AMORA, Daniela Nascimento. Estudo da toxicidade induzida por fosfolipase A2 isolada do veneno de Crotalus durissus terrificus em rim isolado de rato e em túbulos proximais isolados de coelho. 2008. 123 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-06T15:40:23Z No. of bitstreams: 1 2008_tese_dnamora.pdf: 3302617 bytes, checksum: 4a2d6fe5d7b8f824fd39b463f2cf272b (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-06T15:49:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tese_dnamora.pdf: 3302617 bytes, checksum: 4a2d6fe5d7b8f824fd39b463f2cf272b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-06T15:49:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tese_dnamora.pdf: 3302617 bytes, checksum: 4a2d6fe5d7b8f824fd39b463f2cf272b (MD5) Previous issue date: 2008 / Although the increasing interest on biological effects of snake venoms, their cytotoxic as well as their nephrotoxic mechanisms are still unknown. In the particular case of crotalic venoms, it has been postulated the participation of several metabolites from membrane phospholipids hydrolysis and more recently, mitochondrial dysfunction. The present work investigated the renal effects promoted by the phospholipase A2 (PLA2) isolated from Crotalus durissus terrificus venom in the isolated rat kidney. Addition of PLA2 increased UF, GFR and PP, while reducing %TNa+, %TK+ and %TCl-. The histological analysis showed a mild amount of a proteinaceous substance in the renal tubules of kidneys perfused with PLA2. In the present study also showed that the phospholipase A2 isolated from porcine pancreas (PPLA2) and from C d terrificus snake venom (SVPLA2) produced cellular injury suggested by the increase in LDH release and increased nonesterified fatty acid (NEFA) levels from rabbit proximal tubules in suspension. Furthermore, the SVPLA2 induced a decrease in mitochondrial membrane potential (ΔΨm) assessed by both JC-1 uptake and safranin O uptake. PPLA2 produced no effects on ΔΨm with the highest concentrations, and an unexpected increase in the group treated with the lowest concentration. Addition of BSA completely reversed the effects induced by phospholipases on ΔΨm. It was observed no changes in cell ATP levels. Finally, to determine whether mitochondrial membrane permeability was affected by PPLA2 and SVPLA2, we measured the change safranin O uptake to assess both changes in mitochondrial volume and in ΔΨm. The latter was affected by both PLA2s although small alterations in the mitochondrial volume were observed. We conclude that the treatment of proximal tubule suspensions with porcine or crotalic PLA2s disturbed the membrane integrity as well as the mitochondrial function. Furthermore, crotalic PLA2 altered renal function in the isolated rat kidney preparation. / Apesar de muito se discutir sobre os efeitos citotóxicos dos venenos ofídicos, pouco ainda é conhecido sobre os mecanismos de ação sobre as diversas células, e em especial, sobre as células renais. No caso particular da citotoxicidade dos venenos crotálicos, tem-se postulado a participação de diversos metabólitos da hidrólise de lipídios de membrana, e, mais recentemente, da disfunção mitocondrial. O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito da fosfolipase A2 (FLA2) isolada do veneno da Crotalus durissus terrificus sobre rim isolado de rato assim como estudar a toxicidade e as alterações da função mitocondrial induzidas pelas FLA2s de pâncreas de porco (PFLA2) e de veneno da C. d. terrificus (VSFLA2) em suspensões de túbulos proximais (TP). No rim isolado foi observado aumento no fluxo urinário, no ritmo de filtração glomerular (RFG) e na pressão de perfusão (PP) enquanto ocorreram decréscimos nos percentuais de transporte total de sódio (%TNa+), de potássio (%TK+) e de cloreto (%TCl-). Na análise histopatológica foi observada a deposição de material proteináceo nos túbulos de rins perfundidos com FLA2. No estudo de suspensões de TP tratadas com PFLA2 e com VSFLA2 foi observado que estas induziram injúria celular, sugerida pelo aumento na liberação de lactato desidrogenase (LDH), promoveram aumentos nos níveis de ácidos graxos não esterificados (AGNE) e diminuíram o potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm), sem, no entanto, alterar os níveis de ATP. Em relação ao ΔΨm, a PPFLA2 não produziu efeitos nas concentrações mais elevadas, apesar de ter aumentado, significativamente, na menor concentração. As concentrações mais elevadas da FLA2 crotálica, entretanto, induziram um decréscimo significativo no ΔΨm. A adição de BSA reverteu completamente os efeitos das FLA2s sobre o ΔΨm. No estudo da permeabilidade mitocondrial de transição (PMT) foi observado que a PFLA2 e a VSFLA2 promoveram a liberação da safranina O e, por entanto, induziu a formação de PMT, apesar da leve edema mitocondrial produzido. Conclui-se que as fosfolipases A2 de pâncreas de porco e do veneno da C. d. terrificus produziram um efeito citotóxico em preparações de túbulos proximais evidenciado pelo aumento na liberação de LDH, além de promoverem alterações no potencial mitocondrial de membrana, o que sugere alteração da função mitocondrial por essas enzimas. Em rim isolado, foi observado que a FLA2 crotálica promoveu alterações da função renal.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-12Bitstream added on 2014-06-13T18:34:31Z : No. of bitstreams: 1 biluca_df_me_botfmvz.pdf: 232011 bytes, checksum: 5f66e2b253e27ff8acb7ace15eb4f40e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da suplementação com monensina, em vacas nelore paridas a pasto, em anestro, nas concentrações plasmáticas de AGNE, IGF-1, no diâmetro de maior folículo e na capacidade de resposta desse folículo a um estímulo ovulatório hormonal (GnRH). Nesse estudo foram usadas 302 vacas (123 primíparas e 179 multíparas) que foram divididas em dois tratamentos, proporcionalmente, onde o lote controle recebeu apenas suplementação mineral e o lote tratado recebeu suplementação monensina (110mg/vaca/dia). Os tratamentos se iniciaram 30 dias pré-parto, onde avaliou-se o ECC pré-parto, até 90 dias pós-parto. Todas as vacas, em média aos 54 dias pós-parto, receberam um estímulo hormonal ovulatório (administração de 50 mcg de GnRH), foram avaliadas para o escore de condição corporal (escala de 1 a 5), colhido sangue para análise de IGF-1 e AGNE e foram avaliadas para o do diâmetro folicular através de ultra-sonografia (US). Após 7 dias nova US foi realizada para verificar a taxa de ovulação. As variáveis foram submetidas à análise de variância pelo GLM do SAS. O ECC pós-parto foi maior (p<0,01) em vacas tratadas com monensina (3,11) que vacas controle (3,00); além disso, vacas tratadas não perderam ECC no período periparto enquanto vacas controle perderam 0,19 pontos. Vacas suplementadas com monensina (883,9 mmol/l) tiveram concentração plasmática de AGNE menor (p<0,01) que vacas controle (1013,8 mmol/l), caracterizando, junto com a ECC, menor mobilização de reservas. Já a concentração plasmática de IGF-1 foi maior (p<0,01) nas vacas tratadas (118,5 ng/ml) que vacas controle (85,1 ng/ml). Primíparas (118,0 ng/ml) apresentaram IGF-1 maior (p<0,01) que multíparas (84,8 ng/ml). Vacas tratadas (10,07mm) apresentaram folículo maior que vacas controle (9,58mm) e multíparas (10,35mm) maior que primíparas (9,30mm)... / The objective of this trial was to evaluate the effects of monensin supplementation in suckled anestrous Nellore cows on IGF-1 and NEFA concentrations, follicular diameter and GnRH ovulatory response. In this trial were used 302 cows (123 primiparous and 179 multiparous) divided in two treatments. The control group received only mineral supplementation and the treated group received monensin supplementation (110 mg/cow/day). The treatments began 30 days prepartum to 90 days postpartum. All cows, at average of 54 days postpartum, received hormonal ovulatory stimulation (50 mcg GnRH), BCS were evaluated (1 to 5 scale), blood samples were collected to IGF-1 and NEFA analysis and follicular diameter was measured by ultrasound (US). Seven days later ovulation rate was evaluated. Cows that received monensin had higher postpartum BCS (3.11) and lost less BCS at peripartum than control cows (3.00). Treated cows had lower (P<0.01) NEFA plasmatic concentration (883.9 mmol/l) than control cows (101.8 mmo/l), which associated with BCS suggests less reserve mobilization. IGF-1 plasmatic concentration was higher in treated cows (11.5 ng/ml) than control cows (85.1 ng/ml). Primiparous (118.0 ng/ml) had higher IGF-1 than multiparous (84.8 ng/ml). Treated cows had higher follicular diameter (10.07mm) than control cows (9,58mm) and multiparous (10.35mm) higher than primiparous (9.30mm). The hormonal ovulatory stimulation (GnRH) response is follicle diameter dependent and treated cows had higher response (35.9%) than control cows (31.5%). Monensin supplementation is a good strategy to improve energy status due to decrease in BCS loss and reduction of NEFA concentration. Monensin supplementation also increased IGF-1 plasmatic concentration, follicular diameter and hormonal (GnRH) ovulatory response.

This study was conducted to investigate the effect of the consumption of aflatoxins and adsorbents (esterifid glucomannan) for broiler breeders on productive and reproductive aspects addition to verify the residual effects on the progeny. Four experiments were conducted, with the first consisting of 240 broiler breeders feed with increasing levels of aflatoxins, according to the treatment: T1 free aflatoxins diet and treatments T2, T3 and T4, dies containing 0.250, 0.500 and 0.750mg the aflatoxins/kg of diet. The second experiment was composed of 300 broiler breeders submitted to diets containing aflatoxins, in the presence or not of adsorbent as treatments: T1 breeders feed free aflatoxins diets, T2 breeders feed diets containing 0.500mg of aflatoxins / kg of diet, T3 breeders submitted to the same level of aflatoxins in T2, but with 0.10% of adsorbent, T4 consists of breeders feed diets containing 0.750mg of aflatoxins/kg of diet and treatment T5 breeders submitted to the same level of aflatoxins of T4, but with 0.10% of adsorbent. The third and fourth experiments were composed of chicks from broiler breeder belonging to the first and second experiment, respectively. The parameters evaluated in the broiler breeders were: body weight, egg production, mass of eggs, egg weight, specific gravity, hatchability and chicks quality, and the study involving progeny were evaluated body weight, weight gain, feed conversion by weight gain, blood protein and albumin and liver and bursa weights in the first day of age. The performance of breoiler breeders subjected to diets containing increasing levels of aflatoxins, as well, broiler breeders subjected to diets containing levels of aflatoxins and adsorbent in the throws was not influenced. The progeny performance, in the same way, does not show the effect of the treatments applied on the broiler breeder hens. / Este estudo foi realizado para investigar o efeito do consumo de aflatoxinas e adsorventes (glucomananos esterificados) por matrizes de corte sobre aspectos produtivos e reprodutivos, além de verificar os efeitos residuais sobre a progênie. Foram realizados quatro experimentos, sendo o primeiro composto por 240 matrizes submetidas a níveis crescentes de aflatoxinas, segundo os tratamentos: T1 - dieta isenta de aflatoxinas, T2, T3 e T4, matrizes submetidas à dietas contendo 0,250, 0,500 e 0,750mg de aflatoxinas/kg de dieta. O segundo experimento foi composto por 300 matrizes submetidas à dietas contendo aflatoxinas, com presença ou não de adsorvente, conforme os tratamentos: T1 - matrizes submetidas à dietas isentas de aflatoxinas; T2 - aves alimentadas com dietas contendo 0,500mg de aflatoxinas/kg de dieta; T3 - aves submetidas ao mesmo nível de aflatoxinas do T2, porém com 0,10% de adsorvente, T4 - constituído por aves alimentadas com dietas contendo 0,750mg de aflatoxinas/kg de dieta e o tratamento e T5 - aves submetidas ao mesmo nível de aflatoxinas do T4, porém, com 0,10% de adsorvente. O terceiro e o quarto experimentos foram compostos por pintos oriundos de matrizes pertencentes ao primeiro e segundo experimento, respectivamente. Os parâmetros avaliados nas matrizes de corte foram: peso corporal, taxa de postura, massa de ovos, peso de ovos, gravidade específica, eclodibilidade e qualidade de pintos, e no estudo envolvendo a progênie foram avaliados peso corporal, ganho de peso, conversão alimentar, proteína e albumina sanguíneos e pesos de fígado e bursa ao primeiro dia de idade. O desempenho de matrizes de corte submetidas à dietas contendo níveis crescentes de aflatoxinas, bem como, de matrizes submetidas a dietas contendo níveis de aflatoxinas e adsorvente na deita não foi influenciado. Os índices zootécnicos da progênie, da mesma forma, não evidenciaram efeito dos tratamentos aplicado às matrizes de corte.

O objetivo deste trabalho consistiu em esclarecer os mecanismos bioquímicos e hormonais da ação da somatotropina recombinante bovina (r-bST), recomendada no tratamento de toxemia da prenhez (TP). Para tal, foram realizados dois experimentos nos quais induziram-se quadros de hipercetonemia ou hiperlipidemia em 39 ovelhas com elevada condição corporal tratadas ou não previamente com 160 mg de um produto comercial de r-bST, pela via subcutânea. A hipercetonemia foi provocada pela infusão IV de 5 mM/kg P.V. de beta hidroxibutirato (BHB) no decorrer de duas horas e a hiperlipidemia com injeção IV de solução 20% de óleo de peixe, perfazendo 0,54g de triacilglicerol/kg P.V. no decorrer de quatro dias. Essas quantidades infundidas lograram provocar os quadros esperados. No primeiro experimento, o tratamento com r-bST promoveu aumento significativo da gliconeogênese por meio da conversão de BHB em glicose, maiores teores de insulina, com consequente aumento da resistência insulínica, incremento na concentração de IGF1 que levou a mobilização de nitrogênio ureico para os depósitos e maior atividade de GGT. No segundo experimento, o rbST gerou destacado aumento da gliconeogênese, pela metabolização dos AGNEs e de BHB em glicose, com maior destaque aos AGNEs, elevação dos teores de insulina e do percentual de resistência insulínica, e maior atividade da AST e GGT e bilirrubinal direta e total. Assim, conclui-se que a atuação farmacológica do r-bST se baseia na vigorosa capacidade do aumento da gliconeogênese, diminuindo concomitantemente os nefastos catabólitos (AGNEs e BHB) no processo da TP. Foi realizado ainda um experimento subsidiário para comparar a capacidade diagnóstica da detecção de BHB, em sangue total, entre o kit diagnóstico enzimático (Randox®), padrão ouro, e tiras reativas comerciais (Precision Xceed®) lidas em dosímetro portátil. Foram obtidas 247 amostras de sangue das ovelhas nas quais tinham sido infundida solução de BHB, no experimento um. Duas faixas de acetonemia foram consideradas: de 0,7 a 1,5 mM caracterizada como cetose inaparente e acima deste valor como cetose clínica. A correlação entre os métodos foi alta (r = 0,98 ; P < 0,001). Na cetose inaparente as tiras reativas apresentaram sensibilidade de 0,97 e especificidade de 0,89 e na cetose aparente sensibilidade de 0,99 e especificidade de 0,75, respectivamente. As tiras reativas podem ser empregadas eficientemente no diagnóstico precoce de casos de TP, com custo baixo e rápida leitura ao pé dos animais. / The aim of this study was to clarify the biochemical and hormonal mechanisms of action of recombinant bovine somatotropin (r-bST), recommended in the treatment of pregnancy toxemia (PT). Two experiments were conducted inducing hyperlipidemia or hyperketonemia in 39 high body condition sheep pretreated or no with 160 mg of a commercial product of rbST subcutaneously. The hyperketonemia was caused by IV infusion of 5 mM / kg BW of beta-hydroxybutyrate (BHB) during two hours and hyperlipidemia with IV injection of a 20% fish oil solution corresponding to 0.54 g of triglyceride / kg BW in four days course. These infusions successfully caused the expected effects. In the first experiment, treatment with rbST caused a significant increase of gluconeogenesis by converting BHB into glucose, higher levels of insulin, with consequent increased insulin resistance, increase in the concentration of IGF1 leading to mobilization of urea nitrogen for deposits and increased activity of GGT. In the second experiment, the r-bST greatly increased gluconeogenesis generated by metabolism of non esterified fatty acids (NEFA), BHB and glucose, with emphasis on NEFA, elevated levels of insulin and the percentage of insulin resistance, and increased activity of AST and GGT and bilirrubin direct and total. In conclusion, the pharmacological action of r-bST is based on vigorous increase capacity on gluconeogenesis, concomitantly reducing the adverse catabolites (NEFA and BHB) in the PT process. An additional experiment was performed to compare the diagnostic capability of detecting BHB in whole blood, between the enzymatic diagnostic kit (Randox®), considered gold standard, and commercial test strips (Precision Xceed®) read in hand-held meter. 247 sheep blood samples were obtained in the first experiment in which BHB solution had been infused. Two ketonemic tracks were considered: 0.7 to 1.5 mM characterized as unapparent ketosis and above this value as a clinical ketosis. The correlation between the methods was high (r = 0.98, P <0.001). In test strips method, ketosis unapparent showed sensitivity of 0.97 and specificity of 0.89 and in ketosis apparent sensitivity of 0.99 and specificity of 0.75, respectively. The test strips can be used efficiently in the early diagnosis of cases of TP, with fast reading and low cost.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Apesar de muito se discutir sobre os efeitos citotÃxicos dos venenos ofÃdicos, pouco ainda à conhecido sobre os mecanismos de aÃÃo sobre as diversas cÃlulas, e em especial, sobre as cÃlulas renais. No caso particular da citotoxicidade dos venenos crotÃlicos, tem-se postulado a participaÃÃo de diversos metabÃlitos da hidrÃlise de lipÃdios de membrana, e, mais recentemente, da disfunÃÃo mitocondrial. O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito da fosfolipase A2 (FLA2) isolada do veneno da Crotalus durissus terrificus sobre rim isolado de rato assim como estudar a toxicidade e as alteraÃÃes da funÃÃo mitocondrial induzidas pelas FLA2s de pÃncreas de porco (PFLA2) e de veneno da C. d. terrificus (VSFLA2) em suspensÃes de tÃbulos proximais (TP). No rim isolado foi observado aumento no fluxo urinÃrio, no ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG) e na pressÃo de perfusÃo (PP) enquanto ocorreram decrÃscimos nos percentuais de transporte total de sÃdio (%TNa+), de potÃssio (%TK+) e de cloreto (%TCl-). Na anÃlise histopatolÃgica foi observada a deposiÃÃo de material proteinÃceo nos tÃbulos de rins perfundidos com FLA2. No estudo de suspensÃes de TP tratadas com PFLA2 e com VSFLA2 foi observado que estas induziram injÃria celular, sugerida pelo aumento na liberaÃÃo de lactato desidrogenase (LDH), promoveram aumentos nos nÃveis de Ãcidos graxos nÃo esterificados (AGNE) e diminuÃram o potencial de membrana mitocondrial (&#916;&#936;m), sem, no entanto, alterar os nÃveis de ATP. Em relaÃÃo ao &#916;&#936;m, a PPFLA2 nÃo produziu efeitos nas concentraÃÃes mais elevadas, apesar de ter aumentado, significativamente, na menor concentraÃÃo. As concentraÃÃes mais elevadas da FLA2 crotÃlica, entretanto, induziram um decrÃscimo significativo no &#916;&#936;m. A adiÃÃo de BSA reverteu completamente os efeitos das FLA2s sobre o &#916;&#936;m. No estudo da permeabilidade mitocondrial de transiÃÃo (PMT) foi observado que a PFLA2 e a VSFLA2 promoveram a liberaÃÃo da safranina O e, por entanto, induziu a formaÃÃo de PMT, apesar da leve edema mitocondrial produzido. Conclui-se que as fosfolipases A2 de pÃncreas de porco e do veneno da C. d. terrificus produziram um efeito citotÃxico em preparaÃÃes de tÃbulos proximais evidenciado pelo aumento na liberaÃÃo de LDH, alÃm de promoverem alteraÃÃes no potencial mitocondrial de membrana, o que sugere alteraÃÃo da funÃÃo mitocondrial por essas enzimas. Em rim isolado, foi observado que a FLA2 crotÃlica promoveu alteraÃÃes da funÃÃo renal / Although the increasing interest on biological effects of snake venoms, their cytotoxic as well as their nephrotoxic mechanisms are still unknown. In the particular case of crotalic venoms, it has been postulated the participation of several metabolites from membrane phospholipids hydrolysis and more recently, mitochondrial dysfunction. The present work investigated the renal effects promoted by the phospholipase A2 (PLA2) isolated from Crotalus durissus terrificus venom in the isolated rat kidney. Addition of PLA2 increased UF, GFR and PP, while reducing %TNa+, %TK+ and %TCl-. The histological analysis showed a mild amount of a proteinaceous substance in the renal tubules of kidneys perfused with PLA2. In the present study also showed that the phospholipase A2 isolated from porcine pancreas (PPLA2) and from C d terrificus snake venom (SVPLA2) produced cellular injury suggested by the increase in LDH release and increased nonesterified fatty acid (NEFA) levels from rabbit proximal tubules in suspension. Furthermore, the SVPLA2 induced a decrease in mitochondrial membrane potential (&#916;&#936;m) assessed by both JC-1 uptake and safranin O uptake. PPLA2 produced no effects on &#916;&#936;m with the highest concentrations, and an unexpected increase in the group treated with the lowest concentration. Addition of BSA completely reversed the effects induced by phospholipases on &#916;&#936;m. It was observed no changes in cell ATP levels. Finally, to determine whether mitochondrial membrane permeability was affected by PPLA2 and SVPLA2, we measured the change safranin O uptake to assess both changes in mitochondrial volume and in &#916;&#936;m. The latter was affected by both PLA2s although small alterations in the mitochondrial volume were observed. We conclude that the treatment of proximal tubule suspensions with porcine or crotalic PLA2s disturbed the membrane integrity as well as the mitochondrial function. Furthermore, crotalic PLA2 altered renal function in the isolated rat kidney preparation.

O objetivo deste trabalho consistiu em esclarecer os mecanismos bioquímicos e hormonais da ação da somatotropina recombinante bovina (r-bST), recomendada no tratamento de toxemia da prenhez (TP). Para tal, foram realizados dois experimentos nos quais induziram-se quadros de hipercetonemia ou hiperlipidemia em 39 ovelhas com elevada condição corporal tratadas ou não previamente com 160 mg de um produto comercial de r-bST, pela via subcutânea. A hipercetonemia foi provocada pela infusão IV de 5 mM/kg P.V. de beta hidroxibutirato (BHB) no decorrer de duas horas e a hiperlipidemia com injeção IV de solução 20% de óleo de peixe, perfazendo 0,54g de triacilglicerol/kg P.V. no decorrer de quatro dias. Essas quantidades infundidas lograram provocar os quadros esperados. No primeiro experimento, o tratamento com r-bST promoveu aumento significativo da gliconeogênese por meio da conversão de BHB em glicose, maiores teores de insulina, com consequente aumento da resistência insulínica, incremento na concentração de IGF1 que levou a mobilização de nitrogênio ureico para os depósitos e maior atividade de GGT. No segundo experimento, o rbST gerou destacado aumento da gliconeogênese, pela metabolização dos AGNEs e de BHB em glicose, com maior destaque aos AGNEs, elevação dos teores de insulina e do percentual de resistência insulínica, e maior atividade da AST e GGT e bilirrubinal direta e total. Assim, conclui-se que a atuação farmacológica do r-bST se baseia na vigorosa capacidade do aumento da gliconeogênese, diminuindo concomitantemente os nefastos catabólitos (AGNEs e BHB) no processo da TP. Foi realizado ainda um experimento subsidiário para comparar a capacidade diagnóstica da detecção de BHB, em sangue total, entre o kit diagnóstico enzimático (Randox®), padrão ouro, e tiras reativas comerciais (Precision Xceed®) lidas em dosímetro portátil. Foram obtidas 247 amostras de sangue das ovelhas nas quais tinham sido infundida solução de BHB, no experimento um. Duas faixas de acetonemia foram consideradas: de 0,7 a 1,5 mM caracterizada como cetose inaparente e acima deste valor como cetose clínica. A correlação entre os métodos foi alta (r = 0,98 ; P < 0,001). Na cetose inaparente as tiras reativas apresentaram sensibilidade de 0,97 e especificidade de 0,89 e na cetose aparente sensibilidade de 0,99 e especificidade de 0,75, respectivamente. As tiras reativas podem ser empregadas eficientemente no diagnóstico precoce de casos de TP, com custo baixo e rápida leitura ao pé dos animais. / The aim of this study was to clarify the biochemical and hormonal mechanisms of action of recombinant bovine somatotropin (r-bST), recommended in the treatment of pregnancy toxemia (PT). Two experiments were conducted inducing hyperlipidemia or hyperketonemia in 39 high body condition sheep pretreated or no with 160 mg of a commercial product of rbST subcutaneously. The hyperketonemia was caused by IV infusion of 5 mM / kg BW of beta-hydroxybutyrate (BHB) during two hours and hyperlipidemia with IV injection of a 20% fish oil solution corresponding to 0.54 g of triglyceride / kg BW in four days course. These infusions successfully caused the expected effects. In the first experiment, treatment with rbST caused a significant increase of gluconeogenesis by converting BHB into glucose, higher levels of insulin, with consequent increased insulin resistance, increase in the concentration of IGF1 leading to mobilization of urea nitrogen for deposits and increased activity of GGT. In the second experiment, the r-bST greatly increased gluconeogenesis generated by metabolism of non esterified fatty acids (NEFA), BHB and glucose, with emphasis on NEFA, elevated levels of insulin and the percentage of insulin resistance, and increased activity of AST and GGT and bilirrubin direct and total. In conclusion, the pharmacological action of r-bST is based on vigorous increase capacity on gluconeogenesis, concomitantly reducing the adverse catabolites (NEFA and BHB) in the PT process. An additional experiment was performed to compare the diagnostic capability of detecting BHB in whole blood, between the enzymatic diagnostic kit (Randox®), considered gold standard, and commercial test strips (Precision Xceed®) read in hand-held meter. 247 sheep blood samples were obtained in the first experiment in which BHB solution had been infused. Two ketonemic tracks were considered: 0.7 to 1.5 mM characterized as unapparent ketosis and above this value as a clinical ketosis. The correlation between the methods was high (r = 0.98, P <0.001). In test strips method, ketosis unapparent showed sensitivity of 0.97 and specificity of 0.89 and in ketosis apparent sensitivity of 0.99 and specificity of 0.75, respectively. The test strips can be used efficiently in the early diagnosis of cases of TP, with fast reading and low cost.

A obesidade, a resistência à insulina (RI), o diabetes e a hipertensão arterial (HA) estão associadas à maior morbidade e mortalidade cardiovascular. Os verdadeiros mecanismos relacionados com a RI bem como as associações metabólicas e alterações hemodinâmicas a essa condição não estão bem estabelecidos. Sabe-se que o aumento dos ácidos graxos livres (AGL) pode estar relacionado inclusive com as alterações hemodinâmicas como o aumento na pressão arterial (PA), na freqüência cardíaca (FC) e na redução da distensibilidade de pequenas artérias (piora da função endotelial). A infusão de Intralipidâ e heparina (ILH) é hoje um modelo de hiperlipidemia, que permite o aumento agudo de AGL na circulação sangüínea. O aumento da atividade do sistema nervoso simpático (SNS) tem sido apontado como possível mecanismo para parte das alterações hemodinâmicas decorrentes da hiperlipidemia aguda. O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto da injeção de insulina in bolus e da infusão de ILH na resposta hemodinâmica, metabólica e autonômica em pacientes portadores da doença de Chagas. Para tanto, foram utilizados12 pacientes portadores da doença de Chagas sem insuficiência cardíaca (grupo Ch) e 12 voluntários normais (grupo C), pareados para idade, sexo, raça, PA e FC. Os mesmos foram avaliados em condições basais e submetidos aos testes de tolerância à insulina (TTI) e de infusão de ILH. Durante o TTI foram realizadas medidas na PA, na FC e dosagens de glicemia, insulina e noradrenalina. No dia da infusão de ILH os registros da PA e da FC foram realizados batimento a batimento (Finometer®), colhido sangue para dosagens bioquímicas (glicose, insulina, noradrenalina) e realizado análise espectral em todos os participantes. Em condições basais, os níveis de noradrenalina eram superiores no grupo Ch, quando comparados com o grupo C. Após o TTI, houve queda significativa na glicose plasmática em ambos os grupos. A PA e a FC não se modificaram durante TTI no grupo Ch, e aumentaram significativamente no grupo C. Houve aumento dos níveis de noradrenalina plasmática no grupo C e discreta queda no grupo Ch. Em relação à de ILH, ela resultou em aumento na PA nos dois grupos. A FC aumentou no grupo Ch e não se modificou no grupo C. O componente de baixa freqüência (LF) era maior no grupo Ch em condições basais e aumentou em ambos os grupos durante a infusão de ILH. O componente de alta freqüência (HF) diminuiu nos dois grupos de maneira significativa, sendo menor no grupo Ch mesmo em condições basais. Não houve modificação significativa nos valores de noradrenalina plasmática no grupo Ch durante a infusão de ILH, a qual aumentou significativamente no grupo C. Esses dados mostram: Maior resposta da atividade simpática no grupo C durante o TTI pelo aumento da PA, da FC, dos valores de noradrenalina plasmática e a sensibilidade à insulina foi semelhante nos dois grupos, uma vez que a queda da glicose após o estímulo com bolus de insulina foi significante nos dois grupos. Aumento significativo da PA e da atividade simpática (avaliada pela análise espectral) nos dois grupos durante a infusão de ILH. Diminuição da atividade do componente de HF (parassimpático) nos dois grupos após a infusão de ILH. O comprometimento significativo da sensibilidade baroreflexa no grupo Ch após a infusão de ILH. Em conclusão, pacientes chagásicos têm maior concentração de noradrenalina em condição basal em relação ao grupo controle, porém a resposta na PA e na FC durante o TTI no grupo Ch foi menor, sugerindo disautonomia. A infusão de ILH resultou no aumento da PA em ambos os grupos e menor queda da FC no grupo Ch, sugerindo comprometimento do baroreflexo. / The obesity, insulin resistance (IR), diabetes and hypertension (HA) are associated with increased cardiovascular morbidity and mortality. The real mechanisms related to the RI and the associations of metabolic and hemodynamic changes to this condition are not well established. It is known that the increase in free fatty acids (FFA) may also be related to the hemodynamic changes as the increase in blood pressure (BP), heart rate (HR) and reducing the distensibility of small arteries (worsening of endothelial function). The infusion of Intralipid® and heparin (ILH) is today a model of acute hyperlipidemia, which allows the acute increase of FFA in the blood circulation. Increase in the nervous sympathetic activity system (SNS) has been suggested as a possible mechanism for part of hemodynamic changes resulting from acute hyperlipidemia. The purpose of this study was to evaluate the impact of the injection of bolus of insulin and the infusion of ILH in hemodynamic, metabolic, and autonomic response in patients with Chagas\' disease. Twelve patients with Chagas\' disease without heart failure (Ch group) and 12 normal volunteers (C group), matched for age, sex, race, BP, and HR were selected for this study. They were evaluated at baseline conditions and subjected to insulin tolerance test (ITT) and also ILH infusion. During the ITT measures of BP, HR, and biochemistry dosages as blood glucose, insulin and norepinephrine were taken. During the infusion of ILH the records of the BP and HR beat-to-beat (Finometer®) were done, blood samples were collected for biochemical dosages (glucose, insulin, noradrenalin) and spectral analysis was also conducted in all participants. In baseline conditions, norepinephrine levels were higher in the Ch group, compared with the C group. After ITT, there was significant fall in plasma glucose in both groups. The BP and HR did not change during the ITT in Ch group, and increased significantly in C group. There was an increase in plasma levels of norepinephrine in group C and slight fall in group Ch. The ILH infusion resulted in an increase in the BP in both groups. The HR increased in the Ch group and did not change in C Group. The component of low frequency (LF) was higher in group Ch in the baseline conditions and it increased in both groups during the ILH infusion. The component of high frequency (HF) decreased in both groups, and it was lower even in the Ch group even at baseline conditions. There was no significant change in the values of plasma norepinephrine in the group Ch during the ILH infusion, and it increased significantly in C group. These data show: Similar insulin response in both groups, according to the glucose drop. Higher increase in BP and HR in C Group in comparison to Ch group and higher increase in plasma norepinephrine in C group comparing to Cg group. Significant increase in BP and sympathetic activity (evaluated by spectral analysis) in both groups during the ILH infusion. Decrease in the HF component (parasympatethic activity) in both groups after ILH infusion. A significant baroreflex sensitivity impairment in the Ch group after the ILH infusion. In conclusion, chagasic patients have greater concentration of norepinephrine in baseline condition comparing to C group, but the response of BP and HR during the ITT in Ch group was lower, suggesting dysautonomia. The ILH infusion resulted in an increase on BP in both groups and also increased the HR in Ch group, suggesting baroreflex impairment.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Tatiele_Munbach.pdf: 829847 bytes, checksum: 819f6655b2f1238488bb374450563f95 (MD5) Previous issue date: 2015-02-11 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / O período de maior suscetibilidade a doenças em sistemas intensivos de produção de leite é durante o período de transição, o qual corresponde a três semanas antes até três semanas após o parto. O mesmo é caracterizado por um balanço energético negativo devido à mobilização de gordura das reservas corporais e por mudanças no ambiente ruminal pela introdução súbita de grãos na dieta. Com a finalidade de reduzir os efeitos do balanço energético negativo e promover o aumento na produção de leite, algumas medidas têm sido adotadas em relação ao manejo nutricional no período de transição. O uso de leveduras, por exemplo, têm sido uma boa alternativa para tentar melhorar o ambiente ruminal e facilitar às adaptações da microbiota a nova dieta. O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos da suplementação de uma associação de levedura viva e hidrolisada nos marcadores metabólicos e do fluído ruminal de vacas leiterias durante o período de transição. O experimento foi conduzido em um sistema semi-extensivo, utilizando-se 20 vacas da raça Holandesa, divididas igualmente em grupo controle (GC) e grupo Suplementado (GS). O GS recebeu adição diária de 28g/animal/dia da associação de levedura S. cerevisiae desde os 20 ± 2 dias pré-parto até o início da lactação (18 ± 3 dias). As coletas de amostras de fluído ruminal e de sangue foram realizadas no pré-parto, e durante seis dias após o parto. No liquido ruminal foi avaliado o pH, Tempo de redução do azul de metileno, contagem de protozoários e avaliação morfo-tintorial das bactérias. No soro sanguíneo foram determinadas as concentrações de ácidos graxos não esterificados (AGNE’s), albumina e ureia. No metabolismo energético, os AGNE’s diminuíram durante o período do colostro nos animais suplementados, assim como a albumina e ureia no período da lactação. Houve mudança no ambiente bacteriano ruminal nos animais suplementados, ocorrendo um predomínio de bactérias Gram negativas. No ambiente ruminal as bactérias Gram negativas aumentaram significativamente no GS durante a lactação. Concluiu-se que a suplementação com uma associação de levedura viva e hidrolisada em vacas durante o período de transição pode influenciar positivamente o metabolismo energético e proteico assim como o ambiente bacteriano ruminal no início da lactação. / The period of greatest susceptibility to disease in intensive milk production systems is during the transition period, which corresponds to three weeks before up to three weeks after delivery. The same is characterized by a negative energy balance due to body fat mobilization and changes in the rumen by the sudden introduction of grain in the diet. In order to reduce the effects of negative energy balance and increase milk production, some measures have been taken into account in nutritional management during the transition period. The use of yeast, for example, have been a good alternative to improve the rumen and facilitating adjustment of the microbiotato the new diet. The aim of the study was to evaluate the effects of association of live and hydrolyzed yeast in the metabolic markers and ruminal fluid examination of dairy cows during the transition period. The experiment was conducted in a semi extensive system, using 20 Holstein cows, divided equally into control group (CG) and Supplemented group (SG). The SG received daily addition of 28 g / animal / day of S. cerevisiae yeast association from 20 ± 2 days pre-calving until early lactation (18 ± 3 days). The collections of rumen fluid and blood samples were performed during labor, and for six days after delivery. In ruminal fluid was evaluated pH, time of blue methylene reduction, protozoa count and morpho-dye bacteria evaluation. Serum concentrations of non-esterified fatty acids (NEFA's), albumin and urea were determined. There was a change in rumen bacterial environment in the supplemented animals, experiencing a predominance of gram negative. The number of Gram negative bacteria increased significantly in GS during lactation. In energy metabolism, the NEFA's decreased over the period of colostrum in the supplemented animals as well as albumin and urea in the period of lactation. We conclude that supplementation of an association of live and hydrolyzed yeast to cows during the transition period can positively influence the energy and protein metabolism as well as the rumen bacterial environment in early lactation.

A obesidade, a resistência à insulina (RI), o diabetes e a hipertensão arterial (HA) estão associadas à maior morbidade e mortalidade cardiovascular. Os verdadeiros mecanismos relacionados com a RI bem como as associações metabólicas e alterações hemodinâmicas a essa condição não estão bem estabelecidos. Sabe-se que o aumento dos ácidos graxos livres (AGL) pode estar relacionado inclusive com as alterações hemodinâmicas como o aumento na pressão arterial (PA), na freqüência cardíaca (FC) e na redução da distensibilidade de pequenas artérias (piora da função endotelial). A infusão de Intralipidâ e heparina (ILH) é hoje um modelo de hiperlipidemia, que permite o aumento agudo de AGL na circulação sangüínea. O aumento da atividade do sistema nervoso simpático (SNS) tem sido apontado como possível mecanismo para parte das alterações hemodinâmicas decorrentes da hiperlipidemia aguda. O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto da injeção de insulina in bolus e da infusão de ILH na resposta hemodinâmica, metabólica e autonômica em pacientes portadores da doença de Chagas. Para tanto, foram utilizados12 pacientes portadores da doença de Chagas sem insuficiência cardíaca (grupo Ch) e 12 voluntários normais (grupo C), pareados para idade, sexo, raça, PA e FC. Os mesmos foram avaliados em condições basais e submetidos aos testes de tolerância à insulina (TTI) e de infusão de ILH. Durante o TTI foram realizadas medidas na PA, na FC e dosagens de glicemia, insulina e noradrenalina. No dia da infusão de ILH os registros da PA e da FC foram realizados batimento a batimento (Finometer®), colhido sangue para dosagens bioquímicas (glicose, insulina, noradrenalina) e realizado análise espectral em todos os participantes. Em condições basais, os níveis de noradrenalina eram superiores no grupo Ch, quando comparados com o grupo C. Após o TTI, houve queda significativa na glicose plasmática em ambos os grupos. A PA e a FC não se modificaram durante TTI no grupo Ch, e aumentaram significativamente no grupo C. Houve aumento dos níveis de noradrenalina plasmática no grupo C e discreta queda no grupo Ch. Em relação à de ILH, ela resultou em aumento na PA nos dois grupos. A FC aumentou no grupo Ch e não se modificou no grupo C. O componente de baixa freqüência (LF) era maior no grupo Ch em condições basais e aumentou em ambos os grupos durante a infusão de ILH. O componente de alta freqüência (HF) diminuiu nos dois grupos de maneira significativa, sendo menor no grupo Ch mesmo em condições basais. Não houve modificação significativa nos valores de noradrenalina plasmática no grupo Ch durante a infusão de ILH, a qual aumentou significativamente no grupo C. Esses dados mostram: Maior resposta da atividade simpática no grupo C durante o TTI pelo aumento da PA, da FC, dos valores de noradrenalina plasmática e a sensibilidade à insulina foi semelhante nos dois grupos, uma vez que a queda da glicose após o estímulo com bolus de insulina foi significante nos dois grupos. Aumento significativo da PA e da atividade simpática (avaliada pela análise espectral) nos dois grupos durante a infusão de ILH. Diminuição da atividade do componente de HF (parassimpático) nos dois grupos após a infusão de ILH. O comprometimento significativo da sensibilidade baroreflexa no grupo Ch após a infusão de ILH. Em conclusão, pacientes chagásicos têm maior concentração de noradrenalina em condição basal em relação ao grupo controle, porém a resposta na PA e na FC durante o TTI no grupo Ch foi menor, sugerindo disautonomia. A infusão de ILH resultou no aumento da PA em ambos os grupos e menor queda da FC no grupo Ch, sugerindo comprometimento do baroreflexo. / The obesity, insulin resistance (IR), diabetes and hypertension (HA) are associated with increased cardiovascular morbidity and mortality. The real mechanisms related to the RI and the associations of metabolic and hemodynamic changes to this condition are not well established. It is known that the increase in free fatty acids (FFA) may also be related to the hemodynamic changes as the increase in blood pressure (BP), heart rate (HR) and reducing the distensibility of small arteries (worsening of endothelial function). The infusion of Intralipid® and heparin (ILH) is today a model of acute hyperlipidemia, which allows the acute increase of FFA in the blood circulation. Increase in the nervous sympathetic activity system (SNS) has been suggested as a possible mechanism for part of hemodynamic changes resulting from acute hyperlipidemia. The purpose of this study was to evaluate the impact of the injection of bolus of insulin and the infusion of ILH in hemodynamic, metabolic, and autonomic response in patients with Chagas\' disease. Twelve patients with Chagas\' disease without heart failure (Ch group) and 12 normal volunteers (C group), matched for age, sex, race, BP, and HR were selected for this study. They were evaluated at baseline conditions and subjected to insulin tolerance test (ITT) and also ILH infusion. During the ITT measures of BP, HR, and biochemistry dosages as blood glucose, insulin and norepinephrine were taken. During the infusion of ILH the records of the BP and HR beat-to-beat (Finometer®) were done, blood samples were collected for biochemical dosages (glucose, insulin, noradrenalin) and spectral analysis was also conducted in all participants. In baseline conditions, norepinephrine levels were higher in the Ch group, compared with the C group. After ITT, there was significant fall in plasma glucose in both groups. The BP and HR did not change during the ITT in Ch group, and increased significantly in C group. There was an increase in plasma levels of norepinephrine in group C and slight fall in group Ch. The ILH infusion resulted in an increase in the BP in both groups. The HR increased in the Ch group and did not change in C Group. The component of low frequency (LF) was higher in group Ch in the baseline conditions and it increased in both groups during the ILH infusion. The component of high frequency (HF) decreased in both groups, and it was lower even in the Ch group even at baseline conditions. There was no significant change in the values of plasma norepinephrine in the group Ch during the ILH infusion, and it increased significantly in C group. These data show: Similar insulin response in both groups, according to the glucose drop. Higher increase in BP and HR in C Group in comparison to Ch group and higher increase in plasma norepinephrine in C group comparing to Cg group. Significant increase in BP and sympathetic activity (evaluated by spectral analysis) in both groups during the ILH infusion. Decrease in the HF component (parasympatethic activity) in both groups after ILH infusion. A significant baroreflex sensitivity impairment in the Ch group after the ILH infusion. In conclusion, chagasic patients have greater concentration of norepinephrine in baseline condition comparing to C group, but the response of BP and HR during the ITT in Ch group was lower, suggesting dysautonomia. The ILH infusion resulted in an increase on BP in both groups and also increased the HR in Ch group, suggesting baroreflex impairment.