O presente trabalho teve como objetivo estudar a morfologia e fisiologia reprodutiva de Lobotes surinamensis em ambiente natural, reunindo informações que permitam trabalhos aplicados na produção e conservação desta espécie. Machos e fêmeas adultos foram coletados na Baía da Ilha Grande, Rio de Janeiro durante a primavera (outubro-novembro-dezembro), verão (janeiro-fevereiro-março), outono (abril-maio-junho) e inverno (julho-agosto-setembro). Os perfis plasmáticos dos esteroides gonadais, 17β-estradiol (E2), 17-hidroxiprogesterona (17-OHP) e 11-cetotestosterona (11-KT) foram analisados em fêmeas, e a concentração de testosterona (T) e 11-KT nos machos. Análises histológicas das gônadas foram realizadas como uma ferramenta para avaliação morfológica, que foi corroborada com os dados fisiológicos, durante o ciclo reprodutivo. Foram analisadas ainda a expressão gênica hipofisária do fshβ e lhβ e a fecundidade relativa pelo número de oócitos desenvolvidos. Durante a primavera e verão, as fêmeas estavam com os ovários desenvolvidos e capazes de desovar, com oócitos vitelogênicos e desenvolvidos, e membrana radiata bem evidente. No outono e inverno, as fêmeas estavam se preparando para o período reprodutivo, com predomínio de ninhos de oogônias e oócitos perinucleolares de uma forma geral. A concentração plasmática de E2 se manteve elevada nas fêmeas durante a primavera em relação ao verão e outono/inverno. O perfil anual deste esteroide nas fêmeas de L. surinamensis pode ser relacionado com o grau de desenvolvimento do folículo ovariano, observado na histologia. Já a concentração plasmática de 11-KT foi inversa ao observado para o E2, com baixa concentração na primavera e tendência à elevação no inverno, corroborando com o papel da 11-KT no crescimento primário dos oócitos. A concentração plasmática de 17-OHP nas fêmeas não apresentou diferenças significativas entre as estações, o que sugere que este não seja o progestágeno ativo em teleósteos, mas sim o precursor do esteroide indutor da maturação final (MIS). Na primavera e no verão, o lhβ apresentou expressão maior do que no período outono/inverno em fêmeas, enquanto o fshβ se manteve com níveis de expressão constante durante todas as estações. Nos machos, a análise histológica dos testículos, mostrou que na primavera e no verão, os ductos espermáticos estavam preenchidos com espermatozoides, evidenciando o período de espermiação, já no período outono/inverno houve predominância de cistos de espermatogônias e as células em diferentes estágios de desenvolvimento, o que corresponde a uma fase de maturação inicial, ou seja, preparação para o período reprodutivo. A concentração plasmática de T nos machos se manteve estável ao longo das estações, já a concentração plasmática de 11-KT foi mais elevada na primavera quando comparada ao período outono/inverno. Na primavera e verão, a expressão de lhβ foi mais elevada que no período outono/inverno, enquanto de forma similar às fêmeas, os níveis de expressão de fshβ não se alteraram ao longo das estações. As análises de expressão destas gonadotropinas, associadas à concentração dos esteroides gonadais e à morfologia gonadal deixou evidente que o pico do período reprodutivo de L. surinamensis ocorre na primavera, estendendo-se até o verão / The present study aimed to study the morphology and reproductive physiology of Lobotes surinamensis in a natural environment, gathering information that allows applied works in the production and conservation of this species. Adult males and females were collected in the Baía da Ilha Grande, Rio de Janeiro during the spring (October-November-December), summer (January-February-March), autumn (April- May-June) and winter (July-August-September). Plasma profiles of gonadal steroids, 17β-estradiol (E2), 17-hydroxyprogesterone (17-OHP) and 11-ketotestosterone (11-KT) were analyzed in females, and the concentration of testosterone (T) and 11-KT in males. Histological analyzes of the gonads were performed as a tool for morphological evaluation, which was corroborated with the physiological data, during the reproductive cycle. The genetic expression of fshβ and lhβ and the relative fecundity by the number of developed oocytes were also analyzed. During spring and summer, the females had the ovaries developed and capable of spawning, with vitellogenic and developed oocytes, and a well evident radiata zone. In autumn and winter, females were preparing for the reproductive period, with a predominance of nest of oogonia and perinucleolar oocytes in general. The plasma concentration of E2 remained higher in females during the spring in relation to summer and autumn/winter. The annual profile of this steroid in L. surinamensis females may be related to the degree of development of the ovarian follicle observed in histology. The plasma concentration of 11-KT was inversely of that observed for E2, with a low concentration in the spring and a tendency to increase in winter/autumn, corroborating the role of 11-KT in the primary oocyte growth. The plasma concentration of 17-OHP in the females did not present significant differences between the seasons, suggesting that this is not the active progestogen in teleosts, but the precursor of the final maturation inducing steroid (MIS). In spring and summer, lhβ presented higher gene expression than in the autumn/winter period in females, while fshβ remained with constant expression levels during all seasons. In males, the histological analysis of the testicles showed that in the spring and summer, the sperm ducts were filled with spermatozoa, evidencing the period of spermiation, whereas in the autumn/winter period there was a predominance of cysts of spermatogonia and cells in different stages of. development, which corresponds to an initial maturation stage, that is, the preparation for the reproductive period. The plasma concentration of T in males remained stable throughout the seasons, whereas the plasma concentration of 11-KT was higher in the spring when compared to the autumn/winter period. In spring and summer, the expression of lhβ was higher than in the autumn/winter period, while similarly to females, fshβ expression levels did not change over the seasons. The analysis of the expression of these gonadotropin genes, associated with the concentration of gonadal steroids and gonadal morphology, made it evident that the peak of the reproductive period of L. surinamensis occurs in the spring, extending until the summer

A vasta maioria dos pinguins são aves de reprodução sazonal. O pinguim-de-Magalhães (Spheniscus magellanicus) forma colônias reprodutivas em latitudes superiores a 42º S no Chile, Argentina e Ilhas Malvinas/ Falklands, demonstrando comportamento sazonal como outras aves de clima temperado. Durante o inverno, os pinguins migram em direção ao norte, sendo frequentemente avistadas em águas brasileiras nas regiões sul e sudeste. Apesar de diversas instituições no Brasil abrigarem esta espécie de pinguim em seus plantéis, sua taxa reprodutiva em cativeiro é baixa e irregular em todo o país. Desde 2009, a Sabina Parque Escola do Conhecimento (Santo André SP) mantem um plantel de aproximadamente 20 pinguins que nunca apresentara histórico reprodutivo ou se quer sinais de acasalamento. Em 2012, um programa de luz mimetizando o fotoperiodo vivenciado pelas colonias reprodutivas in situ foi instaurado, e a resposta endócrino-comportamental de parte desse plantel (9 machos e 9 fêmeas) foi registrada. Com o início do programa de luz a população não apenas aumentou gradativamente o número de indivíduos pareados, como também iniciou a postura de ovos (férteis e inférteis) e a criação de filhotes. Oscilações nos esteróides fecais e comportamentos de machos e fêmeas com diferentes resultados reprodutivos são detalhadas para duas estações reprodutivas consecutivas (setembro a janeiro). De modo geral, os níveis hormonais no segundo ano de monitoramento foram mais altos, sugerindo uma infuência da idade sobre a secreção de esteróides sexuais. No segundo ano de avaliação, machos que obtiveram filhotes apresentaram concentrações de andrógenos fecais aparentemente mais elevadas que machos pareados sem ovos ou com ovos inférteis, mas similares aos machos despareados cujo os níveis mantiveram-se altos de outubro a janeiro. Não foi possível tirar conclusões sobre os padrões de secreção de progestégenos e estrógenos fecais nos machos monitorados. Nas fêmeas, aumentos nos níveis de andrógenos fecais foram notórios apenas nos indivíduos com ovos e sem filhotes. Elevações na secreção de progestágenos fecais em fêmeas despareadas ou sem postura não resultaram na produção de ovos, apesar desses aumentos serem compativeis àquelas observadas nas fêmeas com ovos ou filhotes. Adicionalmente, em outro período deste trabalho, uma falha mecânica no controle do fotoperíodo desencadeou na elevação do comprimento de luz durante os meses de inverno (24 horas luz/ dia de maio a agosto). Esta superexposição a luz artificial induziu comportamentos reprodutivos em três casais monitorados (inclusive com a postura de ovos por uma fêmea), além de induzir uma segunda muda quatro meses após a primeira muda. Estes achados demonstram a alta susceptibilidade da espécie aos programas de luz, e levantam a possibilidade de utilizar essa ferramenta não só para a estimular a reprodução em cativeiro, mas talvez para induzir uma segunda estação reprodutiva no ano ou reduzir o intervalo entre estações reprodutivas. Ambos desdobramentos possuem aplicabilidade na propagação de indivíduos da família Spheniscidae, a qual 60% das espécies é classificada em alguma categoria de ameaça da IUCN. / Most penguin´s species are seasonal breeders. Magellanic penguins have their breeding sites in Chile, Argentina and Malvinas/ Falklands Islands (42° S and higher latitudes), demonstrating their seasonal behavior as other birds from temperate zones. During the winter, penguins migrate north, and are commonly seen in waters from Brazilian south and southeast regions. Although many institutions keep magellanic penguins in Brazil, the breeding success among these birds is low and irregular all over the country. Since 2009, Sabina Park School of Knowledge (Santo André SP), maintain approximately 20 magellanic penguins without any breeding history or reproductive behavior. In 2012, a lighting program simulating the photoperiod of the penguins´ breeding sites in situ was initiated, and the endocrinal and behavioral responses from part of the animals (9 males and 9 females) was surveyed. After the lightning program started, there was not only a progressive rise in the number of paired animals, but also an outset of laying (fertile and infertile eggs) and raise of chicks. Fecal steroids and behaviors of males and females with different outcomings are exposed for two consecutive breeding seasons (September January). Generally, the hormonal levels of the second year monitored were higher, suggesting an influence of the animal´s maturity upon the sex steroids. On the second year´s evaluation, males with chicks apparently presented higher androgens levels as compared with males without eggs or with infertile eggs, but similar to non-paired males whose levels were high the from October to January. It was not possible to obtain any conclusions on progestogens nor estrogens secretions standards. Fecal androgens on females showed a notorious rise only in the paired without chick group. Rises on the secretion of fecal progestogens on females of the non-paired and without-laying groups did not progress to egg production, although the rises were compatible with the ones seen on females with-egg laying, and with-chicks. Father, on a different stage of this survey, a mechanic failure on the photoperiod control triggered an elevation on the light length during winter months (24 hours light/ day from May to August). This over exposition of artificial light induced reproductive behaviors on three surveyed animals (including an egg laying of one of the females), as well as induced a second molt four months after their annual molt. Those findings demonstrate the high susceptibility to lightning programs showed by this specie, also raise a possibility of using it as a tool, not only to stimulate captivity breeding, but also to induce a second breeding season during the year or decrease the breeding season interval. Both results have applicability on the conservation of Spheniscisdae individuals, which has 60% of species classified in endangered categories (IUCN)

A exibição do comportamento vocal em muitas espécies de anfíbios anuros é relacionada aos níveis de hormônios esteroides gonadais e interrenais. Esses hormônios poderiam mediar a relação entre intensidade de sinais e imunidade, pois estão envolvidos no desenvolvimento das características sexuais secundárias, comportamento de corte e mobilização de reservas energéticas durante a atividade reprodutiva, enquanto apresentam também efeitos imunomoduladores. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi explorar as relações entre comportamento reprodutivo, imunidade e níveis plasmáticos de testosterona e corticosterona em machos do sapo do semiárido brasileiro, Rhinella granulosa, em atividade reprodutiva e após manipulação hormonal. A precipitação foi o principal determinante ambiental para o aumento dos níveis de testosterona e corticosterona circulantes em machos de R. granulosa, estimulando o comportamento de vocalização. As relações fisiológicas encontradas indicam que os altos níveis plasmáticos de testosterona nos primeiros dias após a chuva devem promover o início do turno vocal, porém a corticosterona deve modular o esforço de vocalização. De forma geral, a exacerbação do comportamento vocal de R. granulosa tem efeitos negativos sobre a imunocompetência, porém alguns indivíduos que apresentam maiores concentrações plasmáticas de corticosterona apresentam concomitantemente alto esforço vocal e alta imunidade. De acordo, a aplicação transdérmica de corticosterona promoveu elevação aguda dos níveis plasmáticos deste glicocorticoide, bem como um aumento da função imune. Assim, apesar de a atenção principal ser comumente colocada no papel da testosterona na mediação de sinais honestos, nossos resultados corroboram a importância da corticosterona na mediação da expressão do comportamento de corte e imunocompetência em machos R. granulosa / In most anuran species, vocal behavior is usually related to plasmatic levels of gonadal and interrenal steroid hormones. These hormones could mediate the relationship between signal intensity and immunocompetence, since they are involved in the development of sexual traits, courtship behavior and energetic mobilization during reproductive activity and also exert immunomodulatory effects. The aim of this study was to explore relations among vocal behavior, immunity and plasmatic levels of testosterone and corticosterone in males of a toad species from Brazilian semi-arid, Rhinella granulosa, during reproductive activity and after hormonal manipulation. Precipitation was the main environmental determinant to increase circulating levels of testosterone and corticosterone in R. granulosa males, stimulating vocal behavior. Physiological relations indicate that high circulating testosterone levels in the days right after rain may promote the initiation of vocal behavior, while corticosterone may modulate vocal effort. In general, exacerbation of vocal behavior in R. granulosa has negative effects on immunocompetence, however, some individuals with higher plasmatic levels of corticosterone can present both high vocal effort and good immunocompetence. Corroborating this interpretation, acute increase in glucocorticoid plasmatic levels after hormonal manipulation was accompanied by raised immune function. Despite the emphasis on androgens influence on sexual selected male traits, our results corroborate greater influence of corticosterone in the mediation of expression of courtship behavior and immunocompetence in R. granulosa

O estabelecimento gestacional é determinado por interações entre o perfil endócrino e o trato reprodutivo materno. Eventos endócrinos são primariamente mediados pela ligação do hormônio a receptores específicos e subsequente transcrição de genes alvos. O endométrio bovino é um tecido dinâmico que passa por alterações espaço-temporais dirigidas pelos hormônios ovarianos, estradiol (E2) e progesterona (P4). A hipótese é que os efeitos combinados das concentrações plasmáticas de E2 e P4 à abundância tecidual de seus respectivos receptores estabelecem um “tônus de esteroides sexuais” que dirige funções do endométrio durante o período periovulatório em vacas. Os objetivos foram comparar diferentes tônus de esteroides na (1) expressão de receptores específicos e sua distribuição tecidual, (2) expressão de genes de resposta que regulam a função uterina, e (3) abundância e distribuição de mucina pelo epitélio, uma glicoproteína que indica pobre receptividade endometrial. Vacas Nelore (Bos indicus) foram farmacologicamente manipuladas para ovular um folículo pequeno (FP-CLP) ou grande (FG-CLG) e produzir, respectivamente, menores ou maiores concentrações plasmáticas de E2 no proestro e de P4 no diestro. O grupo FG-CLG representa um modelo de maior fertilidade. Tecido endometrial foi coletado através de biópsia transvaginal no dia zero (D0; FP-CLP, n=4; FG-CLG, n=5) e post mortem no D4 (n=8 por grupo; Experimento 1) ou D7 (FP-CLP, n=8; FG-CLG, n=9; Experimento 2) após indução da ovulação com GnRH. Para estudar a regulação endometrial dos receptores de esteroides, a abundância de transcritos para receptores nucleares e de membrana de esteroides foi mesurada por qPCR: receptor de estrógenos alpha (ESR1) e beta (ESR2), receptor de estrógeno acoplado a proteína G (GPER), receptor de P4 isoformas A (PGR1), B (PGR2) e C (PGR3), receptor de P4 componente de membrana 1 (PGRMC1) e 2 (PGRMC2). Genes previamente mostrados estarem envolvidos em vias de resposta ao E2 foram selecionados: GREB1, CCND1, WNT5a, FGF2 (proliferação), SERPINA14, LTF, NRIP1 (atividade secretória), MMP2 (remodelamento de matriz extracelular), AQP4 (transporte de água) e MUC1 (adesão celular). Os dados foram analisados por one-way ANOVA para efeito de tratamento. O tamanho do POF, subsequente CL, concentrações plasmáticas de E2 (D0) e P4 (D4 e D7) foram significativamente maiores no grupo FG-CLG. No D0, a abundância de mRNA para ESR1, PGR1, PGR2 e PGR3 foi significativamente maior no tecido endometrial de vacas do grupo FG-CLG. A abundância de transcritos envolvidos na proliferação e remodelamento de matriz extracelular sugeriu maior atividade proliferativa e remodelamento no endométrio do grupo FG-CLG no D0. No D4, a expressão de PGR1 e PGRMC2 foi menor no grupo FG-CLG. A abundância de mRNA para AQP4 foi maior no grupo FG-CLG e positivamente correlacionada com a concentração de E2 pré-ovulatório. No D7, a abundância de mRNA foi maior para ESR2, PGRMC1 e PGRMC2, e reduzida para PGR2 e PGR3 em vacas do grupo FG-CLG. Abundância de mRNA para OXTR e MUC1 foi menor neste grupo. Análise histológica de amostras endometriais revelaram que o sinal para mucinas anti-adesivas no epitélio do grupo FG-CLG foi consistentemente menor quando comparado ao grupo FP-CLP (33.3% vs. 62.0%) no D7. A menor expressão de mucinas transmembranas indica a condição receptiva do endométrio. Estes resultados confirmam que a complexa modulação da expressão dos receptores de esteroides pelo ambiente endócrino periovulatório altera a transcrição de genes alvos de maneira tempo-específica para regular a receptividade uterina ao embrião em desenvolvimento / Establishment of pregnancy depends on a well-balanced interplay between the endocrine profiles and the maternal reproductive tract. Endocrine actions are primarily mediated by binding to specific receptors and subsequent transcription of responsive genes. The bovine endometrium is a dynamic tissue that undergoes spatiotemporal functional changes directed by ovarian hormones, estradiol (E2) and progesterone (P4). Hypothesis is that the combined effects of plasma concentrations of E2 and P4 and tissue abundance of their respective receptors establish a “sex steroid tone” that directs endometrial function during the periovulatory period in cattle. Therefore, the aims were to compare different sex steroid tones on (1) steroid receptors gene expression and protein distribution, (2) expression of steroid responsive genes that regulate uterine function and (3) abundance and distribution of epithelial mucin, a glycoprotein that indicates poor endometrial receptivity. Nelore (Bos indicus) cows were pharmacologically manipulated to ovulate small (SFSCL) or large (LFLCL) follicles. Consequently, LF-LCL group was associated with greater proestrus concentrations of E2 and diestrus concentrations of P4, which were previously associated with greater receptivity and fertility. Endometrial tissue was collected by transvaginal biopsy on day zero (D0; SF-SCL, n=4; LF-LCL, n=5), and post mortem on D4 (n=8 per group; Experiment 1) or D7 (SF-SCL, n=8; LF-LCL, n=9; Experiment 2) after GnRH-induced ovulation. To study the regulation of endometrial steroid receptors, abundance of the following transcripts for nuclear and membrane receptor for steroids was measure by qPCR: estrogen receptor alpha (ESR1) and beta (ESR2), G protein-coupled estrogen receptor (GPER), progesterone receptor isoforms A (PGR1), B (PGR2) and C (PGR3), progesterone receptor membrane component 1 (PGRMC1) and 2 (PGRMC2). A subset of genes previously shown to be involved with estrogen-dependent pathways was also studied: GREB1, CCND1, WNT5a, FGF2 (proliferation), SERPINA14, LTF, NRIP1 (secretory activity), MMP2 (extracellular matrix remodeling), AQP4 (aqueous transport) and MUC1 (cell-adhesion pathways). Data were analyzed by one-way ANOVA for the effect of treatment. The POF, subsequent CL size, plasmatic E2 (D0) and P4 concentrations (D4 and D7) were significantly greater in the LFLCL group. On D0, the abundance of mRNA for ESR1, PGR1, PGR2 and PGR3 genes was significantly up-regulated in the endometrial tissue from LFLCL cows compared to the SFSCL counterparts. Abundance of transcripts for growth-related and extracellular matrix remodeling-related genes suggested greater proliferative and remodeling activity on LF-LCL than SF-SCL endometrial tissue at D0. On D4, expression of PGR1 and PGRMC2 was down-regulated in the LFLCL group. The AQP4 mRNA abundance was greater in LF-LCL group and it was positively correlated with preovulatory E2 concentration. On D7, mRNA abundance was greater for ESR2, PGRMC1 and PGRMC2, while it was reduced for PGR2 and PGR3 in the LF-LCL cows. Abundance of mRNA for secretory activity-related genes was increased in LF-LCL group. Abundance of mRNA for OXTR and MUC1 was down-regulated in the LF-LCL group. Histology of endometrial samples revealed that the signal for anti-adhesive mucin at the LF-LCL epithelium was consistently lower than that of the SF-SCL tissue (33.3% vs. 62.0%) at D7. A down-regulated expression of the transmembrane mucin indicates a receptive condition of the endometrium. These results confirm that complex modulation of receptor expression by the periovulatory steroid milieu alters transcription of responsive genes in a time-specific manner to regulate uterine receptivity to the developing embryo

A síntese dos hormônios esteroides é feita através da ação de um complexo enzimático chamado citocromo P450. As enzimas 3β-HSD (3β-hidroxiesteroide desidrogenase), P450c17 (citocromo P450 17α-hidroxilase/17,20-liase) e P450arom (citocromo P450 aromatase), fazem parte desse complexo e são responsáveis pela síntese dos hormônios progestágenos, andrógenos e estrógenos, espectivamente. Essas enzimas já foram identificadas em inúmeros tecidos, inclusive em embriões em período pré-implantação. Por isso, acredita-se que o blastocisto seja uma fonte de produção de progesterona e estrógeno, hormônios essenciais para implantação e manutenção da gestação. Em roedores, as informações sobre a capacidade esteroidogênica dos embriões são controversas e também restritas apenas a estudos com espécies laboratoriais. Para trazer mais informações sobre a capacidade esteroidogênica em blastocistos de roedores utilizamos o preá (Galea spixii), uma espécie de roedor silvestre encontrada nas regiões de Caatinga e Semiárido do Nordeste brasileiro e muito utilizado na alimentação de famílias de baixa renda como fonte proteica. Diante o exposto, o objetivo deste trabalho é fazer um apanhado histórico sobre os dados publicados a cerca da capacidade dos embriões de diversas espécies de produzir os hormônios esteroides além de identificar e quantificar a expressão das enzimas esteroidogênicas em embriões de preá através das técnicas de imunohistoquímica e PCR em tempo real. As análises morfológicas indicam que o desenvolvimento inicial do preá se assemelha com os demais roedores, porém o tempo de desenvolvimento difere das espécies usadas em laboratório. As marcações da imunohistoquímica foram positivas nos tecidos maternos, mas os embriões não tiveram marcação para nenhuma das três enzimas do estudo. No entanto, os dados obtidos pelo PCR indicam que os genes CYP11, CYP17 e CYP19 foram expressos nos embriões e, portanto, o concepto de G. spixii tem capacidade de produzir hormônios esteroides, assim como visto em várias outras espécies que já foram estudadas / The synthesis of steroid hormones is made through the action of an enzyme complex called cytochrome P450. 3β-HSD (3β-hydroxysteroid dehydrogenase), P450c17 (cytochrome P450 17 α-hydroxylase/17,20-lyase) and P450arom (cytochrome P450 aromatase), are present in this complex and are are responsible for the synthesis of progestins, androgens and estrogens hormones, respectively. These enzymes have been identified in numerous tissues, including embryos in pre-implantation period. Therefore, it is believed that the blastocyst is a source of production of progesterone and estrogen, hormones essential for the implementation and maintenance of pregnancy. In rodents, the information about the steroidogenic capacity of embryos are controversial and confined to studies with laboratory species. To get more information about the steroidogenic capacity in blastocysts of rodents we used the spix yellow-toothed cavy (Galea spixii), a species of wild rodent found in the northeastern of Brazil, and used in the feeding of low-income families as a source of protein. On the above, the aim of this work is to make a historic about the data published about the ability of embryos of various species to produce steroid hormones and identify and quantify the expression of steroidogenics enzymes in embryos of spix yellow-toothed cavy by immunohistochemical and real-time PCR techniques. The morphological analyses indicate that the G. spixii early development resembles other rodents, but development time differs from the species used in laboratory. The immunohistochemical stainning was positive in maternal tissues, but the embryos did not have stainnig for any of the three enzymes of the study. However, the data obtained by PCR indicate that CYP11, CYP17 and CYP19 genes were expressed in embryos and, therefore, the concept of G. spixii has capacity to produce steroid hormones, as seen in several other species that have been studied

Ministerio de Educación y Cultura, DGES (proyectos PB94-1514, PB97-0133); Generalitat Valenciana, Conselleria de Educació i Ciència (proyecto GV-C-CN-09-066-96)

O presente estudo avaliou a possibilidade de extração e dosagem de esteroides sexuais em amostras de gordura de carcaças e biópsias de baleia jubarte. A progesterona (P4), testosterona (T) e estradiol (E2) puderam ser dosados em todas as amostras pela técnica de enzimaimunoensaio. Amostras de carcaças foram utilizadas para validação da colheita. Uma série de experimentos foi realizada a fim de se avaliar: se o estado de decomposição da amostra altera os níveis hormonais; se os níveis de hormônios são diferentes em diferentes locais amostrados; se a profundidade de colheita (camadas externa, média e interna) altera os níveis hormonais; e finalmente o efeito do tamanho da amostra sobre as dosagens de hormônio. Todos estes elementos podem influenciar de maneira significativa a dosagem final. Também foram realizadas colheitas por meio de biópsias em 2011 e 2012 em área de reprodução no Atlântico Sul o Parque Nacional Marinho de Abrolhos e seu entorno; e em área de alimentação em 2011 e 2012 no Pacífico Sul o Parque Marino Francisco Coloane e seu entorno - localizado na Patagônia chilena. Como esperado, fêmeas apresentaram médias mais elevadas de P4 e E2 que machos, e machos apresentaram médias mais elevadas de T que fêmeas. Também foi observada sazonalidade reprodutiva com níveis mais elevados T em machos adultos em área de reprodução, especialmente nos meses de setembro e outubro. Os níveis de E2 em áreas de alimentação foram mais elevados que em área de reprodução tanto em machos quanto em fêmeas. Esta aparente inversão dos níveis de E2 com relação ao estado reprodutivo deve-se provavelmente ao tempo de metabolização deste hormônio na gordura. Algumas fêmeas adultas acompanhadas e desacompanhadas de filhotes apresentaram nível de P4 compatível com níveis de prenhez em outras espécies de cetáceos. Alguns dos animais biopsados tiveram seu comprimento corporal estimado através de fotogrametria. A menor fêmea acompanhada de filhote mediu 10.21 metros. Machos e fêmeas não apresentaram comprimentos corporais diferentes entre si, 12.96 e 12.04 metros, respectivamente. O tecido adiposo mostrou-se como uma matriz viável para dosagens de esteroides sexuais e estudos acerca da fisiologia reprodutiva de baleias de vida livre. A dosagem de hormônio da camada de gordura tem o potencial de indicar variações sazonais, estados de prenhez, picos de testosterona em machos, e diferenças entre machos e fêmeas. Quando combinada com comprimento corporal e história de vida, a dosagem hormonal pode promover informações ainda mais robustas acerca do estado reprodutivo dos indivíduos de determinada população. / The current study evaluated the possibility of extracting and measuring steroid hormones from the blubber of carcasses and living animals. Progesterone (P4), testosterone (T) and estradiol (E2) were successfully measured trough enzimaimunoassay technique. Stranded animals were sampled to validate the blubber collection. A set of experiments were performed: whether the state of decomposition of fat affects hormone levels; whether the body region from which samples were collected affects the levels of P4, E2, and T; whether the depth of the layer selected (outer, middle, inner) affects hormone levels; and finally the size of sample effect on hormone levels. All of these four elements can potentially alter the measurement final results. Also, biopsy sampling were done at a South Atlantic breeding Area, National Marine Park Abrolhos in 2011 and 2012; and in one feeding area, the Marine Park Francisco Coloane, locate at Chilean Patagonia. As expected females had higher P4 and E2 means compared to males, and males exhibited higher means of T than females. Also a reproductive seasonality was detected in E2 and T levels. T levels were higher in adult males during breeding season, especially in September and October. E2 were higher in both females and males during feeding season. This apparent inversion of E2 level to the reproductive condition is probably a result of the lag of the hormone from blood to blubber and the time for its metabolism to occur. Part of the adult females with calves and without calves had P4 levels similar to some pregnant cetacean species. Some of the biopsied animals had their body length estimated. The smallest female with calf had 10.21 meters. Males and females did not differ in total body length: 12.96 and 12.04 respectively. The bubbler showed to be a feasible biological matrix to measure sex hormones from free ranging humpback whales, and can indicate differences among sexes and reproductive states. When combined with total body length and life history, the hormone measurements can provide robust information on reproductive state of individuals.

Orientador: Sergio Ricardo Batlouni / Resumo: Nosso objetivo foi avaliar o efeito das diferentes densidades de estocagem e proporções sexuais sobre o desempenho reprodutivo da espécie Astyanax altiparanae em sistema semi-natural. Foram realizados dois experimentos distintos, para o primeiro objetivo testamos quatro densidades de estocagem (3; 6; 12; 24 indivíduos) com quatro réplicas, mantendo sempre a proporção sexual de dois machos para uma fêmea. Quando o efeito da proporção sexual foi avaliado, utilizamos cinco proporções diferentes (1:1; 2:1; 3:1; 1;2; 1:3; macho: fêmea) e dois controles com três repetições, respeitando a densidade de 12 indivíduos em cada unidade experimental. Em ambos os experimentos os tratamentos foram comparados pelo desempenho reprodutivo por meio de variáveis como: a sobrevivência dos reprodutores, a proporção de réplicas com desovas, o volume de desova, percentual médio de fêmeas desovadas por réplica, taxas de fertilidade e eclosão, número de embriões obtidos por tratamento, histologia dos ovários e concentrações plasmáticas dos esteroides sexuais. A densidade não influenciou de forma negativa no desempenho reprodutivo da espécie, sendo observados os melhores desempenhos para as variáveis: volume médio de desova considerando apenas as réplicas onde houve desova 131,50±33,17ml e no número médio de embriões viáveis 73819,2±20462,1, nas unidades com maior densidade (24) animais. Notamos desempenhos muito semelhantes quando as diferentes proporções foram testadas, sendo a variável volume relati... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Our objective was to evaluate the effect of different storage densities and sexual proportions on the reproductive performance of the species Astyanax altiparanae in a semi-natural system. Two different experiments were carried out. For the first objective, we tested four stocking densities (3; 6; 12; 24 individuals) with four replicates, always maintaining the sex ratio of two males to one female. When the sex ratio effect was evaluated, we used five different ratios (1: 1, 2: 1, 3: 1, 1, 2, 1: 3, male: female) and two controls with three replicates, respecting the density of 12 individuals in each experimental unit. In both experiments the treatments were compared by reproductive performance using variables such as: reproductive survival, proportion of replicates with spawning, spawning volume, mean percentage of spawned females per replicate, fertility and hatching rates, number treatment embryos, ovarian histology, and plasma steroid plasma concentrations. The density did not negatively influence the reproductive performance of the species, with the best performances for the variables: average spawning volume considering only spawning replicates of 131.50 ± 33.17 ml and the average number of viable embryos 73819.2 ± 20462.1, in the units with higher density (24) animals. We observed very similar performances when the different proportions were tested, being the relative variable spawning volume in which the proportion of (3 males: 1 female) was more efficient than the oth... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Este estudo experimental avaliou o efeito neuronal e comportamental da administração de dois esteroides anabolizantes androgênicos (EAA), Deposteron® (Cipionato de Testosterona) e Winstrol Depot® (Stanozolol), utilizados indiscriminadamente em academias em doses supra-fisiológicas. Através de extrapolação alométrica, doses foram administradas por via intraperitoneal (IP), 0,8mg/kg/dia de Deposteron® e 1,8mg/kg/dia de Winstrol Depot®, em camundongos machos e fêmeas da linhagem Swiss, estes foram comparados com animais controle tratados com solução salina (0,04mL). Os animais foram submetidos à natação durante o período do experimento, simulando uma possível atividade física. Através da análise de estimativa da densidade dos perfis de corpos celulares de neurônios, este estudo mostrou-se estatisticamente significativo, quanto à redução do número de corpos celulares neuronais, no hipotálamo lateral de machos e fêmeas, e na amígdala central de fêmeas, após administração de EAA, indicativo de que esses dois EAA podem gerar danos neuronais, prejudicando funções desempenhadas por estas estruturas cerebrais. As análises de comportamento agressivo foram realizadas pelo paradigma residente-intruso e não se mostraram estatisticamente significativas, entretanto todos os animais residentes tratados mostraram comportamento agressivo, além de uma postura submissa e neutra dos animais intrusos, em contrapartida, a uma postura dominante dos animais residentes. Contudo, este estudo apresenta grande relevância científica, devido à falta de estudos morfológicos quantitativos acerca dos EAA, mostrando que a uso abusivo de EAA levam a perda neuronal, e consequente perda de atividade, entretanto, mais estudos se fazem necessários, devido às controvérsias quanto à relação entre o uso de EAA e comportamento agressivo. / This experimental study evaluated the behavioral and neuronal effect of two Anabolic-Androgenic Steroids (AAS) administration, testosterone cypionate (Deposteron®) and stanozolol (Winstrol Depot®), which are indistinguishably used by gym customers in hyperphysiologic doses. Usingallometric extrapolation, intraperitoneal (IP) daily doses of 0.8mg/kgDeposteron® and 1.8mg/kg Winstrol Depot® were administered to male and female Swiss mice, in comparison to a control group treated with daily 0.04ml saline solution. All animals were submitted to swimming exercise during experiment time in order to simulate physical activity. By means of estimated profile analyses of neuron cell bodies density, results showed statistically significant decrease of neuron cell bodies number in lateral hypothalamus area of both male and female animalsaswell as in central amygdaloid area of female ones after AAS administration. The outcomes indicated that these two AAS can generate neuronal damage and impaired functions in these brain structures. Aggressive behavioral tests analyses were performed by resident-intruder paradigm and proved to be no statistically significant. Nevertheless, all resident-treated animals displayed an aggressive behavior; in contrast to a dominant attitude of resident animals, intruder ones presented themselves with a compliant and neutral attitude. For all that, we believe this study to be scientificallyimportant due to the scarcity of quantitative morphologic researches concerning AAS and it alsoshows that AAS abuse lead to neuronal loss and consequent activity impairment. In our opinion, further studies are necessary because of controversies about AAS use and aggressive behavior relationship.

O uso de esteroides anabólicos androgênicos (EAA), conhecidos popularmente como anabolizantes ou bomba, vem crescendo nos últimos anos, junto a este fato, temos uma crescente oferta de produtos falsificados. Esses fatores, quando combinados a uma educação de baixa qualidade, torna o Brasil um dos países entre os maiores consumidores de substâncias anabolizantes no mundo. Devido ao risco quando utilizados sem o devido acompanhamento médico, tais substâncias estão sendo continuamente estudadas, visando elucidar com dados empíricos seus reais efeitos deletérios e seus possíveis benefícios quando adequadamente utilizados, como no meio médico. O presente estudo analisou os efeitos de dois EAAs, vendidos no Brasil como Winstrol Depot® (Stanozolol) e Deposteron® (Cipionato de Testosterona) sobre a perda neuronal, através da estimativa da densidade de corpos celulares de neurônios em três regiões corticais (Límbica, Motora e Sensitiva) e três regiões hipocampais (CA1, CA2 e CA3), além da análise comportamental buscando alterações em parâmetros relacionados à ansiedade (Labirinto em Cruz Elevado - LCE), memória (Análise da Memória e Reconhecimento de Objetos) e atividade locomotora (Campo Aberto). Para isso, foram utilizados 60 camundongos da linhagem Swiss, sendo 30 machos e 30 fêmeas, vindos do Biotério Central da Universidade Federal de Alfenas. Os camundongos foram separados em três grupos: Controle e grupos experimentais Deposteron® e Winstrol Depot®, ambos com 20 animais cada, sendo 10 machos e 10 fêmeas por grupo. Os animais receberam os anabolizantes ou solução fisiológica duas vezes na semana (terças e quintas-feiras) e submetidos a 15 minutos de natação três vezes na semana (segundas, quartas e sextas-feiras), durante um mês. O peso dos animais foi aferido todas as segundas-feiras do período de tratamento. Após o término do tratamento os animais realizaram os testes comportamentais e foram sacrificados pela inalação do anestésico Alotano®, tiveram seus encéfalos retirados e estes foram armazenados em solução de formaldeído a 4% por três semanas. De cada encéfalo foram retiradas amostras homotípicas da região média do cérebro em cortes transversais para que pudéssemos avaliar as áreas estabelecidas para este estudo. Os resultados obtidos mostraram que houve uma redução na densidade dos perfis de corpos celulares de neurônios de todas as áreas corticais e hipocampais analisadas no grupo de fêmeas tratadas com Deposteron® e em algumas regiões (CA2 e CA3) no grupo de fêmeas tratadas com Winstrol Depot®, quando comparadas ao grupo Controle. Os resultados mostram também que houve redução na densidade dos perfis de corpos celulares de neurônios nos animais machos na área límbica e na região CA1 do hipocampo de ambos os grupos experimentais (Deposteron® e Winstrol Depot®). Os testes comportamentais revelaram que houve um aumento nos parâmetros relacionados à ansiedade e ao comportamento apático enquanto não houveram alterações relacionadas à atividade motora e à memória dos animais dos grupos experimentais. / The use of AAS (Anabolic-Androgenic Steroids), currently known as steroids or “roids”, has increased in the last years due to a growing bid of faked products. This fact, allied to a low-quality scholarship, put Brazil among the most anabolic-drug consuming countries in the world. Because of their use-risk without medical follow-up these drugs has being studied extensively in order to clarify by empiric data their actual harmful effects or potential benefits when properly used. The present study analyzed the effects of two AAS, sold in Brazil as Winstrol Depot® (stanozolol) and Deposteron® (testosterone cypionate), upon neuronal loss by means of estimated profile analysis of neuron cell bodies density in three cortical areas (limbic, motor and sensorial) and three hippocampal areas (CA1, CA2 and CA3), besides a behavioral analysis searching for changes in parameters related to anxiety (Elevated Plus Maze – EPM), memory (Memory Analysis and Object Recognition Memory) and motor activity (Open Field). For the experiment, we used 60 Swiss mice, 30 males and 30 females, which were divided into three groups: control, Deposteron®-treated, and Winstrol Depot®-treated, each one composed by 20 animals, 10 males and 10 females. The animals received AAS or saline solution twice a week (on Tuesdays and Thursdays) and were put on 15-minute swimming exercises thrice a week (on Mondays, Wednesdays and Fridays) for 30 days. After experiment-ending, the specimens accomplished behavioral tests and were euthanized by halothane inhalation. Their brains were withdrawn and stored in 4% paraformaldehyde solution for 12 hours. Homotypic cross-sections samples from each brain’s middle area were taken in order to evaluate the areas concerning our study. The results showed that there was a reduction in the estimated profile analysis of neuron cell bodies density of all cortical and hippocampal areas in female mice treated with Deposteron® and in hippocampal areas (CA2 and CA3) of female mice treated with Winstrol Depot® when compared to control group. A reduction in the estimated profile analysis of neuron cell bodies density was also displayed in limbic and hippocampal CA1 areas of male mice in both ASS-treated groups. Behavioral tests revealed that there was an increase in parameters related to anxiety and apathetic behavior while there were no detectable changes concerning motor activity or memory in AAS-treated animals on both groups. / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq