Made available in DSpace on 2016-03-01T13:50:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 rayane_freitas_ioc_mest_2015.pdf: 2814197 bytes, checksum: 266f348b6b9d4af76ccdbcb2de423f6a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Mosquitos apresentam ritmos de atividade locomotora e alimentação sanguínea, que são cruciais para a transmissão de diversos patógenos e estão sob o controle de um relógio circadiano endógeno. Estímulos externos exercem uma importante modulação neste relógio, possibilitando o ajuste das funções endógenas com o ambiente. Um dos principais indicadores ambientais capaz de sincronizar o relógio circadiano são os ciclos de temperatura. Em laboratório, pesquisas no modelo Drosophila melanogaster vêm mostrando que ciclos de temperatura retangulares (com mudanças abruptas de temperatura) produzem um perfil de atividade diferente de ciclos com variações de temperatura graduais mais próximas ao natural. Assim, procuramos estabelecer um regime seminatural que fosse o mais próximo possível das variações diárias de temperatura ao longo de um dia no Rio de Janeiro. Escolhemos como modelo o mosquito Aedes aegypti, o principal vetor da dengue no Brasil. Essa espécie é conhecida por apresentar hábitos diurnos com picos de atividade durante o amanhecer e o crepúsculo. Os ciclos de temperatura graduais que produzimos foram capazes de sincronizar a atividade de Ae. aegypti, porém com um perfil diferente do que era observado em ciclos de temperatura retangulares. Na presença dos ciclos de claro/escuro, os ciclos temperatura graduais foram determinantes para amplitude dos picos de atividade e fase do pico principal (pico vespertino) As alterações nos padrões de comportamento parecem refletir alterações moleculares na expressão de genes que compõem o relógio circadiano. Possivelmente os genes da primeira alça (per, tim e cry2) seriam importante para a amplitude, enquanto genes da segunda alça (vri, Pdp1 e cyc) participariam do ajuste de fase do pico principal. Nossos resultados sugerem ainda que os ciclos de temperatura sincronizem o relógio através dos órgãos cordotonais. Mosquitos silenciados pela técnica de RNA de interferência para um gene importante no funcionamento dessas estruturas (nocte) apresentaram prejuízos na sincronização de sua atividade pelos ciclos de temperatura. Assim, concluímos que os ciclos de temperatura graduais que construímos são eficientes para a sincronização de Ae. aegypti e possivelmente poderão contribuir nos estudos de comportamento, permitindo em laboratório uma abordagem mais próxima ao natural. A utilização dos ciclos de temperatura graduais confirma a atuação desse indicador ambiental em sinergia com os ciclos de claro/escuro na promoção da completa sincronização dos ritmos de atividade e expressão circadiana dos organismos / Mosquitoes present locomotor activity and blood feeding rhythms, which are crucial for the transmission of many pathogens and are under the control of an endogenous circadian clock. External stimuli play an important modulation in this clock, enabling adjustment of the endogenous fun ctions with the environment. One of the main environmental indicators able to synchronize the circadian clock are temperature cycles. In laboratory, research in Drosophila melanogaster model ha s shown that rectangular temperature cycles (with abrupt temper ature changes) produce a locomotor activity pattern different from cycles with gradual temperature variations, which are closer to those organism in nature . Thus we tried to establish a semi - natural system that was as close as possible to the daily tempera ture variations observed along one day in Rio de Janeiro. We choose as model the mosquito Aedes aegypti , the main dengue vector in Brazil. This species is known to have diurnal activity with peaks at dawn and dusk. The gradual temperature cycles we produce d were able to synchronize the activity of Ae. aegypti , but with a different profile from the one observed for rectangular temperature cycles. In the presence of light / dark cycles, the gradual temperature cycles were determinat in the amplitude of the pe aks of activity and in the phase of the main peak (evening peak). Changes in the behavior patterns seem to reflect molecular alterations in the expression of the circadian clock genes. Possibly, genes from the first regulatory loop ( per , tim and cry2 ) woul d be important for the amplitude, while the genes from the second regulatory loop ( vri , Pdp1 and cyc ) would participate in the phase adjustment of the main peak. Our results also suggest that temperature cycles synchronize the clock through chordotonal org ans. Mosquitoes silenced by RNA interference assay for a n important gene in the functioning of these structures ( nocte ) presented loss in the synchronization of their activity temperature cycles. Thus, we conclude that the gradual temperature cycles we produced are effective for synchronizing Ae. aegypti and may possibly contribute to studies of behavior, allowing a more natural app roach in the laboratory. The use of gradual temperature cycles confirms the importance of this environmental indicator in synergy with the cycles of light / dark to promote full synchronization of the organisms circadian expression and activity rhythms

Made available in DSpace on 2016-03-01T13:59:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 jose_cortes_ioc_mest_2013.pdf: 6709071 bytes, checksum: 60de5f909a8221f0d6b48fd932e9c808 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O vírus do Dengue é transmitido naturalmente pelo mosquito Aedes aegypti, seu vetor principal no mundo, e em algumas regiões, também pelo mosquito Ae. albopictus. Segundo a OMS, o Dengue tornou-se a mais importante arbovirose transmitida por vetores no mundo, causa anualmente cerca de 390 milhões de infecções no mundo, e põe em risco uma população de cerca de 2,5 a 3 bilhões de pessoas. O Dengue é endêmico de regiões tropicais como o sudeste asiático, sul do Pacífico, África Oriental, Caribe e América Latina. Na Colômbia, o primeiro surto de Dengue na cidade de Letícia (Amazonas), fronteira com o Brasil, foi em 2011 com 540 casos notificados de Dengue, bem como em 2012, foram notificados 533 casos. No Brasil, Tabatinga (Amazonas, Brasil), município na fronteira com a Colômbia, notificou 418 casos da Dengue em 2012. Em 1996, Ae. albopictus foi registrado na cidade de Tabatinga, mas foi rapidamente erradicado. O primeiro registro de Ae. albopictus na Colômbia foi no bairro de La Esperanza (Letícia, Amazonas) em 1998. por outro lado, em Tabatinga Ae. aegypti foi encontrado em 2008 no porto civil, e na cidade de Letícia em 2009 no bairro de La Union. Se estudou e avaliou a distribuição espaço-temporal dos criadouros positivos e as populações de Ae. albopictus e Ae. aegypti e sua associação com os fatores climáticos e os casos de Dengue na área urbana do município de Letícia-Amazonas (Colômbia). Se realizaram análises descritivas e inferenciais, mapas temáticos da distribuição de ambos vetores, os casos de Dengue, e o risco potencial de transmissão do Dengue no município Ae. albopictus apresentou maior preferência por recipientes descartáveis e tanques baixos, enquanto Ae. aegypti foi mais frequente em tanques baixos e recipientes descartáveis, respectivamente. Ae. albopictus mostrou um padrão menos sazonal que Ae. aegypti, e dentre as variáveis meteorológicas investigadas, as mais importantes foram a precipitação e a exposição à luz solar. A precipitação encontrou-se positivamente correlacionada com os pindices de infestação de ambas espécies, contrário à exposição à luz solar, que encontrou-se negativamente correlacionada. Os índices de infestação de Ae. aegypti foram significativamente mais associados a esses fatores, comparado ao encontrado com Ae. albopictus. Observou-se uma importante redução de criadouros positivos e dos índices de infestação para Ae. albopictus, após a introdução de Ae. aegypti em 2009. Por outro lado, encontrou-se evidência significativa de deslocamento de Ae. albopictus para a periferia da área urbana de Letícia, após a introdução de Ae. aegypti em 2009. Baseando-se na ocorrência de Ae. aegypti e Dengue nos quarteirões da área urbana do município de Letícia, concluiu-se que os níveis mais altos de transmissão se encontram nos bairros fronteiriços ou periféricos da cidade. Finalmente, o difícil controle e a vigilância ao longo da faixa de fronteira continuará sendo um desafio para reduzir os índices de infestação e a transmissão da doença na cidade, pelas reinfestações, pelos serviços de saneamento precários, entre outros fatores, que contribuem para a manutenção do vírus do Dengue / The virus of the Dengue is transmitted naturally by the mosquito Ae. aegypti , its main vector in the world, and in some regions, also by the mosquito Ae. albopictus . According to the WHO, the Dengue became the most important arbovirose transmitted by vectors in the world, cause annually nearly 390 million infections in the world, and it puts at risk a population of around 2,5 to 3 billion persons. The Dengu e is endemic of tropical regions like the South - East Asia, Pacific South, Oriental Africa, Caribbean and Latin America. In Colombia, the first Dengue outbreak in the city of Leticia (Amazon), borders with Brazil, was in 2011, with 540 notified cases of Den gue, as well as in 2012, 533 cases were notified. In Brazil, Tabatinga (Amazon, Brazil), county in the frontier with Colombia, notified 418 cases of Dengue in 2012. In 1996, Ae. albopictus was registered in the city of Tabatinga, but it was quickly eradica ted. The first register of Ae. albopictus in Colombia was in the Neighborhood of La Esperanza (Leticia, Amazon) in 1998. On the other side, in Tabatinga Ae aegypti was found in 2008 in the civil port, and in the city of Letícia in 2009 in the neighborhood of La Union. It was studied and evaluated the distribution of the positive breeding sites in the space and time and the Ae. albopictus and Ae. aegypti populations and its association with the climatic factors and cases of Dengue at the urbane area of the c ounty of Leticia - Amazonas (Colombia). It was made descriptive analyses and inferentials, thematic maps of both vectors distribution, the cases of Dengue, and the potential risk of transmission of the Dengue in the county. Ae. albopictus presented bigger pr eference for disposable containers and low tanks, while Ae. aegypti was more frequent in low tanks and disposable containers, respectively. Ae. albopictus showed a less seasonal standard behaviour than Ae. aegypti , and among the investigated meteorological variables, the most important one was rainnig and the exposure to solar light. Rainning was positively correlated with the infestation rates of both species, opposite to the exposure to the solar light, which was negatively correlated. Infestation rates o f Ae. aegypti were significantly more associate to these factors, compared to the find with Ae. albopictus . It was observed an important reduction of positive breeding sites and of the infestation rates for Ae. albopictus , after the introduction of Ae. aeg ypti in 2009. On the other side, it was found significative evidences of dislocation of Ae. albopictus for the periphery of the urbane area of Letícia, after the introduction of Ae. aegypti in 2009. Based in the incident of Ae. aegypti and Dengue in the bl ocks of the urbane area of the county of Letícia, it was concluded that the highest transmission levels are in the frontier or peripheric neighborhoods of the city. Finally, the difficult control and the vigilance along the frontier belt will keep being a challenge to reduce the infestation rates and disease transmission at the city, by reinfestations, by precarious sanitation services, among other factors, which contribute for keeping the virus of Dengue

Made available in DSpace on 2016-03-18T12:14:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 eugenio_hottz_ioc_dout_2014.pdf: 16733087 bytes, checksum: 8997b2db1738619b3afa2e139fcbb5b8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue é a arbovirose humana mais prevalente no mundo. A infecção pelo vírus da dengue (DENV) tem um vasto espectro de sintomas, causando desde febre auto-limitada até casos graves com sangramento e choque podendo evoluir para o óbito. Apesar de plaquetopenia ser frequentemente observada em pacientes com dengue, a participação das plaquetas na patogênese da dengue permanece pouco explorada. Nós inicialmente investigamos a ativação plaquetária em pacientes com dengue ou em plaquetas expostas ao DENV in vitro. Na tentativa de associar a ativação plaquetária com mecanismos imunopatogênicos da dengue, a secreção de citocinas e quimiocinas em plaquetas estimuladas com o DENV e a síntese de IL-1\03B2 em plaquetas de pacientes com dengue foram investigadas. Os mecanismos envolvidos no processamento e secreção da IL-1\03B2, bem como suas contribuições para a permeabilidade endotelial também foram objetos de estudo. A formação de agregados plaqueta-monócito e a expressão de marcadores de ativação de monócitos também foram avaliados em pacientes com dengue. Finalmente, nós investigamos o impacto da apoptose de plaquetas na dengue e sua relação com o desfecho de plaquetopenia. Nossos resultados indicam intensa ativação plaquetária em pacientes com dengue, especialmente em pacientes com dengue grave Nós observamos uma expressão elevada de IL-1\03B2 em plaquetas e micropartículas (MP) derivadas de plaquetas de pacientes com dengue, ou após a exposição de plaquetas ao DENV in vitro. Nós demonstramos que a dengue induz a montagem do inflamassoma NLRP3, ativação de caspase-1 e secreção de IL-1\03B2 de modo dependente da geração de espécies reativas de oxigênio na mitocôndria. A IL-1\03B2 sintetizada por plaquetas foi secretada principalmente em MPs. A ativação do inflamassoma e secreção de MPs contendo IL-1\03B2 correlacionaram com sinais de permeabilidade endotelial aumentada nos pacientes. Além disso, MPs recuperadas de plaquetas expostas ao DENV induziram aumento de permeabilidade endotelial in vitro de modo dependente do receptor de IL-1. Plaquetas de pacientes com dengue também apresentaram características de apoptose como despolarização da mitocôndria, ativação de caspase-3 e de caspase-9 e exposição de fosfatidilserina, que foram associadas à plaquetopenia nos pacientes com dengue. Nós também demonstramos níveis elevados de agregados plaqueta-monócito em pacientes com dengue. A exposição de monócitos isolados de voluntários saudáveis a plaquetas isoladas de pacientes com dengue induziu a secreção das citocinas IL-1\03B2, IL-8, IL-10 e MCP-1 pelos monócitos A secreção de citocinas nos agregados plaqueta-monócito foi dependente tanto da adesão mediada por Pselectina quanto do reconhecimento de plaquetas apoptóticas, que regulou a secreção de IL- 10. Nossos resultados trazem novas evidências de que as plaquetas participam ativamente como efetoras da resposta inflamatória na dengue, e contribuem para os mecanismos patogênicos envolvidos nas alterações hemodinâmicas comuns aos casos de dengue grave / Dengue is the most frequent hemorrhagic viral disease and re-emergent infection in the world. Dengue infection has a large spectrum of clinical manifestations from self-limited febrile illness to severe syndromes accompanied by bleeding and shock. Although thrombocytopenia is characteristically observed in mild and severe forms of dengue, the role of platelet activation in dengue pathogenesis has not been fully elucidated. We hypothesize that platelet activation have major roles in inflammatory amplification and increased vascular permeability during severe forms of dengue. Here we investigate platelet activation in patients with dengue or in platelets exposed to DENV in vitro. The secretion of cytokines and chemokines in DENV-stimulated platelets and the synthesis of IL-1β in platelets from patients with dengue were investigated. The mechanisms involved in processing and secretion of IL-1β, as well as potential contribution of these events to endothelial permeability during infection were also evaluated. Platelet-monocyte aggregates formation and markers of monocyte activation were evaluated in patients with dengue. Finally, we investigated the impact of platelet apoptosis in dengue-associated thrombocytopenia. Our results show increased platelet activation in patients with dengue, especially patients with severe dengue. We showed higher expression of IL-1β in platelets and platelet-derived MPs from patients with dengue or after platelet exposure to DENV in vitro. We demonstrated that DENV infection leads to assembly of NLRP3 inflammasomes, activation of caspase-1, and caspase-1-dependent IL-1β secretion. Our findings also indicate that platelet-derived IL-1β is chiefly released in MPs through mechanisms dependent on mitochondrial reactive oxygen species-triggered NLRP3 inflammasomes. Inflammasome activation and platelet shedding of IL-1β-rich microparticles correlated with signs of increased vascular permeability. Moreover, microparticles from DENV-stimulated platelets induced enhanced endothelial permeability in vitro in an IL-1R-dependent manner. Platelets from dengue-infected patients also showed characteristics of apoptosis, including mitochondrial depolarization, activation of caspase-3 and -9 and phosphatidylserine exposure, which were associated with thrombocytopenia. We also observed increased levels of platelet-monocyte aggregates in blood samples from patients with dengue. The exposure of monocytes from healthy volunteers to platelets from patients with dengue induced the secretion of the cytokines IL-1β, IL-8, IL-10 and MCP-1. In addition to the well-established modulation of monocyte cytokine responses by activated platelets through P-selectin binding, we found that interaction of monocytes with apoptotic platelets mediate IL-10 secretion through phosphatidylserine recognition in platelet-monocyte aggregates. Our findings provide new evidence that platelets actively participate as effector cells in inflammatory response of dengue infection, and contribute to the pathogenesis of dengueassociated vasculopathy.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:42:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 marcio_cipitelli_ioc_mest_2014.pdf: 2535966 bytes, checksum: c480c7ecf9d9f5dabc625d7c2fd0a32c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Quimiocinas são citocinas envolvidas em processos inflamatórios e homeostásicos. Estudos in vitro vêm demonstrando a influência desses mediadores na alteração da permeabilidade endotelial na infecção pelo vírus dengue (DENV). Dengue é uma doença de amplo espectro clínico, variando desde uma infecção assintomática a casos graves, com manifestações hemorrágicas e/ou extravasamento plasmático e, em menor frequência, ao óbito de pacientes. O objetivo de nosso projeto foi avaliar o envolvimento de quimiocinas séricas presentes em pacientes infectados pelo DENV na alteração da permeabilidade transendotelial, utilizando células endoteliais primárias num sistema in vitro. Para isso realizamos estudo populacional para obtenção de amostras de sangue de casos suspeitos de dengue durante epidemia de 2013 e de indivíduos sadios. Após confirmação laboratorial, foi realizada classificação clínica dos casos segundo a OMS 2009. No soro dos pacientes e controles foi realizada quantificação dos níveis das citocinas TNF-\03B1, IL-1\03B2 e IL-10 e das quimiocinas CXCL8/IL-8, CCL2/MCP-1, CXCL10/IP-10 CCL5/RANTES e CX3CL1/Fractalcina por ELISA ou LUMINEX. Para os ensaios de permeabilidade, foram feitos cultivo e manutenção de células endoteliais primárias HMVEC-d para padronização do ensaio, através da medida da resistência elétrica transendotelial (TEER). Na tentativa de avaliar a contribuição das quimiocinas na medida do TEER, foram adicionados sobre monocamada de HMVEC-d com 80% de confluência em sistema Transwell, 20% de soro de pacientes pré-tratados ou não com bloqueadores de CCL4/MIP-1\03B2, CXCL10/IP-10, CX3CL1/Fractalcina, CCL5/RANTES e IgG e feito uma cinética. Brevemente, foram confirmados 181 pacientes, com predominância do DENV-4, distribuídos segundo a OMS em: 125 febre do dengue sem sinais de alarme (FD), 54 FD com sinais de alarme (FDSA) e 2 dengue grave (FDSA/Grave) De forma interessante, a infecção pelo DENV-4 sugeriu características clínicas e laboratoriais mais brandas comparadas a epidemias por outros sorotipos. Independentemente da gravidade, os pacientes DENV-4 apresentaram altos níveis de TNF-\03B1, IL-10, CCL2/MCP-1, CXCL8/IL-8, CXCL10/IP-10 e CX3CL1/Fractalcina, mas não de IL-1\03B2 e CCL5/RANTES comparado aos controles saudáveis. Nossa estratégia para avaliar a capacidade de alterar a permeabilidade das monocamadas de HMVEC-d foi agrupar os pacientes em dois grupos, altos (n=5) e baixos (n=5) produtores de TNF-\03B1, IL-1\03B2 e CXCL8/IL-8. Surpreendentemente, os níveis séricos de TNF-\03B1, IL-1\03B2 e CXCL8/IL-8 parecem não influenciar a medida do TEER. Dos 10 pacientes, 4 não alteraram a medida do TEER e 6 alteraram em algum momento da cinética. O bloqueio das quimiocinas parece não ter influenciado a medida do TEER nas condições estabelecidas. Análises de correlação indicaram uma tendência dos níveis séricos de IL-1\03B2 e CXCL8/IL-8 e CX3CL1/Fractalcina protegerem a monocamada das alterações, enquanto essa proteção parece ter sido mais efetiva em relação aos níveis séricos CCL5/RANTES. O conjunto desses dados nos indica que o DENV-4 parece levar a uma dengue na forma mais branda nos pacientes, aliado a uma redução de parâmetros clínico-laboratoriais associados à gravidade. Citocinas e quimiocinas estão presentes em altos níveis séricos nestes pacientes e parecem ser autorreguladas. Dentre os mediadores inflamatórios, quimiocinas como CCL5/RANTES parece influenciar de forma impactante a alteração da permeabilidade de células endoteliais, o que não foi confirmado pelos ensaios de bloqueio, mas pela correlação direta dos níveis séricos de CCL5/RANTES com a medida do TEER / Chemokines are cytokines involved in homeostatic and inflammatory processes . In vitro studies have demonstrated the influence of these mediators in the alteration of endothelial permeability in Dengue virus (DENV) infection. Dengue is a wide clinical spectrum disease, ranging from an asympto matic infection to severe cases with hemorrhagic manifestations and / or plasma extravasation that could result in death of patients. The aim of our project was to evaluate the involvement of serum chemokines present in patients infected with DENV in chang ing the transendothelial permeability using primary endothelial cells in vitro system. To population - based study conducted to obtain blood samples from suspected dengue cases during the epidemic of 2013 and the control group. After laboratory confirmation, clinical classification was made of the cases according to the WHO 2009. In the serum of patients and controls was performed quantification of levels of the cytokines TNF - α, IL - 1β and IL - 10 and chemokines CXCL8/IL - 8, CCL2/MCP - 1, CXCL10/IP - 10, CCL5/RANTES and CX3CL1/Fractalkine by ELISA or LUMINEX. For the permeability tests were made cultivation and maintaining prim ary endothelial cell (HMVEC - d) and measuring transendothelial electrical resistance (TEER). In order to assess the contribution of chemokines i n the extent TEER were added to monolayer HMVEC - d at 80% confluence in Transwell System, 20% serum from patients pretreated or not with blocking CCL4/MIP - 1β, CXCL10/IP - 10, CX3CL1/Fractalkine, CCL5/RANTES and IgG made kinetics. Briefly, 181 patients were co nfirmed, with a predominance of DENV - 4, distributed according to the WHO in: 125 dengue fever without warning signs (FD), 54 FD with alarm signals (FDSA) an d 2 severe dengue (FDSA/Severe) . Interestingly, infection with DENV - 4 suggested clinical and laborat ory characteristics milder compared to epidemics by other serotypes. Regardless of gravity, DENV - 4 patients presented high levels of TNF - α, IL - 10, CCL2/MCP - 1, CXCL8/IL - 8, CXCL10/IP - 10 and CX3CL1/Fractalkine, but not IL - 1β and CCL5/ RANTES compared to healt hy controls. Our strategy to assess the capacity change the permeability of monolayers HMVEC - d was to group the patients into two groups, high (n = 5) and low (n = 5) TNF - α producers, IL - 1β and CXCL8 / IL - 8. Surprisingly, the serum levels of TNF - α, IL - 1β and CXCL8/IL - 8 did not significantly influence the measurement of TEER. Of the 10 patients, 4 did not alter the extent TEER and 6 changed at some point in kinetics. Blocking chemokine did not influ ence the measurement of TEER on the established conditions. Correlation analysis indicated a trend of serum levels of IL - 1β patients and CXCL8/IL - 8 and CX3CL1/Fractalkine protect monolayer of changes, while this protection appears to have been more effective with respect to serum CCL5/RANTES. These data suggest th at the DENV - 4 appears to lead to dengue in milder form in patients, combined with a reduction of clinical and laboratory parameters associated with severity. Chemokines and cytokines are present in high serum levels in these patients and seem to be autorre gulated. Among inflammatory mediators, such as chemokine CCL5/RANTES impactful seems to influence the change in permeability of endothelial cells, which was not confirmed by blocking assays, but for the direct correlation of serum levels of CCL5/RANTES wit h the measure of TEER

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:47:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 mario_branco_ioc_mest_2014.pdf: 3531615 bytes, checksum: 912f973f0f85cb9d0adb10d8d1d806d7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue é a arbovirose mais importante do mundo. Nos últimos 50 anos, vem progressivamente alcançando o status de pandemia global. Este trabalho descreve a vigilância virológica e os aspectos epidemiológicos da dengue no Estado do Rio Grande do Norte, no período de 2010 a 2012. Foram estudados 1581 casos pela metodologia de isolamento viral e/ou RT-PCR para detecção e tipagem viral, provenientes de diferentes Centros de Saúde do Estado do Rio Grande do Norte, no período compreendido entre Janeiro de 2010 e Dezembro de 2012. A infecção foi confirmada através do isolamento viral em 27% dos casos, enquanto a RT-PCR confirmou 24% dos casos estudados, a união das duas metodologias confirmou 30% dos casos estudados. Este estudo detectou a circulação de todos os quatro sorotipos do vírus Dengue no Rio Grande do Norte, havendo a circulação do DENV-1, DENV-2 e DENV-3 em 2010, já em 2011 ocorreu a circulação do DENV-1, DENV-2 e a introdução do DENV-4 no Estado, após um período de 30 anos sem registro no país. Em 2012 foi detectada apenas a circulação do DENV-4. O sorotipo predominante em 2010 foi o DENV-2, representando 53,33% dos casos positivos, seguido do DENV-1, com 45,33% e DENV-3 com 1,33%. Em 2011, o DENV-1 foi predominante com 75,49% dos casos positivos, seguido por DENV-2 e DENV-4. Em 2012, o DENV-4 foi o único detectado, com 100% dos casos positivos A distribuição geográfica dos casos concentrou-se em Natal, com 53,97% dos casos confirmados. Em relação à distribuição mensal, tivemos um maior número de casos nos meses de Maio e Abril, 23% e 21% dos casos positivos respectivamente (p< 0,0001). A faixa etária mais acometida foi a de 0 a 10 anos, com 38% dos casos positivos, sendo que apenas em 2012, a faixa etária de 11 a 30 anos foi a mais acometida com 51,33% dos casos (p=0,0001). A média de idade dos casos confirmados por sorotipo foi significativamente maior para o DENV-4 (p<0,0001), sendo de 29,87 anos (DP: 17,01). Em relação ao gênero, o sexo feminino representou 52% dos casos. A média de idade de mulheres afetadas pela Dengue foi maior (p=0,0345) que a dos homens afetados, sendo de 22,69 (DP: 18,85). A caracterização genética das cepas circulantes confirmou a circulação do genótipo V, genótipo Sudeste Asiático/Americano e genótipo II, respectivamente para DENV-1, DENV-2 e DENV-4. Este trabalho subsidiará uma melhor compreensão sobre a ação desses vírus na população Norte-Riograndense, fornecendo auxílio às ações voltadas ao controle da doença na região, constituindo uma importante contribuição ao se considerar o grande impacto dessa doença no RN / Dengue is considered as the most important arthropod - borne viral disease throughout the world, which currently represents a major public health problem in tropical and subtropical countries, i ncluding Brazil. This work presents results of virological surveillance and epidemiological aspects of dengue in the state of Rio Grande do Norte, Brazil, 2010 - 2012. A total of 1,581 cases, reported from January 2010 to December 2012 at various health cent ers in the state, were studied by the method of viral isolation and / or RT - PCR for viral detection and typing. The infection was confirmed by virus isolation in 27% of the cases, while the RT - PCR confirmed 24% of the cases studied; the union of the two me thodologies confirmed 30% of the cases studied. This study detected the circulation of all four serotypes of dengue virus in Rio Grande do Norte, with the circulation of DENV - 1, DENV - 2, and DENV - 3 in 2010, and the circulation of DENV - 1, DENV - 2, and the in troduction of DENV - 4 in the state in 2011, after a 30 - year period without registration in the country. The predominant serotype in 2010 was the DENV - 2, representing 53.33% of the positive cases, followed by DENV - 1, with 45.33% and DENV - 3 with 1.33%. In 201 1, DENV - 1 was predominant with 75.49% of the positive cases, followed by DENV - 2 and DENV - 4. In 2012, DENV - 4 was predominant and exclusive, 100% of positive cases. Regarding the spatial distribution, most of cases occurred in Natal, with 53,97% of confirmed cases. The monthly distribution showed a greater number of positive cases in the months of April (21%) and May (23%) (p <0.0001). The most affected age group was 0 - 10 years with 38% positive cases, and only in 2012, the age group 11 - 30 years was the most affected with 51.33% of the cases (p = 0.0001). The average age of confirmed cases was significantly higher for serotype DENV - 4 (p <0.0001), being 29.87 years (SD: 17,01). Regarding gender, females represented 52% of the cases. The average age of women aff ected by dengue was higher (p = 0.0345) than the affected men, with 22.69 (SD: 18.85). Genetic characterization of circulating strains confirmed the circulation of genotypes V, Southeast Asian / American and II, respectively, for DENV - 1, DENV - 2 and DENV - 4. This work furthers a better understanding of the action of these viruses in the local population. Providing assistance to efforts aimed at controlling the disease in the region is an important contribution when considering the major impact of this disease

Made available in DSpace on 2016-04-07T13:18:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 103.pdf: 2012878 bytes, checksum: 1c2d47028c5fe5113df5b6ac2dae714a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / A dengue é uma doença aguda febril transmitida principalmente pelo mosquito Aedes aegypti. No Brasil, a doença encontra-se em franca expansão, com epidemias registradas desde a década de 80. O sorotipo 4 da doença reemerge no país em 2010 e, em 2011, são identificados os primeiros casos de infecção pelo Dengue 4 na região Sudeste, no município de Niterói. Foi objetivo geral: analisar a disseminação do vírus Dengue 4, no tempo e no espaço, no Estado do Rio de Janeiro, no período de janeiro de 2011 a dezembro de 2013. Foram objetivos específicos: descrever os casos notificados de dengue no Estado do Rio de Janeiro no período; descrever os casos notificados de dengue 4, ou seja, os casos confirmados laboratorialmente como dengue 4, no Estado do Rio de Janeiro no período de janeiro de 2011 a dezembro de 2013; descrever como o grau de cobertura da sorologia entre os casos notificados variou no tempo e espaço; elaborar mapas que permitam a análise espacial e temporal do dengue 4 no período supracitado. Trata-se de um estudo ecológico exploratório. Realizou-se uma análise descritiva simples do número de casos, sorologias realizadas, sorotipos identificados e classificação dos casos da dengue por semana epidemiológica no período de estudo, a descrição da distribuição espacial através de mapas e a descrição temporal através de gráficos utilizando-se os programas Excel, R 3.1.1 e TabWin 3.6b. (...) / O município do rio de Janeiro foi o que mais confirmou casos da doença. Estudos que busquem analisar e divulgar a os dados de notificação não somente da dengue, mas de qualquer doença e agravo são importantes, pois dão subsídios aos sistemas de vigilância epidemiológica sobre situações referentes à incompletudes dos bancos de dados, exames sorológicos realizados em uma quantidade insuficiente por exemplo, o que influencia diretamente na qualidade da informação gerada. Tais pesquisas permitem que a vigilância epidemiológica se auto-avalie e busque modificar o que esta sendo realizado insatisfatoriamente, visando um serviço de excelência. / Dengue is an acute febrile disease transmitted primarily by Aedes aegypti. In Brazil, the disease is in full expansion, with epidemics recorded since the 80s Serotype 4 reemerge in the country in 2010 and in 2011 the first cases of infection with dengue 4 in the Southeast were identified, in Niterói. The overall objective of this project was to analyze the spread of Dengue 4 virus, in time and space, in the state of Rio de Janeiro, from January 2011 to December 2013. Specific objectives were: to describe the reported cases of dengue in Rio de Janeiro state in period; describe the reported cases of dengue 4, i.e., the laboratory confirmed cases as dengue 4 in the state of Rio de Janeiro in January 2011 to December 2013; describe the degree of serology coverage among reported cases in time and space; produce maps that allow spatial and temporal analysis of dengue 4 in the above period. We performed a simple descriptive analysis of the number of cases, serological tests, identified serotypes and clinical classification of cases by dengue epidemiological week during the study period, the description of the spatial distribution through maps and temporal description through graphics using the Excel programs, R 3.1.1 and TabWin 3.6b.^ien / The municipality of Rio de Janeiro was the one that most confirmed cases of the disease. Studies that seek to analyze and disseminate the notification data not only of dengue, but of any disease and injury are important as they provide a basis for epidemiological surveillance systems on situations related to the incompleteness of the databases, serological tests performed in an insufficient amount, which directly influences the quality of information generated. Such studies allow the surveillance system to self-assess and seek to change what is being done not in the best possible way in order to improve service excellence. (AU)^ien

Made available in DSpace on 2016-04-27T12:29:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 fernanda_jacome_ioc_mest_2015.pdf: 2626313 bytes, checksum: 64d9f43cae69897ab2bde62384cc1c6a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O DENV-2 foi introduzido no Brasil em 1990, quando os primeiros casos de Febre hemorrágica do Dengue (FHD) e de Síndrome de Choque por Dengue (SCD) foram reportados. Em 2007 este sorotipo reemergiu, causando em 2008 a maior epidemia registrada no país até então. Estudos filogenéticos realizados com cepas de DENV-2 que circularam em 2007-2008 demonstram que os vírus reemergentes pertencem aos mesmo genótipo que os vírus inicialmente introduzidos no país, contudo, eles agrupam-se formando uma linhagem distinta. O DENV-2, frequentemente associado com casos de FHD/SCD, tem sido o sorotipo tradicionalmente mais estudado devido a sua associação com grandes epidemias e com manifestações clínicas mais graves. Entretanto, estudos sobre a viremia induzida por linhagens distintas de um mesmo genótipo do sorotipo 2 e sua associação com a gravidade da doença até o momento não haviam sido realizados. Ademais, um dos maiores desafios no que diz respeito ao estudo da patogênese do DENV e ao desenvolvimento de fármacos e vacinas contra a dengue é a ausência de um modelo animal que reproduza a doença tal qual esta ocorre em casos humanos, sendo o estabelecimento de modelos animais para estudos de infecção e doença causada pelos DENV de grande relevância para as diversas áreas de pesquisa em dengue Diante deste cenário, este estudo teve como objetivo principal analisar as alterações morfológicas e a viremia da infecção de duas linhagens distintas de DENV-2 epidêmicas, isoladas de pacientes e não neuroadaptadas em camundongos BALB/c. Os resultados demonstram a suscetibilidade do camundongo BALB/c às duas linhagens do DENV-2 e a capacidade dos vírus se multiplicarem em diferentes órgãos, incluindo coração, pulmão, cérebro e baço. As alterações morfológicas induzidas pelas duas linhagens são semelhantes bem como às alterações observadas em casos humanos de dengue e que a linhagem I induz, em média, uma viremia mais elevada em todos os tipos de órgãos testados / DENV-2 was introduced in Brazil in 1990, when the first cases of Dengue Hemorrhagic Fever (DHF) and Dengue Shock Syndrome (DSS) were reported. In 2007 this serotype re-emerged, causing in 2008 the largest epidemic registered in the country until then. Phylogenetic studies with DENV-2 strains that circulated in 2007-2008 showed that although the re-emerging viruses belong to the same genotype as the first viruses introduced in the country, they grouped as a distinct lineage. DENV-2 that is often associated with DHF/DSS cases, has been traditionally the most studied serotype because of its association with major epidemics and more severe clinical manifestations. However, studies on viremia induced by different lineages of the same genotype and its association with the disease severity have not yet been performed. Moreover, a major challenge regarding the study of the pathogenesis of DENV and the development of drugs and vaccines against dengue is the lack of an animal model which reproduces this disease as it occurs in human cases, thus, the development of animal models for studies of infection and disease caused by DENV is of great relevance to the various areas ofdengue research. On that scenario, this study aims to analyze morphological alterations and viremia of infection of two different lineages of epidemic DENV-2, isolated from patients and nonneuroadapted, in BALB/c mice. The results demonstrate the susceptibility of BALB/c mouse to the two lineages of DENV-2 and the ability of the virus to replicate in different organs, including heart, lung, brain and splen. Morphological changes induced by both DENV-2 lineages are similar to the changes observed in dengue human cases and Lineage I induces, on average, higher viremia in all tested organs types. / 2016-05-28

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:06:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 edson_oliveira_ioc_dout_2014.pdf: 7681363 bytes, checksum: d1541a9340bac4e63312fb02768ab622 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue é considerada uma grande ameaça em um vasto território mundial que resulta em cerca de 20 mil mortes ao ano. Modelos animais para o estudo da dengue constituem uma ferramenta importante não somente para o desenvolvimento de estratégias anti-dengue como vacinas e antivirais, mas também para o estudo da resposta imune induzida após a infecção. Uma abordagem amplamente utilizada para testes de candidatos vacinais é o uso de camundongos BALB/c infectados por via intracerebral (i.c.) com um vírus DENV neuroadaptado. Como este modelo envolve um desafio letal, inúmeros trabalhos fizeram uso apenas deste parâmetro para avaliar a eficácia de vacinas anti-dengue. Sendo assim, pouco se sabe a respeito da dinâmica da resposta imune primária em animais infectados pela via intracerebral, bem como os mecanismos pelos quais uma vacina pode exercer proteção contra a infecção sob tais condições. Neste contexto, o presente estudo objetivou analizar a resposta imune anti-dengue no modelo BALB/c infectado por via i.c. com o vírus DENV neuroadaptado, investigando a participação de subpopulações celulares na imunidade primária e também durante a imunidade adaptativa induzida por vacinas de DNA. Com relação à resposta imune primária, observamos que apesar da via de inoculação não natural empregada, foi possível observar efeitos periféricos decorrentes da infecção com DENV2, como ativação e migração de células T para órgãos alvo, bem como produção de anticorpos e citocinas Com relação à resposta imune adaptativa aos antígenos do DENV, detectamos que vacinas de DNA que codificam as proteínas NS1, NS3 ou E de DENV2 produzem efeitos peculiares quanto à ativação de células T. Vimos que os antígenos E e NS3, principalmente NS3, induzem ativação de células T mais acentuada do que o antígeno NS1, segundo a expressão reduzida de CD45RB na superfície destas células. Experimentos de transferência de células T utilizando CFSE como sonda mostraram que após o desafio com DENV, animais protegidos pela vacinação com pcTPANS1 apresentaram ativação marcante de células T com proliferação e migração destas células para diversos locais no hospedeiro, incluindo tecido hepático e cerebral. Durante a resposta imune adaptativa ao antígeno NS1, foram encontrados alguns possíveis correlatos de proteção, como por exemplo, os fenótipos TCD4+CD44hi e TCD8+CD44hiCD69- presentes no baço. Além disso, uma população celular de alta granulosidade B220hiCD19+CD11clow presente no sangue de camundongos BALB/c após o desafio com DENV parece estar relacionada a uma melhor condição clínica destes animais. Em conclusão, este estudo contribuiu para a compreensão da dinâmica da resposta imune em animais infectados pela via i.c. Além disso, o estudo forneceu novos insights na compreensão dos mecanismos envolvidos na proteção induzida por vacinas de DNA anti-dengue / Dengue is considered a major threat worldwide that results in approximately 20000 deaths every year. Animal models for dengue disease represent an important tool not only to delelop anti-dengue strategies, such as vaccines and antivirals, but also to investigate the immune response incuced during the infection. A commonly used appoach to evaluate vaccine candidates is the BALB/c mouse model infected with a neuroadapted DENV by the intracerebral (i.c.) route. Since the animals succumb to the infection in this model, many groups consider only the survival as the endpoint in the evaluation of anti-dengue vaccine efficacy. Therefore, little is known about the primary immune response dynamics of these animals infected by the i.c. route, as well as the mechanisms through which the vaccine may protect the host under such conditions. In this context, the present study aimed to analyse the primary immune response against DENV in the BALB/c mouse model, investigating the role of cellular subpopulations in the primary immunity and also during the adaptative immunity induced by DNA vaccines. Concerning the primary immune response, eventhough the inoculation route applied was not natural, peripheral effects caused by DENV infection, like T cell activation and migration to target organs, as well as the production of antibodies and cytokines were observed. With respect to the adaptive immune response to DENV antigens, DNA vaccines that encode the NS1, NS3 or E DENV proteins produced peculiar effects once considering the activation of T cells. We found that E and NS3 antigens, mainly NS3, induced more pronounced T cell activation in comparison to NS1 protein, as measured by the surface membrane expression of CD45RB. Transference experiments of T cells obtained from vaccinated animals and traced by CFSE showed evident T lymphocytes activation, proliferation and migration to different sites in the host, including hepatic and brain tissue, after DENV challenge. During the adaptive immune response to NS1 antigen we found possible cell-fenotypes related to protection, such as TCD4+CD44hi and TCD8+CD44hiCD69- detected in the spleen. Besides, a cell population B220hiCD19+CD11clow, showing high granulosity, detected in blood samples after DENV challenge seemed also to be related with a better clinical condition of these animals. In conclusion, this study contributed for the elucidation of the immune response dynamics in animals infected with DENV by the i.c. route. Moreover, this work provided new insights in the comprehension of the mechanisms involved in the protection induced by anti-dengue DNA vaccines. / 2017-10-16

Made available in DSpace on 2016-05-11T12:56:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 jessica_silva_ioc_mest_2015.pdf: 2328113 bytes, checksum: b930ef473cd389fd3c0702a994f45595 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O vírus dengue é caracterizado por quatro sorotipos antigenicamente distintos (DENV-1 a 4), apresenta um amplo espectro de manifestações clínicas, em que o risco de desenvolvimento das formas graves está parcialmente relacionado com a resposta imune de reatividade cruzada a sorotipos heterólogos. Os alelos do antígeno leucocitário humano (HLA) de classe I e classe II têm sido correlacionados com a susceptibilidade à dengue grave em diferentes populações. Neste estudo, nosso objetivo foi associar a frequência dos alelos do HLA de classe I e II de pacientes com dengue, caracterizados pela infecção por diferentes sorotipos e apresentando diferentes manifestações clínicas, com as frequências de células T produtoras de IL-2, IFN-g e Granzima B, e também com o perfil de ativação destas células em resposta ao antígeno total de DENV-2 (DENV-2 Ag). Utilizamos uma coorte de 60 pacientes naturalmente infectados de diferentes epidemias com prevalência de DENV-1, 2 e 4. Entre os pacientes, 36 deles foram classificados como dengue (FD) e 24 deles como FD com sinais de alerta mais graves (FDSA/Graves) de acordo com a OMS, 2009. A tipagem de alelos de HLA de classe I e II foi realizada utilizando Luminex de múltiplas análises (One Lambda, CA). As células de pacientes foram cultivadas com DENV-2 Ag (isolado de um paciente brasileiro) para a realização dos ensaios de FluoroSpot de IFN-\03B3/IL-2/Granzima B. Em seguida, recuperamos gentilmente as células após a estimulação e realizamos a marcação extracelular com marcadores de ativação (CD45RO, CCR7 e CD62L) por citometria de fluxo. Para as análises estatísticas os testes T pareado, não paramétrico Mann Whitney U, Wilcoxon e as análises com o RATE foram utilizadas Desta forma, a frequência gênica dos HLA classe I mais frequentes em nossa coorte de pacientes DENV+ (>5%) inclui 6 alelos HLA-A (A*02, A*30, A*24, A*03, A*23 e A*01), 7 alelos HLA-B (B*51, B*35, B*44, B*15, B*07, B*58 e B*40), e 7 alelos HLA-C (C*07, C*04, C*03, C*06, C*15, C*08 e C*05). Para o HLA de classe II, 4 alelos HLA-DQA1 (*01, *05, *03 e *02), 5 alelos HLA-DQB1 (*03, *02, *06, *05 e *04) and 8 alelos HLA-DRB1 (*13, *04, *03, *07, *11, *01, *15 e *16). Destes, 2 alelos foram associados com aumento da susceptibilidade (alelo HLA-A*03, p=0.024) ou resistência (alelo HLA-B*15, p=0.034) ao desenvolvimento de FDSA/Grave. Além disso, 6 alelos foram associados com contagem de plaquetas abaixo de 150 mil/mm3 (alelo HLA-B*35, p=0.02, HLA-C*04, p=0.04 e supertipo A03, p=0.003) ou acima de 150 mil/mm3 (HLA-DQA1*02, p=0.033, HLA-DRB1*07, p=0.022 e supertipo A24, p=0.03). Nós demonstramos um aumento de células T produtoras de IFN-\03B3 específicas ao DENV-2 Ag em pacientes FD, mas não em pacientes FDSA/Grave, em comparação com a condição de estímulo basal. No entanto, nenhuma reposta restrita a alelos de HLA foi associada com células produtoras de IFN-\03B3, mas o alelo HLA-C*03 foi associado com células T produtoras de Granzima B após estimulação com DENV-2 Ag. Por fim, também avaliamos a frequencia de subpopulações de linfócitos T A maior parte da resposta de linfócitos T CD4+ após estímulo com DENV-2 Ag foi da subpopulação de linfócitos T CD4 CD45ROposCCR7negCD62Lneg, caracterizado por linfócitos T de memória efetora/efetor. A ausência desta resposta foi associada ao alelo HLA-B*58. Portanto, corroborando estudos anteriores, a expressão de certas moléculas de HLA contribuem com a susceptibilidade ou proteção ao desenvolvimento de formas graves da doença. Além disso, dois dos alelos mais frequentes em nossa coorte de pacientes parecem estar relacionados com uma resposta imune de alta magnitude, e, portanto, uma possível resposta imunoprotetora / The dengue virus comprises four antigenically distinct serotypes (DENV-1 to 4), characterized by a broad spectrum of clinical manifestations, in which the risk of developing the severe forms is partially related to the cross-reactive immune responses with heterologous serotypes. Human leukocyte antigen (HLA) class I and class II alleles have been correlated with susceptibility to severe dengue in different populations. In this study, our goal is to associate the HLA class I and II allele frequency from dengue patients, characterized by different serotypes infection and clinical outcomes, with the frequencies of the IL-2, IFN-g and Granzyme B-producing T-cells and also with the profile of activation of these cells in response to DENV-2 antigen. We proceeded in a cohort of 60 naturally infected patients from different epidemics with prevalence of DENV-1, 2 and 4. Among patients, 36 of them classified as dengue fever (DF) and 24 of them as DF with warning signs plus severe (DFWS/S) according to WHO 2009. The profile of HLA class I and II alleles were typed using a Luminex Multi-analyte profiling system (One Lambda, CA). Cells from patients were cultured with DENV-2 Antigen (DENV-2 Ag isolated from a Brazilian patient) for realizing IFN-\03B3/IL-2/Granzyme-B FluoroSpot assays. Then, we gently recovered these cells after stimulation and submitted them to the activation markers (CD45RO, CCR7 and CD62L) extracellular staining by flow cytometry assay The paired t test, nonparametric t test Mann Witney U, Wilcoxon and RATE analysis were used. Briefly, the genotypic frequency of the highly prevalent HLA class I found in our DENV-patients (>5%) included six HLA-A alleles (A*02, A*30, A*24, A*03, A*23 and A*01), seven HLA-B alleles (B*51, B*35, B*44, B*15, B*07, B*58 and B*40), and seven HLA-C alleles (C*07, C*04, C*03, C*06, C*15, C*08 and C*05). For HLA class II, four HLA-DQA1 alleles (*01, *05, *03 and *02), five HLA-DQB1 alleles (*03, *02, *06, *05 and *04) and eight HLA-DRB1 alleles (*13, *04, *03, *07, *11, *01, *15 and *16). These two alleles were associated with increased susceptibility (HLA-A*03 allele, p=0.024) or resistance (HLA-B*15 allele, p=0.034) to DFWS/Severe DENV clinical outcomes. Besides, six alleles were associated with platelets count bellow 150 mil/mm3 (HLA-B*35 allele, p=0.02, HLA-C*04, p=0.04 and supertype A03, p=0.003) or up 150 mil/mm3 (HLA-DQA1*02, p=0.033, HLA-DRB1*07, p=0.022 and supertype A24, p=0.03). We demonstrated an increased DENV Ag-specific IFN-\03B3-producing T cells in DF patients, but not in DFWS/Severe patients, in relation to unstimulated conditions. However, no HLA allele restricted responses were associated with the IFN-g-producing T cells, but HLA-C*03 allele was associated with the granzyme B-producing T cells following DENV-2 Ag stimulation. In the same series of experiment, we also tested the frequency T cells subsets The majority of the CD4+ T-cell responses after DENV-2 Ag stimulation were CD45ROposCCR7negCD62Lneg CD4 T-cells subsets, characterized by effector/effector memory T-cells. This response was mostly associated with HLA-B*58 allele. Therefore, confirming previous studies the expression of certain HLA molecules contribute with susceptibility to or protection from severe clinical outcome. Moreover, two of the most frequent alleles seen in our patients appear to be involved in a higher magnitude of immune response and therefore a more immunoprotective response

Made available in DSpace on 2016-05-19T13:08:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 205.pdf: 1189300 bytes, checksum: c37aa0ffee9705ba62589fa1555f712c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A infecção pelo vírus da dengue é um problema de saúde pública global que põe em risco cerca de 2,5 bilhões de pessoas no mundo, com uma incidência de 50-100 milhões de casos resultando em cerca de 24.000 mortes por ano. Os mecanismos envolvidos na resposta imune inata atuam imediatamente após o contato do hospedeiro com os antígenos virais, levando à secreção de interferon do tipo I (IFN-I), a principal citocina envolvida na resposta antiviral. Entender como o sistema IFN-I é inibido em células infectadas pelo vírus dengue pode fornecer valiosas informações sobre a patogênese da doença. Propomos neste estudo analisar a inibição da via de sinalização do IFN-I por diferentes cepas isoladas no estado de Pernambuco, assim como o desenvolvimento de um vírus recombinante da dengue expressando a proteína Gaussia luciferase, para estudos futuros de replicação e imunopatogênese. A fim de estudar a via de sinalização do IFN-I, foram selecionadas cepas dos quatro sorotipos de dengue para crescimento, concentração e titulação viral. Foi utilizada a linhagem celular BHK-21-ISRE-Luc-Hygro que expressa o gene firefly luciferase fusionado a um promotor induzido pelo IFN-I (ISRE - Interferon Stimulated Response Element). Observamos que todos os sorotipos em estudo foram capazes de inibir, em diferentes proporções, a resposta ou sinalização do IFN-I. Com o intuito de auxiliar as pesquisas em dengue, desenvolvemos um vírus repórter de dengue expressando o gene repórter da Gaussia luciferase. Células transfectadas com o transcrito in vitro de um dos clones resultou em imunofluorescência positiva, porém não houve recuperação de partículas infectivas. Outros clones deverão ser testados para recuperação de vírus recombinante repórter. Juntos, os dados da caracterização das cepas em estudo e a recuperação de partículas infectivas da construção realizada neste trabalho deverão contribuir para as pesquisas em imunopatogênese, replicação viral e desenvolvimento de antivirais contra o dengue