Thesis (Ph.D. in Immunology) -- University of Colorado at Denver and Health Sciences Center, 2006. / Typescript. Includes bibliographical references (leaves 151-168). Free to UCDHSC affiliates. Online version available via ProQuest Digital Dissertations;

In 2011 there were an estimated 3.9 million orphaned children in South Africa, many of them orphaned by HIV/AIDS. These children are at high risk for developing psychosocial and mental health problems. The National Strategy for the care of orphans and other vulnerable children (OVCs) recognizes the importance of psychosocial support but there are few specific guidelines on best practice and little research on the effectiveness of psychosocial support programs. There is even less research capturing the perspectives of front-line staff and caregivers. This master’s thesis project conducted a case study of an NGO that provides foster care for OVCs in the Western Cape of South Africa. Semi-structured interviews were carried out with 14 foster mothers, four social workers and one administrator of the HomeFromHome organization. Interviews explored the experiences, opinions and concerns of participants regarding psychosocial support and the respondents’ views on the (1) main challenges they face in providing psychosocial support (2) what they see as the most effective forms of support and (3) their recommendations for policy changes. Responses highlighted the psychosocial challenges faced by OVCs, those caring for children, and program staff. The research findings support the existing literature, which promotes psychosocial support as essential for orphaned, and vulnerable children. This case study found that HomeFromHome social workers, foster mothers and administration want increased levels of psychosocial support for both children and caregivers. Respondents identified foster mothers and a primary loving caregiver as the most significant form and source of psychosocial support for the children. An analysis of the participant responses identified several areas that warrant further investigation for future policy and program development. These include: the different forms of alternative childcare, the role of the community and the church, the gap between policy and implementation, gendered issues, the aging out process, and issues concerning biological families.

This study aims to study how different positions in Arbetsförmedlingen perceive the Innovative interplay. The Innovative interplay includes the components of the Creative climate dimensions; Idea time, Idea support, Challenge/participation, and the successful behaviours of; Questioning and Experimenting. These conditions together, can increase creativity in an initial phase of the innovation process. This is a quantitative cross-sectional study with a comparable design that uses and is based on already established research that includes creativity and innovation. The study has constructed a model development regarding the Innovative interplay that can be implemented in the Development process at Arbetsförmedlingen, which can be used as a complement during the initial phase of an innovation process. / Denna studie ämnar undersöka hur olika positioner inom Arbetsförmedlingen uppfattar det Innovativa samspelet. Det Innovativa Samspelet utgör komponenterna av de Kreativa klimatdimensionerna; Idétid, Idéstöd, Utmaning/deltagande och de framgångsrika beteendena av; Ifrågasätta och Experimentera. Dessa kan tillsammans öka förutsättningar för kreativitet i en initial fas av innovationsprocessen. Detta är en kvantitativ tvärsnittsstudie med en jämförande design som använder och utgår från tidigare forskares etablerade studier som berör kreativitet och innovation. Studien har konstruerat en modellutveckling kring det Innovativa samspelet som kan implementeras i Arbetsförmedlingens Utvecklingsprocess, och som kan användas som komplement under den initiala fasen av en innovationsprocess.

<p>  </p> <p>Biosynthesis of fatty acids and specialized metabolites, such as polyketides, is dependent on the C-C bond forming enzymatic activity of carboxylases and <u>k</u>eto<u>s</u>ynthases (KS). Carboxylases and KS perform complex carbon-carbon bond forming reactions via a ping-pong mechanism; the catalytic interactions of which are still unclear. The KS reaction involves the Claisen condensation of an acylated enzyme with a malonyl-thioester, driven forward by the energy of the malonyl-thioester decarboxylation. Similarly, the carboxylase proceeds via a carboxyl-biotin-enzyme intermediate, and a subsequent C-C bond forming reaction. Engineering the substrate specificity of these enzyme involved in producing polyketides is sought after for the purpose of producing novel, derivative polyketides. These derivative polyketides may have serve as effective new antibiotics, of which discovery has waned. Unfortunately, incomplete understanding of protein-protein interactions, conformational changes, and substrate orientation in catalysis leads to not well informed engineering attempts. A challenge in deducing the catalytic details of enzymes acting on malonyl-thioesters in general is the hyper-reactivity of their β-ketoacid and thioester substrates, which are prone to hydrolysis and decarboxylation. Many structures of malonyl-CoA bound enzymes feature hydrolysis of the thioester, preventing determination of enzyme:substrate interactions in structure-function studies. To work around this problem of innate reactivity, groups have synthesized a variety of acyl-thioester analogs for probing the details of enzyme catalysis with mixed success. The success of these enzyme:analog mechanistic studies appears to hinge upon the similarity of the analog to the natural substrate. Here, we demonstrate the synthesis of near-natural, acyl-thioester analogs, featuring single atom substitutions. Using a novel UV-vis assay, we have determined <em>K</em>i values of our analogs with paradigmatic KSs <em>E. coli</em> FabH. These <em>K</em>i values are marginally higher than the substrate <em>K</em>m values, suggesting the KSs bind the analogs as they would natural substrates. Using this information, we have conducted preliminary X-ray crystallography experiments to determine the carboxylase:analog and KS:analog catalytic interactions, which will allow for new insight into debated C-C bond forming catalytic details. The information presented in this thesis and additional studies on protein-protein interactions can be leveraged into informed engineering studies of PKS enzymes.</p>

Vätskekromatografi är vanligt förekommande metod för separationer av molekyler inom bioteknik. Det finns inom begreppet vätskekromatografi många olika tekniker och vilken specifik teknik som är mest lämplig för en given separation beror på egenskaperna hos den avsedda målmolekylen. Egenskaper för vilka målmolekyler kan separeras är bland annat storlek, laddning och affinitetsintreaktioner. Porositeten är i den stationära fasen en avgörande egenskap, eftersom porernas tillgänglighet påverkar den stationära fasens tillgängliga yta. Således är förmågan att bestämma porositeten en avgörande aspekt vid tillverkningen av den stationära fasen. Agaros utgör ofta den stationära fasen, på grund av modifieringsmöjligheterna hos polysackaridkedjorna.  Bio-Works Workbeads 40/1000 SEC är agarbaserade pärlor för den stationär fas i storleksutslutningskromatografi. Pärlorna är tvärbundna två gånger för att få tillräcklig styvhet och för att uppnå en önskad fördelningskoefficient. Det första tvärbindningssteget bestämmer strukturen på pärlorna och därmed porositeten, medan det andra tvärbindningssteget försäkrar att pärlorna får tillräcklig styvhet. För produkten Workbeads 40/1000 är de önskade fördelningskoefficienterna mellan 0,2-0,35 för thyroglobulin, 0,62-0,75 för albumin (från äggvita) och 0,85-0,95 för ribonukleas A. För att bestämma förhållandet mellan koncentrationerna av reaktanterna NaOH och allylbromid i den första tvärbindningen och de resulterande egenskaperna hos den stationära fasen (fördelningskoefficienter, styvhet och porstorlek) ändrades koncentrationerna av reaktanterna i den första tvärbindningen. Samtliga resulterande pärlorna med de ändrade koncentrationerna analyserades med hjälp av en ÄKTAexplorer. Pärlornas styvhet bestämdes genom att analysera kraschflödet i den packade bädden. Det fanns inga tecken på några skillnader mellan de tillverkade pärlproverna. De icke-specifika interaktionerna analyserades genom att jämföra fördelningskoefficienterna i en standard PBS-buffert med en hög saltkoncentrationsbuffert. Polaritetsförändringen i den mobila fasen kan påverka de icke-specifika interaktionerna eftersom hydrofobiska interaktioner då främjas. Fördelningskoefficienternas kurvor jämfördes också för att analysera likheter och skillnader för olika proteiner. Skillnader i formen på fördelningskoefficientkurvorna kan innebära att porstorleken inte är den enda bidragsfaktorn till skillnaderna i fördelningskoefficienterna. Därför kan skillnaden innebära effekter av icke-specifika interaktioner och det fanns det indikationer på att vissa icke-specifika interaktioner uppstod mellan proteinerna och agarpärlorna. Det finns dock ingen skillnad mellan de pärlor med många tvärbindningar och de med få tvärbindningar. Porstorleken och porstorleksdistribution bestämdes genom att använda en uppsättning dextran med inverterad storleksutslutningskromatografi.  Efter varje tvärbindningsreaktioner bestämdes antalet bildade tvärbindningar genom titrering med silvernitrat. Det visade sig att koncentrationen av allylbromid hade en större inverkan på de resulterande egenskaperna jämfört med koncentrationen av NaOH. En ökad koncentration av allylbromid visade på ett ökat antal bildade tvärbindningar. Experiment med många bildade tvärbindningar visade sig ha en större porstorlek och högre fördelningskoefficienten jämfört med experiment med lägre mängd bildade tvärbindningar. / Liquid chromatography is a method that is extensively used for separations in biotechnology at present. There are many different techniques within the concept of liquid chromatography and which specific technique that is most suitable depends on the properties of the intended target molecule. Properties for which target molecules can be separated are among others, size, charge, and affinity interactions. The porosity is a crucial property of the chromatographic resin, as the accessibility of pores determines the accessible surface area of the resin. Thus, the ability to determine the porosity is a crucial aspect in the manufacturing of the resin. Agarose often constitutes the chromatographic resin, due to the modification possibilities of the polysaccharide chains.  Bio-Works Workbeads 40/1000 SEC are agar-based size exclusion chromatography beads. The beads are cross-linked twice in order to obtain sufficient rigidity and to achieve a desired distribution coefficient. The first cross-linking step determines the structure of the beads thereby stets the porosity and the second cross-linking step ensures a sufficinet rigidity. For the product Workbeads 40/1000 the desired distribution coefficients is between 0.2-0.35 for thyroglobulin, 0.62-0.75 for albumin (from egg white) and 0.85-0.95 for ribonuclease A. To determine the relation between the concentrations of two reactants NaOH and allyl bromide in the first cross-linking step and the resulting properties of the resin (distribution coefficients, rigidity, and pore size), the concentrations in the first cross-linking were changed. All resulting beads with the altered reactant concentrations were analyzed using an ÄKTAexplorer. The rigidity of the beads was determined by analyzing the crash flow rate of the packed bed. There were no indications of any differences between the manufactured resin samples. The non-specific interaction was analyzed by comparing the distribution coefficients in a standard PBS buffer to a high salt concentration buffer. The polarity change in the mobile phase might affect the non-specific interactions since hydrophobic interactions would be promoted. The distribution coefficient curves were also compared for similarities and differences between different proteins. Differences in the shape of the distribution coefficient curves might imply that the pore size is not the only contribution factor to the distribution coefficient differences. Hence, the difference might imply the effect of non-specific interactions. It was indicated that some non-specific interactions occurred between the proteins and the agar beads. However, there was no difference between beads of varying cross-linking degree. The porosity and pore size distribution were determined by utilizing a set of dextran’s with Inverse Size Exclusion Chromatography (ISEC). After each cross-linking step the number of cross-links was determined by titration with silver nitrate (AgNO3). It was shown that the concentration of allyl bromide had a greater impact on the resulting properties compared to the concentration of NaOH. An increased concentration of allyl bromide showed increased number of formed cross-links. Experiments with many formed cross-links was shown to have a larger pore size and higher distribution coefficient Kd compared to experiments with lower amount of formed cross-links.

A new apparatus called Bypass Trapped Flow Analysis System (ByT-FAS) is described. A properly designed ByT-FAS gives an analyst the ability to use analyte sample volumes of 10 to 200 μL [or more] and reagent volumes of approximately the same size. The sample and reagent are injected into their respective carrier streams and attain physical steady state concentrations in the detection cell within approximately 15 to 45 seconds after injection. Upon achievement of simultaneous sample and reagent physical steady state concentrations, the system flow is diverted around the detection cell and the reaction mixture is trapped in the detection cell. The concentration of the sample and reagent in the detection cell can be readily computed from knowledge of the original concentrations of the sample and reagent and the flow rates of the streams propelling the sample and reagent. ByT-FAS was demonstrated to be useful for direct measurements of analytes in liquid solutions and for assays which utilize equilibrium and/or kinetic methods to create measurable product(s) for ultraviolet/visible spectrophotometry, fluorimetry, and chemiluminescence. Enzyme activities and fundamental enzyme kinetic parameters (Kms, Kis, VMAXs) were determined directly. Genetic transcription levels of luciferase in whole intact E. coli cells were also determined using chemiluminescent detection. Flow system configuration, components, and flow ratios were investigated for their effects on achieving physical steady state signals in the detector. It is believed that this new type of instrumentation will be of significant use for the analytical chemical, biochemical, molecular biology, biotechnology, environmental, pharmaceutical and medical communities for those measurements which require direct knowledge of the concentration of the reactants and products during quantitation. / Ph. D.

Von TRAIL, FasL und APRIL, drei Mitgliedern der TNF-Liganden-Familie, ist bekannt, dass Trimerstabilität und Oligomerisierungsstatus maßgeblich das Rezeptoraktivierungspotential dieser Liganden beeinflussen. Für die immunstimulatorischen TNF-Liganden CD27L, CD40L, OX40L, 41BBL und GITRL war hingegen vor der Durchführung dieser Arbeit praktisch nicht bekannt, inwieweit Trimerbildung, Stabilisierung und Oligomerisierung wichtig für deren Aktitvität sind. Dies wurde in dieser Arbeit systematisch untersucht. CD40L besaß bereits als trimeres Molekül eine hohe Aktivität, die durch sekundäre Oligomerisierung nur wenig gesteigert wurde. Die spezifische Aktivität konnte durch Stabilisierung mit Hilfe der Tenascin-C (TNC)-Trimerisierungsdomäne nur geringfügig gesteigert werden. CD27L war als lösliches Flag-markiertes sowie als hexameres Fc-Protein selbst nach Quervernetzen nicht in der Lage, seinen Rezeptor CD27 zu binden und zu aktivieren. Die TNC-stabilisierte trimere Form des CD27L hingegen induzierte nach Oligomerisierung mit einem anti-Flag-Antikörper ein starkes Signal. Trimerer OX40L und trimerer 41BBL konnten nur in oligomerisierter Form ihre Rezeptoren aktivieren, wobei die Aktivität der TNC-stabilisierten Form signifikant stärker ausgeprägt war. GITRL aktivierte seinen Rezeptor bereits als stabilisiertes Trimer und Hexamer, die Aktivität konnte durch Quervernetzen nur gering gesteigert werden. Zusammenfassend kann man sagen, dass CD27L, OX40L und 41BBL zu der Untergruppe der TNF-Ligandenfamilie gehört, für die eine Stabilisierung des trimeren Moleküls und dessen Oligomerisierung nötig sind, um eine starke Rezeptoraktivierung zu ermöglichen. Im Gegensatz dazu zeigten CD40L und GITRL bereits oligomerisierungsunabhängig eine hohe Aktivität. GITRL benötigte allerdings die Stabilisierung des trimeren Moleküls durch die TNC-Domäne, um gute Aktivität zu zeigen. Im Weiteren wurden Antikörperfragment (scFv-)-TNF-Ligand-Fusionsproteine konstruiert und untersucht, die ein Zelloberflächenantigen binden. Eine starke Zelloberflächenantigen-spezifische Aktivierung des jeweiligen Rezeptors konnte für scFv-41BBL und für scFv-OX40L gezeigt werden, wohingegen scFv-CD40L und scFv-GITRL bereits auf antigennegativen Zellen stark aktiv waren. scFv-CD27L war selbst auf antigenpositiven Zellen inaktiv. Verwendet man an Stelle des Antikörperfragments eine extrazelluläre Proteinbindedomäne, z.B. die eines TNF-Rezeptors, erhält man Fusionsproteine, die zum einen eine selektive Aktivierung der TNF-Ligandendomäne und somit die Aktivierung des korrespondierenden Rezeptors auf der Zielzelle ermöglichen, zum anderen aber durch die Bindung an den membranständigen Liganden dessen Aktitvät neutralisieren können. Für CD40-, RANK- und B7-2-FasL konnte der immobilisationabhängige Aktivierungseffekt auf entsprechenden Zelloberflächenmolekül-exprimierenden Zellen gezeigt werden. Anhand von T47D-Zellen, die durch eine autokrine CD40L-CD40-Signalschleife vor Apoptose geschützt sind, konnte gezeigt werden, dass durch die Bindung von CD40-FasL an membranständigen CD40L die CD40L-CD40-Interaktion gestört und gleichzeitig Apoptose verstärkt induziert werden kann. Das Prinzip der antigenabhängigen Aktivierung von TNF-Liganden könnte Anwendung in der Tumortherapie finden, da bei Verwendung entsprechender selektiv exprimierter Marker eine lokale Rezeptoraktivierung erreicht und so Nebenwirkungen minimiert werden können. / Trimer stability and oligomerization status of TRAIL, FasL and APRIL, three members of the TNF ligand family, critically determine their receptor activating potential. However, detailed information for the immunostimmulatory ligands CD27L, CD40L, OX40L, 41BBL and GITRL regarding the importance of trimer formation, stabilization and oligomerization for ligand activity was lacking. These aspects were investigated systematically in this work. CD40L was highly active as a trimeric molecule. Secondary oligomerization and/or stabilization via the tenascin-C (TNC) trimerization domain slightly enhanced its specific activity. As soluble Flag-tagged and as hexameric Fc protein CD27L failed to bind and activate its cognate receptor CD27, even after crosslinking. However, the TNC stabilized form of CD27L induced a strong signal after oligomerization with anti-Flag antibody. Receptor signaling was only activated by oligomerized molecules of trimeric OX40L and 41BBL whereas the respective TNC fusion protein showed significant stronger activity. Stabilized GITRL trimers and hexamers already activated their receptor whereas oligomerization of GITRL just slightly enhanced the specific activity. Taken together, CD27L, OX40L and 41BBL belong to a TNF ligand family subgroup which requires oligomerization and stabilization of the trimeric molecule to ensure strong receptor activation. In contrast, CD40L and GITRL already display high oligomerization-independent activity, though the latter needs stabilization by the TNC domain. Furthermore, antibody fragment (scFv)-ligand fusion proteins targeting specific cell surface antigens were designed and analyzed. Strong cell surface antigen-selective TNF receptor activation was achieved for scFv-41BBL and scFv-OX40L whereas scFv-CD40L and scFv-GITRL already induced signaling in the absence of antigen-positive cells. scFv-CD27L lacked activity even on antigen-positive cells. Using an extracellular protein binding domain for example the ligand binding domain of a TNF receptor instead of an antibody fragment resulted in fusion proteins that on the one hand activate the TNF ligand domain and thus the corresponding receptor on target cells and on the other hand neutralize membrane ligand activity by binding. The effect of cell surface immobilization-mediated activation of these fusion proteins on cells expressing the corresponding target molecule was shown here for CD40-, RANK- and B7-2-FasL. The CD40-FasL fusion protein simultaneously blocked CD40L-CD40 interaction and induced strong apoptosis in T47D cells displaying an antiapoptotic autocrine CD40L-CD40 signaling loop. The principle of antigen-dependent activation of TNF ligands could be of use in tumor treatment due to the fact that tumor specific marker targeting leads to locally restricted receptor activation on antigen positive cells, promising a reduction in potential off target effects.

Bakgrund och problem: IASB beslutade 2008 att ersätta IAS 39 med IFRS 9 då IAS 39 ses som alltför omfattande och komplex. Processen har delats upp i tre faser. Fas 1 behandlar klassificering och värdering, fas 2 behandlar nedskrivningar och fas 3 behandlar säkringsredovisning. Denna uppsats behandlar endast fas 2. Både redovisare, revisorer och användare av finansiella rapporter anser standarden för finansiella instrument vara komplex. En orsak till komplexiteten är att finansiella instrument i sig är komplexa och begreppet finansiella instrument innefattar en vid variation av instrument. Det konstaterades även under den globala finansiella krisen att IAS 39 innehöll betydande brister.Syfte: Syftet med denna uppsats är att studera delar av arbetet IASB har gjort för att ersätta IAS 39 med IFRS 9, vilket ger oss möjlighet att studera fas 2 i detta examensarbete. Syftet är att se vad intressenter förväntar sig i redovisning av finansiella instrument och vad det finns för attityder angående förslaget till IFRS 9 fas 2.Avgränsningar: Eftersom det krävs att EU antar standarden för att den ska börja gälla i Sverige har vi även avgränsat oss till att titta på remissvar från enbart EU-länder.Metod: Studien har utförts med en kvalitativ metod där den empiriska undersökningen bestått av 22 remissvar som finns att tillgå på IASB:s hemsida.Resultat och slutsatser: Den genomförda undersökningen visar att det finns ett flertal olika åsikter angående IASB:s arbete med Exposure Draft. Många organisationer är överens om att man vill ha en mer principbaserad standard men vill samtidigt ha mer exempel att tillgå vilket återigen drar mot en mer regelbaserad standard. Slutsatsen är att Exposure Draft fortfarande ses som komplex dock inte i samma bemärkelse som IAS 39. Hur IASB löser denna problematik blir intressant att följa. / Program: Civilekonomprogrammet

Den i dagsläget mycket komplicerade IAS 39 som bland annat berör säkringsredovisninghade en del till den stora finanskrisen enligt vissa. Oavsett bakgrund så har utveckling av enny redovisningsstandard för att ersätta och förenkla säkringsredovisning påskyndats. Ettförsta utkast av förslag till förändring för redovisning av säkringar presenterades i december2010. IASB som leder arbetet har redan kritiserats, så hur tar användarna – företagen emotförändringsförslagen? Genom att ta del av företagens skriftliga åsikter är studiens syfte attundersöka attityderna till förslagen i exposure draft IFRS 9 Fas III Säkringsredovisning.Detta är en kvalitativ studie där datainsamlingen består av comment letters i vilka företag harskrivit sina kommentarer och uttryckt sina attityder i olika frågor om förändringsförslagenställda i exposure draft specifikt skrivna angående IFRS 9 Fas III Säkringsredovisning. Istudiens slutsatser har vi kommit fram till att respondenterna är mycket positiva till utkastetav förändringarna rörande säkringsredovisning. De välkomnar en förändring och speciellt närmånga av bristerna i föregående IAS 39 är åtgärdade. I det stora hela gör respondenterna detklart att dessa förändringar kommer att underlätta företags applicering avsäkringsredovisning.

Carbon nanotubes (CNTs) have gathered a lot of interest because of their extraordinary mechanical, electrical and thermal properties and have potential applications in a wide variety of areas such as material-reinforcement and nano-electronics. The properties of nanotubes are dependent on their diameter and methods for determining this using atomic force microscopy (AFM) in tapping mode assume that the measured height of the tubes represent the real diameter. Based on early, faulty calculations, the forces in tapping mode were assumed to be much lower than in contact mode, however it was later shown that forces in tapping mode can at point of impact rival the forces present in contact mode. This means that there is a potential risk of tube deformation during tapping mode measurements, resulting in incorrectly determined diameters. This work studies CNTs deposited on a silicon-substrate to analyze the effect of three common AFM settings (tapping frequency, free oscillation amplitude and setpoint) to determine their effect on measured CNT diameters and recommendations for choosing settings are given. / Kolnanorör har skapat mycket intresse på grund av sina extraordinära mekaniska, elektriska och termiska egenskaper och har lovande tillämpningar inom en mängd olika områden så som materialförstärkning och nanoelektronik. Kolnanorörens egenskaper påverkas kraftigt av deras diameter och de metoder som använder sig av atomkraftsmikroskopi(AFM) för att mäta diametern hos rören antar att den höjd-data man får fram är ett bra mått på den verkliga diametern hos rören. Baserat på tidiga, felaktiga beräkningar, antog man att kraften i ’tapping mode’ skulle vara mycket lägre än i ’contact mode’ vilket skulle leda till att man inte deformerar ytan man undersöker. Senare forskning visade att kraften mellan spets och prov kan vara lika stor eller rentutav större i tapping mode än i contact mode under det ögonblick då spetsen slår ner i provytan. Det medför att det finns en potentiell risk för att man deformerar kolnanorören när man mäter på dom vilket skulle resultera i att man får felaktiga värden på deras diametrar. Under det här projektet har kolnanorör som placerats på ett kisel-substrat undersökts för att analysera hur tre vanliga inställningar hos AFMet påverkar de erhållna värdena för diametern hos kolnanorören. De tre inställningarna som testats är svängnings-frekvensen, svängnings-amplituden i luft och börvärdet hos svängnings-amplituden.