Avaliou-se, por testes in vitro, a fungitoxicidade dos produtos Cabrio Top, Captan SC, Comet, Derosal 500, Derosal Plus, Frowncide 200 SC, Nativo, Opera, Stratego e Vitavax-Thiram 200 SC em isolados de Trichoderma sp. (T1R, T2R, T4R, T6R, T7R, TSV e PCT). Os fungicidas foram adicionados em meio de cultura BDA e em discos de papel filtro na dosagem recomendada pelo fabricante, metade e dobro desta dose. Os tratamentos foram mantidos a 23 ± 1ºC e fotoperíodo de 14 horas. Após sete dias de incubação foi medido o diâmetro da colônia dos fungos na presença dos fungicidas e o halo de inibição formado em torno do disco de papel filtro. Os fungicidas Cabrio Top, Captan SC, Comet, Stratego e Vitavax-Thiram 200 SC não se mostraram tóxicos aos isolados. O isolado T4R foi o menos sensível aos fungicidas e os isolado T6R e PCT foram os mais sensíveis. Avaliou-se também, a fungitoxicidade in vitro destes mesmos defensivos agrícolas a Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli, agente causal da murcha do feijoeiro e o potencial antagônico dos isolados de Trichoderma sp. ao fitopatógeno. Os fungicidas, Derosal 500, Derosal Plus, Nativo, Opera e Vitavax-Thiram 200 SC foram efetivos no controle de F. oxysporum f.sp. phaseoli in vitro. Experimentos in vitro, testando o potencial antagônico dos isolados T4R, TSV e PCT de Trichoderma sp. ao fitopatógeno mostraram que os isolados são efetivos no controle de F. oxysporum f.sp. phaseoli quando inoculados 48 horas antes e simultaneamente com o fitopatógeno. Em experimento de casa de vegetação, sementes de feijão foram tratadas com os fungicidas Vitavax-Thiram 200 SC e Derosal Plus, com os isolados T4R, TSV e PCT e com o fitopatógeno F. oxysporum f. sp. phaseoli. Somente o isolado TSV foi efetivo no controle do fitopatógeno. Todos os isolados de Trichoderma sp. foram recuperados de raízes de plantas cujas sementes foram tratadas com fungicidas. / The fungitoxicity of the products Cabrio Top, Captan SC, Comet, Derosal 500, Derosal Plus, Frowncide 200 SC, Nativo, Opera, Stratego and Vitavax-Thiram200 SC was evaluated through in vitro tests in strains of Trichoderma sp. (T1R, T2R, T4R, T6R, T7R, TSV and PCT). The fungicides were added in a PDA culture medium and on discs of filter paper following manufactures recommended dosages, half and the double of this dose. The treatments were maintained at 23±1ºC and at a photophase of 14 hours. After 7 days of incubation the diameter of the fungus colony in the presence of fungicides and the halo of inhibition formed around the disc of paper filter were measured. The fungicides Cabrio Top, Captan SC, Comet, Stratego and Vitavax-Thiram 200 SC were not toxic towards the isolates. The isolate T4R was less sensitive towards the fungicide while the isolates T6R and PCT were the most sensitive ones. The fungitoxicity in vitro of these same agricultural defensives towards Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli (the casual agent of Fusarium Wilt and the antagonistic potential of the isolates of Trichoderma sp. towards the pathogen) was evaluated. The fungicides Derosal 500, Derosal Plus, Nativo, Opera and Vitavax-Thiram 200 SC were effective in the control of F. oxysporum f.sp. phaseoli in vitro. Experiments in vitro, testing the antagonistic potential of the isolates T4R, TSV and PCT of Trichoderma sp. towards the pathogen have shown that the isolates are effective in the control of F. oxysporum f.sp. phaseoli when inoculated before 48 hour period and simultaneanously with the pathogen. In experiment in greenhouse bean seeds were treated with the fungicides Derosal Plus and Vitavax-Thiram200 SC with the isolates T4R, TSV and PCT and with the pathogen Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli. Only the isolated TSV was effective in the control of the pathogen. All isolated of Trichoderma sp. Tested they had been recouped of roots of plants whose seeds had been with fungicides.

A avaliação da capacidade produtora de micotoxinas vem sendo utilizada como uma importante ferramenta na identificação de espécies conhecidamente toxigênicas. Poucos são os métodos rápidos e alternativos disponíveis para a determinação do potencial toxigênico de espécies do gênero Aspergillus. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade produtora de aflatoxina B1, em diferentes condições de cultivo, por três isolados de Aspergillus flavus, produtores de aflatoxina B1. O delineamento experimental baseou-se em um planejamento 2³ completo, tendo como variáveis independentes a temperatura (20-40°C), o tempo de incubação (7-21 dias) e o pH (2,0-6,0) nos meio sintéticos (YES, CYA e Sabouraud). As melhores condições encontradas foram aplicadas em testes com meio natural (arroz) e isolados a principio não-aflatoxigênicos. Aflatoxina B1 foi extraída diretamente dos meios sintéticos com clorofórmio e do arroz com metanol. A identificação e quantificação do composto foi realizada por Cromatografia em Camada Delgada e Fotometria Fotográfica. O meio YES se mostrou o melhor para detecção do potencial toxigênico, seguidos de melhor pH 4,0 e 5,2, e temperatura de 20º e 25ºC e tempo de incubação de 11 e 14 dias. O isolado A43, em temperatura de 25º, pH 5,2 e tempo de incubação de 11 dias, mostrou a maior produção de aflatoxina B1, com 206,05 ng. No arroz, os isolados revelaram produção de aflatoxina, apenas a partir do 14ºdia. Dos 30 isolados a princípio não-aflatoxigênicos testados inicialmente em agar coco, 12 apresentaram resultado positivo nos meios e condições aqui apresentados. / Mycotoxins producing capacity evaluation has being used as an important tool, in the identification of toxigenic species. A few of them are available as alternative rapid methods for the determination of the toxigenic potential of species Aspergillus. The objective of this work was to evaluate the aflatoxin B1 producing capacity in different conditions of culture by three Aspergillus flavus. The experimental delineation was based on a 2³ factorial design. To test the effect of three independent variables, the temperature (20-40°C), the incubation time (7-21 days) and pH (2,0 -6,0) in the synthetic medium (YES, CYA and Sabouraud) were applied in the program STATISCA 7.0. The best joined conditions had been applied in tests with natural medium (rice) and isolated tested as nonaflatoxigenics. Aflatoxin B1 was extracted directly from sintetic mediuns by chloroform and from rice by methanol. Thin-layer chromatography (TLC) and Photometric Photography were the methods utilized for the identification and quantification of aflatoxin B1. YES was the best medium for the detention of toxigenic potential, at pH 4,0 and 5,2, temperature of 20º and 25ºC and incubation time of 11 and 14 days. The isolated A43, at temperature of 25ºC, pH 5,2 and incubation time of 11 days showed the biggest aflatoxin B1 production (206,05 ng). Aflatoxin production in rice occurred only after 14 days. 12 of the 30 non aflatoxigenic isolates showed aflatoxin production in the media and conditions tested.

Este estudo foi realizado na Estação Experimental Agronômica (EEA) da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS) e teve por objetivo avaliar o comportamento de três espécies de fungos micorrízicos arbusculares (FMA) sobre o desenvolvimento vegetativo de dois porta-enxertos (PE) de videira. Foram utilizados os PE 101-14 e P1103 e os FMA Glomus clarum, Scutellospora pellucida e Gigaspora margarita. As estacas dos PE, previamente enraizadas, foram colocadas em sacos de polietileno (5 L), contendo um substrato composto por terra argilosa:areia:casca de acácia (2:2:1; v:v:v) previamente desinfestado com formolaldeído (7%). Utilizou-se, como inóculo, 20 g de solo rizosférico mais fragmentos de raízes contendo as estruturas dos FMA. Após 126 dias avaliou-se o desenvolvimento vegetativo dos PE, através de vários parâmetros, assim como a porcentagem de colonização pelos FMA. G. clarum e S. pellucida favorecem mais intensamente o desenvolvimento vegetativo dos porta-enxertos de videira 101-14 e P1103 além de proporcionar maior acúmulo de reservas e nutrientes nos tecidos destes PE.

Levando-se em conta as vantagens dos FMA, este trabalho foi desenvolvido tendo por objetivo avaliar a utilização destes microrganismos no desenvolvimento vegetativo e no controle biológico da fusariose, em porta-enxertos de videira oriundos de micropropagação.

Cerca de 15% da safra de arroz é perdida anualmente, principalmente em práticas inadequadas de pós-colheita. Nesse contexto, a avaliação de técnicas de secagem e armazenamento é necessária em função das perdas quali e quantitativas de grãos, resultantes do desenvolvimento de fungos. O objetivo desse trabalho foi analisar a contaminação fúngica e por micotoxinas do arroz submetido aos sistemas de secagem intermitente e estacionário, com armazenamento em sacaria e em silo-secador, avaliando o comportamento das principais variáveis de influência no processo. O trabalho foi realizado entre os meses de maio de 2003 a maio de 2004. As amostras de arroz com casca foram coletadas a cada dois meses, em duplicatas. Foram, ainda, analisadas amostras de arroz branco polido e parboilizado de ambos sistemas. O número de colônias de bolores e leveduras foi determinado e a capacidade produtora de micotoxinas dos isolados do gênero Aspergillus foi investigada. A detecção de aflatoxinas, ocratoxina A, zearalenona e citrinina foi realizada por cromatografia em camada delgada. Os grãos secados no sistema estacionário apresentaram maior contagem de colônias fúngicas. Enquanto no sistema intermitente, a contaminação foi mais uniforme ao longo do armazenamento. Predominaram representantes do gênero Penicillium nos dois sistemas, principalmente P. commune e P. islandicum. Entre os isolados do gênero Aspergillus, destacou-se A. flavus. Foram encontrados 7 (13, 20%) isolados de A.flavus produtores de aflatoxina B1, mas não foram detectadas micotoxinas nas amostras. A umidade dos grãos afetou significativamente a contaminação fúngica no manejo intermitente e no terço superior (altura 2) do silo-secador. A temperatura no interior do silo influenciou a contaminação no terço inferior (altura 1).

A brusone, causada pelo fungo Magnaporthe grisea (Hebert) Barr, é uma das mais importantes doenças da cultura do arroz. A resistência genética é a forma mais efetiva para o controle da doença. Os objetivos do presente trabalho foram: identificar genes envolvidos na resposta de resistência à infecção de M. grisea em arroz através das técnicas de expressão diferencial; obter e caracterizar uma biblioteca de cDNAs utilizando como modelo linhas quase-isogênicas de arroz (NILs = Near Isogenic Lines), contendo os genes de resistência Pi-1 e Pi-2; e avaliar e comparar a expressão diferencial de mRNAs, através dos cDNAs isolados em uma série de cultivares com resposta distinta à infecção de M. grisea. Foram identificados dois isolados com virulência diferencial para as NILs e um isolado para os cultivares. Os cDNAs relacionados à resistência do arroz à M. grisea foram identificados a partir de mRNAs isolados das NILs. Foram obtidos 30 fragmentos de cDNAs e 232 clones de cDNAs pelas técnicas de cDNA-AFLP e SSH, respectivamente. A análise das seqüências permitiu identificar genes envolvidos nos processos de metabolismo, transporte de íon inorgânico; transdução de sinais; fatores de transcrição; metabolismo de coenzima; conversão e produção de energia; metabolismo e transporte de carboidrato e biossíntese de proteína. Noventa clones isolados através da técnica de SSH foram selecionados e a expressão diferencial foi avaliada via hibridização em macroarranjos de cDNAs. A ausência de conservação entre os mRNAs diferencialmente expressos nas interações analisadas e a diversidade dos grupos de genes reflete a complexidade das respostas. A análise funcional in vivo desses genes poderá contribuir para utilização dos mesmos na obtenção de uma resistência de espectro amplo à brusone do arroz.

Com o objetivo de avaliar o impacto de diferentes práticas agrícolas sobre as comunidades de FMA, foi realizado um levantamento no município de Urussanga/SC, no qual foram estudados diferentes vinhedos conduzidos com manejo orgânico e convencional.

Orientador: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Resumo: O objetivo deste estudo foi formular e avaliar os efeitos fotodinâmicos da curcumina (CUR) encapsulada em nanopartículas poliméricas (NP) em culturas plactônicas de Candida albicans, Streptococcus mutans e Staphylococcus aureus resistente à meticilina e em biofilme misto formado por essas três espécies. NP de CUR aniônicas e catiônicas foram sintetizadas utilizando-se polímero poli-ácido lático (PLA) e sulfato de dextran (DEX). Para caracterização dessa solução, foram determinadas as propriedades fisicoquímicas (tamanho, polidispersão e potencial zeta) e realizados testes de eficiência de encapsulamento, espectro de absorção, fotoestabilidade (fotodegradação da CUR) e atividade fotodinâmica (fotodegração de reagente e scavenger de oxigênio singleto). Em seguida, os efeitos da Terapia Fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) mediada pela CUR-NP contra culturas planctônicas e biofilme misto cultivado in vitro por 48 horas, foram avaliados por meio de quantificação de colônias (UFC/mL). Cada avaliação foi realizada em triplicata em três ocasiões distintas e comparada com CUR livre. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística descritiva e inferencial (α=0,05). Após a síntese as CUR-NP apresentaram propriedades nanomêtricas farmacotécnicas adequadas, com valores médios de tamanho, polidispersão e potencial zeta 237,9; 0,08 e -35,2 mV; 239; 0,20 e +32 mV respectivamente para as CUR-NP aniônica e catiônica. Foi observada uma eficiência de encapsulamento de 67 e 64,6 % para as... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In vivo studies have used a computerized microtomography (Micro CT) to assess a quality and amount of tissue present in the development of induced periodontal disease. However, have not yet studied which are the most reliable standards established for the proper use of the Micro CT technique. The objective of this study was to evaluate the generation of artifacts during biopsy scanning, as well as the analysis of different parameters defined in an area and bone volume measurement in an experimental model of periodontal disease induced in rats. To analyze the different detection parameters of microcomputers with selected animals and submitted to insertion of ligatures in the subgingival region of the upper second molars. After the 7-day period the animals were used as bone biopsies scanned using resolutions of 9 μm and 18 μm, with different filters: aluminum (0.2 mm, 0.5 mm and 1 mm) and copper + aluminum (Cu 0 04 mm + 0.5 mm). Subsequently, two regions of interest (ROI's) were defined around the second molars, in the way the bone tissue was analyzed. After determining the area of interest, the amount of bone tissue was evaluated and quantified using the CTAn software, from 5 threshold values: 255-75, 255-80, 255-85, 255-70, 255-65. When different thresholds were analyzed within the same filter, only the 0.2 mm Al filter presented statistical difference for all comparisons (9 μm and 18 μm). Already when the different filters with the same threshold were compared, it is only one comparison Al 0.2 mm x Cu + Al presented statistical difference for all comparisons, except for comparisons between Al 0.1 mm x 0.2 mm (threshold 255 - 65 with resolution of 18 μm). It was concluded that advances and standardization in microtomographic analysis to evaluate bone loss in induced periodontal disease should be performed with the objective of greater...(Complete abstracelectronic access below) / Mestre

Metarhizium anisopliae é um fungo entomopatogênico usado como agente de controle biológico devido a sua capacidade de infectar mais de 300 espécies de artrópodes. É um organismo muito utilizado como modelo de estudo de interação patógeno-hospedeiro sendo um dos focos de estudo a descrição de genes envolvidos no processo de infecção pela construção de mutantes funcionais. Esse processo pode ser facilitado pelo uso da metodologia do sistema CRISPR/Cas9 para manipulação genômica, que foi derivada do sistema imune adaptativo de procariotos que vem demonstrando potencial tecnológico em edição genética de eucariotos pela incorporação de protoespaçadores (sequencias oriundas de bacteriófagos ou plasmídeos invasores) em seus loci. CRISPR e a proteína associada à CRISPR (Cas) formam uma endonuclease guiada (Cas9) a qual tem como alvo o sítio específico do DNA invasor, provocando a clivagem da dupla fita do DNA alvo em uma sequência específica. Muitos estudos realizados pela edição gênica têm sido desenvolvidos em diferentes organismos por meio da sua adaptação em eucariotos. Com o objetivo de melhorar a eficiência na geração de mutantes em em M. anisopliae, o sistema CRISPR/Cas9 e um sistema de RNAi foram usados a fim de desenvolver novas ferramentas. As metodologias CRISPR/Cas9 e RNAi foram desenvolvidas para ter como alvo o gene reporter gfp da linhagem M. anisopliae E6 GFP+. Para realizar a edição genômica em M. anisopliae, foram gerados, por transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens, fungos transgênicos estáveis que expressam a endonuclease Cas9 códon-otimizada para fungos filamentosos. Oligonucleotídeos foram projetados para ter como alvo quatro regiões diferentes na sequencia do gene gfp com o auxílio da ferramenta CRISPR RGEN tool com o objetivo de evitar o pareamento aleatório. O vetor binário utilizado foi o plasmídeo pPZP com o promotor U6-1 para a expressão do RNA guia. Para a metodologia de RNA interferente foi reproduzido o knockdown do gene repórter gfp por meio de agrotransformação do vetor pPZP::SUR::DP que contém um sistema de dois promotores em direções opostas (dual promoter Pdgp e Ptrpc) e um cassette de expressão com o gene marcador sur (resistência a sulfoniluréia) para a seleção dos transformantes. Foram clonados 420 pares de bases do gene gfp entre os promotores gerando o plasmídeo pPZP::SUR::DP::GFP. O desenvolvimento dessas duas metodologias se mostra viável para análise funcional de genes de M. anisopliae. / Metarhizium anisopliae is an entomopathogenic fungus used as a biological control agent due to its capacity to infect more than three hundred species of arthropods. It is broadly used as a model to the development of host-pathogen interaction studies, including the study of the description of the involved genes in the infection process by the construction of functional mutants. This process may be facilitated by the use of the CRISPR/Cas9 methodology to genomic manipulation, which was derived from the immune adaptive system in prokaryotes and has demonstrated technological potential in genetic of eukaryotes edition through the activity of incorporation of protospacers (sequences arising from bacteriophages or plasmids invaders) in their loci. CRISPR and CRISPR associated protein (Cas) code a guided nuclease (Cas9) that targets a specific site of the invading DNA leading to breakage of double-stranded target DNA in a specific sequence. Multiple gene editing studies have been developed in different organisms including its adaptation to eukaryotes. In order to improve the efficiency of the generation of mutants in M. anisopliae, CRISPR/Cas9 system and a RNAi system were used in order to develop new tools. Both CRISPR/Cas9 and RNAi methodologies were developed having as a target the gfp gene from M. anisopliae E6 GFP+ strain. To perform genome editing in M. anisopliae, stable transgenic fungi that express fungal codon-optimized Cas9 were generated by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. Oligonucleotides were designed to target four different regions along the gfp gene by using the CRISPR RGEN tool in order to avoid off-targets. The binary vector was the pPZP plasmid with the U6-1 to RNAi expression. For RNAi analysis, gene knockdown were developed by agrotransformation with a suitable plasmid (pPZP::SUR::DP) containing dual promoters with opposite directions (Pdgp and Ptrpc) and a cassette for the expression of the selective marker (gene sur, conferring sulfonylurea resistance) for the selection of transformants. The 420 bp gfp sequence was cloned between promoters, obtaining thus the plasmid pPZP::SUR::DP::GFP. The development of these two techniques proves itself viable for functional analysis of M. anisopliae genes.

A citricultura brasileira é um dos setores mais competitivos do agronegócio mundial, contudo, o setor de produção de mudas de citros apresenta inúmeras limitações. A produção de porta-enxertos cítricos carece de substratos de qualidade, opções para diversificação de variedades porta-enxerto e plantas bem formadas num breve período para que o pomar alcance o sucesso. Objetivou-se avaliar o desenvolvimento de porta-enxertos cítricos cultivados em diferentes substratos, submetidos ou não à desinfestação e à inoculação micorrízica. Desenvolveu-se dois estudos: o primeiro, verificando o desenvolvimento de seis porta-enxertos (tangerineira ‘Sunki’, citrumeleiro ‘Swingle’, citrangeiro ‘Fepagro C 37’, ‘Flying Dragon’, limoeiro ‘Volkameriano’ e Poncirus trifoliata) em dois substratos comerciais. O segundo estudo, compreendendo 3 experimentos, que avaliaram duas variedades porta-enxerto (tangerineira ‘Sunki’ e citrangeiro ‘Fepagro C 37’) cultivadas em dois substratos comerciais (denominados Comercial 1 e 2) submetidos ou não a desinfestação e inoculação micorrízica (nos experimentos 1 e 2 utilizou-se Scutellospora heterogama e no experimento 3 inoculou-se Glomus etunicatum, S. heterogama e Gigaspora margarita). Avaliou-se a emergência de plântulas e o seu desenvolvimento vegetativo durante todo o experimento, além da colonização micorrízica em cada fase de crescimento. O substrato Comercial 1, em geral, proporcionou mais rápida emergência das variedades porta-enxerto. Os substratos Comercial 1 e 2, autoclavados e manejados adequadamente, proporcionaram desenvolvimento satisfatório às plantas, sendo recomendados, para citricultura. Altos teores de sais solúveis (TTSS (g.L-1) dos substratos podem prejudicar a emergência das plântulas. P. trifoliata foi pouco vigoroso, o limoeiro ‘Volkameriano’ foi altamente vigoroso; o citrumeleiro ‘Swingle’ e a tangerineira ‘Sunki’ apresentaram vigor intermediário. A desinfestação do substrato do substrato foi fundamental para o bom desenvolvimento das plantas. / The Brazilian citrus industry is one of the most competitive sectors of the agribusiness world, however, the production sector of citrus seedlings has several limitations. The citrus production rootstocks lacks quality of substrates, options for diversification of rootstock varieties and plants well-formed in a short time to reach success of the orchard. The objective was evaluate the development of citrus rootstocks grown on different substrates, submitted or not to disinfection and mycorrhizal fungi. There were developed two studies: first, checking the development of six rootstocks ('Sunki' mandarin, citrumelo, citrange ‘Fepagro C 37', 'Flying Dragon' lemon 'Volkameriano’ and Poncirus trifoliata) in two commercial substrates and the second, comprising 3 experiments that evaluated two rootstock varieties ('Sunki' mandarin and ‘Fepagro citrange C 37') growned in two commercial substrates (called Commercial 1 and 2) subjected or not to disinfestation and mycorrhizal inoculation (experiments 1 and 2 was used Scutellospora heterogama and in experiment 3 was inoculated Glomus etunicatum, Gigaspora margarita and S. heterogama). We have evaluated the seedling emergence and vegetative development throughout the experiment, besides the mycorrhizal colonization at each stage of growth. The substrate Commercial 1, in general, provided faster emergence of varieties rootstock. The substrates 1 and Commercial 2, autoclaved and handled properly, provided satisfactory development of the plants, being recommended for citrus. High levels of soluble salts (TTSS (gL-1) of the substrates may hinder seedling emergence. P. trifoliata was little vigorous, lemon trees 'Volkameriano' was highly vigorous, the citrumelo and 'Sunki' mandarin showed an intermediary effect. The sterilization of the substrate was essential for the good plant growth.