Foram desenvolvidos dois experimentos para avaliação do efeito da temperatura e do período de estocagem de ovos férteis sobre os resultados da incubação, qualidade do pintinho de um dia de idade, bem como sobre o desempenho e rendimento de carcaça de frangos de corte durante as fases inicial e final. Experimento I - Utilizou-se 1620 ovos férteis da linhagem Cobb 500, oriundos de matrizes de 38 semanas de idade distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualisado em arranjo de tratamentos em fatorial 2x2 com os fatores: período (5 e 10 dias) e temperatura (17 e 20oC) na estocagem de ovos, totalizando 4 tratamentos com nove repetições de 45 ovos cada. Após a estocagem procedeu-se a incubação em máquina de estágio único por vinte e um dias. Experimento II - Utilizou-se 504 pintos machos e fêmeas de um dia de idade, distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualisado com os mesmos 4 tratamentos do experimento I sendo eles: Tratamento 1 (5 dias e 20oC), tratamento 2 (5 dias e 17oC), tratamento 3 (10 dias e 20oC) e tratamento 4 (10 dias e 17oC) com 9 repetições de quatorze aves cada para avaliação de desempenho e características de carcaça. Todos os dados foram analisados pelo Statistical Analysis System (SAS, 2008) e submetidos à análise de variância pelo procedimento MIXED ao nível de 5% de significância. Os dados que não respeitaram as premissas da análise estatística foram submetidos à análise não paramétrica de frequência pelo procedimento GLIMMIXED. No experimento I, não foi observado efeito significativo da interação entre os fatores analisados. Os melhores resultados de eclosão e eclodibilidade (77.28 e 77.86%, respectivamente) foram para ovos estocados por 5 dias. O efeito do período também foi observado no embriodiagnóstico, aumentando a ocorrência de mortalidade embrionária nas fases inicial e final em ovos estocados por 10 dias. A qualidade do pintinho foi superior em aves de ovos estocados durante os mesmos períodos. No experimento II, o desempenho não foi afetado significativamente pelos fatores, como também não houve efeito significativo da interação (p<0.05). Para as características de carcaça houve efeito significativo do fator temperatura (P<0,05) para peso vivo e rendimento de pernas. As aves de ovos estocados a 20oC foram mais pesadas aos 42 dias e apresentaram maior rendimento de pernas quando comparadas aos cortes de aves de ovos estocados a 17oC. Concluiu-se que a estocagem de ovos influencia os resultados da incubação bem como a qualidade do pintinho, principalmente no que diz respeito ao período em que permanecem estocados. Por outro lado o manejo pré-incubação não influenciou o desempenho de frangos de corte, mas sim características de carcaça, demonstrando que ambiência, sanidade, nutrição e melhoramento genético são fatores imprescindíveis na produção avícola mundial. / Two experiments were conducted to evaluate the effect of temperature and storage time of fertile eggs on the results of incubation, chick quality day old, as well as on the performance and carcass yield of broilers during the initial phases and final. Experiment I - was used in 1620 fertile eggs from Cobb 500, from breeders 38 weeks of age distributed in completely randomized design with treatments arranged in a 2x2 factorial with the factors: time (5 and 10 days) and temperature (17 and 20 o C) in the storage of eggs, totaling 4 treatments with nine replicates of 45 eggs each. After storage incubation proceeded in single stage machine for twenty-one days. Experiment II - was used 504 male and female chicks from one day of age in completely randomized design with 4 treatments of the same experiment I being: Treatment 1 (5 days, 20 o C), treatment 2 (5 days and 17 o C), treatment 3 (10 days and 20 o C) and treatment 4 (10 days and 17 o C) with 9 repetitions of fourteen birds each for performance evaluation and carcass characteristics. All data were analyzed using Statistical Analysis System (SAS, 2008) and subjected to analysis of variance by the MIXED procedure at the 5% significance level. Data that did not meet the assumptions of statistical analysis were analyzed by frequency nonparametric by procedure GLIMMIXED. In experiment I, there was no significant interaction between the factors. The best results hatching and hatchability (77.28 and 77.86%, respectively) were for eggs stored for 5 days. The effect of time was also observed in embryo diagnosis, increasing the occurrence of embryonic mortality in early and late in eggs stored for 10 days. Chick quality was higher in birds from eggs stored for long memos. In the second experiment, the performance was not affected by the factors, as there was no significant interaction (p <0,05). For carcass traits was no significant effect of temperature factor (P <0.05) on body weight and yield legs. Birds from eggs stored at 20 o C were heavier at 42 days and showed higher upside compared to cuts of poultry eggs stored at 17 o C. It was concluded that the storage of eggs influences the results of the incubation and chick quality, especially with regard to the period that remain stocked. On the other hand the management pre-incubation did not influence the performance of broilers, but carcass characteristics, demonstrating that ambience, sanitation, nutrition and genetic improvement are indispensable factors in poultry production worldwide.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar, em laboratório, a seletividade de produtos químicos, utilizados na citricultura, ao parasitóide de ovos Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner (Hymenoptera: Trichogrammatidae), inimigo natural com maior potencial de uso para o controle biológico de Gymnandrosoma aurantianum Lima (Lepidoptera: Tortricidae), uma das principais pragas dos citros. Os ensaios foram conduzidos seguindo as normas estabelecidas pela IOBC/WPRS para a avaliação dos efeitos nocivos de agroquímicos aos inimigos naturais de insetos. Utilizou-se água destilada como testemunha e foram selecionados cinco inseticidas (imidacloprid, deltametrina, Bacillus thuringiensis, óleo mineral e triflumuron), três acaricidas (abamectina, dicofol e espirodiclofeno) e quatro fungicidas (oxicloreto de cobre, piraclostrobina, difenoconazole e mancozebe) utilizados para o controle do bicho-furão-dos-citros e outras pragas e doenças de citros. Foram realizados ensaios relativos à exposição de adultos, forma mais suscetível do parasitóide, aos produtos; contato direto com formas imaturas (ovo-larva, pré-pupa e pupa) no interior dos ovos do hospedeiro natural G. aurantianum e do hospedeiro alternativo, Anagasta kuehniella e aceitação, pelas fêmeas do parasitóide, de ovos tratados com os produtos. Posteriormente, os produtos foram classificados, conforme a redução causada no parasitismo ou porcentagem de emergência em: 1, inócuo (<30%); 2, levemente nocivo (30 a 79%); 3, moderadamente nocivo (80 a 99%); 4, nocivo (>99%). Os inseticidas, acaricidas e fungicidas testados afetaram o parasitismo de T. atopovirilia. Não houve diferença no comportamento de T. atopovirilia fosse ele criado no hospedeiro natural ou no alternativo. Os produtos menos seletivos aos adultos do parasitóide foram deltametrina, abamectina, óleo mineral e imidacloprid. Em relação aos estágios imaturos do parasitóide, todos os produtos foram inócuos, exceto óleo mineral, que provocou redução de 100% na porcentagem de emergência; abamectina, triflumuron, imidacloprid foram levemente prejudiciais ao período ovo-larva. Abamectina e triflumuron tiveram maior efeito sobre a capacidade de parasitismo dos indivíduos emergidos quando o tratamento ocorreu durante a fase de pupa do parasitóide. Os produtos Bacillus thuringiensis, difenoconazole, oxicloreto de cobre, piraclostrobina, dicofol, espirodiclofeno, considerados inócuos ou levemente prejudiciais em todas as etapas dos ensaios em laboratório, podem ser utilizados em programas de Manejo Integrado de Pragas, em associação com o controle biológico, sem prejuízo para o parasitóide e contribuindo para a sustentabilidade da citricultura. / This study sought to evaluate in the laboratory the selectivity of chemical products used in citriculture to the egg parasitoid Trichogramma atopovirilia Oatman & Platner (Hymenoptera: Trichogrammatidae), the natural enemy with the greatest potential for use in the biological control of Gymnandrosoma aurantianum Lima (Lepidoptera: Tortricidae), one of the main pests of citrus. Assays were conducted following the standards established by IOBC/WPRS to evaluate the harmful effects of agrochemicals to natural enemies of insects. Distilled water was used as a control and five insecticides (imidacloprid, deltamethrin, Bacillus thuringiensis, mineral oil, and triflumuron), three miticides (abamectin, dicofol, and spirodiclofen), and four fungicides (copper oxychloride, pyraclostrobin, difenoconazole, and mancozeb) used to control the citrus fruit borer and other pests and diseases of citrus were selected as treatments. Assays were conducted to study adult (the most susceptible stage of the parasitoid) exposure to the products; direct contact with immature forms (egg-larva, prepupa, and pupa) inside eggs of the natural host G. aurantianum and of the factitious host, Anagasta kuehniella; and acceptance, by females of the parasitoid, of eggs treated with the products. The products were then classified with regard to the reduction caused in parasitism or emergence percentage, into: 1, harmless (<30%); 2, slightly harmful (30 to 79%); 3, moderately harmful (80 to 99%); and 4, harmful (>99%). The insecticides, miticides, and fungicides tested affected T. atopovirilia parasitism. No differences were observed in T. atopovirilia behavior reared either on the natural or on the factitious host. The least selective products to parasitoid adults were deltamethrin, abamectin, mineral oil, and imidacloprid. As to the immature stages of the parasitoid, all products were harmless, except for mineral oil, which caused a 100% reduction in emergence percentage; abamectin, triflumuron, and imidacloprid were slightly harmful to the egg-larval period. Abamectin and triflumuron had the greatest effect on the parasitism capacity of individuals emerged when the treatment was applied during the parasitoid\'s pupal stage. The products Bacillus thuringiensis, difenoconazole, copper oxychloride, pyraclostrobin, dicofol, spirodiclofen, considered harmless or slightly harmful in all steps of the laboratory assays, can be used in Integrated Pest Management programs, in association with biological control, without being harmful to the parasitoid, and can contribute toward citriculture sustainability.

Lacase 2 é um gene com função majoritária na esclerotinização e pigmentação da cutícula corporal em insetos e evidências sugerem que desenvolva função na esclerotinização do córion dos ovos de mosquitos vetores de patógenos. A literatura registra que quando a expressão do gene é silenciada em adultos de Aedes albopictus suas fêmeas produzem ovos hialinos e inviáveis. Em teoria, este seria um bom gene-candidato à manipulação em iniciativas de controle biológico baseada em organismos geneticamente modificados. No presente estudo, caracterizamos o perfil expressional e a atividade enzimática de lacase 2 durante o desenvolvimento de Aedes aegypti, bem como silenciamos transcritos do gene em fêmeas adultas para testar se havia prejuízo na formação do córion dos ovos. A técnica de RT-PCR não foi sensível suficiente para detectar amplificação do gene lacase 2 em larvas, contudo, detectamos amplificação nos outros estágios de vida. Pupas e fêmeas adultas após repasto sanguíneo apresentaram perfis de expressão similares entre si. Com a técnica de detecção de atividade enzimática por fluorescência foi possível determinar o perfil de atividade enzimática de lacase 2 e o pH ótimo em todos estágios de desenvolvimento. O maior pico de atividade foi registrado em fêmeas adultas 32 horas após repasto sanguíneo. A atividade enzimática de lacase 2 foi confirmada após separação cromatográfica na amostra de fêmeas adultas 24 horas após repasto sanguíneo. Ambas técnicas, RT-PCR e detecção de atividade enzimática, apontam para maior produção de lacase 2 após repasto sanguíneo em fêmeas adultas, denotando sua importância no desenvolvimento do ovo. Para realização dos experimentos de silenciamento de transcritos foram sintetizados RNAs dupla-fita de lacase 2 e da proteína MSP1, utilizado como controle negativo do silenciamento. Ambos RNAs dupla-fita foram microinjetados em três concentrações, 20ng, 200ng e 1700ng, isoladamente em três grupos experimentais de fêmeas de Ae. aegypti. Em todos os experimentos não houve diferença morfológica entre os ovos das fêmeas microinjetadas com RNA dupla-fita de lacase 2 e MSP1. Os ovos dos grupos experimento e controle iniciaram a pigmentação cerca de 30 minutos após a postura. Entretanto, foram observados alguns ovos com início de pigmentação tardio no grupo experimento no lote de fêmeas microinjetadas com 200ng. Este fenômeno pareceu ter sido um incipiente do silenciamento de transcritos de lacase 2. O efeito da inserção do RNA dupla-fita de lacase 2 não resultou no mesmo efeito reportado na literatura para Ae. albopictus. Ainda assim, os resultados obtidos neste trabalho corroboram a hipótese de que lacase 2 desempenhe alguma função no desenvolvimento do ovo em mosquitos. / Laccase 2 is a gene with major role in body cuticle tanning in insects and evidences suggest laccase 2 may play a role in egg chorion tanning in mosquitoes vectors of pathogens. When the expression of the gene is knocked down in adults of Aedes albopictus their females produce hyaline and inviable eggs. Theoretically, this gene would be a good candidate for manipulation in the context of biological control of vectors based on genetically modified organisms. In the present study, we characterized the expressional profile and enzymatic activity of laccase 2 during the development of Aedes aegypti. We also knocked down the gene in adult females hypothesizing that this could jeopardize egg chorion formation. The RT-PCR technique was not sensitive to detect laccase 2 amplification in larvae, however, we detected amplification in other life stages. Pupae and adults females after blood meal exhibited equivalent expressional profiles. Using the technique of enzymatic activity detection by fluorescence, it was possible to determine the laccase 2 enzymatic activity profile and the optimum pH in all stages of development. The highest activity peak was registered in adult females 32 hours after blood meal. The laccase 2 enzymatic activity was confirmed by chromatographic separation in the adults females 24 hours after blood meal sample. Both techniques (RT-PCR and enzymatic activity detection) point to a higher production of laccase 2 after blood meal in adult females, suggesting the importance of laccase 2 for egg development. For the knocking down experiments we synthesized double-stranded RNA of laccase 2 and protein MSP1 (negative control). Both double-stranded RNAs were injected at three concentrations, 20ng, 200ng and 1700ng, in three experimental groups of Ae. aegypti females. No significant morphological differences between eggs from females injected with laccase 2 and MSP1 double-stranded RNA were observed. Pigmentation of the eggs started 30 minutes after they were laid (experimental and control group). However, the pigmentation started slightly later in those eggs of experiment females injected with 200ng. This apparent developmental delay may be related to the silencing of laccase 2. The effect of insertion of double-stranded RNA of laccase 2 did not result in the same effect reported in the literature for Ae. albopictus. Even so, the results obtained in this study corroborate the hypothesis that laccase 2 plays a role in egg development in mosquitoes.

Zabrotes subfasciatus é considerado um dos principais predadores de sementes da espécie Phaseolus vulgaris, causando sérios prejuízos para esta espécie em armazenagem. Este trabalho teve como objetivo conhecer alguns dados do comportamento de oviposição das fêmeas de Z. subfasciatus (Coleoptera, Bruchidae) que ainda são desconhecidos. Foi estudada a oviposição de Z. subfasciatus em P. vulgaris, ao longo de toda a vida e em situações de privação do hospedeiro, logo após a emergência dos adultos, por períodos determinados de 1 a 10 dias. Foi utilizada apenas uma variedade de P. vulgaris: rosinha. O trabalho foi dividido em 2 fases, realizadas concomitantemente. Na primeira fase, foi estudada a variação da oviposição, ao longo do tempo de vida total das fêmeas, sem e com privação do hospedeiro, por até 10 dias, bem como a variabilidade entre as fêmeas dentro de cada grupo, observando as estratégias de cada uma delas no interior de cada grupo. Foram analisados vários parâmetros, como: número de ovos colocados diariamente, a longevidade, o período de oviposição e o número de ovos colocados por cada fêmea dentro de cada grupo. O número de ovos depositados por dia variou estatisticamente, sendo que o pico de oviposição na presença do hospedeiro (Grupo Controle) ocorreu entre o 2o e 5o dia de postura. A longevidade média foi de 11,1&plusmn;1,8; o período de oviposição médio foi de 8,7&plusmn;1,1 dias e o número de ovos colocados por cada fêmea ao longo da vida foi de 37,0&plusmn;9,3. Nos Grupos em que houve privação do hospedeiro, também observou-se que o número de ovos colocados por dia foi diferente estatisticamente, sendo que o pico de oviposição ocorreu sempre no 1o. dia seguinte à privação, com exceção do nível 1, em que o pico ficou entre os dias 1 e 4 (após a presença do hospedeiro). A fecundidade máxima de cada grupo diminuiu, mas só foi diferente estatisticamente a partir do nível 6 (6 dias sem o hospedeiro), sendo que a média foi de 13,9&plusmn;9,2 ovos, quando o tempo de espera foi de 10 dias. Isso sugere que em até 5 dias de privação, Z. subfasciatus consegue manter sua capacidade de postura, graças a uma boa retenção dos seus ovos e, a partir do 6o dia, há, provavelmente, uma reabsorção. A longevidade foi maior nos Grupos de Privação do hospedeiro a partir do nível 3, em relação ao Grupo Controle, mas o período de oviposição foi menor (4,3&plusmn;4,6 dias no nível 10) a partir do nível 1, em relação ao Grupo Controle. O número de ovos colocados por todas as fêmeas, tanto no Grupo Controle como nos de Privação, não diferiu, indicando assim que não há variabilidade intraespecífica dentro de cada grupo. Na segunda fase, o objetivo foi comparar a distribuição dos ovos por grão, no Grupo em que não houve privação do hospedeiro (Controle) e nos Grupos em que houve privação por 2, 5, 8 e 10 dias, respectivamente. Foi constatado que as fêmeas privadas do hospedeiro por 5 e 8 dias apresentaram maior número de grãos com 4 ou mais ovos, no 1o dia de oviposição (1,4 grão em média), em relação ao Grupo Controle e as fêmeas que ficaram privadas do hospedeiro por 2 e 10 dias (0,8 grão em média). Quanto ao número de grãos com 1 ou nenhum ovo, observou-se que o Grupo Controle e os Grupos em que houve privação do hospedeiro por 8 e 10 dias apresentaram um maior número de grãos (3,2 grãos em média) em relação aos demais (2,1 grãos em média), no 1o dia de oviposição. E quanto ao número de ovos no grão com mais ovos, observou-se que ocorreu um maior número de ovos em todos os Grupos Privados (5,1 ovos/ grão em média), em relação ao Grupo Controle (1,9 ovo/ grão, em média). / Zabrotes subfasciatus is considered to be one of the main predators of Phaseolus vulgaris seeds, causing severe damage to this species during storage. The aim of the present study was to investigate some aspects of the oviposition behavior of Z. subfasciatus (Coleoptera, Bruchidae) females that are still unknown. The oviposition of Z. subfasciatus on P. vulgaris was studied along the entire life cycle of the parasite and in situations of host privation, right after the emergence of the adults, for periods of time ranging from one to ten days. Only one variety of P. vulgaris (&quot;rosinha&quot;) was used. The study was divided into two parts carried out concomitantly. In the first part, the variation of oviposition along the total lifetime of the females was studied, with and without host privation up to ten days, as well as the variability among the females inside each group, with individual observation of the strategies of each insect. Several parameters were analyzed: number of eggs laid daily, longevity, oviposition period and number of eggs laid per female inside each group. The number of eggs laid per day varied significantly and the peak oviposition in the presence of the host (Control Group) occurred between the second and the fifth day after deposition. The mean longevity was 11.1 &plusmn; 1.8 days, the mean oviposition period was 8.7 &plusmn; 1.1 days and the number of eggs laid by each female along their lives was 37.0 &plusmn; 9.3. In the groups submitted to host privation the number of eggs deposited per day was significantly different, with peak oviposition occurring always on the first day after privation, except for level 1 where the peak was observed between the first and fourth days (after the presence of the host). The maximum fecundity of each group has reduced, but the difference was statistically significant only when level 6 (six days without the host) and higher levels were reached, the average being 13.9 &plusmn; 9.2 eggs when the waiting time was ten days. This suggests that, for up to five days of privation, Z. subfasciatus is able to maintain its oviposition capacity thanks to the good retention of its eggs. After the sixth day, however, reabsorption is likely to occur. The longevity of the groups submitted to host privation from level 3 to higher levels was longer than the longevity of the Control Group, but the oviposition period from level 1 to higher levels (4.3 &plusmn; 4.6 days at level 10) was lower than in the Control Group. The number of eggs laid by all females in the Control and Privation Groups did not differ, thus indicating that there is no intraspecific variability inside each group. In the second part of the experiment, the aim was to compare the distribution of eggs per grain in the group where there was no host privation (Control) and in the groups where privations of 2, 5, 8 and 10 days were imposed. The females kept under host privation for 5 and 8 days presented a larger number of grains with four or more eggs on the first day of oviposition (average of 1.4 grains) compared with the Control Group and with the females that were kept under host privation for 2 and 10 days (average of 0.8 grains). As regards the number of grains with one or no egg, the Control Group and the groups submitted to host privation for 2 and 10 days presented a larger number of grains (average of 3.2 grains) in relation to the others (average of 2.1 grains) on the first day of oviposition. As regards the number of eggs on the grains with a larger content of eggs, the number of eggs was larger in all the Privation Groups (average of 5.1 eggs/grain) in relation to the Control Group (average of 1.9 eggs/grain).

O presente experimento foi conduzido para avaliar o uso de enzimas fitase e carbohidrolase em dietas a base de milho e soja com ou sem alta concentração de fibras no desempenho produtivo e qualidade dos ovos (gravidade especifica (GE), unidade haugh (UH), espessura da casca (EC) e peso da casca (PC) de galinhas poedeiras. Foram utilizadas 320 poedeiras da linhagem comercial Hissex White, com idade inicial de 44 semanas. As aves foram alimentadas com quatro diferentes tratamentos (10 repetições de 8 cada) durante 10 semanas. As dietas incluíam: controle (T-1) a base de milho e soja com baixa concentração de fibras; (T-2) a base de milho e soja com alta concentração de fibras; (T-3) a base de milho e soja com adição do complexo enzimático e (T-4) a base de milho e soja com adição do complexo enzimático e alta concentração de fibras. As galinhas alimentadas com a dieta controle, apresentaram maior consumo de ração (CR) (P&lt;0,05) na primeira e na quinta semanas em relação ao controle negativo (T-2). Somente na quinta semana o grupo controle obteve maior conversão alimentar (CA) (P&lt;0,05) em relação aos outros tratamentos. Nas outras variáveis observadas, como o peso dos ovos (PO), a massa dos ovos (MO), gravidade específica (GE), unidade Haugh (UH), espessura da casca (EC) e peso da casca (PC), os diferentes tratamentos determinaram resultados similares, isso pode indicar que dietas com alta concentração de fibras e por isso de baixo custo, podem ser adotadas sem diminuição da qualidade e produção dos ovos. / The present experiment was conducted to evaluate the use of enzymes phytase and carbohydrase in corn/soybean meal diets with or without fibers regarding the productive performance and egg quality (specific gravity (SG), Haugh unit (HU), shell thickness (ST) and shell weight (SW) of laying hens. Were utilized 320 commercial line Hissex White laying hens, aged 44 weeks. The hens were fed with four different treatments (10 replicates of eight each) during 10 weeks. The diets included control (T-1) based of corn, soybean meal and low concentration of fibers; (T-2) based of corn, soybean meal and high concentration of fibers; (T-3) based of maize and soybean meal supplemented with enzymes and (T-4) based of corn and soybean meal supplemented with enzymes and high concentration of fibers. The laying hens fed with the control diet (T-1) showed higher feed intake (FI) (P&lt;0,05) in the first and fifth weeks in relation to the negative control (T-2). Only in the fifth week the control group had higher feed conversion (FC) (P&lt;0,05) in relation with the other treatments. In the other variables observed, the different treatments showed similar results, it may indicate that diets with high fiber concentration and therefore low cost can be taken without decreasing the quality and egg production.

Dois experimentos foram conduzidos com os objetivos de avaliar o desempenho e a qualidade dos ovos de poedeiras alimentadas com dietas formuladas com base nos critérios de aminoácidos totais (AAT) e digestíveis (AAD) (Experimento 1) e com diferentes relações arginina:lisina e fontes de metionina na estação de verão (Experimento 2). No Experimento 1, cento e sessenta poedeiras semipesadas com 54 semanas de idade foram distribuídas em delineamento inteiramente ao acaso em arranjo fatorial 2 x 4, sendo os fatores: critério de formulação das dietas (AAT e AAD) e diferentes níveis de aminoácidos (100%, 95%, 90% e 85% de metionina, lisina e triptofano), totalizando oito tratamentos com cinco repetições de quatro aves cada. Foram avaliadas as características de desempenho, de qualidade dos ovos. Os resultados indicaram que não houve efeito significativo dos fatores sobre as características consumo de ração, consumo de energia e peso dos ovos e em nenhuma das características de qualidade dos ovos. A produção de ovos foi influenciada pelos níveis de aminoácidos na dieta, apresentando efeito linear positivo (P<0,05). Verificou-se interação significativa entre os fatores para as características massa de ovos e conversão alimentar, na qual os melhores resultados foram obtidos com o critério AAD e 100% das exigências de aminoácidos. No Experimento 2, foram utilizadas 288 poedeiras com 25 semanas de idade, distribuídas em delineamento inteiramente casualizado em arranjo fatorial 2x3x2: critérios de formulação (AAT e AAD), relações arginina:lisina (0,9:1,0; 1,0:1,0 e 1,1:1,0) e fontes de metionina (pó e líquida), totalizando 12 tratamentos com seis repetições de quatro aves cada. Foram avaliadas as características de desempenho e qualidade dos ovos. Os fatores critérios de formulação e fontes de metionina não influenciaram as características consumo de ração, produção, peso dos ovos, massa de ovos e conversão alimentar. No entanto, o fator relação arginina:lisina influenciou linear e positivamente as características consumo de ração, peso e massa de ovos. As características que expressam a qualidade interna e externa dos ovos não foram influenciadas por nenhum dos fatores estudados. Concluiu-se que o desempenho de poedeiras semipesadas pode ser melhorado quando as dietas são formuladas com base no critério de AAD sem acarretar diminuição na qualidade dos ovos e que a melhor relação arginina:lisina em dietas para poedeiras comerciais leves criadas na estação de verão é de 1,1:1,0. / Two experiments were carried out to evaluate the performance and egg quality of laying hens fed diets formulated based on total (TAA) and digestible (DAA) amino acids (Experiment 1), containing different arginine:lysine ratios and methionine sources at summer season (Experiment 2). In Experiment 1, one hundred sixty brown hens, 54 weeks of age, were randomly distributed in a 2x4 factorial scheme: feed formulation criterion, and amino acid levels (100%, 95%, 90%, and 85% of the methionine, lysine and tryptophan) totaling eight treatments with five replicates of four birds each. Performance and egg quality characteristics were evaluated. The results showed no effects of the factors on feed intake, energy intake, egg weight and on all egg quality characteristics. There was positive linear effect (P<0.05) of the amino acid levels on egg production and significant interaction between the factors on egg mass and feed conversion showing that feeding formulation based on digestible amino acids with 100% of the amino acids provided the best results. In Experiment 2, two hundred eighty eight white hens, 25 weeks of age, were randomly distributed in a 2x3x2 factorial scheme: feed formulation criterion, arginine:lysine levels and methionine sources totalizing 12 treatments with six replicates of four birds each. There were no effects of the feed formulation criterion and methionine sources on feed intake, egg production, egg weight, egg mass, and feed conversion. However, the arginine:lysine ratios influenced linear and positively the feed intake, egg weight, and egg mass characteristics. Egg quality characteristics were not influenced by the factors. It was concluded that the performance of the brown laying hens can be improved by using diets formulated with digestible amino acids criterion, and the arginine:lysine ratio of 1.1:1.0 is the best ratio for white laying hens under summer conditions.

Orientador: Elisa Helena Giglio Ponsano / Banca: Roberto de Oliveira Roça / Banca: Otto Mack Junqueira / Resumo: Os efeitos da adição de biomassa de Rubrivivax gelatinosus em dietas de galinhas poedeiras foram investigados. Sorgo e milho foram utilizados para formulação de rações basais que receberam níveis crescentes de biomassa. A biomassa bacteriana aumentou a tonalidade de vermelho e diminuiu a luminosidade das gemas quando adicionada a ambas as rações basais. Na ração à base de milho, 1.500ppm de biomassa foram suficientes para alcançar a preferência do consumidor, enquanto que, com ração à base de sorgo, 7.500ppm foram necessários para atingir o mesmo objetivo. Galinhas alimentadas com ração à base de milho tiveram consumo de ração superior e melhor conversão alimentar que aquelas alimentadas com ração à base de sorgo, mas os níveis de inclusão da biomassa em ambas as rações basais não influenciaram estes parâmetros. Durante o período experimental não ocorreu mortalidade nem mudança no peso das galinhas. As galinhas alimentadas com ração à base de milho mostraram taxas superiores de produção de ovos, peso e massa de ovos que aquelas alimentadas com ração à base de sorgo. Estes parâmetros não foram influenciados pela inclusão de níveis de biomassa em ambos os tipos de ração. Níveis normais para enzimas séricas e ausência de lesões degenerativas e inflamatórias nos fígados e nos rins das galinhas permitem a indicação da biomassa para suplementação de rações. / Abstract: The effects of the dietary inclusion of Rvi. gelatinosus biomass in layers rations were investigated. Sorghum and corn were used for the formulation of basal rations that received increasing levels of biomass. The bacterial biomass increased red hues and decreased lightness of yolks when added to both basal rations. Biomass at 1,500ppm in the corn-based ration was enough to reach consumers' preference, while with the sorghum-based ration, 7,500ppm were necessary to reach the same. Hens fed corn-based rations had superior feed consumption and better feed conversion than those fed sorghum-based rations but the inclusion levels of the biomass on both basal rations did not influence these parameters. No mortality and no change on layers weight occurred during the experimental period. Hens fed corn-based rations showed superior egg production, egg weight and egg mass rates than those fed sorghum-based rations. These parameters were not influenced by the inclusion levels of the biomass on both kinds of rations. Normal levels for seric enzymes and the absence of degenerative and inflammatory lesions in livers and kidneys of hens allow the indication of the biomass for ration supplementation. / Mestre

Current usage of human embryonic stem cells (hES) and induced pluripotent stem cells (iPS) in clinical therapies and personalized medicine are limited as a result of ethical, technical and medical problems that arise from isolation and generation of these cells. Isolation of hES cells faces ethical problems associated with their derivation from human pre-implantation embryos. The most controversial aspect of hES cell isolation targets the generation of autologous hES cell lines which requires the transfer of a somatic-cell nucleus from the patient to an enucleated oocyte. While already established embryonic stem cell lines from IVF embryos can be used in a similar manner, lack of genetic identity can cause therapy rejection from the host, and prevent their use in personalized medicine. Induced pluripotent stem cells on the other hand, are generated from somatic cells that have been reprogrammed in vitro to behave like stem cells. While these cells can potentially be used for personalized medicine without the risk of rejection by the host system, derivation methods prevent their therapeutic use. The most efficient method used to generate iPS cells involves usage of viral particles which can result in viral DNA being integrated in the host cell’s genome and render these cells non-compliant for clinical therapies. Other methods not involving viral particles exist as well, but the reprogramming efficiency is too low and technical problems with generating large enough numbers of cells prevent these methods from being feasible approaches for clinical therapies. Direct reprogramming of a differentiated cell into a developmentally more plastic cell would offer alternatives to applications in regenerative medicine that currently depend on either embryonic stem cells (ES), adult stem cells or iPS cells. We hypothesize that Xenopus laevis egg cytoplasmic extract contains critical factors needed for reprogramming that may allow for non-viral, chemically defined derivation of human induced pluripotent/multipotent cells which can be maintained by addition of exogenous FGF2. In this thesis we investigated a new method for generation of multipotent cells through determining the ability of select fractions of Xenopus laevis egg extract to induce multipotency in already differentiated cells. We were able to identify select fractions from the extract that in combination with exogenously added FGF2 can reprogram and maintain the reprogrammed cells in an undifferentiated state. The findings of this work also determined that Xenopus laevis egg extract mRNA is required for achieving full reprogramming. The body of work presented in this thesis showed the ability of FGF2 isoforms to bind and activate select FGF receptor tyrosine kinases, act as extracellular mitogenic factors to support growth of hES cells in an undifferentiated state as well bind to nuclear DNA and affect expression of endogenous genes. Moreover, we showed that all FGF2 isoforms can induce expression of stem cell specific proteins in human dermal fibroblasts as well as extend lifespan of human dermal fibroblasts in vitro. In this work we identified HECW1, the gene coding for E3 ubiquitin ligase NEDL1, as a novel nuclear target for all FGF2 isoforms and showed that overexpression of recombinant FGF2 isoforms in human dermal fibroblasts can down regulate expression of HECW1 gene.

Expanded bed chromatography using ion-exchange media is a powerful first step in purification processes. Expanded bed chromatography can be used to extract components from complex and viscous solution. This can be achieved because of the void created between adsorbent particles where as in packed bed chromatography, the adsorbent is too compact and dense for a complex feed stock to flow through. Expanded bed chromatography was used to purify bovine serum albumin (BSA) from chicken egg white (CEW). The high viscosity of CEW presents a unique challenge for efficient large-scale protein purification. This project aimed to optimize and evaluate a separation method that is believed to be particularly suitable for high viscosity solutions: expanded-bed ion exchange chromatography. The BSA was admixed into the CEW and the solution was pumped through the column for purification. The media used in the column was Streamline DEAE which is an anion-exchanger. The yield obtained was 85% and the purity was 57%. A mathematical model to understand and predict the behavior of expanded bed chromatography was developed to provide an estimation of the breakthrough curves obtained for BSA. A small sized porous dense adsorbent was also synthesized to enhance the purification process. This zirconia-based adsorbent allows use of higher flow velocities that is a key factor when working with viscous fluids such as chicken egg white.

Egg activation is a series of highly coordinated processes that prepare the mature oocyte for embryogenesis. Typically associated with fertilisation, egg activation results in the resumption of the cell cycle, expression of maternal mRNAs and cross-linking of the vitelline membrane. While some aspects of egg activation, such as initiation factors in mammals and environmental cues in sea animals, have been well-documented, the mechanics of egg activation in many animals are still not well understood. This is especially true for animals where fertilisation and egg activation are unlinked. In order to elucidate how egg activation is regulated independently of fertilisation, I use Drosophila melanogaster as a model system. This insect provides extensive genetic tools, ease of manipulation for experimentation and is amenable for imaging. Through visualisation of calcium, Processing bodies and meiotic spindles, I show that osmotic pressure acts as an initiation cue for the calcium wave and downstream processes, including the resumption of cell cycle and the dispersion of the translational repression sites. I further show that aquaporin channels, together with external sodium ions, play a role in coordinating swelling of the oocyte in response to the osmotic pressure. I proceed to identify the requirement of internal calcium sources together with a dynamic actin cytoskeleton for a calcium wave to occur. Through co-visualisation of calcium and actin, I provide the first evidence that the calcium wave is followed by a wavefront of non-cortical F-actin at egg activation, which requires the calcium wave. Genetic analysis supports a model where changes in osmotic pressure trigger the calcium wave via stretch sensitive calcium channels in the oocyte membrane and the calcium wave is relayed by nearby channels via the actin cytoskeleton. My work concludes that the mechanism of egg activation in Drosophila is more similar to plants, compared to most vertebrates.