Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-26Bitstream added on 2014-06-13T18:41:37Z : No. of bitstreams: 1 benedetti_acep_dr_arafcf.pdf: 555249 bytes, checksum: c34c45268021bed2af4612d36cdf1d73 (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A descoberta de resíduos agrícolas, como fonte de energia renovável tem colaborado para o desenvolvimento industrial e preservação do meio ambiente. Desta maneira, a degradação da parede celular destes resíduos tem grande importância na fabricação de pães, alimentos, bebidas, têxtil, papel e celulose entre outros produtos. A degradação enzimática destes polímeros esta se tornando uma alternativa mais atraente do que a utilização de substâncias químicas e processos mecânicos. Alguns fungos termófilos participam desta degradação enzimática, como Humicola grisea var. thermoidea, isolado do solo, é conhecido como bom produtor do complexo xilanolítico. Além deste, um fungo termófilo isolado da polpa do fruto cupuaçuzeiro em decomposição foi estudado e produziu xilanase. Esses fungos foram mantidos em meios sólidos contendo ágar e farinha de aveia. O fungo isolado da polpa do fruto cresceu em meio liquido empregando diferentes resíduos agrícolas como fonte de carbono. Dentre os vários resíduos empregados para se otimizar a produção de xilanase, o melhor foi o sabugo de milho. Esse foi utilizado nos experimentos na proporção de 1,0% (m/v), em meio líquido contendo 0,1% CaCO3, 0,5% NaCl, 0,1% NH4Cl; 0,5% água de maceração de milho. O pH ótimo foi 5,0 e a temperatura ótima de 60ºC. A xilanase presente no extrato clarificado em caulim apresentou cinética Michaeliana com Km de 10,41 ± 0,282 mgmL-1 e Vmax 3,32 ± 0,053 U (mg protein)-1. Para acompanhar o processo de clarificação da enzima solúvel realizou-se SDS-PAGE verificando a presença de uma banda protéica com atividade xilanolítica de massa molecular de aproximadamente 30kDa e a Cromatografia Sílica Gel P60 para verificar os produtos da hidrólise da xilana em função do tempo e da associação de xilosidase do fungo termófilo Humicola com a xilanase do fungo isolado do fruto... / The researches of agricultural residues as renewable energy sources have been contributing for the industrial development and the environment conservation. Thus, the degradation of these residues’ cell walls has great importance in fabrication of bread, food, drinks, textile, paper, cellulose, and other products. The enzymatic degradation of such polymers is becoming an attractive option when compared to the use of chemical substances and mechanical processes. Some thermophilic fungi take role in this enzymatic degradation, such as Humicola grisea var. thermoidea, isolated from soil, and is known to be a good producer of the xylanolytic complex. Besides it, another thermophilic fungus, isolated from the Theobroma grandiflorum decomposing fruit pulp, was studied and also produced xylanases. These fungi were kept in solid media containing agar and oat bran. The fungus isolated from the fruit pulp grew in liquid media in wich different kinds of agricultural residues were employed as carbon sources. Among the various types of residues that were used to optimize the xylanase production, corn cobs proved to be the best one. It was used in assays in a proportion of 1,0% (m/v), in liquid media containing 0.1% of CaCO3, 0.5% of NaCl, 0.1% of NH4Cl, and 0.5% of corn steep liquor. The pH optima was 5.0 and the temperature optima was 60ºC. The xylanase present in the kaolin clarified extract showed a Km of 10.41 ± 0.282 mg.mL-1, and Vmax 3.32 ± 0.053 U (mg.protein)-1. In order to follow the soluble enzyme clarification process, SDS-PAGE was run, verifying the presence of a proteic band with xylanolytic activity of, approximately, 30kDa of molecular mass. Furthermore, Silica Gel 60 Thin Layer Chromatography (TLC) was used to verify the xylan hydrolysis products in function of time and the association of Humicola sp. thermophylic fungus xylosidase with the xylanase produced by the fruit pulp... (Complete abstract click electronic access below)

O presente trabalho foi delineado considerando-se a importância de fungos filamentosos e leveduras, os quais estão associados a diversas patologias no homem e animais. Deve-se considerar ainda que o leite e seus derivados lácteos contaminados com estes microrganismos podem constituir potenciais vias de transmissão de zoonoses a eles relacionados. Foram analisadas amostras de leite cru dos tipos A, B e C colhidas nas próprias propriedades leiteiras, bem como amostras de leite comercializado diretamente ao consumidor, visando-se a comparação da qualidade destes produtos quanto à presença e quantidade de fungos. Procedeu-se ainda à avaliação da susceptibilidade dos fungos isolados das amostras de leite às relações temperatura/tempo empregados nos processos de pasteurização e avaliação da sensibilidade destes isolados à fervura do leite. Foram analisadas 70 amostras de leite, sendo 50 de tanques de refrigeração de propriedades leiteiras, 10 de latões de propriedades de exploração leiteira e 10 de latões de transportadores e distribuidores que armazenam e comercializam leite clandestino, sendo que não houve diferença estatisticamente significante entre as medianas das quantidades de unidades formadoras de colônias de fungos/mL de Leite das diferentes procedências, indicando que o nível de contaminação por fungos nas amostras destas três origens foi similar. Foram isolados, em diferentes percentagens, fungos filamentosos e leveduras de todas as amostras de leite das diferentes procedências: Candida spp. (C. krusei, C. guilliermondii, C. tropicalis, C. kefyr, dentre outras), Geotrichum spp., Rhodotorula spp., Trichosporon spp., Aureobasidium sp., Penicillium spp., Acremonium spp., Chrysosporium sp., Mucor spp., Aspergillus spp. Todos os gêneros e espécies isoladas foram submetidos aos testes de pasteurização rápida e lenta, bem como a fervura. O processo de pasteurização rápida foi o procedimento no qual houve maior resistência (72,18%) por parte dos isolados de leveduras e fungos filamentosos submetidos ao teste na metodologia aplicada, seguido pelo processo de fervura (15,89%) e o de pasteurização lenta (0,99%). / The present study was outlined considering the importance of filamentous fungi and yeasts, associated to various pathologies in man and animals. It must be considered that milk and dairy products when contaminated with these microorganisms can represent a potential means of zoonosis transmission related to them. Samples of raw milk types A, B and C, collected in dairy farms, as well as milk sold directly to the consumer, were analysed, aiming the comparison of the quality of these products as to the presence and quantity of fungi. The susceptibility of the isolates to the temperature/time rates employed in pasteurization and boiling was also evaluated. Seventy samples of raw milk were analysed, 50 from bulk tanks, 10 from small tanks of milk from dairy farms, and 10 from transportation tanks and distributors that store and sell clandestine milk. No statistically significant difference was observed between medians of the quantity of colonies forming units of fungi/mL of milk from the different sources, indicating that the level of contamination by fungi was similar when the three sources were compared. Filamentous fungi and yeasts were isolated in different percentages from all the samples from the different sources: Candida spp. (C. krusei, C. guilliermondii, C. tropicalis, C. kefyr, etc.), Geotrichum spp., Rhodotorula spp., Trichosporon spp., Aureobasidium sp., Penicillium spp., Acremonium spp., Chrysosporium sp., Mucor spp., Aspergillus spp. All isolates were submitted to pasteurization and boiling. Quick pasteurization was the procedure in which the highest resistance (72.18%) of the isolates was verified, followed by boiling (15.89%) and slow pasteurization (0.99%).

Estudos em nosso laboratório caracterizaram camundongos B10.A e A/J, respectivamente, como susceptíveis e resistentes à infecção pulmonar pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis. A imunidade inata desempenha papel fundamental no controle inicial dos patógenos e na regulação da resposta imune adquirida. Como os macrófagos alveolares são as primeiras células do hospedeiro a interagir com o fungo, propusemo-nos a estudar a capacidade fungicida e secretora dos macrófagos alveolares de camundongos susceptíveis e resistentes ao P. brasiliensis para melhor compreender a PCM pulmonar. Camundongos B10.A e A/J normais (n: 10-15) foram submetidos a lavagem bronco-alveolar (LBA) e a suspensão celular obtida (2x105 células/poço) foi pré-ativada durante a noite com IFN-γ, IL-12 ou a combinação destas duas citocinas (50.000, 10.000 e 2.000 pg/rnL) e desafiados in vitro com leveduras viáveis de P. brasiliensis (relação fungo-macrófagos de 1:50). Após 72h de incubação a atividade fungicida dos macrófagos foi avaliada através da contagem do número de fungos viáveis pelo método de unidades formadoras de colônias (UFC). A produção de nitrito e de citocinas foi avaliada no sobrenadante de cultivo através da reação de Griess e ELISA, respectivamente. Os dados foram expressos como média ± EP e analisados pelo teste T -Student. Nossos resultados mostraram que os macrófagos de camundongos B 10.A pré-ativados com IFN-γ, IL-12 ou ambas as citocinas nas diferentes concentrações ensaiadas apresentaram elevada capacidade fungicida (51-97%) acompanhada de produção aumentada de NO, IL-12 e MCP-l e baixa síntese de IL-10 e GM-CSF. Por outro lado, somente o tratamento com a mais alta concentração de IFN-γ foi capaz de induzir atividade fungicida em macrófagos alveolares de animais A/J. A síntese de NO ocorreu sempre em baixos níveis e nos sobrenadantes dos co-cultivos observamos altos níveis de IL-10 e GM-CSF associados a baixas concentrações de IL-12 e MCP-l. A inibição da síntese de NO por aminoguanidina demonstrou que a atividade fungicida dos macrófagos de animais B10.A, mas não de A/J, era mediada por este composto tratamento dos macrófagos com anticorpo monoclonal anti-IL-10 não alterou a capacidade fungicida dos macrófagos de ambas as linhagens, entretanto induziu franca produção de NO que, para animais A/J, não se traduziu em atividade microbicida aparente. Por outro lado. a neutralização de TGF-β induziu alta capacidade fungicida das células de animais A/J níveis aumentados de NO e TNF-α aliados a níveis reduzidos de IL-10. O mesmo tratamento não alterou a já elevada capacidade fungicida dos macrófagos alveolares de animais B10.A mas aumentou a produção de NO, IL-12 e TNF-α. Em conclusão, os macrófagos alveolares de camundongos B10.A são facilmente ativáveis por 1FN-γ e IL-12, apresentam elevada capacidade fungicida, NO-dependente, sobre leveduras do P. brasiliensis associada com a síntese de níveis elevados de NO e IL-12. Por outro lado, os macrófagos de camundongos A/J são pobremente ativados por 1FN-γ e IL-12, produzem baixos níveis de NO, a sua capacidade fungicida, que parece ser NO-independente, pode ser aumentada pela neutralização do TGF-β endógeno, mas não pelo tratamento com anti-IL-10. / Previous studies in our laboratory characterized B10.A and A/J mice as susceptible and resistant strains to pulmonary Paracoccidioides brasiliensis infection. Innate immunity plays a fundamental role on the control of the initial growth of pathogens as well as in the acquired immunity that subsequently develops. As alveolar macrophages are the first host cells to interact with P. brasiliensis we decided to study the fungicidal and secretory ability of alveolar macrophages from resistant and susceptible mice to P. brasiliensis to better understand the pulmonary model of paracoccidioidomycosis. Normal B10.A and A/J mice (n=10-15) were submitted to bronchoalveolar lavage (BAL) and cell suspensions (2x105 cells/well) were pre-activated ovemight with IFN-γ, IL-12 or the combination of these two cytokines (50,000, 10,000 and 2,000 pg/rnL). After that, macrophages were in vitro challenged with P. brasiliensis yeasts (1:50 fungus: macrophage ratio) and 72h later fungicidal activity was determined by colony forming units counts (CFU). Nitrite and cytokines production were determined in culture supematants by Griess reaction and ELISA, respectively. Data were expressed as means ± SE and analyzed by Student\'s t test. Our results showed that B10.A macrophages pre-activated with the different assayed concentrations of IFNγ, IL-12 or both cytokines presented elevated fungicidal ability (51¬-97%) concomitant with the presence of high levels of NO, IL-12 and MCP-l and low amounts of IL-10 and GM-CSF. NO synthesis occurred in low levels but high concentrations of IL-10 and GM-CSF associated to low amounts of IL-12 and MCP-1 were detected in the co-cultures supematants. NO synthesis inhibition by aminoguanidine clearly showed that the fungicidal ability of B10.A but not of A/J macrophages was NO¬ dependent. Treatment with anti-IL-10 monoclonal antibodies did not alter the fungicidal ability of macrophages from both mouse strains but enhanced NO synthesis which, however, did not alter the absent microbicidal ability of A/J macrophages. On the contrary, anti-TGF-β treatment induced an increased fungicidal ability of A/J cells associated with enhanced levels of NO and TNF-α besides diminished amounts of IL-10. The same treatment did not alter the high fungicidal ability of B10.A alveolar macrophages but increased NO, IL-12 and TNF-α production. In conclusion, alveolar macrophages from susceptible mice are easily activated by IFNγ and IL-12, present a high and NO-dependent ability to kill P. brasiliensis yeasts and secrete elevated levels of NO and IL-12. In contrast, alveolar macrophages from resistant mice are poorly activated by IFNγ and IL¬12, secrete low amounts of NO and high of IL-10. Their fungicidal ability which appears to be NO-independent can be restored by neutralization of endogenous TGF-β but not by anti-IL-10 treatment.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-10-09T14:38:25Z No. of bitstreams: 2 Tese - Rodrigo Alves da Silva - 2012.pdf: 2207385 bytes, checksum: a2450ec59543ec17b23f8c3632087770 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-10-09T14:40:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Rodrigo Alves da Silva - 2012.pdf: 2207385 bytes, checksum: a2450ec59543ec17b23f8c3632087770 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:40:07Z (GMT). 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Sorokin, general aspects of taxonomy, morphology, infection process of this fungus to their hosts and virulence factors were also addressed. To sum up, chemical ecology was explored addressing intraspecific and interspecific interactions among insect family pentatomidae with emphasis on studies of chemical compounds of defense in order to understand the natural resistance of this group of insects to entomopathogenic fungi. Chapter 2 (Toxicity of compounds extracted from the cuticle and the stink methatoracic gland (MTG) of T. limbativentris to the fungus M. anisopliae) describes the susceptibility of different life stages of T. limbativentris to M. anisopliae and correlates these results with the fungicidal activity of aldehydes (E)-2-octenal and (E)-2-dedecenal extracted from metathoracic scent glands (MTG) of adults as well as the (E)-2-hexenal, extracted from dorsal abdominal scent glands (DAG) of nymphal stages (second to fifth instar), by collecting exuviae. All compounds extracted were characterized by GC-MS and their fungistatic potential determined measuring the minimum inhibitory concentration (MIC) of these compounds, which expresses the ability of these compounds to inhibit the conidial germination of this fungus entirely. The aldehyde (E)-2-decenal was the most harmful to M. anisopliae germination, with MIC of 0.003% (30 ppm) compared to the (E)-2-hexenal and (E)-2-octenal, which in turn showed MIC of 0.012 and 0.025%, respectively. Chapter 3 (Effect of pesticides used in conventional rice cultivation with the entomopathogenic fungus M. anisopliae.) Describes the assessment of the compatibility of M. anisopliae to eight insecticides, five herbicides and four fungicides registered for rice cultivation. In this study we evaluated the germination (GER), vegetative growth (VG) and sporulation (ESP) of the fungus after three hours in the mixture, stirring with agrochemicals. The parameters evaluated were the fungus equated using the following formula: BI = [(VG * 47) + (ESP * 43) + (10 * GER)] / 100, in which through the biological index value (BI) was possible to determine the compatibility level of agrochemicals to the fungus. Among the tested pesticides, insecticides Bravic™, Actara™, Karate Zeon™; herbicide Roundup™, Basagran™, Kifix™ and fungicide Priori ™ were the only products compatible with M. anisopliae. Chapter 4 (enhanced pathogenicity toT. limbativentris with sublethal doses of chemical insecticides.) describes the interaction of M. anisopliae combined with sublethal concentrations of thiamethoxam against adults of T. limbativentris. This combination as hypothesis has to overcome the natural chemical resistance of T. limbativentris to M. anisopliae. The results showed that T. limbativentris was more susceptible to M. anisopliae (strain CG-168) associated with sublethal doses of thiamethoxam (Actara™) or lambda-cyhalothrin (Karate Zeon™) than the fungus alone. In addition, the optimum concentration was observed for the fungus at 5x107 conidia combined with concentrations of the insecticide thiamethoxam. The fungus in xxi this concentration mixed with thiamethoxam at 3.1 ppm caused 80% adult mortality, whereas the mortality rates in treatments with the fungus and 3.1 ppm thiamethoxam both applied alone were 38 and 35% respectively. Sublethal doses of Actara™ (3.1 ppm) and Karate Zeon™ (186 ppm) was estimated by Probit equation. For the purpose of using a commercial strain of M. anisopliae, the virulence of strain CG-168, used in all previous tests, was compared to strain 1037-ESALQ, registered commercially. According to the results both strains had similar virulence to adult T. limbativentris. commercially registered in Brazil market. According to the results, adults of T. Limbativentris were similarly susceptible to both strains of M. anisopliae. In the field experiment, five treatments were prepared: Fungus + Actara™ sublethal dose (50g ha), Fungus, Actara™ sublethal dose (50g./ha) Actara™ full dose (200g./ha) and control; which were applied on rice plants infested with insects inside nylon cages under field conditions. After seven and 14 days of application, 20 insects were collected from each cage and evaluated in the laboratory. According to the results, the evaluation of the first collection, mixture of M. anisopliae with 50g/ha Actara™ caused 54% mortality compared with 40, 32, 26 and 18% respectively for the full dose of Actara™ (200g/ha), fungus alone, Actara™ sublethal dose (50g/ha) and control. In the second collection, fungus + Actara™ highlightedin relation to the others, causing a 50% mortality, while treatment with the fungus alone the mortality was16% and the others treatment was 0% As a result, we found a synergism effect between fungus and sublethal dose of the insecticide. In summary, our results highlight the potential of sublethal concentrations of the neonicotinoid insecticide thiamethoxan in increasing the susceptibility of adults of T. Limbativentris to the fungus M. anisopliae. In fact, this strategy consists in a control method effective and feasible to combat this stink rice bug in the field from a viewpoint of an integrated pest management and sustainability. / O presente estudo foi dividido em capítulos que inclui diversos aspectos da interação entre o fungo entomopatogênico M. anisopliae com o percevejo do colmo do arroz T. limbativentris como se seguem: O capítulo 1 (Considerações teóricas) descreve uma introdução sobre os elementos envolvidos neste estudo como: A importância da cultura do arroz para o Brasil, assim como aspectos sócio-econômicos e fitossanitário dessa cultura. O mesmo capítulo também aborda informações sobre o percevejo do colmo do arroz, Tibraca limbativentris stal (1869) como aspectos morfológicos, biológicos, importância como praga e métodos de controle químico e biológico. Sobre o fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin esse capítulo aborda aspectos gerais como taxonomia, morfologia, processo de infecção desse fungo aos seus hospedeiros e fatores de virulência. Para finalizar o capítulo foi explorado o assunto sobre ecologia química abordando as interações interespecíficas e intraespecíficas entre os insetos da família pentatomidae com ênfase nos estudos sobre compostos de defesas já elucidados nesta família de insetos. O capítulo 2 (Toxicidade de compostos extraídos da Glândulas Metatorácica (GMT), de adultos, e da Abdominal Dorsal (GAD), de ninfas, de T. limbativentris a M. anisopliae) descreve os resultados relacionados a diferença de susceptibilidade entre os estágios de vida do T. limbativentris ao fungo M. anisopliae e correlaciona estes resultados a atividade fungitóxica dos aldeídos (E)-2-octenal e (E)-2-decenal, extraído da glândula metatorácica (MTG) de adultos, e também o (E)-2-hexenal, extraído da glândula abdominal dorsal (DAG) nos estágios ninfais de segundo a quinto instar deste percevejo, por meio de coleta de exúvias. Todos os compostos extraídos foram caracterizados por CG-EM e o potencial fungitóxico determinado por meio da concentração inibitória mínima (MIC) desses compostos capaz de inibir totalmente a germinação do fungo. O aldeído (E)-2-decenal foi o mais ativo, apresentando MIC de 0,003% (30 ppm), em comparação com o (E)-2-hexenal e o (E)-2-octenal que apresentaram MIC de 0,012 e 0,025% respectivamente. O capítulo 3 (Efeito de agroquímicos convencionais utilizados na cultura do arroz ao fungo M. anisopliae.) descreve a avaliação da compatibilidade do M. anisopliae à oito inseticidas, cinco herbicidas e quatro fungicidas registrados para a cultura do arroz. Neste trabalho avaliou-se a germinação (GER), o crescimento vegetativo (CV) e a esporulação (ESP) do fungo após três horas em mistura, sob agitação, com os agroquímicos. Os parâmetros avaliados do fungo foram equacionados segundo a fórmula: IB = [(CV*47)+(ESP*43)+(GER*10)]/100; no qual através do valor índice biológico (IB) determinou-se a seletividade dos agroquímicos ao fungo. Entre os agroquímicos testados, os inseticidas Bravic™, Actara™, Karate Zeon™; os herbicidas Roundup™, Basagran™, Kifix™ e o fungicida Priori™ foram compatíveis ao M. anisopliae. No entanto, o fungicida Priori™ retardou a germinação do fungo, até 20 horas após o contato nenhum conídio germinado foi observado neste tratamento e após 48 horas foi observado 43% germinação. O capítulo 4 (Aumeto da patogenicidade de M. anisopliae a T. limbativentris com doses subletais de inseticidas químicos.) descreve a interação do M. anisopliae combinado com concentrações subletais de tiametoxam contra adultos do T. limbativentris. A combinação tem como hipótese superar resistência química natural do T. libentriventris ao M. anisopliae. Os resultados mostraram que o T. limbativentris foi mais susceptível ao M. anisopliae associado a doses subletais de tiametoxam (Actara™) ou λ-cialotrina (Karate Zeon™) do que ao xix fungo isolado. E ainda foi verificado uma concentração ótima para o fungo (5x107 conídios.mL), através de correlação com concentrações do inseticida tiametoxam. O fungo nesta concentração misturado ao tiametoxam a 3.1 ppm causou mortalidade de 80%, enquanto a taxa de mortalidade nos tratamentos com o fungo isolado e o tiametoxam 3.1 ppm foi de 38 e 35% respectivamente. As doses sobletais de Actara™ (3,1ppm) Karate Zeon™ (186ppm) foi estimada pela equação Probit. Com a intenção de utilizar uma cepa comercial do M. anisopliae foi comparada a virulência da cepa CG-168, utilizadas em todos os ensaios anteriores, com a cepa ESALQ-1037, registrada comercialmente. Segundo resultados ambas as cepas tiveram virulência semelhante para adultos de T. limbativentris. No experimento de campo, foram preparados cinco tratamentos: Fungo + Actara™ dose subletal (50g/há), Fungo, Actara™ dose subletal (50g/há), Actara™ dose cheia (200g/ha) e o controle; os quais foram aplicados nos insetos contidos em gaiolas em campo. Após um e sete dias da aplicação, foram coletados 20 insetos de cada gaiola e avaliados em laboratório. Segundo resultados, na avaliação da primeira coleta, o tratamento com a mistura do M. anisopliae com 50g/ha Actara™ apresentou taxa de mortalidade 54% contra 40, 32, 26 e 18% respectivamente para os tratamentos Actara™ dose cheia (200g/ha), Fungo, Actara™ dose subletal (50g/há) e Controle. Na avaliação da segunda coleta, o tratamento com o fungo + Actara™ destacou em relação aos demais, causando taxa de mortalidade de 50% enquanto o tratamento com o fungo isolado foi de 16% e os demais de 0%. Nesta avaliação constatou-se um sinergismo entre o fungo e a dose subletal do inseticida. Em resumo, nossos resultados destacam o potencial de concentrações subletais do inseticida tiametoxam (neonicotinóide) em aumentar a susceptibilidade dos adultos de T. limbativentris ao fungo M. anisopliae. Na verdade, esta estratégia consiste em um método de controle eficaz e viável para combater o percevejo do colmo do arroz em campo, do ponto de vista de um manejo integrado pragas com sustentabilidade.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Sergio Gaspar de Campos.pdf: 2897411 bytes, checksum: 8082944027bbc9af70ff336d4860483f (MD5) Previous issue date: 2007-03-27 / The commercial feed constitutes an important element in the pet industry in Brazil. Its composition includes cereal mixtures produced in farms such as sorghum, maize and some oily seeds. All feed destined to pets are supplemented with fats, vitamins, minerals, antirust and flours of diverse origins incorporated in some cases as pellets. When conditions of nutrients and moisture are adequate, fungal contamination could be present during pre and post harvest, storage, manufacture and processing of these ingredients. The filamentous stored grain fungi more commonly found include the species belonging to Aspergillus, Penicillium and Fusarium genera. They are able to produce different mycotoxins. Species of Aspergillus such as Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus and Aspergillus nomius are able to produce aflatoxins, considered as carcinogen type 1A. The pet foods have important amounts of cereals and therefore, they can concentrate important amounts of toxins. In dogs and cats the effects of mycotoxins are severe and can produce death, besides the loss of nutrients, to alter the organoleptic properties and to diminish the average life of the product in the market. On the other hand, the presence of toxicogenic species could indicate the contamination with several mycotoxins and this situation represents a potential risk for the animal health. On the basis of these antecedents the objectives of this work were 1) to characterize the mycoflora, 2) to detect the natural incidence of mycotoxins from raw materials and compound feed for dogs and 3) to establish parameters to prevent and/or to control micotoxicoses. A total of 230 samples (117 suspected foods to produce natural poisoning (AIN), 43 commercial foods (AC) of 3 different qualities, 70 ingredients of the production line (ALP)) of ingredients and rations destined to the feeding of dogs were analyzed. The fungal isolation was made by the surface spread method. The culture media were dicloran-rose-bengal-chloranphenicol agar (DRBC), dicloran-chloranphenicol 18% glicerol agar (DG18) and Nash-Snyder agar. The average of the number of colonies by triplicate was determined and it was expressed as colony forming units/gram of feed (UFC/g). AIN and some ALP (maize, ground maize, flour of sorghum, maize flour and gluten) obtained fungal counts over than 104 UFC/g. The AC samples were not over this value. Each strain was isolated and identified at the species level. The species belonging to the Aspergillus genera were predominant in all of the analyzed samples, having aflatoxicogenic species A. flavus/A. parasiticus those of greater frequency. These strains were evaluated in their ability to produce aflatoxins by the TLC method. The 100% of isolated strains of AIN, 80% of AC and 70% of ALP were able to produce aflatoxins at levels that varied from 2 and 66.25 ng/g. The natural incidence of aflatoxins in all feed samples was determined by high performance liquid chromatography (HPLC). AIN and some samples of ALP ingredients, mainly those containing maize, obtained aflatoxins levels over than 20 ppb. The hystopatological and biochemical studies of the affected animals organs demonstrated the death cause (aflatoxicosis), and were confirmed by the mycological studies: the fungal counts and aflatoxins levels were over the allowed ones by national and international regulations in use. The commercial feed of different qualities are feeds in conditions to be consumed, but have a potential risk if they are in inadequate storage conditions due to the aflatoxicogenic ability of the studied strains. As far as the ingredients and finished feed of the production line, those made up of maize did not fulfill the values of fungi and aflatoxins allowed by the legislation. Although the finished ration adjusts to the required regulation, probably by the processing, it presents a potential risk since more of 80% of the species of A. flavus, were able to produce aflatoxins B1 and B2. It is important then to emphasize the need to a suitable control of the used ingredients in the compound feed elaboration and the adequate environmental conditions to preserve the pet food of undesired fungal contamination and the consequent production of their mycotoxinas. / Os alimentos balanceados comerciais constituem um elemento importante na ind?stria de c?es no Brasil. Sua composi??o inclui misturas de cereais produzidos nas granjas, tais como sorgo, milho e algumas oleaginosas. Todos os alimentos destinados a c?es est?o suplementados com gorduras, vitaminas, minerais, antioxidantes e farinhas de diversas origens incorporados, em alguns casos como pellets. Ao possuir suficientes nutrientes e condi??es de umidade adequadas s?o suscet?veis a contamina??o por fungos durante a pr? e p?s-colheita, no armazenamento, na manufatura e no processamento destes ingredientes. Os fungos filamentosos mais comumente encontrados em gr?os armazenados incluem as esp?cies dos g?neros Aspergillus, Penicillium e Fusarium, capazes de produzir deteriora e diferentes micotoxinas. Esp?cies de Aspergillus como Aspergillus flavus, Aspergillus parasiticus e Aspergillus nomius s?o as mais toxic?genas podendo produzir aflatoxinas, consideradas como carcin?genos tipo 1A. Os alimentos destinados a c?es possuem quantidades importantes de cereais e, portanto podem concentrar quantidades importantes de toxinas. Em c?es e gatos os efeitos das micotoxinas s?o severos e podem produzir a morte, al?m de levar a perda de nutrientes, alterar as propriedades organol?pticas e diminuir a vida m?dia do produto no mercado. Por outro lado a presen?a de esp?cies toxicog?nicas poderia indicar a contamina??o com v?rias micotoxinas e, esta situa??o representa um risco potencial para a sa?de dos animais. Baseado no exposto anteriormente, os objetivos deste trabalho foram caracterizar morfologicamente a micobiota, detectar a incid?ncia natural de micotoxinas em ingredientes e alimentos balanceados para c?es, isolar microrganismos com potencialidades toxicog?nicas e estabelecer par?metros para prevenir e/ou controlar as micotoxicoses em c?es. Um total de 230 amostras (117 alimentos suspeitos de produzir intoxica??o natural (AIN), 43 de alimentos comerciais (AC) de tr?s qualidades diferentes, 70 ingredientes da linha de produ??o (ALP) de ingredientes e ra??es destinadas ? alimenta??o de c?es) foram analisadas. O isolamento de fungos se realizou pelo m?todo de dissemina??o em superf?cie. Os meios de cultivo utilizados foram ?gar Diclor?n-Rosa de Bengala Cloramfenicol (DRBC), ?gar Diclor?n Cloramfenicol 18% Glicerol (DG18) e ?gar Nash-Snyder. Se determinou a m?dia do n?mero de col?nias por triplicata e se expressou como unidades formadoras de col?nias por grama de alimento (UFC/g). Os AIN e alguns ALP (milho, milho mo?do, farinha de sorgo, farinha de milho e gl?ten) apresentaram contagens f?ngicas superiores a 104 UFC/g. As amostras de AC n?o superaram este valor. Cada cepa foi isolada e identificada a n?vel de g?nero. As esp?cies pertencentes ao g?nero Aspergillus prevaleceram em todas as amostras analisadas, sendo as esp?cies aflatoxicog?nicas, A. flavus/A. parasiticus, as de maior freq??ncia. Estas cepas foram avaliadas em sua habilidade de produzir aflatoxinas. Dos 100% das cepas isoladas de AIN, 80% de AC e 70% de ALP, foram capazes de produzir aflatoxinas em n?veis que variaram entre 2 e 66,25 ng/g. Se determinou a incid?ncia natural de aflatoxinas em todas as amostras de alimentos por cromatografia l?quida de alta efici?ncia. Os AIN e algumas amostras de ingredientes de ALP, principalmente aquelas compostas por milho, apresentaram n?veis de aflatoxinas superiores a 20 ppb. Os estudos histopatol?gicos e bioqu?micos dos ?rg?os dos animais afetados evidenciaram a causa morte (aflatoxicose), assim como tamb?m os estudos micotoxicol?gicos realizados: a carga f?ngica e os n?veis de aflatoxinas encontrados, foram superiores aos permitidos pelas regulamenta??es nacionais e internacionais em vig?ncia. Os alimentos comerciais pertencentes a distintas qualidades s?o alimentos aptos para o consumo mas, potencialmente perigosos em condi??es de armazenamento inadequado devido ? capacidade aflatoxicog?ncia das cepas estudadas. Quanto aos ingredientes e alimentos terminados da linha de produ??o, aqueles compostos por milho n?o cumpriram com os valores de fungos e aflatoxinas permitidos pela legisla??o. Embora a ra??o terminada se ajuste ao requerido pela regulamenta??o, provavelmente pelo processamento recebido, apresenta um risco potencial j? que mais de 80% das esp?cies de A. flavus foram capazes de produzir aflatoxinas B1 e B2. ? importante ent?o destacar a necessidade de realizar um controle adequado dos ingredientes utilizados na elabora??o de alimentos compostos, como tamb?m as condi??es ambientais onde se armazenam as ra??es destinadas aos c?es, para preserv?- los da indesejada contamina??o f?ngica e a conseq?ente produ??o de micotoxinas.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Marcelo Carvalho Gomes.pdf: 324564 bytes, checksum: 3942a2feee43fca4762eb4590c899bfc (MD5) Previous issue date: 2006-03-31 / The present work was carried out in three different goat raisings and 27 females and 2 males were selected for identifying the present microbiota in the preputial and vaginal cavity of goats under three estrous cycle phases: In Februrary, 2005 in the pro-estrum, in May, 2005 in the post-copula and in October, 2005 in the post-partum. The samples were collected by swabs as well as vaginal and preputial washings for studying microbiota and by gynecological brushes for the females esfoliative cytological study. The two greatest bacteria genera prevalence were: Micrococcus spp (89,65 %) following by Bacillus spp. (29,90 %). Filamentous fungi as Cladosporium spp. (26,39 %) and Aspergillus spp. (11,46 %) were the most isolated. On the bacteria cytological test about 76 % of the investigations have been in accordance with the microscopic finding and bacteria isolation. In 89% appraised animal some yeasts presence on sheets was observed in spite of there was isolation just in 7,4 % of the animals. There was similarity between hifas observation and filamentous fungi isolation, in regarding to 53 % of hifas presence investigations. The bacterial and fungical microbiota found on this survey showed the goats vaginal and preputial microbiota diversity and pointed out to the fact that it might be carried during copulation. The number of isolated bacteria species in the post-copulation phase was upper, as well as for yeasts. The vaginal cytology performed significative association in relation to the bacterial isolation, observed by cocos and bacilli presence on the sheets with positive growth. Bacteria potentially pathogenic as Pseudomonas alcalinigenes, P. aeruginosa, and Corynebacterium spp. as well as opportunist fungi as Aspergillus flavus in healthy goats vaginal cavity were found. / O presente trabalho foi desenvolvido em tr?s criat?rios caprinos distintos, de onde tomamos 27 f?meas e 2 machos a fim de identificar a microbiota presente no prep?cio de bodes e na cavidade vaginal de cabras em tr?s fases do ciclo estral: fevereiro de 2005 no proestro, maio de 2005 ap?s a c?pula e outubro de 2005 ap?s o parto. As amostras foram coletadas atrav?s de swab, lavado vaginal e prepucial para o estudo da microbiota e com escovas ginecol?gicas para o estudo colpocitol?gico das f?meas. Os dois g?neros de bact?rias de maior preval?ncia foram os seguintes: Micrococcus spp. (89,65 %) e Bacillus spp. (29,90 %). Os dois g?neros de fungos de maior preval?ncia foram Cladosporium spp. (26,39 %) e Aspergillus spp. (11,46 %). No estudo colpocitol?gico para bact?rias, em 76 % das investiga??es houve concord?ncia entre os achados microsc?picos e isolamento bacteriano. Em 89 % dos animais avaliados foi observada a presen?a de leveduras nas l?minas, mas houve isolamento em apenas 7,4 % dos animais. Em 53 % das investiga??es da presen?a de hifas houve concord?ncia entre a observa??o de hifas e o isolamento de fungos filamentosos. A microbiota f?ngica e bacteriana encontrada no presente trabalho evidenciou a diversidade da microbiota vaginal e prepucial de caprinos e aponta para o fato de que podem ser carreados durante a c?pula. Observou-se que o n?mero de esp?cies isoladas de bact?rias ? superior na fase de p?s-c?pula enquanto que em fungos observamos este aumento no p?s-parto; O resultado da citologia vaginal teve correla??o com o isolamento bacteriano, observada pela presen?a de cocos e bacilos nas l?minas com crescimento bacteriano positivo; Bact?rias potencialmente patog?nicas como Pseudomonas alcaligenes, P. aeruginosa e Corynebacterium spp. foram encontrados na cavidade vaginal de cabras h?gidas, assim como fungos oportunistas como Aspergillus flavus.

Resumo não disponível

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-27Bitstream added on 2014-06-13T20:04:36Z : No. of bitstreams: 1 freitas_pm_dr_rcla.pdf: 670514 bytes, checksum: 22df87c8cdf056a03825df30dc778c89 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O fungo Rhizomucor pusillus A 13.36, quando cultivado por fermentação em estado sólido utilizando farelo de algodão como fonte de carbono por 72 horas, produziu altos níveis de poligalacturonase (18,6U/g). Essa enzima apresentou atividade máxima em pH 5,5 e em 55oC. A poligalacturonase bruta apresentou estabilidade na faixa de pH entre 4,5 e 6,5, com uma atividade residual de 91,3% no pH 6,5, e também até 70oC por 1h, com atividade residual de 80% nas temperaturas de 55 a 60oC. Esta enzima foi purificada por concentração e uma combinação de procedimentos de gel filtração e cromatografia de troca-iônica. A massa molecular da enzima foi 53,7kDa. A focalização isoelétrica mostrou uma única banda cujo ponto isoelétrico (pI) foi 3,8. A atividade máxima da enzima purificada também ocorreu em pH 5,5 e a 55oC. A enzima purificada foi estável na faixa de pH 4,5 a 6,5, com atividade residual na faixa de 80 a 100%, e também até 70oC por 1h, com atividade residual de 100% nas temperaturas de 55 a 60oC. A enzima purificada foi totalmente inibida por Ca2+, Cu2+, Hg2+ e 80% inibida por Fe2+ e Ag+. Mg2+ estimulou a atividade da poligalacturonase em 100%. Entre os substratos avaliados, a pectina de citrus (D.E. 92%) foi o que mais estimulou a ação da enzima. A afinidade por pectinas de alta esterificação e a ausência de atividade quando o ácido poligalacturônico foi usado como substrato, indica que a enzima purificada é uma polimetilgalacturonase. Os resultados obtidos pela cromatografia de papel demonstraram que a polimetilgalacturonase purificada possui o modo de clivagem endo/exo misto. O Km com pectina de citrus foi 10,78mg mL-1 e a Vmax foi 2379,04μmolmin-1mg-1. As possíveis aplicações desta enzima incluem composição de detergentes, processamento têxtil e de fibras de celulose, degradação ou modificação de material vegetal, aditivo... / Rhizomucor pusillus A 13.36 produced high levels of polygalacturonase (18.6U/g) in solid state fermentation in medium composed by cotton bran for 72 hours. This enzyme showed maximal activity at pH 5.5 and 55oC. Crude polygalacturonase was stable from pH 4.5 to 6.5, with remaining activity of 91,3% at pH 6.5, and stable until 70oC for 1h, with remaining activity of 80% at 55-60oC. This enzyme was purified by concentration and a combination of gel filtration and ion exchange chromatographic procedures. The molecular mass of the enzyme was 53.7kDa. Isoelectric focusing showed a single band with an isoelectric point (pI) of 3.8. The purified enzyme also showed maximum activity at pH 5.5 and 55oC. The purified enzyme was stable from pH 4.5 to 6.5, with remaining activity range of 80 to 100%, and stable until 70oC for 1h, with remaining activity of 100% at 55-60oC. The purified enzyme was totally inhibited by Ca2+, Cu2+, Hg2+ and 80% inhibited by Fe2+ and Ag+. Mg2+ increased poligalacturonase activity in 100%. Citrus pectin (D.E. 92%) was found to be the preferred substrate among the different substrates tested in the enzyme assay. The affinity for high pectin esterification and the lack of activity when polygalacturonic acid was used as substrate, indicates that the enzyme is a polymethylgalacturonase. The results obtained by paper chromatography showed that the purified polymethylgalacturonase has the mixed endo/exo mode of cleavage. The Km with citrus pectin was 10.78mg mL-1 and the Vmax was 2379.04μmolmin-1mg- 1. The possible applications of this enzyme include the composition of detergents, textile and cellulosic fiber processing, degradation or modification of plant material, animal feed additive and wine and juice processing.

Patógenos necrotróficos matam as células por meio de suas agressivas moléculas toxicas e enzimas líticas não específicas. Jasmonato (JA) é um importante hormônio produzido, para entre outras funções, regular positivamente genes envolvidos na defesa a necrotróficos. Um passo importante nesta rota é a produção do ácido linolênico, um ácido graxo de (18:3) que é dessaturado de (18:2) pelas enzimas FAD3, FAD7 e FAD8. Uma ferramenta muito utilizada hoje é o silenciamento gênico induzido por vírus (VIGS) que se utiliza de um mecanismo natural de defesa das plantas a vírus, para a descoberta da função gênica. O objetivo deste trabalho foi avaliar a interação entre A. thaliana e isolados do gênero Pythium sp., com os genes FAD3, FAD7 e FAD8 silenciados. Para alcançar tal objetivo um fragmento de 325 pb do gene FAD7 de A. thaliana foi isolado e clonado no vetor viral TRV2b. As plantas foram agro-infiltradas com o vetor TRV1 e TRV2b-GFP (controle) ou TRV2b-FAD7 (silenciada), após foi realizada a inoculação dos isolados de Pythium sp. e atribuídas notas de severidade, referente ao fenótipo e medido o comprimento das raízes. A agro-infiltração do vetor viral TRV2b-FAD7 ocasionou uma redução significativa na quantidade de mRNA dos genes FAD3 e FAD7, não interferindo na quantidade de mRNA do FAD8. Esta redução na expressão interferiu negativamente na resistência de A. thaliana a P. deliense, causando sintomas mais severos na parte aérea, sintomas que estão correlacionados significativamente com o comprimento de raiz. O silenciamento destes genes ocasionou a redução na expressão da defensina PDF1.2, induzida na infecção por patógenos necrotróficos. A resistência a P. deliense foi restituída pela adição de metil-jasmonato, pois a aplicação exógena deste, ocasionou a indução de PDF1.2, evidenciando a importância da produção de JA na indução desta defensina e na resistência a P. deliense. / Necrotrophic pathogens kill plant cells through its aggressive and nonspecific lytic enzymes and toxic molecules. Jasmonate (JA) is an important hormone that positively regulates genes involved in necrotrophic defense, among other functions. An important step in this pathway is the production of linolenic acid, a fatty acid (18:3) that is desaturated to (18:2) by FAD3, FAD7, and FAD8 enzymes. Virus induced gene silencing (VIGS) is a widely used tool today, which takes advantage of a natural defense mechanism of plants against viruses, for the discovery of gene function. The aim of this study was to evaluate the interaction between A. thaliana and isolates of the genus Pythium sp., after gene silencing of FAD3, FAD7, and FAD8. For this purpose, a 325 bp fragment of FAD7 from A. thaliana was isolated and cloned into a viral vector TRV2b. Plants were agro-infiltrated with the vector and TRV1 TRV2b-GFP (control) or TRV2b-FAD7 (silenced). Then, plants were inoculated with Pythium sp. isolates and disease severity was evaluated, based on phenotype and measures of root length. Agroinfiltration of TRV2b-FAD7 caused a significant reduction in the amount of mRNA from FAD3 and FAD7 but did not interfere in the amount of mRNA from FAD8. This down regulation had a negative influence on the resistance of A. thaliana to P. deliense, causing more severe symptoms in the shoot, symptoms that are significantly correlated with root length. Gene silencing led to a reduction in the expression of PDF1.2 defensin, which is induced in infections caused by necrotrophic pathogens. Resistance to P. deliense was restored by adding exogenous methyl jasmonate, which induced PDF1.2 expression. These results indicate the importance of JA in the induction of this defensin leading to resistance against P. deliense in A. thaliana.

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