A avaliação da capacidade produtora de micotoxinas vem sendo utilizada como uma importante ferramenta na identificação de espécies conhecidamente toxigênicas. Poucos são os métodos rápidos e alternativos disponíveis para a determinação do potencial toxigênico de espécies do gênero Aspergillus. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade produtora de aflatoxina B1, em diferentes condições de cultivo, por três isolados de Aspergillus flavus, produtores de aflatoxina B1. O delineamento experimental baseou-se em um planejamento 2³ completo, tendo como variáveis independentes a temperatura (20-40°C), o tempo de incubação (7-21 dias) e o pH (2,0-6,0) nos meio sintéticos (YES, CYA e Sabouraud). As melhores condições encontradas foram aplicadas em testes com meio natural (arroz) e isolados a principio não-aflatoxigênicos. Aflatoxina B1 foi extraída diretamente dos meios sintéticos com clorofórmio e do arroz com metanol. A identificação e quantificação do composto foi realizada por Cromatografia em Camada Delgada e Fotometria Fotográfica. O meio YES se mostrou o melhor para detecção do potencial toxigênico, seguidos de melhor pH 4,0 e 5,2, e temperatura de 20º e 25ºC e tempo de incubação de 11 e 14 dias. O isolado A43, em temperatura de 25º, pH 5,2 e tempo de incubação de 11 dias, mostrou a maior produção de aflatoxina B1, com 206,05 ng. No arroz, os isolados revelaram produção de aflatoxina, apenas a partir do 14ºdia. Dos 30 isolados a princípio não-aflatoxigênicos testados inicialmente em agar coco, 12 apresentaram resultado positivo nos meios e condições aqui apresentados. / Mycotoxins producing capacity evaluation has being used as an important tool, in the identification of toxigenic species. A few of them are available as alternative rapid methods for the determination of the toxigenic potential of species Aspergillus. The objective of this work was to evaluate the aflatoxin B1 producing capacity in different conditions of culture by three Aspergillus flavus. The experimental delineation was based on a 2³ factorial design. To test the effect of three independent variables, the temperature (20-40°C), the incubation time (7-21 days) and pH (2,0 -6,0) in the synthetic medium (YES, CYA and Sabouraud) were applied in the program STATISCA 7.0. The best joined conditions had been applied in tests with natural medium (rice) and isolated tested as nonaflatoxigenics. Aflatoxin B1 was extracted directly from sintetic mediuns by chloroform and from rice by methanol. Thin-layer chromatography (TLC) and Photometric Photography were the methods utilized for the identification and quantification of aflatoxin B1. YES was the best medium for the detention of toxigenic potential, at pH 4,0 and 5,2, temperature of 20º and 25ºC and incubation time of 11 and 14 days. The isolated A43, at temperature of 25ºC, pH 5,2 and incubation time of 11 days showed the biggest aflatoxin B1 production (206,05 ng). Aflatoxin production in rice occurred only after 14 days. 12 of the 30 non aflatoxigenic isolates showed aflatoxin production in the media and conditions tested.

Levando-se em conta as vantagens dos FMA, este trabalho foi desenvolvido tendo por objetivo avaliar a utilização destes microrganismos no desenvolvimento vegetativo e no controle biológico da fusariose, em porta-enxertos de videira oriundos de micropropagação.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-12-14T17:02:31Z No. of bitstreams: 1 Cataliny Andreza Duarte Silva.pdf: 1069880 bytes, checksum: 4c76983584eb687b13ef5946ada94770 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-14T17:02:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cataliny Andreza Duarte Silva.pdf: 1069880 bytes, checksum: 4c76983584eb687b13ef5946ada94770 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The cultivation of cassava has great importance worldwide, it is the sixth largest crop production and expression of the planet. Brazil is the second largest producer in the world and this culture is the second largest national economic expression, with great social importance as it contributes to the survival of a significant portion of the low-income population as a source of income and food. This work aimed to make the first survey of fungi associated with root rot of cassava in Agreste of Pernambuco, to evaluate the effect of sources and levels of organic matter isolated and added to sandy soil under the suppressiveness of mycelial growth of Scytalidium lignicola and check the effect of levels and sources of organic matter incorporated into sandy soils inoculated with Scytalidium lignicola on the black rot of cassava cv. Father Antonio. Were collected plant material with symptoms and / or signs of disease in the Wasteland producing municipalities of Pernambuco: Jupi, Jucati, São João and Caetés. The frequency of isolation of the fungi was performed by plating method until pure culture isolation and identification. The second moment were the first two experiments was to evaluate the effect of extracts of organic materials (poultry manure, goat manure, cattle and earthworm castings) added to the culture medium potato dextrose agar (BDA) at concentrations (10 , 20, 30 and 40%) (v / v) and the second was to evaluate the effect of organic materials mixed with sandy soil with fountains and the same doses. The variables analyzed were: radial growth rate, mycelial growth inhibition and area under the curve of mycelial growth. After the results of the previous experiment was conducted a review of the effect of organic materials litter (CA) and goat manure (EC) incorporated into the sandy soil concentrations (10, 20 and 30%) (v / v). The variables analyzed were: Severity of disease, soil basal respiration, microbial biomass carbon samples, the chemical (pH, P, Na and K) and biochemical attributes and alkaline phosphatase and urease. The most prevalent fungi were tested for pathogenicity. We found a high diversity of fungi associated with root rot of cassava in rural Pernambuco. The prevalence of fungi associated with Fusarium root rot in cassava with symptoms from all areas of the municipalities of Jupi, Jucati and St. John and Scytalidium lignicola from areas of the Municipality of Caetés. Isolates that had prevailed in a high severity of cassava cultivate Branquinha. In test doses and sources on the mycelial growth of Scytalidium lignicola the source litter was the most effective in inhibiting the growth at a dose 40%, with an inhibition of mycelial growth of 69.75% only when the extracts were not autoclaved . Sandy soil with incorporation of sources and levels of organic matter were highly efficient in suppressiveness mycelial growth of S. lignicola. The treatments considered suppressive to black rot will grow dad Anthony EC were 10 and 20% and CA 20 and 30%. Being recommended for suppressiveness black rot of cassava caused by Scytalidium lignicola EC at doses of 10 and 20%. / O cultivo da mandioca apresenta grande importância mundial, pois é a sexta cultura de maior produção e expressão do planeta. O Brasil é o segundo maior produtor mundial e esta cultura é a segunda de maior expressão econômica nacional, com grande importância social, pois contribui para a sobrevivência de significativa parcela da população de baixa renda, como fonte de renda e alimentícia. Este trabalho teve como objetivos efetuar o primeiro levantamento de fungos associados à podridão radicular da mandioca no Agreste de Pernambuco, avaliar o efeito de fontes e doses de matéria orgânica isolada e adicionada a solo arenoso sob a supressividade do crescimento micelial de Scytalidium lignicola e verificar o efeito de doses e fontes de matéria orgânica incorporados à solos arenosos com inoculação de Scytalidium lignicola sobre a podridão negra da mandioca cv. Pai Antônio. Foram realizadas coletas de material vegetal com sintomas e/ou sinais da doença nos municípios produtores do Agreste de Pernambuco: Jupi, Jucati, São João e Caetés. A frequência de isolamento dos fungos foi realizada pelo método de plaqueamento e isolamento até cultura pura para identificação. No segundo momento foram realizados dois experimentos o primeiro foi visando avaliar o efeito dos extratos de materiais orgânico (cama de aviário, esterco caprino, bovino e húmus de minhoca) incorporados ao meio de cultura batata-dextrose-ágar (BDA) nas concentrações (10, 20, 30 e 40%) (v/v) e o segundo foi avaliar o efeito dos materiais orgânicos misturados com solo arenoso com as mesmas fontes e doses. As variáveis analisadas foram: taxa de crescimento micelial, inibição do crescimento micelial e área abaixo da curva de crescimento micelial. Após os resultados do experimento anterior foi realizado uma avaliação dos efeitos dos materiais orgânico cama de aviário (CA) e esterco caprino (EC) incorporados ao solo arenoso nas concentrações (10, 20 e 30%) (v/v). As variáveis analisadas foram: Severidade da doença, respiração basal do solo, carbono da biomassa microbiana das amostras, atributos químicos (pH, P, Na e K) e atributos bioquímicos fosfatase ácida e alcalina e uréase. Os fungos que mais prevaleceram foram submetidos a teste de patogenicidade. Foi encontrada alta diversidade de fungos associados à podridão radicular da mandioca no agreste de Pernambuco. Houve prevalência de fungos do gênero Fusarium associados à podridão radicular em mandiocas com sintomas provenientes de todas as áreas dos municípios de Jupi, Jucati e São João e Scytalidium lignicola provenientes de áreas do Município de Caetés. Os isolados que prevaleceram apresentaram uma alta severidade em mandiocas da cultivar Branquinha. No teste de doses e fontes sobre o crescimento micelial de Scytalidium lignicola a fonte cama de aviário foi a mais eficiente em inibir o crescimento a uma dose 40%, com uma inibição do crescimento micelial de 69,75% apenas quando os extratos não foram autoclavados. Solo arenoso com incorporação de fontes e doses de matéria orgânica foram altamente eficientes na supressividade do crescimento micelial de S. lignicola. Os tratamentos considerados supressivos á podridão negra para a cultivar pai Antônio foram EC 10 e 20% e CA 20 e 30%. Sendo recomendado para supressividade da podridão negra da mandioca, causada por Scytalidium lignicola o EC nas doses de 10 e 20%.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5158_1.pdf: 1219168 bytes, checksum: 88c2523b7802f1a2d1804b141d7f6de0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Fungos entomopatogênicos Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae amplamente distribuídos em todas as regiões do mundo podem ser isolados de insetos, solo e de outros substratos. Essas espécies apresentam variabilidade genética e habilidades sobre diferentes insetos-praga. Patogenicidade e virulência sobre diversos artrópodes têm sido observadas com a variação de atividades enzimáticas e características genéticas dos isolados. A ação desses agentes está relacionada com as condições climáticas, causando epizootias em população de insetos e observado o controle biológico de Coleoptera, Hemiptera, Lepdoptera, Isoptera e de outras importantes pragas no Brasil e no mundo. Este trabalho teve por objetivos avaliar a ação de patogenicidade, viabilidade e virulência das linhagens de B. bassiana, M. anisopliae var. anisopliae e M. anisopliae var. acridum sobre ovos, larvas e adultos antes e após reisoladas de Anthonomus grandis (Boheman) (Coleoptera: Curculionidae), importante praga do algodão, avaliadas em condições de laboratório, visando o desenvolvimento de estratégias para o controle biológico da praga. Os resultados apresentados neste trabalho confirmaram que B. bassiana, M. anisopliae var. anisopliae e M. anisopliae var. acridum têm ação patogênica, elevada viabilidade sobre o bicudo-do-algodoeiro e significante virulência após reisolados das diferentes fases do inseto, podendo ser usados contra o inseto adulto em programas de controle biológico, proporcionando uma importante alternativa de controle contra A. grandis

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-04-20T13:57:02Z No. of bitstreams: 1 Patyanne Carvalho Correia.pdf: 1733331 bytes, checksum: 0fd1c13c3c6c63ed674e16d388765579 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T13:57:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Patyanne Carvalho Correia.pdf: 1733331 bytes, checksum: 0fd1c13c3c6c63ed674e16d388765579 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed to evaluate the production, purification characterization of proteases produced by filamentous fungi isolated from Caatinga. 32 strains of filamentous fungi were previously selected from the best protease producer and the best culture conditions for the microorganisms were determined in shake flasks using a factorial design 23, the influence of the independent variables were evaluated: glucose and soy concentrations, and pH on proteinase activity. Based on the obtained results from the fermentation in shake flasks, a a factorial design 22 was performed in a bioreactor type stirred tank of 1.5L to verify the influence of the independent variables: agitation and aeration in the protease production. The resulting metabolic liquid from the fermentation was used in the following purification steps using aqueous two phases system (ATPS) and chromatographic methods. Another protease with fibrinolytic activity was studied and proprieties analyzed effect on coagulation, stability with solvents and the structure on different pH and fibrinogenolytic activity.The maximum protease production (69.77 U/ml) for shake flasks was obtained under the following conditions: 6.0 of pH, glucose 0.5% and soy 3%. On stirred-tank bioreactor maximum protease activity it was obtained 61.19 U/mL after 72 h of cultivation, under conditions of agitation and aeration at 450 rpm and 0.5 vvm. The protease characterization revealed that the optimum temperature of the enzyme was 50 °C and the activity was 75% when incubated for 3 hours at 20, 30 and 40 °C. The enzyme activity was slightly inhibited by metal ions (ZnSO4 and CuSO4) and phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), indicate be a serine protease. The enzyme was parcial purified by 24% (w/w) PEG 400 and 20% (w/w) citrate system, at pH 6 the proteases preferably partitioned to the top phase, resulting in 146% recovery and a 1.6-fold increase in specific activity. The ATPS combined with varied chromatography methods reached 8 fold purified and a 12.5% recovery. The fibrinolytic protease on coagulation time was analyzed, a prolonged effect over time was observed in the activated partial thromboplastin time (APTT), indicating an inhibition of intrinsic pathway coagulation and the prothrombin time (PT) was less sensitive to time variation, even at high enzymatic concentration. The fibrinolytic protease was more stable in the presence of ethyl acetate solvents and less stable in the presence of ethanol. When fibrinogenolytic activity was evaluated, a preferential action of the fibrinolytic protease on the Aα and Bβ chains occurred. The fibrinolytic protease presented a structural disorder at pH scales with higher acidity and alkalinity. The two fungal enzymes studied present potential for application in the biotechnology industry. / O presente estudo objetivou avaliar a produção, purificação e caracterização de proteases produzidas por fungos filamentosos isolados da Caatinga. Foram previamente utilizados 32, sendo selecionada a linhagem com maior produção de proteases em condições de cultivo em frascos agitados utilizando planejamento fatorial 23, foi avaliado influência das variáveis independentes: concentração de glicose, concentração de soja e pH. Com base nos resultados obtidos na fermentação em frascos agitados foi realizado em biorreator tipo tanque agitado de 1,5L, avaliando a influência das variáveis independentes: velocidade de agitação e aeração na produção da protease. O líquido metabólico resultante das fermentações foi utilizado nas etapas de purificação utilizando o sistema de duas fases aquosas (SDFA), métodos cromatográficos por troca iônica e gel filtração. Uma segunda protease com atividade fibrinolítica. foi utilizada e foram analisadas as propriedades em termos de coagulação, estabilidade da enzima na presença de solventes orgânicos e estrutural em diferentes pH, e atividade fibrinogenolíta. Em frascos agitados a produção máxima de protease (69,77 U/mL) foi obtida pH 6,0, 0,5% de glicose e 3% de soja, enquanto em biorreator nas condições de agitação e aeração iguais à 450 rpm e 0,5 vvm, a atividade máxima de protease foi de 61,19 U/mL após 72h de cultivo. A protease revelou uma temperatura ótima de 50°C e valores de atividade cerca de 75% quando incubada por 3h a 20, 30 e 40°C, respectivamente. A atividade enzimática foi fracamente inibida pelos íons metálicos ZnSO4 e CuSO4 e por fluoreto de fenilmetilsulfonil (PMSF), sugerindo ser uma serino protease. A protease foi parcialmente purificada a partir do sistema 24% (m/m) polietilenoglicol (PEG) 400 e 20% (m/m) citrato em pH 6, o que assegurou um fator de purificação de 1.6 e 146% de recuperação, na fase rica em (PEG). Associado o sistema a cromatografia por troca iônica e gel filtração foi possível alcançar uma purificação de 8 e rendimento de 12,5%. Quando analisado o efeito da protease fibrinolítica sobre o tempo de coagulação, observou-se no tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa) um efeito prolongado com o passar do tempo, sugerindo uma inibição da via intrínseca.Com relação ao tempo de protrombina (TP), esse foi menos sensível a variação do tempo, mesmo em concentração enzimática elevada. A protease fibrinolítica apresentou-se mais estável na presença do solvente acetato de etila e menos estável na presença de etanol. Quando foi avaliada a atividade fibrinogenolítica ocorreu uma ação preferencial da protease fibrinolítica sobre as cadeias Aα e Bβ. A protease fibrinolítica apresentou uma desordem estrutural a valors extremos de pH. As duas enzimas fúngicas estudadas apresentam potencial para aplicação na indústria biotecnológica.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-08-23T10:50:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 920805 bytes, checksum: 4b3f88cb2a2ca504e0eb80bc07bc744d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-23T10:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 920805 bytes, checksum: 4b3f88cb2a2ca504e0eb80bc07bc744d (MD5) Previous issue date: 2017-10-24 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A degradação de madeira e matéria orgânica é realizada pela ação conjunta de organismos detritívoros e decompositores, como besouros e fungos, através da fragmentação e modificação química desses materiais. Os fungos basidiomicetos são capazes de reter nutrientes nas hifas e nos basidiomas, o que os torna uma fonte de alimento muito rica para muitos organismos. Os besouros micetobiontes, como os Ciidae, utilizam os basidiomas diretamente como habitat e fonte de alimento. Esta atividade pode facilitar a liberação dos nutrientes retidos no basidioma, tornando-os acessíveis para outros níveis tróficos, como os organismos de serrapilheira. O objetivo deste trabalho é verificar se a presença de besouros micetócolos, que utilizam o fungo de alguma forma, influencia na composição de espécies de besouros da serrapilheira. Também objetiva-se saber se fatores diretos e indiretos aos besouros interferem na riqueza e na abundância destes dentro dos basidiomas. Enquanto a riqueza só respondeu à área superficial e ao estágio de decaimento dos basidiomas, que são fatores diretos, a abundância respondeu à área superficial dos basidiomas e ao diâmetro dos troncos, que é fator direto e indireto, respectivamente. Fungos com maiores áreas têm maior disponibilidade de nichos e de recursos, o que permite que diferentes espécies colonizem o mesmo basidioma e, também, o desenvolvimento de populações numerosas. Fungos mais degradados têm menos compostos de defesa, o que possibilita que espécies polífagas, que são a maioria, os colonizem. Troncos com maiores diâmetros têm mais recurso disponível para o desenvolvimento dos basidiomas, e maiores basidiomas podem manter maior abundância de besouros. A composição dos besouros de serrapilheira foi diferente entre áreas sem basidioma, com basidioma e basidioma colonizado. Houve maior riqueza de besouros de serrapilheira próximo aos basidiomas e próximo aos basidiomas colonizados. Isso indica que os fungos e os besouros micetócolos são importantes para o sistema onde estão inseridos, pois a presença e, consequentemente as atividades que desempenham, interferem na comunidade de besouros de serrapilheira de suas proximidades. / The integrated action of detritivores and decomposers, as beetles and fungi, decompose wood and organic matter by means of materials fragmentations and chemical modifications. Bracket-fungi are able to retain nutrients in hyphaes and basidiomes, becoming a rich resource to other organisms. Mycetobiont beetles, as Ciidae, use the basidiomes as habitat and food. This activity can facilitate nutrient release, making them available to other trophic-levels, as leaf-litter organisms. The objective of the present work is to check whether the presence of beetles associated with bracket-fungi influences on the composition of leaf-litter beetle species. Other objective is to know evaluate direct and indirect factors influencing richness and abundance of beetles inside basidiomes. While species richness was positively related to superficial area and to bracket-fungi decaying stage, both direct factors, abundance was positively related to superficial area, and to trunk diameter, direct and indirect factors, respectively. Bracket-fungi with the largest areas provide more niches and resources, which allows different species colonize the same basidiome and sustain bigger populations. Most decayed fungi have less defense compounds, which allow colonization by polyphagous (the majority of species). Trunks with the largest diameters have more resource to bracket-fungi‘s development, and the largest basidiomes can keep greater beetle abundance. The composition of leaf-litter beetles was different between areas without bracket-fungi, with bracket-fungi and with bracket-fungi colonized. The highest leaf-litter beetles‘ richness was closer to basidiomes and to colonized basidiomes. This indicates that the fungi and the beetles associated with bracket-fungi are important to their environment system, because their presence, and consequently the activities they perform, interfere on the community of leaf-litter beetles.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-08-29T13:09:12Z No. of bitstreams: 1 Regina Francisca Soares.pdf: 1592866 bytes, checksum: 006c607e153115ed284ba86276d846e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T13:09:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Regina Francisca Soares.pdf: 1592866 bytes, checksum: 006c607e153115ed284ba86276d846e2 (MD5) Previous issue date: 2010-08-31 / Our proposal is to investigate the fungi conceptual construction by juniors school teachers with the appropriation of notions about the design of teaching and learning sequences. To achieve our goals, we structured our intervention in five steps and considered the approach called "integrated constructivist" (MARTINE MÉHEUT, 2005) that considers equally both dimensions: epistemic and pedagogical. The results indicate that there was a gradual evolution in the construction of the content on fungi by teachers, but there are still many gaps in the conceptual part of teachers. Moreover the proposed activities in the intervention helped confirm that the conceptual difficulties compromise the development of more sophisticated methodological approaches, such as the design of teaching-learning sequences. Despite the difficulties, two pairs of teachers have achieved the expected results on the design of teaching and learning sequences, as they beheld the most structural criteria listed. / Nossa proposta é investigar a construção conceitual sobre fungos por professores das séries iniciais juntamente com a apropriação de noções sobre o desenho de sequências de ensino aprendizagem. Para atingir nossos objetivos, nos fundamentamos na abordagem denominada de “construtivista integrada” (MARTINE MEHÉUT, 2005) que considera conjuntamente as dimensões epistêmica e pedagógica, e estruturamos uma intervenção didática em cinco etapas. Os resultados indicam que houve uma evolução gradual na construção dos conteúdos sobre fungos por parte das professoras, mas que ainda existem muitas lacunas conceituais por parte das mesmas. Além do mais as atividades propostas na intervenção permitiram verificar que as dificuldades conceituais comprometem o desenvolvimento de propostas metodológicas mais sofisticadas, como é o caso do desenho das sequências de ensino-aprendizagem. Apesar das dificuldades, duas duplas de professoras conseguiram atingir os resultados esperados quanto ao desenho das sequências de ensino aprendizagem, visto que contemplaram a maior parte dos critérios estruturantes elencados.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6499_1.pdf: 2052434 bytes, checksum: 0d0ed4c819168b93a4f1be887b9da045 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Metarhizium anisopliae é um patógeno de insetos economicamente importante usado em todo o mundo no controle biológico de insetos-praga. Porém, sua utlização é limitada devido ao tempo de mortalidade ser relativamente alto quando comparado aos inseticidas químicos. A análise das expressões de genes envolvidos na virulência é um passo importante na identificação de métodos para aumentar a sua eficácia. Neste trabalho foi investigado pela técnica de RT-qPCR o nível de expressão relativa do gene cag8 (regulador da sinalização da proteína G) e do nrr1 (regulador da resposta ao nitrogênio) durante a germinação, conidiogenese e em diferentes fases de patogênese de M. anisopliae var. anisopliae e de M. anisopliae var. acridum. A expressão relativa do gene pr1A (codificador da protease subtilisina) foi analisado em M. anisopliae var. anisopliae e em M. anisopliae var. acrdum durante o crescimento em diferentes meios de cultura e durante a patogênese. Em ambas as variedades, o gene cag8 foi reprimido durante a germinação e induzido durante a conidiogenese e patogênese, o gene nrr1 apresentou-se constitutivamente expresso durante a germinação, conidiogenese e patogênese e o gene pr1A foi induzido nos diferentes meios de cultura e induzido e reprimido durante as fases de patogênese. Considerando as diferenças entre as duas variedades, M. anisopliae var. anisopliae apresentou maior expressão em todos os genes analisados durante a patogênese, isso pode justificar o fato dessa linhagem ter apresentado maior potencial para o controle de Diatraea saccharalis no teste de patogenicidade demonstrando que M. anisopliae pode apresentar variações na ativação de genes ligados à virulência para determinados ambientes e hospedeiros

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-28T14:14:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Rozana M. S. Galvão.pdf: 1560472 bytes, checksum: 5434a76f0b516e97d5f0698b73fa8050 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-08-28T14:14:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Rozana M. S. Galvão.pdf: 1560472 bytes, checksum: 5434a76f0b516e97d5f0698b73fa8050 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-28T14:14:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Rozana M. S. Galvão.pdf: 1560472 bytes, checksum: 5434a76f0b516e97d5f0698b73fa8050 (MD5) Previous issue date: 2008-02-22 / In this work three Brazilian B. rhodina, and also two strains from Cuba, selected for their ability to produce jasmonate compounds, were submitted to molecular analysis of internal transcribed spacers- ITS regions of rDNA to characterize their genetic variability. rDNA extraction procedures were conducted according classic protocols followed by amplification, via the PCR technique, of conserved ITS regions with the primers ITS1 and ITS4. The PCR products were purified using the GFX purification kit (GE-Healthcare), resolved in “MegaBace” 1000 – DNA Analysis System (GE-Healthcar) and further identified by comparative analysis with ITS regions of rDNA sequences from the databases available at the National Center for Biotechnology Information (NCBI). Analyses were performed with the BLAST tool and the multiple alignments of sequences with Clustal W program from the computational package BioEdit. Moreover, analysis using the TCS program resulted in the identification of nine haplotypes separated by ten polymorphic sites. AFLP analyses were also implemented using four combinations of oligonucleotide primers which resulted in the generation of 300 polymorphic markers. The mean number of amplified fragments by primer pair was 79 with up to 95% of polymorphic bands. The genetic distance between B. rhodina strains was estimated in 29.19%. Dendogram constructed with Jaccard’s coefficient of similarity showed that analyzed strains were assembled in four groups with high genetic variability found in all strains. / Os microrganismos produzem substâncias químicas como resultado do metabolismo primário e secundário. No metabolismo secundário estão envolvidas vias metabólicas para a síntese de produtos naturais que não são essenciais para o crescimento do organismo produtor. O fungo Botryosphaeria rhodina, tem despertado um interesse crescente devido à produção de uma serie de ácidos graxos ciclopentanos, do tipo ácido jasmônico (AJ), com propriedades reguladoras do crescimento de plantas superiores. Usualmente o AJ é um regulador de crescimento vegetal endógeno, sintetizado de maneira natural por uma grande variedade de plantas, pertence aos reguladores de crescimento vegetal (RCV) denominados jasmonatos, sendo os mais representativos o ácido (-)-jasmônico (-)-AJ e o ácido(+)-7-isojasmônico [(+)-7-isoAJ] os quais se encontram amplamente distribuídos nas plantas. AJ tem inúmeras aplicações conhecidas tais como a utilização do AJ na fabricação de perfumes; na produção do chá preto; na redução do consumo de estimulador de crescimento; na produção de malte em indústrias de cerveja; no aumento da produção de taxol; na produção de flavorizantes alimentícios, entre outros. Os microrganismos produzem substâncias químicas como resultado do metabolismo primário e secundário. No metabolismo secundário estão envolvidas vias metabólicas para a síntese de produtos naturais que não são essenciais para o crescimento do organismo produtor. O fungo B. rhodina, tem despertado um interesse crescente devido à produção de uma serie de ácidos graxos ciclopentanos, do tipo AJ, com propriedades reguladoras do crescimento de plantas superiores. A importância crescente do uso de microrganismos na biotecnologia nos levou a propor a prospecção dos metabólitos produzidos pelos microrganismos existentes em espécies vegetais da Amazônia. Desse modo, foram obtidos isolados de B. rhodina capazes de produzir o ácido jasmônico e seus derivados os quais foram caracterizados geneticamente por meio de seqüenciamento do DNA ribossomal e pela técnica de AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism ou Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos Amplificados). Trinta e quatro linhagens de B. rhodina isoladas como patógenos de plantas tropicais, tais como: citros, manga, mogno africano, mamão, cupuaçu e madeira cortada foram analisadas para verificar a capacidade de produção de AJ utilizando-se a metodologia de Miersch et al., 1989. Os ensaios para produção de AJ e seus derivados foram realizados em meio Miersch (M1) e Miersch Modificado (M2) e, avaliados em placas de Cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC) e quantificados por meio de Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Após a avaliação da produção de jasmonatos as linhagens foram submetidas à análise molecular de regiões ITS do rDNA para avaliação da diversidade genética. A extração do DNA foi realizada por métodos clássicos, seguido da amplificação das regiões conservadas ITS do rDNA por meio da técnica de PCR, onde foram utilizados os oligonucleotídeos ITS1 e ITS4. A distância genética entre as linhagens variou de 0 a 1,6%. A taxa de transição/transversão foi de 1,2. Os alinhamentos foram submetidos ainda ao Programa TCS, resultando na identificação de nove haplótipos e 10 sítios polimórficos. A matriz de distância genética assim como a árvore filogenética resultante mostrou pouca divergência genética nas regiões de DNA analisadas. Também foi feita a analise das linhagens de B. rhodina por meio de marcadores moleculares AFLP. Para a obtenção dos resultados foram utilizadas quatro combinações de iniciadores nas reações AFLP, possibilitando a geração de 300 marcadores polimórficos. O número médio de bandas obtidas por iniciador foi de 79% e a porcentagem de bandas polimóficas foi de 95%. A distância genética entre as linhagens de B. rhodina foi de 29,19%, e a porcentagem de loci polimórfico foi de 0,95%. Todas as linhagens investigadas foram agrupadas em quatro grupos e foram obtidos indicadores de alta variabilidade genética entre todos os isolados.

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Were evaluated about their morphological diversity (conidia structure), genetic (Its1 and Its2 / AFLP), protein (SDS-PAGE) and they secondary metabolites were evaluated for chemical profile obtained by mass spectrometry (APCI-MS ). Secondary metabolites were tested against tumor cells SKMEL-19, CAL-27, ACP02 and against strain of C. albicans CFAM - 1342, associating the results with yours metabolomic profile. The most promising strain was subjected to mutagenesis by UV (UVC) light induction. The 33 strains of Pestalotiopsis spp. were isolated from nine plant genera as Euterpe sp., Gustavia spp., Myrcia sp. Duguetia sp., Rollinia sp., Arrabidaea sp. Victoria sp., Pinus sp., and associated Basidiomycetes. The most representative species were P. mangiferae, P. microspora and P. clavispora with eight, seven and six strain respectively. The extracts did not showed promising results against any of the tumor cells and nine extracts showed activity against C. Albicans. The chemical profile assessed over 60 days showed that the strain P. microspora (P12 / AnspCg1.1.3a) isolated of Rollinia sp. initiates the stationary growth phase of 20 days of cultivation, and the cultivation time best for obtaining bioactive compounds is 30 days. The analyzes of the reduction of the carbon source, growth of mycelial mass and the pH of the fortified protein profile results confirmed that the strain arrive the metabolic apex with 25 days.The production of mutant strains PX was efficient, but the strains did not show anticandida activity in their extracts. The secreted protein profile was also modified proteins of 50 to 140 kDa being expressed with greater intensity. Through large-scale cultivation was possible positive evaluation by bioautography and CCDP isolation subfractions which analyzed by 1H and 13C NMR showed the presence of 3-phenyl-propionic acid molecule known for its ecological role in protecting the host against plant pathogens. / Fungos do gênero Pestalotiopsis podem ser encontrados como parasitas ou endófitos, sendo bastante disseminados aos diversos habitats. A bioprospecção de Pestalotiopsis spp. têm demonstrado o potencial deste gênero na obtenção de compostos bioativos como anticancerígenos e antimicrobianos, isso por conta da diversidade de metabólitos secundários que são capazes de produzir. No trabalho ampliou-se o conhecimento a cerca da genômica, proteômica e metabolômica de linhagens de Pestalotiopsis isolados de ambientes Amazônicos. Foram reativadas 33 linhagens do gênero Pestalotiopsis da Coleção do LaBMicra da Universidade Federal do Amazonas - UFAM. Foram avaliadas com relação a sua diversidade morfológica (estrutura de conídios), genética (Its1 e Its2/AFLP), proteica (SDS-PAGE) e seus metabólitos secundários foram avaliados através do perfil químico obtido por espectrometria de massas (APCI-MS). Os metabólitos secundários foram ensaiados frente a células tumorais SKMEL-19, CAL-27, ACP02 e frente a cepa de C. albicans CFAM – 1342, associando os resultados ao perfil metabolômico. A linhagem mais promissora foi submetida a mutagênese por indução de luz ultravioleta (UVC). As 33 linhagens de Pestalotiopsis spp. foram isoladas de nove gêneros vegetais como Euterpe sp., Gustavia spp., Myrcia sp. Duguetia sp., Rollinia sp., Arrabidaea sp. Victoria sp., e Pinus sp., além de associadas a Basidiomycetes. As espécies mais representativas foram P. mangiferae, P. microspora e P. clavispora, com oito, sete e seis linhagens respectivamente. Os extratos das linhagens não apresentaram resultado promissor contra nenhuma das células tumorais e nove extratos apresentaram atividade frente a C. albicans. O perfil químico avaliado ao longo de 60 dias demonstrou que a linhagem P. microspora (P12/ AnspCg1.1.3a) isolada de Rollinia sp. chega a fase estacionária de crescimento com 20 dias de cultivo, e que o melhor tempo de cultivo para a obtenção dos compostos bioativos é 30 dias. As análises da redução da fonte de carbono, crescimento da massa micelial e pH do meio fortaleceram os resultados do perfil proteico confirmando que a linhagem chega ao ápice metabólico com 25 dias. A produção de linhagens PX mutantes foi eficiente, mas as linhagens não apresentaram atividade anticandida em seus extratos. O perfil de proteínas secretadas também foi modificado com proteínas de 50 a 140kDa sendo expressas com maior intensidade. Através do cultivo em larga escala foi possível a avaliação positiva por bioautografia e por CCDP o isolamento de subfrações que analisadas por RMN de 1H e 13C revelaram a presença do ácido 3-fenil-propanóico, molécula conhecida por sua função ecológica na proteção da planta hospedeira contra patógenos.