Orientador: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Banca: Maria José Valarini / Banca: Norma Gouvêa Rumjanek / Banca: Lúcia Maria Carareto Alves / Banca: Fátima Maria de Souza Moreira / Resumo: O nitrogênio é o nutriente requerido em maior quantidade para a cultura da soja. Avanços nas pesquisas de melhoramento genético vegetal e microbiologia do solo permitiram expandir o uso de inoculantes comerciais contendo estirpes de Bradyrhizobium japonicum e Bradyrhizobium elkanii. Estas bactérias infectam as raízes da planta e induzem a formação de nódulos, que abrigam a forma bacterióide, diferenciada da bactéria, responsável pela fixação simbiótica do nitrogênio. Informações sobre processos bioquímicos envolvidos no metabolismo da relação simbiótica podem ser adquiridas através de análises globais de expressão gênica. Para esta finalidade, destaca-se a tecnologia de microarranjo de DNA para detecção de genes diferencialmente expressos em larga escala. O objetivo geral deste trabalho foi identificar genes diferencialmente expressos, por meio de microarranjos de DNA, em Bradyrhizobium elkanii SEMIA 587 cultivada em diferentes meios de cultura, RDM (Rhizobia Defined Medium), TY (Triptone-Yeast Medium) e YMB (Yeast-Mannitol Medium), e em bacterióides isolados de nódulos de soja em diferentes períodos de desenvolvimento, 13, 28 e 48 dias após inoculação. Para esta finalidade, a partir do seqüenciamento de DNA genômico de B. elkanii, um microarranjo (Be587) foi gerado contendo 2654 genes. Em meio RDM, a bactéria confrontou-se com a necessidade de se adaptar e sintetizar suas subunidades formadoras de macromoléculas a partir de uma única fonte de carbono, refletindo em um metabolismo mais ativo nas fases lag e log. Por outro lado, em meio TY, as células cultivadas na presença de uma boa fonte de carbono e energia cresceram rapidamente esgotando os recursos disponíveis no meio, 8 o que pode ter causado uma situação de estresse que se refletiu na identificação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nitrogen is the most required nutrient by soybean culture. Advanced researches in genetic plant breeding and soil microbiology allowed the expansion in commercial inoculants applications containing strains of Bradyrhizobium japonicum and Bradyrhizobium elkanii. These bacteria infect plant roots and induce nodule formation which home the differentiated bacteria, named bacteroid. The bacteroid in turn is responsible for symbiotic nitrogen fixation. Biochemical knowledge about processes of symbiotic regulation can be acquired by global analysis of gene expression. To achieve such information, the DNA microarray technology, used for detection of differentially expressed genes in large scale, was used. The purpose of this work was identificate differentially expressed genes of Bradyrhizobium elkanii SEMIA 587, grown under different media conditions, such as RDM (Rhizobia Defined Medium), TY (Triptone- Yeast Medium) and YMB (Yeast-Mannitol Medium), and in bacteroids from soybean nodules at different developmental stages, 13, 28 e 49 days after inoculation. For this purpose, the DNA microarray Be587 with 2654 genes was generated from B. elkanii genomic DNA. In RDM medium the bacterium was confronted with the need of adaptation and building of macromolecules subunits from a single carbon source, what was reflected in a more active metabolism in lag and log phases. In turn, in TY medium with good carbon and energy sources the cells grew fastly and exhaust the medium sources available. Such condition can submitted the bacterial cells to a stress condition that reflected in the identification of higher number differentially expressed genes. At different bacteroids stages, the analysis detected genes related to nodulation and 10 nitrogen fixation regulation more than structural genes. Inasmuch, an organic nitrogen recycle might be involved... (Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Introdução: A Esclerose Múltipla (EM) é uma doença autoimune desmielinizante que afeta drasticamente a capacidade motora, cognitiva, e sensitiva dos pacientes. Acreditase que o Retrovírus Endógeno Humano da família W (HERV-W) possa ter um papel na patogênese da doença. Assim, o objetivo deste trabalho foi analisar o transcriptoma desses indivíduos, e analisar os loci do HERV-W diferencialmente ativos. Materiais e Métodos: PBMC e soro de pacientes com EM em surto (GS), em condições avançadas (GA) e indivíduos saudáveis (GC) foram coletadas. Amplicons de envelope de HERV-W foram sequenciados em Ion Torrent e o RNAm foi sequenciado na plataforma Illumina HiSeq2500. Além da análise do HERV-W, análises de interação gênica foram feitas e citocinas inflamatórias e quimiocinas foram testadas. Resultados: Foram analisados 23 indivíduos com EM (16 GS e 7 GA) e 36 do GC. Os pacientes com EM apresentam 3x mais expressão de HERV-W do que os indivíduos controle. O sequenciamento de amplicon revelou que os grupos com EM apresentavam mais loci ativos do que o GC. Apesar limitações decorrentes de variações entre corridas, o transcriptoma demonstrou que o HERV-K11 era diferencialmente expresso no GS, e no GA, 19 HERVs estavam diferencialmente expressos. Loci novos e já descritos como ativos em outros estudos foram encontrados no presente trabalho. O perfil de interação gênica do GS demonstrou um caráter inflamatório, confirmados pela dosagem de citocinas, onde IL-6, IL-1?, TNF-?, IFN-? estavam elevadas nos indivíduos do GS. Já os indivíduos do GA apresentavam um perfil não inflamatório com vias de reparo neuronal inativadas. Conclusões: Os pacientes com EM apresentam maior nível de expressão e maior diversidade de expressão de HERV-W do que o GC. Apesar os perfis semelhantes de expressão, há loci diferencialmente expressos dependente do grupo estudado. Os pacientes com EM apresentam perfis distintos de expressão gênica onde os indivíduos GS apresentam um perfil inflamatório e no GA, um perfil neurodegenerativo. / Introduction: Multiple Sclerosis (MS) is an autoimmune disease which drastically affects motor, cognitive and sensitive capability of the patients. It seems that Human Endogenous Retrovirus W family (HERV-W) may play a role in MS pathogenesis. Therefore, the aim of this study was to analyze the transcriptome of these individuals and to analyze the HERV-W loci differentially expressed. Materials and Methods: PBMC and serum samples were collected from MS patients in relapsing conditions (GS), MS patients in advanced conditions (GA) and healthy individuals (GC). HERV-W Env amplicon was sequenced in Ion Torrent and mRNA was sequenced in illumina HISeq2500 platform. Besides HERV-W analysis, genic pathways analysis was performed and inflammatory cytokines and chemokines were tested. Results: A total of 23 MS patients (16 from GS and 7 from GA) and 36 from GC were enrolled in the study. MS patients presented 3-fold higher expression than healthy individuals. Amplicon sequencing revealed that MS groups presented more active loci than GC. Despite the limitations due to variations between sequencing runs, the transcriptome revealed that HERV-K11 was differentially expressed in GS, and 19 HERVs were differentially expressed in GA. New HERV-W loci and other loci that were reported as active loci previously are described here. The genic pathway analysis revealed that individuals from GS presented an inflammatory profile, also confirmed by cytokines dosage, where IL-6, IL-1?, TNF-?, IFN-? were significantly higher in GS. In the other hand, individuals from GA presented a non inflammatory profile with neuronal repair pathways inactivated Conclusions: MS patients present higher level and diversity of HERV-W expression than GC. Regardless the similar profile of HERV-W expression in MS groups, there are differentially expressed HERV-W loci depending of each MS group. MS patients present distinct genic expression profile, where GS presented an inflammatory pathway with vascular permeability, whereas GA presented a neurodegenerative profile

Orientadores: Marta Helena Krieger, Regina Celia Spadari / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T11:44:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caceres_VivianedeMenezes_M.pdf: 892273 bytes, checksum: 832dcecc572cc26759a9832b12d09b9e (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Os objetivos do presente estudo são investigar e comparar o efeito do nitrosotiol doador de NO (SNAC) e do doador de NO-/HNO (Sal de Angelis) na estrutura e função do miocárdio sob processo aterogênico precoce induzido pela dieta em camundongos com deleção gênica do receptor de LDL (LDLr-/-). Os dados obtidos possibilitam avaliar a eficácia destas espécies químicas, bem como os mecanismos de ação envolvidos nos efeitos preventivos promovidos pelo sistema NO/NOS e pela via HNO, na hipertrofia ventricular esquerda, neste modelo animal. O papel dos adrenoceptores beta no controle da função cardíaca destes camundongos LDLr-/- também foi avaliado. A deleção gênica do receptor de LDL resultou em déficit contrátil cardíaco, sem alteração na homogeneidade da população miocárdica de adrenoceptores ß1, mas quando associada à dieta hiperlipídica induziu participação de adrenoceptores ß2, com conseqüente alteração da sensibilidade aos efeitos inotrópico e cronotrópico da isoprenalina. O tratamento com SNAC e Sal de Angelis (SA) preveniu o aumento da sensibilidade à isoprenalina, provavelmente ao induzir o acoplamento dos adrenoceptores ß 2 com a proteína Gi. Além disso, o SA foi capaz de corrigir o déficit contrátil do miocárdio. Camundongos LDLr-/- também apresentaram hipertensão, a qual foi prevenida pelo tratamento com SNAC. Quando a deleção gênica estava associada à dieta hiperlipídica, os camundongos apresentaram hipertensão e hipertrofia ventricular esquerda. O SNAC e o SA previniram a hipertrofia, mas não a hipertensão. Concluímos que camundongos com deleção gênica do receptor de LDL, alimentados com dieta hiperlipídica são um modelo interessante de alterações cardíacas e hemodinâmicas, especialmente quando enfocamos alterações das respostas dos adrenoceptores beta adrenérgicos, e que compostos doadores de NO e seus congêneres podem se tornar uma alternativa para prevenir tais alterações / Abstract: The aim of this study is to analyze and to compare the effects of a nitrosothiol NO donnor (SNAC) and of a NO-/HNO donor (Angelis Salt, AS) on the structure and functioning of myocardium under atherogenic process induced by a hyperlipic diet in LDL receptor knockout mice (LDLr-/-). The role played by the ß adrenoceptor subtypes in the control of the cardiac function of LDLr-/- mice has also been analysed. LDLr-/- mice exhibited a contractile deficit in the myocardium, with no alteration in the response to isoprenaline, which is mediated by a homogeneous population of ß1 adrenoceptors. However, when it was associated with a hyperlipidic diet, ß2 adrenoceptors participate in the inotropic and chronotropic responses to isoprenaline, causing an alteration on tissue sensitivity to the agonist. LDLr-/- knockout mice treatment with SNAC or AS avoided the atria supersensitivity to isoprenaline by inducing ß2 adrenoceptors coupling to Gi protein. Moreover, AS but not SNAC was able to recover the atria contractile performance. LDLr-/- mice also presented hypertension that it was prevented by the SNAC treatment. Hypertension was accompanied by ventricular hypertrophy when the gene deletion was associated with a hyperlipidic diet. SNAC or AS treatment prevented the hypertrophy, but not the hypertension. We concluded that LDLr-/- mice fed with a hyperlipidic diet are useful models for the study of haemodynamic and cardiac diseases related to a hypercholesterolemic profile, mostly when the focus is to investigate the participation of the adrenoceptors in the involved processes, and that NO donnors or similar compounds may be an alternative tool to prevent such alterations / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Fatores hepatotróficos (FH) possuem a capacidade de promover aumento de massa hepática em ratos e diminuição da fibrose em animais cirróticos. Os FH podem ser importantes nos casos de ressecção e transplantes hepáticos no qual o fígado remanescente necessita de um volume considerável para exercer suas funções após a cirurgia. Objetivou-se neste trabalho avaliar a cinética de uma solução de FH em fígados de animais sadios. Utilizou-se 105 ratos Wistar fêmeas divididos em 7 grupos de 15 animais cada. 6 grupos receberam solução de FH na dose 40 ml/kg/dia, i.p. e 1 grupo controle (CT) recebeu apenas solução salina 0,9%. Os animais foram eutanasiados com 2, 4, 6, 8, 10 e 12 dias (grupos 2, 4, 6, 8, 10 e 12) após o início do tratamento. Avaliou-se os parâmetros biométricos, a proliferação dos hepatócitos pela análise imuno-histoquímica (PCNA), morfometria do colágeno, função hepática e a expressão gênica de colágeno αI, TGFβ1, MMP 2 e PLAU. O aumento de massa hepática foi maior nos grupos 8, 10 e 12. A marcação de hepatócitos PCNA+ obteve seu pico no grupo 2. A morfometria do colágeno (mensurado pelo picrossírius) revelou redução nos grupos 6, 10 e 12 (o Grupo 8 não foi avaliado). A imunofluorescência para colágeno tipo III evidenciou redução do colágeno no grupo 12. Os resultados das enzimas de função hepática permaneceram normais. A expressão gênica do colágeno I obteve alta expressão diminuindo com o decorrer do tratamento; a ação do gene TGFβ1 indicou inibição da proliferação celular no grupo 12. MMP 2 e PLAU não demonstraram participar de forma efetiva no mecanismo de ação dos FHs. Os resultados demonstraram que a solução de FH promove a hipertrofia hepatocitária, sem alteração da função hepática e diminuindo o colágeno volumétrico do fígado. Os FH representam uma opção relevante ao tratamento de hepatopatias ou quando é necessário aumento de massa hepática antes de hepatectomias e/ou ressecções. / Hepatotrophic factors (HF) have the ability to the liver mass in rats and decrease fibrosis in cirrhotic rats. HFs can be important in cases of resection and liver transplantation in which the remnant liver needs to restore a considerable mass volume before surgery. Thus, this study evaluates the kinetics of HF solution in the livers of healthy animals. Were used 105 female Wistar rats divided into 7 groups of 15 animals each. 6 groups received HF solution at a dose 40 ml/kg/day, i.p. and 1 control group (CT) only received 0.9% saline solution. The animals were euthanized at 2, 4, 6, 8, 10 and 12 days (groups 2, 4, 6, 8, 10 and 12) after starting treatment. The biometric parameters, proliferation of hepatocytes by immunohistochemical analysis (PCNA), collagen morphometry, liver biochemical function and gene expression of collagen αI, TGFβ1, MMP 2 and PLAU. The increase in liver mass was greater in groups 8, 10 and 12. The index of hepatocytes PCNA+ peak obtained in group 2. Morphometry of collagen (measured by picrosirius red) revealed reduction in groups 6, 10 and 12 (Group 8 was not evaluated). Immunofluorescence for collagen type III showed reduction of collagen in group 12. The results of the enzymes of liver function remained normal. Gene expression of collagen I expression was higher decreasing over the course of treatment; the action of TGFβ1 gene showed inhibition of cell proliferation in group 12. MMP 2 and PLAU not shown to effectively participate in the mechanism of action of HFs. The results showed that the solution of HF promotes hepatocyte hypertrophy with no change in liver function and decreasing the volume of liver collagen. Therefore, HFs represents an important option for treatment of chronic liver diseases or when it is necessary to increase liver mass before hepatectomy and/or resections.

O gene TrCit do fungo filamentoso Trichoderma reesei codifica a proteína citrato sintase, uma enzima chave do ciclo de Krebs. Análise da região 5´ upstream de TrCit mostra que o gene está adjacente ao gene TrIcl (que codifica a proteína isocitrato liase, uma enzima do ciclo de glioxalato), em uma orientação cabeça-cabeça. A região promotora intergênica de 647 pb rica em G + C, apresenta uma ilha CpG, seqüência INR, caixas GC, caixas CAAT, sítios de ligação para diversos fatores de transcrição e é isenta de caixa TATA. O gene TrCit de 1573 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1422 pb produz uma proteína de 474 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 52,3 kD. O gene TrIcl de 1880 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1788 pb produz uma proteína de 596 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 65,4 kD. A atividade transcricional da região promotora foi analisada utilizando como repórter o gene de higromicina B fosfotransferase (hph). Uma região funcional necessária à transcrição de ambos os genes foi identificada na região central do promotor e contém uma caixa GC que liga o putativo fator de transcrição Sp1 de T. reesei (TrZnFSp1). O gene do putativo fator de transcrição “zinc-finger” TrZnFSp1 de 1500 pb contém 3 éxons e 2 íntrons. Sua seqüência codificadora de 1344 pb produz uma proteína de 448 aminoácidos, com um peso molecular estimado de 48,4 kD. Os resultados mostram que ambos os genes são transcritos de forma divergente a partir de um promotor bidirecional que compartilha na região central uma caixa GC, necessária para a transcrição de ambos os genes. / The TrCit gene from the filamentous fungus Trichoderma reesei codes for the citrate synthase protein, a key enzyme in the Krebs cycle. Analysis of TrCit 5’ upstream region showed that it is adjacent to the TrIcl gene that codes for isocitrate lyase protein, an enzyme involved in the glyoxylate cycle. Both genes, on a head-to-head orientation, are separated by an intergenic GC-rich and TATA-less promoter region of 647 base pairs. This bidirectional promoter has diverse cis regulatory elements: a CpG island, two INR sequences, GC boxes, CAAT boxes and several putative interaction sites for different transcription factors. The TrCit gene, 1,573-base pair-long, has an open reading frame of 1,422 base pairs interrupted by two introns. The gene codes for a protein with an estimated molecular weight of 52.3 kD. The TrIcl gene, 1,880-base pair-long, contains 3 exons and 2 introns and a putative coding sequence of 1,788 base pairs. The estimated molecular weight of TrICL is 65.4 kD. he transcriptional activity of the intergenic promoter region was analyzed using hygromicin B phosphotransferase (hph) as a reporter gene. A functional region required for the transcription of both genes was identified in the centre of this promoter. It has a GC box that interacts with a putative transcription factor Sp1 from T. reesei (TrZnFSp1). The results presented in this work show that both genes are divergently transcribed from a bidirectional promoter that shares an essential central GC box.

O objetivo deste trabalho foi caracterizar uma nova família de retrotransposons Copia em cana-de-açúcar, e também compreender a diversidade de retrotransposons com LTR transcricionalmente ativos em cana, com base na análise filogenética de cDNAs provenientes do projeto SUCEST. Foi assim isolada uma nova família de retrotransposons de cana, denominada SURE (SUgarcane REtrotransposon). O genoma da cana apresentou grande colinearidade com os genomas de sorgo e arroz em segmentos contendo SURE. Foram também classificados filogeneticamente cDNAs e seqüências completas de retrotransposons com LTR de cana-de-açúcar. A maioria das linhagens evolutivas descritas apresenta ao menos um representante em cana. O grupo de retrotransposons com LTR mais representado no transcriptoma de cana foi reunido como um novo membro da superfamília Copia Garapa. Trata-se de um elemento com mais cópias e maior variabiliadade que SURE. Dessa forma, SURE e Garapa apresentam-se como duas linhagens de retrotransposons que apresentam padrões distintos de amplificação no genoma de cana. / The aim of this work was to characterize a sugarcane element belonging to a new Copia retrotransposon-family in sugarcane and also study the diversity of transcriptional active LTR-retrotransposons in sugarcane, based in a phylogenetic analysis of cDNAs from SUCEST. The new retrotransposon family identified in sugarcane was named SURE (Sugarcane REtrotransposon). BAC clones bearing one copy of SURE showed that sugarcane genome have a high sinteny with sorghum and rice genomes in coding regions. Other sugarcane sequences containing LTR-retroelements were characterized and compared to pre existent in the plant kingdom. Most of these lineages had at least one sugarcane element. The most representative group of these sequences was reunited as a new group of Copia superfamily in sugarcane and named Garapa. It comprises elements highly distributed in sugarcane chromosomes and with a higher variability when compared to SURE. Finally, SURE and Garapa represent two distinct lineages of Copia retrotransposons that had different amplification pattern in the sugarcane genome.

Made available in DSpace on 2017-07-25T19:30:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hellen Christine Prochno.pdf: 2394554 bytes, checksum: 2bef91782af17469f52e15e3757a8eec (MD5) Previous issue date: 2013-11-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objectives of this study were to measure the resistance/susceptibility of the sixteen maize inbred lines to anthracnose leaf blight (Colletotrichum graminicola (Ces.) G. W. Wils.) and estimate the genetic parameters associated with resistance, as well as study the inheritance of resistance and the genic action involved in the generations descended from crosses between maize inbred lines (Zea mays L.). Firstly, sixteen maize lines were screened for resistance/susceptibility to anthracnose leaf blight in three trials conducted in a randomized block design, with four replications. The plants inoculations were performed when the plants were six to seven completely expanded leaves in two times, the second made seven days after the first inoculation. To quantify the disease severity, six evaluations were performed at weekly intervals, initiated after the first symptoms appear, by use a note scale with amplitude from 1 to 6. Were used the data obtained in the second, fourth and sixth evaluation and data of the area under the disease progress curve (AUDPC) to perform analyzes and estimates of genetic parameters. To study the inheritance of resistance in maize to anthracnose leaf blight, were estimated the genetic parameters of six families derived from crosses between resistant and susceptible lines to C. graminicola. Each family consisted of six generations (P1, P2, F1, F2, RC1 e RC2), which were evaluated for resistance in two trials implanted in a randomized block design in a split-plot, where in the plots were studied the families effects and in splits the generations effects, with three replications. Were used the data estimated in second, fourth and sixth evaluation for the performed the statistical and genetic analysis. The results showed the existence of genetic variability for resistance/susceptibility to anthracnose leaf blight in all inbred lines studied. The inbred lines L 04-2, L 23-1, L 87-3, L 99-4 e L 118-4 stood out for keep the resistance pattern, showing the lowest values of AUDPC in the three trials, were considered important source of resistance to C. graminicola. The estimates genetic parameters indicated low participation of environmental effects on the resistance/susceptibility expression to anthracnose leaf blight and showed the possibility of genetic gains with the artificial selection. The results indicated predominance of additive effects in the inheritance of maize resistance to anthracnose leaf blight in the six families analyzed, explaining up to 99,39% of the phenotypic variation. The high heritability coefficients (broad and narrow sense) observed indicated ease in the artificial selection process by breeding programs. The heterosis estimates were high and negatives in all families studied, revealing the ability of resistant inbred lines (LR 04-2 e LR 23-1) in transmitting the resistance genes for generations affiliated, resulting in lower disease severity. The results showed that the inheritance of maize resistance to anthracnose leaf blight is oligogenic. Predominance of additive genic action, associated with high heritability estimates and oligogenic genetic control, assuming that genetic gains with artificial selection will reach success in the breeding programs that search develop resistant maize populations to anthracnose leaf blight. / Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a resistência/suscetibilidade de dezesseis linhagens endogâmicas de milho à antracnose foliar (Colletotrichum graminicola (Ces.) G. W. Wils.) e estimar os parâmetros genéticos associados à resistência, bem como estudar o modo de herança da resistência e a ação gênica envolvida nas gerações descendentes de cruzamentos entre linhagens endogâmicas de milho (Zea mays L.). Primeiramente, dezesseis linhagens de milho foram avaliadas quanto a resistência/suscetibilidade à antracnose foliar em três experimentos instalados no delineamento de blocos casualizados, com quatro repetições. As inoculações das plantas foram realizadas quando as plantas estavam com seis à sete folhas completamente expandidas, em dois momentos, sendo a segunda realizada sete dias após a primeira inoculação. Para a quantificação da severidade da doença, foram realizadas seis avaliações com intervalo semanal, iniciadas após o aparecimento dos primeiros sintomas, pela utilização de uma escala de notas com amplitude de 1 a 6. Foram utilizados os dados obtidos na segunda, quarta e sexta avaliação e os dados da área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) para a realização das análises estatísticas e estimativas dos parâmetros genéticos. Para o estudo da herança envolvida na resistência de milho à antracnose foliar, estimou-se os parâmetros genéticos de seis famílias derivadas dos cruzamentos entre linhagens resistentes e suscetíveis à C. graminicola. Cada família foi constituída de seis gerações (P1, P2, F1, F2, RC1 e RC2), as quais foram avaliadas para resistência em dois experimentos implantados no delineamento de blocos casualizados, em esquema de parcelas subdivididas, onde nas parcelas foi estudado o efeito de famílias e nas subparcelas o efeito das gerações, com três repetições. Foram utilizados os dados estimados na segunda, quarta e sexta avaliação para a realização das análises estatísticas e genéticas. Os resultados evidenciaram a existência de variabilidade genética para a resistência/suscetibilidade à antracnose foliar no conjunto de linhagens estudadas. As linhagens L 04-2, L 23-1, L 87-3, L 99-4 e L 118-4 destacaram-se pela manutenção do padrão de resistência, apresentando os menores valores de AACPD nos três experimentos, sendo consideradas importantes fontes de resistência a C. graminicola. As estimativas dos parâmetros genéticos indicaram baixa participação dos efeitos ambientais na expressão da resistência/suscetibilidade à antracnose foliar e evidenciaram a possibilidade de ganhos genéticos com a seleção artificial. Os resultados indicaram predomínio dos efeitos genéticos aditivos na herança da resistência de milho à antracnose foliar nas seis famílias analisadas, explicando até 99,39% da variação fenotípica. Os elevados coeficientes de herdabilidade (sentido amplo e restrito) observados indicam facilidade no processo de seleção artificial pelos programas de melhoramento. As estimativas de heterose foram altas e negativas em todas as famílias estudadas, revelando a capacidade das linhagens resistentes (LR 04-2 e LR 23-1) em transmitir os genes de resistência para as gerações filiais, resultando na menor severidade da doença. Os resultados demonstraram que a herança da resistência do milho à antracnose foliar é oligogênica. Predomínio de ação gênica aditiva, associada às altas estimativas de herdabilidade e controle genético oligogênico, permitem inferir que os ganhos genéticos com a seleção artificial lograrão êxito nos programas de melhoramento que buscam desenvolver populações de milho resistentes à antracnose foliar.

A suplementação com ácido fólico (AF) apresenta efeitos quimiopreventivos, porém, pode aumentar o risco de desenvolvimento e acelerar a progressão do câncer se ocorrer em doses elevadas ou após a ocorrência de lesões pré-neoplásicas (LPN). O AF é essencial na síntese de novo de purinas e timidalato e consequentemente na síntese, replicação e reparo do DNA, proliferação celular e apoptose. Assim, a deficiência pode implicar em danos ao DNA e erros na sua replicação e reparo, processos importantes na carcinogênese, onde as células apresentam taxas de replicação e divisão aceleradas, e é possível que a suplementação module estes processos. Além disso, como AF ocupa uma posição de destaque no metabolismo dos grupamentos metila pode exercer efeitos sobre a hipometilação global do DNA e o aumento da expressão de proto-oncogenes como o c-myc, fenômenos característicos da hepatocarcinogênese. Assim, objetivando-se avaliar os efeitos do AF na promoção da hepatocarcinogênese em ratos Wistar, desenvolveu-se o modelo do \"Hepatócito Resistente\" e administrou-se por entubação gástrica diariamente, durante 5 semanas, o AF (0,16; 0,32; ou 0,64 mg / 100 g de peso / dia) ou água (0,25 mL / 100 g de peso / dia). Então, avaliou-se as LPN hepáticas presentes visíveis à macroscopia e microscopia (GST-P), a proliferação celular (BrdU) e a apoptose (microscopia de fluorescência) no tecido hepático ao redor das LPN e nas LPN persistentes e em remodelação, a intensidade de danos ao DNA (\"Cometa\" alcalino), e o padrão de metilação global (Dot Blot) e a expressão do c-myc (RT-PCR) especificamente em LPN microdissecadas. Apesar de não ter alterado a incidência e multiplicidade das LPN, o tratamento com AF 0,32 mg / 100 g promoveu um aumento na porcentagem de lesões &#8805; 1 mm e o com AF 0,64 mg / 100 g a diminuição na porcentagem dessa lesões com relação ao grupo água (p<0,05). De modo semelhante, observou-se na análise das LPN GST-P positivas que o AF 0,32 mg / 100 g promoveu aumento e o AF 0,64 mg / 100 g inibiu o processo carcinogênico, embora não se tenha observado diferenças significantes no número, área e porcentagem da área do corte ocupada pelas LPN. Apesar de não ter modulado significativamente o desenvolvimento das LPN, o AF nas doses de 0,32 e 0,64 mg / 100 g inibiu a proliferação celular nas LPN persistentes (p<0,05). A contagem dos corpúsculos apoptóticos permitiu constatar uma possível inibição da apoptose nas LPN persistentes e em remodelação com caráter dose-dependente (p>0,05). De acordo com a análise do comprimento dos cometas, houve um aumento dos danos ao DNA no modelo de hepatocarcinogênese e ausência de efeito do AF nesse processo (p>0,05). O padrão de metilação global do DNA e a expressão do c-myc nas LPN microdissecadas não foram significativamente alterados pelo tratamento com diferentes doses de AF, embora, em geral, se tenha observado uma tendência dos tratamentos com AF promoverem hipometilação e aumento da expressão de c-myc. Os resultados obtidos, em conjunto, auxiliaram na caracterização das ações paradoxais (inibitórias e promotoras) que o AF apresenta na etapa de promoção da carcinogênese, de forma que a dose e o estágio do desenvolvimento neoplásico em que se inicia a suplementação demonstraram ser críticos e, por isso, indicam necessidade de cautela acerca da fortificação com o AF, uma das maiores intervenções de saúde pública que expôs a população a elevadas concentrações de AF sintético. / Folic acid (FA) supplementation shows chemopreventive effects, however, it may increase the risk of development and accelerate cancer progression in case of high doses or after preneoplastic lesions (PNL) are established. FA is essential on de novo synthesis of purine and thymidalate and, consequently, on DNA synthesis, replication and repair, cell proliferation and apoptosis. Thus, its deficiency may cause DNA damage and replication and repair mistakes, important processes on carcinogenesis, where cells present high replication rates and accelerated division, and is possible that supplementation modulates these processes. Besides, as FA has a central role on methyl group metabolism, it may have effects on hepatocarcinogenesis peculiar events such as DNA global hypomethylation and on the increased expression of proto-oncogenes like c-myc. Objecting the evaluation of FA effects during hepatocarcinogenesis promotion in Wistar rats, the \"Resistant Hepatocyte\" model was developed and water (0.25 mL / 100 g BW / day) or FA (0.16; 0.32; or 0.64 mg / 100 g BW / day) were supplemented daily by gavage for 5 weeks. Then, hepatic PNL detected by macroscopy and microscopy (GST-P), cell proliferation (BrdU) and apoptosis (fluorescence microscopy) on surrounding tissue, persistent and remodeling PNL, DNA damage (alcaline Comet assay), DNA global methylation pattern (Dot Blot) and c-myc expression (RT-PCR) specifically in microdissected PNL were evaluated. Even though FA treatment was not able to change incidence and multiplicity of PNL, the treatment with 0.32 mg / 100 g of FA increased the percentage of lesions &#8805; 1 mm whereas with 0.64 mg / 100 g of FA diminished the percentage of these lesions, compaired to the water group (p<0.05). Similarly, it could be observed in PNL positive GST-P analysis that FA 0.32 mg / 100 g enhanced and FA 0.64 mg / 100 g inhibited the carcinogenic process, although it was not possible to detect significant differences on number, size and area of liver section occupied by GST-P positive PNL. Despite the fact that PNL development was not significantly modulated by FA, FA 0.32 and 0.64 mg / 100 g dosages inhibited cell proliferation on persistent PNL (p<0.05). The apoptotic body count allowed to identify a possible dosage-dependent apoptosis inhibition on persistent and remodeling PNL (p>0.05). According to the analysis of comet length, the hepatocarcinogenesis model increased DNA damage but FA showed lack of effect on this process (p>0.05). DNA global methylation pattern and c-myc expression in microdissected PNL were not significantly altered by treatment with different dosages of FA, although a trend towards promotion of hypomethylation and increase on c-myc expression was observed. Altogether, the obtained results helped to characterize the paradoxical action (both inhibitory and promoting) that FA has on carcinogenesis promotion step, in such a way that the dosage and the stage of neoplastic development in which supplementation begins seems to be critical, highlighting the necessity of caution with FA fortification, one of the biggest public health interventions taken that exposes the population to high concentrations of synthetic FA.

Orientador: Mario de Beni Arrigoni / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do fornecimento de fontes de lipídios a bovinos Nelore confinados. O estudo foi conduzido no confinamento experimental da FMVZ, UNESP – Botucatu. Foram utilizados 96 bovinos machos Nelore, com média de 22 meses e peso vivo médio inicial de 399,90 (±19,32). O delineamento experimental foi em blocos casualizados divididos em quatro tratamentos: Coprodutos, com adição de caroço de algodão e gérmen de milho como fontes de lipídios; Nutrigordura, com inclusão de fonte de lipídios protegidos da degradação ruminal provenientes de óleo de soja; Blend, com inclusão de uma mistura de óleos vegetais protegidos da degradação ruminal, contendo ácidos graxos saturados e insaturados e Mix, com adição de caroço de algodão, gérmen de milho e blend. Cada tratamento consistiu em seis baias (4 animais/baia), sendo estas consideradas as unidades experimentais para o estudo. Os animais foram abatidos após 108 dias de estudo. Os dados obtidos foram analisados com auxílio do programa SAS e as médias comparadas por meio do teste de Tukey (P<0,10). Não foram observadas diferenças quanto aos parâmetros de desempenho, características de carcaça e deposição de tecido muscular e adiposo entre os tratamentos. O tratamento Nutrigordura apresentou menor expressão dos genes SREBP1 e LPL. O gene SCD foi menos expresso no tratamento Nutrigordura em comparação à Coprodutos e Mix. Quanto aos parâmetros de qualidade de carne, observou-se diferença apenas para luminosi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to evaluate the effects of the supply of lipid sources to Nellore cattle. The study was conducted in experimental feedlot of FMVZ, UNESP - Botucatu. 96 Nellore male bulls were used, with a mean of 22 months and initial body weight of 399.90 (± 19.32). The experimental design was in randomized blocks divided into four treatments: Coproducts, with addition of cottonseed and corn germ as sources of lipids; Nutrigordura, with soybean oil protected from rumen degradation; Blend, with inclusion of a mixture of vegetable oils protected from ruminal degradation, containing saturated and unsaturated fatty acids and Mix, with of cottonseed, corn germ and blend. Each treatment consisted of six pens (4 animals / pen), which were considered the experimental units for the study. The cattle were slaughtered after 108 days of study. The data obtained were analyzed using SAS and the means were compared using the Tukey test (P <0.10). No differences were observed regarding parameters of performance, carcass characteristics and deposition of muscular and adipose tissue between the treatments. Nutrigordura presented lower expression of SREBP1 e LPL genes. SCD gene was less expressed in Nutrigordura treatment, compared to Coproducts and Mix. Regarding meat quality parameters, differences were observed only for luminosity, red color intensity and yellow color intensity. The Nutrigordura treatment provided a lower content of saturated fatty acids and a higher CLA content in meat. S... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Rafael Santana (rafael.silvasantana@ufpe.br) on 2017-04-27T17:11:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao-2016 Mariela Sader.pdf: 1705519 bytes, checksum: 88403c5afd27ce740e32a563b44b06b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T17:11:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao-2016 Mariela Sader.pdf: 1705519 bytes, checksum: 88403c5afd27ce740e32a563b44b06b3 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CNPQ / O gênero Passiflora é o maior da família Passifloraceae, sendo formado por aproximadamente 500 espécies. Tem origem na América tropical, apresentando mais de 135 espécies nativas do Brasil. Dentre as principais espécies do gênero, destaca-se o maracujáazedo, Passiflora edulis Sims, em virtude de seu interesse comercial principalmente como planta frutífera. Apesar de avanços no conhecimento genético e genômico, não é possível o reconhecimento de cada um de seus nove pares cromossômicos. Uma estratégia que auxilia na definição do cariótipo é o desenvolvimento de marcadores específicos para cada par cromossômico, que podem ser obtidos a partir da hibridização in situ fluorescente (FISH) de sequências genômicas clonadas em cromossomos artificiais de bactérias (BACs). No presente trabalho, 27 BACs contendo genes ou regiões gênicas de Passiflora foram utilizados como sondas para a construção de um mapa físico do maracujá-azedo por BAC-FISHintegrando a localização de sequências únicas e repetidas.Destes, 12 clones puderam ser mapeados, permitindo a identificação com marcas únicas de oito dos pares cromossômicos, sendo o par cinco identificado com o DNAr 5S. Além disso, foi demonstrada a distribuição dispersa de retroelementos Ty1-copia, Ty3-gypsy e LINE. Os resultados do presente trabalho corroboram a importância da FISH na caracterização e identificação cromossômicas, tanto com sequências repetitivas quanto com clones com grandes insertos como sonda (BAC-FISH), propiciando o desenvolvimento de marcadores cromossomo-específicos e um mapa citogenético para o maracujá-azedo. / Passiflora is the largest genus of the Passifloraceae family, and includes about 500 species. It originates in tropical America and more than 135 species are native to Brazil. Among the main species of the genus, the sour passion-fruit Passiflora edulis Simsis of great importance because of their commercial interest, primarily as fruitful plant. Despite the advances in genetic and genomicknowledge, it has not been possible to distinguish eachone of his nine chromosome pairs. One strategy that helps karyotype definition is the development of markers specific for each chromosome pair, which can be obtained from fluorescent in situ hybridization (FISH) of cloned genomic sequences in bacterial artificial chromosomes (BACs). In this study, 27 BACs containing genes or gene regions of Passiflora were used as probes to construct a physical map of the sour passion-fruit using BAC-FISH. Subsequently, 12 clones have been mapped allowing the identification of eight chromosome pairs with unique signal, the fifthpair being identified by the 5S rDNA. Furthermore, a dispersed distribution of retrotransposons Ty1-copia, Ty3-gypsy and LINE was demonstrated. The results of this study confirm the importance of FISH in chromosome characterization and identification, using both repetitive sequences and clones with large inserts as probe (BACFISH), promoting the development of chromosome-specific markers and a cytogenetic map for the sour passion-fruit.