El objeto de estudio de esta investigación fue una pintura sobre tabla titulada “El Señor de la Caída”, la cual forma parte del vasto patrimonio cultural del Perú. La pintura, propiedad de la iglesia San Pedro de Lima, es anónima, pero podría pertenecer a Bernardo Bitti, quien fue un artista de gran importancia en el proceso de evangelización del Perú y países vecinos a finales del siglo XVI. Se trabajó en la caracterización química de los materiales presentes en la obra mencionada. Por la naturaleza del objeto en estudio, estos análisis químicos tuvieron que ser no invasivos o microdestructivos. En una primera fase del estudio, se realizaron análisis in situ de la obra, usando fluorescencia de rayos X como técnica elemental y espectroscopía Raman como técnica molecular. Posteriormente, se tomaron radiografías de transmisión y fotografías de reflectancia infrarroja para investigar posibles detalles o esbozos ocultos a la vista. En base a la información obtenida, se tomaron micromuestras de zonas de la obra que requerían un estudio más detallado. Estas muestras fueron analizadas mediante diferentes técnicas. Se caracterizaron los pigmentos inorgánicos y el material de la base de preparación mediante microespectroscopía Raman y microscopía electrónica de barrido. Por otro lado, se analizaron los aglutinantes y resinas utilizados en la obra mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC-MS), se identificó una laca orgánica mediante espectrometría de masas con ionización MALDI (MALDI-MS) y se propuso la presencia de material proteico a partir de los resultados de una tinción con Ponceau S. Los materiales identificados en la obra concuerdan con aquellos que se esperaría en una pintura sobre tabla del siglo XVI. En base al estilo de los personajes representados en la obra, es posible que más de un autor haya estado involucrado en su creación. No se puede determinar, sólo a partir de este estudio, si el artista principal fue Bernardo Bitti o algún contemporáneo a él, pero sí es un punto de inicio importante para poder investigar y entender mejor la técnica del autor (o autores) de la obra. / Tesis

El presente trabajo de tesis se encuentra enmarcado dentro del proyecto multidisciplinario “Redes de intercambio marítimas y terrestres a larga distancia de vasijas de cerámica de prestigio en los Andes centrales durante el primer milenio antes de nuestra era: Un enfoque interdisciplinario”. El objetivo principal de esta tesis es determinar el alcance de la fluorescencia de rayos X portátil (pXRF) como técnica de análisis que permita discriminar entre grupos y su posible procedencia, de cerámicas encontradas en el sitio arqueológico de Puerto Nuevo. Para lograr lo anterior, se han estudiado 119 fragmentos de cerámica recogidos de la zona de excavación de Puerto Nuevo, además de 30 azulejos de control preparados a partir de material arcilloso recabado de diferentes zonas aledañas a la excavación. El análisis químico de estos grupos de piezas se realizó mediante pXRF con el fin de obtener la información composicional expresada como las áreas netas bajos los picos (NPA). A partir de esta información, mediante análisis de componentes principales y análisis de clúster, se construyeron los grupos composicionales. Se han encontrado 4 grupos composicionales y 2 casos extraños, los que, al ser comparados con el material arcilloso de control por medio de análisis discriminante, muestran que los fragmentos de cerámica podrían ser en su mayoría de origen local. Además, los grupos construidos mediante pXRF fueron contrastados con los grupos encontrados por medio de análisis petrográfico, y se observó una buena correlación entre los resultados de ambos enfoques. Finalmente, se ha determinado que la pXRF, empleada junto a un análisis estadístico adecuado, ha demostrado resultados lo suficientemente buenos como para constituir a la pXRF en una alternativa para estudios de este tipo. / Tesis

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-14Bitstream added on 2014-08-13T18:00:31Z : No. of bitstreams: 1 000758549.pdf: 4897173 bytes, checksum: c163d4d10bad620325bff69dc51cef61 (MD5) / Florações de cianobactérias são frequentemente relacionadas a condições eutróficas que comprometem os usos múltiplos dos ambientes aquáticos, implicando em riscos a saúde humana e a biota aquática. Para a compreensão da dinâmica do fitoplâncton (abundância, taxonomia, produtividade e fisiologia), com melhor resolução espacial e temporal, e com custo reduzido, os métodos tradicionais de monitoramento do fitoplâncton estão sendo complementados por abordagens que utilizam as propriedades ópticas dos pigmentos fitoplanctônicos. No caso das cianobactérias, a presença exclusiva do pigmento ficocianina, tem propiciado o desenvolvimento de pesquisas com enfoque na discriminação de cianobactérias a partir de suas respostas espectrais peculiares. Assim, com o propósito de analisar o comportamento sazonal de cianobactérias por meio da inferência do pigmento ficocianina foram adquiridos em quatro levantamentos de campo dados multifonte: imagens multiespectrais MODIS e RapidEye, curvas de reflectância espectral e dados fluorimétricos. Os dados originais e seus derivados resultantes de aplicação de técnicas como razão de bandas, análise derivativa, remoção do contínuo foram relacionados com a concentração de ficocianina e em alguns casos com clorofila a. Os resultados mostraram que dados multifonte mesmo em diferentes níveis de aquisição, permitem inferir a presença de cianobactérias, por meio do pigmento fitoplanctônico ficocianina, contudo a detecção em baixas concentrações só foi possível por meio da fluorescência. Pela análise das variáveis limnológicas tradicionais, verifica-se que o segundo levantamento de campo, realizado em fevereiro de 2012 foi o mais representativo de uma região eutrofizada, com concentrações médias de 7,12 μg/L e 47,54 μg/L para ficocianina e clorofila a, respectivamente. Já os primeiro (dezembro/2011)... / Cyanobacterial blooms are often related to eutrophic conditions that jeopardize the multiple uses of aquatic environment, which can endanger both human and aquatic health. In order to understand the dynamics of phytoplankton (abundance, taxonomy, physiology and productivity) with a better spatial and temporal resolution and low cost, traditional monitoring methods phytoplankton are being complemented by approaches based in optical properties of phytoplankton pigments. Concerning cyanobacteria, the singular presence of phycocyanin has allowed the development of researches about of cyanobacteria discrimination based upon their spectral response characteristics. Thus, for the purpose of examine the seasonal behavior of cyanobacteria through inference of the phycocyanin pigment were acquired in four field surveys some multisource data: MODIS and RapidEye multispectral images, spectral reflectance curves and fluorimetric data. The original data and their derivatives (band ratio, derivative analysis, continuous removal) were related with concentration of phycocyanin and in some cases with chlorophyll a. The results have shown that remote sensing multisource data, even at different levels of acquisition could detect the presence of cyanobacteria by means of its phycocyanin pigment. However, the detection by the spectral response of this pigment is conditioned to its occurence in minimal concentrations. Thus, in the order to monitor the seasonal behavior of the occurrence of cyanobacteria, the detection through fluorescence are complementary, given the fluorimetry performance at low concentrations...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-22Bitstream added on 2014-06-13T19:29:51Z : No. of bitstreams: 1 souza_jf_me_arafo.pdf: 3284885 bytes, checksum: 881b633adafdc61e86d920b11bc5ff19 (MD5) / As propostas dos estudos foram avaliar in vitro: o desempenho do exame visual (ICDAS), do exame radiográfico convencional e de métodos baseados em indução de fluorescência, DIAGNOdent 2095 (DD, Kavo, Biberach, Alemanha), DIAGNOdent 2190 (DDpen, Kavo, Biberach, Alemanha) e câmera intraoral VistaProof (CI, Dürr Dental, Bietigheim-Bissingen, Alemanha), na detecção e na determinação da profundidade de lesões de cárie oclusais em molares decíduos, bem como o desempenho do DIAGNOdent 2190 (DDpen) e do exame radiográfico convencional (ER) na detecção e na determinação da profundidade da lesão de cárie proximal em dentes anteriores decíduos e permanentes. Para a primeira pesquisa, foram selecionados 78 molares decíduos recém-extraídos e para a segunda, 123 dentes anteriores, sendo 72 decíduos e 51 permanentes. Todos os dentes foram coletados imediatamente após a extração e apresentavam suas superfícies hígidas ou com sinais que sugeriam a presença da lesão de cárie. Esses dentes foram armazenados em ambiente com 100% de umidade e mantidos congelados a -20oC. Foram excluídos aqueles que apresentavam destruição coronária ou restaurações, hipoplasias ou hipomineralizações de esmalte. Um sítio na superfície oclusal de cada dente foi selecionado para a primeira pesquisa, e na segunda pesquisa, toda a face proximal foi analisada. Dois examinadores treinados realizaram os exames duas vezes com intervalo de uma semana, utilizando os métodos citados acima. Após os exames, os dentes foram preparados para validação histológica e tanto a presença como a profundidade da lesão de cárie foram avaliadas. Foram calculados os valores de sensibilidade, especificidade, acurácia e comparados pelo teste de McNemar (p<0.05), e as áreas sob a curva ROC calculadas... / The aim of this in vitro studies was to assess: the performance of the visual inspection (ICDAS criteria), radiographic examination and light-induced Fluorescence: DIAGNOdent 2095 (LF, KaVo, Germany), DIAGNOdent 2190 (LFpen, KaVo, Germany) and fluorescence camera (FC, Dürr Dental,Germany), for detection of occlusal caries lesions and deepness in primary teeth. And the performance of the light-induced Fluorescence DIAGNOdent 2190 (LFpen, KaVo, Germany) and the radiographic examination for approximal caries lesions detection and deepness. It was selected, for the first study, seventy-eight primary molars, and for the second research, seventy-two primary and fifty-one permanent anterior teeth. The inclusion criteria was teeth with intact surfaces or varying from sound to different degrees of caries lesions and the exclusion criteria was surfaces restorated and decayded, enamel´s hipoplasic and hypomineralisation. The teeth were stored frozen at -200C. For de first research, one site of each occlusal surface was selected, and for second research, the approximal surface was evaluated. The teeth were independently measured by two examiners who assessed the surfaces twice with a 1-week interval. After the assessments, teeth were histologically prepared and assessed for caries extension. Optimal cut-off limits were established for LF, LFpen and FC. The results of the first research showed that at D2 threshold the sensitivity values did not shown statistical difference among the methods. For D1 and D3 thresholds, the sensitivity values were statistically significant difference, the values were improved for 0.83 (FC) and 0.75 (ICDAS) at D1, and for 1.00 (LF pen) at D3. The highest specificity values were exhibited by 1.00 (ER) at D1, 0.94 (FC) at D2, and for D3 threshold 0.92 (LF), 0.94 (ICDAS) and 0.94 (ER) did not... (Complete abstract click electronic access below)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Fisicas e Matematicas / Made available in DSpace on 2012-10-17T02:43:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T22:10:57Z : No. of bitstreams: 1 108505.pdf: 4374309 bytes, checksum: 42d56672e07bc8fcea4f4cd27ccd2f52 (MD5) / Um novo campo de estudo tem sido aberto com a solubilização de gelatina em microemulsão água em óleo. O sistema MBG é formado por Aerosol-OT, água e solvente orgânico, e este possui a vantagem de se obter géis hidrofóbicos transparentes com a viscosidade variando de líquido a verdadeiros géis consistentes. Este trabatho teve o objetivo de estudar a transição sol-gel através de medidas de fluorescência, tempo de vida e medidas de supressão, usando uma sonda hidrofóbica (pireno). Através da análise da intensidade de fluorescência das várias estruturas finas vibracionais (razão III/I) do monômero do pireno, é possível obter informações sobre o microambiente no qual ele se encontra. As medidas de fluorescência foram realizadas em sistemas de organo-gel de n-hexano, n-heptano e ciclo-hexano, com composições diferentes de água, surfactante e gelatina, tanto em sistema micelar líquido, como em gel homogêneo e transparente. Os resultados obtidos para a razão III/I em função e W0 (W0 = H2O/AOT) e percentagem de gelatina, mostraram uma mudança acentuada na transição sol-gel no sistema MBG. Nas medidas de supressão do pireno por brometo de N-etilpiridínio não foram observadas mudanças no espectro de fluorescência. Nas medidas de tempo de relaxação, observou-se que a sonda está localizada preferencialmente na fase orgânica para os sistemas de organo-gel de n-hexano e n-heptano, e que ocorre um particionamento maior em sistema de ciclo-hexano. Portanto, através destas técnicas, é possível estudar a transição sol-gel, além de obter novas informações sobre a sua microestrutura .

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2006. / Made available in DSpace on 2012-10-22T14:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 270200.pdf: 3453876 bytes, checksum: 7463859e117a1fd502790705cac7451a (MD5) / Esta pesquisa teve como objetivo avaliar clinicamente a fluorescência presente nos dentes naturais e a sua relação com a faixa etária. 40 voluntários foram selecionados de acordo com critérios pré-estabelecidos e divididos de acordo com sua faixa etária em 4 grupos (n=10): Grupo 1; de 06 à 14 anos; Grupo 2; de 15 à 29 anos; Grupo 3; de 30 à 44 anos e Grupo 4; de 45 à 59 anos. A refletância espectral e as coordenadas de cor foram mensuradas de acordo com a escala de cor CIELAB da Comissão internacional de Luminosidade (CIE) relativa ao iluminante padrão D65. Foi utilizada a geometria de medição D/8°, com iluminação difusa a 10°, comprimento de onda de 360 a 740nm, com a componente especular exclusa e com a luz ultravioleta excluída e incluída. A fluorescência foi calculada pela diferença na reflectância pela exclusão e inclusão da luz ultra-violeta. A intensidade da fluorescência não foi influenciada pela faixa etária (p>0,05). Apesar do grupo 1 ter apresentado valores de luminosidade estatisticamente maiores (p=0,005), não foi observada relação entre a cor dos dentes e a intensidade de emissão fluorescente. Concluímos que, quando avaliada clinicamente, a fluorescência dos dentes naturais não foi afetada pela idade dos pacientes. / The objective of this study was to analyze the fluorescence of natural teeth and its relation with age. 40 volunteers were selected in view of pre- established criteria, and divided in 4 groups according to their age (n=10): Group 1; from 06 to 14 years; Group 2; from 15 to 29 years; Group 3; from 30 to 44 years and Group 4; from 45 to 59 years. Spectral reflectance and color coordinates were measured according to the Commission Internationale de l'Eclairage (CIE) CIELAB color scale relative to the standard illuminant D65. The measurement geometry used was D/8°, with 10° diffuse illumination, 360 to 740nm wavelengths, specular component excluded and ultraviolet light excluded or included. Fluorescence was calculated from the subtraction of the reflectance values by the inclusion and exclusion of the ultraviolet component. The fluorescence intensity was not influenced by the age (p>0.05). Even tough group 1 presented luminosity values statistically higher (p=0.005), no relation was observed between teeth color and intensity of fluorescent emission. We conclude that, when measured in a clinical environment, the fluorescence of natural teeth was not related with patients' age.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T22:21:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 239077.pdf: 25988956 bytes, checksum: ffe95ab29f0f55399ad189111a8a0b65 (MD5) / Esse estudo avaliou a influência da aplicação de uma resina específica para reprodução da junção amelo-dentinária (JAD) nas propriedades ópticas de restaurações com compósitos. Blocos de resina com 4mm de espessura, formados por 3 discos de resina correspondentes ao esmalte vestibular, dentina e esmalte palatal, foram confeccionados. Esses blocos foram divididos em 2 grupos, de acordo com a resina composta utilizada para sua confecção: grupo A (n=30), resina Vit-l-escence (Ultradent) e grupo B (n=30), resina 4 Seasons (Ivoclar Vivadent). Cada grupo foi subdividido em 5 subgrupos (n=6), de acordo com a reprodução ou não da JAD: subgrupo 1, sem reprodução da JAD; subgrupo 2, reprodução da JAD vestibular (V) com DE Connector (Ultradent); subgrupo 3, reprodução da JAD V e Palatina (P) com DE Connector; subgrupo 4, reprodução da JAD V com Single Bond (3M ESPE); e subgrupo 5, reprodução da JAD V e P com Single Bond. Os corpos-de-prova foram analisados no espectrofotômetro para avaliação da reflexão, luminosidade (coordenada L*) e fluorescência. Os resultados foram submetidos ao teste estatístico de análise de variância, teste de Tukey e Kruskal Wallis. Os valores de reflexão e L* aumentaram quando o DE Connector foi aplicado, sem diferença estatisticamente significativa entre os subgrupos A2 e A3; e B2 e B3. Os valores de fluorescência não foram influenciados pela aplicação do DE Connector. A reprodução da junção amelo-dentinária vestibular, através da aplicação do DE Connector, é suficiente para alterar as propriedades ópticas das restaurações dos compósitos, elevando a reflexão 13 e luminosidade. Entretanto, o adesivo Single Bond, não reproduziu as propriedades ópticas da JAD, e, portanto, não deve ser utilizado para essa finalidade.

El documento digital no refiere asesor / Realiza una breve descripción de los rayos X, su historia, a partir de los trabajos de Röntgen y las investigaciones que llegan a obtener características importantes de esta radiación, posteriormente se trata de algunas interacciones de la radiación con la materia, como es el efecto Compton, efecto fotoeléctrico, producción de pares, que son interacciones que ayudarán a una mejor comprensión de la fluorescencia de rayos X. Se explica cómo es que se da la fluorescencia de los rayos X, generación y se analiza la emisión de radiación característica. Además, se hace una diferencia entre dos tipos de análisis de la fluorescencia, por dispersión de energía y por dispersión de longitud de onda. Estas técnicas son utilizadas con muchas empresas, que han insertados en el mercado diversos equipos para el análisis de fluorescencia de rayos X, tanto equipos portátiles como fijos, por ello, en este trabajo se hace una descripción resumida de algunos espectrómetros de rayos X, para conocer sus características. Para la explicación concreta de la XRF, se ha tomado como ejemplo la aplicación de la fluorescencia de rayos X, del trabajo de caracterización elemental en granos de quinua (Chenopodium quinoa Willd) mediante la técnica de fluorescencia de rayos X , elaborado en el IPEN, en su Informe Científico Tecnológico volumen 14, 2014; para poder caracterizar a la quinua como ricos en nutrientes minerales, con contenidos de K, Ca, Mn, Fe, Cu, Zn, Rb y Sr, mucho más altos que en otros cereales. Se analizó 8 muestras de las marcas de quinua de mayor distribución en el mercado local, los mismos que se expende embolsados y debidamente sellados. También se analizó una muestra de quinua no envasada (a granel, quinua sin marca). Se dispuso aproximadamente unos 20 g de granos de quinua por muestra sobre una luna de reloj que luego se dejó secar. Luego, las muestras fueron pulverizadas utilizando un mortero de ágata. Cada una de las muestras fue colocada en una matriz de 25 mm de diámetro donde se realizó el pastillado utilizando una prensa hidráulica para obtener las pastillas, estas pastillas fueron analizadas tanto en un sistema modular de análisis por fluorescencia de rayos X cuya fuente de excitación es una fuente anular de Cd-109, como en un sistema cerrado de espectrometría de fluorescencia de rayos X con blancos secundarios y un tubo de rayos X cuyo ánodo es de Gadolinio, Modelo EPSILON 5; ambos sistemas tienen un detector semiconductor de Si(Li) de 167 eV y 140 eV de resolución para 5.89 KeV de energía, respectivamente. Para la toma de datos se utilizó analizadores multicanales. / Trabajo de suficiencia profesional

[pt] Durante as últimas décadas tem-se acentuado o desenvolvimento de técnicas de fluorescência e suas aplicações em biociências e biotecnologia. Dada sua alta sensibilidade de detecção, tais técnicas têm-se tornado ferramentas importantes em muitas áreas de pesquisa tais como diagnósticos médicos, análise genética, mapeamento estrutural de células, estudos de fármacos, caracterização de complexos de fármacos com metais, análise da interação de fármacos com proteínas, lipídeos e DNA. Os anestésicos locais são fármacos que bloqueiam reversivelmente a condução nervosa quando aplicados a uma região circunscrita do corpo. Entretanto, possuem uma variedade de efeitos nos sistemas biológicos que não somente os efeitos de anestesia. Os antibióticos fluorquinolonas são agentes antimicrobianos sintéticos utilizados clinicamente há mais de 30 anos. Além de sua atividade antibacteriana, algumas fluorquinolonas vêm sendo aplicadas no desenvolvimento de drogas anticancerígenas e anti-HIV. O pH local de muitos meios biológicos tem grande influência nas propriedades espectroscópicas de muitos fármacos. Suas constantes de ionização, pKa, podem ser obtidas experimentalmente através de medidas espectroscópicas tais como absorbância, intensidade de fluorescência e parâmetros da fluorescência resolvida no tempo. Neste trabalho estudamos a partir da técnica de fluorescência estacionária e fluorescência resolvida no tempo os anestésicos locais dibucaína e tetracaína. Estudamos também os antibióticos norfloxacina e levofloxacina e seus respectivos complexos com ouro. Determinamos os tempos de vida de fluorescência e descrevemos ainda como as propriedades espectrais de fluorescência que se alteram em função do pH. Nos estudos de decaimento da fluorescência, desenvolvemos expressões para os fatores pré-exponenciais e as intensidades fracionárias de fluorescência como função do pH para amostras fluorescentes que sofrem transição ácido-base. Mostramos que os valores de pKa são aparentemente deslocados e obtivemos as expressões para o deslocamento. Determinamos as constantes de ionização, pKa, a partir da fluorescência estacionária e de parâmetros associados aos tempos de vida e testamos as expressões teóricas nos resultados experimentais. Os valores obtidos foram coerentes para as constantes de ionização dos fármacos dibucaína, levofloxacina e norfloxacina. Acredita-se que a ação dos anestésicos locais deve-se à interação das moléculas do anestésico com lipídeos e/ou proteínas de membrana. Uma análise desta interação mostra-se necessária para se investigar a difusão do anestésico na membrana e seu efeito na organização e dinâmica dos lipídeos e proteínas que constituem a membrana. Investigamos a interação da dibucaína e tetracaína com membranas enriquecidas em Na,K-ATPase e a incorporação do fármaco à membrana. Determinamos as constantes de associação. O valor obtido para a dibucaína foi de 0.91 × 10(3) M(-1) e para a tetracaína 0.77 × 10(3) M(-1). Estudamos a acessibilidade dos triptofanos por supressão de fluorescência do triptofano pela dibucaína, obtivemos uma acessibilidade de 90% para os triptofanos e uma constante de supressão dinâmica de 4.3 × 10(4) M(-1). / [en] During the last decades the development of fluorescence techniques and their applications in bioscience and biotechnology has been accentuated. Due to high sensitivity, such techniques have become important tools in many research areas such as medical diagnosis, genetic analysis, structural mapping of cells, drug investigation, characterization of drug-metal complexes, analysis of drugs interaction with proteins, lipids and DNA. The local anesthetics are drugs that reversibly block the nervous impulse when applied to a limited region of the body. However, they possess a variety of additional effects in the biological systems. The fluoroquinolone derived antibiotics are synthetic antimicrobial agents that have been used clinically for more than 30 years. In addition to their antibacterial activity, some fluoroquinolones have been applied in the development of anticancer drugs and anti-HIV. The local pH of many biological environments has great influence in the spectroscopic properties of many drugs, including local anesthetics and fluoroquinolones. The ionization constants of the drugs, pKa, can be experimentally obtained via spectroscopic parameters such as absorbance, fluorescence intensity, and time-resolved fluorescence parameters. In this work we studied the local anesthetics dibucaine and tetracaine using steady state and time resolved fluorescence techniques. We also studied the antibiotics norfloxacin and levofloxacin and their complexes with gold. We determined the fluorescence lifetimes and described how the spectral fluorescence properties alter as a function of the pH. In the studies of fluorescence decay, we developed expressions for the pre-exponential factors and the fractional fluorescence intensities as a function of the pH for a fluorophore undergoing an acid-base transition. We showed that the pKa values are apparently shifted and obtained the expressions for the pK shifts. We determined the ionization constants, pKa from steady state fluorescence and from parameters associated with the lifetimes, and we tested the theoretical expressions using the experimental results. The observed pK shifts for dibucaine, levofloxacin and norfloxacin were found to agree with the theoretical expressions. The action of local anesthetics is believed to involve the interaction of the anesthetic molecules with lipids and/or membrane proteins. An analysis of this interaction is necessary to examine the anesthetic diffusion in the membrane and its effect in the organization and dynamics of the membrane lipids and proteins. We investigated the interaction of dibucaine with Na,K-ATPase enriched membranes, and the incorporation of the drug in the membrane. We determined the binding constants. The obtained values were 0.91 × 10(3) M(-1) for dibucaine and 0.77 × 10(3) M(-1) for tetracaine. We also studied the accessibility of the tryptophan residues using the fluorescence quenching by dibucaine. We obtained a dynamic quenching constant of 4.3 × 10(4) M(-1).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento / Made available in DSpace on 2013-06-25T21:22:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 310633.pdf: 3391423 bytes, checksum: f9a38ad483d29dfa0babb47673830a6f (MD5) / As mudanças globais têm sido amplamente discutidas, e dentre essas mudanças, destaca-se o aumento da incidência da radiação ultravioleta B, em função da contínua destruição da camada de ozônio. Estudos científicos têm evidenciado os efeitos deletérios da exposição à radiação UV-B sobre as macroalgas, mas poucos estudos têm abordado o impacto dessa radiação sobre a germi-nação de esporos e desenvolvimento de fases juvenis. Nemalion helminthoides é uma alga vermelha amplamente distribuída nas regiões temperadas e subtropicais do planeta. Na única fase ma-croscópica da espécie, N. helminthoides mostra um talo cilíndrico e gelatinoso, e é encontrada fixada às rochas de regiões interti-dais, estando frequentemente exposta à radiação solar. Analisar os efeitos da radiação ultravioleta B sobre o desenvolvimento inicial de Nemalion helminthoides foi o principal objetivo deste trabalho. Para tanto, carpósporos de N. helminthoides foram cul-tivados em laboratório, e foram estabelecidos dois grupos: Con-trole, expostos somente à radiação fotossintéticamente ativa PAR; e tratado, expostos à radiação PAR e UV-B. O grupo tratado foi submetido a 1,6 W.m-2 de radiação UV-B artificial, 2h por dia, ao longo de 12 dias. As amostras foram avaliadas a cada três dias. O grupo controle mostrou crescente proliferação celular, crescente acúmulo de substâncias de reservas e intensa ramificação nos últimos estágios observados, 9 e 12 dias de desenvolvimento. Nas células do grupo controle o cloroplasto ocupou grande espaço na célula, empurrando as demais organelas para a periferia celular. Além disso, o cloroplasto apresentou um característico pirenóide globoso, profusamente atravessado por lamelas de tilacóides. As células mostraram freqüente associação entre mitocôndrias, nú-cleos, corpos de Golgi e retículo endoplasmático rugoso, intera-ção que favorece a intensa atividade metabólica característica de fases iniciais de desenvolvimento. Os tetrasporófitos do grupo tratado apresentaram danos a importantes organelas celulares, tais como: desestruturação do pirenóide, perda da organização do cloroplasto, alteração nas cristas mitocondriais, crescente atro-fia dos corpos de Golgi. Além de alterações nos padrões de de-senvolvimento, como perda da polaridade nas primeiras divisões do carpósporo e ramificação anormal do talo filamentoso. Em relação à autofluorescência do cloroplasto, o grupo controle mostrou crescente aumento na auto-fluorescência ao longo do desenvolvimento. Enquanto no grupo tratado a autofluorescência acompanhou a intensidade do grupo controle para 3 e 6 dias, mas mostrou redução de aproximadamente 50% na autofluores-cência em 9 e 12 dias de desenvolvimento, em relação ao grupo controle. As principais alterações nas células de N. helminthoides aconteceram no cloroplasto. Os dados de quantificação da auto-fluorescência coincidiram com as alterações ultraestrutrais apre-sentadas no cloroplasto das células expostas à radiação ultravio-leta B, sugerindo efeitos nocivos dessa radiação ao aparato fotos-sintético, síntese e acúmulo de substâncias de reserva, como o amido das florídeas, os plastoglóbulos e o pirenóide. Além disso, a radiação alterou o padrão de desenvolvimento dos tetrasporófi-tos. Sugere-se neste estudo que a próxima fase do ciclo de vida da espécie, a formação dos tetrasporângios, onde ocorre a meio-se e formação dos tetrásporos, seria comprometida caso os te-trasporófitos jovens continuassem no regime de exposição à ra-diação ultravioleta, mas somente estudos mais longos podem dizer se esta exposição poderá interferir e/ou interromper o ciclo de vida de N. helminthoides. / Global changes have been widely discussed, and among these changes, there is an increased incidence of ultraviolet B radiation, due to the continuous destruction of the ozone layer. Scientific studies have shown the deleterious effects of exposure to UV-B radiation on macro algae, but few studies have addressed the impact of this radiation on spore germination and development of juvenile stages. Nemalion helminthoides is a red alga widely distributed in temperate and subtropical regions of the planet. In the only macroscopic phase of the species, N. helminthoides shows a cylindrical and gelatinous stem, and is found attached to rocks in intertidal areas, being frequently exposed to solar radia-tion. To analyze the effects of ultraviolet B on the initial develop-ment of Nemalion helminthoides is the main objective of this work. For this new set of carpospores Nemalion helminthoides were cultured in the laboratory, and were arranged in two groups: control, exposed only to photosynthetically active radiation (PAR); and treated, exposed to PAR and UV-B. The treated group was exposed to 1.6 Wm -2 UV-B artificial radiation 2 hours a day over 12 days. Specimens from both groups were evaluated every three days. The control group showed increasing cell proliferation, in-creasing accumulation of reserve substances and intense branch-ing in the latter observed stages of 9 and 12 days of develop-ment. In the cells from the control group the chloroplast occupied much space, pushing the other cell organelles to the periphery. Furthermore, the chloroplast showed a typical globular pyrenoid profusely traversed by thylakoid lamellae. The cells showed fre-quent association between mitochondria, nucleus, Golgi bodies and rough endoplasmic reticulum, interaction that favors the in-tense metabolic activity, characteristic of early stages of devel-opment. The sporelings from the treated group showed damage to significant cell organelles, such as: pyrenoid disruption, loss of organization of chloroplast, changes in mitochondrial cristae, increasing atrophy of the Golgi bodies, in addition to changes in development patterns, such as loss of polarity in the first divisions of carpospore and abnormal filamentous thallus branching. Re-garding the autofluorescence of the chloroplast, the control group showed increasing growth in the photosynthetic response during development. While in the treated group the autofluorescence followed the intensity for the control group for 3 and 6 days but showed approximately a 50% reduction in re-sponse of the photosynthetic apparatus in the stages of 9 and 12 days in relation of the control group. The major damage to the cells of N. helminthoides happened in the chloroplast. The quan-tification of autofluorescence data coincided with the ultra struc-tural changes made in the chloroplast of cells exposed to ultra-violet B radiation, showing the harmful effects of this radiation to the photosynthetic apparatus, synthesis and accumulation of re-serve substances such as floridean starch grains, plastoglobuli and pyrenoid . Furthermore, the radiation changed the develop-ment pattern of the seedling. It is suggested in this study that the next stage of reproduction of the species, the formation of tetrasporangia, where meiosis and formation of the tetraspores occur, would be compromised if the seedlings continued in the regime of exposure to ultraviolet radiation, but only longer term studies can tell whether this exposure may interfere with and / or interrupt the life cycle of N. helminthoides.