Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:39:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 332300.pdf: 2434498 bytes, checksum: a712c4a338d5e3b6ed5eb3f5116323d8 (MD5) Previous issue date: 2014 / As células-tronco mesenquimais (CTM) adultas abrangem uma população de células que pode ser isolada a partir de vários órgãos e tecidos que têm sido sugerida como uma fonte atrativa de células para a engenharia de tecidos em razão da sua multipotencialidade e capacidade de liberação de moléculas ativas. Representam assim uma fonte promissora de células para o tratamento de lesão da medula espinhal, uma desordem neurológica que compromete funções motoras, sensoriais, reflexas e autonômicas. As CTM derivadas da derme humana apresentam a capacidade de se diferenciar em células das linhagens mesenquimal e ectodérmica in vitro. Neste trabalho, investigamos o potencial neural de CTM da derme humana (CTMD). A expressão espontânea de marcadores neurais por CTM tem sido considerada uma demonstração da sua predisposição para originar linhagens neurais. Neste trabalho, demonstramos que as CTMD expressam marcadores neurais in vitro, em meio de cultivo padrão e in vivo, em modelo animal de lesão de medula espinhal. Uma vez que a combinação do fator de crescimento epidérmico (EGF) e do fator de crescimento do fibroblasto tipo 2 (FGF2) é mitogênica e promove o comprometimento neuronal de diversas populações de células-tronco, avaliamos seus efeitos em estimular o potencial neuronal das CTMD in vitro. O tratamento com a combinação de EGF e FGF2, promoveu um aumento na proporção de células que expressam marcadores de pluripotência, marcadores neurais precoces e marcadores neuronais e gliais, em detrimento da expressão de marcadores mesenquimais. Além disso as CTMD responderam a estímulos neurogênicos, aumentando a expressão de proteínas neuronais específicas, e reduzindo a expressão de marcadores neurais precoces e marcadores gliais. Ademais, as CTMD promovem a recuperação funcional locomotoraparcial em ratos com lesão da medula espinhal, e sobrevivem no tecido medular. Portanto, as CTMD apresentam potencial neural in vitro e in vivo, que pode ser explorado em terapia para a regeneração da lesão medular, e possivelmente como complemento a outras terapias.<br> / Abstract : Adult mesenchymal stem cells (MSCs) correspond to a cell population isolated from several organ and tissues that represent an attractive source of cells for tissue engineering due to their multipotentiality and ability to release active molecules. MSCs derived from human dermis (DMSCs) are able to differentiate into mesenchymal and ectodermal cell lineages in vitro. In this study, we have investigated the neural potential of DMSCs. The expression of neural markers by MSCs has been considered a demonstration of their predisposition to differentiate towards neural lineages. Here we show that human DMSCs express in vitro and in vivo neural markers. Since the combination of epidermal growth factor (EGF) and fibroblast growth factor type 2 (FGF2) promotes the neural commitment of stem cells, we examined its effects in the neuronal potential of DMSCs. The treatment with the combination of EGF and FGF2 increased the proportion of cells positives for pluripotency and neural (neuronal and glial) markers and reduced those expressing the smooth muscle marker. Moreover, DMSCs were able to respond to neurogenic stimulation expressing neuronal specific proteins, at the expense of early neural and glial markers. Furthermore, DMSCs are able to survive and integrate into the spinal tissue partially recovering spinal cord injured rats. Therefore, DMSCs represent an attractive source of cells for therapy of spinal cord injuries and possibly also for other therapies.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:06:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334505.pdf: 7755473 bytes, checksum: 73d900cb90e365173681d8a2697c5eaf (MD5) Previous issue date: 2015 / Lesões medulares traumáticas resultam em um dano neurológico que, geralmente, resulta em dor neuropática, a qual impacta negativamente a qualidade de vida dos lesados medulares. As endotelinas são peptídeos que exercem seus efeitos através dos receptores ETA (ETAR) e ETB (ETBR) e, contribuem para alterações sensoriais associadas aos processos inflamatórios e dores neuropáticas. No entanto, o envolvimento desses receptores na dor neuropática após trauma medular precisa ser elucidado. Ratos Wistar machos foram submetidos a lesão medular traumática no nível torácico T10 por compressão através de catéter Fogarty-2F. As avaliações comportamentais e coletas de amostras foram realizadas em 2, 7, 14, 21 e 28 dias após o procedimento cirúrgico. Os níveis de expressão dos receptores ETA e ETB foram mensurados através de western blot e imunohistoquímica, e seus correpondentes níveis de RNAm avaliados por PCR-em tempo real. Além de avaliações funcionais pela escala BBB e comportamentais através de filamentos de von Frey e avaliação de sensibilidade térmica por aparato de Hargreave s nas patas anteriores e posteriores . No dia 28 o escore BBB destes animais foi de 4 pontos, que se caracteriza por movimento discreto das três articulações  quadril, joelho e tornozelo. No entanto, os animais lesados medulares tiveram um aumento significativo em comparação ao grupo falso-operado nas respostas ao estímulo mecânico das patas posteriores, tanto com o filamento de 4 gramas quanto com o de 15 gramas. Essas alterações de sensibilidade foram significantes entre os dia 14 e 28 após o procedimento cirúrgico. O dano medular resultou no desenvolvimento de hiperalgesia nos membros posteriores a partir do 14o dia após a lesão medular, redução na sensibilidade térmica a partir do 7o dia, um aumento nos níveis de RNAm para ETAR e ETBR, além de um aumento na expressão da proteína do receptor ETA na medula espinhal. Observou-se, também, um aumento da expresão de ETAR na substância cinzenta da medula espinhal de animais lesados medulares no 14 dias após o trauma. O tratamento no 21o dia após a lesão medular com antagonista peptídico de ETAR, BQ-123 (40 e 90 pmol, i.t.) e tratamento com o antagonista dual para ETAR e ETBR, bosentan (30 and 100 mg/kg, oralmente) foram capazes de reduzir significativamente a hiperalgesia por algumas horas após o tratamento, no entanto o tratamento com o antagonista seletivo para ETBR, BQ-788 (20 e 90 pmol, i.t), foi ineficaz na redução da hiperalgesia. Assim, esse estudo demonstra que há uma participação de ETAR e ETBR, na dor neuropática decorrente do trauma medular, em especial do ETAR e estes resultadados podem contribuir para o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento desta importante comorbidade dos lesados medulares.<br> / Abstract : Traumatic spinal cord injury (SCI) is a devastating neurologic disorder that often inflicts neuropathic pain, which further impacts negatively on the patient s quality of life. Endothelin peptides, which exert their effects via endothelin A (ETAR) and endothelin B (ETBR) receptors, can contribute to sensory changes associated with inflammatory and neuropathic pain, but their role in nociception following SCI is unknown. At different time points (2, 7, 14, 21 and 28 d) after subjecting male Wistar rats to surgery for compression-induced T10 level SCI, the spinal cord levels of ETAR and ETBR were assessed by Western blot and immunohistochemistry, and the corresponding mRNAs by real-time PCR, alongside recordings of locomotor behaviour by BBB scale and behavioral responses to mechanical and thermal stimulation of the forepaws and hind paws with von Frey hairs. Animal subjected to SCI ended the 28th time-period with a score of 4 within the BBB scale, which represents slight movements of the hip, knee and ankle. SCI was associated with development of hind paw mechanical hyperalgesia from day 14 onwards and heat hyperalgesia from day 7 to day 21, and up-regulation of ETAR and ETBR mRNA in the spinal cord and of ETAR protein in the spinal cord. SCI increased ETAR protein expression in spinal grey matter on the 14th day after injury. Treatment on day 21 after surgery with the ETAR selective antagonist BQ-123 (40 and 90 pmol, i.t.) or the dual ETAR/ETBR antagonist bosentan (30 and 100 mg/kg, orally) transiently reduced SCI-induced mechanical hyperalgesia, but the ETBR antagonist BQ-788 (20 and 90 pmol, i.t.) was ineffective. Conclusions. Altogether, these data show that SCI upregulates ETAR expression in the spinal cord, which appears to contribute to the hind paw mechanical hyperalgesia associated with this condition. Therapies directed towards blockade of spinal ETAR may hold potential to limit SCI-induced neuropathic pain.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:07:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334506.pdf: 6602954 bytes, checksum: 2edbe2671a45d091e8252ddc6bd67d9e (MD5) Previous issue date: 2015 / A dor crônica está presente na maioria dos pacientes após a lesão medular traumática (LMT). As respostas inflamatórias após a lesão medular estão relacionadas com o desenvolvimento da dor neuropática através da ativação de um vasto número de mediadores e vias de sinalização. A lipoxina A4 (LXA4), um eicosanoide com propriedades anti-inflamatórias e pró-resolução, exerce ações neuroprotetoras e anti-hiperalgésicas. Entretanto, seu papel na dor neuropática induzida pela lesão medular ainda não foi elucidado. Sob completa anestesia, ratos Wistar e camundongos CD1 machos receberam uma hemissecção medular na porção esquerda do segmento T10. Em 4 e 24 horas após a lesão, os animais foram tratados por via intratecal com LXA4 (150 ou 300 pmol) ou veículo. Em outro protocolo, foi realizado o silenciamento gênico do receptor de lipoxina A4, ALX/FPR2, através do tratamento por via intratecal com ALX/FPR2 RNAsi. A sensibilidade mecânica das patas posteriores foi avaliada após a lesão medular através da frequência de resposta ao filamento de von Frey de 15 g em ratos e por uma sequência de filamentos (método up-down) em camundongos. No 7° dia após a cirurgia, a medula espinhal foi coletada e processada para análise do teor endógeno de LXA4 e também dos níveis de expressão do receptor ALX/FPR2, marcadores gliais e citocinas, por RT-PCR. Culturas de microglia também foram preparadas a partir do córtex cerebral de camundongos para avaliação dos efeitos diretos da LXA4 na expressão de citocinas e ativação de proteínas quinases (MAPK) nestas células. Todos os procedimentos foram aprovados pelos comitês de ética locais. Os animais falso-operados apresentaram sensibilidade mecânica normal após a cirurgia. Houve aumento da resposta ao estímulo de von Frey em ambas as patas posteriores de ratos a partir do dia 7 e até o dia 28 após a cirurgia. Os camundongos apresentaram aumento de sensibilidade da pata posterior ipsilateral a partir do 14° dia e da pata contralateral a partir do 7° dia, a qual durou pelos 35 dias de observação. Houve aumento da expressão do RNAm do receptor ALX/FPR2 no 7° dia após a lesão em ambas as espécies. O tratamento intratecal com LXA4 reduziu a hiperalgesia mecânica, em comparação ao grupo tratado com veículo, em ratos e camundongos, mas o silenciamento gênico do receptor em camundongos bloqueou este efeito. A LXA4 também reduziu os níveis das citocinas pró-inflamatórias IL-1ß, IL-6 e TNF-a, e aumentou o nível da citocina anti-inflamatória IL-10, na medula espinhal de ratos. Finalmente, a LXA4 reduziu a ativação de p38 e a liberação de TNF-a induzidas por IFN-? em culturas de microglia. Em conjunto, nossos resultados sugerem que a LXA4 pode reduzir efetivamente a dor neuropática após a lesão medular em roedores, pela inibição da neuroinflamação e das respostas da microglia na medula espinhal. Assim, a LXA4 e seus análogos poderiam ser utilizados para prevenção da dor neuropática e da neuroinflamação induzidas pela lesão medular.<br> / Abstract : It is well known that after traumatic spinal cord injury (SCI) majority of patients develop chronic pain syndromes. Spinal inflammatory responses to SCI have been implicated in the onset of neuropathic pain via activation of a broad spectrum of factors and signaling pathways. Lipoxin A4 (LXA4), an eicosanoid endowed with anti-inflammatory and pro-resolution properties, exerts neuroprotective and antihyperalgesic effects. However, its role in SCI-induced neuropathic pain still remains to be elucidated. Spinal cord hemisection at the left side of T10 was carried out in anesthetized adult male Wistar rats and CD1 mice. At 4 and 24 h after SCI, the animals received two intrathecal LXA4 (150 pmol or 300 pmol) or vehicle injections. In a different protocol, animals also received an intrathecal treatment of ALX/FPR2 siRNA for receptor gene silencing. Mechanical sensitivity of hind paws was evaluated after SCI using a 15g von Frey hair in rats or with a series of von Frey hairs in mice (up-down method). On the 7th day after surgery the spinal cord was collected and processed to evaluate the levels of endogenous LXA4 as well as the transcriptional expression level by RT-PCR of the ALX/FPR2 receptor, cytokines and glial markers. Microglia cultures were also prepared from mice cerebral cortexes to assess the direct effects of LXA4 on microglial cytokine expression and MAPK activation. The local ethics committees approved all procedures. Shamoperated animals showed normal mechanical responsiveness after the surgery. The mechanical responsiveness to von Frey hair was increased on both rat hind paws from day 7 until day 28 after SCI. Mice started presenting increased sensitivity on the ipsilateral paw on day 14 and in the contralateral paw on day 7, until the 35th days of observation. The ALX/FPR2 receptor mRNA was significantly increased in both species on the 7th day after SCI. Intrathecal treatment of LXA4 reduced SCIinduced mechanical hypersensitivity when compared to vehicle control group in both rats and mice, but the gene silencing with the respective siRNA in mice for the receptor blocked this effect. The LXA4 treatment also reduced the levels of the pro-inflammatory cytokines IL-1ß, IL-6 and TNF-a and increased the levels of the anti-inflammatory cytokine IL-10,on rat spinal cord. Finally, LXA4 reduced the IFN-?-induced p38 activation and TNF-a release in microglia cultures. Taken together, our results suggest that LXA4 can effectively reduce neuropathic pain in rodents after SCI, by inhibiting SCI-induced neuroinflammation in the spinal cord and microglial responses. Thus, LXA4 and its analogs may be used to prevent SCI-induced neuropathic pain and neuroinflammation.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Enfermagem, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-13T04:09:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334521.pdf: 2490829 bytes, checksum: 66123a26b89736099f00c7fb27c50342 (MD5) Previous issue date: 2015 / O estudo teve como objetivo compreender o quotidiano e o ritmo de viver das pessoas com lesão medular e suas famílias, com suas potências e seus limites para a adesão à reabilitação, colaborando para a Promoção da Saúde. Trata-se de um estudo qualitativo, interpretativo, realizado em um Centro Especializado de Reabilitação, no Sul do Brasil, referência no atendimento de pessoas com deficiência física e intelectual. Foram participantes deste estudo 12 pessoas com lesão medular e 09 familiares, totalizando 21 participantes. Os dados foram coletados entre os meses de dezembro de 2013 e março de 2014, a partir de 21 entrevistas individuais e 02 coletivas, adotando-se, para estas, a estratégia de oficinas. As entrevistas foram realizadas a partir de um roteiro semiestruturado distinto para cada grupo de participantes da pesquisa. As oficinas foram realizadas em um encontro com as pessoas com lesão medular e outro encontro com suas famílias. Para o agrupamento e organização dos dados, utilizou-se o software Atlas.ti. A análise dos dados envolveu: análise preliminar, ordenação, ligações-chave, codificação e categorização, guiada pelo olhar da Sociologia Compreensiva e do Quotidiano. Esta pesquisa resultou em quatro manuscritos: um relacionado à revisão da literatura e três referentes à interpretação dos dados empíricos. No primeiro, o cuidado de Enfermagem no quotidiano da reabilitação de pessoas com lesão medular, buscou-se identificar e analisar o conhecimento produzido nas publicações de pesquisas em Enfermagem sobre o cuidado de Enfermagem de reabilitação às pessoas com lesão medular, no período de 2003 a 2013. No segundo manuscrito, o quotidiano e o ritmo de vida da pessoa com lesão medular e sua família, descreve-se o quotidiano dessas pessoas, caracterizado pelo antes e o depois da lesão medular, suas dificuldades na aceitação e adaptação ao novo ritmo de vida, marcado pela dor, alteração do sono, dor, limitação, dependência, distúrbio da autoimagem, alteração da resposta sexual. A família também se desestrutura pelo desgaste físico (dependência/sobrecarga), emocional (desconhecimento, desordem emocional e sexual) e socioeconômica (afastamento do trabalho e lazer). No terceiro manuscrito, limites na adesão à reabilitação no quotidiano de pessoas com lesão medular e suas famílias: implicações para a promoção da saúde, discute-se o descuidado dos profissionais da saúde nos três níveis de atenção à saúde, envolvendo: falta de orientação, desconhecimento das políticas de saúde, falta de encaminhamento aos Centros Especializados de Reabilitação e o despreparo dos profissionais no cuidado às pessoas com lesão medular e suas famílias, além da falta de acessibilidade, o auto preconceito e o preconceito social. No quarto manuscrito, potências na adesão à reabilitação de pessoas com lesão medular e suas famílias, analisam-se os aspectos que contribuem para a adesão à reabilitação, como: o acolhimento, traduzido pela dedicação no cuidado, o carinho, o respeito e a alegria no cuidar que mobiliza as pessoas pelas suas potencialidades; a família, que se aproxima pelo cuidado e pelo diálogo; a própria reabilitação, que é meio de retorno à vida e o credo religioso que os fortalece na caminhada. Consideramos que a reabilitação é, além de uma especialidade, um modelo de cuidado que contribui para o enriquecimento de outras práticas de cuidado. Ressalta-se a necessidade da integração entre profissionais de saúde, entre Instituições de saúde e a qualificação dos profissionais da saúde. Faz-se necessária uma análise individual de cada determinante que envolve a temática para que possamos, efetivamente, minimizar as barreiras atitudinais e arquitetônicas que influenciam negativamente na adesão à reabilitação das pessoas com lesão medular e suas famílias. A construção deste conhecimento em Tese indica que compreender o quotidiano e o ritmo de vida das pessoas com lesão medular e de suas famílias, com suas potências e limites, possibilita um cuidado para melhor adesão à reabilitação, colaborando para a Promoção da Saúde.<br> / Abstract : The study had as objective understand the everyday life and the pace of life of people with spinal cord injuries and their families, with their powers and their limits for the accession to the rehabilitation, collaborating for the Promotion of Health.It is a qualitative study, interpretative, made in a Specialized Center for Rehabilitation, in the South of Brazil, reference in the care of people with physical disabilities and intellectual. The participants in this study were 12 persons with spinal cord injury and 09 families, totaling 21 participants. The data were collected between the months of December 2013 and March 2014, from 21 individual interviews and 02 collective, adopting, for these, the strategy workshops.The interviews were conducted from a different semistructured script for each group of participants. The workshops were carried out in a meeting with people with spinal cord injury and another meeting with their families. For the grouping and organization of the data, we used the software Atlas.ti. The analysis of the data involved: preliminary analysis, sorting, key links, coding and categorization, guided by the gaze of Comprehensive Sociology and Everyday Life.This research resulted in four manuscripts: one related to the review of the literature and three relating to the interpretation of empirical data. In the first, the Nursing care on a daily basis of the rehabilitation of people with spinal cord injury, we attempted to identify and analyze the knowledge produced in the publications of Nursing research on the Nursing care of rehabilitation for people with spinal cord injury, in the period of 2003 to 2013.The second manuscript, everyday life and the pace of life of the person with spinal cord injury and their families, describes the daily life of these people, characterized by before and after spinal cord injury, their difficulties in acceptance and adaptation to the new pace of life, marked by pain, sleep disorders, pain, limitation, dependence, disorder of self-image, change of sexual response.The family is also destructured by physical wear (dependence/overload), emotional (ignorance, emotional confusion and sexual) and socioeconomic status (being away from work and leisure). In the third manuscript, limits on membership in the rehabilitation on the daily lives of people with spinal cord injuries and their families: implications for the promotion of health, discusses the careless of health professionals in the three levels of health care, involving:lack of guidance, ignorance about health politcs, lack of guidin to Specialized Centers of Rehabilitation and the low knowledge of professionals in the care for people with spinal cord injuries and their families, in addition to the lack of accessibility, the self prejudice and social injury.In the fourth manuscript, potentials on membership in the rehabilitation of people with spinal cord injuries and their families, ii is analyzed the aspects that contribute to the membership of the rehabilitation, such as: the reception, translated by dedication in caring, affection, respect and joy in caring for that mobilizes the people by their potentials; the family, who approachesfor the care and by the dialog; the own rehabilitation, which is a way of return to life and the religious belief that strengthens the walk. We believe that the rehabilitation is, in addition to a skill, a model of care that contributes to the enrichment of other care practices. This emphasizes the need for integration between health professionals, between health care institutions and the qualification of health professionals.It is necessary an individual analysis of each determinant that involves the topic so that we can effectively minimize the attitudinal and architectonical barriers that influence negatively on accession to the rehabilitation of people with spinal cord injuries and their families.The construction of this knowledge in Theory indicates that understand the everyday life and the pace of life of people with spinal cord injuries and their families, with their potencials and limits, enables a care for better adherence to rehabilitation, collaborating for the Promotion of Health.<br>

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-26T09:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 302615.pdf: 1176972 bytes, checksum: 7817651b85e1920291ab9691ad63d7a3 (MD5) / A medula espinhal é conhecida por ser um centro de controle ortodrômico (nocicepção), bem como antidrômico (vasodilatação) na via nociceptiva. Os receptores de histamina participam da transmissão nociceptiva na medula espinhal, assim, é concebível que a histamina possa também desempenhar um papel no controle medular da vasodilatação periférica. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da via histaminérgica medular na incapacitação, no edema articular e na migração celular induzida pela injeção da carragenina na articulação do joelhos de ratos. Os animais receberam todos os fármacos por via intratecal 20 min antes da injeção intraarticular de carragenina (50 mg). A incapacitação articular foi medida pela contagem do tempo de elevação da pata (TEP), durante 1 min de caminhada forçada a cada hora, num total de 6 horas. O edema foi avaliado pela mensuração do diâmetro articular (DA). Após 6 h, o líquido sinovial foi coletado para a avaliação do infiltrado de leucócitos. A histamina foi hiponociceptiva e pró-edematogenica, diminuindo dessa forma o TEP (20 nmol) e aumentando o DA (0,002 nmol). Da mesma forma, 2-PEA diminuiu o TEP (1 nmol), e aumentou o DA (0,001 nmol). Cetirizina aumentou o TEP (0,126 pmol), e diminuiu do edema (12,6 nmol). O dimaprit diminuiu incapacitação, mas aumentou edema (18 pmol). Da mesma forma, ranitidina aumentou a incapacitação e diminuiu o edema (38 pmol). Immepip diminuiu a incapacitação (8 nmol), mas aumentou o edema (32 nmol). A tioperamida foi hipernociceptiva (4 nmol), e pró-edematogenica (0,04 nmol). A morfina inibiu incapacitação e edema (5, 45 nmol). A co-administração de morfina (0,5 nmol) com cetirizina (12,6 nmol) e immepip (16 pmol) causou hiponocicepção. Cetirizina e thioperamide aumentou o conteúdo sinovial leucócitos. A histamina pode atuar na medula espinhal por receptores H1 e H3 causando hiponocicepção, mas sua ação também pode aumentar a inflamação periférica. / Spinal cord is known to be a center that controls ortodromic (nociception) as well as antidromic traffic (vasodilation) in the nociceptive pathway. Histamine receptors are known to participate in the spinal cord nociceptive transmission, thus it is conceivable that histamine may also play a role in the spinal cord control on the peripheral vasodilation. The aim of this study was evaluate the role of spinal cord histamine in the articular incapacitation, edema and cell migration induced by carrageenan injection into rat knee-joints. The animals received intrathecal injection with drugs 20 min before knee-joint carrageenan injection (50 ìg). Articular incapacitation was measured by counting the paw elevation time, during 1-min periods of forced walk hourly. Edema was accessed by the metering of the articular diameter. After 6 h, synovial fluid was collected for the evaluation of leukocyte infiltration. Histamine decreased the incapacitation (20 nmol), while increased the edema (0.002 nmol). Similarly, 2-PEA decreased the incapacitation (1 nmol), and increased the edema (0.001 nmol). Cetirizine increased the incapacitation (0.126 pmol), and decreased edema (12,6 nmol). Dimaprit decreased incapacitation, but increased edema (18 pmol). Similarly, Ranitidine increased incapacitation and decreased edema (38 pmol). Immepip decreased the incapacitation (8 nmol), but increased the edema (32 nmol). Thioperamide increased the incapacitation (4 nmol), and the edema (0.04 nmol). Morphine inhibited incapacitation and edema (5; 45 nmol). The coadministration of morphine (0.5 nmol) with cetirizine (12,6 nmol) and immepip (16 pmol) decreased incapacitation. Cetirizine and thioperamide increased the synovial leukocyte content. Histamine may act in the spinal cord by H1 and H3 receptors to cause hyponociception, but this action may also increase peripheral inflammation.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-26T12:04:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 302042.pdf: 693987 bytes, checksum: 823b44b5d3f07e3feb6ab9f9b1c8df9d (MD5) / Glutamato, o principal neurotransmissor central excitatório, induz excitotoxicidade neuronal pela ativação de receptores NMDA e AMPA, promovendo o influxo de cálcio nos neurônios. Estudos recentes do nosso grupo demonstram que as frações e sub-frações isoladas da Croton celtidifolius possuem propriedades anti-inflamatórias, antioxidantes e antinociceptivas. Assim, utilizando um modelo in vitro de excitotoxicidade induzida por glutamato (Glu) e in vivo de neurotoxicidade decorrente da lesão da medula espinhal de ratos Wistar adultos, avaliou-se o possível efeito neuroprotetor da fração rica (FRP) em proantocianidinas isolada da Croton celtidifolius. Glu induziu morte de células do gânglio da raiz dorsal (GRD), de forma dependente da concentração e do tempo de exposição. O pós-tratamento com a FRP (1 - 100 µg/ml) inibiu em até 37% a morte celular induzida por Glu (1 mM). Já o co-tratamento, foi capaz de reduzir a morte celular em 27%. A exposição das células ao Glu (0,01, 0,1 e 1 mM) aumentou os níveis da enzima lactato desidrogenase de 6,5 % (células controle) para 37, 49 e 63 %, respectivamente, indicativo de alteração na permeabilidade da membrana celular. Esta alteração foi atenuada pelo tratamento das células com a FRP (100 µg/mL). Ademais, o insulto glutamatérgico induziu a geração de espécies reativas de oxigênio, a qual foi inibida pelo tratamento das células do GRD com FRP (100 µg/ml). Além disso, o efeito neuroprotetor desencadeado pela FRP parece ser mediado em parte pela inibição de receptores glutamatérgicos do tipo NMDA, mas não os metabotrópicos uma vez que a perda da viabilidade celular decorrentes da exposição das células ao agonista NMDA, mas não ao agonista metabotrópico, foi revertida pela FRP. Nos estudos in vivo, animais submetidos a lesão medular e tratados com a FRP na dose de 10 mg/kg por via intraperitoneal, durante 5 dias consecutivos, apresentaram uma melhora significante na performance locomotora e na força de preensão, quando comparado aos animais lesados tratados com veículo. Em conjunto, estes resultados fornecem a primeira evidência de que a FRP atenua a morte celular por necrose e por apoptose, bem como a produção de EROs induzida por Glu, inibe a morte celular induzida por peróxido de hidrogênio e pelo agonista NMDA. A FRP também foi capaz de promover uma melhora na atividade locomotora e na força de preensão de animais submetidos à lesão traumática da medula espinhal, reforçando a hipótese de que polifenóis podem ser ferramentas terapêuticas promissoras como agentes neuroprotetores. / Glutamate, the major central excitatory neurotransmitter, induces neuronal excitotoxicity by activation of NMDA and AMPA receptors and stimulating the influx of calcium into neurons. Recently, our group showed that fractions and subfractions isolated from Croton celtidifolius have antiinflammatory, antioxidant and antinociceptive properties. Thus, using an in vitro model of excitotoxicity induced by glutamate (Glu) and in vivo neurotoxicity caused by spinal cord injury (SCI) in adult Wistar Rats, we evaluated the possible neuroprotective effect of a proanthocyanidin-rich fraction (PRF) isolated from the bark of Croton celtidifolius. Glu induced cell death of dorsal root ganglion (DRG) in a manner concentration-dependent and the exposure time. The post-treatment with FRP (from 1 to 100 ìg / mL) inhibited the cell death induced by Glu (1 mM) in 37%. Since co-treatment, was able to reduce cell death in 27%. The exposure of cells to glu (0.001, 0.1 and 1 mM) increased the levels of the enzyme lactate deydrogenase from 6.5% (control cells) to 37, 49 and 63% respectively, indicating changes in cell membrane permeability. This change was attenuated by treatment of cells with the PRF (100 ìg / mL). Moreover, the glutamatergic insult induced generation of reactive oxygen species, which was inhibited by treatment of cells with FRP (100 ìg / mL). Moreover, the neuroprotective effect triggered by FRP seems to be mediated in part by inhibition of NMDA-type glutamate receptors, but not metabotropic receptors, since the loss of cell viability after exposure of cells to NMDA agonist, but not a metabotropic agonist was reversed by FRP. The in vivo studies, animals subjected to SCI and treated with PRF at a dose of 10 mg / kg by i.p. route for 5 consecutive days showed a significant improvement in locomotor performance and grip force when compared to injured animals treated with vehicle. Taken together, these results provide the first evidence that PRF attenuated the cell death by apoptosis and the production of ROS induced by Glu, also inhibits cell death induced by hydrogen peroxide and the NMDA agonist receptors. The FRP was able to promote an improvement in locomotor activity and grip strength of animals subjected to traumatic spinal cord injury (SCI), reinforcing the hypothesis that polyphenols are promising therapeutic tools such as neuroprotective agents.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2013-07-16T04:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 305252.pdf: 1400650 bytes, checksum: 83e4a007927147a9402a26f64b85b606 (MD5) / A utilização de materiais hidrogéis poliméricos visando ancorar células e promover a regeneração neuronal é uma abordagem atual e promissora. Neste sentido, o estudo da viabilidade e interação de células neuronais nesses biomateriais é de grande importância para engenharia de tecido neuronal. A interação das células com o material arcabouço pode definir o sucesso da formação do novo tecido. Neste trabalho foram avaliadas a viabilidade e a interação de células de gânglios da raiz dorsal de ratos Wistar em arcabouço hidrogel baseado em celulose bacteriana. Utilizou-se hidrogel de celulose bacteriana modificado com fibronectina e poli-L-lisina/laminina como arcabouço para o cultivo celular com o objetivo de avaliar a viabilidade e interação celular in vitro. Os resultados evidenciaram que houve interação entre as células e o arcabouço e que as mesmas se mantiveram viáveis e não apresentaram citotoxicidade para células neuronais, sendo que o hidrogel de superfície modificada composto de CB e poli-L-lisina/laminina manteve o maior número de células viáveis. Também, a adsorção de fibronectina e poli-L-lisina/lamina aumentou a adesão e a interação celular ao biomaterial e o tratamento enzimático hidrogel composto de CB-PL (CB-PL injetável) não apresentou citotoxicidade. No entanto ocorreu uma diminuição na viabilidade celular quando comparado ao biomaterial CB-PL sem tratamento enzimático. Portanto, o hidrogel de celulose bacteriana modificada com poli-L-lisina/laminina se apresenta como um biomaterial promissor para promover a regeneração de tecidos neurais uma vez que os mesmos potencializam a adesão celular e aumentam a sobrevida neuronal. / The use of polymeric hydrogel materials to anchor cells and to promote the neuronal regeneration is a promising current approach. In this way, the study of viability and interaction neuronal cells in these biomaterials is of great importance for neuronal tissue engineering. The cell interactions with the material scaffold can define the success of the new tissue formation. In this work was assessed the viability and interaction of ganglion cells of Wistar rat dorsal roots, hydrogel scaffold based in bacterial cellulose. It was used modified bacterial cellulose with fibronectin and poli-L-lisina/lamina as scaffold for cell culture, aiming to assess the cellular viability and interaction in vitro. The results showed that there was interaction between cells and scaffold and that ones were viable and did not present cytotoxity for neuronal cells, being that the modified surface hydrogel composed of CB and poli-L-lisina/lamina kept the highest number of viable cells. The absorption of fibronectin and poli-L-lisina/lamina also increased the cell adhesion and interaction to the biomaterial and the hydrogel enzymatic treatment compound of CD-PL (injected CB-PL) did not present cytotoxicity, however, occurred a decrease in the cell viability when compared to CB-PL biomaterial without enzymatic treatment. Therefore, the hydrogel of modified bacterial cellulose with poli-lisina/lamina present as a prosperous biomaterial to promote neuronal tissue regeneration, since they potentiate cell adhesion and increase the neuronal survival.

A atrofia muscular espinal (AME) é uma das doenças de herança autossômica recessiva mais frequentes, com uma incidência estimada de 1 em cada 10.000 nascidos vivos. A AME se caracteriza por degeneração de neurônios motores na medula espinal, causando fraqueza progressiva de membros e tronco, seguida de atrofia muscular. Os pacientes são classificados em AME tipo I, AME tipo II e AME tipo III, baseado na idade de início dos sintomas e na evolução clínica. As três formas clínicas são causadas por alterações no gene de sobrevivência do neurônio motor (SMN1), que apresenta uma cópia homóloga (SMN2). Em torno de 95% dos pacientes com AME são homozigotos para ausência do exon 7 do gene SMN1, devido a uma deleção desse gene ou à uma conversão para SMN2. A ausência de SMN2 não tem consequências clínicas e é encontrada em aproximadamente 5% dos indivíduos normais, mas o número de cópias de SMN2 modula o fenótipo de pacientes com AME. Devido a este espectro uniforme de mutação, a análise molecular realizada mais frequentemente é a detecção de deleções e conversões dos éxons 7 e/ou 8 dos genes SMN1 e SMN2 nos pacientes com suspeita clínica de AME. Neste trabalho, um protocolo baseado no sistema TaqMan® foi desenvolvido e comparado com a metodologia de PCR-RFLP (restriction fragment length polymorfism) utilizada no laboratório, avaliando o potencial de aplicação no diagnóstico molecular de pacientes com AME. Amostras de DNA de 100 indivíduos com suspeita clínica de AME foram analisadas pelos dois métodos. Amostras suspeitas de apresentar conversão foram analisadas por sequenciamento direto de DNA. Homozigotos para a ausência do exon 7 do gene SMN1 foram identificados em 58 casos (58%), sendo a maioria devido à deleção desse gene. Destes pacientes, 56 foram classificados, de acordo com os critérios diagnósticos revisados para AME, e distribuídos da seguinte forma: 26 (46,4%) do tipo I, 16 (28,6%) tipo II e 14 (25,0%) tipo III. Oito casos de conversão do gene SMN1 para SMN2 foram encontradas entre os pacientes e a distribuição desses casos entre as três formas clínicas foi a seguinte: 4 pacientes do tipo III, 3 do tipo II e 1 do tipo I. Cinco casos de homozigotos para ausência do gene SMN2 foram identificados entre os demais indivíduos. A comparação do método PCR-RFLP com o método baseado no sistema TaqMan® descrito neste estudo mostrou que ambos foram específicos e precisos para essas análises. No entanto, o ensaio TaqMan® foi mais sensível e mais rápido e parece ser um método adequado para o diagnóstico de AME. / Spinal muscular atrophy (SMA) is one of the most frequent autosomal recessive disorder with an estimated incidence of 1 case in each 10,000 live-births. SMA is characterized by degeneration of motor neurons in the spinal cord, causing progressive weakness of the limbs and trunk, followed by muscle atrophy. Patients have been classified in type I–III SMA based on age at onset and clinical course. All three types of SMA are caused by alterations in the survival motor neuron gene (SMN1) that also have a homologous copy named SMN2. About 95% of SMA patients show homozygous absence of SMN1 exon 7 due a deletion of this gene or a conversion into SMN2. The absence of SMN2 is found in about 5% of individuals with no clinical phenotype, but number of SMN2 copies modulates the phenotype of SMA patients. Considering this uniform mutation spectrum, direct molecular genetic testing consists basically of detecting deletions and conversions of exons 7 and 8 of these genes in SMA patients. In this work, we develop a real time PCR TaqMan® method and compared with the most commonly used PCR restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) assay, evaluating the potential application of molecular diagnosis of SMA patients. DNA samples from 100 individuals with clinical features of SMA were analyzed by both methods. Besides, patients DNA samples carrying a conversion event were analysed by direct DNA sequencing. Homozygous for SMN1 exon 7 absence were identified in 58 cases (58%) being the majority due to gene deletion and eight cases of gene conversion. From those, 56 were classified, according to the revised diagnostic criteria, and distributed as follows: 26 (46.4%) SMA type I, 16 (28.6%) SMA type II and 14 (25.0%) SMA type III. In addition, gene conversion was observed in 4 SMA type I patients, 3 SMA type II and 1 SMA type III patient. Among the remaining individuals five samples were found to be homozygous for absence of SMN2 gene. Comparing PCR-RFLP method and the method based on the TaqMan® system describe in this study, we verify that both were precise and specific for these analyses. However, the TaqMan® assay was faster and more sensitive than PCR-RFLP and was shown to be a suitable method for the diagnosis of SMA.

Orientador : Prof. Dr. André Luiz Félix Rodacki / Coorientador : Prof. Dr. Eddy Krueger / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Educação Física. Defesa: Curitiba, 29/07/2016 / Inclui referências : f. 63-81 / Área de concentração: Exercício e esporte / Resumo: A atrofia muscular é uma das consequências mais evidentes da lesão medular, como resultado da imobilidade crônica. Os efeitos deletérios da lesão medular em grandes grupos musculares podem levar a efeitos secundários, tais como intolerância à glicose, aumento do risco da síndrome metabólica e diabetes do tipo II. O treinamento com RFS (RFS) tem sido proposto como uma forma efetiva para induzir hipertrofia utilizando-se de cargas baixas, com pouco ou nenhum dano muscular. O presente estudo teve como objetivo investigar os efeitos agudos e crônicos da eletro-estimulação funcional de baixa intensidade combinada com restrição parcial do fluxo sanguíneo (EEF+RFS) em músculos afetados pela lesão medular. Os efeitos agudos de uma sessão de EEF com (grupo EEF+RFS) e sem RFS (grupo EEF) nos níveis de lactato sanguíneo, na espessura muscular (EM) e na formação de edema foram comparados. Os efeitos crônicos na EM e na formação de edema após oito semanas de EEF com e sem RFS, realizados duas vezes por semana, foram também comparados. O grupo EEF+RFS mostrou aumentos agudos maiores nos níveis de lactato, na EM e edema, comparado ao grupo EEF (p<0,05). O grupo EEF+RFS mostrou um aumento crônico na EM após 4 semanas de treinamento (p<0,05), sem aumentos adicionais da 4a. para a 8a. semana (p>0,05). Após 3 semanas de destreinamento, a EM diminuiu aos valores basais. Não houve mudanças na EM crônica no grupo EEF ao longo das 8 semanas de treinamento (p>0,05). O presente estudo mostrou que 8 semanas de eletro-estimulação funcional combinada com RFS induz a aumentos na EM dos músculos afetados pela lesão medular. Os efeitos agudos indicam que a eletro-estimulação induz a um maior acúmulo de metabólitos e edema, quando combinada com RFS. Os efeitos crônicos sugerem que os aumentos iniciais na EM podem ser atribuídos a edema, ao passo que depois da 4a. semana os aumentos podem ser interpretados predominantemente como hipertrofia muscular. Palavras-chave: lesão medular, RFS, eletro-estimulação funcional, hipertrofia muscular, edema. / Abstract: Muscle athrophy is one of the most evident consequences of SCI, as a result of chronic immobility. The detrimental effects of SCI on large skeletal muscle groups may lead to secondary effects such as glucose intolerance, increased risk of metabolic syndrome and type 2 diabetes mellitus. Blood flow restriction (BFR) training has been proposed as an effective method to induce hypertrophy using low training loads, with little or no muscle damage. This study aimed to investigate the acute and chronic effects of low-intensity functional electrical stimulation (FES) combined with blood flow restriction (BFR) on muscles affected by spinal cord injury. The acute effects of one bout of FES with (FES+BFR group) and without BFR (FES group) on blood lactate, muscle thickness (MT) and edema formation were compared. The chronic effects on MT and edema following 8-weeks of twice weekly training with and without BFR were also compared. The FES+BFR group showed greater acute blood lactate, MT and edema increases compared to the FES only group (p<0,05). The FES+BFR group showed a chronic MT increase after 4 week of training (p<0.05), with no further MT increases from the 4th to the 8th week (p>0,05). Following 3 week of detraining, MT decreased to baseline values. No MT changes were observed in the FES group throughout the 8 weeks (p>0.05). This current study showed that 8 weeks of low-intensity FES training combined with BFR induces MT increases on the paralyzed skeletal muscles of spinal cord-injured men. The acute effects suggest that functional electrical stimulation induces a greater metabolites accumulation and edema, when combined with BFR. The chronic effects suggest that early increases in MT can be attributed to edema, whereas after the 4th week the increased MT can be interpreted predominantly as muscle hypertrophy. Keywords: spinal cord injury, blood flow restriction, functional electrical stimulation, muscle hypertrophy, edema.

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:28Z : No. of bitstreams: 1 000835331.pdf: 1065395 bytes, checksum: e7bb730f232fea40414d2de0bea96dd9 (MD5) / Lesões da medula espinhal ocorrem frequentemente em pequenos animais em razão de causas exógenas ou endógenas. A lesão medular é classificada em extradural, intradural-extramedular e intramedular. Este estudo tem como objetivo determinar as lesões que envolvem a medula espinhal e seus diferentes achados e frequências à mielografia. Paralelamente, um outro estudo com seis pacientes com exames inconclusivos à mielografia foram submetidos à tomografia computadorizada contrastada e seus achados foram confrontados com a mielografia. Neste estudo foram reavaliados 154 casos de cães com suspeita clínica neurológica envolvendo a medula espinhal, os quais foram submetidos a exames radiográficos convencionais e à mielografia com composto iodado não iônico no período de 2008 a 2012. Os exames imaginológicos foram desenvolvidos no Setor Diagnóstico por Imagem do Hospital Veterinário Governador Laudo Natel da Faculdade de Ciências Agrária e Veterinária de Jaboticabal - Unesp. Entre as diferentes raças de cães, a Teckel foi mais acometida com a apresentação de 58 pacientes (38%). A faixa etária de maior ocorrência foi de cinco a oito anos, totalizando 67 cães (43,5%). A coluna cervical foi o segmento de maior ocorrência das lesões encontradas com 88 lesões (44%). A localização mais frequente das lesões foi extradural, correspondente a 191 lesões do total analisado (95,5%) e nove lesões foram intradurais-extramedulares (4,5%). Das lesões extradurais, 175 (91,6%) foram de origem degenerativa do disco intervertebral, protrusão/extrusão. Com exceção dos 154 casos, no primeiro semestre de 2013, em seis outros pacientes foram realizados, sequencialmente, mielografias e tomografia computadorizada. Nestes casos as lesões foram em região cervical: três casos (50%), dois na região lombar (33%) e um toracolombar (17%). Todas as lesões foram extradurais, três casos de extrusão do disco (50%), dois de... / Spinal cord injuries often occur in small animals due to exogenous or endogenous causes. Spinal cord injury is classified into extradural, intradural-extramedullary and intramedullary. This study aims to determine the lesions involving the spinal cord and its findings and different frequencies to myelography. At the same time, another study with six patients with inconclusive examinations to myelography underwent computed tomography contrasting and their findings were compared with myelography. In this study were reassessed 154 cases of dogs with neurological clinical suspicion surrounding the spinal cord, which underwent conventional radiographs and myelography with nonionic iodinated compound in the period 2008 to 2012. The imaging studies were developed in Sector Diagnostic Imaging Veterinary Hospital Governador Laudo Natel of the Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias Jaboticabal - Unesp. Among the different breeds of dogs, the Teckel were the most affected with the presentation of 58 patients (38%). The age group most frequent was 5-8 years, totaling 67 dogs (43.5%). The cervical column was the most frequent segment of the lesions found in 88 lesions (44%). The most common location of lesions was extradural corresponding to lesions of the total analyzed 191 (95.5%) and nine lesions were intradural extramedullary (4.5%). Extradural lesions of 175 (91.6%) were degenerative intervertebral disc protrusion / extrusion. Aside from the 154 cases in the first half of 2013, in six other patients were performed sequentially myelography and computed tomography. In these cases the lesions were in the neck: three cases (50%), two in the lower back (33%) and one thoracolumbar (17%). All lesions were extradural three cases of disc extrusion (50%), two protrusion (33.3%) and one for cancer/osteomyelitis (16.7%). The myelography permits, in most cases lead to a definitive diagnosis in patients with spinal cord compression injury. Computed ...