Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Gisela Rita Monteiro Marques / Banca: Antonio Luiz Caldas Júnior / Banca: Wanderlei Pedro Tadei / Banca: Maria Anice Sallun Mured / Resumo: A necessidade de se controlar dengue com uso de inseticidas tem acarretado o desenvolvimento de resistência aos produtos mais utilizados em âmbito mundial. No Brasil, o Ministério da Saúde monitora anualmente o nível de susceptibilidade de populações de Aedes aegypti aos inseticidas. Este estudo objetivou analisar os dados disponíveis para o estado de São Paulo visando avaliar não só o impacto das estratégias de manejo adotadas nos níveis de resistência das populações, mas também o papel de resistência metabólica como um mecanismo da resistência detectada em larvas. Foram analisados os dados do período de 1996 a 2009, relativos à caracterização biológica da resistência de larvas e insetos adultos e os resultados de provas de efetividade em campo. Para avaliação do papel atividade de enzimas metabólicas na resistência observada em larvas, foi feito um experimento em laboratório com medida de atividade enzimática durante o processo de incremento da resistência em população originada do campo. Os dados foram confrontados com os resultados da atividade enzimática das populações de campo. Os dados do Programa de Monitoramento demonstraram ao longo do tempo um aumento do número de populações resistentes ao principal larvicida utilizado (temephos); que a resistência a adulticidas da classe dos piretróides é disseminada em todo o estado desde 2000 e que há comprometimento do controle em campo nas populações resistentes. Enzimas do grupo das esterases foram caracterizadas como envolvidas no mecanismo de resistência a temephos, embora tenham sido caracterizadas alterações em outras classes de enzimas em populações resistentes dificultando a interpretação pontual de atividade enzimática. A caracterização do vínculo genético apontou para um baixo fluxo gênico entre as populações justificando a manutenção da avaliação e manejo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The need to control dengue transmission with insecticides has led to the development of resistance to the most used products all over the world. In Brazil the Ministry of Health monitors annually the level of susceptibility of Aedes aegypti populations to insecticides. This study aimed to evaluate data from São Paulo State in order to evaluate the impact of management of resistance on resistance levels in vector populations and also evaluate the role of metabolic enzymes on larval resistance to temephos. Data of larval and adults resistance from 1996 to 2009 were analyzed together with field efficacy tests response. In order to evaluate the role of metabolic enzymes on resistance of larvae to temephos, an experiment for increasing resistance and measurement of enzyme activity were compared with enzyme profile from field populations. Results showed, along the period, a decrease in susceptibility to the temephos-based larvicide in all populations; resistance to pyrethroids, observed in adult stage, was disseminated in the state since 2000 and that in resistance impacts on field activities. Enzymes from the esterase class were involved on temephos resistance of larvae, although other classes of enzymes show alterations in resistant populations making it difficult the interpretation of enzyme activity on single population. The characterization of the genetic link pointed to a low gene flow among populations. This justifies the maintenance of the assessment and management of sentinel regardless of their geographical origin. The study concludes that there is a general trend for loosing susceptibility of Aedes aegypti to the most used insecticides. To date management strategies adopted were not enough to avoid this process. There is impact of field control on "resistant" populations showing that management should be trigged on populations with "Decreased Susceptibility" status. Insecticide use self imitating tool which should de preserved / Doutor

La dengue, maladie transmise par des moustiques, est causée par l'un des 4 sérotypes du virus de la dengue (DENV). Le Cambodge est un pays d'hyperendémicité de la dengue où les 4 sérotypes en co-circulent. Le programme national de lutte contre la dengue a été établi en 2000 et a fourni des données nécessaires dans la compréhension du profil épidémiologique et de l'évolution du DENV. La dynamique d'évolution virale est caractérisée par des événements de disparition et d'émergence de lignées au sein de chaque sérotype en fonction du temps. La dengue se présente sous différentes formes cliniques allant d'une forme asymptomatique aux formes sévères accompagnée d'un syndrome de choc (DSS) et le diagnostic différentiel est souvent compliqué. Dans des contextes cliniques différents et avec des profils biologiques variables, nous avons évalué un test de diagnostic précoce de détection de l'antigène NS1 de la dengue. De plus, nous avons identifié de nombreux profils d'expression biologique spécifiques aux cas de DSS qui pourraient être utilisés comme d'éventuelles cibles pour le développement de nouveaux traitements ou comme des marqueurs de pronostic. / Dengue infection, caused by one of the four serotypes of dengue virus (DENV), is a major cause of morbidity and mortality in the world with an estimated 50-100 million cases annually. In Cambodia, dengue is hyperendemic and all four serotypes are circulating. The active hospital-based surveillance has been established in 2000 and provided important insights in the understanding of the epidemiological profile and of the DENV evolution. The dynamic of evolution of DENV is characterized by complex patterns of lineage turnovers within each serotype, with lineages increasing and decreasing in frequency through time. Dengue manifests in various clinical forms - from asymptomatic to severe form with shock syndrome - and is sometimes difficult to differentiate from other febrile diseases. We have evaluated the performance of a recent diagnostic tool (NS1 antigen detection) - developed to identify dengue at a very early stage on the infection - depending on various clinical and biological patterns. Additionally, genome-wide expression analysis has characterized a large amount of gene signatures specific to dengue shock syndrome which could be used as prognostic markers as well as potential targets for drug design.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-04-06T12:53:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final - Adriana Andrade.pdf: 2860120 bytes, checksum: 9c25748f97bf9e85c8b9bcc05e3f32d5 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-29T14:41:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Final - Adriana Andrade.pdf: 2860120 bytes, checksum: 9c25748f97bf9e85c8b9bcc05e3f32d5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T14:41:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Final - Adriana Andrade.pdf: 2860120 bytes, checksum: 9c25748f97bf9e85c8b9bcc05e3f32d5 (MD5) / CAPES / O vírus da dengue (DENV) é um arbovírus pertencente à família Flaviviridae, gênero Flavivirus, apresentando quatro sorotipos denominados DENV-1, DENV-2, DENV-3 e DENV-4. No Brasil, a infecção pelo DENV-4 ressurgiu em 2010, após 31 anos, expondo a população ao alto risco de desenvolvimento da dengue grave, devido à co-circulação dos quatro sorotipos. Nesse contexto, os anticorpos monoclonais (AcM) apresentam-se como uma ferramenta importante devido à sua potencial aplicação como ferramenta biotecnológica. O objetivo deste trabalho foi a produção e caracterização de AcM contra DENV-4. A metodologia para a produção de AcM foi desenvolvida por Köhler e Milstein (1975). Resumidamente, os animais de experimentação foram hiperimunizados com antígeno viral DENV-4, obtidos a partir da multiplicação do vírus em células de cultura C6/36, e subsequente concentração e precipitação com polietilenoglicol 8000. A triagem dos sobrenadantes dos hibridomas para reatividade ao DENV-4 foi realizada pelo Ensaio Imunoenzimático (ELISA), e a caracterização dos AcM foi realizada pelas técnicas de ELISA, Dot-Blot, Imunofluorescência Indireta (IFI), Western-Blot. Um total de dez hibridomas foram obtidos e os AcM produzidos foram denominados A2, B1, B4, C11, D2, E4, F10, F12, H1, H12. Os AcM apresentaram diferentes perfis de reatividade frente aos diversos testes de detecção antigênica, demonstrando um reconhecimento direcionado principalmente para prM. Em conclusão, este estudo mostra o potencial de utilização dos AcM produzidos como insumo biotecnológico; sejam em estudos a respeito do vírus e sua patogênese, sejam em uma possível aplicação como ferramenta imunodiagnóstica. / Dengue virus (DV) is an arbovirus belonging to family Flaviviridae, genus Flavivirus, with four serotypes named DENV-1, DENV-2, DENV-3 and DENV-4. In Brazil, the infection by DENV-4 reemerged in 2010 after 31 years, exposing the population at high risk for developing severe diseases because of the co-circulation of the four serotypes. The monoclonal antibodies (AcM) are important tools due to its potential application in biotechnology. The aim of this work was to produce and to characterize of AcM against DENV-4. The methodology to produce AcM was developed by Köhler and Milstein (1975). Briefly, experimental animals were hyperimmunized with DENV-4 viral antigen obtained to virus multiplication in C6/36 culture cells and subsequent concentration and precipitation with polyethylene glycol 8000. ELISA test was performed to screen hybridoma supernatants for reactivity to DENV-4, and the characterization of AcM was performed by ELISA, Indirect Immunofluorescence (IFI), Dot-Blot and Western-Blot techniques. A total of ten hybridomas were obtained producing AcM named A2, B1, B4, C11, D2, E4, F10, F12, H1 and H12. AcM showed different reactivity profiles in the tests, showing a dominant recognition to prM. In conclusion, this study shows the potential use of AcM produced as biotechnology tool; to study the virus and its pathogenesis, or a possible application in immunodiagnostic assays.

p. 1-47 / Submitted by Santiago Fabio (fabio.ssantiago@hotmail.com) on 2013-04-22T17:57:28Z No. of bitstreams: 1 1111.pdf: 321783 bytes, checksum: adf8d30a1de03fb37e7da08aee32b4dd (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Creuza Silva(mariakreuza@yahoo.com.br) on 2013-05-04T16:56:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 1111.pdf: 321783 bytes, checksum: adf8d30a1de03fb37e7da08aee32b4dd (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-04T16:56:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 1111.pdf: 321783 bytes, checksum: adf8d30a1de03fb37e7da08aee32b4dd (MD5) Previous issue date: 2008 / O principal objetivo deste estudo foi verificar a existência de relação entre os níveis do Índice de Infestação Predial (IIP) obtidos pelo LIRAa e a transmissão de dengue nas semanas posteriores a sua realização. Trata-se de estudo ecológico tendo como unidade de análise município, fonte de dados o SINAN e registros sobre o LIRAa, de 2003 a 2006, obtidos nas Secretarias Estaduais de Saúde. Observou-se correlação positiva estatisticamente significante entre o IIP e o Número da Reprodutibilidade Basal das Infecções - R0 (r= 0,36, p=0,002) e a Força de infecção - λ ( r = 0,35, p=0,002). Os resultados deste estudo reforçam a importância do LIRAa como sinal de alerta para os responsáveis pelas atividades de controle da dengue nos municípios, pois, indiretamente, foi demonstrado que IIP mais elevados nos meses que antecedem o verão podem resultar no maior número de casos na estação de maior transmissão da doença. / Salvador

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-16T22:47:30Z No. of bitstreams: 1 Adriana de Souza Azevedo completo.pdf: 9819625 bytes, checksum: 2453578116f0a15f3832c81fccd0979e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-16T22:47:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriana de Souza Azevedo completo.pdf: 9819625 bytes, checksum: 2453578116f0a15f3832c81fccd0979e (MD5) Previous issue date: 2011-06-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A dengue é uma doença causada pelo vírus da dengue (DENV1-4). Apesar dos vários estudos, ainda não existe uma vacina comercialmente disponível. A proteína do envelope (E) de DENV apresenta-se como o maior componente protéico da superfície viral. Consequentemente, esta proteína é o principal alvo para a indução de uma resposta imune protetora, provavelmente baseada em anticorpos neutralizantes. No presente trabalho, nós avaliamos o potencial protetor de vacinas de DNA baseadas na proteína E de DENV2. Para isto, foram construídos dois plasmídeos, pE1D2 e pE2D2, que contêm as sequências que codificam o ectodomínio da proteína E (domínios I, II e III) ou somente o seu domínio III, respectivamente, clonadas da montante à sequência que codifica o peptídeo sinal do ativador de plasminogênio de tecido humano (t-PA). Os dois plasmídeos mediaram à expressão e secreção das proteínas recombinantes in vitro em células eucarióticas, detectadas com anticorpos anti-DENV2 e avaliadas por ensaios de imunofluorescência ou marcação metabólica seguida de imunoprecipitação. Ambas as vacinas de DNA foram capazes de induzir respostas imunes com produção de anticorpos neutralizantes em camundongos Balb/c, com títulos mais elevados nos animais imunizados com o pE1D2. A vacina pE1D2 também se mostrou mais protetora nos testes de desafio com uma dose letal de DENV2, induzindo 100% de sobrevivência nos camundongos imunizados, enquanto que 45% dos animais vacinados com o plasmídeo pE2D2 morreram após a infecção. Além disso, 10% e 65% dos camundongos imunizados com pE1D2 ou pE2D2, respectivamente, apresentaram morbidade frente ao desafio letal. As vacinas pE1D2 e pE2D2 também foram testadas combinadas com o vírus quimérico YF17D-D2, em um sistema de dose e reforço ou em imunizações simultâneas. O vírus quimérico YF17D-D2 foi construído com a substituição dos genes prM e E do vírus vacinal da febre amarela 17DD pelos genes prM e E de DENV2. A vacina de DNA pE1D2 combinada com a quimera YF17D-D2 induziu altos níveis de anticorpos neutralizantes nos animais vacinados com os diferentes esquemas de imunização. Além disso, esses animais apresentaram 100% de sobrevivência frente ao desafio letal com DENV2, com ausência de qualquer sinal clínico da infecção. O efeito sinérgico da imunização combinada também foi evidenciado quando combinamos a vacina pE2D2 e YF17D-D2, que gerou 100% de sobrevivência nos animais desafiados. A resposta imune celular foi avaliada pela produção de IFN-por células TCD8+ em ensaios de ELISPOT, evidenciando a ativação destas células nos animais imunizados com as pE1D2 independente da sua combinação com a quimera YF17D-D2. Além disso, a análise do perfil fenotípico das células TCD4+ e TCD8+ mostrou um percentual menor de linfócitos CD62L+ nos animais vacinados com o pE1D2 isolado ou combinado com o vírus quimérico, indicando que a vacina de DNA pode influenciar nos processos de ativação das células T. Posteriormente, foram construídas novas vacinas de DNA que codificam os ectodomínios da proteína E de DENV1, 3 e 4 (pE1D1, pE1D3 e pE1D4), cuja expressão foi confirmada in vitro, e que serão testadas futuramente em modelos animais. / Dengue is a disease caused by the dengue virus (DENV1-4). Despite several studies, no effective vaccine is yet commercially available. The envelope protein (E) of DENV is the viral surface major protein component, associated with numerous biological activities. Thus, this protein is the main target for the induction of a protective immune response based on neutralizing antibodies. In the present study, we evaluated the potential of DNA vaccines expressing the DENV2 E protein for the induction of protection. Two plasmids were constructed, pE1D2 and pE2D2, which contain sequences encoding the ectodomain of the E protein (domains I, II and III) or only its domain III, respectively, cloned upstream the encoding sequence of the human tissue plasminogen activator signal peptide (t-PA). Both plasmids mediated expression and secretion of the recombinant proteins in vitro in eukaryotic cells, detected with anti-DENV2 antibodies and evaluated by immunofluorescence or metabolic labeling assay followed by imunopreciptation. Both DNA vaccines were elicited neutralizing antibodies in Balb/c mice, with the highest antibody titers detected in animals immunized with the pE1D2. The pE1D2 vaccine was also more protective in challenge tests with a lethal dose of DENV2, inducing 100% survival in immunized mice, while 45% of animals vaccinated with the plasmid pE2D2 died after infection. Furthermore, 10% and 65% of the mice immunized with pE1D2 or pE2D2, respectively, showed morbidity after virus challenge. The vaccines pE1D2 and pE2D2 were also tested in combination with the chimeric YF17D-D2 virus, in a prime and booster system or with simultaneous immunizations. The YF17D-D2 chimeric virus was previously constructed by replacing the prM and E genes of 17DD yellow fever vaccinal virus with those from DENV2. The pE1D2 DNA vaccine combined with the YF17D-D2 chimera induced high levels of neutralizing antibodies in animals vaccinated with any of the different immunization schedules. Moreover, these animals showed 100% survival rates against a lethal challenge with DENV2, with no clinical signs of infection. The synergistic effect of combined immunization was also evident when we used the pE2D2 DNA vaccine and the YF17D-D2 virus, which generated 100% survival in challenged animals. The cellular immune response was evaluated by the production of IFN- by CD8+ T cells in ELISPOT assays, revealing the activation of these cells in animals immunized with the pE1D2 alone or in combination with the YF17D-D2 chimera. Furthermore, analysis of the phenotypic profile of CD4+ and CD8+ T cells showed low percentage of CD62L+ lymphocytes in animals vaccinated with pE1D2, alone or combined with the chimeric virus, thus indicating that the DNA vaccine can influence the processes of T cell activation. New DNA vaccines encoding the ectodomains of DENV1, 3 and 4 of the envelope protein (pE1D1, pE1D3 and pE1D4) were constructed and the expression of recombinant proteins was confirmed in vitro. These DNA vaccines will be further tested animal models.

Submitted by Isac Macêdo (isac@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-22T20:41:54Z No. of bitstreams: 1 MA 2010 - Sheila Soares de Assis.pdf: 1940861 bytes, checksum: 4d02ac643563adee882444f51703cab9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-22T20:41:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MA 2010 - Sheila Soares de Assis.pdf: 1940861 bytes, checksum: 4d02ac643563adee882444f51703cab9 (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A dengue integra o conjunto de doenças negligenciadas, constituindo-se como um grave problema de saúde pública em todo o mundo, inclusive no Brasil. A abordagem dos aspectos relacionados ao processo saúde-doença é uma responsabilidade partilhada entre os serviços de saúde e os de educação. No ensino formal, os temas relacionados à saúde devem ser tratados de forma transversal. Entretanto, historicamente a responsabilidade da abordagem deste tema tem recaído sobre os componentes curriculares das disciplinas de ciências e de biologia. No cenário nacional, o estado do Rio de Janeiro possui grande representatividade por concentrar índices elevados da doença. O Estado possui a segunda região urbana mais populosa do país, a região metropolitana do Rio de Janeiro. Neste contexto, o município de Itaboraí tem se destacado pelo elevado número de casos notificados da doença nos últimos anos. Aliado a este fato, há expectativa de aumento demográfico na região para os próximos anos, requerendo a maximização das ações de educação em saúde, voltadas à prevenção da dengue, realizadas de forma integrada pelos serviços de saúde e educação. Neste sentido, o Programa Saúde na Escola (PSE) caracteriza-se como uma importante estratégia para estas ações se materializem. Assim, sob enfoque qualitativo, a pesquisa se propõe a analisar percepções expressas por professores de ciências e biologia e de profissionais de saúde, que atuam em uma localidade do município de Itaboraí (RJ), sobre as ações educativas executadas para auxílio à prevenção da dengue e os recursos pedagógicos (livros didáticos e materiais impressos) destinados a estas ações. Participaram do estudo 23 sujeitos, dentre os quais sete são professores de ciências e biologia e 16 profissionais de saúde. Os entrevistados integram instituições participantes do PSE. Estes foram entrevistados a partir de roteiros semiestruturados. Os dados foram tratados empregando-se a análise de conteúdo (BARDIN, 2009). O tema da dengue foi também analisado nos livros didáticos de ciências e biologia indicados pelo Programa Nacional do Livro Didático (PNLD/2008 e PNLD/2011) e Programa Nacional do Livro Didático para o Ensino Médio (PNLEM/2009) (n=40), respectivamente e nos materiais educativos/informativos impressos (n= 17) disponibilizados a estes profissionais no município de Itaboraí. Os resultados indicam que materiais impressos e livros didáticos, evidenciam incorreções científicas e inadequações no que se refere ao conteúdo, linguagem e ao contexto sociocultural da área de estudo. Além disso, verificou-se ausência de articulação entre ambos os setores, saúde e educação. Os entrevistados expressaram conhecimento superficial sobre a doença e as ações educativas executadas não se processam de forma integrada. Os dados apontam para a necessidade de maior rigor na elaboração e avaliação dos materiais educativos/informativos e didáticos em relação à abordagem da dengue. Indica-se a implementação de estratégias de educação permanente vinculada à perspectiva do PSF e abordagem do agravo junto às duas esferas investigadas. / Dengue is part of a set of diseases considered neglected and it has established itself as a serious public health problem worldwide, including in Brazil. The approach of the aspects related to processes of health-disease is a shared responsibility between health and education services. In formal education, health issues must be addressed across the board. However, historically the responsibility of tackling this issue has fallen on the curricular components of the disciplines of science and biology. Nationwide, the state of Rio de Janeiro is largely represented by high rates of the disease. The State has the second most populous urban area in the country, the metropolitan area of Rio de Janeiro. In this context, Itaboraí has been highlighted by the high number of reported cases of the disease in recent years. Allied to this, population increases are expected in the region over the next year requiring the maximization of actions of health education aimed at the prevention of dengue, carried out jointly by health and education professionals. In this sense, the Program of Health in Schools (PSE) is characterized as an important strategy to materialize these actions. Thus, through a qualitative research, the aim of this work was to analyze the perceptions expressed by science and biology teachers and health professionals, who work in a location of Itaboraí (RJ), about the educational actions taken to aid in the prevention of dengue and teaching resources utilized for these actions (such as textbooks and printed materials). The study included 23 subjects, of which seven are science and biology teachers and 16 health professionals. All participants integrate institutions included in the PSE. A semi-structured script was utilized. The data were processed employing the content analysis (Bardin, 2009) methodology. The approach of dengue was also analyzed in science and biology textbooks indicated by the National Textbook Program (PNLD/2008 and PNLD/2011) and National Textbook Program for Secondary Schools (PNLEM/2009) (n = 40) , respectively, and printed educational/ informative materials (n = 17) available to these professionals in Itaboraí. The results indicate that printed materials and textbooks present scientific inaccuracies and inadequacies with regard to content, language and the socio-cultural context of the study area. In addition, there was no linkage between the two sectors, health and education. The participants expressed superficial knowledge about the disease and the educational process is not executed in an integrated manner. The data indicate the need for greater precision in the drafting and evaluation of educational/informative materials and didactic approach in relation to dengue. We also indicate the implementation of lifelong learning strategies linked to the perspective of the PSF and to the two spheres investigated.

Este trabalho, ao apresentar os conceitos básicos da Epidemiologia Matemática e da modelagem de populações por classes etárias, tem por objetivo desenvolver e implementar três modelos epidemiológicos de transmissão do dengue, a fim de avaliar teoricamente os efeitos da aplicação de inseticidas em populações de Aedes aegypti, em relação às epidemias de dengue. Uma variedade de métodos têm sido empregados no controle do vetor, sendo o Aedes aegypti a principal espécie envolvida na transmissão do dengue. A· aplicação de inseticidas de ultrabaixo volume (UL V) é uma das técnicas amplamente utilizada, particularmente durante epidemias. Tal técnica tem como objetivo matar os mosquitos adultos (adulticida). Há muita controvérsia em tomo destas aplicações, no que diz respeito ao impacto no controle da transmissão do dengue. Desta forma, através deste trabalho, procuramos observar a influência do uso de inseticida na dinâmica populacional do vetor transmissor e na dinâmica da epidemia, e analisar as circunstâncias em que o inseticida pode ser utilizado a fim de agir eficientemente no controle da transmissão do dengue. O emprego de larvicidas também é abordado, a fim de que se possa observar a influência deste na dinâmica populacional do vetor transmissor e na dinâmica da epidemia. Neste trabalho são detalhadas as hipóteses utilizadas na construção de cada modelo de transmissão do dengue apresentado. Apresentados os modelos, são considerados os aspectos relativos à implementação. Assim, mediante os aspectos teóricos envolvidos na modelagem e implementação, resultados numéricos são obtidos, através das simulações, as quais nos auxiliam a avaliar os efeitos da aplicação de inseticidas em populações de Aedes aegypti no controle da transmissão do dengue. / In this work the basic Mathematical Epidemiology ideas are presented and three models of Dengue Fever transrnission are developed in order to measure the effects of the use o f insecticides on the populations o f the mosquito Aedes aegypti that are related to the dengue epidemics. There is a good variety of control methods on the Aedes aegypti populations. The use of ultra-low volume (UL V) insecticides is widely employed specially during epidemics. The goal of such method is to eliminate a fraction of the adult mosquito population. There is a great deal o f controversy on the effectiveness o f insecticide use during a dengue epidemic. In this way we propose to investigate the impact o f UL V on the mosquito dynarnics and on the epidemics dynarnics as well in order to determine in which circumstances the use o f UL V can truly effective on the course o f a epidemic. On the same line, we also propose a study on the use of larvicides as a control method. In this study we detail the hypotheses that are used to construct the dynarnic models. Once the models are presented we consider the implementation details. The numerical results are obtained after various simulations which provide the data that allow us to measure the impact ofthe control technique on the dengue epidemics.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-03-29T13:29:04Z No. of bitstreams: 1 monique_rq_lima_ioc_mt_0010_2009.pdf: 1937766 bytes, checksum: d05c52dcbcc952c1a57ff1ff206f06b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-29T13:29:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 monique_rq_lima_ioc_mt_0010_2009.pdf: 1937766 bytes, checksum: d05c52dcbcc952c1a57ff1ff206f06b1 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O diagnóstico laboratorial de dengue é muito importante para apoiar os programas Vigilância Epidemiológica considerando-se a dificuldade da confirmação dos casos em bases clínicas apenas, em especial, durante períodos inter-epidêmicos. Atualmente estão disponíveis kits comerciais para o diagnóstico sorológico do dengue, embora o seu custo ainda represente um alto encargo financeiro para países em desenvolvimento. Um diagnóstico rápido pode direcionar as medidas de controle do vetor. A proteína não-estrutural 1 (NS1) do vírus dengue por ser um marcador utilizado durante a fase aguda da doença e tem sido proposto para o diagnóstico da doença. Desta forma, a sensibilidade e especificidade de três kits comerciais para captura de antígeno NS1 disponíveis no mercado foram avaliadas com um painel de 852 amostras obtidos a partir da coleção do Laboratório de Flavivírus no Instituto Oswaldo Cruz, FIOCRUZ, de epidemias ocorridas durante os anos de 1986 a 2008. O desempenho de cada kit foi avaliado individualmente e, a comparação entre os três kits foi baseada na análise de uma sub-população de 450 amostras. Dentre os três kits analisados, o kit NS1 Ag Strip (BioRad Laboratories) foi o mais sensível em confirmar casos de dengue na amostragem testada (89%, 197/220), seguido pelo Platelia NS1 (BioRad Laboratories) (84%, 184/220) .O menos sensível foi o pan -E Early ELISA (PanBio Diagnostics) com 72% (159/220) de sensibilidade. Porém, neste estudo o kit da PanBio foi o mais especifico (100%), enquanto que ambos os kits da BioRad apresentaram 99% de especificidade. Os resultados obtidos demonstraram uma maior sensibilidade de confirmação de casos de infecção primária pelos três kits, porém não houve diferença significativa em relação aos casos de infecção secundária. Os três kits foram mais sensíveis em confirmar casos positivos por isolamento viral do que em casos positivos por RT-PCR. A sensibilidade dos três kits foi maior no período compreendido entre o primeiro ao quinto dia após o inicio dos sintomas. Reações cruzadas foram raramente observadas em vacinados contra o vírus da febre amarela e casos de rubéola. Os resultados obtidos demonstraram que três kits podem ser utilizados para a detecção precoce da infecção viral por dengue. / Dengue virus diagnosis is an important tool to support Epidemiological Surveillance Programs considering the difficulties found in confirm dengue cases based only on the clinical symptoms, especially during inter-epidemic periods. Currently, there are many commercial serological kits for dengue diagnosis, however its costs poses a financial burden for many developing countries. The dengue virus non- structural protein a (NS1) can be used as a marker during the acute phase of the illness and its use has been proposed for the disease diagnosis. Therefore, here we evaluated the sensitivity and specificity of three newly available NS1 antigen capture commercial kits with a panel of 852 samples from the collection of the Flavivirus Laboratory at the Oswaldo Cruz Institute, FIOCRUZ, from epidemics occurred from 1986 to 2008. Each kit was evaluated individually and the comparison among them was based on the analysis of a sub- population of 450 samples. From the three kits analyzed, the NS1Ag Strip (Biorad Laboratories) showed the highest sensitivity (89%, 197/220) in confirming dengue cases, followed by the PlateliaTM NS1 (Biorad Laboratories). The less sensitive one was the pan-E Early ELISA (PanBio Diagnostics) with a sensitivity of 72% (159/220). However, in this study the PanBio kit was the most specific (100%) while the two kits from BioRad showed both 99% of specificity. Primary dengue cases were more frequently confirmed than secondary ones. A higher sensitivity was observed in cases positive by virus isolation, when compared to cases positive by RT-PCR. The highest NS1 antigen detection was from the first to the fifth day after the onset of the symptoms. Cross reactivity were rarely observed in yellow fever vaccinees and rubella cases. The results showed that the three kits can be used in the early diagnosis of dengue infections.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:44:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000041.pdf: 2945846 bytes, checksum: 9459efcda4034b425c3b73b8d2f0b167 (MD5) Previous issue date: 2008 / Estudos que relacionam a cinética de viremia, o estado de imunidade do hospedeiro e as formas clínicas da dengue são importantes para uma melhor compreensão da patogênese da doença. A quantificação da magnitude da replicação viral é fundamental no entendimento da progressão da doença para formas clínicas mais graves. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de estudar a cinética de viremia do vírus dengue sorotipo 3 (DENV-3) nos diferentes tipos de infecção e formas clínicas. Dois kits (DSSS-P26 e DSSS-P29), específicos para detecção e determinação da carga viral do DENV-3 por PCR em tempo real, foram testados e validados, sendo escolhido e utilizado o kit DSSS-P29 que apresentou um limite de detecção de 10 cópias de RNA. Foram analisadas 314 amostras de soro seqüenciais de 85 pacientes, além de 209 primeiras amostras coletadas na fase aguda (período febril). Os níveis de viremia foram os mesmos em infecções primárias e secundárias e diferentes formas clínicas, quando analisadas amostras seqüenciais. O tempo mediano de duração da viremia foi de 10 dias. A carga viral máxima foi observada entre o primeiro e o terceiro dia após o início dos sintomas. Foi detectada viremia após a defervescência em todas as formas clínicas. A redução dos níveis de plaquetas foi mais acentuada nas infecções primárias, com valores mais baixos entre o quinto e o sétimo dia de início dos sintomas. Além disso, os valores de transaminase glutâmico oxalacética (TGO) foram mais elevados que os de transaminase glutâmico pirúvica (TGP) em amostras coletadas até oito dias de início dos sintomas, em infecções secundárias e na forma clínica dengue clássica complicada, embora a TGP tenha permanecido alterada por mais tempo. Os níveis de viremia foram mais elevados nas formas mais graves (febre hemorrágica da dengue e dengue clássica complicada) que em dengue clássica (p0,0001), quando analisada a primeira amostra de cada paciente, coletada na fase febril. Os níveis de carga viral e cinética de viremia nas amostras analisadas não possibilitaram predizer a gravidade da dengue

Submitted by Tatiana Oliveira (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-05-31T16:28:56Z No. of bitstreams: 1 ana_cecilia_r_cruz_ioc_bp_0001_2005.pdf: 4732352 bytes, checksum: ea13b3487709eb14b3bda0c2d649e513 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-31T16:28:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ana_cecilia_r_cruz_ioc_bp_0001_2005.pdf: 4732352 bytes, checksum: ea13b3487709eb14b3bda0c2d649e513 (MD5) Previous issue date: 2005 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / A febre do dengue está amplamente distribuída por todas as áreas tropicais do mundo. Em certas áreas endêmicas, as formas graves da doença, febre hemorrágica do dengue (FHD) e síndrome de choque do dengue (SCD), ocorrem com freqüência. Outras manifestações clínicas, como, por exemplo, encefalopatias, encefalites, mielite transversa, também tem sido observadas. O nosso objetivo foi a caracterização genética e biológica de amostras de vírus VDEN2 e 3, com ênfase no caráter de neurovirulência do vírus VDEN2. As amostras de VDEN 2 e 3 utilizadas foram isoladas na Serviço de Arbovírus do Instituto Evandro Chagas a partir de soro de pacientes com quadro clínico de dengue (FD e FHD) e manifestações neurológicas. Os vírus padrão foram o VDEN2 Nova Guiné C e 44-2, VDEN3 H87. As 11 seqüências do vírus VDEN2 quando comparados entre si e com 16 outras seqüências do VDEN2 apresentaram percentual médio de identidade nucleotídica e aminoácido de 89,5 e 99,8% respectivamente. Os estudos filogenéticos realizados mostram os isolados brasileiros pertencem ao genótipo III de origem Asiática. As 10 seqüências do vírus VDEN3 quando comparados entre si e com 16 outras seqüências do VDEN3 apresentaram percentual médio identidade nucleotídica e aminoácido de 89,6 e 100% respectivamente.Os estudos filogenéticos realizados mostram que estão agrupados ao genótipo III também de origem Asiática. O virus VDEN2 isolado a partir de caso mielite transversa (Bel61082) foi caracterizado pelo sequenciamento nucleotidico da região estrutural assim como em testes de neurovirulência em camundongos recém-nascidos. A susceptibilidade de culturas primárias de neurônios e astrócitos, células de glioma humano, também foi estudada para fins de caracterização do caráter neurovirulento do vírus.O estudo de neurovirulência em infecção de camundongo mostrou sinais aparentes de doença apenas após a inoculação da cepa NGC, mas a replicação do vírus Bel 61082 pode ser detectada por RT-PCR em suspensão de cérebro de camundongo. Obtivemos evidências experimentais de apoptose nas células neuronais infectadas com VDEN2 NGC e Bel61082. No sequenciamento nucleotídico, a principal alteração observada está localizada na proteína M 28, região esta conhecida como pró-apoptótica. / The dengue fever is widely distributed in all tropical areas of the world. In certain endemic areas, severe disease, dengue hemorrhagic fever (DHF) and dengue shock syndrome (DSS), occur frequently. Other clinical manifestations such as, for example, encephalopathies, encephalitis, transverse myelitis, has also been observed. Our objective was to characterize genetic and biological samples of viruses VDEN2 and 3, with emphasis on the neurovirulence of the virus VDEN2. The samples of DENV 2 and 3 used were isolated in the Service of the Instituto Evandro Chagas Arboviruses from the serum of patients with clinical dengue (DF and DHF) and neurological manifestations. Viruses were standard VDEN2 New Guinea C and 44-2, VDEN3 H87. The 11 sequences of the virus VDEN2 compared among themselves and with 16 other sequences showed VDEN2 average percentage of nucleotide and amino acid identity of 89.5 and 99.8% respectively. Phylogenetic studies performed show the Brazilian isolates belonged to genotype III of Asian origin. The 10 sequences of the virus VDEN3 compared among themselves and with 16 other sequences showed VDEN3 average percentage nucleotide and amino acid identity of 89.6 and 100% respectively.The phylogenetic studies carried out show that they are grouped to genotype III also of Asian origin. The virus isolated from VDEN2 case transverse myelitis (Bel61082) was characterized by nucleotide sequencing of the framework region as well as tests neurovirulence in mice newborn. The susceptibility of primary cultures of neurons and astrocytes, human glioma cells was also investigated for the characterization of the character neurovirulent vírus.O study of infection in mouse neurovirulence showed no apparent signs of disease after inoculation only NGC strain, but virus replication 61,082 Bel can be detected by RT-PCR on mouse brain suspension. We obtained experimental evidence of apoptosis in neuronal cells infected with NGC and VDEN2 Bel61082. In nucleotide sequencing, the main change observed is located at 28 M protein, an area known as pro-apoptotic.