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Biomarcadores de contaminação aquática em Poecilia viviparaMachado, Anderson Abel de Souza January 2012 (has links)
Dissertação(mestrado) - Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós–Graduação em Oceanografia Biológica, Instituto de Oceanografia, 2012. / Submitted by Cristiane Gomides (cristiane_gomides@hotmail.com) on 2013-11-18T15:23:39Z
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Previous issue date: 2012 / A poluição aquática em zonas costeiras é crescente, exigindo cada vez mais o uso de
ferramentas alternativas para seu monitoramento. Dentre estas, as de maior potencial são os biomarcadores, que são medidas biológicas capazes de expressar exposição ou efeito deletério de contaminantes. Porém, a falta de informação sobre respostas de biomarcadores a contaminantes em concentrações ambientalmente relevantes constitui empecilho ao emprego destas ferramentas. Neste trabalho foram analisados os efeitos de três contaminantes em diversos biomarcadores usualmente utilizados em estudos de avaliação ambiental. Os contaminantes testados foram cobre (metal), atrazina (herbicida) e fenantreno (hidrocarboneto policíclico aromático). Os biomarcadores avaliados foram atividades enzimáticas (superóxido dismutase, catalase, glutationa redutase e glutationa s-transferase), concentração de metalotioneínas, espécies reativas de oxigênio, capacidade antioxidante, peroxidação lipídica, quebras na fita de DNA, freqüência de células micronucleadas e de anomalias nucleares, e composição iônica corporal. Os três contaminantes demonstraram potencial para afetar os biomarcadores avaliados, porém cada um afetou distintamente os grupos de biomarcadores. O efeito do cobre foi caracterizado por um elevado potencial de geração de estresse oxidativo em brânquias, fígado e músculo, além de causar dano genético através da quebra da fita de DNA e clastogenicidade. A atrazina aumentou a atividade da glutationa s-transferase, causou estresse oxidativo branquial e danos genéticos não detectáveis no ensaio cometa. Por fim, o fenantreno gerou estresse oxidativo muscular, sendo a maioria dos danos possivelmente relacionada à geração de metabólitos reativos durante sua degradação, resultando em elevada genotoxicidade e citotoxicidade, bem como perturbações de sistemas enzimáticos e da fisiologia do animal. / Aquatic pollution in coastal areas is increasing, demanding the use of alternative tools for its adequate monitoring. Among them, biomarkers are those showing higher potential for practical use. They are biological measurements capable of detecting the exposure and effects of contaminants. However, the lack of information on the response of biomarkers to contaminants at environmentally relevant levels is a constraint for the employment of these tools in monitoring programs. In the present study, the effects of three contaminants on several biomarkers commonly employed in environmental analyses were evaluated. Contaminants tested were copper (metal), atrazine (herbicide) and phenanthrene (polycyclic aromatic hydrocarbon). Biomarkers evaluated were enzyme activities (superoxide dismutase, catalase, glutathione reductase and glutathione s-transferase), metallothioneins concentration, reactive oxygen species, antioxidant capacity, lipid peroxidation, DNA strand-breaks, micronucleated cells and nuclear anomalies frequencies, and whole-body ion composition. The three contaminants showed potential to affect the biomarkers evaluated. However, each contaminant affected distinctly the groups of biomarkers. Copper effect was characterized by a elevated potential for oxidative stress generation in gills, liver and muscle. It also induced genetic damage (DNA strand-breaks) and clastogenicity. Atrazine increased glutathione stransferase activity, caused oxidative stress in gills and genetic damage non detectable by the Comet assay. Finally, phenanthrene induced oxidative stress in muscle, being most of the damage likely associated with the generation of reactive metabolites during the contaminant degradation process. Exposure to phenanthrene resulted in elevated genotoxicity and cytotoxicity, as well as perturbations of the enzymatic systems and the whole-animal physiology.
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Efeitos citotoxicos e genotoxicos no meristema radicular de Allium cepa exposta a agua do Rio Paraiba do Sul - estado de São Paulo - regiões de Tremembe e Aparecida / Citotoxic and genotoxic effects in the root meristem of Allium cepa exposed to the water of the Paraiba do Sul river - São Paulo state - regions of Tremembe and AparecidaBarberio, Agnes 13 August 2018 (has links)
Orientador: Maria Luiza Silveira Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T07:52:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2009 / Resumo: Uma das principais fontes de poluição dos ecossistemas de água doce se refere aos resíduos de efluentes industriais e urbanos. Os esgotos não tratados e excrementos humanos são considerados causa importante na deterioração da qualidade da água de países em desenvolvimento. Os poluentes ambientais têm causado uma diminuição da qualidade da água, induzindo efeitos deletérios nos organismos que estão em contato direto ou indireto com os mesmos. O efeito da exposição dos organismos a qualquer substância potencialmente tóxica, depende de sua concentração e do tempo de exposição. Um dos efeitos, freqüentemente observado pelos agentes ambientais é a alteração química do DNA. Tais modificações são prejudiciais às células, uma vez que podem afetar processos vitais, como a duplicação e a transcrição do DNA, a regulação gênica e a divisão celular, e levar ao desenvolvimento de processos patogênicos e/ou à morte celular. Nesse contexto, testes biológicos de toxicidade e genotoxicidade são indispensáveis para a avaliação das reações dos organismos vivos à poluição ambiental, como também para a identificação dos efeitos sinérgicos potenciais de vários poluentes. O rio Paraíba do Sul é um dos integrantes da bacia do rio Paraíba do Sul, de importância para a região sudeste do Brasil, pois serve ao abastecimento urbano, à irrigação, à geração de energia, e à assimilação de despejos urbanos, industriais e agrícolas nessa região. No presente trabalho foram pesquisados efeitos citotóxicos e genotóxicos em raízes de Allium cepa expostas a amostras de água do rio Paraíba do Sul, coletadas em agosto de 2005, 2006 e 2007, em pontos localizados nas cidades de Tremembé e Aparecida (SP). Foram utilizados para investigação parâmetros anátomo-morfológicos (crescimento das raízes), índices mitóticos (IM), índices de fases da divisão celular (IF), freqüência de micronúcleos (MN) e anomalias cromossômicas (AC). O comprimento das raízes de cada bulbo foi acompanhado, diariamente, ao longo de 24 a 120 h. Somente as raízes tratadas com amostras de água coletadas em 2005, na cidade de Tremembé, apresentaram um decréscimo em taxa de crescimento. Entretanto, nesse mesmo ano, houve redução no IM das raízes tratadas com água coletada em Tremembé e Aparecida. Considerando-se os dados de crescimento de raiz e especialmente os valores de IM, admite-se que em 2005 a água do rio Paraíba do Sul nas regiões de Tremembé e Aparecida tenha tido potencial citotóxico. Por outro lado, ainda nesse mesmo ano, a freqüência de MN não se mostrou alterada, o que indica que a água do rio, nos pontos mencionados, não apresentaria potencial genotóxico. Em 2007 não houve diferença no crescimento das raízes assim como os valores de IM nas raízes tratadas com água de ambos os pontos de coleta não diferiram dos valores do controle negativo. As freqüências das fases da mitose (IF) diferiram de modo significativo dos respectivos controles; as freqüências de prófase e anáfase das raízes tratadas com as águas coletadas em Tremembé e em Aparecida foram maiores e a freqüência de telófases menor do que as dos controles negativos. As freqüências de metáfase foram maiores para as raízes tratadas por água coletada em Aparecida. Foram constatados aumentos significativos de MN e de AC em raízes tratadas com água das duas regiões de coleta. A freqüência de c-mitose foi significantemente maior após tratamento com a água proveniente de Tremembé, enquanto a freqüência de pontes cromossômicas foi maior para as raízes tratadas por água coletada em Aparecida. Considerando-se a freqüência de MN, AC e IF, admite-se efeito citotóxico e genotóxico para A. cepa tratada com as amostras de água do rio Paraíba do Sul das regiões de Tremembé e Aparecida, no ano de 2007. O teste Allium mostrou ser uma ferramenta sensível na detecção de citotoxicidade e genotoxicidade promovidas pela água do rio Paraíba do Sul nos pontos nomeados. / Abstract: One of the main sources of pollution of fresh water ecosystems refers to the discharge of industrial and urban wastes. Untreated sewage is considered an important cause to the deterioration of water quality in developing countries. Environmental pollutants have caused a decrease in water quality, inducing harmful effects in organisms which are in direct or indirect contact with them. The effect of exposure of organisms to any potentially toxic substance depends on its concentration as well as exposure time. One of the effects frequently observed by environmental agents is the chemical alteration of the DNA affecting vital processes, like DNA duplication and transcription, gene regulation and cell division, and leading cells to pathologic processes and/or cell death. In this context, toxicity and genotoxicity biological tests are mandatory for the evaluation of reactions of living organisms to environmental pollution, as well as for the identification of potential synergetic effects of several pollutants. The Paraíba do Sul river is one of the components of the Paraíba do Sul basin, of importance to the southeast region of Brazil, as it serves for urban supply, irrigation, generation of energy, and assimilation of urban, industrial and agricultural discharges in the mentioned region. This work aimed at researching cytotoxic and genotoxic effects in Allium cepa roots exposed to water samples collected from the Paraíba do Sul river in August 2005, 2006 and 2007, at sites located in the cities of Tremembé and Aparecida. Anatomo-morphologic parameters (root growth), mitotic indices (MI), cell division phase indices (PI), frequency of micronuclei (MN) and chromosome anomalies (CA) were investigated. Root lengths from each bulb were evaluated daily along 24 to 120 h. Only in the roots treated with the water samples collected at Tremembé in 2005, a decrease in root growth rate was found. However, in the same year, there was reduction in the MI of the roots treated with water collected at Tremembé and Aparecida. Considering the root growth data and especially the MI values, it is assumed that the water of the Paraíba do Sul river in the regions of Tremembé and Aparecida had a cytotoxic potential in 2005. On the other hand, still in the same year, no change in MN frequency was detected, which indicates that the water at the mentioned river points had probably no genotoxic potential. In 2007, there was no difference in root growth, as the MI values for roots treated with the water collected at both sites did not differ from the values of the negative control. The frequencies of the mitosis phases differed significantly from the respective controls; the frequencies of prophases and anaphases for roots treated with water collected at Tremembé and Aparecida were higher and the frequency of telophases were lower than those of the negative controls. Frequencies of metaphases were higher for roots treated with water collected in Aparecida. A significant increase in MN and CA was found for the roots treated with water collected from both sites. The frequency of c-mitosis significantly increased after treatment with the river water collected at Tremembé, whereas the frequency of chromosome bridges increased for roots treated with water collected at Aparecida. By considering the frequencies of MN, CA and PI, a cytotoxic and genotoxic effect is supposed for A. cepa treated with the water collected from the river Paraíba do Sul at sites of Tremembé and Aparecida, in 2007. The Allium test has proved to be a sensitive tool for detecting cytotoxicity and genotoxicity effects promoted by the Paraíba do Sul water in the mentioned sites. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural
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Alterações genômicas e mutagênicas em duas espécies de anfíbios anuros / Genomic and mutagenic changes in two species of amphibiansGonçalves, Macks Wendhell 20 February 2015 (has links)
Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-07T11:33:43Z
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Previous issue date: 2015-02-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Amphibian populations have declined in many areas of the world. These declines seem to have
worsened over the past 25 years and amphibians are now more threatened than other taxa, such
as mammals or birds. Numerous factors contribute to this decrease; however, environmental
pollution has recently been cited as a major factor. These vertebrates are important in natural
control of several pests in natural and agricultural areas, where they are constantly exposed to
large amounts of pesticides. Genotoxicity studies with amphibians are important to detect
indicator species of environmental change. Amphibians are particularly sensitive to these
variations due to their behavioral and physiological characteristics, such as, permeable skin
(cutaneous respiration), low mobility and life cycle with simultaneous dependence of the
aquatic and terrestrial environment. In this context, these animals could be used as bioindicators
of the environmental quality in genotoxicity and mutagenicity studies. The aim of this study
was to analyze the genomic damage in tadpoles of Dendropsophus minutus and Physalaemus
cuvieri sampled in perturbed and natural areas, by the comet assay and micronucleus test. We
found that the tadpoles of D. minutus and P. cuvieri collected in perturbed areas had the highest
extensions of DNA damage compared to the tadpoles of natural areas. Tadpoles sampled in
soybean crop areas had higher DNA damage, followed by those sampled in the cornfields. In
contrast, the frequency of DNA damage in tadpoles of natural areas were significantly lower in
relation to DNA damage suffered by tadpoles of agricultural areas. Thus, we can conclude that
tadpoles of D. minutus and P. cuvieri sampled in this study can be considered excellent sentinel
organisms, as they were sensitive to environmental changes. In addition, we can highlight the
advantages of using the comet assay in environmental genotoxicity studies, such as its speed,
high sensitivity in detecting DNA damage in the genome of amphibians, for a relatively low
cost. However, it is necessary to invest in the standardization of methodologies for field studies,
thus the results could be compared between different laboratories, and make environmental
genotoxicity studies, involving aquatic organisms, more informative and applicable as a
practical laboratory routine. / Populações de anfíbios tem diminuído em diversas áreas do mundo. Estes declínios têm se
agravado nos últimos 25 anos, fazendo com que esses animais sejam agora considerados mais
ameaçados do que outros táxons como por exemplo, mamíferos e aves. Numerosos fatores
contribuem para esse decréscimo, no entanto, a poluição do meio ambiente tem sido
recentemente citada como um dos principais fatores. Estes vertebrados são importantes no
controle natural de pragas em áreas naturais e agrícolas, onde estão constantemente expostos a
grandes quantidades de pesticidas. Estudos de genotoxicidade com anfíbios anuros se fazem
importantes para se detectar espécies indicadoras de mudanças ambientais. Os anfíbios são
particularmente sensíveis a essas variações devido às suas características comportamentais e
fisiológicas, tais como, pele permeável (respiração cutânea), pouca mobilidade e ciclo de vida
com dependência simultânea do ambiente aquático e terrestre. Neste contexto, estes animais
podem ser utilizados como bioindicadores da qualidade ambiental em estudos de
genotoxicidade e mutagenicidade. O objetivo deste estudo foi analisar os danos genômicos em
girinos de Dendropsophus minutus e Physalaemus cuvieri amostrados em áreas antropizadas e
naturais, via ensaio cometa e teste do micronúcleo. Os resultados deste estudo detectaram que
os girinos de D. minutus e P. cuvieri amostrados em áreas antropizadas apresentaram as maiores
extensões de danos genômicos quando comparados com os girinos de áreas naturais. Os girinos
coletados nas áreas de lavoura de soja tiveram maiores danos no DNA, seguidos daqueles
amostrados nas plantações de milho. Em contrapartida, a frequência de danos genômicos nos
girinos de áreas naturais foram significativamente menores em relação aos danos genômicos
sofridos pelos girinos das áreas agrícolas. Assim, pode se concluir que os girinos das espécies
D. minutus e P. cuvieri amostrados neste estudo podem ser consideradas excelentes
bioindicadores, uma vez que se mostraram sensíveis a alterações ambientais. Além disso, podese
ressaltar as vantagens de se utilizar o ensaio cometa em estudos de genotoxicidade ambiental,
como sua rapidez, alta sensibilidade em detectar danos no DNA no genoma de anfíbios, por um
custo relativamente baixo. No entanto faz-se necessário a normatização de uma metodologia
para estudos de campo, de forma que, os resultados possam ser comparados entre laboratórios
diferentes, tornando assim, os estudos de genotoxicidade ambiental envolvendo organismos
aquáticos mais informativos e aplicados como uma prática de rotina.
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Avaliação do potencial anticâncer in vitro de óleos essenciais de plantas do gênero EugeniaAranha, Elenn Suzany Pereira 15 April 2014 (has links)
Submitted by Kamila Costa (kamilavasconceloscosta@gmail.com) on 2015-07-23T20:59:50Z
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Previous issue date: 2014-04-15 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Cancer is one of the most causes of death in the world. The research of natural products is
strategy to develop anticancer agents. The aim this research was to identify chemical
components, to investigate the anticancer potential in vitro and genotoxicity of Eugenia
genus´s essential oil. For this, were used the cytotoxicity assay of Alamar blue and the
hemolytic potential in erythrocytes of mice, as initial screening for selection of samples with
cytotoxic potential, from the determination of the samples IC50. After the samples selection,
we attemped to evaluate anticancer effect of the essential oil and its genotoxicity. Nine
essential oils were tested, in a single concentration (50 μg/mL) which only two- Eugenia
cuspidifolia (1) e Eugenia tapacumensis (3)- were selected for later tests. The IC50, in 72
hours, obtained to these samples varied between 4,69 to 24,35 μg/mL and 6,22 to 26,17
μg/mL, respectively, among tumor cell lines. For non-tumor cell line, in 72 hours, the values
for the IC50 were 25,51 μg/mL to E. cuspidifolia and 36,12 μg/mL to E. tapacumensis besides
they didn´t cause hemolysis to mice erythrocytes. The species E. cuspidifolia and E.
tapacumensis were more active to colorectal line (HCT 116) and ovary (ES-2), and the HCT
116 line was chosen to be used for later tests, because it´s one of the most frequent kind of
cancer in diagnostics and in deaths worldwide at a world level . The chemical constitution of
E. cuspidifolia and E. tapacumensis essential oils was investigated through gas
chromatography. A total 26 constituents were identified for both samples. The majority
components were caryophyllene oxide, α-copaene, hepoxid of humulene II and cis-nerolidol.
The essential oils in concentrations 7,5, 15 and 30 μg/mL, were tested in the clonogenic assay
and they significantly reduced the number of colonies (p<0,05), in the 7,5 and 15 μg/mL
concentrations, when compared with DMSO (0,2%). In the wound-healing assay, 24 and 48
hours, the essential oils reduced the migration in vitro (p<0,05) only on the concentration 30
μg/mL, at 48h. The inhibitor potential of metalloproteinase MMP-2 and MMP-9 was
evaluated through of zymography method. In the results, the better inhibition effect was from
the E. tapacumensis essential oil, that reduced the enzymatic activity (p<0,05) in the
concentrations 15 and 30 μg/mL, in both treatments times (24 and 48h). Genotoxicity was
evaluated by comet assay, using two versions, alkaline pH, which detects any damage caused
to DNA, and neutral pH, specific to double-stranded breaks in DNA. Through damage index
analisis, the results in alkaline pH assay were similar to the neutral pH. Only E. tapacumensis
(30 μg/mL) caused damage DNA (p<0,05) in the alkaline version. At the neutral pH version,
all concentrations tested (p<0,05) caused DNA damage. Thus, is concluded that E.
cuspidifolia and E. tapacumensis essential oils are cytotoxic in tumor cell lines, and they have
anticancer potencial in HCT 116 cell line acting as cytotoxic and cytostatic depending on the
time and the tested concentration. Only E. tapacumensis is genotoxic, in non-tumor cell line,
however more specific studies are needed to determine whether this genotoxicity is reversible
or if the mechanism of cytotoxic action of essential oil is related to the cell DNA damage. / O câncer é uma das maiores causas de morte no mundo. A pesquisa de produtos naturais
constitui uma estratégia para o desenvolvimento de agentes anticancerígenos. Objetivou-se
nessa pesquisa identificar os componentes químicos, investigar o potencial anticâncer in vitro
e a genotoxicidade de óleos essenciais do gênero Eugenia. Para isso, foram utilizados os
ensaios de citotoxicidade do alamar blue e o potencial hemolítico em eritrócitos de
camundongos, como triagem inicial para a seleção das amostras com potencial citotóxico, a
partir da determinação da CI50 das amostras. Posteriormente a seleção das amostras, buscouse
avaliar o efeito anticâncer dos óleos essenciais e a sua genotoxicidade. Foram testados nove
óleos essenciais, em concentração única (50 μg/mL) dos quais apenas dois - Eugenia
cuspidifolia (1) e Eugenia tapacumensis (3)- foram selecionados para os testes posteriores. A
CI50, em 72 horas, obtida para essas duas amostras variou entre 4,69 a 24,35 μg/mL e 6,22 a
26,17 μg/mL, respectivamente, entre as linhagens tumorais. Para a linhagem não tumoral, em
72 horas, os valores de CI50 foram de 25,51μg/mL para E. cuspidifolia (1) e 36,12 μg/mL para
E. tapacumensis (3), além de não causarem hemólise a eritrócitos de camundongos. As
espécies E. cuspidifolia (1) e E. tapacumensis (3) foram mais ativas para as linhagens de
colorretal (HCT 116) e ovário (ES-2), e escolheu-se para os testes posteriores utilizar a
linhagem HCT 116, por ser um dos tipos de câncer mais frequentes em diagnósticos e
também em mortes a nível mundial. A constituição química dos óleos essenciais de E.
cuspidifolia (1) e E. tapacumensis (3) foi investigada através de cromatografia gasosa. Foram
identificados um total de 26 constituintes para as duas amostras. Os componentes majoritários
foram óxido de cariofileno, α-copaeno, hepóxido de humuleno II e cis-nerolidol. Os óleos nas
concentrações de 7,5, 15 e 30 μg/mL, foram testados no ensaio clonogênico e reduziram
significativamente o número de colônias (p<0,05) na concentração de 7,5 e 15 μg/mL,
quando comparado ao controle DMSO (0,2%). No ensaio de motilidade celular, nos tempos
de 24 e 48 horas, os óleos essencias reduziram a migração (p<0,05) somente na concentração
de 30 μg/mL, no tempo de 48h. O potencial inibidor de metaloproteinases MMP-9 e MMP-2
foi avaliado através de método zimográfico. Nos resultados obtidos, o melhor efeito inibitório
foi do óleo essencial de E. tapacumensis (3), o qual reduziu a atividade enzimática (p<0,05)
nas concentrações de 15 e 30 μg/mL, nos dois tempos de tratamento (24 e 48h). A
genotoxicidade foi avaliada pelo ensaio do cometa, usando duas versões, a de pH alcalino, o
qual detecta qualquer dano causado ao DNA, e a de pH neutro, específico para quebras da fita
dupla de DNA. Através da análise do Índice de dano, os resultados no ensaio em pH alcalino
foram semelhantes ao do pH neutro. Somente E. tapacumensis (3) (30 μg/mL) causou dano ao
DNA (p<0,05) na versão alcalina. Na versão em pH neutro todas as concentrações causaram
dano (p<0,05). Assim, conclui-se que os óleos essenciais de E. cuspidifolia (1) e E.
tapacumensis (3) são citotóxicos nas linhagens tumorais, tem potencial anticâncer na
linhagem HCT116 agindo como citotóxico e citostático dependendo do tempo e da
concentração testada e somente a E. tapacumensis (3) é genotóxica, em células não
neoplásicas, , entretanto estudos mais específicos precisam determinar se essa genotoxicidade
é reversível ou se o mecanismo de ação citotóxica do óleo está relacionada a lesão do DNA
das células.
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Avaliação de polimorfismos nos genes de reparo e detoxificação e a associação com o dano no DNA em etilistas / Evaluation of polymorphisms in the repair and detoxification genes and the association with DNA damage in alcoholicsMelo, Caroline Oliveira de Araújo 06 July 2017 (has links)
Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-08-08T11:37:43Z
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Previous issue date: 2017-07-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Alcohol abuse is related to approximately 3.3 million annual deaths worldwide and is considered the first risk factor for the global burden of disease in countries of the Americas. Long-term abuse of alcohol induces numerous molecular and biochemical changes in alcohol-related tissues. It is believed that the toxic effects of alcohol are mediated by DNA damage by several mechanisms, such as by the induction of oxidative damage, DNA adducts, crosslinks and DNA strand breaks. In this sense, the aim of this study was to verify the frequency of polymorphisms in the repair and detoxification genes and the association with the DNA damage in alcoholics. The analysis of the obtained results showed a greater genotoxic damage in the alcoholics, when carrying out the Comet Assay. A point of variation was found in the GSTP1 gene and another point of variation in the XRCC1 gene. However, no statistically significant differences were observed between GSTM1 and GSTT1 genotypes and genetic damage. In this context, it can be concluded that the Comet Assay is a very effective and inexpensive method for the analysis of genotoxic damage. / O consumo abusivo do álcool está relacionado a aproximadamente 3,3 milhões de mortes anuais em todo o mundo, sendo considerado o primeiro fator de risco para a carga global de doenças em países das Américas. O abuso da ingestão de álcool em longo prazo induz inúmeras alterações moleculares e bioquímicas nos tecidos relacionadas ao álcool. Acredita-se que os efeitos tóxicos do álcool sejam mediados por danos ao DNA por vários mecanismos, como pela indução dos danos oxidativos, pelos adutos de DNA, pelos crosslinks e pelas quebras de fitas de DNA. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi de verificar a frequência de polimorfismos nos genes de reparo
e detoxificação e a associação com o dano no DNA em etilistas. A análise dos resultados obtidos mostrou um maior dano genotóxico nos etilistas, ao realizar o Ensaio Cometa. Foi encontrado um ponto de variação no gene GSTP1 e um ponto de variação no gene XRCC1. No entanto, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os genótipos GSTM1 e GSTT1 e os danos genéticos. Nesse contexto, pode-se concluir que o Ensaio Cometa é um método bastante eficaz e barato para a análise de danos genotóxicos.
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Avaliação do dano genético em células sanguíneas de quirópteros de áreas urbanas e não urbanas / Evaluation of the DNA damage in Chiroptera blood cells from urban and non-urban areasAssunção, Dornelles 31 March 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-03-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The evaluation of DNA damage was carried out with the comet assay from blood samples of three
bat species sampled at municipal parks of Goiania and Cerrado remnants, located in rural areas of
the municipalities of Bela Vista and Urutaí, Goias state. The species sampled in the urban area
were Artibeus lituratus, Artibeus planirostris and Platyrrhinus lineatus. In non-urban areas, only
Artibeus planirostris was sampled. These frugivorous species are abundant and well adapted to
different environments, including urban and agricultural areas. The remaining vegetation of the
urban environment was very impacted and it was included in the most urbanized area of the city,
with heavy traffic of vehicles, large concentration of buildings and high population density.
Sampling in non-urban environments were held in Cerrado fragments in a rural area surrounded by
pasture and agricultural activities. Thus, the DNA damage found in the urban environment bats
were compared to verify whether there was significant variation among the parks, between species
and if weight influenced the variation of the DNA damage. The DNA damage obtained for A.
planirostris allowed to compare the urban and non-urban environment to identify in which of the
environments this species presented higher DNA damages. The results showed that in the nonurban environment, the DNA damage was higher than in the urban environment being statistically
significant. Moreover, in the urban environment, the increased DNA damage was associated with a
reduction in area of the parks. In general, in the urban environment, the DNA damage may be
linked indirectly to the edge effect and other environmental stressors, while in non-urban
environment, higher levels of DNA damage may be related to pesticides used in the agricultural
activities. / A avaliação do dano ao DNA em morcegos foi realizada com o ensaio cometa, a partir de amostras
sanguíneas coletadas de 3 espécies capturadas em parques municipais de Goiânia e remanescentes
de Cerrado situados na zona rural dos municípios de Bela Vista e Urutaí, ambos no Estado de
Goiás. As espécies amostradas na área urbana de Goiânia foram Artibeus lituratus, Artibeus
planirostris e Platyrrhinus lineatus. Nas áreas não urbanas, apenas Artibeus planirostris foi
amostrado. Estas espécies frugívoras são abundantes e bem adaptadas a diversos ambientes,
incluindo o meio urbano e regiões destinadas a agricultura. Os fragmentos vegetais remanescentes
amostrados no ambiente urbano estão bastante impactados e inseridos na região mais urbanizada
da cidade, com tráfego intenso de veículos, grande concentração de edifícios e densidade
populacional elevada. As amostragens em ambiente não urbano foram realizadas em fragmentos de
Cerrado na área rural, cercados por pastagem e atividades agrícolas. Dessa forma, foi comparado o
dano encontrado no DNA dos morcegos para verificar se no ambiente urbano o dano varia
significativamente entre os locais, entre as espécies e se o peso teria influência nessa variação. O
dano ao DNA da espécie A. planirostris foi comparado entre os ambientes urbano e não urbano,
para identificar em qual dos ambientes havia maiores índices de dano. Os resultados demonstraram
que no ambiente não urbano, o dano ao DNA foi mais elevado que no ambiente urbano, sendo
estatisticamente significativo. Além disso, no ambiente urbano, o aumento no dano ao DNA está
relacionado à redução na área dos parques. Dessa forma, no ambiente urbano, o dano ao DNA
parece estar associado ao efeito de borda e outros fatores estressores típicos desse ambiente,
enquanto no ambiente não urbano, os valores mais elevados de dano ao DNA podem estar
relacionados aos agrotóxicos e pesticidas utilizados nas atividades agrícolas.
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AvaliaÃÃo da Piscicultura em Esgoto DomÃstico Tratado: Aspectos ZootÃcnicos, Ambientais e de Qualidade do Pescado Produzido / Evaluation of treated domestic sewage in fish: aspects of husbandry, environmental and quality of fish produced.Cleto Augusto Baratta Monteiro 24 February 2011 (has links)
FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O aproveitamento de Ãguas residuÃrias à uma alternativa bastante difundida na atualidade, e uma das formas de reÃso à na atividade piscÃcola, considerando-se que os efluentes das EstaÃÃes de Tratamento de Esgotos sÃo fontes ricas em nutrientes que podem ser aproveitados pelos peixes. Entretanto, algumas restriÃÃes se apresentam com relaÃÃo à qualidade dos animais para aproveitamento na alimentaÃÃo humana. Dessa forma, essa pesquisa foi realizada utilizando esgotos domÃsticos tratados, na criaÃÃo de tilÃpias do Nilo, Oreochromis niloticus, observando-se os aspectos zootÃcnicos, toxicolÃgicos do ambiente de cultivo, bem como condicionantes qualitativos sanitÃrios, nutricional, e de aceitabilidade do pescado produzido. A unidade experimental foi implantada em Ãrea adjacente à EstaÃÃo de Tratamento de Esgotos (lagoas de estabilizaÃÃo), da zona leste de Teresina-Pi, com dezoito tanques de fibra de vidro, dispostos em trÃs (03) tratamentos com seis (06) repetiÃÃes (3X6). O tratamento T-01 foi abastecido somente com Ãgua tratada e forneceu-se raÃÃo industrializada; o tratamento T-02 recebeu esgoto tratado da lagoa de maturaÃÃo, sem suprimento adicional de raÃÃo ou oxigÃnio, e o tratamento T-03 foi abastecido com o mesmo efluente sem fornecimento de raÃÃo, mas, recebeu aeraÃÃo suplementar. Durante o ciclo experimental, foi realizada a renovaÃÃo diÃria de 15% do volume de Ãgua armazenado nos tanques experimentais, para reposiÃÃo de nutrientes e limpeza. Nos tanques foram estocados alevinos de tilÃpias, revertidos sexualmente para machos em lotes de 10 indivÃduos por tanque (aproximadamente 03 alevinos /mÂ). Foram analisados os principais parÃmetros de qualidade da Ãgua e do esgoto, que abastece os tanques, com especial destaque para as anÃlises destinadas ao monitoramento da piscicultura. Para verificaÃÃo da capacidade produtiva do ambiente de cultivo, foram avaliados os parÃmetros zootÃcnicos, tais como: crescimento, ganho de peso, produtividade e conversÃo alimentar aparente. TambÃm foram realizados os testes microbiolÃgicos, de genotoxicidade (micronÃcleos), de aceitabilidade e preferÃncia (anÃlise sensorial), alÃm do Ãndice do rigor mortis (IRM) e da Bioimpedancia. Este conjunto de testes foi utilizado para identificar o nÃvel de qualidade do pescado. Os indivÃduos submetidos ao tratamento T-01 (produtividade de 118,14 kg/ha.dia), tiveram o melhor desempenho zootÃcnico, seguido dos peixes do T-03 (produtividade de 48,61kg/ha.dia), e com o pior resultado ficou o grupo do tratamento T-02 (produtividade de 34,90 kg/ha.dia). Entretanto, nos testes que aferiram a qualidade sanitÃria do pescado e a palatabilidade nÃo foram registradas diferenÃas significativas. Conclui-se que a piscicultura com esgoto domÃstico tratado em lagoas de estabilizaÃÃo à viÃvel, mas, ainda sÃo necessÃrios novos estudos para o desenvolvimento desta prÃtica. / The use of wastewater is an alternative widespread nowadays. One way to reuse it in fish activity, considering that the effluent from Sewage Treatment Stations, are rich sources of nutrients that could be used by fish. However, some restrictions arise regarding the quality of animals for use in human diet. Thus, this research was conducted using treated sewage, to raise Nile tilapia (Oreochromis niloticus), observing zootechnical aspects, toxicology of the culture environment, as well as qualitative sanitary conditions, nutrition, and acceptability of fish produced. The experimental unit was deployed in an area adjacent to the Sewage Treatment Station (stabilization ponds), at the east side of Teresina-PI, with eighteen of fiberglass tanks, arranged in three treatments with six repetitions. Treatment T-01 was supplied only with treated water and industrial fish feed; treatment T-02 received treated sewage from the maturation pond, without additional supply of feed or oxygen, and treatment T-03 was stocked with the same sewage effluent without feed, but received supplemental aeration. During the experimental cycle, we performed a daily renewal of 15% of the volume of water stored in experimental tanks for nutrient replacement and cleaning. In ponds stocked fingerlings of tilapia, sexually reversed for males in batches of 10 individuals per tank (about 03 fingerlings / mÂ). We analyzed the main parameters of water quality and sewage, fueling the tanks, with special emphasis on tests for monitoring of fish farming. To verify the productive capacity of the culture environment, we assessed the growth parameters such as growth, weight gain, feed conversion and productivity. Were also conducted microbiological testing of genotoxicity (micronuclei), acceptability and preference (sensory analysis), and the level of rigor mortis (MRI) and bioimpedance. This set of tests was used to identify the level of fish quality. Individuals undergoing treatment T-01 (productivity 118,14 kg/ha.day), had the best performance, followed of treatment T-03 (productivity 48,61kg/ha.day), and T-02 (productivity 34,90 kg/ha.day). However in tests that assessed the quality, fish health and the flavor, there was not significant difference. It is concluded that the fish farming with treated domestic sewage in stabilization ponds, it is feasible. But new studies are still needed for development of the practice.
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Estudo das alteraÃÃes hematolÃgicas, bioquÃmicas e genotÃxicas induzidas por agrotÃxicos em agricultores do estado do Piauà / STUDY OF POSSIBLE GENETIC CHANGES INDUCED BY PESTICIDES IN FARMERS IN THE STATE OF PIAUÃTatiana Vieira Souza Chaves 26 September 2011 (has links)
nÃo hà / A exposiÃÃo aos agrotÃxicos representa um risco em potencial para a saÃde humana. AlÃm das intoxicaÃÃes, estes compostos podem interagir com o DNA, causando doenÃas degenerativas e cÃncer. A avaliaÃÃo de riscos aos agrotÃxicos foi realizada em 97 agricultores dos municÃpios de Picos, Piripiri, Barras e Josà de Freitas, tendo como grupo nÃo exposto 55 trabalhadores administrativos da capital, Teresina, como uma proposta de continuidade dos estudos anteriormente realizados nos municÃpios: Baixa Grande do Ribeiro, Ribeiro GonÃalves e UruÃuÃ, regiÃo sul do PiauÃ. O objetivo desta pesquisa foi avaliar os possÃveis efeitos tÃxicos e genotÃxicos/mutagÃnicos da exposiÃÃo ocupacional Ãs misturas complexas de agrotÃxicos, com o uso de biomarcadores hematolÃgicos, enzimÃticos e genotÃxicos/mutagÃnicos. Aplicou-se um questionÃrio recomendado pela International Comission for Protection Against Environmental Mutagens and Carcinogens-ICPEMC, e coletou-se material biolÃgico, para as anÃlises hematolÃgicas, bioquÃmicas, genotÃxicas e mutagÃnicas. A populaÃÃo exposta aos agrotÃxicos apresentou uma mÃdia de idade de 40,37 anos e tempo de trabalho de 19,32 anos, com carga horÃria de 41,38 h/semanas e apenas 50,5% usam EPIs, e 33% sÃo fumantes; 59,8% consomem Ãlcool; 34% utilizam medicamentos prescritos; 54,6% foram vacinados nos Ãltimos 6 meses; 68% nÃo consomem vegetais, e 96,9% comem carne. Os agricultores utilizam 13 diferentes tipos de ingredientes ativos, sendo 53,5% de herbicidas. Quanto aos parÃmetros hematolÃgicos apenas 39% apresentaram leucopenia e 10% diminuiÃÃo na sÃrie vermelha. Quanto as variÃveis bioquÃmicas: ureia, proteÃnas totais e fraÃÃes, Gama GT nÃo ocorreram alteraÃÃes significantes, entretanto nas dosagens de creatinina, TGO, TGP e fosfatase alcalina, houve significÃncia (p< 0,05) em relaÃÃo ao grupo controle. Foi observado para a butilcolinesterase inibiÃÃo no percentual de cerca de 4%, dado nÃo significante. Foi evidenciada genotoxicidade nos agricultores expostos pelo significante (p < 0,001) aumento do Ãndice de Dano (45,85 vs 12,51) e FrequÃncia de Dano (29,41 vs 9,98), em mucosa bucal, e em linfÃcitos com Ãndice de Dano (33,27 vs 10,12) e FrequÃncia de Dano (21,44 vs 9,38), avaliados pelo teste do cometa. A avaliaÃÃo mutagÃnica pelo aumento do nÃmero (4,95  2,81 vs 0,72  1,20) e frequÃncia (0,24  0,14 vs 0,03  0,06) de MN em mucosa bucal foi estatisticamente significante (p< 0,001) nos expostos em relaÃÃo aos nÃo expostos. A mutagenicidade em linfÃcitos avaliados com o teste de MicronÃcleo (MN) com bloqueio de citocinese foi significante (p< 0,01) nos agricultores expostos (9,38 Â1,05), em relaÃÃo ao nÃo exposto (5,50  0,84). Aumento significante (p<0,001) do percentual de aberraÃÃes cromossÃmicas dos expostos em relaÃÃo aos nÃo expostos 3,24  0,44 vs. 0,40  0,07) foram observados, com significÃncia (p<0,001) para os tipos de AC: cromossomos dicÃntricos, anÃis, tricÃntricos, anel acÃntrico, deleÃÃo terminal, deleÃÃo intersticial. Indicativo significante (p<0,001) para apoptose foi encontrado em cÃlulas de mucosa bucal e em linfÃcito, com bloqueio de citocinese. CorrelaÃÃes positivas significantes (p<0,01; p<0,05) de danos ao DNA, em cÃlulas de mucosa bucal foram evidenciadas para idade, tabagismo, etilismo e tempo de trabalho, no entanto, essas correlaÃÃes nÃo foram observadas para a os micronÃcleos. Em cÃlulas de mucosa bucal a apoptose e cÃlulas binucleadas foram significantemente (p<0,01) correlacionadas com a idade do trabalhador. Em relaÃÃo aos MN em linfÃcitos, percentual de AC e apoptose foram observadas correlaÃÃes positivas com o etilismo (p<0,01). MN em linfÃcitos foi correlacionado de maneira significativa (p<0,05) com o baixo consumo de micronutrientes e com o uso de EPI. Os parÃmetros de genotoxicidade e de mutagenicidade foram indicativos de instabilidade genÃtica, que podem sugerir riscos de neoplasias. Assim, se faz necessÃrio o biomonitoramento desses agricultores, como uma estratÃgia de vigilÃncia em saÃde, com prevenÃÃo e promoÃÃo da saÃde ocupacional no Estado do PiauÃ. / Exposure to pesticides represents a potential risk to human health. In addition to poisoning, these compounds may interact with DNA, causing degenerative diseases, including cancer. The risk assessment for pesticides was conducted in the municipalities of Picos, Piripiri, Barras and Josà de Freitas with farm workers (exposed group) and 55 administrative officers from Teresina (Capital) as unexposed group. It was as a proposal for the continuation of studies previously performed in other cities of Piauà (Baixa Grande do Ribeiro, Ribeiro GonÃalves and UruÃuÃ). The purpose of this study was to evaluate the toxicity and genotoxicity/mutagenicity effects of occupational exposure to complex mixtures of pesticides by using hematologic, enzymatic and genotoxic/mutagenic biomarkers. Initially, a questionnaire recommended by the International Commission for Protection Against Environmental Mutagens and Carcinogens-ICPEMC was applied, then biological material was collected for the hematological, biochemical, genotoxic and mutagenic analysis.The population exposed to pesticides (n = 97) had a mean age of 40.37 years and a mean working time of 19.32 years, with a schedule of 41.38 hours per week. 50.5% of the farmers use personal protective equipment (PPE). About their lifestyle, 33% were smokers; 59.8% consume alcohol; 34% use prescription drugs; 54.6% were vaccinated in the last 6 months; 68% do not consume vegetables, and 96.9% eat meat. They use 13 different types of active ingredients, 53.5% are herbicides. As for hematological parameters of the 97 workers exposed, only 39% presented leucopenia, and only 10% presented low red blood cell count. The biochemical variables: urea, total proteins and fractions, Gamma GT, there were no significant changes. However, the dosages of creatinine, AST, ALT and alkaline phosphatase, showed significant changes (p <0.05) compared to the control group. It was also observed that butilcolinesterase inhibition was a non-significant data. Genotoxicity was observed on the exposed farmers (p <0.001), as seen in the damage index (45.85 vs 12.51) and the damage frequency (29.41 vs. 9.98) in exfoliated cells. We found a high damage index (33.27 vs. 10.12) and frequency of damage (21.44 vs. 9.38) in the lymphocytes of the exposed farmers, when assessed by the comet test. The mutagenic evaluation by the increase of micronuclei (MN) in oral mucosa was also statistically significant (p <0.001) in the exposed farmers (4.95  2.81) compared to those not exposed (0.72  1.20), as well as the increase in the frequency of MN (0.24  0.14 vs. 0.03  0.06). Similarly, mutagenicity in the lymphocytes evaluated by the MN test with cytokinesis block was observed (p <0.01) in the farmers (p <0.001) when compared to the unexposed group (9.38  1.05 vs. 5.50  0.84). Significant increase (p <0.001) in the percentage of chromosomal aberrations (CA) in exposed workers compared to the unexposed (3.24  0.44. vs. 0.40  0.07) were observed, with significance (p <0.001) for the types of AC: dicentric chromosomes, rings, tricentrics, acentric ring, terminal deletion and interstitial deletion. Significant evidence (p <0.001) for apoptosis was found in oral mucosa cells and lymphocytes, with cytokinesis blocking. Positive correlations (p <0.01, p <0.05) of DNA damage in oral mucosa cells were found for age, smoking, drinking and working time. However, these correlations were not observed for the micronuclei. In oral mucosa cells, apoptosis and binucleated cells were significantly (p <0.01) correlated with the age of the worker. Regarding the MN in lymphocytes, the percentage of AC and apoptosis, positive correlations with the alcohol consumption (p <0.01) was observed. MN in lymphocytes was also significantly correlated (p <0.05) with the low intake of micronutrients and the use of PPE. The parameters of genotoxicity and mutagenicity were indicative of genetic instability, which may suggest the risk of cancer. Thus, the biomonitoring of these farmers is necessary as a strategy for health surveillance, prevention and promotion of occupational health in the state of Piaui.
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O ensaio cometa e a espécie Hypsiboas albopunctatus (Spix, 1824) como ferramentas de avaliação de qualidade ambiental em uma unidade de conservação federal inserida no Cerrado goianoVieira, Tiago Quaggio 31 March 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-03-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / A região Sudoeste do estado de Goiás, originalmente coberta pelo Cerrado, é hoje caracterizada pela presença de grandes propriedades rurais produtoras de algodão, soja e milho. As monoculturas, em especial as de grãos, causam sérios impactos ao meio ambiente: empobrecimento e dano genômico, erosão do solo, contaminação por agrotóxicos, compactação do solo, queimadas e desmatamento. O último grande remanescente de vegetação nativa de Cerrado na região está protegido pelo Parque Nacional das Emas, que possui uma área de 132 mil hectares. A proposta deste estudo é avaliar o dano no DNA em girinos de Hypsiboas albopunctatus submetidos a diferentes níveis de exposição às pressões antrópicas do sistema de produção agrícola predominante na região. Tal avaliação foi realizada por meio de ensaio cometa, a partir de amostras sanguíneas obtidas desses girinos, coletados no Parque Nacional das Emas e entorno, tais coletas foram feitas ao longo do primeiro trimestre de 2016. Essa espécie de anuro possui ampla distribuição geográfica e é considerada abundante, características importantes para eleger um organismo como bioindicador de qualidade ambiental. As amostras foram coletadas em ambiente de veredas, com solo encharcado e presença de poças temporárias e permanentes. A amostragem foi dividida em dois tipos de ambiente: a) dentro do Parque Nacional, onde os impactos antrópicos são significativamente menores, não havendo pulverização direta de agrotóxicos ou qualquer tipo de alteração física da paisagem natural, e, b) fora dos limites da unidade de conservação, onde a vegetação nativa foi quase totalmente suprimida e a exposição direta a agrotóxicos é frequente. Dessa forma foi comparado o DNA dos girinos por meio de ensaio cometa, para verificar se no ambiente protegido do Parque Nacional das Emas o dano no material genético difere significativamente em relação ao ambiente antropizado, externo à Unidade de Conservação. Após a realização das análises foi possível constatar que o dano encontrado no DNA de girinos da espécie Hypsiboas albopunctatus foi maior nas amostras provenientes de áreas externas ao parque, intermediário nas áreas internas mais próximas da borda do Parque Nacional das Emas e reduzidos nas áreas centrais e mais próximas do centroide, corroborando a hipótese de que os impactos intermediate in the internal areas closer to the edge of the Emas National Park and reduced in the central areas and closer to the centroid, corroborating the hypothesis that environmental impacts, which are severe outside the protected area boundaries, would have a detrimental effect on biodiversity, including at the molecular level. / A região Sudoeste do estado de Goiás, originalmente coberta pelo Cerrado, é hoje caracterizada pela presença de grandes propriedades rurais produtoras de algodão, soja e milho. As monoculturas, em especial as de grãos, causam sérios impactos ao meio ambiente: empobrecimento e dano genômico, erosão do solo, contaminação por agrotóxicos, compactação do solo, queimadas e desmatamento. O último grande remanescente de vegetação nativa de Cerrado na região está protegido pelo Parque Nacional das Emas, que possui uma área de 132 mil hectares. A proposta deste estudo é avaliar o dano no DNA em girinos de Hypsiboas albopunctatus submetidos a diferentes níveis de exposição às pressões antrópicas do sistema de produção agrícola predominante na região. Tal avaliação foi realizada por meio de ensaio cometa, a partir de amostras sanguíneas obtidas desses girinos, coletados no Parque Nacional das Emas e entorno, tais coletas foram feitas ao longo do primeiro trimestre de 2016. Essa espécie de anuro possui ampla distribuição geográfica e é considerada abundante, características importantes para eleger um organismo como bioindicador de qualidade ambiental. As amostras foram coletadas em ambiente de veredas, com solo encharcado e presença de poças temporárias e permanentes. A amostragem foi dividida em dois tipos de ambiente: a) dentro do Parque Nacional, onde os impactos antrópicos são significativamente menores, não havendo pulverização direta de agrotóxicos ou qualquer tipo de alteração física da paisagem natural, e, b) fora dos limites da unidade de conservação, onde a vegetação nativa foi quase totalmente suprimida e a exposição direta a agrotóxicos é frequente. Dessa forma foi comparado o DNA dos girinos por meio de ensaio cometa, para verificar se no ambiente protegido do Parque Nacional das Emas o dano no material genético difere significativamente em relação ao ambiente antropizado, externo à Unidade de Conservação. Após a realização das análises foi possível constatar que o dano encontrado no DNA de girinos da espécie Hypsiboas albopunctatus foi maior nas amostras provenientes de áreas externas ao parque, intermediário nas áreas internas mais próximas da borda do Parque Nacional das Emas e reduzidos nas áreas centrais e mais próximas do centroide, corroborando a hipótese de que os impactos intermediate in the internal areas closer to the edge of the Emas National Park and reduced in the central areas and closer to the centroid, corroborating the hypothesis that environmental impacts, which are severe outside the protected area boundaries, would have a detrimental effect on biodiversity, including at the molecular level.
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Avaliação de uma preparação hidrossolúvel de curcumina sobre a toxicidade induzida pelo quimioterápico cisplatina: possíveis efeitos protetores in vitro e in vivo, e identificação de alterações na expressão do gene Tp53 / Evaluation of a water-soluble curcumin formulation against toxicity induced by antineoplasic drug cisplatin: the possible protective effects in vitro and in vivo, and modulation of Tp53 gene expressionLeonardo Meneghin Mendonça 30 November 2012 (has links)
A curcumina é um pigmento amarelo encontrado no rizoma da planta Curcuma longa Linn. que possui propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias e anticâncer. Embora tenha um grande potencial terapêutico, sua aplicação clínica é limitada pelas baixas concentrações plasmáticas obtidas após administração oral. A cisplatina é um agente quimioterápico utilizado no tratamento de vários tipos de cânceres, entretanto é inerente o desenvolvimento de sérios efeitos adversos. Seu principal mecanismo de ação em células tumorais envolve a interação direta com o DNA e formação de crosslinks, levando a célula a parada do ciclo celular e apoptose pela ativação da proteína p53. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito protetor da curcumina hidrossolúvel formulada na dispersão sólida curcumina/gelucire®50-13/aerosil® (curcumina DS) sobre a citotoxicidade, neurotoxicidade e genotoxicidade da cisplatina in vitro e in vivo, além da sua possível interferência na eficácia antitumoral da cisplatina in vitro. Os estudos in vitro foram realizados no modelo de neurotoxicidade em células PC12 e em células tumorais HepG2, derivadas de um hepatocarcinoma humano. Os experimentos in vivo foram realizados em ratos Wistar, comparando a absorção gastrintestinal e os efeitos da curcumina DS e da curcumina padrão. Nos estudos in vitro a curcumina DS reduziu a neurotoxicidade da cisplatina no ensaio de crescimento de neuritos. A expressão do gene Tp53 nas células PC12 não foi modulada pela curcumina DS. Na linhagem celular tumoral HepG2, a curcumina DS não reduziu a citotoxicidade da cisplatina. Os resultados dos experimentos in vivo mostraram que curcumina DS e a curcumina padrão reduziram significativamente a formação de micronúcleos induzidos pela cisplatina na medula óssea, porém, no ensaio do cometa, não alteraram a formação de crosslinks induzidos pela cisplatina no tecido renal. A curcumina DS e a curcumina padrão não modularam o estresse oxidativo e a expressão do gene Tp53 no tecido renal. Nossos resultados sugerem que a curcumina não interfere na atividade antitumoral da cisplatina, uma vez que a curcumina não reduziu a citotoxicidade da cisplatina nas células HepG2, e nem a expressão do gene Tp53 nas células PC12 e no tecido renal. Além disso, os resultados obtidos no ensaio do cometa mostraram que a curcumina não reduziu a formação de crosslinks platina-DNA, o principal mecanismo de citotoxicidade da cisplatina. A formulação da curcumina em dispersão sólida aumentou significativamente a sua biodisponibilidade, além de não apresentar redução dos efeitos antimutagênicos em relação à curcumina padrão. Os efeitos protetores da curcumina DS, como a redução da neurotoxicidade e mutagenicidade induzida pela cisplatina, poderia trazer benefícios à quimioterapia, possibilitando uma terapia mais eficaz e melhor qualidade de vida aos pacientes. Os resultados sugerem que os efeitos protetores da curcumina poderiam ser seletivos às células sadias, não reduzindo os efeitos da cisplatina em células tumorais. / Curcumin is a yellow pigment derived from the rhizome of Curcuma longa Linn. Its pharmacological effects include antioxidant, anti-inflammatory, and anti-cancer properties. Although curcumin possesses great therapeutic potential, its low oral bioavailability limits therapeutic application. Cisplatin is a chemotherapeutic drug with activity against a wide variety of tumors; however, it has notorious side effects. Its main mechanism of action in tumor cells involves direct interaction with DNA and formation of crosslinks, leading the cells to a cycle arrest and apoptosis through activation of p53. This study\'s aim was to evaluate the protective effects of watersoluble curcumin, which was formulated in a solid dispersion consisting of curcumin/gelucire®50-13/aerosil® (curcumin DS), on the cytotoxicity, neurotoxicity, and genotoxicity of cisplatin in vitro and in vivo beyond its possible interference in the antitumor efficacy of cisplatin in vitro. In vitro studies were performed on the model of neurotoxicity in PC12 cells and in HepG2 tumor cells derived from a human hepatocarcinoma. The in vivo experiments were performed on Wistar rats, comparing gastrointestinal absorption and the effects of curcumin DS and standard curcumin. In the in vitro studies, curcumin DS reduced neurotoxicity of cisplatin in the neurite outgrowth assay. Tp53 gene expression in PC12 cells was not modulated by curcumin DS. In the tumor cell line HepG2, curcumin DS did not reduce the cytotoxicity of cisplatin. Results of in vivo experiments showed that curcumin DS and standard curcumin significantly reduced micronucleus formation induced by cisplatin in bone marrow. However, on the comet assay, it did not affect the formation of crosslinks induced by cisplatin on renal tissue. Curcumin DS and standard curcumin did not modulate oxidative stress or the expression of the Tp53 gene in renal tissue. Our results suggest that curcumin DS does not compromise the antitumor activity of cisplatin, since curcumin did not reduced the cytotoxicity of cisplatin in HepG2 cells nor Tp53 gene expression in PC12 cells or in renal tissue. Furthermore, the results of the comet assay suggest that curcumin did not reduce the formation of platinum-DNA crosslinks, the major mechanism of cisplatin cytotoxicity. The formulation of curcumin in solid dispersion significantly increased its bioavailability and did not reduced its antimutagenic effect compared to standard curcumin. The protective effects of curcumin DS, such as reducing neurotoxicity and mutagenicity induced by cisplatin, could provide benefits to chemotherapy, including more effective therapy and improved quality of life. The findings suggest that the protective effects of curcumin could be selective to healthy cells without compromising the effects of cisplatin in tumor cells.
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