Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade de ligacao in vitro a bacterias enteropatogenicas (Salmonella sp.) dos extratos nativos e quimiotransformados isolados de farelo de soja. Para obtencao dos extratos foram adotadas cinco estrategias de extracao: estrategia 1 para obtencao de extratos nativos; estrategias 2 e 4 para obtencao de extratos quimiotransformados e estrategias 3 e 5 como controles das estrategias 2 e 4. Na estrategia 1 o farelo de soja foi submetido a extracoes aquosas sequenciais (25 oC e 80 oC; 4 h). Nas estrategias 2 e 3, uma solucao de farelo de soja teve seu pH ajustado para 2,0 e 7,0, respectivamente, e foi submetida a autoclavacao (121 oC, 1 atm, 1 h). Apos filtracao, neutralizacao e centrifugacao o sobrenadante obtido foi submetido a um novo processo de autoclavacao (121 oC, 1 atm, 15 min). Nas estrategias 4 e 5, uma solucao de farelo de soja teve seu pH ajustado para 2,0 e 7,0, respectivamente, e foi submetida a autoclavacao (121 oC, 1 atm, 1 h). Apos filtracao, neutralizacao e centrifugacao o sobrenadante obtido foi submetido a um novo processo de autoclavacao (121 oC, 1 atm, 15 min). A solucao final foi entao tratada com TCA 80% (p/v) e em seguida os polissacarideos foram precipitados com etanol. As extracoes aquosas a 25 e 80 oC (Estrategia 1) nao foram eficientes para a extracao de polissacarideos. As fracoes obtidas a partir desta estrategia sao compostas por alto teor de proteinas (66,0 - 87,2%) e baixos teores de carboidratos (3,6 - 8,2%), com excecao da fracao FS-1, a qual apresentou o maior teor de carboidratos (42,5%), sendo estes oligossacarideos, majoritariamente sacarose. A estrategia 2 originou um polissacarideo quimiotransformado, inedito na natureza, uma ?-galactana, composta principalmente por unidades de -D-Galp-(1 4)-ligadas. Os polimeros extraidos com as estrategias 3 e 5, estrategias controle, sao constituidos de um polissacarideo do tipo pectina com unidades de -D-GalpA-(1 4)-ligadas e cadeias laterais de -LAraf-( 1 5)-ligadas e -D-Galp-(1 4)-ligadas, confirmando que a condicao de extracao utilizada para estrategia 2 e capaz que quimiotransformar a estrutura polissacaridica nativa. As fracoes obtidas da estrategia 4 apresentam alto conteudo de acido galacturonico, galactose, xilose, arabinose e ramnose, o que sugere a presenca de pectinas. Os diversos extratos obtidos das diferentes estrategias de extracao foram avaliados quanto a sua capacidade de ligacao a bacterias enteropatogenicas (Salmonella sp.). Os resultados obtidos foram comparados aos do produto comercial hoje existente (BioMosR). Os extratos nativos (estrategia 1) diferenciaram-se significativamente do produto comercial, apresentando resultados ate 3000% maiores. As fracoes obtidas das estrategias 2 e 3 apresentaram capacidade de ligacao semelhante ao produto comercial, mostrando-se como potenciais substitutos. A capacidade de ligacao evidenciada para soja e dita comumente como resultado da presenca de manose e sua respectiva ligacao as lectinas da bacteria. No entanto os teores de manose determinados no presente trabalho sao baixos (0 - 2,3%) o que pode indicar que as proteinas tambem possam estar envolvidas no processo de ligacao. Estes resultados demonstram o potencial uso biotecnologico do farelo de soja.

Orientadores: Wanderley Dias da Silveira, Vera Nisaka Solferini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T21:46:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moretti_PauloEduardo_D.pdf: 4663485 bytes, checksum: 3034ccc025c8c70de38c5699d75a8a92 (MD5) Previous issue date: 1998 / Doutorado / Genetica / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: João Matins Pizauro Júnior / Coorientador: Cecília Maria Costa do Amaral / Banca: Jesus Aparecido Ferro / Banca: Luís Henrique Souza Guimarães / Resumo: Bactérias do gênero Enterobacter sp. são conhecidas por produzir ácidos orgânicos e solubilizar fosfato inorgânico presente no solo. O objetivo do trabalho foi caracterizar a enzima fosfatase ácida ligada à membrana de Enterobacter sp. isolada de raízes de orquídeas Cyrtopodium paludicolum. A enzima ligada à membrana foi purificada por centrifugação a 100.000 x g durante uma hora a 4ºC. A atividade da p-nitrofenilfosfatase (PNFFásica) foi determinada descontinuamente a 37°C. A bactéria foi inoculada em meio de cultura líquido e a enzima foi estritamente regulada pelo fósforo, atingindo expressão máxima a 5 mM, em pH ótimo aparente de 3,5. Em relação aos inibidores avaliados, verificouse que o cobre apresentou inibição não-competitiva. Já o arsenato, vanadato e fosfato inibiram competitivamente a enzima, demonstrando que são análogos estruturais. A enzima exibiu comportamento "michaeliano" para a hidrólise do PNFF (atividade específica de 30,67 U/mg, Km = 0,55 mM e n = 1). Interações sítio-sítio foram observadas para a hidrólise do ATP (atividade específica de 11,2 U/mg, Km = 0,62 mM e n = 1,8) e para a hidrólise do pirofosfato (atividade específica de 15,64 U/mg, Km = 0,89 mM e n = 2,8). Os valores obtidos pela inativação térmica demonstraram que a enzima manteve-se estável a 45°C e a atividade enzimática diminuiu com o aumento da temperatura. Os resultados sugerem que a produção da fosfatase ácida promove aumento na disponibilidade dos nutrientes para as plantas, solubilizando minerais insolúveis através da produção de enzimas, sendo um dos mecanismos que esses microrganismos utilizam para solubilização de fosfato mineral / Abstract: Bacteria of the genus Enterobacter sp. are known as organic acid producers and are able to solubilize inorganic phosphate which is present in soil. The aim of this work was to characterize the cell-wall associated acid phosphatase of Enterobacter sp. symbionts of plants and were isolated from roots of orchid Cyrtopodium paludicolum. The enzyme was obtained by centrifugation at 100.000 x g, for one hour at 4ºC and the activity from p-nitrophenilphosphatase (PNPPase) was determined at 37°C Culture medium was inoculate d with bacteria and supplemented with phosphorus. Under optimal conditions (5mM phosphorus, pH 3.5) the enzyme was expressed. The activity from p-nitrophenylphosphatase (PNPPase) was determined at 37°C. The enzyme presen ted Michaelis behavior for the hydrolysis of PNPP (specific activity of 30.67 U/mg, Km = 0.55 mM and n = 1). Besides site-site interactions were observed for ATP hydrolysis (specific activity of 11.2 U/mg, Km = 0.62 mM and n = 1.8) and pyrophosphate hydrolysis (specific activity of 15.64 U/mg, Km = 0.89 mM and n = 2.8). It was observed that enzyme activity decreased with increasing temperature. Inhibition studies revealed that copper inhibited the enzyme in a non-competitive manner. In contrast arsenate, and vanadate which are structural analogues of phosphate presented a competitive inhibition. The results suggest that plants expressing acid phosphatase are able to solubilize mineral phosphate and are able to hydrolyse insoluble minerals thereby increasing the availibilty of nutrients which can be used by the plant / Mestre

La calidad microbiológica de los alimentos es esencial para asegurar la disponibilidad de un producto inócuo y de alta calidad para el consumidor. Los alimentos expendidos con alta contaminación; a consecuencia de diversos factores como inadecuada manipulación en las diversas etapas, convierten a los lácteos como el queso fresco, derivados cárnicos como carne molida y frutas rastreras como fresas; en alimentos de alto riesgo, asociados a brotes epidémicos de diarrea. Entre los patógenos que pueden ser transportados por alimentos se encuentran las enterobacterias del género Escherichia, Salmonella, Shiguella entre las mas frecuentes. El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo determinar la frecuencia de enterobacterias en queso fresco, carne molida y fresa en el mercado mayorista La Parada en el periodo Marzo - Junio 2012, determinar el porcentaje de Enterobacteriaceae coliformes y no coliformes; y determinar en las muestras analizadas el alimento en el que predomina Escherichia coli. Se recolectaron en total 50 muestras, 17 de queso fresco, 17 de carne molida y 16 de fresa (Fragaria vesca) en La Parada. Las muestras fueron analizadas según metodología del ICMSF (International Commission on Microbiological Specifications for Foods) y pruebas bioquímicas. En el estudio se encontró que del total de muestras analizadas 66% tienen Escherichia coli, 12% Enterobacter, 4% Shigella y 18% otras enterobacterias. Además, del total de Enterobacteriaceae halladas en las muestras 78% son coliformes y 22% no coliformes. Referente a la prevalencia de Escherichia coli en los alimentos analizados, se halló 82% de Escherichia coli en carne molida. / --- The microbiological quality of food is essential to ensure the availability of an innocuous and high quality product to the consumer. Vended foods with high pollution; as a result of various factors such as improper handling at various stages, converted to dairy like cheese, meat products such as ground beef and creeping fruits like strawberries; in highrisk foods associated with outbreaks of diarrhea. Among the pathogens that may be carried by foods include Enterobacteriaceae of the gender Escherichia, Salmonella, Shigella among the most frequent. El present research had as objective to determine the frequency of Enterobacteriaceae in fresh cheese, ground beef and strawberry in the wholesale market La Parada in the period March - June 2012, determine the percentage of coliforms and no coliforms Enterobacteriaceae; and determine in the analyzed samples the food in that prevail Escherichia coli. Has been colleted a total of 50 samples, 17 of fresh cheese, 17 of ground beef and 16 of strawberry (Fragaria vesca) from La Parada. The samples were analyzed according to the methodology of the ICMSF (International Commission on Microbiological Specifications for Foods) and biochemistry tests. In the study has been found that total of analyzed samples 66% have Escherichia coli, 12% Enterobacter, 4% Shigella and 18% others Enterobacteriaceae. In adittion, of the total of Enterobacteriaceae found in the samples 78% are coliforms and 22% no coliforms. Regarding the prevalence of Escherichia coli in the analyzed samples, has been found 82% de Escherichia coli in ground beef. / Tesis

Orientador: Carlos Alberto de Magalhães Lopes / Resumo: O Enterococcus faecalis é considerado, atualmente, um dos grandes agentes responsáveis pelas infecções hospitalares, onde sua resistência a diversas drogas tem sido motivo de preocupação das autoridades. Neste contexto, o trabalho teve como objetivo determinar a suscetibilidade antimicrobiana e a presença de linhagens mutantes em E. faecalis. Foram obtidas 74 linhagens provenientes de hemoculturas e de secreções purulentas de pacientes internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, no período de 1995 a 2001. Foram analisadas "in vitro", quanto à sua suscetibilidade, a vancomicina e a ciprofloxacina através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), da concentração bactericida mínima (CBM) e a presença de linhagens mutantes através da determinação da taxa de mutação espontânea à ciprofloxacina. Os resultados demonstraram uma maior efetividade da vancomicina, que inibiu 98,6% das linhagens de E. faecalis (CIM 0,06 a 1mg/ml). Entretanto, quando da análise bactericida, o perfil de sensibilidade desta droga apresentou-se elevado, onde 73% das linhagens tiveram a CBM igual ou maior que 64mg/ml. Para a ciprofloxacina, o perfil de sensibilidade ficou distribuído entre as classes de CIM e CBM. Nesse estudo, não foi encontrada a presença de linhagens mutantes. Há probabilidade de algumas linhagens serem tolerantes à vancomicina, sendo necessário então, a realização de testes mais apurados, no sentido de confirmar esta característica. / Abstract: Enterococcus faecalis has been considered one of the major agents of nosocomial infection; its resistance to several drugs has been the concern of health authorities. The objective of this study was to determine antimicrobial susceptibility and the presence of mutant strains in E. faecalis. Seventy-four strains were obtained from hemocultures and purulent secretions of patients hospitalized at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu - UNESP between 1995 and 2001. They were analyzed in vitro for their susceptibility to vancomycin and ciprofloxacin by determining the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC), and the presence of mutant strains through determination of the spontaneous mutation rate to ciprofloxacin. Our results showed vancomycin higher efficacy, inhibiting 98.6% of E. faecalis strains (MIC 0.06 1μg/ml). The bactericidal analysis, however, showed vancomycin high susceptibility profile, with 73% of strains, presenting MBC equal or higher than 64μ/ml. Ciprofloxacin sensitivity profile was found in MIC and MBC classes. No mutant strains were found in this study. It is probable that some strains are resistant to vancomycin, which requires that further tests be performed. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-01Bitstream added on 2014-06-13T18:31:26Z : No. of bitstreams: 1 sandrini_gb_me_jabo.pdf: 333023 bytes, checksum: 103aefb6c00d464c83f63b4a78d2cb4c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Bactérias do gênero Enterobacter sp. são conhecidas por produzir ácidos orgânicos e solubilizar fosfato inorgânico presente no solo. O objetivo do trabalho foi caracterizar a enzima fosfatase ácida ligada à membrana de Enterobacter sp. isolada de raízes de orquídeas Cyrtopodium paludicolum. A enzima ligada à membrana foi purificada por centrifugação a 100.000 x g durante uma hora a 4ºC. A atividade da p-nitrofenilfosfatase (PNFFásica) foi determinada descontinuamente a 37°C. A bactéria foi inoculada em meio de cultura líquido e a enzima foi estritamente regulada pelo fósforo, atingindo expressão máxima a 5 mM, em pH ótimo aparente de 3,5. Em relação aos inibidores avaliados, verificouse que o cobre apresentou inibição não-competitiva. Já o arsenato, vanadato e fosfato inibiram competitivamente a enzima, demonstrando que são análogos estruturais. A enzima exibiu comportamento “michaeliano” para a hidrólise do PNFF (atividade específica de 30,67 U/mg, Km = 0,55 mM e n = 1). Interações sítio-sítio foram observadas para a hidrólise do ATP (atividade específica de 11,2 U/mg, Km = 0,62 mM e n = 1,8) e para a hidrólise do pirofosfato (atividade específica de 15,64 U/mg, Km = 0,89 mM e n = 2,8). Os valores obtidos pela inativação térmica demonstraram que a enzima manteve-se estável a 45°C e a atividade enzimática diminuiu com o aumento da temperatura. Os resultados sugerem que a produção da fosfatase ácida promove aumento na disponibilidade dos nutrientes para as plantas, solubilizando minerais insolúveis através da produção de enzimas, sendo um dos mecanismos que esses microrganismos utilizam para solubilização de fosfato mineral / Bacteria of the genus Enterobacter sp. are known as organic acid producers and are able to solubilize inorganic phosphate which is present in soil. The aim of this work was to characterize the cell-wall associated acid phosphatase of Enterobacter sp. symbionts of plants and were isolated from roots of orchid Cyrtopodium paludicolum. The enzyme was obtained by centrifugation at 100.000 x g, for one hour at 4ºC and the activity from p-nitrophenilphosphatase (PNPPase) was determined at 37°C Culture medium was inoculate d with bacteria and supplemented with phosphorus. Under optimal conditions (5mM phosphorus, pH 3.5) the enzyme was expressed. The activity from p-nitrophenylphosphatase (PNPPase) was determined at 37°C. The enzyme presen ted Michaelis behavior for the hydrolysis of PNPP (specific activity of 30.67 U/mg, Km = 0.55 mM and n = 1). Besides site-site interactions were observed for ATP hydrolysis (specific activity of 11.2 U/mg, Km = 0.62 mM and n = 1.8) and pyrophosphate hydrolysis (specific activity of 15.64 U/mg, Km = 0.89 mM and n = 2.8). It was observed that enzyme activity decreased with increasing temperature. Inhibition studies revealed that copper inhibited the enzyme in a non-competitive manner. In contrast arsenate, and vanadate which are structural analogues of phosphate presented a competitive inhibition. The results suggest that plants expressing acid phosphatase are able to solubilize mineral phosphate and are able to hydrolyse insoluble minerals thereby increasing the availibilty of nutrients which can be used by the plant

Orientador: Celso Luís Marino / Coorientador: Edson Luís Marino / Banca: Leonardo Novaes Rosse / Banca: Izabel Christina Gava de Souza / Resumo: O setor florestal brasileiro, em grande maioria advindos de plantios de eucalipto, é destaque no mercado de florestas plantadas, tornando-se um dos mais relevantes no cenário global, para produção de matéria-prima para diversas indústrias e consequentemente movimentando a economia do país. Assim, é crescente a necessidade de estudos que visem compreender fatores que afetam diretamente a produção da cultura. Dentre estes fatores, destacam-se os ligados diretamente as doenças bióticas, sendo causadas por diferentes patógenos fúngicos e bacterianos. Nos últimos anos observa-se o aumento gradativo de doenças de origem bacteriana, como as causadas por Ralstonia solanacearum, Xanthomonas sp. e Pseudomonas sp. e mais recente a seca de ponteiros causada por bacterioses. Sendo assim, o presente trabalho realizou a diferenciação entre essas, bem como, buscou o entendimento através da caracterização bioquímica, molecular, patogênica e epidemiológica da bacteriose causadora de seca de ponteiros em eucalipto, a fim de servir como base para tomadas de decisão em práticas de manejo para controle e erradicação. Através desse estudo, conclui-se que o sintoma de necrose apical seguida de seca dos ponteiros do eucalipto é causado pelo complexo de enterobactérias Erwinia psidii e Pantoea eucalypti e que esse causa danos e prejuízos consideráveis para mudas e árvores do gênero. / Abstract: The Brazilian forestry sector in its majority coming from plantations of Eucalyptus has been highlighted in a global scenario due to the large production of raw material to various industries and, thus, driving the economy. Thus, studies aimed at understanding factors that directly affect crop production are extremely relevant. Among these factors, those directly linked to biotic diseases are highlighted, being caused by different fungal and bacterial pathogens. In recent years, it is possible to observe the gradual increase of bacterial diseases, such as those caused by Ralstonia solanacearum, Xanthomonas sp. and Pseudomonas sp. and more recently the die back caused by a bacteriosis. Therefore, the present work seeks to differentiate bacterioses, as well as to understand through the biochemical, molecular and pathogenic characterization of the bacteriosis whith causes die back in eucalyptus, in order to serve as a basis for decision-making in management practices for control and eradication of this disease. Throughout this study, it was possible to conclude that the symptom of apical necrosis followed by the die back in eucalyptus is caused by the complex of enterobacteria Erwinia psidii and Pantoea eucalypti and it causes considerable damages and losses to seedlings and trees of this genus. / Mestre

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El uso de antimicrobianos en medicina veterinaria al igual que en medicina humana constituye una herramienta fundamental en la terapia y profilaxis de las enfermedades bacterianas. Esto ha llevado a que bacterias de origen animal adquieran resistencia a varios de los antimicrobianos usados y en consecuencia aparezca el riesgo de diseminar este fenotipo de resistencia a bacterias de origen humano o viceversa. El fenómeno de resistencia a los antimicrobianos es un proceso natural y progresivo que se disemina en la población bacteriana. Se han identificado diferentes elementos que favorecen esta diseminación mediante eventos de transferencia genética. Los integrones son estructuras genéticas móviles con capacidad de integrar la información de uno o varios genes de resistencia a antimicrobianos y facilitan la diseminación horizontal de la resistencia. Debido a que constituyen una fuente muy importante de transmisión y diseminación de la multirresistencia es frecuente encontrar integrones en bacterias que presentan resistencia a antimicrobianos. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de integrones clase 1 y 2 y su asociación estructural con los genes que codifican resistencia a tetraciclina, estreptomicina y trimetoprim en cepas de Salmonella spp y E. coli aisladas desde cerdos y aves faenados en la Región Metropolitana de Chile. Para el desarrollo de este trabajo se utilizaron 35 cepas de Salmonella spp aisladas desde cerdos y 38 cepas aisladas desde aves; en el caso de E. coli, 90 cepas aisladas desde cerdos y 87 cepas aisladas desde aves, cuyo patrón de susceptibilidad a antimicrobianos había sido previamente caracterizado. Se utilizó la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para determinar la presencia de los integrones y de los genes que codifican resistencia a los antimicrobianos descritos anteriormente. El 73.4% de las E. coli aisladas desde cerdos y el 28.7% aisladas desde aves presentaron al menos una de las clases de integrón. En las cepas de Salmonella spp aisladas desde cerdos se determinó que el 45.7% presentó una de las clases de integrón. En cambio, Salmonella spp aisladas desde aves no presentaron integrones. Del total de bacterias que presentaron integrones se determinó que el integrón clase 1 es más frecuente que el clase 2. En el total de cepas con integrón se evidenció la presencia de los genes que codifican la resistencia a trimetoprim (dhrfIa), estreptomicina (aad1a) y tetraciclina ( (tetA(A); tetA(B) ). Sin embargo, en ambas clases de integrones sólo se determinó la asociación estructural con los genes que codifican resistencia a trimetoprim (dhfrIa) y estreptomicina (aad1a). Finalmente, el análisis de los resultados permite evidenciar que la resistencia bacteriana a ciertos antimicrobianos está asociada a la presencia de integrones, elementos genéticos que favorecen la diseminación de este fenómeno de resistencia. Por ello, esta información aporta antecedentes moleculares que demuestran la urgente necesidad de instaurar e implementar programas de monitoreo y control farmacológico en la industria de productos alimenticios de origen animal. De esta forma, se podrá contar con más herramientas que permitan enfrentar correctamente aspectos relacionados con la inocuidad alimentaria, sobre todo cuando las empresas de producción animal y las políticas nacionales tienen como objetivo posicionar a Chile como una potencia agropecuaria

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-13Bitstream added on 2014-06-13T21:05:10Z : No. of bitstreams: 1 okura_mh_dr_jabo.pdf: 1727865 bytes, checksum: 274387943c4d806f73766dff5da4c4f2 (MD5) / No presente trabalho foram analisadas 111 amostras de queijos Minas Frescal. As análises compreenderam a determinação do Número Mais Provável de coliformes a 35ºC e a 45ºC e pesquisa de E. coli. Os resultados mostraram a presença de coliformes a 45ºC acima dos valores permitidos pela legislação em 30% dos queijos com SIF, 70% dos queijos sem SIF e 61,4% dos queijos temperados. Das Enterobacteriaceae isolados nos queijos Minas Frescal verificou-se presença de E. coli, Proteus, Providencia, Serratia, Klebsiella e Enterobacter. Foram isoladas e identificadas 1.243 E. coli e dessas amostras foram separadas aleatoriamente 330 estirpes, para pesquisar a presença do gene stx1, stx2 e eae, a detecção dos genes codificadores de adesinas (pap, afa e sfa) pela reação em cadeia da polimerase e o teste de sensibilidade aos antimicrobianos. Nenhuma estirpe testada identificou presença de stx e eae não havendo E. coli produtoras de toxina e uma estirpe apresentou o gene afa. Para o teste de sensibilidade as E. coli de todos os queijos testados apresentaram índices de resistência à tetraciclina. Neste trabalho, avaliou-se o efeito inibitório do Origanum vulgare e da Petroselinum sativum testando-os sobre coliformes a 35ºC e a 45ºC do queijo produzido com leite cru e dos queijos produzidos com leite cru acrescidos de E. coli (ATCC 25922). Os resultados dessas plantas no leite cru não promoveram efeito inibitório sobre os coliformes a 35ºC, no entanto, promoveram um efeito inibitório significativo nos coliformes a 45ºC. No leite inoculado com E. coli, os resultados apresentaram efeito inibitório para os coliformes a 35ºC e a 45ºC / In the present study, 111 samples of cheese of Fresh “Minas” type were analyzed. The analysis include the determination of the most likely number of coliforms at 35ºC and at 45ºC and research of E. coli. The results showed the presence of coliforms at 45ºC above the values allowed by the legislation in 30% of the cheese with SIF, 70% of the cheese without SIF and 61.4% of the seasoned cheese. Out of the Enterobacteriaceae isolated in the cheese of Fresh “Minas” type and the E. coli, Proteus, Providencia, Serratia, Klebsiella e Enterobacter presence was determinated. 1,234 E. coli were isolated and identified and 330 stocks were randomly separated out of these samples to research the presence of the stx1, stx2 and eae gene, the detection of the adhesine codifier genes (pap, afa and sfa), through the chain reaction of polymerase and the sensibility test to antimicrobials. No tested stock identified the presence of stx and eae, no E. coli toxin productors and a stock showed the afa gene. For the sensibility test, the E. coli of all the tested cheese showed endurance index to tetracycline. In this study, it was evaluated the inhibitory effect of the Origanum vulgare and the Petroselinum sativum by testing them on the coliforms at 35ºC and at 45ºC of the cheesed produced with raw milk and the ones produced with raw milk and E. coli (ATCC 25922). The results of these plants in the raw milk did not provoke inhibitory effect on the coliforms at 35ºC, however, they provoked a significant inhibitory effect in the coliforms at 45ºC. In the milk inoculated with E. coli, the results showed inhibitory effect for the coliforms at 35ºC and at 45ºC

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-13T11:09:12Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 19392 bytes, checksum: 64f0b61e8783f7a7b478eaea99ccf4ab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-13T11:09:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 19392 bytes, checksum: 64f0b61e8783f7a7b478eaea99ccf4ab (MD5) Previous issue date: 2002-02-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A resistência aos antimicrobianos foi estudada em bactérias da microbiota indígena de frangos de corte. O objetivo geral foi determinar os mecanismos de resistência aos antimicrobianos em membros multirresistentes da família Enterobacteriaceae. Quatorze isolados de Enterobacter cloacae e oito de Escherichia coli tiveram seus perfis de resistência investigados. Foi observada ampla variação nos níveis de resistência entre isolados de uma mesma espécie, com base nas concentrações inibitórias mínimas (MIC) de antimicrobianos pertencentes a diferentes classes. A presença de sistemas de efluxo multidrogas foi evidenciada em ambas as espécies, pela diminuição da MIC nas células tratadas com carbonil cianeto m-clorofenilhidrazona (CCCP) e pelas hibridizações com sondas derivadas de genes codificadores de algumas proteínas componentes de sistemas de efluxo multidrogas. O uso da sonda derivada de mexXY resultou em hibridização com DNA plasmidial, enquanto a sonda derivada de mexEF hibridizou com DNA cromossômico. Os sistemas de efluxo MexXY e MexEF são conhecidos em Pseudomonas aeruginosa. Presença de seqüências homólogas às dos genes codificadores das proteínas AcrA e AcrB foi detectada por reação em cadeia de polimerase, PCR. Todos os isolados de E. coli apresentaram resultados positivos para acrAB, enquanto onze isolados de E. cloacae apresentaram amplificação de segmentos com os comprimentos esperados e três apresentaram resultados negativos, isto é, não houve amplificação. O sistema de efluxo AcrAB é conhecido em Escherichia coli e em Salmonella typhimurium. Resistência ao cloranfenicol, dependente de força próton motora, foi relacionada com presença de plasmídios em isolados de E. coli, resultado este obtido de cura e transformação de E. coli selvagem e de transformação de E. coli DH5α com os plasmídios da E. coli original. Todos os isolados resistentes aos β-lactâmicos apresentaram atividade de β- lactamases, exceto um, que apresentou atividade de sistema de efluxo para o β-lactâmico cefaclor. Os resultados demonstram a diversidade de mecanismos de resistência aos antimicrobianos entre isolados da mesma espécie e da mesma fonte, além da presença de sistemas de efluxo de drogas em bactérias da microbiota indígena de frangos. / The resistance to antimicrobial agents in bacteria isolated from poultry carcasses was examined. The main objective was to identify resistance mechanisms in multiresistant members of the Enterobacteriacae family. Fourteen isolates of Enterobacter cloacae and eight of Escherichia coli had their resistance profiles investigated. Wide ranges of Minimum Inhibitory Concentrations, MIC, for individual antimicrobial agents belonging to different classes were observed. In both species, the presence of drug efflux systems was determined by the lowering of MIC for cells treated with carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone, CCCP. DNA hybridization with probes derived from mexXY and mexEF indicated the possible presence of similar genes in some of those isolates. Plasmid DNA hybridized with the mexXY probe and chromossomal DNA hybridized with the mexEF probe. MexXY and MexEF are multidrug efflux systems of Pseudomonas aeruginosa. Amplification of DNA with primers derived from acrAB showed positive results for all of the E.coli isolates. AcrAB is a multidrug efflux system recognized in E. coli and in Salmonella typhimurium. Eleven of the E. cloacae isolates had DNA of the xiiiexpected lengths amplified and three did not show any sign of amplification with either the acrA or acrB primers. There was evidence of a chloranfenicol resistance mechanism dependent of the proton motive force that was related to the the presence of plasmids. The evidence was obtained by plasmid curing and transformation. E. coli DH5α transformed with the referred plasmids also acquired resistance to the same level of the drug. All of the isolates resistant to β-lactam antibiotics presented β-lactamase activity, except for one that showed possible efflux system to cefaclor, as evidenced by the response to CCCP. These results demonstrate diversity in resistance mechanisms to antimicrobial agents among isolates of the same species from the same origin in nature. The presence of drug efflux systems was demonstrated in commensal bacteria of poultry.