AT-rich regions The Ag-NORs were equivalent to 18S rDNA sites detected through fluorescent in situ hybridization. The 5S rDNA is syntenic and adjacent to 18S rDNA site, characterizing an uncommon situation amongst fishes. The results obtained in T. nematurus agree with previous studies in this group, reinforcing the basal condition of the system ZZ/ZW in the phylogeny of this genus, prior to speciation events. Besides T. nematurus, other seven species/populations of Triportheus were analyzed by FISH with 18S and 5S rDNA probes. The results confirmed the presence of 18S sites on the W chromosome in all Triportheus species herein studied, even when Ag-NORs showed to be inactive. The 5S rDNA sites, not reported in this group so far, were always located on short arms of a single chromosomal pair, close to centromeres. The only exception was T. auritus, which presented ten 5S rDNA sites. Two distinct T. nematurus populations (Piracicaba River SP and Paraná River Argentina) presented synteny between 18S and 5S ribosomal genes, located on short arm of a NOR-bearing chromosomal pair. A probe for whole chromosome painting (WCP), specific to the Z chromosome of T. nematurus (Piracicaba River), was obtained by microdissection, followed by unspecific amplification via DOP-PCR (Degenerate Oligonucleotide Primed-PCR). Fluorescent in situ hybridization with such probe was performed in Triportheus species, as well as in other Characidae species belonging to genus closed to Triportheus. In male specimens of Triportheus, both Z chromosomes (1st large metacentric pair) presented conspicuous marks over their whole extension. In females, the Z chromosome showed the same pattern observed in males while the W chromosome bears only a subtle signal on the short arm, or on the long arm close to centromere, according to species. Therefore, the region of the W chromosome with homology to Z chromosome is relatively small. All the other Characidae species analyzed presented no positive signals after hybridization using Z chromosome of Tirportheus nematurus as a probe, even in those apparently closely related to this genus. Thus, these results stress out, positively, that the ZZ/ZW system should actually correspond to a synapomorphy shared by Triportheus species, likely to be unique to this Characidae group. / No presente estudo foram analisados os cromossomos de distintas espécies de Triportheus (Characiformes, Characidae), de diferentes bacias hidrográficas do Brasil, assim como da Argentina. Triportheus nematurus, proveniente do rio Piracicaba - SP, foi analisada pela primeira vez, utilizando técnicas de estudo convencionais, fluorocromos base-específicos e o mapeamento físico dos sitos de rDNA 18S e de rDNA 5S. O número diplóide encontrado foi de 2n=52 cromossomos, tanto em machos como em fêmeas. As fêmeas apresentaram um par de cromossomos heteromórficos bem diferenciados, caracterizando um sistema de cromossomos sexuais do tipo ZZ/ZW. O cromossomo Z é o maior do complemento, com a ocorrência de heterocromatina constitutiva nas regiões pericentromérica e teloméricas. O cromossomo W é em grande parte heterocromático, evidenciando heterocromatina heterogênea, composta por regiões GC- e AT-ricas. As Ag-RONs, em concordância com os sítios de rDNA 18S, detectados pela hibridação fluorescente in situ. O rDNA 5S, mostra uma localização sintênica e adjacente ao rDNA 18S, caracterizando uma situação pouco freqüente entre os peixes. Os resultados obtidos em T. nematurus concordam com estudos prévios nesse grupo, reforçando a condição basal do sistema ZZ/ZW na filogenia do gênero, provavelmente pré-datando os eventos de especiação. Além de T. nematurus, mais sete espécies/populações de Triportheus foram analisas por FISH com sondas de rDNA 18S e 5S. Os resultados confirmaram a presença de sítios 18S no cromossomo W em todas as espécies de Triportheus aqui analisadas, mesmo nos casos onde as Ag-RONs mostraram-se inativas. Os sítios de rDNA 5S, que ainda não tinham sido descritos para o grupo, encontram-se sempre localizados no braço curto de um só par de cromossomos, adjacentes ao centrômero. A única exceção ocorreu em T. auritus, que apresentou 10 sítios de rRNA 5S. Duas populações distintas de T. nematurus (rio Piracicaba SP e rio Paraná Argentina) apresentaram sintenia dos genes ribossomais no braço curto de um par cromossômico correspondente ao portador de Ag-RONs. Uma sonda para pintura cromossômica total (WCP - Whole Chromosome Painting), específica do cromossomo Z de T. nematurus (rio Piracicaba), foi obtida por intermédio de microdissecção, seguida por amplificação inespecífica por DOP-PCR (Degenerate Oligonucleotide Primed-PCR). Hibridações fluorescentes in situ, utilizando-se esta sonda, foram realizadas em espécies/populações de Triportheus, assim como em espécies de outros gêneros da família Characidae filogenticamente próximos de Triportheus. Nos espécimes machos de Triportheus, os dois cromossomos Z (1º par metacêntrico grande) apresentaram uma forte marcação em toda sua extensão. Nas fêmeas, o cromossomo Z (1o metacêntrico grande) mostra o mesmo padrão observado nos machos e o cromossomo W se apresenta apenas com sutil marcação no braço curto ou no braço longo, em uma região adjacente ao centrômero, conforme a espécie. Assim sendo, a região do cromossomo W que mantém homologia com o cromossomo Z é relativamente pequena, demonstrando a grande diferenciação desse cromossomo ao longo da evolução do sistema ZZ/ZW no grupo. Todas as demais espécies de Characidae testadas não apresentaram sinais positivos de hibridação com a sonda do cromossomo Z de Triportheus, mesmo sendo relativamente próximas desse gênero. Assim sendo, esses resultados reforçam, de modo mais positivo, que o sistema ZZ/ZW deve de fato corresponder à uma sinapomorfia entre as espécies de Triportheus, aparentemente exclusiva desse grupo de Characidae

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2120.pdf: 3248445 bytes, checksum: b0b86bd040503fa4b3db18bcf9089415 (MD5) Previous issue date: 2007-12-07 / Universidade Federal de Sao Carlos / Basic and molecular cytogenetic studies have been performed in 11 species of the subfamily Serrasalminae: Colossoma macropomum, Serrasalmus (S. altispinnis, S. elongatus, S. gouldingi, S. rhombeus, S. cf rhombeus, S. serrulatus and S. maculatus), Pygocentrus nattereri, Pristobrycon striolatus and Catoprion mento, collected along different sites in Central Amazon basin. The diploid number found was 2n=54 chromosomes in Colossoma macropomum, 2n=62 in C. mento and P. striolatus, 2n=60 for all species in the genus Serrasalmus and P. nattereri, except for S. cf. rhombeus, which presented 2n=58. Besides distinct diploid numbers, variable karyotypical formulae were also detected, even between species with the same chromosomal number, showing the occurrence of chromosomal rearrangements in the evolutionary process of this group, such as fusions and centric fisions and pericentric inversions. No sex chromosome heteromorphism was found in the analyzed species. The silver stained nucleolus organizer regions (Ag-NORs) were always telomeric and multiple, ranging from 4 to 12 marks according to each species. In most species, they were observed on short arms of subtelo-acrocentric chromosomes. However, in Colossoma macropomum the Ag-NORs were located at terminal position on long arms and, in Catoprion mento, they were present on short ams of submetacentric chromosomes and on long arms of subtelocentric and acrocentric chromosomes. The 18S rDNA sites were usually coincident with Ag-NORs, although they might occur in a higher number or in distinct chromosomes positions in relation to Ag-NORs. These discrepancies may be attributed to either methodological specificities or to difficulties in detecting some NOR sites, since they are commonly very small within Serrasalminae. The C-banded heterochromatin was observed at pericentromeric region of most chromosomes, being some regions more conspicuous than others, besides some telomeric bands in some chromosomal pairs. All Serrasalmus species presented a proximal heterochromatic block on the long arm of a medium-sized metacentric pair, which seems to be a marker for this genus regarding to its karyotype position (7th pair), once it may be present in other species, such as P. nattereri, but in a larger chromosome (3rd pair). The 5S rDNA sequences were always mapped in a single chromosomal pair. In Serrasalmus species, this pair corresponds to the metacentric pair 7 and in P. nattereri, P. striolatus and C. mento, it corresponds to the medium-sized metacentric pair 3. On its turn, the 5S rDNA sites in C. macropomum were located on short arms of a small metacentric, probably corresponding to the 12th pair. Considering the wide array of the present data, the species of the genera Serrasalmus, Pygocentrus, Pristobrycom and Catoprion, in spite of their specific differentiations, showed higher karyotypic similarity with the presence of metacentric, submetacentric, subtelocentric and acrocentric chromosomes, a preferential location of 18S rDNA sites at telomeric region on short arms of subteloacrocentric chromosomes, besides the number and location of 5S rDNA sites in karyotypes. On the other hand, C. macropomum shows quite divergent features, with 2n=54 meta-submetacentric chromosomes, with 18S rDNA sites at terminal region on long arms and interstitial 5S rDNA sites on short arms of chromosomes. Therefore, the location of C. macropomum far from the piranha clades, according to available phylogeny hypotheses for Serrasalminae, is corroborated by our cytogenetic data. Considering that C. macropomum would be a basal representative in the phylogeny of Serrasalminae, chromosomal rearrangements such as centric fissions, besides pericentric inversions, seem to play an important role in the karyotypic differentiation of this group, increasing the basal number of 2n=54 meta-submetacentric to 2n=58, 60 and 62, and giving rise to distinct chromosome forms in relation to those present in C. macropomum. Analogously, the NOR sites have also undergone numerical and positional changes in chromosomes along the karyotypical differentiation of Serrasalminae. As for the 5S rDNA sites, its location in a same position in morphologically similar chromosomes in all analyzed species of the genera Serrasalmus, Pygocentrus, Pristobrycom and Catoprion suggests that, once established this location from a distinctive ancestor condition, as that seen in C. macropomum, it has been remained conserved. / Foram realizados estudos de citogenética básica e molecular em 11 espécies de peixes da subfamília Serrasalminae - Colossoma macropomum, Serrasalmus altispinnis, S. elongatus, S. gouldingi, S. rhombeus, S. cf. rhombeus, S. serrulatus, S. maculatus, Pygocentrus nattereri, Pristobrycon striolatus e Catoprion mento, coletados em diferentes locais da Amazônia Central. O número diplóide encontrado foi 2n=54 cromossomos para Colossoma macropomum, 2n= 62 para C. mento e P. striolatus, 2n=60 para todas as espécies do gênero Serrasalmus e P. nattereri, exceto S. cf. rhombeus que apresentou 2n=58. Além de diferentes números diplóides, as fórmulas cariotípicas também se mostraram diversificadas, mesmo entre as espécies com o mesmo número de cromossomos, evidenciando alguns principais rearranjos cromossômicos presentes no processo evolutivo desse grupo como fusões/fissões e inversões pericêntricas. Heteromorfismo cromossômico sexual não foi encontrado em nenhuma das espécies analisadas. As regiões organizadoras de nucléolos, evidenciadas pelo Nitrato de Prata (Ag-RONs), foram sempre teloméricas e múltiplas, variando entre 4 a 12 conforme a espécie. Na maioria das espécies essas regiões foram visualizadas no braço curto de cromossomos subtelo-acrocêntricos. Entretanto, em Colossoma macropomum elas foram evidenciadas no braço longo de cromossomos metacêntricos e em Catoprion mento no braço curto de cromossomos submetacêntricos e no braço longo de cromossomos subtelocêntricos e acrocêntricos. Os sítios de DNAr 18S foram, na maioria dos casos, coincidentes com os sítios de Ag-RONs, embora tenham ocorrido em maior número ou mesmo em cromossomos/posições distintas daqueles detectados pela Prata. Tais discrepâncias podem ser atribuídas às especificidades de cada uma dessas metodologias empregadas, como também à dificuldade de detecção de alguns sítios de RONs, os quais são geralmente muito pequenos nos Serrasalminae. A heterocromatina banda-C positiva foi evidenciada na região pericentromérica da maioria dos cromossomos, sendo algumas regiões mais conspícuas do que outras além de algumas bandas teloméricas características em alguns pares de cromossomos. Todas as espécies de Serrasalmus apresentaram um bloco heterocromático proximal no braço longo de um par metacêntrico de tamanho médio, o qual parece ser um marcador desse gênero quanto à posição que ocupa no cariótipo (7o par), visto que em outras espécies onde ele ocorre, como em P. nattereri, esse par é de tamanho maior (3o par). As seqüências de DNAr 5S foram sempre mapeadas em um único par de cromossomos. Nas espécies de Serrasalmus esse par corresponde ao metacêntrico número 7 e em P. nattereri, P. striolatus e C. mento ao metacêntrico número 3. Por sua vez, em C. macropomum os sítios de DNAr 5S se localizaram no braço curto de um metacêntrico menor, provavelmente o de número 12 no cariótipo. Considerando a generalidade dos dados ora obtidos as espécies analisadas dos gêneros Serrasalmus, Pygocentrus, Pristobrycom e Catoprion, apesar das diferenciações específicas que apresentam, mostram maior proximidade entre si apresentando cromossomos metacêntricos, submetacêntricos, subtelocêntricos e acrocêntricos, localização preferencial dos sítios de DNAr 18S na região telomérica do braço curto dos cromossomos subteloacrocêntricos, além de número e localização similar dos sítios de DNAr 5S nos cariótipos. Por sua vez, C. macropomum mostra características bem divergentes, com 2n=54 cromossomos meta-submetacêntricos, com sítios de DNAr 18S localizados na região terminal do braço longo e sítios de DNAr 5S intersticiais no braço curto dos cromossomos. Assim sendo, a separação de C. macropomum do clado das piranhas, tanto na proposta filogenética de Ortí et al. (1996) ou de Machado-Allison (1983), é corroborada pelos nossos dados citogenéticos. Considerando uma posição mais basal para C. macropomum na filogenia dos Serrasalminae, rearranjos cromossômicos como fissões cêntricas, ao lado de inversões pericêntricas, parecem se destacar na diferenciação do cariótipo desse grupo, aumentando o número basal de 2n=54 metasubmetacêntricos para 2n=58, 60 e 62 e possibilitando o surgimento de cromossomos com formas distintas daqueles presentes em C. macropomum. Igualmente também os sítios de RONs passaram por modificações numéricas e de localização nos cromossomos ao longo da diferenciação cariotípica dos Serrasalminae. Quanto aos sítios de DNAr 5S, sua localização em posição e em cromossomos morfologicamente similares em todas as espécies analisadas de Serrasalmus, Pygocentrus, Pristobrycom e Catoprion sugere que, uma vez estabelecida esta localização a partir de uma condição ancestral distinta, como aquela presente em C. macropomum, ela se manteve conservada.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2198.pdf: 3921778 bytes, checksum: fdcf7021aa70d6a2c02b293338344fb3 (MD5) Previous issue date: 2008-12-19 / The Loricariidae Family is the second largest family of fresh water fish with approximately 700 species. Among the Loricariidae, the Ancistrini tribe distinguishes itself with 217 valid species distributed in the neotropical region. The catfish of this group measure an average of 15 centimeters in length and have moveable evertible odontodes in the operculum region. Cytogenetic studies have been made in only 10% of the species. In this study, fifteen species, two of the genus Lasiancistrus and thirteen of the genus Ancistrus were cytogenetically analyzed. Besides the classic analyses of cytogenetic, the technique of fluorescent in situ hybridization (FISH) was used to locate the regions of rDNA 5S and 18S in seven species of the genus Ancistrus. The results showed diploid numbers of 2n=34, 40, 42, 50, 52 and 54 chromosomes. In the species of the genus Lasiacistrus, the diploid number was 2n=54 chromosomes, and there were simple NORs and some small blocks of constitutive heterochromatin. There were no chromosomic differences observed between males and females but there were distinct cytotypes among the species. The results are compared with analyses made with other genera of the Ancistrini group. In the genus Ancistrus diversity of species and chromosomic variation is surprising. In the species Ancistrus cuiabae chromosomic polymorphism and rDNA 18S were observed. The event that is probably responsible for this chromosomic polymorphism was a pericentric inversion. In four species of distinct populations chromosomic heteromorphism and constitutive heterochromatin were verified, thus suggesting that two populations possess XX/XY and ZZ/ZW sexual chromosomes. The nucleolar organizing regions (NORs) that appeared in the presence of silver nitrate were simple in all the species, located in the terminal and interstitial region of the chromosomes. With the FISH technique it was possible to confirm the data obtained with AgNOR in seven species. In respect to rDNA 5S the results were very diversified with only one pair of chromosomes marked, in Ancistrus sp 06; two pairs in A. sp 04, A. sp 08 and A. sp 13; three pairs in A. cuiabae, A. claro and A. cf. dubius. The cístrons observed in rDNA 5S and 18S were syntenic in four of the seven species analyzed. Using technique of C band it was possible to verify the blocks of constitutive heterochromatin were few in number and small in size in the species with diploid numbers 2n=50 to 54, but were bigger and stained in an evident manner in the species with chromosomic polymorphisms, sexual chromosomes and 2n=34 to 42 chromosomes. Besides the highly variable diploid number, the Ancistrini tribe has simple and multiple sexual chromosomes systems. In this study we confirmed the occurrence of chromosomic polymorphism, of rDNA 18S and of constitutive heterochromatin in new species. For the first time fluorescent in situ hybridization was done in the Ancistrini tribe and it confirmed the diversity existent, especially in the genus Ancistrus, which is the most derived of the tribe. With these results it was to infer that the species of the genus Ancistrus with diploid numbers 2n=50 to 54 chromosomes are more primitive than the others founded in the Baixada Cuiabana with intense sedimentation. New analyses, using molecular techniques could help in understanding the phylogeny and evolution of this diversified group of Loricariidae. / A família Loricariidae é a segunda maior família de peixes de água doce com aproximadamente 700 espécies. Dentre os Loricariidae, a tribo Ancistrini se destaca com 217 espécies válidas na região neotropical. Os cascudos deste grupo medem cerca de 15 cm e possuem odontodes móveis que se invertem na região do opérculo. Estudos citogenéticos são verificados em apenas 10% das espécies até o presente. Neste trabalho, duas espécies do gênero Lasiancistrus e treze do gênero Ancistrus foram cariotipadas. Além da análise de citogenética clássica, também foi utilizada a técnica de hibridação in situ fluorescente (FISH) para localizar as regiões de rDNA 5S e 18S em 7 espécies do gênero Ancistrus. Os resultados evidenciaram uma variação dos números diplóides de 2n=34, 40, 42, 50, 52 e 54 cromossomos nas espécies analisadas. Nas espécies do gênero Lasiancistrus o número diplóide foi de 2n=54 cromossomos, RONs simples e pequenos blocos de heterocromatina constitutiva. Neste mesmo gênero não foram observadas diferenças cromossômicas entre machos e fêmeas, apenas citótipos distintos entre as espécies. Os resultados são discutidos com análises realizadas em outros gêneros do grupo Ancistrini. No gênero Ancistrus foi observado uma diversidade de citótipos e espécies. Na espécie Ancistrus cuiabae se observou um polimorfismo cromossômico e de rDNA 18S. O provável evento responsável por este polimorfismo foi uma inversão pericêntrica. Em duas outras espécies de Ancistrus de distintas populações foram verificados heteromorfismos cromossômicos e de heterocromatina constitutiva, sugerindo a ocorrência de cromossomos sexuais XX/XY e ZZ/ZW. As regiões organizadoras de nucléolos foram simples para todas as espécies, localizadas nas regiões terminais e intersticiais dos cromossomos. Com a técnica de FISH e sonda de rDNA 18S foi possível confirmar os dados obtidos com AgRON em sete espécies. Quanto ao rDNA 5S os resultados foram bastante diversificados, com apenas um par de cromossomos marcados, em Ancistrus sp 06, dois pares em A. sp 04, A. sp 08 e A. sp 13 e três pares nas espécies A. cuiabae, A. sp 01, A. claro e A. cf. dubius. Os cístrons de rDNA 5S e 18S foram sintênicos em quatro das sete espécies analisadas. Através da técnica de banda C foi possível verificar que os blocos de heterocromatina constitutiva são poucos e pequenos nas espécies com números diplóides 2n=50 a 54, maiores e bem evidentes nas espécies com 2n=34 a 42 cromossomos e com polimorfismos ou com prováveis cromossomos sexuais. Além do número diplóide bastante variável, a tribo Ancistrini possui sistemas de cromossomos sexuais simples e múltiplos; e, neste trabalho, evidenciando também a ocorrência de polimorfismo cromossômico, de rDNA 18S e de heterocromatina constitutiva. Realizadas pela primeira vez na tribo Ancistrini, as análises com hibridação in situ fluorescente confirmam a diversidade existente, especialmente no gênero Ancistrus, o mais derivado da tribo. Através destes resultados foi possível inferir que a estrutura cariotípica das espécies do gênero Ancistrus com números diplóides 2n=50 a 54 cromossomos parece ser mais primitiva que aquela das demais espécies encontradas na Baixada Cuiabana e de locais com sedimentação mais intensa. Novas análises, utilizando-se de técnicas moleculares poderão auxiliar na compreensão da filogenia e evolução deste diversificado grupo de Loricariidae.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2828.pdf: 14647874 bytes, checksum: 8fb4ecaf07755c78ec51b1069a9943aa (MD5) Previous issue date: 2010-01-29 / Universidade Federal de Sao Carlos / Cyphocharax nagelii, Cyphocharax modestus, and Steindachnerina insculpta were the curimatid species analyzed in the present work. The objectives for all species were to identify sequences that could be used as chromosomal markers, to infer on the active mechanisms in their chromosomal evolution and of the family Curimatidae, and to determine indirectly the nucleotide composition of chromosomal regions. Additionally, the present work also aimed to analyze the B chromosome of C. nagelii, investigating the mitotic and meiotic behavior of this element and making inferences on its origins and evolution. The encountered diploid number was of 2n=54 with meta- and submetacentric chromosomes, corroborating the karyotypic macrostructure of the family Curimatidae. B chromosomes were detected in C. nagelii and analyses indicated that this element is potentially stable during mitosis. The presence of B chromosomes in other curimatid species suggests that this element represents an additional karyotypic differentiation mechanism. In the analyses of metaphase I cells of C. nagelii, the B chromosome behaved as a univalent, indicating possible segregation instability of this element. The C-banding technique evidenced heterochromatin blocks in the pericentromeric region of all chromosomes of the complement, as well as a few telomeric blocks, in the three studied species (B chromosomes in C. nagelii are heterochromatic). No chromosomal heteromorphisms regarding size, morphology, or C-banding pattern that could be associated with the presence of sex chromosomes were found in any of the three curimatid species. Microdissection of the B chromosome and consequent in situ hybridization with the produced probe showed that these elements share many mutual sequences, but the same does not occur with chromosomes of complement A of C. nagelii, C. modestus, or S. insculpta. The use of the base-specific CMA3/DAPI fluorochromes, silver nitrate staining, and 18S rDNA probes allowed the identification of 45S rDNA sites. These sites are present in an autossome pair in the three studied species, as well as in most curimatids. In C. nagelii and C. modestus, the 5S rDNA region is present in chromosome pairs 3 and 20; in S. insculpta only pair 3 contained the 5S rDNA gene. The presence of 5S rDNA in the third pair of the three described species points to a possible conserved location of this gene. A size difference was seen between the 5S rDNA sites, probably owing to the presence of two quantitavely different clusters of this ribosomal sequence. The B chromosomes of C. nagelii do not support 5S or 18S rDNA sequences and were not differentially marked by DAPI or CMA3. The hypothesis that karyotypic evolution in curimatids involves rearrangements of the centric fission/fusion and pericentric inversion type was suggested. Telomeric DNA sequences (TTAGGG)n were used in C. nagelii. The chromosomes of complement A as well as of complement B showed signs in the telomeric region. Furthermore, at least two autosome pairs exhibited telomeric sequences in an interstitial position, thus corroborating the hypothesis of centric fission/fusion evolution combined with pericentric inversion for the family Curimatidae. / Cyphocharax nagelii, Cyphocharax modestus e Steindachnerina insculpta, foram as espécies de curimatídeos analisadas no presente trabalho. Nas três espécies investigadas, os objetivos foram identificar sequências que pudessem ser usadas como marcadores cromossômicos, inferir sobre os mecanismos atuantes na evolução cromossômica destas espécies e paralelamente na família Curimatidae e ainda, determinar indiretamente a composição nucleotídica de regiões cromossômicas. Além disso, também foi objetivo do presente trabalho a análise do cromossomo B de C. nagelii, procurando investigar o comportamento mitótico e meiótico deste elemento e fazer inferências sobre sua origem e evolução. O número diplóide encontrado foi 2n=54 com cromossomos meta- ou submetacêntricos, corroborando a macroestrutura cariotípica da família Curimatidae. Foi detectada a presença de cromossomos B em C. nagelii, e as análises indicaram que este elemento seria mitoticamente estável. A presença de cromossomos B em outras espécies de curimatídeos sugere que este elemento represente um mecanismo de diferenciação cariotípica adicional. Nas análises de células metafásicas I de C. nagelii, o cromossomo B comportou-se como um univalente, indicando uma possível instabilidade segregacional desse elemento. A técnica de bandamento C, evidenciou blocos de heterocromatina na região pericentromérica de todos os cromossomos do complemento, e alguns blocos teloméricos, nas três espécies estudadas; os cromossomos B de C. nagelii são heterocromáticos. Nas três espécies de curimatídeos não foram encontrados heteromorfismos cromossômicos, quanto ao tamanho, morfologia ou padrão de bandamento C, que pudessem estar associados à presença de cromossomos sexuais. A microdissecção cromossômica do B e a conseqüente hibridação in situ com a sonda produzida, mostraram que estes elementos compartilham muitas seqüências entre si, mas, o mesmo não ocorre com os cromossomos do complemento A de C. nagelii ou de C. modestus e S. insculpta. O uso dos fluorocromos base-específicos CMA3/DAPI, impregnação por nitrato de prata e sondas de rDNA 18S, permitiram a identificação dos sítios de rDNA 45S. Estes sítios estão presentes em um par de autossomos nas três espécies estudadas, assim como na maioria dos curimatídeos. Em C. nagelii e em C. modestus a região de rDNA 5S, está presente nos pares cromossômicos 3 e 20; em S. insculpta apenas o par 3 continha o gene de rRNA 5S. A presença de rDNA 5S no par 3 das três espécies descritas, aponta para uma possível localização conservada desse gene. Foi constatada uma diferença de tamanho entre os sítios de rDNA 5S, devido provavelmente a presença de dois clusters quantitativamente diferentes desta seqüência ribossômica. Os cromossomos B de C. nagelii não comportam seqüências de rDNA 5S ou 18S e não foram marcados diferencialmente pelo DAPI ou CMA3. A hipótese de que a evolução cariotípica nos curimatídeos envolveria, rearranjos do tipo fissão/fusão cêntrica e inversão pericêntrica, foi sugerida. Seqüências de DNA telomérico (TTAGGG)n foram utilizadas em C. nagelii. Os cromossomos do complemento A, bem como os cromossomos B mostraram sinais na região telomérica. Além disso, pelo menos dois pares autossômicos mostraram seqüências teloméricas na posição intersticial, corroborando a hipótese de evolução por fissão/fusão cêntrica e inversão pericêntrica para família Curimatidae.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5780.pdf: 5855646 bytes, checksum: 3d4781dbb847918fa368d7e2bf601d34 (MD5) Previous issue date: 2014-02-14 / Universidade Federal de Minas Gerais / Brazil has a large and dense hydrographic network distributed in eight major basins, with a great diversity of fish species. Erythrinidae is a small family of Characiformes, represented by only three genera: Erythrinus, Hoplerythrinus and Hoplias. Hoplerythrinus has only three species: H. cinereus (Gill, 1858), H. gronovii (Valenciennes, 1847) and H. unitaeniatus (Agassiz, 1829) and only the latter is found in Brazil, besides also occur in Central America and in several other countries in South America. H. cinereus and H. gronovii have a more restricted distribution and occur only in Trinidad and Tobago and Guyana, respectively. Only H. unitaeniatus has cytogenetic studies, proving to be a diverse chromosomally species, indicating it is a complex of species. In order to progress in the knowledge of the genome of H. unitaeniatus, this study aimed to characterize by conventional Giemsa staining, C-banding, impregnation with silver nitrate and fluorescence in situ hybridization (FISH) with probes of DNAr 18S and 5S, telomeric sequence (TTAGGG)n, histones (H3 and H4), and microsatellite (CA)15, (GA)15, (CAC)10, (GAG)10 and (GATA)n, populations of H. unitaeniatus from five hydrographic basin in Brazil (Amazon, Araguaia, Paraguay, Upper Parana and São Francisco). The diploid numbers found were 2n=48 (Paraguay and Upper Parana), 2n=50 (São Francisco) and 2n=52 (Amazon, Araguaia and São Francisco), besides the occurrence of natural hybrids with 2n=51 chromosomes in the São Francisco basin. The C-banding showed heterochromatic blocks located in the interstitial and pericentromeric position in most chromosomes, but some chromosomes also showed heterochromatic blocks in the centromeric and terminal position in all populations. The impregnation with silver nitrate revealed simple AgNORs for populations of the Amazon and Araguaia and multiple AgNORs for the populations of Paraguay, Upper Parana and São Francisco. FISH with 18S and 5S DNAr probes revealed several chromosomes carrying these cistron, besides the occurrence of synteny in all populations. Probes with telomeric sequence (TTAGGG)n detected sites only in the terminal vii portion of all chromosomes. A dispersed pattern was verified to H3 and H4 histones in the chromosomes and only for H4 was observed strongest blocks in the interstitial position. The chromosomal distribution of the microsatellites (CA)15, (GA)15, (CAC)10, (GAG)10 in the genome of H. unitaeniatus shown to be preferentially located in the terminal position of the chromosomes with some interstitial regions marked. The microsatellite (GATA)n shown dispersed in the chromosomes without preferential accumulation in a specific region of the chromosome in all populations analyzed. The data obtained in this study reinforce the hypothesis that H. unitaeniatus it is not a single species, but the specie complex H unitaeniatus. / O Brasil possui uma ampla e densa rede hidrográfica distribuída em oito grandes bacias, com uma grande diversidade de espécies de peixes. Erythrinidae é uma pequena família de Characiformes, representada por apenas três gêneros: Erythrinus, Hoplerythrinus e Hoplias. Hoplerythrinus possui apenas três espécies: H. cinereus (Gill, 1858), H. gronovii (Valenciennes, 1847) e H. unitaeniatus (Agassiz, 1829), sendo que apenas esta última é encontrada em território brasileiro, além de ocorrer também na América Central e em vários outros países da América do Sul. Hoplerythrinus cinereus e H. gronovii possuem uma distribuição mais restrita e ocorrem apenas em Trinidad e Tobago e Guiana Francesa, respectivamente. Somente H. unitaeniatus possui estudos citogenéticos, demonstrando ser uma espécie cromossomicamente diversa e indicando se tratar de um complexo de espécie. Com o intuito de progredir no conhecimento do genoma de H. unitaeniatus, este trabalho teve por objetivo caracterizar, através de coloração convencional por Giemsa, bandamento C, impregnação por nitrato de prata e hibridização in situ fluorescente (FISH) com sondas de DNAr 18S e 5S, seqüência telomérica (TTAGGG)n, histonas (H3 e H4), e microsatélites (CA)15, (GA)15, (CAC)10, (GAG)10 e (GATA)n, populações de H. unitaeniatus provenientes de cincos bacias hidrográficas brasileiras (Amazonas, Araguaia, Paraguai, Alto Paraná e São Francisco). Os números diplóides encontrados foram 2n=48 (Paraguai e Alto Paraná), 2n=50 (São Francisco) e 2n=52 (Amazônia, Araguaia e São Francisco), além da ocorrência de híbridos naturais com 2n=51 cromossomos na bacia do São Francisco. O bandamento C evidenciou blocos de heterocromatina localizados em posição intersticial e pericentromérica na maioria dos cromossomos, contudo alguns cromossomos também apresentaram blocos heterocromáticos em posição centromérica e terminal em todas as populações. A impregnação por nitrato de prata revelou AgRONs simples para as populações da Amazônia e Araguaia e AgRONs múltiplas para as populações do Paraguai, Alto Paraná e São Francisco. A FISH com sondas de DNAr 18S e 5S revelou vários cromossomos portadores desses cístrons, além da ocorrência de sintenia em todas as populações. A sonda de seqüência telomérica (TTAGGG)n detectou sítios restritos a porção terminal de todos os cromossomos. Para as histonas H3 e H4, foi verificado um padrão disperso pelo cromossomo, sendo que, principalmente para H4, foi verificado blocos mais fortes em posição intersticial. Já a distribuição cromossômica dos microssatélites (CA)15, (GA)15, (CAC)10, (GAG)10 no genoma de H. unitaeniatus mostrou-se alocado preferencialmente em posição terminal dos cromossomos com algumas regiões intersticiais marcadas. O microssatélite (GATA)n apresentou-se disperso pelos cromossomos de todas as populações analisadas, sem um acúmulo preferencial em uma região cromossômica específica. Os dados obtidos neste trabalho vêm reforçar a hipótese de que H. unitaeniatus não se trata de uma única espécie, mas sim do complexo de espécie H. unitaeniatus.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4676037 bytes, checksum: 95dde20b76c33bfd09f530eb8a65e6e5 (MD5) Previous issue date: 2010-07-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The tribe Attini consists of a monophyletic group that includes about 230 species in 14 genera. Different biological substrate are utilized by these ants for cultivation of the symbiotic fungus on which they feed and are necessarily dependent. This tribe includes the leaf-cutting ants (Atta Fabricius and Acromyrmex Mayr) that are known as important agricultural pests. The usage of cytogenetics in the family Formicidae has made significant contributions in the study of more than 750 ant species. Only 10% of Attini’s species have some sort of cytogenetic data available. This work aimed at cytogenetically studying six Acromyrmex species and seven species of the tribe Attini divided into four genera: Apterostigma Mayr, Mycocepurus Forel, Sericomyrmex Mayr and Trachymyrmex Forel. Some of the species were also submitted to banding techniques. The karyotypes observed were: Apterostigma madidiense Weber (n=23, 7m + 10sm + 5st + 1a), Apterostigma steigeri Santschi (2n=22, 20m + 2sm), Mycocepurus goeldii (2n=8, 4m + 4sm), Sericomyrmex sp. (2n=50, 44m + 6 sm; n=25, 22m + 3 sm), Trachymyrmex fuscus Emery (2n=18, 16m + 2sm; n=9, 8m + 1sm), Trachymyrmex relictus Borgmeier (2n=20m, n=10m) and Trachymyrmex sp. (2n=22, 18m + 4sm). A size polymorphism on a short arm of a submetacentric pair from Trachymyrmex fuscus was also pointed out. The possible causes of chromosomal segment duplication were discussed. All studied species of the genus Acromyrmex presented 2n=38. Each species showed a different karyotype in relation to morphology (A. balzani: 12m + 10sm + 14st + 2a; A. coronatus: 12m + 12sm + 12st + 2a; A. disciger: 10m + 12sm + 14st + 2a; A. niger: 12m + 18sm + 6st + 2a; A. rugosus: 16m + 12sm + 8st + 2a; A. echinatior: 8m + 6sm + 14st + 10a), in the distribution of heterocromatin (C banding) and GC rich regions (CMA3). For three species (A. coronatus, A. disciger, A. niger) the first subtelocentric pair was the bearer of ribosomal genes. Acromyrmex species presented stability in the number of chromosome with differences in the karyotype. The results suggest that many chromosomal rearrangements such as translocations, growth of heterochromatin and inversion may have occurred during their differentiation, contributing to the karyotype variability found. / A tribo Attini é um grupo monofilético que inclui mais de 230 espécies agrupadas em 14 gêneros. Nesta tribo estão incluídas as formigas cortadeiras (Atta e Acromyrmex), consideradas importantes pragas agrícolas. A utilização da citogenética na família Formicidae tem mostrado importante contribuição nas mais de 750 espécies de formigas estudadas. Os dados citogenéticos são reportados para 10% das espécies da tribo Attini. O presente trabalho teve como objetivo o estudo citogenético de seis espécies do gênero Acromyrmex e de sete espécies de Attini distribuídas em quatro gêneros: Apterostigma, Mycocepurus, Sericomyrmex e Trachymyrmex. Parte das espécies foi submetida a técnicas de bandamentos cromossômicos. Os cariótipos observados foram: Apterostigma madidiense Weber (n=23, 7m + 10sm + 5st + 1a), A. steigeri Santschi (2n=22, 20m + 2sm), Mycocepurus goeldii (Forel) (2n=8, 4m + 4sm), Sericomyrmex sp. (2n=50, 44m + 6sm; n=25, 22m + 3sm), Trachymyrmex fuscus Emery (2n=18, 16m + 2sm; n=9, 8m + 1sm), T. relictus Borgmeier (2n=20m, n=10m) e Trachymyrmex sp. (2n=22, 18m + 4sm). Trachymyrmex fuscus apresentou polimorfismo de tamanho no braço curto do par submetacêntrico. As possíveis causas da duplicação do segmento cromossômico são discutidas. As seis espécies do gênero Acromyrmex apresentaram 2n=38 cromossomos. Cada espécie mostrou um cariótipo diferente em relação à morfologia (A. balzani: 12m + 10sm + 14st + 2a; A. coronatus: 12m + 12sm + 12st + 2a; A. disciger: 10m + 12sm + 14st + 2a; A. niger: 12m + 18sm + 6st + 2a; A. rugosus: 16m + 12sm + 8st + 2a; A. echinatior: 8m + 6sm + 14st + 10a) e variações na distribuição de heterocromatina (banda C) e regiões ricas em GC (CMA3). Em três espécies (A. coronatus, A. disciger, A. niger) o par subtelocêntrico de maior tamanho foi o portador de genes ribossomais. As espécies do gênero Acromyrmex apresentaram estabilidade no número cromossômico com diferenças no cariótipo. Isto sugere que rearranjos do tipo translocações, crescimento de heterocromatina e inversão devem ter ocorrido durante a evolução das espécies deste gênero, levando a modificações nos cariótipos das diferentes espécies.

Orientadores: Louis Bernard Klaczko, Ana Maria L. Azeredo-Espin / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T12:39:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hatadani_LucianeMendes_D.pdf: 5098763 bytes, checksum: ffd29b437b2e422e6d8f1797873032be (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O grupo tripunctata e o segundo maior grupo neotropical de Drosophila em numero de espécies e foi incluído na radiação tripunctata ¿ que inclui outros grupos próximos. O segundo cromossomo de Drosophila medipunctata (espécie que pertence ao grupo tripunctata) e altamente polimorfico para inversões. Trabalhos anteriores sugeriram a presença de interação genotipo-ambiente para tamanho da asa, mas não para forma. Experimentos de laboratório foram realizados para testar os efeitos combinados de temperatura e inversão cromossômica no tamanho e forma da asa de D. mediopuncta. A morfologia da asa foi analisada por métodos de morfometria geométrica. Os resultados mostraram que tamanho e forma da asa são influenciados por temperatura, sexo e cariótipo. Também foram encontradas evidencias que sugeriram a existência entre os efeitos de cariótipo e temperatura para forma da asa, mas nao para tamanho, indicando a presença de interação genotipo-ambiente para forma da asa em D. mediopunctata. Sugerimos que outros fatores ecológicos ¿ tais como densidade de larvas ¿ ou variação sazonal de conteúdo genético das inversões poderia explicar os resultados anteriores. Alem disso, uma nova hipótese filogenética para a radiação tripunctata e sugerida com base em dados de seqüências dos genes mitocôndrias das subunidades I e II da citocromo oxidase, e a variação de tamanho e forma da asa e descrita com bases na nova hipótese filogenética. As arvores filogenéticas foram reconstruídas por métodos de parcimônia, máxima verossimilhança e inferência Bayesiana. Os resultados rejeitaram a hipótese de monofila para o grupo tripunctata, enquanto esta hipótese não foi rejeitada para a radiação tripunctata e outros grupos específicos dentro da radiação. Ambos tamanho e forma da asa apresentaram sinal filogenético e diferentes padrões de tamanho e forma puderam ser identificados para cada um dos agrupamentos mais importantes detectados pela analise filogenética / Abstract: The tripunctata group is the second largest Neotropical group of Drosophila in number of species and was included in the tripunctata radiation ¿ which comprises other closely related groups. The second chromosome of Drosophila mediopunctata (a species that belongs to the tripunctata group) is highly polymorphic for inversions. Previous work suggested the presence of genotype-environment interaction for wing size but not for shape. We performed experiments in the laboratory to test for the joint effects of temperature and chromosome inversions on size and shape of the wing in D. mediopunctata. Wing morphology was analyzed by methods of geometric morphometrics. Our findings show that wing size and shape are influenced by temperature, sex, and karyotype. We also found evidence suggestive of an interaction between the effects of karyotype and temperature on wing shape (but not for size), indicating the existence of genotype-environment interaction for wing shape in D. mediopunctata. We suggest that other ecological factors ¿ such as larval crowding ¿ or seasonal variation of genetic content within inversions may explain the previous results. Moreover, we suggest a new phylogenetic hypothesis for the tripunctata radiation based on sequences of mitochondrial genes of cytochrome oxidase subunits I and II, and describe wing size and shape variation in different species based on this new phylogenetic hypothesis. Phylogenetic trees were reconstructed by parsimony, maximum likelihood and bayesian inference. Results reject the monophyly hypothesis for the tripunctata group whereas monophyly is not rejected for the tripunctata radiation and other specific groups within the radiation. Both wing size and shape displayed phylogenetic signal and different patterns of size and shape could be identified for each of the most important clusters detected by phylogenetic analysis / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:26:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2154_1.pdf: 2946293 bytes, checksum: d55db8fd95c353e5369e10a31bb5a187 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / A dengue é atualmente considerada a mais importante arbovirose que afeta o homem. O agravamento desta situação epidemiológica tem acarretado um aumento expressivo no uso de inseticidas organofosforados no combate ao vetor, principalmente o temefós, que é amplamente e sistematicamente aplicado em ambientes urbanos em reservatórios de água, até para o consumo humano. Este projeto propôs investigar efeito genotóxico (clastogênico) em células de mamíferos, induzido pela exposição ao temefós (grau técnico 95,5%), e ao biolarvicida Bacillus thuringiensis sorovar. israelenses (Bti) - IPS 82, ambos empregados no controle do Aedes aegypti. Na avaliação genotóxica foram utilizadas células da medula óssea de camundongos albinos Swiss Webster de ambos os sexos, empregando-se os testes de metáfase e de micronúcleos para detecção dos danos cromossômicos: aberrações cromossômicas e micronúcleos. Os camundongos foram tratados com temefós (grau técnico 95,5%) nas concentrações de 27,75; 55,5 e 111 mg/kg ou com água destilada 10 ml/kg, via gavagem, como controle negativo ou com Ciclofosfamida a 25 mg/kg, via i.p., como controle positivo por 24, 48 e 72h, em dose única ou em 9 doses repetidas (1 dose/semana). Outros grupos foram tratados com Bti nas doses de 204 e 122,4 UFC (Unidade Formadora de Colônia) ou água destilada (200 μl) como controle negativo, via gavagem, por 24 e 48h. Os resultados observados confirmaram a ação genotóxica induzida pelo inseticida temefós em camundongos de ambos os sexos, com a formação de micronúcleo em eritrócitos policromáticos (PCE MN), em todas as concentrações testadas 24h após o tratamento único. Na concentração de 111,00 mg/kg induziu PCE MN também após 48 e 72h em dose única e após tratamento com 9 doses. O temefós induziu também aberrações cromossômicas nas células em metáfases, em todas as concentrações testadas, 24h após tratamento único, e na concentração de 111,00 mg/kg, também após 48 e 72h de tratamento único. A Ciclofosfamida padronizada como controle positivo, para detecção de genotoxicidade, assegurou a confiabilidade dos experimentos realizados nos padrões estabelecidos. O Bti, através dos experimentos realizados, não induziu formação de micronúcleos, portanto, não foi considerado como um agente mutagênico e/ou genotóxico. A citotoxicidade do Bti também foi avaliada em diferentes doses e tempos de permanência em ambos o sexo, não apresentando diferença estatisticamente significativa ao nível de 5% em comparação com o controle negativo. Esta investigação veio comprovar a preocupação pelos potenciais riscos que o uso sistemático, constante ou mesmo esporádico de inseticidas de síntese em ambiente antropico, na agricultura e em programas de controles de vetores, pode induzir ao homem ao nível mutagênico e/ou genotóxico. É imprescindível, para o uso seguro para a saúde e o meio ambiente, a investigação do potencial mutagênico e/ou genotóxico de produtos utilizados para o controle de insetos

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-08-11T13:55:38Z No. of bitstreams: 1 Larissa Monteiro de Vasconcelos.pdf: 1926749 bytes, checksum: 46a22f2473b8fc34a3db7c3549b55a03 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-11T13:55:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Larissa Monteiro de Vasconcelos.pdf: 1926749 bytes, checksum: 46a22f2473b8fc34a3db7c3549b55a03 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Chromosomal set manipulation is a promising tool for breeding programs and biological conservation. Triploidy induction provides benefits that increase fish production and reduces the impact of escapes from fish farming on wild populations. These benefits are due to the most probable characteristics of triploid fish: sterility; because of its assumed ability to increase yield by conducting the energy required from gonadal development to somatic growth, leading to better growth rates and fillet quality. The curimatã-pacu (Prochilodus argenteus) is an endemic migratory fish species of the São Francisco River, which abundance have been compromising by the hydroelectric dams along the river and is known for its highly appreciated meat, with a great potential for extensive aquaculture, In this study, the efficiency of thermal shocks (cold and heat) to triploid production was evaluated. Cold shocks (0-4ºC) were tested at 2.5 min, 5 min, 10 and 12 min postfertilization (mpf), lasting for 10, 15, 20 and 25 minutes. Heat shocks were alsoinvestigated at 5 mpf, lasting for three minutes at 39 and at 41ºC. In each treatment, a control group was maintained to analyze egg quality. No hatches were observed for the heat shock treatments. For cold shock treatment applied at 5mpf and lasting for 25 minutes, 100% triploids were obtained. For others cold shock treatments also applied at 5mpf, but lasting for 20, 15 and 10 minutes, triploid rates were 89.12, 76.92 and 63.33%, respectively. Although fertilization rates were statistically different between diploid and triploid, survival, weigh and size were similar between triploids and control groups after being reared for 21 days in tanks. This is the second protocol for a Brazilian native species with 100% triploidization yield and the first one to achieve this by means of thermal shocks. / A manipulação cromossômica apresenta-se como uma ferramenta promissora nos programas de criação de peixes e de conservação biológica. Dentre elas, a indução à triploidia apresenta benefícios que vão desde a otimização da produção à minimização dos impactos causados na natureza pelos escapes de peixes cultivados. Tais benefícios ocorrem, principalmente, em virtude da característica mais provável dos triploides: a esterilidade; que permite que o gasto energético antes empregado no desenvolvimento gonadal seja realocado para o crescimento somático, podendo resultar em taxas de crescimento mais elevadas e na melhoria da qualidade do filé. A curimatã-pacu (Prochilodus argenteus) é um peixe endêmico do rio São Francisco muito apreciado por sua carne, que tem sua abundância comprometida pelos barramentos das hidrelétricas dessa bacia, e que apresenta grande potencial para a aquicultura extensiva. Nesse trabalho foi avaliado a eficiência de choques térmicos quentes e frios para indução à triploidia em curimatã-pacu. Para os choques frios (0 – 4 ºC), foram testadas aplicações aos 2,5 min, 5 min, 10 e 12 min pós-fertilização (mpf), com durações de 10, 15, 20 e 25 minutos. Os testes com choques quentes (39 e 41ºC) foram aplicados também aos 5 mpf com duração de três minutos. Para cada um dos choques testados foi mantido um grupo controle para avaliação da qualidade gamética. Nenhuma eclosão foi observada para os choques quentes. Para os choques frios, embora as taxas de triploidização não tenham sido obtidas para os testes realizados aos 2,5 e 12 mpf, os choques aplicados aos 5 mpf com duração de 25 minutos produziram 100% de triploides. Para os demais choques com 20, 15 e 10 minutos de duração, as taxas de triploidização obtidas foram de 89,12, 76,92 e 63,33%, respectivamente. Os animais foram mantidos em aquários por um período de 21 dias, no qual à exceção das taxas de fertilização e sobrevivência inicial, peso e tamanho não foram significativas entre diploides e triploides. Esse é o segundo protocolo com 100% de produção de triploides para uma espécie nativa brasileira e, o primeiro a conseguir esse feito com o uso de choques térmicos.