Orientador: Graziela Estela Fonseca Rodrigues / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Artes / Made available in DSpace on 2018-08-18T15:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teixeira_PaulaCaruso_M.pdf: 7176482 bytes, checksum: 389f0c10e77275f0d6b6f697c2b4a368 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Este trabalho tem por finalidade principal aprofundar o eixo co-habitar com a fonte do Método Bailarino-Pesquisador-Intérprete (BPI), a partir da pesquisa de campo da autora com os devotos da Dança de São Gonçalo do bairro rural Ponte Nova de Munhoz - MG e com os do bairro rural Fazenda Grande de Pouso Alegre - MG. O Método que será utilizado é o BPI, criado pela professora Graziela Rodrigues do Instituto de Artes (IA) da UNICAMP. Ele é um Método de pesquisa e de criação em Dança que possui três eixos fundamentais, que estão interligados: o inventário no corpo, o co-habitar com a fonte e a estruturação da personagem. O co-habitar com a fonte é o eixo no qual o núcleo das experiências do bailarino-pesquisador-intérprete realiza-se através da pesquisa de campo. O bailarino pesquisador-intérprete co-habita quando interage com o outro (o pesquisado) "até se sentir parte daquela paisagem investigada". O co-habitar ainda abrange análises práticas e teóricas do que se pesquisou (dos movimentos, dos sentidos e das paisagens-cenário, entre outros elementos), laboratórios e o aprofundamento do inventário no corpo do bailarino-pesquisador-intérprete. Durante um ano e meio, a autora co-habitou com os devotos no seu cotidiano (colheita da uva, feitura do vinho etc.) e no seu sagrado (Dança de São Gonçalo). A partir dos laboratórios do co-habitar, elaborou uma síntese prática, um 'roteiro de imagens, movimentos e sentidos', que foi apresentado aos investigados numa paisagem-cenário do co-habitar (no galpão onde se realiza a Dança de São Gonçalo em Pouso Alegre-MG). Após essas vivências, chegou a várias conclusões que confirmaram as características do eixo do co-habitar e do Método BPI. O co-habitar com a fonte potencializa a expressividade e a originalidade do bailarino pesquisador-intérprete iniciadas no eixo inventário no corpo (fase introdutória do BPI) / Abstract: This study is mainly aimed at going deeply into the co-inhabiting axis with the source of the BPI: Bailarino-Pesquisador-Intérprete (Dancer-Researcher-Interpreter) method, from the author's field research with Saint Gonçalo's Dance devotees from Ponte Nova de Munhoz - MG rural district and with the ones from Fazenda Grande de Pouso Alegre - MG. The method that will be used is BPI, created by professor Graziela Rodrigues from Instituto de Artes (IA) of Unicamp. It is a dance research and creation method that has three fundamental axis that are interconnected: the inventory in the body, co-inhabiting with the source and the character's structuring. Co-inhabiting with the source is the axis in which the dancer-researcher-interpreters experiences core is performed through the field research. The dancer-researcher-interpreter co-inhabits when he interacts with the other one (the researched) 'until he feels part of that investigated landscape'. Co-inhabiting still comprehends theoretical and practical analysis of what has been researched (about the movements, the senses and landscapes-scenery, among other elements), lab sessions and going deeply into inventory in the dancer-researcher-interpreter's body. For one year and a half, the author co-inhabited with the devotees in her everyday life (the grape harvest, making of the wine, etc) and in her sacred (Saint Gonçalo's Dance). As from the lab sessions, she prepared a practical summary, 'a guide of images, movements and senses', which was presented to the ones that were investigated in a landscape-scenery of co-inhabiting (at the shed where Saint Gonçalo's Dance is performed in Pouso Alegre - MG). After going through that, she drew several conclusions which have confirmed the characteristics of the co-inhabiting axis and the BPI method. Co-inhabiting with the source enhances the dancer-researcher-interpreter's expressiveness and originality which were started in the inventory in the body axis (BPI introductory stage) / Mestrado / Artes / Mestre em Artes

Orientadores: Marcos Antonio Machado, Alessandra Alves de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-24T04:53:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coqueiro_DanilaSouzaOliveira_D.pdf: 3034667 bytes, checksum: 7ce135c75da10c6b26032ec285344dc5 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Avaliou-se as alterações transcricionais em laranja 'Pera' (Citrus sinensis L. Osb.) promovidas por quitosana (CHI) e ácido salicílico (SA), utilizando RNA-seq, e o efeito destes compostos no controle do cancro cítrico (Xanthomonas citri subsp. citri) e da clorose variegada dos citros (CVC - Xylella fastidiosa). As plantas foram tratadas com CHI ou SA e após 48h e 24h, respectivamente, foram coletadas amostras foliares para avaliar seus transcriptomas. Para a avaliação dos eliciadores sobre o cancro cítrico e a CVC, as plantas foram tratadas com CHI ou SA e após 48h e 24h, respectivamente, inoculadas com as duas bactérias separadamente. A partir de 24h da inoculação, foram coletadas amostras foliares para avaliar a curva de crescimento de ambas as bactérias, a redução da severidade e/ou incidência das doenças e respostas de defesa da planta por RT-qPCR. Com os resultados do transcriptoma, observou-se que mais genes foram induzidos pelo tratamento com SA do que com CHI. O tratamento com SA aumentou a expressão de genes que participam da via de sinalização do SA na planta (WRKY50, PR2 e PR-9) e genes da biossíntese do etileno e ácido jasmônico (ACS 12, fator de transcrição contendo domínio AP2 e OPR3). Além disso, promoveu a indução de genes relacionados ao metabolismo secundário, processos redox e estresse biótico. No tratamento com CHI, foi observada maior indução de genes relacionados ao metabolismo secundário. Para ambos os tratamentos, a via da auxina foi reprimida. No experimento para controle do cancro cítrico, observou-se que ambos os eliciadores promoveram reduções na severidade e incidência da doença. Entretanto, a CHI pareceu não interferir diretamente na formação do biofilme pela bactéria, mas pode ter dificultado a multiplicação de X. citri na planta. O SA retardou a entrada da bactéria na planta e, aparentemente, inibiu mais a formação do biofilme bacteriano do que a CHI. Comparações da expressão gênica entre os eliciadores reforçam a ideia de que a CHI tem maior potencial de induzir resistência ao cancro cítrico do que SA. No experimento para o controle da CVC, observou-se que a CHI induziu importantes genes da via do SA (NPR1, TGA, EDS1) e etileno (EIN-3, PR-4) 24h após a inoculação. Aplicações exógenas de SA potencializaram o seu efeito endógeno na planta, pois houve indução de NPR1, TGA e PRs. Entretanto, não foi possível estabelecer uma relação clara entre a multiplicação de X. fastidiosa, a incidência da doença e o uso da CHI e SA em laranja 'Pera', já que na maioria das avaliações não houve redução da população bacteriana em amostras foliares e não houve redução da incidência em plantas tratadas. Com base nos resultados, observou-se que CHI e SA induziram diversos genes envolvidos em respostas de defesa em laranja 'Pera'. Entretanto, essas respostas podem ser moduladas diferencialmente a depender do patógeno que afeta a planta, pois os eliciadores foram eficientes no controle da X. citri, um patógeno que coloniza o mesófilo da planta, entretanto não foram efetivos no controle da X. fastidiosa, um patógeno que coloniza o xilema da planta, embora respostas de defesa tenham sido expressas nos momentos iniciais (24h) após a inoculação com X. fastidiosa / Abstract: This study was carried out to evaluate transcriptional modification in sweet orange 'Pera' (Citrus sinensis L. Osb.), promoted by chitosan (CHI) and salicylic acid (SA), using RNA-seq, and the effect of these compounds on citrus canker (Xanthomonas citri subsp. citri) and citrus variegated chlorosis (CVC - Xylella fastidiosa). Plants were treated with CHI or SA and after 48h and 24h, respectively, leaf samples were collected to assess the transcriptome. In the experiments for disease assessment, the plants were treated with CHI or SA and after 48h and 24h, respectively, inoculated. Starting from 24h after inoculation, leaf samples were collected to evaluate the multiplication of the pathogens (X. citri and X. fastidiosa), reduction of the severity and / or incidence and plant defense responses by RT-qPCR. Based upon the transcriptome results, it was observed that more genes were induced by SA than by CHI. SA treatment increased the expression of genes that participate in the SA signaling pathway in the plant (WRKY50, PR2 and-PR9), and genes involved in the biosynthesis of ethylene and jasmonic acid (ACS 12, transcription factor containing AP2 and OPR3 domain). Besides these, SA promoted induction of genes of secondary metabolism, redox processes and biotic stress. The treatment with CHI exhibited higher induction of genes related to secondary metabolism. For both treatments, the auxin pathway was suppressed. In the experiment for the control of citrus canker, it was observed that both elicitors reduced the severity and incidence of the disease. However, CHI seems not to interfere directly in biofilm formation, but may have hindered the multiplication of X. citri in the plant. The SA slowed down the entry of the bacteria into the plant and, apparently, inhibited the formation of biofilm more efficiently than the CHI. Comparisons of gene expression between elicitors reinforce the idea that CHI has higher potential to induce resistance to citrus canker than SA. In the experiment for the control of CVC, it was observed that the CHI induced important genes of the SA (NPR1, TGA, EDS1) and ethylene (EIN-3, PR-4) pathways 24h after inoculation. Exogenous applications of SA potentiated its endogenous effect in the plant, since there was induction of EDS-1, NPR1, TGA and PRs. However, it was not possible to establish a clear relationship between the multiplication of X. fastidiosa, the incidence of the disease and the use of CHI and SA in 'Pera' sweet orange, since most of the assessments did not show reduction of bacterial populations in leaf samples and there was no reduction of the incidence in treated plants. Based upon the results of this study, it was observed that CHI and SA induced several genes involved in defense responses in 'Pera' sweet orange. However, these responses can be modulated differentially depending on the pathogen that affects the plant. This fact was demonstrated in this study, as elicitors were effective in controlling X. citri, a pathogen that colonizes the mesophyll of the plant, but were not effective in controlling X. fastidiosa, a pathogen that colonizes the xylem of the plant, although defense responses were expressed in the early stages (24 h) after inoculation with X. fastidiosa / Doutorado / Bioquimica / Doutora em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : João Batista Freire da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Educação Fisica / Made available in DSpace on 2018-08-03T15:41:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Salgado_LuizCarlosDuarte_M.pdf: 3127352 bytes, checksum: 630ac36d21d715bd549817ee6718d766 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Esta dissertação é resultado da combinação de pesquisa bibliográfica com pesquisa de campo, tendo sido esta última realizada em um projeto de extensão universitária que objetivou colocar em prática uma pedagogia do movimento que tratasse o ser humano holisticamente. O projeto de extensão contou com 32 aulas que foram ministradas no espaço da Faculdade de Educação Física da UNICAMP, onde utilizamo-nos dos seus equipamentos e com a freqüência de duas vezes por semana. O grupo de alunos foi composto por trinta adultos de ambos os sexos com idade superior a 30 anos. Cada aluno pode vivenciar a ginástica, os jogos esportivizados, as lutas, a dança, e as brincadeiras da cultura infantil. O tema da pesquisa é a compreensão do porque a Educação Física escolar vivida pelos alunos não contribuiu de maneira significativa para que eles alcançassem uma compreensão melhor de suas possibilidades corporais, um conhecimento das diferentes atividades corporais que pudessem de alguma forma tomá-los pessoas mais saudáveis e sensíveis à percepção corporal. Um questionário foi aplicado no início e no final de cada semestre com o objetivo de identificar possíveis mudanças de compreensão e interesse pela atividade física. Ao final do projeto pude constatar que com uma pedagogia que considere questões como sensibilidade, prazer, informação, ludicidade, conhecimento é possível desenvolver em adultos um maior interesse pela atividade física e uma conseqüente vida mais saudável / Abstract: This work stems from a combination of bibliographic and field researches. The field research was performed as a graduate project with the objective of putting into practice a pedagogy of the movement that holistically treats the human being. This project included 32 classes at the Faculty of Physical Education at the State University of Campinas, where the faculty's equipments were used twice a week. The class consisted of 30 adults of both sexes, alI of them more than 30 years old. Each student could experience gymnastics, sport games, fights, dances and children's games from our culture. The research theme was the understanding of the reasons why Physical Education, as it is experienced by the students at schools, does not contribute in a significant manner to the achievement of a better understanding of their corporal possibilities, and to a knowledge of the different physical activities that could somehow make them more healthy individuaIs, sensitive to corporal perception. A questionnaire was applied at the beginning and at the end of each semester, in order to identify possible changes in comprehension and to increase the interest in physical activities. At the end of the project it was possible to conclude that, using a pedagogy that considers issues such as sensibility, pleasure, information, ludicity and knowledge, it is possible to develop in adults a greater interest in physical activity and a consequent healthier life / Mestrado / Mestre em Educação Física

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-07-12T15:47:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Gustavo Barbosa de Lima PPGG UFPE 2016.pdf: 2227933 bytes, checksum: 03616701d6dbf5994db493d4eb7b243c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T15:47:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Gustavo Barbosa de Lima PPGG UFPE 2016.pdf: 2227933 bytes, checksum: 03616701d6dbf5994db493d4eb7b243c (MD5) Previous issue date: 2016-03-09 / A família de protozoários tripanosomatídeos apresenta características moleculares diferenciadas dos demais eucariotos, onde a regulação da expressão gênica é feita principalmente em nível pós-transcricional. Como em outros eucariotos, acredita-se que a iniciação da tradução seja uma etapa crítica de controle pós-transcricional, onde atuam diferentes fatores de iniciação da tradução (eIFs). Nesta etapa os pontos centrais são o reconhecimento do mRNA maduro e o recrutamento do ribossomo para dar início ao processo, atividades realizadas pelo complexo eIF4F, formado por três subunidades: eIF4E, eIF4A e eIF4G. Nos tripanosomatídeos foram descritos seis homólogos de eIF4E, a proteína de ligação ao cap. Dois destes, EIF4E3 e EIF4E4, participam da formação de complexos envolvidos no processo de tradução e outros dois, EIF4E5 e EIF4E6, participam de novos complexos de função desconhecida. Destes quatro homólogos, o EIF4E4 já foi caracterizado, de forma que o presente trabalho visa contribuir para o entendimento da importância dos demais (EIF4E3, EIF4E5 e EIF4E6) na viabilidade e taxa de crescimento celular de Leishmania sp. Construções gênicas foram geradas de forma a permitir a deleção das duas cópias gênicas de cada proteína por meio da transfecção de Leishmania e seleção com antibióticos. As três proteínas, e mutantes do EIF4E3, foram ainda expressas em parasitas transgênicos para a realização de experimentos de complementação. Os resultados mostram que os baixos níveis de expressão de EF4E5 e EIF4E6 indicam que as três proteínas parecem ser importantes para a viabilidade celular com funções não sobrepostas. Sítios específicos no EIF4E3 foram também identificados de forma isolada como essenciais para a função da proteína e críticos para a sobrevivência do organismo. Os resultados obtidos neste trabalho mostram a importância do estudo do papel destes homólogos de eIF4E na síntese protéica, assim com seu papel na biologia celular de tripanossomatídeos. / The Trypanosomatid of protozoans display distinct molecular features not seen in other eukaryotes, where the regulation of gene expression is mainly performed at the post-transcriptional level. As in other eukaryotes, it is believed that the initiation of translation is a critical stage of post-transcriptional control, where different initiation factors (eIFs) are active. At this stage, critical steps are the recognition of the mature mRNA and the ribosome recruitment to start the process, activities of the eIF4F complex, consisting of three subunits: eIF4E, eIF4A and eIF4G. In trypanosomatids, six homologues of eIF4E, the cap binding protein, have been described. Two of these, EIF4E3 and EIF4E4, participate in the formation of complexes involved in the translation process and two others, EIF4E5 and EIF4E6, participate in new complexes of unknown function. Among these four homologues, EIF4E4 has been better characterized, so that the present work aims to contribute to the understanding of the remaining homologues (EIF4E3, EIF4E5 and EIF4E6) and study their importance for cell viability and growth rate of Leishmania species. Gene constructs were generated to allow deletion of the two gene copies of each protein by transfection of Leishmania cells and selection with antibiotics. The three proteins and EIF4E3 mutants were also expressed in transgenic parasites in order to carry out complementation experiments. The results show low levels of expression of EF4E5 and EIF4E6 and indicate that the three proteins appear to be important for cell viability with non-overlapping functions. EIF4E3 specific residues were also identified which are essential for the protein to the function and critical for the survival of the organism. The results of this study highlight the importance of the study on the role of eIF4E homologues in protein synthesis, as well as their role for the trypanosomatids cell biology.

Orientador: Joel Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Educação Fisica / Made available in DSpace on 2018-07-18T11:04:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Venancio_SoniaMariaDiaz_M.pdf: 3501342 bytes, checksum: acfcc2ffd99215171201c575d3c69552 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Este trabalho busca nos discursos dos professores de Educação Física, a expressão da consciência do "ser corpo". A procura foi pelo sentido não do que dizem as palavras mas o que se diz entre elas. o caminho percorrido foi feito com auxílio da metodologia qualitativa, por oferecer não só a possibilidade de ir ao encontro com o outro mas com ele procurar o significado do corpo. O que os discursos da Educação Física desvelaram foi o diálogo existente entre o signo corpo:homem e o signo não-corpo:homem e este diálogo é o próprio homem. Reflexão que sem dúvida torna-se um espaço vibrante sobre o qual se projetam um punhado de significações, todos buscando constituir uma nova figura - um núcleo de significados no ser humano / Abstract: This work tries to depict, through the speeches from Physical Education professors, what the body expression looks like. Special attention was given for the hidden meaning of the words in the discourse. Qualitative possibility it provides the subject methodology was used, as it offers not only the of being in contact with the subject, but also because means to understand and study what the body, which is of this work, really represents. The dialog between signs - body:men and no body:men was revealed in the speeches. This dialog is actually the man, and this opens an exciting space for reflection, where new meanings arise, trying to build a new picture of the intrinsic of the human being / Mestrado / Mestre em Educação Física

Orientador: Júlia Ziviani Vitiello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Artes / Made available in DSpace on 2018-08-26T18:55:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Alcofra_GabrielaMachadoFreireTournillon_M.pdf: 294618879 bytes, checksum: fae6acb0f30f5dfec9ffc00e22ec8eee (MD5) Alcofra_GabrielaMachadoFreireTournillon_M_Anexo.zip: 767065078 bytes, checksum: cc86a30656c51f5d02c32d09ec1a9d21 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Essa dissertação investiga a expressão do rosto na dança contemporânea, tendo como motivação inicial a observação de uma padronização da expressão do rosto em uma aparência neutralizada, sem tônus ou variação expressiva, em espetáculos variados apresentados no Rio de Janeiro em 2010. Divide-se em duas vertentes: na primeira faz uma contextualização histórica observando a relação entre expressão do rosto e expressividade do espetáculo de acordo com cada período histórico, indo desde o balé clássico até a dança contemporânea no Brasil, suas origens, heranças e influências; na segunda vertente faz relações entre o rosto como identidade do sujeito na sociedade e o rosto expresso na dança contemporânea, levantando associações entre o figurativo e o abstrato na dança e a experiência estética como ativador da presença cênica. A pesquisa é atravessada por laboratórios de criação em uma metodologia teórico-experimental, criando os espetáculos Movimento Sem Face e Dança sobre Nada e os vídeos Estudos para um Movimento sem Face / Abstract: This dissertation investigates the expression of the face in contemporary dance, having as initial motivation the observation of a standardization of the expression of the face in a neutralized appearance, without variation or expressive tone, in varied performances presented in Rio de Janeiro in 2010. It is divided into two parts: the first is a historical contextualization observing the relationship between facial expression and expressiveness of the show according to each historical period, ranging from classical ballet to contemporary dance in Brazil, its origins, influences and heritages; in the second strand makes relations between the face like the subject's identity in society and the face expressed in contemporary dance, raising associations between the figurative and the abstract in the dance and the aesthetic experience as activator of stage presence. The research is crossed by laboratories of creation in a theoretical-experimental methodology / Mestrado / Teatro, Dança e Performance / Mestra em Artes da Cena

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-11-23T13:25:53Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 803605 bytes, checksum: 9ec08b4e04571e5ee182d83cdd987654 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-23T13:25:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 803605 bytes, checksum: 9ec08b4e04571e5ee182d83cdd987654 (MD5) Previous issue date: 2018-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Aquaporinas são proteínas de membrana responsáveis pelo transporte de água através das membranas celulares. Estas proteínas são encontradas e amplamente investigadas em insetos, porém pouco estudadas em Apis mellifera. As regiões do sistema digestório e os túbulos de Malpighi dos insetos expressam aquaporinas, o que aumenta a permeabilidade natural dos tecidos e a velocidade do transporte de água. Neste estudo foi avaliado o nível de expressão de cinco genes preditos para aquaporinas, que apresentaram diferentes níveis de expressão nos órgãos do sistema digestório – papo, intestino médio, íleo e reto – e túbulos de Malpighi de abelhas forrageiras. O gene Am_Eglp 1 apresentou maior expressão relativa no intestino médio, e a hibridização in situ confirmou a presença de RNA mensageiro para este gene em todas as regiões investigadas. Além disso, o ensaio de absorção de água, após a expressão heteróloga de Am_Eglp 1 em ovócitos de Xenopus laevis, comprovou que o gene da aquaporina codifica para uma proteína funcional, capaz de transportar água e que é bloqueada por mercúrio. Este foi o primeiro relato da funcionalidade de uma aquaporina de abelhas, que atua principalmente no intestino médio, aumentando a permeabilidade à água nas membranas da região. / Aquaporins are membrane proteins responsible for water transport through cell membranes. These proteins are found and widely investigated in insects, but still little studied in Apis mellifera. In insects, digestive tract and Malpighian tubules express aquaporin, increasing the natural permeability of tissues and the speed of water transport. In this study five predicted aquaporin genes had their expression level evaluated in forager honey bees, which presented different expression on digestive tract organs – crop, midgut, ileum and rectum – and Malpighian tubules. Am_Eglp 1 showed higher relative expression level in the midgut, and in situ hybridization confirmed the presence of mRNA to this gene in every organ evaluated. In addition, heterologous expression of Am_Eglp 1 was performed in Xenopus laevis oocytes, followed by water uptake assay, demonstrating that this gene encodes for a functional aquaporin, capable of transporting water and blocked by mercury. This was the first time a honey bee aquaporin was tested, and the results suggest that Am_Eglp 1 plays an important role on increasing membrane water permeability, mainly on A. mellifera midgut.

Os gliomas são os tumores mais fatais do sistema nervoso central, para os quais ainda não há tratamento eficaz. Para analisar as bases celulares e moleculares da ação do agente diferenciador e antitumoral ácido retinóico (ATRA) sobre gliomas, foi utilizado, como modelo, a linhagem STl de glioma de rato. Propôs-se: a) analisar os efeitos de ATRA sobre a morfologia, proliferação e morte celular; b) isolar, identificar e caracterizar genes induzidos por ATRA em células STl. Verificou-se que o tratamento com ATRA promove achatamento celular e inibição da síntese de DNA e do crescimento em suspensão de agarose, caracterizando uma completa reversão fenotípica tumoral-normal, a qual não é acompanhada de indução de apoptose. Os genes induzidos por ATRA foram isolados através da construção de bibliotecas subtraídas de cDNA por: RDA (\"Representational Diference Analysis\") e SSH (\"Suppressive Subtractive Hybridization\") acoplados a rastreamento em \"macroarrays\". Foram identificados 10 genes regulados por ATRA durante a reversão fenotípica das células STl: p450rai2, spi3, vegf, cdv-3a, okl38, eya2, gem, retSDR1, aldose redutase-like, e um gene novo, com 61 % de identidade com uma fosfatase de galinha. Este estudo permitiu a caracterização dos efeitos de ATRA sobre STl e identificou novos alvos para futuro desenvolvimento de novas drogas e terapia gênica. / Gliomas are the most fatal central nervous system tumors, for which efficient treatment is still not available. To analyze the cellular and molecular bases for the action of the differentiating and anti-tumor agent retinoic acid (ATRA) in gliomas, the rat glioma STl cell line was used as a model. We proposed: a) to analyze the effects of ATRA in STl cells morphology, growth and apoptosis; b) to isolate, identify and characterize the ATRA-induced genes in STl cells. We demonstrated that ATRA promotes cellular flattening and inhibition of DNA synthesis and growth in agarose suspension, characterizing a complete tumoral to normal phenotypic reversion, which is not accompanied by apoptosis. Subtracted cDNA libraries were generated, using 2 different methodologies: RDA (Representational Difference Analysis) and SSH (Suppressive Subtractive Hybridization) followed by macroarray screening. This allowed identification of 10 ATRA induced genes which are up regulated by ATRA during STl cells phenotypic reversion, namely: p450rai2, spi3, vegf, cdv-3a, okl38, eya2, gem, retSDR1, aldose redutase-like and a new gene with 61 % identity with chicken phosphatase. This study characterized the cellular and molecular effects of ATRA upon STl cells and allowed identification of new targets for future development of new drugs and gene therapy.

O camundongo mdx, modelo murino para a Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) possui uma mutação de ponto no gene da distrofina que resulta na ausência da proteína no músculo, porém seu fenótipo é brando o que o torna um bom modelo genético e molecular, mas não um bom modelo funcional. Esperando obter um modelo para DMD que tivesse um fenótipo mais fiel ao apresentado pelos pacientes humanos, optou-se por transferir a mutação mdx para o background 129/Sv. Através de cruzamentos sucessivos foram obtidas 3 gerações de animais mdx com background 129/Sv (mdx129) e cada geração foi avaliada funcionalmente por 6 meses. Desde a primeira geração é possível observar que os animais mdx129 são mais fortes do que os mdx originais em background C57BL (mdxC57BL), sendo o oposto do esperado no início dos experimentos. O estudo então foi redirecionado para tentar entender o motivo dessa melhora. Em relação ao padrão histológico, em geral há diferenças entre o mdxC57BL e mdx129. Observa-se também que os animais mdx129 entram no processo de degeneração mais tardiamente que os animais mdxC57BL e seu processo de regeneração se estende por mais tempo. Através de estudos de microarray foi possível observar que os animais 129/Sv apresentam poucos genes diferencialmente expressos (GDEs) em relação aos animais C57BL, portanto os dois backgrounds são muito semelhantes. O mdxC57BL apresenta muito mais GDEs em relação ao seu selvagem (C57BL) do que o mdx129 em relação ao 129/Sv, entretanto, ambos os modelos apresentam mais genes superexpressos do que subexpressos, indicando que as alterações distróficas e regenerativas estão mais associadas com a ativação do que a repressão de genes. Quando os GDEs de ambos os modelos de mdx são distribuídos em categorias funcionais, há o predomínio de genes ligados ao sistema imune e quando essa categoria é omitida para melhor visualização das restantes, observa se que ambos os modelos apresentam categorias funcionais semelhantes, porém com proporções diferentes. No modelo mdx129 se destaca a diminuição da participação da categoria de rota endo/exocítica (tráfego de vesículas) e homeostase e aumento da participação das categorias de matiz extracelular e atividade enzimática. Cada modelo apresenta genes exclusivos, destacando os genes SPP1 e IL1RN na comparação 129/Sv x mdx129F3. O gene SPP1 codifica a proteína osteopontina (OPN) e o polimorfismo rs28357094 neste gene é utilizado como biomarcador de prognóstico para DMD. O papel da OPN na progressão da distrofia não é bem conhecido. Alguns estudos afirmam que a ausência dessa proteína melhora a força muscular de camundongos mdx, enquanto outros apontam que sua participação é necessária para a regeneração muscular. Assim sendo, mais estudos serão necessários para verificar qual seria a via responsável pela melhora fenotípica do modelo mdx129. Já o gene IL1RN codifica a proteína IL-1Ra, a qual é um antagonista de interleucina 1 (citocina pró-inflamatória e pró fibrótica). Portanto o aumento da expressão do gene de seu antagonista sugere que os animais mdx129F3 podem estar mais protegidos do processo inflamatório causado por essas moléculas. Quando analisadas as listas filtradas para músculo esquelético das comparações C57BL x mdxC57BL e 129/Sv x mdx129F3 para a formação de vias metabólicas, foi gerada apenas uma via em ambas as comparações com número relevante de moléculas. A via gerada pela análise da lista C57BL x mdxC57BL possui mais moléculas do que a via gerada pela analise da lista 129/Sv x mdx129F3, porém, todas as moléculas presentes nesta via, estão presentes na via C57BL x mdxC57BL, indicando que mesmo com número diferente de moléculas envolvidas, os genes participam das mesmas vias. Tanto a comparação de cada geração de mdx129 com o 129/Sv como a comparação das gerações entre si mostram que os efeitos da mudança de background estão presentes desde a primeira geração e não se alteram significativamente com os cruzamentos sucessivos. / The mdx mouse, murine model for Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) has a point mutation in the dystrophin gene that results in the absence of the protein in the muscle, however its phenotype is mild, which makes it a good genetic and molecular model, but not a good functional model. Hoping to obtain a model for DMD with a phenotype that is more similar the patients\', it was chosen to transfer the mdx mutation to the 129/Sv background. Through successive breedings, 3 generations of mdx animals with 129/Sv background were obtained and each generation was functionally evaluated for 6 months. Since the first generation it is possible to observe that the mdx129 animals are stronger than the original mdx with C57BL background. The results were the opposite of what was expected in the beginning of the experiments, therefore the study was redirectioned to try to understand the reason of the improved phenotype. About the general histological pattern, there are differences between mdxC57BL and mdx129. It can be observed that the mdx129 animals enter the degenerative process later than the mdxC57BL animals and the regenerative process lasts longer. Through microarray studies it was possible to observe that the 129/Sv animals present few differentially expressed genes (DEGs) in comparison to the C57BL animals; therefore both backgrounds are very similar. The mdxC57BL presents many more DEGs in comparison to C57BL than mdx129 in comparison to 129/Sv, however both models present more super expressed genes than sub expressed, indicating that the dystrophic and regenerative alterations are more associated to the activation rather than the repression of genes. When the DEGs of both mdx models are distributed in functional categories, there is the predominance of genes related to the immune system and when this category is omitted for the better visualization of the remaining, it can be observed that both models present similar functional categories, but with different proportions. In the mdx129 model we can highlight the decrease in participation of the endo/exocytic pathway (vesicle traffic) and homeostasis categories, and increase in participation of the extracellular matrix and enzymatic activity categories. Each model presents exclusive genes, highlighting SPP1 and IL1RN in the comparison 129/Sv x mdx129F3. SPP1 encodes the protein osteopontina (OPN) and the polymorphism rs28357094 in this gene is used as a DMD prognostic biomarker. The role of OPN in the dystrophy progression is not well known. Some studies claim that the absence of OPN increases the muscle strength of the mdx mouse, while others indicate that its participation is necessary to muscle regeneration. More studies are needed to ascertain what pathway is responsible for the phenotypic improvement of the mdx129 model. The IL1RN gene encodes the protein IL-1Ra, and interleukin 1 antagonist, which is a pro-inflammatory and pro-fibrotic cytokine. Therefore, the increase in the expression of its antagonist suggests that the mdx129F3 animals may be more protected from the inflammatory process caused by these molecules. When the filtered lists for skeletal muscle of the comparisons C57BL x mdxC57BL e 129/Sv x mdx129F3 were analyzed for the formation of metabolic pathways, only one pathway was generated in both comparisons. The pathway generated in the analysis C57BL x mdxC57BL has more molecules that the one generated by the 129/Sv x mdx129F3 list, but all molecules present in the latter are also present in the former, indicating that even with different numbers of molecules involved, the genes participate in the same pathways. The comparisons of each generation of mdx129 with the 129/Sv and the comparison of the generations among each other show that the effects of the background change are present since the first generation and are not altered with the successive breedings.

O objetivo inicial deste trabalho foi estudar a expressão de genes regulados por cAMP durante o desenvolvimento do eucarioto inferior Dictyostelium discoideum. Foram analisados vários clones de uma biblioteca de cDNA construída a partir de mRNAs de células estimuladas com cAMP. A análise de um destes clones revelou que este codificava para a proteína de adesão celular gp80, que é expressa durante a fase de agregação no início do desenvolvimento. A regulação da expressão do gene da gp80 foi então estudada. Baixas concentrações de cAMP induzem o aparecimento de mRNA para gp80. A indução ocorre via o receptor de cAMP da superfície celular, e por um mecanismo que não envolve mudanças de cAMP intracelular. Por outro lado, altas concentrações de cAMP, que levam à \"down-regulation\" do receptor de cAMP, causam uma rápida desestabilização do mRNA para gp80 em células competentes para agregação. O mecanismo pelo qual cAMP em altas concentrações desestabiliza o mRNA para gp80 foi investigado. Foi observado que este tratamento, também causa um aumento da tomada de Ca2+. Devido à esta observação, nós procuramos um papel para Ca2+ como um mensageiro secundário na degradação do mRNA para gp80. Mudanças nos níveis de mRNA foram examinadas após tratamento das células com compostos que alteram a concentração intracelular de Ca2+. A soma dos dados sugere que um influxo de cálcio através da membrana celular, em oposição à liberação de cálcio de compartimentos intracelulares, ativa a degradação do mRNA para gp80. Além disso, incubação das células com um inibidor da proteína quinase C previne parcialmente a ação do cAMP, sugerindo um papel para proteína quinase C neste fenômeno. A regulação por cAMP da estabilidade do mRNA para gp80 foi também estudada durante o crescimento vegetativo de uma linhagem de D. discoideum que expressa constitutivamente o cDNA para gp80. Os resultados indicam que, assim como as células da fase de agregação, as células da fase de crescimento também possuem os elementos necessários para degradar a mensagem para gp80 em resposta a um aumento na concentração intracelular de cálcio. Contudo, estas células não são capazes de degradar a mensagem em resposta a altas concentrações de cAMP. / The initial goal of the present work was the study of gene expression regulated by cAMP in Dictyostelium discoideum development. For this, several cDNA clones, from a Iibrary constructed using mRNA of cells stimulated with cAMP, were analyzed. Analysis of one of this clones showed that it corresponded to gp80, a cell adhesion molecule expressed during cell aggregation in early development. gp80 gene regulation was then studied. Low concentrations of cAMP induces gp80 mRNA expression. The induction seems to be via the cell surface cAMP receptor and by a mechanism that does not involve changes in intracellular cAMP. Interestingly, high concentrations of cAMP, which down-regulate the cell surface cAMP receptor, elicit destabilization of gp80 mRNA in agregation competent cells. The mechanism by which high concentrations of cAMP selectively destabilize the gp80 mRNA was investigated. This treatment which leads to down-regulation of the cAMP receptor was found to also cause an increase in calcium uptake. Given this observation, we sought a role for calcium as a second messenger in the degradation of the gp80 mRNA. Changes in the mRNA leveis were examined after treating cells with compounds known to alter the intracellular Ca2+ concentrations. The sum of the data suggest that it is the cAMP-induced influx of Ca2+ across the plasma membrane, as apposed to a cAMP-mediated release of Ca2+ from intracellular stores, that initiates gp80 mRNA degradation. Also, cell incubation with staurosporin partially prevents the action of cAMP, implicating a possible role of protein kinase C. Regulation by cAMP of the message stability during vegetative growth was also studied in cells which constitutively express the gp8ü cDNA. The results indicate that like aggregation competent cells, these cells are able to evoque destabilization of the mRNA in response to a raise in intracellular calcium concentration. However, they are unable to induce the mRNA degradation after cAMP treatment.