O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade in vitro e in vivo de embriões bovinos reconstruídos com oócitos enucleados em Metáfase II e núcleos de células somáticas (fibroblastos) fetais e adultas. Para tanto, oócitos de ovários colhidos em matadouro foram maturados in vitro por 17 horas e enucleados pela remoção do primeiro corpúsculo polar (CP) e da região do oolema contendo a placa metafásica. Como núcleo doador, foram utilizados fibroblastos de orelha de vaca da raça Nelore e de feto colhido em abatedouro. Para a reconstrução dos embriões, cada célula doadora de núcleo, após indução à G0, foi inserida sob a zona pelúcida de cada oócito enucleado e o complexo citoplasma receptor - núcleo doador (CCN) fundido e ativado por eletrofusão (2 pulsos de 4 KV/cm durante 20µs). Após ativação elétrica, cada CCN foi incubado em solução de ciclohexemide (10µg/ml) e citocalasina D (2,5µg/ml) por 1 hora e, em seguida, em solução de ciclohexemide (10µg/ml) por mais 4 horas. Os embriões reconstruídos e ativados, assim como os fecundados in vitro (controle), foram co-cultivados em monocamada de células da granulosa e TCM 199 acrescido de 10% de SFB por 7-9 dias. Após o co-cultivo por 7-9 dias, parte dos embriões (controle e reconstruídos) foi fixada e corada para determinação do número de células e parte transferida para receptoras. Um total de 668 embriões foram reconstruídos com célula fetal e 569 com fibroblasto adulto. Após eletrofusão, 212 embriões reconstruídos com célula fetal e 181 com célula adulta fundiram e 32 (15,1%) e 30 (16,6%) atingiram o estádio de blastocisto, respectivamente. O número médio de células dos blastocistos foi 129,3, 101,3 e 114,3, respectivamente, para célula fetal, adulta e embriões FIV (controle), não havendo diferença estatística significante entre os grupos (P<0,05). Após a transferência de 18 blastocistos de célula fetal e 21 de célula adulta, as taxas de prenhez aos 90 dias foram 16,7% (3) e 19% (4), respectivamente, não havendo diferença estatística significante entre os grupos (P<0,05). A primeira prenhez com célula fetal deu origem a um bezerro saudável, aos 290 dias, pesando 34kg. Uma das receptoras morreu aos 229 dias de gestação em conseqüência de hidroalantóide e outra abortou aos 252 dias. As prenhezes de embriões reconstruídos com célula adulta ainda estão em andamento. Estes resultados indicam que fibroblastos fetal e adulto podem ser usados como doadores de núcleo com semelhantes taxas de desenvolvimento in vitro e in vivo. / The aim of this study was to evaluate the in vitro and in vivo viability of bovine nuclear transferred embryos from metaphase II oocytes and fetal and adult fibroblasts. Oocytes from ovaries collected at slaughterhouse were matured in vitro for 17 hours and enucleated after aspiration of first polar body (PB) and small volume of cytoplasm containing metaphase plate. Fibroblasts from Nelore cow and foetus collected at slaughterhouse were used as nuclei donor. In Nuclear Transfer, each nuclei donor cell, after serum starvation, was inserted under the zona pellucida of the each enucleated oocyte and the enucleated oocyte- nuclei donor cell complexes were electrofused and activated (2 pulses of 4KV/cm for 20µs). After electrical activation, the couplets were incubated in TCM199 plus 10% FCS supplemented with cycloheximide (10µg/ml) and cytochalasin D (2.5µgml) for 1 hour and cycloheximide alone for further 4 hours. The activated reconstructed embryos, as well as IVF embryos (control group), were co-cultured with granulosa cells in TCM 199 + 10% FCS for 7–9 days. After co-cultured, part of embryos (control and reconstructed) was fixed and the number of cells counted and part was transferred into recipients. A total of 668 couplets were reconstructed from fetal and 569 from adult fibroblasts. After electrofusion, 212 (fetal cells) and 181 (adult cells) embryos got fused and 32 (15.1%) and 30 (16.6%) reached blastocyst stage, respectively. The blastocyst cell number means were 129.3, 101.3 and 114.3, respectively, for fetal, adult and IVF (control) embryos. There was no significant difference (P<0.05) in the number of cells of blastocysts among the groups. After transferring 18 (fetal cells) and 21 (adult cells) blastocysts, pregnancy rates at day 90 were 16.7% (3) and 19% (4), respectively. There was no significant difference (P<0.05) between pregnancy rates. The first pregnancy from fetal cells delivered a healthy male calf at day 290, weighting 34kg. One of the remaining recipients died with hydrallantois at day 229 and the other aborted at day 252. The pregnancies of adult cells reconstructed embryos are still in course. These results indicated that fetal and adult fibroblasts could be used as nuclei donor, with similar rates of in vitro and in vivo developments.

Nos últimos anos, o emprego da aspiração folicular (OPU) e produção in vitro de embriões (PIVE) têm crescido mundialmente nos rebanhos bovinos. A OPU-PIVE viabiliza a rápida multiplicação do material genético, utilizando tanto a base genética da fêmea como do macho. No entanto, fêmeas de leite Bos taurus apresentam algumas peculiaridades, como menor população de folículos antrais e inferior qualidade oocitária, as quais foram apontadas como fatores responsáveis pela reduzida eficiência da técnica nesses rebanhos. Frente às dificuldades para o estabelecimento de programas de OPU-PIVE eficientes em vacas de leite Bos taurus, três experimentos foram conduzidos envolvendo diferentes tipos de tratamentos superestimulatórios em doadoras de oócitos lactantes e não lactantes. O primeiro estudo teve como objetivo aumentar a PIVE em doadoras da raça Holandesa lactantes e não lactantes submetidas ao tratamento tradicional de superstimulação com doses decrescentes de FSH porcino (FSHp) a cada 12 h, previamente à OPU. Nesse estudo, as doadoras (n = 15 vacas lactantes e n = 15 não lactantes da raça Holandesa) receberam protocolo para sincronização da emergência da onda folicular [protocolo a base de benzoato de estradiol (BE) e progesterona (P4)] e foram submetidas aos tratamentos de superestimulação em um delineamento experimental cross-over. Os outros dois estudos (n = 23 novilhas da raça Holandesa e n = 72 vacas não lactantes da raça Holandesa) foram desenvolvidos para avaliar diferentes diluentes para o FSHp com o objetivo de viabilizar a superestimulação com apenas uma aplicação de FSHp. No geral, os estudos avaliaram o efeito da superestimulação no perfil plasmático de FSH, na proporção de folículos classificados como pequenos (<6mm), médios (6-10mm) ou grandes (>10mm), conforme diâmetro folicular, na PIVE e no estabelecimento gestacional após transferência de embriões. A superestimulação aumentou a proporção de folículos médios, aumentou a competência oocitária e resultou em maior produção de blastocistos por sessão de OPU. A aplicação única de FSHp associado ao diluente de liberação lenta (ácido hialurônico), resultou em semelhante área sob a curva de FSH, semelhante proporção de folículos pequenos, médios e grandes e semelhante PIVE comparado ao tratamento superestimulatório tradicional com doses de FSHp administradas a cada 12h. Independentemente do diluente e da dose de FSHp utilizada, o tratamento superestimulatório resultou em maior produção de blastocistos por sessão de OPU comparado às vacas não tratadas com FSHp. Adicionalmente, semelhante taxa de estabelecimento gestacional foi observada, independentemente do tratamento utilizado na doadora. Portanto, os dados obtidos no presente estudo permitem concluir que independentemente do tipo de tratamento (diluente para FSHp ou dose utilizada de FSHp), a superestimulação previamente ao processo de OPU, aumentou o desenvolvimento de embriões in vitro, número de blastocistos por sessão de OPU e resultando em semelhante taxa de estabelecimento gestacional após transferência de embriões. / In the last years, the use of ovum pick-up (OPU) and in vitro produced embryo (IVEP) technology has worldwide increased in cattle herds. The OPU-IVEP enable a rapid individual multiplication based on the female and male donor genetic. However, Bos taurus dairy females present some peculiarities, as reduced antral follicle population and lower oocyte quality, and these factors have been awarded as responsible to the reduced technique efficiency among these herds. Given the difficulties of establishing OPU-IVEP programs with high efficiency in Bos taurus dairy cows, three studies were carried out, involving different types of superstimulation treatments in lactating and non-lactating Holstein donors. The first study aimed to increase IVEP in lactating and non-lactating Holstein dairy donors submitted to the traditional twice-daily porcine FSH (pFSH) superstimulation treatment prior to the OPU. For this purpose, donors (n = 15 lactating and n = 15 non-lactating Holstein cows) received the follicular wave synchronization protocol [estradiol benzoate (EB) and progesterone (P4) based protocol] and were submitted to superstimulation treatment in a cross-over design. Other two experiments were performed (n = 23 Holstein heifers and n = 72 non-lactating Holstein cows) to evaluate different pFSH diluents to enable superstimulation with a single injection. In general, these studies evaluated the effect of superstimulation on the plasmatic FSH profile, proportion of follicles sizes previous to OPU (small: <6mm; medium: 6-10mm; and large follicles: >10mm), on in vitro embryo production and pregnancy establishment after the produced embryo transfer. The superstimulation treatment improved the proportion of medium sized-follicles, improved oocyte competence and resulted in greater amount of blastocyst per OPU session. A single injection of pFSH combined with a slow release carrier (hyaluronan), resulted in similar FSH area under curve, proportion of follicles sizes previous to OPU and in vitro embryo production compared to the twice-daily superstimulating treatment. Regardless pFSH diluent and dose, superstimulating hormone resulted in greater number of blastocysts per OPU session compared to the non-pFSH treated donors. Additionally, similar pregnancy establishment was observed, regardless embryo donor treatment. Therefore, with the present data, we can conclude that regardless treatment type (pFSH diluent or dose), the superstimulation procedure prior to the OPU, enhanced in vitro embryo development, increased the number of blastocyst per OPU session and resulted in similar pregnancy establishment after embryo transfer.

Os grandes avanços obtidos em quantidade de massa muscular nos animais domésticos foram alcançados por programas de melhoramento genético baseados na seleção de características fenotípicas observados na fase adulta do animal. No entanto, o número de precursores miogênicos e conseqüentemente, de fibras musculares, é determinado nos estádios embrionários do desenvolvimento. Este fato direcionou o programa miogênico como alvo de busca de potenciais transcritos candidatos que possam causar impacto sobre a deposição muscular em animais domésticos. Este trabalho objetivou identificar transcritos candidatos originais associados ao desenvolvimento e crescimento do tecido muscular esquelético em frangos (Gallus gallus). Um total de 4.534 transcritos (ESTs) identificados em trabalhos anteriores foram imobilizados em membrana de náilon (microarranjo) para permitir a investigação das diferenças no padrão de expressão entre genótipos e tecidos. O perfil transcricional do tecido muscular peitoral entre linhagens contrastantes para potencial de crescimento e deposição muscular da Embrapa Suíno Aves permitiu identificar 98 transcritos diferencialmente expressos, que foram validados por amplificação quantitativa de transcritos reversos (RT-PCRq), e localizados em regiões coincidentes às anteriormente mapeadas por QTLs. Estes transcritos são agora os candidatos preferenciais para a identificação de mutações e desenvolvimento de marcadores específicos que possam ser empregados em programas de melhoramento e seleção precoce ou indireta de aves. O mesmo microarranjo foi utilizado para caracterizar os transcritos desconhecidos pelo padrão de expressão entre cinco tecidos (cérebro, coração, fígado, músculo e pele). Esta abordagem permitiu identificar transcritos com padrão de expressão tecido-específico e tecido-preferencialmente expressos e caracterizar 24 transcritos desconhecidos como co-expressos aos transcritos músculo esquelético-específicos. Por fim, o orientador de axônio RGM-A (Repulsive guidance molecule A), identificado como músculo esquelético-específico, foi selecionado para ser funcionalmente analisado in vivo, para investigar uma possível função deste transcrito atípico no tecido muscular e comprovar a eficiência dos microarranjos em orientar a seleção de transcritos candidatos. O padrão de expressão de RGM-A em embriões de frango e os efeitos da super-expressão sobre Pax3 indicaram uma possível associação deste orientador de axônio com a formação da musculatura esquelética dos vertebrados superiores. Os transcritos candidatos indicados por análises de microarranjo deste trabalho serão úteis não apenas para que os programas de melhoramento sejam capazes de manter ou aumentar os índices de crescimento das aves, que atualmente buscam por informações adicionais para superar os limites impostos pelo próprio perfil genético alcançado em anos de seleção. Estes resultados também abriram novas perspectivas para a caracterização funcional in vivo de transcritos desconhecidos, tendo embriões de frango como modelo animal. / by animal breeding programs along the years based on the observation of adult phenotypic characters. But, the number of myogenic precursor cells and, consequently, the number of muscle fibers is determined during the embryonic stages of development. Therefore, the embryonic myogenic program is an ideal target for searching potential candidate-transcripts, that can influence skeletal muscle deposition in domestic animals. This work aimed to identify original candidate-transcripts associated with skeletal muscle development and growth in chicken embryos (Gallus gallus). A total of previously identified 4,534 transcripts (Expressed Sequence Tags) were transferred to a nylon membrane (microarray) to investigate differences in expression patterns among genotypes and tissues. The pectoral skeletal muscle transcriptional pattern between broiler and layer chicken lines allowed the identification of 98 differentially expressed transcripts, whose expression were validated by quantitative RT-PCR (Reverse-transcription Polymerase Chain Reaction), and were co-localized in coincident regions with previously mapped QTLs (Quantitative Trait Loci). These transcripts are now preferential candidates to further identify mutations, and/or to develop specific markers to be used in breeding programs for early or indirect selection of superior animals. The same microarray was used to characterize unknown transcripts by expression patterns among five tissues (brain, heart, liver, muscle and skin). This approach allowed to identify tissue-specific and/or preferentially-expressed transcripts, and to characterize 24 unknown transcripts as co-expressed with skeletal musclespecific ones. Finally, the axon guidance molecule RGM-A, identified as skeletal muscle-specific transcript by microarrays, was selected to be functionally analyzed in vivo, to investigate the function of this atypical transcript in the skeletal muscle and to demonstrate the approach efficiency to guide selection of candidate transcripts. The RGM-A expression pattern and the Pax3 phenotype after over-expression in chicken embryos indicated a possible association of this axon guidance with the skeletal muscle formation. The candidate transcripts identified by mycroarray analyses may be useful in animal breeding programs to increase the present gains in chicken growth rate, since additional information is urgently required to surpass current limits of selection gains. The results have also opened a new range of possibilities to promote the functional characterization in vivo of unknown transcripts, having chicken embryos as models.

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Além disso, estudamos os mecanismos de liberação de glutamato com relação a sua dependência de Ca2+ extracelular e a participação de transportadores dependentes e independentes de Na+. Uma vez que, níveis elevados de glutamato estão implicados na ocorrência de estresse oxidativo, investigamos também os efeitos de NGF sobre a liberação de compostos tióis. Para isto, tecidos retinianos íntegros de embrião de galinha (E11) foram incubados com NGF (10, 50, 100 ng/ml) por diferentes períodos de incubação (15, 30, 120). Os níveis extracelulares de glutamato e tióis foram medidos por cromatografia líquida de alta eficácia (CLAE) e ensaio colorimétrico, respectivamente. Observamos que NGF aumenta rapidamente a liberação basal de glutamato e também pode induzir a liberação de tióis em um tempo maior de incubação. De maneira interessante, o aumento dos níveis extracelulares de glutamato induzido por NGF foi revertido em meio sem Ca2+ somente em retinas tratadas por 15 min. Retinas que foram incubadas com NGF por 30 min apresentaram liberação de glutamato independente de Ca2+. Dado que, a liberação de glutamato e tióis induzida por NGF não foi bloqueada por Zn2+ e ocorreu na ausência de Na+, sugerimos o possível envolvimento do sistema independente de Na+, o trocador Xc- em ambos os processos. O aumento de tióis extracelulares induzido por NGF poderia representar um importante mecanismo protetor, possibilitando que os neurônios mantenham seu estado redox durante o desenvolvimento. / Nerve growth factor (NGF) belongs to the neurotrophin family and induces its effects through activation of two distinct receptor types. NGF was first described by Rita Levi-Montalcini and collaborators as an important factor involved in nerve differentiation and survival. Another role for NGF has been established in neurotransmitter release in the hippocampus, developing visual cortex and cerebellar neuron. However, this phenomenon has not been demonstrated in retina to date. We therefore investigated whether NGF can modulate the glutamate release in the retinal tissue at its peak of the neurotrophic activity (E10-E12). In addition this, we aimed to study the mechanisms of this effect about its dependence on extracellular Ca2+ and participation of Na+-dependent and Na+-independent glutamate transporters. Since high levels of glutamate signalization have been implicated in the oxidative stress, we also investigated the effects of NGF on the thiols compounds. We used intact retinal tissue from chicken embryos (E11) incubated with NGF (10, 50, 100 ng/ml) for different periods (15, 30, 45, 60, 120 min). Extracellular glutamate and thiols content was measured by HPLC methods and colorimetric assay, respectively. We found that NGF rapidly enhances the release of basal glutamate and it can induce thiol release in a more prolonged time of incubation, as well. Interestingly, the NGF-induced increase in the extracellular levels of glutamate was blocked by Ca2+-free medium only in retina treated for 15 min. Retina incubated for 30 min showed a non-vesicular NGF-induced glutamate release. Since glutamate and thiol release was not blocked by Zn2+, we suggested the possible involvement of system Xc- in both processes.NGF-induced increase in the extracellular thiol could be an important protective mechanism enabling retinal neurons to maintain their redox status during development.

O embrião equino apresenta um desenvolvimento dinâmico por um longo período entre a fertilização, sua entrada no útero, fixação e posterior invasão trofoblástica após o 36º dia da gestação. Durante todo este período o concepto é sustentado pelo histotrofo endometrial. Estas características dos equídeos favorecem o seu uso com modelo experimental in vivo para estudos nos desenvolvimentos e interações fetal e maternal. Os estudos em endométrio equino tiveram foco em eventos fisiológicos nas diferentes fases do ciclo estral, enquanto os estudos aos primeiros momentos da gestação são escassos. O entendimento do processo de remodelação e morfofisiologia do endométrio após a entrada do embrião no útero não é completamente entendido. O objetivo deste trabalho foi estudar a morfofisiologia endometrial da gestação na égua envolvendo os períodos pós-fixação e peri-implantação, por histologia e microscopia eletrônica de varredura. A característica mais marcante da transformação ou adaptação endometrial à gestação foi o quase total desaparecimento das células ciliadas na superfície epitelial em ambos cornos uterinos. A capacidade de secreção das células microvilosas também passou por mudanças com o avanço gestacional. Muitas células secretórias ingurgitadas e protusas formam a maioria da população do epitélio, onde o histotrofo se acumula, e apresentaram erosões em sua superfície, provavelmente pela secreção apócrina de vesículas. A superfície epitelial apresentou pleomorfismo celular e pseudoestratificação, promovida por intensa hiperplasia celular, acompanhada de adensamento das glândulas endometriais, desde o 21º dia da gestação diminuído após o 36º dia. Linfócitos, provavelmente uNK, foram encontrados no epitélio luminal do endométrio já aos 21 dias de gestação em ambos cornos, gravídico e não gravídico. Foi evidenciado o septamento no epitélio luminal, com sulcos formados aos 35 e 36 dias, tornando-se mais profundos aos 42 dias de gestação. Toda esta evolução e adaptação contínua aconteceram principalmente no corno gravídico acompanhados em menor intensidade pelo corno não gravídico. / The equine embryo plays a dynamic development for a long period between fertilization, its entry into the uterus, fixes and subsequent trophoblastic invasion after day 36 of gestation. Throughout this period, the conceptus is supported by endometrial histotrophe. These equids characteristics favor their use as an in vivo experimental model for studying the changes and interactions in fetal and maternal development. Studies in equine endometrium were focused on physiological events in the different phases of the estrous cycle, while studies in early moments of pregnancy are scant. The process of endometrial remodeling and morphophysiology after the maternal recognition of pregnancy is not completely understood. The objective of this work was to study the endometrial morphophysiology in the mare comprising post-fixation and peri-implantation periods, by histology and scanning electron microscopy. The most striking feature of endometrial transformation or adaptation to pregnancy was the almost total ciliated cells disappearance of the epithelial surface in both uterine horns. In addition, the secretory capacity of microvillus cells underwent changes with gestational age. Many engorged and protruded secretory cells were the majority epithelium population where histotroph accumulates, and showed erosions on its surface, probably by apocrine vesicle secretion. The epithelial surface also showed cellular pleomorphic and pseudostratified epithelium as a result of intense cell hyperplasia. It was accompanied by thickening of the endometrial glands from day 21 of gestation, then decreasing after the 36th day. Lymphocytes, probably uNK, were found in the luminal epithelium of the endometrium since 21st day of gestation in both pregnant and not pregnant horns. Septation was evidenced in the luminal epithelium, with sulci formed at 35 days, becoming deeper at 42 days of pregnancy. All this continued evolution and adaptation occurred mainly in the gravid horn accompanied in less intensity by non-gravid horn.

Nos últimos anos, o emprego da aspiração folicular (OPU) e produção in vitro de embriões (PIVE) têm crescido mundialmente nos rebanhos bovinos. A OPU-PIVE viabiliza a rápida multiplicação do material genético, utilizando tanto a base genética da fêmea como do macho. No entanto, fêmeas de leite Bos taurus apresentam algumas peculiaridades, como menor população de folículos antrais e inferior qualidade oocitária, as quais foram apontadas como fatores responsáveis pela reduzida eficiência da técnica nesses rebanhos. Frente às dificuldades para o estabelecimento de programas de OPU-PIVE eficientes em vacas de leite Bos taurus, três experimentos foram conduzidos envolvendo diferentes tipos de tratamentos superestimulatórios em doadoras de oócitos lactantes e não lactantes. O primeiro estudo teve como objetivo aumentar a PIVE em doadoras da raça Holandesa lactantes e não lactantes submetidas ao tratamento tradicional de superstimulação com doses decrescentes de FSH porcino (FSHp) a cada 12 h, previamente à OPU. Nesse estudo, as doadoras (n = 15 vacas lactantes e n = 15 não lactantes da raça Holandesa) receberam protocolo para sincronização da emergência da onda folicular [protocolo a base de benzoato de estradiol (BE) e progesterona (P4)] e foram submetidas aos tratamentos de superestimulação em um delineamento experimental cross-over. Os outros dois estudos (n = 23 novilhas da raça Holandesa e n = 72 vacas não lactantes da raça Holandesa) foram desenvolvidos para avaliar diferentes diluentes para o FSHp com o objetivo de viabilizar a superestimulação com apenas uma aplicação de FSHp. No geral, os estudos avaliaram o efeito da superestimulação no perfil plasmático de FSH, na proporção de folículos classificados como pequenos (<6mm), médios (6-10mm) ou grandes (>10mm), conforme diâmetro folicular, na PIVE e no estabelecimento gestacional após transferência de embriões. A superestimulação aumentou a proporção de folículos médios, aumentou a competência oocitária e resultou em maior produção de blastocistos por sessão de OPU. A aplicação única de FSHp associado ao diluente de liberação lenta (ácido hialurônico), resultou em semelhante área sob a curva de FSH, semelhante proporção de folículos pequenos, médios e grandes e semelhante PIVE comparado ao tratamento superestimulatório tradicional com doses de FSHp administradas a cada 12h. Independentemente do diluente e da dose de FSHp utilizada, o tratamento superestimulatório resultou em maior produção de blastocistos por sessão de OPU comparado às vacas não tratadas com FSHp. Adicionalmente, semelhante taxa de estabelecimento gestacional foi observada, independentemente do tratamento utilizado na doadora. Portanto, os dados obtidos no presente estudo permitem concluir que independentemente do tipo de tratamento (diluente para FSHp ou dose utilizada de FSHp), a superestimulação previamente ao processo de OPU, aumentou o desenvolvimento de embriões in vitro, número de blastocistos por sessão de OPU e resultando em semelhante taxa de estabelecimento gestacional após transferência de embriões. / In the last years, the use of ovum pick-up (OPU) and in vitro produced embryo (IVEP) technology has worldwide increased in cattle herds. The OPU-IVEP enable a rapid individual multiplication based on the female and male donor genetic. However, Bos taurus dairy females present some peculiarities, as reduced antral follicle population and lower oocyte quality, and these factors have been awarded as responsible to the reduced technique efficiency among these herds. Given the difficulties of establishing OPU-IVEP programs with high efficiency in Bos taurus dairy cows, three studies were carried out, involving different types of superstimulation treatments in lactating and non-lactating Holstein donors. The first study aimed to increase IVEP in lactating and non-lactating Holstein dairy donors submitted to the traditional twice-daily porcine FSH (pFSH) superstimulation treatment prior to the OPU. For this purpose, donors (n = 15 lactating and n = 15 non-lactating Holstein cows) received the follicular wave synchronization protocol [estradiol benzoate (EB) and progesterone (P4) based protocol] and were submitted to superstimulation treatment in a cross-over design. Other two experiments were performed (n = 23 Holstein heifers and n = 72 non-lactating Holstein cows) to evaluate different pFSH diluents to enable superstimulation with a single injection. In general, these studies evaluated the effect of superstimulation on the plasmatic FSH profile, proportion of follicles sizes previous to OPU (small: <6mm; medium: 6-10mm; and large follicles: >10mm), on in vitro embryo production and pregnancy establishment after the produced embryo transfer. The superstimulation treatment improved the proportion of medium sized-follicles, improved oocyte competence and resulted in greater amount of blastocyst per OPU session. A single injection of pFSH combined with a slow release carrier (hyaluronan), resulted in similar FSH area under curve, proportion of follicles sizes previous to OPU and in vitro embryo production compared to the twice-daily superstimulating treatment. Regardless pFSH diluent and dose, superstimulating hormone resulted in greater number of blastocysts per OPU session compared to the non-pFSH treated donors. Additionally, similar pregnancy establishment was observed, regardless embryo donor treatment. Therefore, with the present data, we can conclude that regardless treatment type (pFSH diluent or dose), the superstimulation procedure prior to the OPU, enhanced in vitro embryo development, increased the number of blastocyst per OPU session and resulted in similar pregnancy establishment after embryo transfer.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-08Bitstream added on 2014-08-13T18:00:46Z : No. of bitstreams: 1 000754017_20141006.pdf: 124813 bytes, checksum: 8aa4ba135a60ece4a526b02ffd3a8244 (MD5) / O desempenho reprodutivo bovino pode sofrer interferência de diversos fatores, dentre os quais os relacionados à fisiologia, à patologia, à genética, à nutrição e ao manejo zootécnico-sanitário dos rebanhos, os quais, direta ou indiretamente podem comprometer o embrião, o feto e o trato reprodutivo das fêmeas. O propósito desse estudo foi estabelecer em receptoras de embriões (n=235), se e em qual proporção a resposta aos protocolos de sincronização hormonal, as taxas de prenhez e de perda embrionária foram, negativamente, afetadas devido à constatação de soropositividade para enfermidades reprodutivas, das concentrações plasmáticas de cortisol e de P4, das temperaturas ambiente, retal e umidade relativa do ar. Avaliou-se, ainda, o volume do CL e sua relação com a produção de P4. As taxas de soropositividade para brucelose, leptospirose, diarreia viral bovina (BVD), rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR) e neosporose foram 2,89% (n=7), 54,47% (n=128), 43,83% (n=98), 74,04% (n=174) e 63,82% (n=150), respectivamente. Com respeito às enfermidades, as diferenças entre as taxas de receptoras reagentes e não reagentes mostraram-se estatisticamente significantes (p<0,05) para as associações da leptospirose e da neosporose, com a taxa de aproveitamento e da brucelose e IBR com a taxa de perda embrionária. Nas avaliações sobre cortisol e P4, observou-se que as diferenças entre suas respectivas concentrações plasmáticas não diferiram estatisticamente (p>0,05) entre as receptoras que resultaram prenhas (17,24±7,59; 13,58±6,41) e as não prenhas (17,78±5,54; 14,15±7,16), mas apresentaram correlação positiva (p<0,05) Desse modo, essas concentrações plasmáticas de cortisol observadas, presumivelmente, não interferiram com a capacidade de resposta das receptoras aos protocolos, mas, nos grupos de animais Resp.P. e N.Resp.P. suas concentrações diferiram estatisticamente (p<0,05). Em relação ao VCL e à ... / Beef catle reproductive performance is under the interference of several factors among which those related to physiology , pathology , genetics , nutrition and management of health - livestock herds , which directly or indirectly may affect the embryo , fetus and reproductive tract of females . The purpose of this study was to establish in recipient embryos (n=235), if and in some extent, the response to synchronization protocols hormone, pregnancy and embryonic loss rates were negatively affected due to the finding of reproductive diseases serumpositivity, of cortisol and P4 serum levels and of ambient and rectal temperatures and air relative humidity; it was also evaluated the CL volume and its relation to P4 production. Brucellosis, leptospirosis, bovine viral diarrhea (BVD), infectious bovine rhinotracheitis (IBR) and neosporosis seropositivity rates were 2.89% (n=7), 54.47% (n=128), 43.83% (n=98), 74.04% (n=174) and 63.82% (n=150), respectively. Correlations of leptospirosis and neosporosis with responsive cows to protocols and of brucelosis and IBR with embryonic loss rate were all statistically significant (p<0.05). Pregnant and non- pregnant recipient cows cortisol and P4 respective serum levels (17.24±7.59, 13.58±6.41; 17.78±5.54, 14.15±7.16) did not differ statistically (p>0,05), but were positively correlated (p<0,05), thus this cortisol serum level, presumably, did not interfere with recipient cows responsiveness to the protocols, but in groups Resp.P. and N.Resp.P. their concentrations differed significantly (p<0,05). Regarding the VCL and the concentration of P4 , no difference was found statistically significant (p>0,05) between the mean values. For all cases studied, only correlation was observed between the amount of CL and P4 production (p < 0,05) in group small. In relation to environmental temperatures, rectal and relative humidity values in averages were 30.07°C , 39.38°C and 69.23, respectively. Was ...

Orientador: Steve Sol Witkin / Coorientador: Débora Cristina Damasceno / Coorientador: Iara Moreno Linhares / Banca: Marilza Vieira Cunha Rudge / Banca: Gustavo Tadeu Volpato / Resumo: Não disponível / Abstract: Embryo implantation and formation of a functional placenta are essential steps for the establishment of pregnancy, survival and development of the embryo and the fetus in the intrauterine environment. Among the various factors involved in embryo-fetal development, heat shock proteins (hsp) play a central role. These proteins function as molecular chaperones and have a highly conserved amino acid sequence, being essential for survival of all organisms from bacteria to plants and mammals. The hsp are essential for cellular survival, thus it is understandable that hsp have gained considerable interest in almost every medical field including reproduction, immunology and infectious diseases. Recent studies have reported the involvement of hsp in various stages of embryonic and fetal development, from formation of the male and female gametes until parturition. Further studies are needed to elucidate the mechanisms by which hsp influence reproductive processes. The purpose of this review is to present and discuss the involvement of hsp on embryonic and fetal development / Mestre

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-04Bitstream added on 2015-04-09T12:48:24Z : No. of bitstreams: 1 000815878.pdf: 508389 bytes, checksum: dd0a6086a48e26525e8d4fe0813e8989 (MD5) / As biotecnologias da reprodução são utilizadas como uma alternativa para melhorar a eficiência reprodutiva e acelerar a produção de animais de alto valor zootécnico. Este estudo teve por objetivo avaliar a taxa de concepção de novilhas e vacas mestiças inseminadas com sêmen sexado e convencional (Experimento 1) e a taxa de concepção de novilhas e vacas mestiças submetidas a transferência de embriões produzidos in vivo (TE) e in vitro (PIVE) com sêmen sexado (Experimento 2). No experimento 1, sêmen sexado e convencional foram utilizados na inseminação de vacas (n=50) e novilhas (n=50) após 18-24 horas de observação de cio; no experimento 2 embriões produzidos in vitro (n=50) e in vivo (n=40) foram transferidos para vacas (n=45) e novilhas (n=45). Animais inseminados com sêmen sexado apresentaram taxa de concepção de 44% (11/25) para vacas e 52% (13/25) para novilhas e com sêmen convencional, a taxa de concepção foi de 72% (18/25) para vacas e 68% (17/25) para novilhas. A taxa de concepção obtida pela técnica de produção in vitro de embriões foi de 24% (6/25) para vacas e 28% (7/25) para novilhas e para os embriões produzidos in vivo foi de 45% (9/20) tanto para vacas como para novilhas. A técnica de IA com sêmen sexado apresentou diferença estatística (p<0,05) quando comparada com sêmen convencional, porém a categoria animal não teve diferença estatística (p>0,05) (Experimento 1). Não foi observada diferença estatística (p>0,05) entre a as técnicas de produção in vivo e in vitro de embriões nem entre a categoria animal. Os resultados indicam que o intervalo entre a observação de cio e inseminação de 18-24 horas mostrou-se eficaz na concepção tanto de vacas como de novilhas utilizando sêmen sexado ou convencional, no entanto para se aproximar aos resultados obtidos pelo sêmen convencional há necessidade de mais pesquisas para melhorar a taxa de concepção com sêmen sexado ... / The reproduction biotechnologies are used as an alternative to improve reproductive efficiency and accelerate the production of animals of high performance zootechnical. This study aimed to evaluate the conception rate of heifers and cows crossbred inseminated with sexed semen and conventional (Experiment 1) and conception rate of heifers and cows crossbred receiving the transfer of embryos produced in vivo (TE) and in vitro (PIVE) with sexed semen (Experiment 2). In experiment 1, sexed and conventional semen were used for the insemination of cows (n = 50) and heifers (n = 50) after 18-24 hours of estrous observation; in experiment 2 embryos produced in vivo (n = 40) and in vitro (n = 50) were transferred to cows (n = 45) and heifers (n = 45). Animals inseminated with sexed semen showed conception rate from 44% (11/25) for cows and 52% (13/25) for heifers and with conventional semen, the conception rate was 72% (18/25) for cows and 68% (17/25) for heifers. The conception rate obtained by the technique of in vitro production of embryos was 24% (6/25) for cows and 28% (7/25) for heifers and for embryos produced in vivo was 45% (9/20) both for cows as for heifers. The technique of AI with sexed semen presented statistical difference (p <0.05) when compared with conventional semen, but animal category was not statistically different (p> 0.05) (Experiment 1). No statistical difference (p> 0.05) between the production techniques in vivo and in vitro embryo or between animal category was observed. The results indicate that the interval between estrous observation and insemination 18-24 hours was effective on conception of both cows and heifers using conventional and sexed sêmen, however to approximate of the results obtained by the conventional semen is no need to most research to improve conception rates with sexed semen (Experiment 1). Conception rates with embryos PIVE in heifers and cows recipients were lower than those produced in ...

Orientador: Ciro Moraes Barros / Banca: Fabíola Freitas de Paula Lopes / Banca: Fernanda Alvarenga / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Resumo: A fim de melhor compreender as diferenças entre zebuínos e taurinos em relação à resistência ao estresse térmico (ET), objetivou-se com o presente trabalho: (1) verificar se a adição de IGF-I ao meio de cultivo, na ausência de Soro Fetal Bovino (SFB), seria capaz de manter as taxas de produção embrionária semelhantes àquelas obtidas em meio de cultivo com SFB; (2) verificar se a adição de IGF-I ao meio de cultivo é mais eficiente em diminuir os efeitos deletérios do ET em embriões da raça Holandesa preto e branco (HPB) quando comparados aos da raça Nelore; (3) verificar se o efeito deletério do ET no desenvolvimento embrionário e na taxa de apoptose é mais acentuado em embriões da raça HPB, quando comparado aos da raça Nelore. No experimento 1, oócitos de vacas aneloradas oriundas de matadouro foram maturados, fertilizados com sêmen de touros da raça Nelore e, 10 horas pós inseminação (hpi), os embriões foram distribuídos ao acaso em quatro grupos, de acordo com a composição do meio de cultivo: SFB (5% de SFB + 0 ng/mL de IGF-I; n=165); IGF (0% de SFB + 51 100 ng/mL de IGF-I; n=163); SFB+IGF (5% de SFB + 100 ng/mL de IGF; n=169) e controle (0% de SFB + 0 ng/mL de IGF-I; n=168). Foram avaliadas as taxas de clivagem, mórula, blastocisto e blastocisto eclodido. Nos experimentos 2 e 3, oócitos de vacas Nelore e HPB oriundas de matadouro foram maturados em meio TCM 199, fertilizados com sêmen de touros das raças Nelore (n=6) e HPB (n=6), respectivamente, e cultivados em meio SOF (synthetic oviduct fluid, na ausência de SFB) até o estágio de blastocisto. Dadas 10 hpi, os embriões foram distribuídos ao acaso em quatro grupos: controle (cultivados na ausência de IGF a 39 oC); ET (cultivados na ausência de IGF e expostos a 41 oC, 96 hpi, por 9 horas, retornando a seguir para 39 oC); IGF (cultivados na presença de IGF a 39 oC) e ET/IGF (IGF e ET). No ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Doutor