A necessidade de se prolongar o período pós-colheita fez com que a utilização de tratamentos em pós-colheita com o uso de defensivos agrícolas aumentasse nas últimas décadas. No entanto, a preocupação de consumidores quanto a resíduos as deficiências de controle observadas incentivaram a procura por tratamentos alternativos, entre os quais os tratamentos com calor vem sendo testados em frutos de várias espécies. No presente trabalho estudou-se o efeito do tratamento com calor no crescimento do micélio e germinação dos conídios de Botryosphaeria dothidea e, avaliou-se a viabilidade da termoterapia com calor, isolada ou em combinação com carbonato de sódio no controle da podridão branca e na manutenção da qualidade das maçãs ‘Fuji’ em diferentes estádios de maturação, mantidas ou não sob armazenamento refrigerado. Foi objetivo também verificar a expressão de genes que são regulados durante a interação maçã-Botryosphaeria dothidea, após tratamento com calor. Os experimentos foram conduzidos testando-se combinações de diferentes temperaturas e períodos de exposição ao calor sobre o patógeno B. dothidea e sobre frutos inoculados e não inoculados artificialmente com o patógeno. Os resultados obtidos sobre o patógeno mostraram que, independente da concentração de caldo batata-dextrose (BD) utilizada na suspensão, 45% dos conídios de B. dothidea germinaram nos frutos após 24h e 91% após 48h de incubação a 26°C. Constatou-se um aumento significativo da germinação dos conídios quando acrescentado 2,4% de caldo BD a suspensão. Sobre o efeito da temperatura no patógeno, as temperaturas inferiores a 62°C, em qualquer período de exposição não foram capazes de inibir o micélio do patógeno. Os conídios submetidos à temperatura de 58°C somente foram inativados quando o tratamento foi estabelecido por 60s. A termoterapia com calor associada ou não ao carbonato de sódio reduziu a incidência e severidade da doença podridão branca. A severidade da doença foi influenciada pelo estádio de maturação dos frutos verificando pelo aumento no número de lesões/fruto quanto mais avançada a maturação das maçãs. Os resultados obtidos no RT-PCR evidenciaram que os protocolos utilizados não produziram RNA de alta qualidade e desta forma inviabilizaram a análise da expressão diferencial dos genes na interação maçã-B.dothidea.

Significantes quantidades de maçãs produzidas no Rio Grande do Sul são usadas para a produção de suco destinado à exportação. As frutas que são utilizadas pela indústria são aquelas que não atingem o padrão exigido para o consumo in natura. Estas maçãs constituem fator de risco quanto à contaminação por fungos, que podem produzir micotoxinas, como a patulina. O Brasil não tem legislação que estabeleça níveis permitidos de patulina em alimentos. Mas muitos países têm adotado a recomendação do Codex Alimentarius que indica um nível máximo permitido de 50 μg/L de patulina em suco de maçã. Esse fato estimula países exportadores, como o Brasil, a pesquisar a qualidade micotoxicológica dos seus produtos, a fim de se tornarem competitivos no mercado internacional e de fornecerem alimentos seguros. Nesse contexto, os objetivos desse trabalho foram: (1) avaliar a contaminação fúngica de maçãs destinadas à produção de suco, bem como a possível presença de patulina nos sucos produzidos a partir destas frutas; (2) adaptar metodologicamente a técnica de cromatografia em camada delgada à quantificação de patulina em maçãs e sucos de maçã; (3) analisar os níveis de patulina nas fases do processamento de suco de maçã; e (4) pesquisar fungos termorresistentes nos sucos em estudo. As amostras de maçãs e de sucos foram fornecidas pela Golden Sucos Ltda de Farroupilha, RS. Penicillium expansum foi a espécie isolada predominantemente, sendo que 94,44% dos isolados pertencentes a esta espécie se mostraram produtores de patulina nas condições testadas. A prevalência de fungos produtores de patulina nas maçãs processadas resultou em altas concentrações da micotoxina nessas maçãs, variando entre 254,62 e 653,37 μg/kg e também nos sucos concentrados produzidos, com níveis de patulina nestes entre 56,04 e 231,44 μg/L. O método desenvolvido para extração e quantificação da patulina foi eficaz. O detector de carga acoplada forneceu boa sensibilidade, precisão, linearidade e recuperação para a determinação quantitativa de patulina. Todos os estágios do processamento do suco contribuíram para a redução dos níveis de patulina. Desde a maçã até o suco a redução foi de 75,2%. A presença de Byssochlamys nivea em uma das amostras de suco indica que a patulina poderia ser produzida por este fungo durante o armazenamento. / Significant amounts of apples produced in the state of Rio Grande do Sul, Brazil, are used to juice production destined to exportation. Fruits used by the industry show some defects and are not accepted for fresh consumption. These apples are a risk factor considering the contamination by fungus, which can produce mycotoxins, such as patulin. Brazil does not have legislation for patulin in food. But many countries have adopted the recommendation of the Codex Alimentarius, which indicates a maximum permitted level of 50 μg/L of patulin in apple juice. This concern stimulates exporting countries, like Brazil, in the research of mycotoxigenic quality of apples and by-products, to become competitive and provide safe foods. In this context, the objectives of this work were (1) evaluate mould contamination of apples used to juice production and possible presence of patulin in apples; (2) methodologically adapt the thin-layer chromatographic technique for quantification of patulin in apples and apple juice; (3) analyze patulin levels in some processing stages of apple juice production; and (4) investigate heat-resistant moulds in juices. The apples and juice samples were obtained from Golden Sucos Ltda, located in Farroupilha city, in Rio Grande do Sul state, Brazil. Penicillium expansum was the most frequently isolated fungus, among these isolates, 94.44% were able to produce patulin under the tested conditions. The prevalence of patulin-producing fungi in apples resulted in high patulin levels in these apples, ranging from 254.62 to 653.37 μg/Kg and in juices ranging from 56.04 to 231.44 μg/L. The method developed to patulin extraction and quantification was effective. The charged coupled device imaging system provides good sensitivity, precision and linearity for the quantitative determination of patulin. All stages of apple juice production contributed to patulin reduction. The overall loss of patulin through processing from apple to apple juice was 75.2%. The presence of Byssochlamys nivea in a juice sample indicates that this fungus could produce patulin during storage.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-07T17:11:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 927356 bytes, checksum: 6c422db022d62f1130f3945fa49dd101 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T17:11:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 927356 bytes, checksum: 6c422db022d62f1130f3945fa49dd101 (MD5) Previous issue date: 2000-08-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A diversidade genética de seis isolados Arthrobotrys conoides, três isolados A. oligospora e sete isolados A. robusta foi avaliada por meio de RAPD. A amplificação resultou em um total de 107 fragmentos de DNA polimórficos, utilizando 11 oligonucleotídeos. As distâncias genéticas variaram de 9 a 83%, quando analisadas em conjunto, demonstrando grande diversidade genética nos isolados dessas três espécies. Por meio dessas análises, pôde-se diferenciar os isolados A51 (A. robusta) e A78 (A. conoides) das suas respectivas espécies. Além desses, o isolado A183 (A. oligospora) também se diferenciou de sua espécie agrupando-se com isolados de A. robusta. A variação dentro da região ITS do rDNA de seis isolados A. conoides e sete isolados A. robusta foi analisada por PCR seguida pela análise do polimorfismo de comprimento de restrição (RFLP). Essa região amplificada inclui o espaçador interno transcrito (ITS), que possui um baixo grau de conservação. Dois isolados fúngicos, A51 e A78, apresentaram polimorfismo de tamanho dentro de suas respectivas espécies. Os produtos da amplificação da região ITS foram hidrolisados com diferentes endonucleases de restrição. Análises de agrupamento, baseadas nos fragmentos de DNA de restrição, separaram os isolados em três distintos grupos: o Grupo 1, que contém os isolados pertencentes à espécie A. conoides, exceto o isolado A78; o Grupo 2, que contém os isolados da espécie A. robusta, exceto o isolado A51; e o Grupo 3, formado pelos isolados A78 e A51, sugerindo uma nova análise na sua classificação. / The genetic diversity of six isolates of Arthrobotys conoides, three of A. oligospora, and seven of A. robusta was evaluated by RAPD. Total DNA amplification using 11 oligonucleotides resulted in 107 distinct polymorphic DNA fragments. The genetic distances varied from 9 to 38%, showing high genetic diversity among the isolates of the three species. By means of RAPD analysis, the isolates A51 (A. robusta) and A78 (A. conoides) could be differentiated from their respective species. Besides A51 and A78, the isolate A183 (A. oligospora) also differentiated from its species, grouping with the isolates of A. robusta. Variation within the rDNA ITS region of six isolates of A. robusta was analyzed by PCR, followed by restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP). The amplified region included the internal transcribed spacer (ITS), which possesses a low degree of conservation. Two fungal isolates presented length polymorphism within their respective species. Amplification products of the ITS region were cleaved with different restriction endonucleases. Cluster analysis based on restriction fragments divided the isolates into three groups: Group 1, containing the A conoides isolates, except ixA78; Group 2, containing the A robusta isolates, except A51; and Group 3, formed by A78 and A51, suggesting that their classification should be revised.

FARIAS, Gabriel Castro. Biometria e respostas fisiológicas de feijão-de-corda inoculado com fungos endofíticos dark septate sob estresse salino. 2014. 55 f. Dissertação (Mestrado em engenharia agrícola)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-06-23T17:48:04Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_gcfarias.pdf: 713863 bytes, checksum: 7be0252f35e54d5ad3dde924985c12a7 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-21T20:14:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_gcfarias.pdf: 713863 bytes, checksum: 7be0252f35e54d5ad3dde924985c12a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-21T20:14:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_gcfarias.pdf: 713863 bytes, checksum: 7be0252f35e54d5ad3dde924985c12a7 (MD5) Previous issue date: 2014 / With the increasing of areas degraded by soil salinization process, is necessary to increase of agricultural investments to be able to reach a production acceptable. In order to reduce such inputs, studies of microorganisms involved in the production process are becoming more constant. The objective of this study was to evaluate the associations between endophytic fungi Dark Septate and cowpea plants when irrigated with water of different salinities, analyzing biometrics, gas exchange, nutrient content and accumulation of organic solutes in the leaves. Cowpea plants were grow in containers of five liters under greenhouse conditions and subjected to four different electrical conductivity of irrigations water (1.2; 2.2; 3.6; 5.0 dS m-1). Were used for the inoculation strains B’2 and 21W and treatments were as follows: F1 – plants that were not inoculated; F2 – plants inoculated with strains 21W and F3 – plants inoculated with strain B’2. during the experiment was measured gas exchange and at the end of the experiment the plant were collected and determinate the leaf area, shoot dry mass, root dry mass, concentration of the foliar nutrients and organic solutes, and was made the determination colonization of roots by the fungus. The salinity caused significant reductions in biomass, leaf area and leaf gas exchange, however, the presence of the endophytic fungi provided a large tolerance to the adverse effects of salinity. There was a larger accumulation of calcium, sodium, clore and phosphorus in cowpea leaves with increasing salinity and decrease in the leaves of nitrogen and potassium. The presence of the fungus in the plant provided a foliar phosphorus and nitrogen. / Com o crescimento das áreas degradadas pelo processo de salinização dos solos se faz necessário o aumento do uso de insumos para que seja possível atingir uma produção aceitável. Visando a redução de tais insumos, estudos sobre microrganismos envolvidos no processo produtivo são cada vez mais constantes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta das associações entre fungos endofíticos Dark Septate e plantas de feijão-de-corda quando irrigado com águas de diferentes salinidades, analisando-se a biometria, troca gasosas, teores foliares de nutrientes e o acúmulo de solutos orgânicos nas folhas. As plantas de feijãode-corda foram cultivadas em vasos de 5 litros, sob condições de casa de vegetação e submetidas a quatro diferentes condutividades elétricas da água de irrigação (1,2; 2,2; 3,6 e 5,0 dS m-1). Para a inoculação foram utilizados as linhagens B’2 e 21W e os tratamentos foram os seguintes: F1 – plantas que não foram inoculadas; F2 – plantas inoculadas com a linhagem 21W e F3 – plantas inoculadas com a linhagem B'2. Durante a condução do experimento mediu-se as trocas gasosas e ao final do experimento as plantas foram coletadas e determinou-se a sua área foliar, massa seca da parte aérea, massa seca das raízes teores de nutrientes e solutos orgânicos foliares, bem como foi feita a determinação de colonização nas raízes pelo fungo. A salinidade provocou reduções significativas na biomassa, área foliar e trocas gasosas, contudo, a presença do fungo endofítico proporcionou uma maior tolerância aos efeitos negativos da salinidade. Houve um maior acúmulo de cálcio, sódio, cloro e fósforo em folhas de feijão-de-corda com o aumento da salinidade e uma diminuição dos teores de nitrogênio e potássio. A presença do fungo na planta proporcionou maior teor foliar de fósforo e nitrogênio.

LOPES NETO, Antônio Viana. Atividade fungistática de uma quitinase recombinante do feijão de corda [Vigna unguiculata (L.) (Walp.)] contra Lasiodiplodia theobromae Pat. (Griff. e Maubl.), agente causal da resinose do cajueiro (Anacardium occidentale L.). 2014. 57 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-08T13:45:57Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_avlopesneto.pdf: 1483564 bytes, checksum: 0e776910b7f818898df5c2fc18bff4ec (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:18:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_avlopesneto.pdf: 1483564 bytes, checksum: 0e776910b7f818898df5c2fc18bff4ec (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:18:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_avlopesneto.pdf: 1483564 bytes, checksum: 0e776910b7f818898df5c2fc18bff4ec (MD5) Previous issue date: 2014 / The aim of this work was to evaluate the biological activity of a recombinant chitinase (rVuChi) from cowpea (Vigna unguiculata) against the phytopathogenic fungus Lasiodiplodia theobromae. The recombinant protein was expressed in Pichia pastoris, collected and purified after 72h of induction, using a chitin affinity chromatography. The chitinase was eluted from the affinity chromatography using 0.1 M acetic acid. Enzymatic assay was performed against the synthetic substrate (colloidal chitin) in order to determine the activity of the purified recombinant protein. The chitinase displayed a specific activity of 5,637.32 U/mg of protein. Biological tests were performed. In these tests three different isolates of L. theobromae, identified as CNPAT CCJ-127, CNPAT CCJ-166 and CNPAT CCJ-184, were used and the experiments were performed on triplicate. The fungal isolates were obtained from the collection of work from the laboratory of plant pathology from the Embrapa Agroindústria Tropical (Fortaleza-CE, Brasil). In all biological assays the fungicide Carbomax 500 SC® (Carbendazim) at a concentration of 2 mL/L and sterile distilled water were used as positive and negative controls, respectively. A total of 50, 100 and 300 µg of recombinant chitinase (rVuChi) was used in all tests. The first test was based on the disk diffusion methodology using filter paper in which the effects of the protein on the mycelium growth, as well as the formation of an inhibition zone on the fungal hyphae were investigated. The second test was based on the diffusion assay in agar. Photographs were used to register the observations. The rVuChi showed moderate to strong fungistatic activities on the mycelial growth of all L. theobromae isolates when used at 100 and 300 µg in the disk diffusion assay. CNPAT CCJ-127 was the most resistant specimen to the rVuChi fungistatic action, as observed by the lower impact of the protein on it is mycelial growth. In the agar diffusion test the amount of 300 µg was the most effective, as observed in the disk diffusion test. In addition, the effect of the protein was most pronounced on the isolates CNPAT CCJ-166 and CNPAT CCJ-184 and less impacting on CNPAT CCJ-127. The recombinant chitinase rVuCHi showed to be an inhibitor of the mycelial growth of three L. theobromae isolates. The fungistatic effects of the protein described here may be due to its ability to degrade chitin, a structural biopolymer that makes part of the cell wall of several phytopathogenic fungi, including L. theobromae. Once this is only a scientific speculation, more studies need to be made to definitely reveal the mechanism of action of rVuChi on L. theobromae. / O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade biológica de uma quitinase recombinante (rVuChi) de feijão-caupi (Vigna unguiculata) contra o fungo fitopatogênico Lasiodiplodia theobromae. A proteína recombinante foi expressa em Pichia pastoris, coletada e purificada após 72h de indução, utilizando cromatografia de afinidade em matriz de quitina. A quitinase foi eluída a partir da cromatografia de afinidade com ácido acético a 0,1 M. Ensaio enzimático foi realizado contra o substrato sintético (quitina coloidal), a fim de determinar a atividade da proteína recombinante purificada. A quitinase apresentou atividade específica de 5.637,32 U/mg de proteína. Testes biológicos foram realizados. Nestes testes três diferentes isolados de L. theobromae, identificados como CNPAT CCJ-127, CNPAT CCJ-166 e CNPAT CCJ-184, foram utilizados e os experimentos foram realizados em triplicata. Os isolados fúngicos foram obtidos da coleção de trabalho do Laboratório de Fitopatologia da Embrapa Agroindústria Tropical (Fortaleza-CE, Brasil). Em todos os ensaios biológicos o fungicida Carbomax 500 SC® (Carbendazim), a uma concentração de 2 mL/L, e água destilada estéril foram utilizados como controles positivos e negativos, respectivamente. Um total de 50, 100 e 300 µg de quitinase recombinante (rVuChi) foi utilizado em todos os testes. O primeiro ensaio foi baseado na metodologia de difusão em disco de papel de filtro em que foram investigados os efeitos da proteína sobre o crescimento do micélio, bem como a formação de halo de inibição sobre o crescimento micelial do fungo. O segundo ensaio foi baseado no ensaio de difusão em ágar. Fotografias foram usadas para registrar as observações. A quitinase rVuChi mostrou efeito fungistático variando de moderado a forte sobre o crescimento micelial de todos os isolados de L. theobromae, particularmente quando usada nas doses de 100 e 300 µg, no ensaio de difusão em disco. CNPAT CCJ-127 foi o isolado mais resistente à ação fungistática de rVuChi, como observado pelo menor impacto da proteína em seu crescimento micelial. No teste de difusão em ágar a quantidade de 300 µg foi a mais efetiva, da mesma forma como observado para o de difusão em disco de papel de filtro. Além disso, o efeito da proteína foi mais pronunciado nos isolados CNPAT CCJ-166 e CNPAT CCJ-184 e menos impactante no isolado CNPAT CCJ-127. A quitinase recombinante rVuCHi mostrou ser um inibidor do crescimento micelial de três diferentes isolados de L. theobromae. Os efeitos fungistáticos da proteína aqui descritos podem ser devido à sua capacidade de degradar quitina, um biopolímero estrutural que faz parte da parede celular de vários fungos fitopatogênicos, incluindo L. theobromae. Entretanto, mais estudos precisam ser conduzidos para revelar os possíveis mecanismos de ação de rVuChi sobre L. theobromae.

PINTO, Emanuelle Sampaio Almeida. Respostas fisiológicas e bioquímicas de plantas de milho (Zea mays L.) inoculadas com fungos micorrízicos arbusculares sob estresse salino. 2011. 88 f. Dissertação (mestrado em agronomia/fitotecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2011. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-03-18T19:12:08Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_esapinto.pdf: 1040562 bytes, checksum: a9649c70781b909a31c6835067f0c1e0 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-04-26T21:04:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_esapinto.pdf: 1040562 bytes, checksum: a9649c70781b909a31c6835067f0c1e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-26T21:04:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_esapinto.pdf: 1040562 bytes, checksum: a9649c70781b909a31c6835067f0c1e0 (MD5) Previous issue date: 2016 / Many studies have shown that inoculation with arbuscular mycorrhizal fungi improved plant growth under salt stress. Considering that the salinity is a serious problem that directly affects the productivity of plants, the aim of this study was to evaluate the effects of inoculation of AMF in maize plants under salt stress in the presence or absence of phosphorus. The experiment was run in a greenhouse of the Department of Biochemist and Molecular Biology of the Federal University of the Ceará (Campus of the Pici, Fortaleza - Ceará), with four replicates per treatment. The experimental design was completely randomized in factorial arrangement 2 (inoculated and not inoculated plants) x 3 (levels of salinity 0.5, 4.0 and 8.0 dS m-1) x 2 (presence or absence of phosphorus), total of 48 experimental units. During the experiment measurements were made of net photosynthesis, transpiration rate, stomatal conductance and SPAD index. At 40 days after sowing the plants, they were collected, and determined leaf area, shoot dry matter (after drying the material under glass), the relative water content, the osmotic potential, microbiological variables (dependency and mycorrhizal colonization), mineral levels (N, P, K+, Ca2+, Mg2+, Na+, and Cl-) and organic solutes (soluble carbohydrates, N-aminosolubles, proline and soluble protein). The mycorrhizal fungi did not provide an increase in the growth of corn plants, but elevated levels of salinity reduced leaf area and shoot dry matter of plants. Generally, the salinity reduced the photosynthesis, stomatal conductance and transpiration in all treatments. The relative water content was not influenced by any of the factors studied. The SPAD index and relative water content were not influenced by any of the factors studied. The osmotic potential was significantly reduced in treatments with 4.0 and 8.0 dS m-1 salinity compared with the level of 0.5 dS m-1. Mycorrhizal colonization decreased with increasing levels of saline. The levels of glomalin were not influenced by the presence of P and not by increasing levels of salinity. The mycorrhizal fungi did not cause increases in levels of inorganic solutes. The presence of P promoted maize cultivation in non-inoculated plants, increased levels of phosphorus in the leaves and stems, at all levels of salinity. Increased salinity levels decreased the levels of N and Mg2+, but promoted increased levels of Na+ and Cl- in corn plants. The water-soluble carbohydrate showed no significant differences for any of the factors. In general, the levels of N-aminosolubles and proline increased with increasing salinity. Since the levels of soluble proteins showed different responses according to the factors. These results suggest that the mycorrhizal fungi did not minimize the effects of salinity in maize plants (hybrid AG 1051), at least under the conditions employed here. / Muitos estudos têm demonstrado que a inoculação de plantas com fungos micorrízicos arbusculares (FMA) melhora o crescimento das plantas sob estresse salino. Tendo em vista que a salinidade é um problema sério e que afeta de forma direta a produtividade das plantas, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da inoculação dos FMA em plantas de milho sob estresse salino, na presença ou ausência de fósforo. O experimento foi conduzido na casa de vegetação do Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular da Universidade Federal do Ceará (Campus do Pici, Fortaleza - Ceará), com quatro repetições. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, em arranjo fatorial 2 (plantas inoculadas e não inoculadas) x 3 (níveis de salinidade 0,5; 4,0 e 8,0 dS m-1) x 2 (presença ou ausência de fósforo), totalizando 48 unidades experimentais. Durante a condução do experimento foram realizadas medições da fotossíntese líquida, da taxa de transpiração, da condutância estomática e do índice SPAD. Aos 40 dias após a semeadura das plantas, as mesmas foram coletadas, sendo determinados a área foliar, a matéria seca da parte aérea (após secagem do material em estufa), o teor relativo de água, o potencial osmótico, as variáveis microbiológicas (dependência e colonização micorrízica), os teores de alguns elementos minerais (N, P, K+, Ca2+, Mg2+, Na+ e Cl-) e solutos orgânicos (carboidratos solúveis, N-aminossolúveis, proteína solúvel e prolina). A associação micorrízica não proporcionou incremento no crescimento das plantas de milho, porém os aumentos nos níveis de salinidade reduziram a área foliar e a matéria seca da parte aérea das plantas. De maneira geral, a salinidade reduziu a fotossíntese, a condutância estomática e a transpiração em todos os tratamentos. O índice SPAD e o teor relativo de água não foram influenciados por nenhum dos fatores estudados. O potencial osmótico foi significativamente reduzido nos tratamentos com 4,0 e 8,0 dS m-1 de CE em comparação com o nível de 0,5 dS m-1. A colonização micorrízica decresceu com o incremento dos níveis salinos. Os teores de glomalina não foram influenciados pela presença de P e nem pelos níveis crescentes de salinidade. A associação micorrízica não acarretou incrementos nos teores de solutos inorgânicos. A presença de P no cultivo do milho promoveu, nas plantas não inoculadas, aumento nos teores de fósforo nas folhas e nos colmos, em todos os níveis de salinidade. O aumento dos níveis de salinidade reduziu os teores de N e Mg2+, porém promoveram o aumento nos teores de Na+ e Cl- nas plantas de milho. Os teores de carboidratos solúveis não apresentaram diferenças significativas para nenhum dos fatores analisados. De modo geral, os teores de N-aminossolúveis e de prolina aumentaram com o incremento da salinidade. Já os teores de proteínas solúveis apresentaram respostas diferenciadas de acordo com os fatores analisados. Esses resultados sugerem que a associação micorrízica não minimizou os efeitos da salinidade nas plantas de milho (híbrido AG 1051), pelo menos nas condições aqui empregadas.

Patógenos necrotróficos matam as células por meio de suas agressivas moléculas toxicas e enzimas líticas não específicas. Jasmonato (JA) é um importante hormônio produzido, para entre outras funções, regular positivamente genes envolvidos na defesa a necrotróficos. Um passo importante nesta rota é a produção do ácido linolênico, um ácido graxo de (18:3) que é dessaturado de (18:2) pelas enzimas FAD3, FAD7 e FAD8. Uma ferramenta muito utilizada hoje é o silenciamento gênico induzido por vírus (VIGS) que se utiliza de um mecanismo natural de defesa das plantas a vírus, para a descoberta da função gênica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a interação entre A. thaliana e isolados do gênero Pythium sp., com os genes FAD3, FAD7 e FAD8 silenciados. Para alcançar tal objetivo um fragmento de 325 pb do gene FAD7 de A. thaliana foi isolado e clonado no vetor viral TRV2b. As plantas foram agro-infiltradas com o vetor TRV1 e TRV2b-GFP (controle) ou TRV2b-FAD7 (silenciada), após foi realizada a inoculação dos isolados de Pythium sp. e atribuídas notas de severidade, referente ao fenótipo e medido o comprimento das raízes. A agro-infiltração do vetor viral TRV2b-FAD7 ocasionou uma redução significativa na quantidade de mRNA dos genes FAD3 e FAD7, não interferindo na quantidade de mRNA do FAD8. Esta redução na expressão interferiu negativamente na resistência de A. thaliana a P. deliense, causando sintomas mais severos na parte aérea, sintomas que estão correlacionados significativamente com o comprimento de raiz. O silenciamento destes genes ocasionou a redução na expressão da defensina PDF1.2, induzida na infecção por patógenos necrotróficos. A resistência a P. deliense foi restituída pela adição de metil-jasmonato, pois a aplicação exógena deste, ocasionou a indução de PDF1.2, evidenciando a importância da produção de JA na indução desta defensina e na resistência a P. deliense. / Necrotrophic pathogens kill plant cells through its aggressive and nonspecific lytic enzymes and toxic molecules. Jasmonate (JA) is an important hormone that positively regulates genes involved in necrotrophic defense, among other functions. An important step in this pathway is the production of linolenic acid, a fatty acid (18:3) that is desaturated to (18:2) by FAD3, FAD7, and FAD8 enzymes. Virus induced gene silencing (VIGS) is a widely used tool today, which takes advantage of a natural defense mechanism of plants against viruses, for the discovery of gene function. The aim of this study was to evaluate the interaction between A. thaliana and isolates of the genus Pythium sp., after gene silencing of FAD3, FAD7, and FAD8. For this purpose, a 325 bp fragment of FAD7 from A. thaliana was isolated and cloned into a viral vector TRV2b. Plants were agro-infiltrated with the vector and TRV1 TRV2b-GFP (control) or TRV2b-FAD7 (silenced). Then, plants were inoculated with Pythium sp. isolates and disease severity was evaluated, based on phenotype and measures of root length. Agroinfiltration of TRV2b-FAD7 caused a significant reduction in the amount of mRNA from FAD3 and FAD7 but did not interfere in the amount of mRNA from FAD8. This down regulation had a negative influence on the resistance of A. thaliana to P. deliense, causing more severe symptoms in the shoot, symptoms that are significantly correlated with root length. Gene silencing led to a reduction in the expression of PDF1.2 defensin, which is induced in infections caused by necrotrophic pathogens. Resistance to P. deliense was restored by adding exogenous methyl jasmonate, which induced PDF1.2 expression. These results indicate the importance of JA in the induction of this defensin leading to resistance against P. deliense in A. thaliana.

A deterioração microbiana de hidrocarbonetos, principalmente em combustíveis destilados, leva à formação de uma biomassa na interface óleo-água em sistemas de armazenagem, causando a obstrução de filtros, mangueiras e tubulações, sólidos suspensos no óleo (atividade biosurfactante) e corrosão dos tanques metálicos. Visando a determinar a população presente no sedimento de tanques armazenadores de óleo diesel (naval, comum e urbano), procedeu-se o isolamento, caracterização, estimativa da população bacteriana pela técnica do número mais provável (NMP) que realiza a estimativa do número de bactérias por ml, assim como a possibilidade de controle com o uso de 4 biocidas. Foram isolados os fungos Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger e Amorphotheca resinae; 2 isolados identificados como prováveis Bacillus e 2 como Pseudomonas, detectando-se também a presença de bactérias redutoras de sulfato - BSR. O isolado caracterizado como provável pertencente ao gênero Pseudomonas apresentou-se com maior atividade surfactante. A estimativa da população aeróbia foi de 5,4 a 7,0 unidades logarítmicas/ml e da população de BSR foi de 5,4 a 6,4 unidades logarítmicas/ml presentes no sedimento e na fase aquosa. Os biocidas à base de sal quaternário de amônio e de isotiazolona apresentaram atividade superior aos demais biocidas testados (aldeídos). / Microbial deterioration of hydrocarbons, mainly distilled fuels, causes the formation of a biomass at the oil-water interface, leading to the blockage of filters and pipes, the presence of suspended solids in the oil phase (due to biosurfactant activity) and corrosion of the metallic tanks. The isolation, characterization and enumeration by the MPN (Most probable number) technique of the microbial population in the water and sediment phase of tank diesel was carried out with a view to investigating microbial contamination in diesel storage tanks. The anti-microbial activity of 4 biocides against the isolated microrganisms was also tested. Four fungi and 5 bacteria were isolated: Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger and Amorphotheca resinae; 2 types of Bacillus; 2 of Pseudomonas and 1 sulphate-reducing bacteria - SRB. One isolate tentatively identified as Pseudomonas was shown to be the best biosurfactant producer. The aerobic population was 105.4 -107.0/ml and the anaerobic 105.4 -106.4/ml. The 2 biocides based on a quaternary ammonium salt and an isothiazolone mixture were more active against the isolated microrganisms than the other biocides (aldehydes).

Submitted by MAIARA STEFANINI BORGES null (borges.maiara@iq.unesp.br) on 2016-03-22T21:06:41Z No. of bitstreams: 1 MAIARA STEFANINI BORGES.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-23T13:30:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 borges_ms_me_araiq.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-23T13:30:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 borges_ms_me_araiq.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) Previous issue date: 2016-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Micro-organismos endofíticos, geralmente fungos e bactérias, vivem sistematicamente no interior das plantas sem causar, aparentemente, danos a seus hospedeiros. Fungos endofíticos representam um importante grupo de fungos com potencial fármaco e biotecnológico e podem ser isolados de diversas plantas medicinais. A espécie vegetal Eugenia jambolana Lam. tem sido intensamente explorada química e biologicamente devido a seus usos populares e por apresentar diversas atividades biológicas. Logo, o estudo de fungos endofíticos, associados a esse espécie vegetal, apresenta-se como uma estratégia promissora na obtenção e identificação de substâncias potencialmente bioativas. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo principal a avaliação química do fungo endofítico Saccharicola sp. isolado de Eugenia jambolana Lam. Este endófito foi cultivado em pequena escala nos meio de cultura liquido (MDB) e sólido (Milho) e em escala ampliada no meio Czapek. O caldo foi separado dos micélios após 28 dias (meios líquidos) e 21 dias (meio sólido) por filtração e o filtrado foi submetido à partição líquido/líquido com AcOEt fornecendo, após a evaporação do solvente, os respectivos extratos brutos. Os extratos foram avaliados frente a produção metabólica por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H e também avaliados frente aos ensaios biológicos. Portanto para os extratos MDB, Milho Fr.CH3CN, Milho Fr. aquosa e Milho Fr.Hexânica, foram realizados ensaios antifúngico, antioxidante e anticolinesterásico, onde estes extratos demonstraram ser promissores. O extrato obtido em escala ampliada (Czapek) foi fracionado em cartucho SPE (extração em fase sólida), resultando em seis frações (Ss.C.Fr1- Ss.C.Fr6). Do estudo da fração Ss.C.Fr1 foi possível o isolamento de uma substância o Ácido fusárico (1) e a fração Ss.C.Fr3 resultou no isolamento de 6,7 dihidroxi- 4,6 dimetil octanoato de metila (2), substância inédita. O extrato obtido em escala reduzida (Milho Fr.CH3CN) foi submetido a fracionamento em coluna de sílica gel de fase reversa (C18), resultando em oito frações (Ss.M. CH3CN Fr1 - Ss.M. CH3CN Fr8). O estudo da fração Ss.M. CH3CN Fr5 resultou no isolamento da substância 4-hidroximeleina (3). O estudo da fração Milho Fr.Aquosa-XAD resultou no isolamento de duas substâncias Timidina (4) e Adenosina (5). Portanto, o estudo químico com o fungo endofítico Saccharicola sp. resultou no isolamento de cinco substâncias puras. Sendo assim, este trabalho visou isolar substâncias potencialmente bioativas através da investigação dos extratos e frações de Saccharicola sp.. / Endophytic microorganisms, often bacteria and fungi systematically live within the plant without apparent harm their hosts. Endophytic fungi represent an important group of fungi with biotechnological potential and may be isolated from various medicinal plants. The plant species Eugenia jambolana Lam. has been intensively explored chemically and biologically due to its popular uses and it has several biological activities. Thus, the study of endophytic fungi associated with this plant species, presents itself as a promising strategy in obtaining or identifying potentially bioactive substances. Within this context, this study aimed to evaluate the chemical endophytic fungus Saccharicola sp. isolated from Eugenia jambolana Lam., encoded as Ej-c04. This endophyte was cultivated on a small scale to a liquid culture medium PDB solid Corn and enlarged scale for the Czapek medium. The broth was separated from the mycelium after 28 days (liquid media) and 21 days (solid medium) by filtration and the filtrate was subjected to liquid / liquid partition with ethyl acetate providing after evaporation of the solvent, their crude extracts. The extracts were evaluated against metabolic production by TLC, CLAE-DAD and 1H NMR also evaluated and compared to the bioassay. So for MDB extracts, Fr.CH3CN Corn, aqueous Fr. Corn and Corn Fr.Hexânica, tests were performed antifungal, antioxidant and anticholinesterase where these extracts have shown promise.The extract obtained in enlarged scale (Czapek) was fractionated on SPE cartridge (solid phase extraction), resulting in six fractions (Ss.C.Fr1- Ss.C.Fr6). From Ss.C.Fr1 fraction was possible to isolate a substance fusaric acid (1) and Ss.C.Fr3 fraction resulted in the isolation of (2E, 4E) - 6,7 dihydroxy-4,6-dimethyl octanoate (2) novel substance. The extract obtained in small scale (Corn Fr.CH3CN) was subjected to fractionation column of silica gel reversed phase (C18) resulting in eight fractions (Ss.M. CH3CN- Fr1 - CH3CN Ss.M. Fr8). The study fraction Ss.M. CH3CN Fr5 resulted in the isolation of 4-hidroximeleina substance (3). The study of fraction Corn Fr. Aqueous -XAD resulted in the isolation of two substances Thymidine (4), adenosine (5). Therefore the chemical study of the endophytic fungus Saccharicola sp. resulted in the isolation of five pure substances Thus, this study aimed to isolate potentially bioactive substances through the investigation of extracts and fractions of Saccharicola sp..

Submitted by AIRTON DAMASCENO SILVA null (airton.silva@ufv.br) on 2016-04-05T15:38:08Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado versão final.pdf: 4535490 bytes, checksum: 8bb674faf58fdd954d9ebfabaecc42b1 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-04-07T18:23:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_ad_me_araiq.pdf: 4535490 bytes, checksum: 8bb674faf58fdd954d9ebfabaecc42b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-07T18:23:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_ad_me_araiq.pdf: 4535490 bytes, checksum: 8bb674faf58fdd954d9ebfabaecc42b1 (MD5) Previous issue date: 2016-03-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O fungo Hypoxylon investiens ocorre em ambientes terrestres e aquáticos, sendo que a maior parte dos estudos já realizados com o gênero Hypoxylon refere-se aos fungos terrestres. Diversas substâncias e atividades biológicas foram determinadas para o gênero e o presente estudo é o primeiro a realizar a bioprospecção de H. investiens associado à alga marinha. Neste trabalho, foram estudados os constituintes químicos produzidos pelo fungo H. investiens e avaliadas algumas atividades biológicas promissoras (antifúngica e citotóxica). O extrato bruto dos metabólitos produzidos em meio líquido de PDB obtido em escala ampliada apresentou forte atividade frente aos fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum e mostrou-se ativo (75,7% de inibição) frente à linhagem tumoral HCT-116 (carcinoma de cólon). O seu fracionamento por CC em Sephadex LH-20 eluída com metanol resultou em 6 frações (G1 a G6): a fração G4 mostrou forte atividade antifúngica contra linhagens de C. cladosporioides e C. sphaerospermum, além de alto potencial de inibição (97,3%) de células tumorais HCT-116. As frações G5 e G6 também se mostraram ativas frente à linhagem tumoral HCT-116 apresentando, respectivamente, 104,8% e 99,4% de inibição dessa linhagem de células tumorais. A fração G5 apresentou ainda atividade (inibição de 84,5%) contra a linhagem MCF-7 (adenocarcinoma de mama metastático). No entanto, as frações G4 e G6 mostraram-se inativas contra esta linhagem, o que evidenciou a seletividade dessas frações frente às linhagens tumorais testadas. Estes resultados indicaram elevado potencial de produção de metabólitos bioativos por H. investiens. Os procedimentos cromatográficos levaram ao isolamento de 14 substâncias da fração G5, 3 substâncias da fração G6 e de outras 2 substâncias da fração inativa G3. A análise estrutural preliminar por RMN das 17 substâncias isoladas das frações bioativas G5 e G6 indica que devam se tratar de compostos inéditos, derivados do BNT (4,4´,5,5’-tetraidroxi-1,1´-binaftila), sendo que três delas, isoladas da fração G5, tiveram seus esqueletos carbônicos completamente caracterizados, utilizando-se experimentos uni e bidimensionais de RMN e espectrometria de massas de alta resolução. Experimentos adicionais estão em andamento para se determinar a estereoquímica dos centros de quiralidade das substâncias elucidadas, e as demais estruturas estão sob processo de investigação estrutural. Uma das substâncias isoladas da fração não-ativa G3 foi o ácido 3-nitropropanóico, uma toxina mitocondrial produzida por fungos para sua defesa e que foi produzido com alto rendimento (304,5 mg a partir de 605,4 mg da fração G3) por H. investiens. Os resultados obtidos foram promissores, evidenciando a destacada quimiodiversidade de fungos obtidos do ambiente marinho e elevado potencial de bioatividade de seus extratos e frações. Sinalizam ainda para a necessidade de estudos mais aprofundados da química e das propriedades biológicas do fungo H. investiens contribuindo para a exploração sustentável da biodiversidade marinha brasileira. / The fungus Hypoxylon investiens occurs in terrestrial and aquatic environments, and most studies carried out so far on genus Hypoxylon refer to the terrestrial fungal strains. Many compounds and biological activities were determined for the genus and the present study is the first to carry out the bioprospection of H. investiens associated to marine algae. In this work, the chemical constituents produced by a fungal strain of H. investiens were investigated and some promising biological activities were evaluated (antifungal and cytotoxicity). The crude extract of the metabolites produced in PDB liquid medium by H. investiens was obtained in large scale and showed strong activity against the phytopathogenic fungi Cladosporium cladosporioides and C. sphaerospermum. It also showed inhibitory activity (75.7% of inhibition) on colon carcinoma tumor cell line HCT-116. Its fractionation by column chromatography over Sephadex LH-20 eluted with methanol afforded 6 fractions, (G1-G6). Fraction G4 showed strong antifungal activity against C. cladosporioides and C. sphaerospermum strains, in addition to high inibitory potential (97,3%,) towards tumor cells HTC-116. Fractions G5 and G6 were also active against tumor cell line HCT-116, showing 104,8% and 99,4% inhibition, respectively. Additionally, fraction G5 inhibited metastatic breast adenocarcinoma cell line MVF-7 whereas fractions G4 and G6 were inactive, which evidenced selectivity of such fractions towards the tested tumor cells lines. These results evidenced a high potential of production of bioactive metabolites by H. investiens. The chromatographic procedures led to the isolation of 14 compounds from fraction G5, 3 compounds from fraction G6 and 2 compounds from the non-active fraction G3. The preliminary analysis of the 17 isolated compounds from the bioactive fraction G5 and G6 by NMR spectroscopy indicated they are novel compounds structurally related to BNT (4,5,4',5'-tetrahydroxy-1,1'-BiNaphThyl). From those, three compounds were isolated from fraction G5 and had their carbon skeletons fully characterized and consistent with uni and bidimensional 1H and 13C NMR spectral data and high-resolution mass spectrometry. Additional experiments are being developed to determine the stereochemistry of asymmetric centers in the elucidated structures. Additionally, the non-active fraction G3 afforded high yield (304,5 mg from 605,4 mg of G3 fraction) of 3-nitropropanoic acid, a mitochondrial toxin wide spread among fungi and produced for their own defense. The results obtained were promising, pointing out the need for further in-depth investigations on the chemistry and biological properties of the fungus H. investiens. Such promising results evidence the outstanding chemodiversity of marine-derived fungi and highlight the bioactivity potencial of their extracts and fractions. They also point out the need for further studies of H. investiens chemistry and biological properties, which may contribute for the sustainable exploration of Brazilian marine biodiversity.