A infecção pelo vírus da Dengue constitui atualmente um dos maiores problemas da saúde pública pelo mundo inteiro, porque se tornou doença reemergente em várias regiões tropicais do mundo, inclusive no Brasil, e é causada por qualquer um de quatro sorotipos distintos. Por tratar-se da infecção viral urbana mais difundida no mundo, várias pesquisas em modelagem de epidemias têm se preocupado em fornecer uma fundamentação racional para tomadas de decisão, tais como adotar estratégias de vacinação ou outras estratégias, com o objetivo de controlar a propagação da doença. O objetivo deste trabalho é o de modelar e ilustrar algumas estratégias alternativas para erradicar esta doença infecciosa. Partindo da versão básica do modelo epidemiológico determinístico compartimental contínuo SEIR (suscetíveis -> expostos -> infecciosos -> recuperados), como um sistema de oito equações diferenciais, determinamos os estados de equilíbrio e a sua análise de estabilidade local, e apresentamos algumas simulações numéricas, para ilustrar os resultados analíticos. A seguir, propomos um modelo discreto correspondente, do qual reconhecemos estados de equilíbrio livre da doença e estados de equilíbrio endêmico, e, através de um enfoque de rede de mapas acoplados, incluímos uma estrutura espacial na qual as populações se movimentam por difusão. Por m, mostramos, através de simulações numéricas, que a doença pode ser erradicada do ambiente todo, por meio da retirada de acumuladores de ovos dos mosquitos, em uma área parcial do habitat todo que está em equilíbrio endêmico; então, esta estratégia tem um efeito desestabilizante, no sentido de que a estabilidade do estado endêmico pode ser destruída, levando o habitat inteiro para o estado de equilíbrio livre da doença. / Dengue virus infection is nowadays one of the major worldwide public health problems, because it has become an important re-emerging disease in many tropical regions of the world, including Brazil, and it is caused by any one of four distinct serotypes. As the moste widespread urban virus infection, several researches of epidemics modeling have focused on providing a rational basis for decision making, such as vaccination strategies or other strategies, in order to control the spread of this disease. The aim of this work is to model and illustrate some alternative strategies to eradicate this infectious disease. Starting from the basic version of the SEIR (susceptible -> exposed -> infective -> removed) deterministic compartmental epidemic continuous model, as a system of eight di erential equations, the equilibrium states and local stability analysis are carried out, and some numerical simulations are presented to illustrate the analytical results. Then we propose a discrete corresponding model, where we identify disease-free and endemic stable equilibrium states, and through a coupled map lattice approach, we include a spatial structure where the populations are allowed to follow a di usive movement. Finally, it is shown through numerical simulations that this disease can be eradicated from the overall environment by removing reservoirs of mosquito eggs from only a partial area of the habitat. Therefore, this strategy has a destabilizing e ect, in the sense that the stability of the endemic state can be destructed and the entire habitat goes to the disease-free equilibrium state.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-11T13:04:50Z No. of bitstreams: 2 TESE Iêda Freire Santos.pdf: 3491878 bytes, checksum: b992e484e2a5fd51a96d3ab78505d583 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T13:04:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Iêda Freire Santos.pdf: 3491878 bytes, checksum: b992e484e2a5fd51a96d3ab78505d583 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-07-30 / CNPq; PAPES VI / As glutationas S-transferase (GSTs) constituem uma superfamília de enzimas envolvida em diversos processos biológicos, por exemplo, detoxificação metabólica, transporte intracelular de substratos hidrofóbicos e proteção contra radicais livres. Em artrópodes, as classes delta e epsilon destacam-se por sua função no metabolismo de inseticidas. Até o momento, pouco se conhece sobre a diversidade dos genes GSTs dentro e entre as populações, assim como a função desses genes em outros processos biológicos, tais como no desenvolvimento e na resposta ao estresse. Este trabalho teve o objetivo de analisar a diversidade genética e padrões de transcrição de genes GSTs em Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus. Sequências de DNA foram obtidas por amplificação e sequenciamento, enquanto a expressão gênica foi realizada por experimentos de RT-PCRq. Os resultados revelaram ausência de polimorfismo nos genes GSTE2 e GSTE3 de Ae. aegypti, além de assinaturas de seleção em três populações de Cx. quinquefasciatus. Após a infecção com o vírus Dengue (DENV), Ae. aegypti mostrou regulação gênica tecido-específica para os quatro genes avaliados ao longo do tempo, com destaque para GSTO e GSTX1. A expressão dos genes GSTE2 e GSTE3 em Cx. quinquefasciatus variou de acordo com o tecido, o estágio de vida e o sexo analisado. A partir dos resultados observados, pode-se concluir que: 1) os genes GSTEs provavelmente estão sendo selecionados ao longo do tempo, indicando que eles desempenham importante papel na sobrevivência desses culicídeos na natureza; 2) os mosquitos Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus são capazes de regular a expressão dos genes GSTs, no tempo e no espaço, de acordo com a natureza do estímulo.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T12:39:53Z No. of bitstreams: 2 TESE Paula Virgínia Souza.pdf: 3356842 bytes, checksum: 612ad016f5345373502688d9e4421a85 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T12:39:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Paula Virgínia Souza.pdf: 3356842 bytes, checksum: 612ad016f5345373502688d9e4421a85 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES; CNPq; FACEPE / Os métodos de diagnósticos clínicos convencionais, para detecção de infecções virais, geralmente demandam tempo, alto custo, reagentes e equipamentos laboratoriais. Os biossensores voltamétricos são excelentes alternativas de detecção viral, pois apresentam grande praticidade, rapidez, portabilidade, baixo custo e alta sensibilidade. Eletrodos quimicamente modificados (EQM) por polímeros condutores (poliacetileno, polianilina, polipirrol e politiofeno), são bastante sensíveis, com grande potencial de aplicação, constituindo excelentes alternativas para melhorar o desempenho de um sensor. Tais polímeros são constituídos por ligações duplas conjugadas que são responsáveis pelo aumento de condutividade. O objetivo deste estudo foi o desenvolver métodos diagnósticos label-free para detecção dos vírus papilomavírus bovino (BPV) e dengue (DENV), fabricados em eletrodos quimicamente modificados por Polianilina (PANI) e polipirrol (PPy) respectivamente. Foi utilizado como método para detecção viral de BPV um sistema genossensor elaborado a partir de eletrodos baseados em membranas de alumina anódica (AAO), polimerizadas quimicamente por Polianilina. Sondas de oligonucleotídeos de alta seletividade, alinhadas por bioinformática, foram imobilizadas no suporte proposto e, em seguida, a hibridização dos ácidos nucléicos complementares e amostras biológicas (positivas) foram avaliadas. A caracterização do perfil eletroquímico foi realizada e o sinal de oxidação da guanina verificado por voltametria de pulso diferencial (VPD) e as superfícies das membranas (AAO) foram analisadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O sistema exibiu uma resposta rápida, sensível e seletiva com detecção limite de 51 nM. Outro sistema para detecção da proteína NS1 do DENV (imunossensor), foi desenvolvido em eletrodos de carbono impresso, eletropolimerizados por polipirrol/polipirrol-2-ácido carboxílico (PPy-PPa) e nanobastões de ouro (AuNR). Análises do bioconjugado foram realizadas por espectroscopia UV-Vis, microscopia eletrônica de transmissão (MET) e a caracterização eletroquímica por voltametria cíclica (VC). Os resultados demonstraram uma detecção limite de 0.0079 μgml−1. Os dois sistemas de detecção desenvolvidos demonstraram grande potencial eletroquímico no diagnóstico de infecções virais.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-02-25T18:49:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Camila Marques Queiroz.pdf: 1322318 bytes, checksum: fa38b127181cbd3fb8d4a21effd1f9e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T18:49:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Camila Marques Queiroz.pdf: 1322318 bytes, checksum: fa38b127181cbd3fb8d4a21effd1f9e2 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / CAPES / O aumento da incidência de casos de dengue constitui um importante problema de saúde pública mundial. A patogênese da Febre Hemorrágica da Dengue (FHD) ainda não está completamente esclarecida. A invasão do vírus às células do sistema imunológico modifica o estado normal celular, induzindo a produção e a liberação de inúmeros mediadores imunológicos como espécies reativas de oxigênio, incluindo o óxido nítrico (NO) e citocinas pró-inflamatórias (IFN-α e IFN-β, TNF-α e IL-6). A indefinição acerca do papel desses mediadores imunológico durante a infecção humana pelo dengue vírus (DENV) e possível papel na disfunção endotelial justifica a realização do presente trabalho buscando esclarecer a dinâmica da relação vírus-hospedeiro frente ao agravamento da infecção. O objetivo desse estudo foi avaliar o potencial de marcador biológico da dosagem dos níveis séricos de NO e mediadores imunoinflamatórios em pacientes diagnosticados com dengue em sua forma grave. Foram analisadas 307 amostras de soros coletadas entre 2009 a 2011. A dosagem de NO foi realizada por reação de Griess e a dosagem das citocinas pelo método ELISA, seguindo as instruções sugeridas por cada kit, buscando correlacionar os valores séricos encontrados com a gravidade das formas clínicas da doença. Como resultado, não houve diferença nos níveis séricos de NO entre pacientes com Dengue Clássica (DC) ou FHD, infecção primária ou secundária ou mesmo entre os diferentes sorotipos virais. Analisando os resultados em tempos específicos de sintomatologia, observou-se que até os 02 dias iniciais, maiores níveis de NO foram detectados em pacientes com infecção primária em relação à infecção secundária, e principalmente nos pacientes com DC em relação aos pacientes com FHD. Na dosagem do TNF-α não houve diferença entre os grupos de pacientes estudados. Observou-se diferença entre dengue primária e dengue secundária, sendo maior a produção de IFN-α nos pacientes com dengue primária. A dosagem do IFN-β foi realizada, porém não foram detectados níveis séricos mínimos dessa citocina. Observamos a circulação de três sorotipos diferentes na mesma população de estudo, porém sem associação com os níveis de citocinas circulantes. Os dados sugerem que a quantificação sérica do NO e citocinas pró-inflamatórias na população estudada não auxilia como determinação de marcador biológico de dengue para formas graves da doença. / The increased incidence of dengue cases is an important problem of global public health. The pathogenesis of Dengue Hemorrhagic Fever (DHF) is not yet fully elucidated. The invasion of the virus into immune system cells modifies the cell normality, triggering the production and release of several immune mediators. With emphasis in oxygen reactive species, for example, nitric oxide (NO) and proinflammatory cytokines (IFN-α, IFN-β, TNF-α and IL-6). The uncertainty about the role of these immune mediators during the human infection by DENV justifies the need for new research, seeking to clarify the virus-host dynamics relationship in to the aggravation of infection. The aim of this study was to evaluate the prognostic potential of NO serum levels and others proinflammatory cytokines in patients diagnosed with dengue. We analyzed 307 serum samples collected between 2009 to 2011. The NO level was evaluated with the Griess reagent and the dosage of proinflammatory cytokines by ELISA technique following the instructions suggested by each kit seeking to correlate the serum levels with the severity of the clinical forms of the disease. As a result, there was no difference in serum levels of NO in patients with Classical Dengue (DC) or DHF, primary or secondary infection or even between different serotypes. Analyzing the results at specific times of symptomatology, it was observed that up to 02 days initial, high levels of NO were detected in patients with primary infection, compared to secondary infection, especially in patients with DC compared to patients with DHF. There was no difference in TNF-α levels among the groups of patients. It were observed significant differences between primary dengue and secondary dengue, with a higher IFN-α production in patients with primary dengue. The IFN-β dosage was performed, but there were no detected minimum serum levels of this cytokine. We observed the presence of three different serotypes in the same population studied, but no association with cytokine levels. The detection of elevated levels of NO in patients with DC, in the initial days of symptomatology, reinforces the potential role of this molecule in the control of the viral infection, however, was not found difference in later times of symptomatology. The data suggest that the serum quantification of NO and inflammatory cytokines in this population does not help to determine biological marker for severe forms of dengue disease.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4616_1.pdf: 3279839 bytes, checksum: 621a02ed93906efb52f341ee3990cadb (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / O caramujo Biomphalaria glabrata é o hospedeiro intermediário mais susceptível ao Schistosoma mansoni, no Brasil. O uso de plantas com propriedades moluscicidas poderia ser uma alternativa para o controle do vetor. Como teste alternativo para determinar a toxicidade de produtos químicos e naturais tem sido usado a Artemia salina, um invertebrado de grande importância na indústria de aqüicultura. Cratylia mollis é uma planta nativa, perene do semi-árido do sertão de Pernambuco. Sementes de C. mollis foram avaliadas quanto à presença de lectinas que são proteínas ou glicoproteínas capazes de ligar-se especificamente e reversivelmente a carboidratos. Três isolectinas foram obtidas a partir de diferentes frações (F) de precipitados salinos (F0-40, F40-60 e F60-80). Cramoll 1,4 foi obtida da F40-60 e purificada por cromatografia de afinidade. Cramoll 1,4 e F 60-80 promoveram a morte de todos espécimes avaliados de B. glabrata em 80 e 100 ppm. Cramoll 1,4 (LC90 = 23.581) apresentou maior toxicidade contra A. salina que F60-80 (LC90 = 62.988), mas nenhuma delas teve atividade na desova e cercária. A toxicidade para A. salina é um indicativo do uso potencial da Cramoll 1,4 e F 60-80 como inibidores do crescimento celular tumoral. Portanto, a partir desse resultado foi investigado o efeito da Cramoll 1,4 sobre as células de tumor de Walker variante AR (sarcoma de rato), e sobre a linhagem de células LNCaP originalmente obtida de carcinoma prostático metastásico humano. Cramoll 1,4 em baixas concentrações (4 μg/ml) induziu apoptose nas células tumorais de Walker e LNCaP, em 4 horas de tratamento. Análises realizadas em 2,5 h de tratamento promoveu elevação do Ca2+ citosólico, mas este efeito não foi visualizado na mitocôndria. Cramoll 1,4 também aumentou a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), as quais foram reduzidas na presença de DPI sugerindo que a produção de EROs ocorreu no citosol. Testes adicionais realizados com as células de Walker demonstraram que a atividade antitumoral da Cramoll 1,4 foi totalmente inibida pelo antioxidante desferal (DFO) e parcialmente inibida pelo inibidor da caspase 8. Os resultados do presente trabalho demonstram que Cramoll 1,4 tem potencial para utilização: 1) no controle da B. glabrata; 2) como composto promissor na terapia alternativa anticancer, haja vista que induz a morte de células tumorais pelo processo deapoptose resultando na perda irreversível da estrutura e funções vitais dessas células; 3) no diagnóstico laboratorial de anormalidades glicoproteicas em soro de pacientes portadores do dengue

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:28:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo32_1.pdf: 7397954 bytes, checksum: 2d107d9c87e3b72294b61028707c08ad (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Este trabalho aborda o tratamento dado pela imprensa pernambucana à dengue, doença que vem afetando cada vez mais os brasileiros. Tendo como ponto de partida a epidemia explosiva de 2002, buscamos compreender os efeitos de sentido produzidos, avaliando comparativamente as estratégias discursivas utilizadas em 2002, 2004, 2006 e 2008. Para tanto, selecionamos matérias, reportagens e notas publicadas no Jornal do Commercio nesses quatro anos como objeto de investigação, totalizando 291 textos. Tomando por base a Análise do Discurso (AD), em especial a Escola Francesa, procuramos identificar o papel da memória discursiva e a presença do interdiscurso no material analisado. Também resgatamos noções seculares ligadas a antigas pestes, tais como medo, mal, morte, risco e epidemia, que emanam das matérias atuais sobre dengue. Aliado a isso, relacionamos a AD com as teorias do jornalismo a fim de aprofundar as análises em torno do discurso jornalístico e da própria narrativa constituída pelas notícias. Pelo estudo, foi possível constatar que a cobertura acompanha, em geral, a evolução dos casos, divulgando o assunto com mais intensidade nos momentos de epidemia. As análises também revelaram que a paráfrase é a matriz de sentido do noticiário, produzindo efeitos com base num dizer já sedimentado e determinando uma estrutura narrativa na qual a inserção dos atores que falam da dengue (poder público, cidadão, médicos, cientistas e pacientes) é condicionada conforme o contexto da doença

Submitted by Julio Cesar de Azevedo Vieira (julio_vieira@globo.com) on 2018-06-16T14:57:18Z No. of bitstreams: 1 dissertacao_JulioCesarVieira.pdf: 1988173 bytes, checksum: 55cb349d2840d5de748cbd814f155bb9 (MD5) / Rejected by Marcia Bacha (marcia.bacha@fgv.br), reason: O aluno irá submeter com o novo PDF on 2018-06-19T14:38:11Z (GMT) / Submitted by Julio Cesar de Azevedo Vieira (julio_vieira@globo.com) on 2018-06-26T21:10:08Z No. of bitstreams: 1 dissertacao_JulioCesarVieira.pdf: 1801751 bytes, checksum: 382cab03be50d392c166a61e21222c05 (MD5) / Approved for entry into archive by Janete de Oliveira Feitosa (janete.feitosa@fgv.br) on 2018-07-05T13:19:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 dissertacao_JulioCesarVieira.pdf: 1801751 bytes, checksum: 382cab03be50d392c166a61e21222c05 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-16T19:25:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_JulioCesarVieira.pdf: 1801751 bytes, checksum: 382cab03be50d392c166a61e21222c05 (MD5) Previous issue date: 2018-04-17 / Dengue é uma doença infecciosa que afeta países subtropicais. Autoridades de saúde locais utilizam informações sobre o número de notificações para monitorar e prever epidemias. Este trabalho foca na modelagem do número de casos de dengue semanal em quatro cidades do estado do Rio de Janeiro: Rio de Janeiro, São Gonçalo, Campos dos Goytacazes, e Petrópolis. Modelos de séries temporais são frequentemente utilizados para prever o número de casos de dengue nos próximos ciclos (semanas ou meses), particularmente, modelos SARIMA (Modelo Sazonal Autorregressivo Integrado de Médias Móveis) apresentam uma boa performance em situações distintas. Modelagens alternativas ainda incluem informação sobre o clima da região para melhorar a performance preditiva. Apesar disso, modelos que usam apenas dados históricos e de clima podem não possuir informações suficientes para capturar mudanças entre os regimes de não-epidemia e epidemia. Duas razões para isso são o atraso na notificação dos casos e que possivelmente não houveram epidemias nos anos anteriores. Baseando-se no sistema de monitoramento InfoDengue, esperasse que incluindo dados sobre ”numero de reprodução efetiva dos mosquitos”(RT) e ”número de tweets se referindo a dengue”(tweets) possam melhorar a qualidade das previsões no curto (1 semana) e longo (8 semanas) prazo. Foi possível mostrar que modelos de séries temporais incluindo RT e informações climáticas frequentemente performam melhor do que o modelo SARIMA em termos do erro preditivo quadrático médio (RMSE). Incluir a variável sobre o twitter não mostrou uma melhora no RMSE. / Dengue fever is an infectious disease affecting subtropical countries. Local health departments use the number of notified cases to monitor and predict epidemics. This work focus on modeling weekly incidence of dengue fever in four cities of the state of Rio de Janeiro: Rio de Janeiro, São Gonçalo, Campos dos Goytacazes, and Petrópolis. Time series models are often used to predict the number of cases in the next cycles (weeks, months), in particular, SARIMA (Seazonal Auto-Regressive Integrated Moving Average) models are shown to perform well in distinct settings. Alternative models also include climate covariates to improve the quality of the forecasts. However, models that only use historical and climate data may no have sufficient information to capture changes from non-epidemic to an epidemic regime. Two reasons are that there is a delay in the notification of cases and there might not have had epidemics in the previous years. Based on the INFODENGUE monitoring system we argue data including the "effective reproduction number of mosquitoes" (RT) and "number tweets referring to dengue" (tweets) may improve the quality of forecasts in the short (1 week) to long (8 weeks) range. We show that time series models including RT and climate information often outperform SARIMA models in terms of mean squared predictive error (RMSE). Inclusion of twitter did not improve the RMSE.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-08-27T14:33:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 789582 bytes, checksum: 2a1d5257736b2d9a9615f6069df6a707 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-27T14:33:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 789582 bytes, checksum: 2a1d5257736b2d9a9615f6069df6a707 (MD5) Previous issue date: 2017-07-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A dengue é uma doença amplamente distribuída pelo mundo, e representa um grande problema de saúde pública em vários países. As manifestações clínicas podem variar desde uma síndrome viral inespecífica e benigna, até um quadro grave e fatal de doença hemorrágica com choque. O diagnóstico na sua fase inicial é muito importante, pois auxilia no tratamento sintomático do paciente e na adoção de medidas para o controle do vetor, prevenindo a dispersão da doença. Nesse contexto, a detecção de antígenos virais, especialmente a proteína não estrutural 1 (NS1), é uma alternativa muito eficaz para realizar o diagnóstico da dengue. Essa proteína é sintetizada pelas células infectadas, podendo ser detectada nos sobrenadantes das culturas ou no soro de pacientes infectados. Dessa forma, ela pode ser utilizada como antígeno para o desenvolvimento de kits de diagnóstico. No entanto, um grande problema no desenvolvimento de tais kits, consiste na obtenção desses antígenos, que geralmente é realizado por métodos caros, trabalhosos e de difícil execução. Nesse contexto, objetivou-se nesse trabalho utilizar um sistema de expressão eucariótico para produzir as proteínas NS1 dos vírus dengue-1, -3 e -4, e avaliar a sua antigenicidade. O gene otimizado da proteína NS1 do vírus dengue-4 foi clonado no plasmídeo pPICZαA, o qual foi utilizado para transformar leveduras Pichia pastoris por eletroporação. Posteriormente,a levedura transformada foi submetida á indução da expressão da proteína NS1. Outras duas leveduras transformadas, de maneira independente, com dois plasmídeos diferentes (pPICZαA/NS1DENV1 e pPICZαA/NS1DENV3) também foram induzidas a expressar as proteínas NS1 dos vírus dengue-1 e dengue-3. Proteínas de 60 kDa (NS1 DENV4), e duas de 50 kDa (NS1 DENV-1 e NS1 DENV-3) foram obtidas. Essas proteínas mostraram-se antigênicas no teste de Western Blot, demonstrando o seu potencial para serem utilizadas como antígenos para aplicações diagnósticas. / Dengue is a disease widely distributed throughout the world and represents a major public health problem in several countries. Clinical manifestations may range from a benign non-specific viral syndrome to severe and fatal hemorrhagic shock syndrome. The diagnosis in its initial phase is very important, since it assists in the symptomatic treatment of the patient and in the adoption of measures for the control of the vector, preventing the dispersion of the disease. In this context, detection of viral antigens, especially nonstructural protein 1 (NS1), is a very effective alternative for the diagnosis of dengue. This protein is synthesized by infected cells and can be detected in culture supernatants or in the serum of infected patients. In this way, it can be used as antigen for the development of diagnostic kits. However, a major problem in the development of such kits is the procurement of these antigens, which is usually accomplished by costly, laborious and difficult methods. In this context, the objective of this study was to use a eukaryotic expression system to produce the NS1 proteins of dengue-1, -3 and -4 viruses, and to evaluate their antigenicity. The optimized NS1 protein gene of the dengue-4 virus was cloned into the plasmid pPICZαA, which was used to transform Pichia pastoris yeasts by electroporation. Subsequently, the transformed yeast was subjected to the induction of NS1 protein expression. Two other yeasts independently transformed with two different plasmids (pPICZαA/NS1DENV1 and pPICZαA/ NS1DENV3) were also induced to express the NS1 proteins of the dengue-1 and dengue-3 viruses. Proteins of 60 kDa (NS1 DENV4) and two of 50 kDa (NS1 DENV1 and NS1 DENV3) were obtained. These proteins were shown to be antigenic in the Western Blot test, demonstrating their potential to be used as antigens for diagnostic applications.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-03T10:49:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Katiúscia A. Rios.pdf: 5557349 bytes, checksum: 1964fe97b319914d498f0df13ea42974 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-03T11:00:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Katiúscia A. Rios.pdf: 5557349 bytes, checksum: 1964fe97b319914d498f0df13ea42974 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-03T11:00:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Katiúscia A. Rios.pdf: 5557349 bytes, checksum: 1964fe97b319914d498f0df13ea42974 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-03T11:00:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Katiúscia A. Rios.pdf: 5557349 bytes, checksum: 1964fe97b319914d498f0df13ea42974 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dengue infection has become a public health problem in tropical and sub-tropical areas. It is a viral disease transmitted by arthropods with high mortality rates. Its clinical diagnosis requires laboratory confirmation because several other conditions can also cause similar symptoms with acute fevers as well as the primary use antibodies or antigens for detection of DENV. The continued development of diagnostic tests that are cheap, sensitive, specific, easy to perform, and that are capable of giving early diagnosis of the dengue virus infection is still a needed. Using bioinformatics, we mapped peptides of Envelope protein (E), Nonstructural 1 and 2 which have antiginity, hidrofility and probality to apper on the surface. The first peptide, with molecular weight of the 17KDa, was called E/ENS3 and corresponds to two Envelope protein (E) sequences and a Nonstructural 3 sequence. The second peptide, with molecular weight of the 15Kda, was called ENS1/3 and it corresponds to a Envelope protein (E) sequence, a Nonstructural 1 sequence and Nonstructural 3 sequence. The peptides were expressed in prokaryotic sistem, purified and used in ELISA (Enzyme-Linked Assay Imunoabsorvente). Using Indirect ELISA in the IgM and IgG antibody detection previously characterized, we obtained as results: (1) IgG research using E/ENS3 and ENS1/3 peptides, sensibility was 65% and the specificity was 91,7% and (2) IgM research, sensibility was 75,7% and and the specificity was 91,8%. These results indicate that use of both E/ENS3 and ENS1/3 peptides may be a alternative to the serological diagnosis of dengue. / A infecção pelo vírus dengue continua sendo um grande problema de saúde pública em regiões tropicais e subtropicais do mundo, sendo a principal doença viral transmitida por artrópodes, com alta morbidade e mortalidade. O diagnóstico clínico da dengue requer confirmação laboratorial devido à semelhança dos sintomas com uma série de outras febres agudas e para detecção de infecções virais primárias ou secundárias. O desenvolvimento de testes baratos, sensíveis, específicos e de fácil execução, que sejam capazes de proporcionar diagnóstico precoce da infecção pelo vírus da dengue, é ainda uma necessidade. Neste trabalho mapeamos, por ferramentas de bioinformática, peptídeos das proteínas de Envelope (E), Não Estrutural 1 e 2 que apresentasse como características: elevada antigenicidade, hidrofilicidade e probabilidade de se apresentar na superfície. O primeiro peptídeo, com peso molecular de 17KDa, foi denominado E/ENS3 e corresponde a duas sequências da proteína de Envelope (E) e uma sequência da Não Estrutural 3. O segundo peptídeo, com peso molecular de 15Kda, foi denominado ENS1/3 e corresponde a uma sequência da proteína de Envelope (E), uma sequência da Não Estrutural 1 e uma sequência da Não Estrutural 3. Os peptídeos foram expressos em sistemas em sistema procarioto, purificados e utilizados em teste de ELISA (Enzyme-Linked Assay Imunoabsorvente). Foram realizadas a detecção de anticorpos IgM e IgG de amostras de laboratório, previamente caracterizadas, através de ELISA Indireto e obteve-se os seguintes resultados: (1) na pesquisa de IgG usando os peptídeos E/ENS3 e ENS1/3, a sensibilidade foi de 65% e a especificidade foi de 91,7% e (2) na pesquisa de IgM a sensibilidade foi de 75,7% e especificidade foi de 91,8%. Estes resultados indicam que a utilização dos peptídeos E/ENS3 e ENS1/3 podem ser uma alternativa para o diagnóstico sorológico da dengue

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Dentre as arboviroses, a dengue apresenta-se como a mais importante, constituindo um grave problema de saÃde pÃblica a nÃvel mundial. As regiÃes tropicais e subtropicais sÃo as mais afetadas, ocorrendo aproximadamente 100 milhÃes de infecÃÃes por ano. Os principais sintomas que caracterizam a infecÃÃo sÃo febre, cefalÃia, dor retro-orbitÃria, mialgia, artralgia, prostraÃÃo e exantema. No entanto, outras infecÃÃes apresentam sintomas bastante semelhantes com a dengue, como a leptospirose. Ambas, dengue e leptospirose, podem causar surtos durante as estaÃÃes chuvosas, visto que à o melhor perÃodo para a disseminaÃÃo do mosquito Aedes aegypti e a contaminaÃÃo de Ãreas alagadas pela bactÃria Leptospira sp.. Dessa forma, este estudo teve como objetivo empregar diferentes mÃtodos para o diagnÃstico laboratorial de dengue e leptospirose em pacientes com sÃndrome febril. Oitenta e seis amostras de 86 pacientes com suspeita de dengue foram analisadas por meio do teste imunocromatogrÃfico NS1, ELISA-NS1, teste imunocromatogrÃfico de captura de IgM e IgG, ELISA-IgM e RT-PCR. Dentre os 86 pacientes avaliados, 48 (55,8%) foram positivos para pelo menos um dos testes diagnÃsticos realizados. ApÃs testados para dengue, 68 pacientes foram avaliados pelo teste imunocromatogrÃfico de captura de IgM e pelo teste de ELISA-IgM, ambos para identificaÃÃo de anticorpos anti-Leptospira. Cinco (7,3%) foram positivos para esta infecÃÃo. à de grande importÃncia pesquisar outras causas infeciosas, como a leptospirose, que tambÃm à uma doenÃa febril, em pacientes com suspeita clÃnica de dengue, pois o controle das doenÃas mais prevalentes sà se torna possÃvel quando conhecemos os agentes infecciosos responsÃveis por elas. Portanto, faz-se necessÃrio o uso de diagnÃsticos especÃficos para cada infecÃÃo, permitindo com que os programas de controle epidemiolÃgicos sejam realizados. / Among the arboviruses, dengue is the most important, constituting a serious public health problem worldwide. The tropical and subtropical regions are most affected, occurring approximately 100 million infections per year. The main symptoms that characterize the infection are fever, headache, retro-orbital pain, myalgia, arthralgia, prostration and rash. However, other infections have very similar symptoms to dengue, such as leptospirosis. Both dengue and leptospirosis, can cause outbreaks during the rainy seasons, since it is the best period for the dissemination of Aedes aegypti and contamination of wetlands by Leptospira sp.. This study aimed to employ different methods for the laboratory diagnosis of dengue and leptospirosis in patients with febrile syndrome. Eighty-six samples of 86 patients suspected of being infected with dengue were analyzed by NS1 immunoassay, NS1-ELISA, immunoassay IgM and IgG capture, IgM-ELISA and RT-PCR. Among the 86 patients evaluated, 48 (55.8%) were positive for at least one of diagnostic tests. After tested for dengue, 68 patients were evaluated by immunoassay IgM capture and by ELISA-IgM, both for identification of anti-Leptospira. Five (7.3%) were positive for this infection. It is very important to search for other infectious causes, such as leptospirosis, which is also a febrile illness, in patients with clinical suspicion of dengue, since the control of diseases prevalent only becomes possible when we know the infectious agents responsible for them. Therefore, it is necessary to use specific diagnoses for each infection, allowing epidemiological control programs can be carried out.