Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-03-15T13:05:33Z No. of bitstreams: 1 PATRICIA_FERNANDA_DASILVA_VILCHES_DIS.pdf: 1829625 bytes, checksum: d4b53df7fed69d5202d5bafec96aaa13 (MD5) / Approved for entry into archive by Tatiana Lopes (tatiana.lopes@pucrs.br) on 2018-03-23T12:17:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PATRICIA_FERNANDA_DASILVA_VILCHES_DIS.pdf: 1829625 bytes, checksum: d4b53df7fed69d5202d5bafec96aaa13 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-23T12:22:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PATRICIA_FERNANDA_DASILVA_VILCHES_DIS.pdf: 1829625 bytes, checksum: d4b53df7fed69d5202d5bafec96aaa13 (MD5) Previous issue date: 2017-03-30 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Potatoes (Solanum tuberosum L.) are the third most consumed crop in the world, after rice and wheat. Among the diseases affecting potato, the blackleg and tuber soft rot, caused by phytobacteria Pectobacterium spp., lead to significant losses in the yield crop. Several studies have been exploring the use of plant defense inducers as a strategy to control plant diseases. The use of plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR) in agriculture can lead to plant growth and enhancement of plant defense through the promotion of induced systemic resistance (ISR). However, the mechanisms involved in promoting ISR are still poorly understood. This study aimed to screen rhizobacteria of the genus Streptomyces with capacity to promote plant growth and induce Solanum tuberosum innate immunity. To achieve these objectives, we evaluated: i) the ability of Streptomyces isolates to produce auxin (3-indoleacetic acid), ACC deaminase (1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid deaminase) and siderophores; ii) their capacity to promote the growth of potato plants; iii) the induction of resistance in potato plants challenged with Pectobacterium carotovorum subsp. brasiliensis and iv) the expression of genes related to defense pathways in S. tuberosum, promoted by Streptomyces and P. carotovorum. Results indicated that the CLV163 isolate presents PGPR features, such as high auxin and siderophores production, and promoted plant defense against P. carotovorum. Although CLV145 showed the highest auxin and siderophores production, it reduced the shoot dry mass and was inefficient in promoting plant defense. Moreover, the ability of Streptomyces in producing ACC deaminase was not critical for promoting plant growth. The CLV163 isolate induced a priming state in potato plants that has occurred through the activation of the AS and ET pathways, and its interaction with S. tuberosum plants did not impair the plant growth. / A batata (Solanum tuberosum L.) ? a terceira cultura agr?cola mais consumida no mundo, ficando atr?s somente do arroz e do trigo. Dentre as diversas doen?as que afetam esta cultura, a canela-preta e a podrid?o-mole, causadas pela fitobact?ria Pectobacterium spp., levam a importantes perdas na produ??o. Neste contexto, v?rios trabalhos v?m explorando o uso de indutores da defesa vegetal como estrat?gia para o controle de doen?as. O uso de rizobact?rias promotoras do crescimento vegetal (PGPR) na agricultura pode promover tanto o crescimento quanto o aumento da defesa das plantas atrav?s da indu??o da resist?ncia sist?mica induzida (ISR). Contudo, ainda s?o pouco conhecidos os mecanismos envolvidos na promo??o da ISR. Este estudo visou selecionar rizobact?rias do g?nero Streptomyces com caracter?sticas de promotoras de crescimento e indutoras da imunidade inata de Solanum tuberosum. Para tanto, foram avaliadas: i) a capacidade de isolados de Streptomyces produzirem auxina (?cido 3- indolac?tico), ACC desaminase (?cido 1-aminociclopropano-1-carbox?lico desaminase) e sider?foros; ii) a capacidade destas rizobact?rias em promover o crescimento das plantas; iii) a promo??o da resist?ncia em plantas de batata desafiadas com Pectobacterium carotovorum subsp. brasiliensis e iv) a express?o de genes relacionados a vias de sinaliza??o de respostas de defesa em S. tuberosum, promovida por Streptomyces sp e a fitobact?ria P. carotovorum. Os resultados indicam que o isolado CLV163 apresenta caracter?sticas de PGPR, sendo capaz de produzir auxina e sider?foros, al?m de promover o aumento da resist?ncia das plantas contra P. carotovorum. Contudo, a rizobact?ria CLV145, com a maior produ??o de auxina e sider?foros, causou a diminui??o da mat?ria seca de parte a?rea e n?o promoveu a defesa das plantas. A capacidade dos Streptomyces em produzirem ACC desaminase n?o foi determinante para a promo??o de crescimento vegetal. O isolado CLV163 induziu um estado de priming nas plantas de S. tuberosum L. atrav?s da ativa??o das vias do AS e ET e a sua intera??o com as plantas de batata n?o comprometeu o crescimento vegetal.

A administração do LPS de Escheria coli gera resposta imunológica e endócrina, como a produção de citocinas pró-inflamatórias, produção de prostaglandinas. Além disso, a endotoxemia promove mudanças neuro-endócrinas, como alterações no metabolismo da noradrenalina e serotonina no cérebro além da ativação do eixo HPA provocando comportamento doentio evidenciado por quadros de redução da capacidade exploratória e locomotora, anorexia, pirexia, anedonia, sonolência, redução do comportamento social e sexual, comportamento semelhante à ansiedade e depressão. Já foi demonstrado na literatura que endotoxemia é capaz de provocar hipotermia em animais prenhes além de apresentar significativa taxa de aborto e falhas gestacionais. Além disso, foi evidenciado também que fêmeas gestantes também apresentam o comportamento doentio diante da administração do LPS com mudanças nos componentes da interface materno-fetal importantes para o estabelecimento da homeostase uterina. Como a ativação do eixo HPA é uma das respostas mais proeminentes da endotoxemia, o presente estudo investigou a interferência de glicocorticoides no comportamento doentio em fêmeas prenhes. Para tanto, foi utilizado glicocorticoide exógeno, a dexametasona, bem como, inibidores da síntese de glicocorticoide, metirapona e mifepristone. A metirapona é um inibidor da enzima 11-β-hidroxilase, a qual inibe o passo final de precursores da corticosterona. A mifepristone é um antagonista de receptores de glicocorticoide e ligante de receptores de progesterona. Fêmeas de camundongos SWISS no 10º dia de gestação foram pré-tratadas com as referidas drogas, 30 minutos antes do tratamento com LPS. Após duas horas, a temperatura retal foi aferida e foram realizados testes comportamentais a fim de investigar comportamentos semelhante à ansiedade, depressão, além de observar a capacidade exploratória e retenção de informações a curto prazo. A viabilidade gestacional também foi averiguada observando, para isso, o número de filhotes nascidos por ninhada. Foi observado que o tratamento com LPS provocou hipotermia nos animais prenhes sendo que o pré-tratamento com dexametasona foi o único capaz de evitar tal efeito através da redução da síntese de TNF-α. Tais achados fornecem indícios para o uso da dexametasona como antipirético em quadros de endotoxemia durante a gestação. Além disso, foi observado que o tratamento com LPS, independente do pré-tratamento utilizado, provocou um comportamento doentio evidenciado pela redução da capacidade exploratória e locomotora nos animais prenhes submetidos aos testes comportamentais. Os presentes achados comportamentais vão de encontro com a vasta literatura, indicando, adicionalmente, que o comportamento doentio é dependente de citocina pró-inflamatória e que o pré-tratamento com glicocorticoide ou inibidores de sua síntese não são capazes de prevenir o comportamento doentio. O pré-tratamento com metirapona foi o único capaz de evitar o aborto causado pelo LPS através da elevação dos níveis plasmáticos de progesterona, a qual, por sua vez, protege o feto contra ataques imunológicos maternos durante a gestação e assegura o parto. Desse modo, a metirapona pode ser usada a fim de prevenir abortos imunológicos provocados pela administração do LPS. Tais achados são significativos a fim de evitar perdas gestacionais provocadas pela endotoxemia evidenciando a metirapona como importante agente farmacológico. O pré-tratamento com mifepristone, com ou sem exposição ao LPS, provocou perda total da gestação. Tais achados vão de encontro com a literatura científica e caracterizam a mifepristone como potente agente abortivo capaz de interromper a gestação mesmo quando administrado após o período de implantação embrionária. / Administration of LPS from Escherichia coli generates endocrine and immune response, such as the production of proinflammatory cytokines and prostaglandin production. Furthermore, endotoxemia promotes neuroendocrine changes such as alteration on the metabolism of norepinephrine and serotonin in the brain beyond the activation of HPA axis resulting in sickness behavior evidenced by the reduction of exploratory locomotor ability and anorexia, pyrexia, anhedonia, drowsiness, reduction behavior social and sexual behavior similar to anxiety and depression. Has been shown in the literature that endotoxemia is able to cause hypothermia in pregnant animals as well as presenting significant abortion and pregnancy failure. In addition, it has been shown that pregnant animals also exhibit the sickness behavior in response to LPS administration with important changes in the components of the maternal-fetal interface for establishing uterine homeostasis. Since the activation of the HPA axis is one of the most prominent responses of endotoxemia, the present study investigated the interference of glucocorticoids in sickness behavior in pregnant females. For this purpose, we used exogenous glucocorticoid, dexamethasone, as well as glucocorticoid synthesis inhibitors, metyrapone and mifepristone. The metyrapone is an inhibitor of the enzyme 11-β-hydroxylase, which inhibits the last step of precursors of corticosterone. The mifepristone is an antagonist of glucocorticoid receptors, and progesterone receptor binding. SWISS female mice at 10th day of pregnancy were pre-treated with said drug, 30 minutes before the LPS treatment. Two hours after, the rectal temperature was measured and behavioral tests were performed to investigate the behavior like anxiety, depression, addition to observing the exploratory ability and short-term information retention. Gestational viability was also investigated observing, for this, the number of pups born per litter. It was observed that the treatment with LPS caused hypothermia in pregnant animals and that pretreatment with dexamethasone was the only one able to avoid this effect by reducing TNF-α synthesis. These findings provide evidence for use of dexamethasone as an antipyretic in endotoxemia frames during pregnancy. Furthermore, was noted that the LPS treatment, regardless of pretreatment employed provoked sickness behavior evidenced by the reduction in the exploratory and locomotor ability in the pregnant animals subjected to behavioral testing. Behavioral study findings corroborate with the vast literature, indicating additionally that sickness behavior is dependent on proinflammatory cytokine, and that pretreatment with glucocorticoids, or inhibitors of its synthesis are not able of preventing sickness behavior. Pretreatment with metyrapone was the only one capable of preventing abortion caused by LPS through elevated plasma levels of progesterone, which in turn protects the fetus from maternal immune attack during pregnancy and assures delivery. Thereby metyrapone can be used to prevent immunological abortions caused by LPS administration. These findings are significant to prevent pregnancy loss caused by endotoxemia indicating metyrapone an important pharmacological agent. Pretreatment with mifepristone, with or without exposure to LPS provoked a total loss of the pregnancy. These findings run counter to scientific literature and characterize the mifepristone as powerful abortive agent able to interrupt pregnancy even when administered after a period of embryo implantation. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Tem sido demonstrado que os glicocorticóides podem modular a secreção de prolactina e ocitocina, mas a influência dos glicocorticóides sobre as respostas neuroendócrinas e comportamentais em ratas lactantes era pouco conhecida. Portanto, nós avaliamos a influência da dexametasona (glicocorticóide exógeno) e da ativação do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal pela administração de LPS nas respostas neuroendócrinas e comportamentais durante a lactação. Além disso, nós verificamos se os efeitos produzidos pelos glicocorticóides são mediados pelos endocanabinóides. Para isto, nós utilizamos um antagonista de receptor CB1 (AM251) após a administração da dexametasona. Para confirmar a possível participação do sistema canabinóide nas respostas neuroendócrinas e comportamentais durante a lactação, nós utilizamos um agonista de receptor CB1 (WIN 55,212-22). O tratamento com a dexametasona atenuou as respostas neuroendócrinas e comportamentais em ratas lactantes, pois reduziu a secreção de ocitocina e prolactina, diminuiu o comportamento materno, assim como o agressivo, reduziu o ganho de peso da ninhada, reverteu a ansiólise materna, diminuiu a expressão de c-Fos na BST, MnPOv e MnPOd e, reduziu o número de duplas marcações para c-Fos/ocitocina em neurônios do PVN e SON. O tratamento com AM251 reverteu a maioria desses efeitos, sugerindo assim o envolvimento dos endocanabinóides nessas alterações. A redução nas respostas endócrinas e comportamentais durante a lactação produzidas pela administração do LPS é mediada por glicocorticóides, pois a metirapona (inibidor de síntese de glicocorticóides) reverteu parte dos efeitos produzidos pelo LPS. O tratamento com WIN 55,212-2 reduziu as respostas neuroendócrinas e comportamentais em ratas lactantes, confirmando assim nossa hipótese de que os efeitos dos glicocorticóides são mediados pelos endocanabinóides. Em conjunto, nossos resultados sugerem que o tratamento com a dexametasona em ratas lactantes diminuiu a secreção de prolactina e ocitocina, seguida pela redução das respostas comportamentais e estes efeitos são mediados pelos endocanabinóides. / It has been shown that glucocorticoids can modulate prolactin and oxytocin secretion, but the influence of glucocorticoids on the neuroendocrine and behavioral responses during lactation was not well known. Therefore, we evaluated the influence of dexamethasone (exogenous glucocorticoid) and hypothalamic-pituitary-adrenal axis activation by administration of LPS on the neuroendocrine and behavioral responses during lactation. In addition, we verified if the effects produced by glucocorticoids are mediated by endocannabinoids. For this purpose, we used a CB1 receptor antagonist (AM251) following the administration of dexamethasone. To confirm the possible involvement of the cannabinoid system on the neuroendocrine and behavioral responses during lactation, we used a CB1 receptor agonist (WIN 55,212-2). The dexamethasone treatment disrupted neuroendocrine and behavioral responses during lactation, because reduced oxytocin and prolactin, decreased maternal behavior as well as aggressive behavior, reduced litter weight gain, reverted the maternal anxiolysis and decreased the number of c-Fos positive neurons in the BST, MnPOv and MnPOd, and reduced the number of c-Fos/OT double labeled neurons in PVN and SON. The AM251 treatment reverted most of the effects produced by dexamethasone, suggesting the involvement of endocannabinoids in these effects. The changes in the endocrine and behavioral responses during lactation produced by administration of LPS are mediated by glucocorticoids, since metyrapone (glucocorticoids synthesis inhibitor) reverted some effects produced by LPS. The treatment with WIN 55,212-2 reduced the neuroendocrine and behavioral responses in lactating female rats, confirming our hypothesis that the effects of glucocorticoids are mediated by endocannabinoids. Taken together, our results suggest that dexamethasone treatment in lactating rats disrupts prolactin and oxytocin secretion, and this is followed by an attenuation of behavior responses and these effects are mediated by endocannabinoids. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

O reparo de tecidos lesionados pode se dar por regeneração ou cicatrização, sendo que o início desse processo de cura ocorre pela ação de fatores de crescimento que atuam no sítio da lesão estimulando a quimiotaxia, fibroplasia e angiogênese tecidual. A utilização do Plasma Rico em Plaquetas (PRP) em lesões teciduais possui grande potencial terapêutico, pois estimula a cicatrização e a regeneração, desenvolve a neovascularização, reduz o processo inflamatório e o risco de infecções, além de fornecer uma rápida hemostasia ao local. Por meio da indução de feridas na região dorsal dos ratos, o presente trabalho avaliou o efeito do PRP na cicatrização de feridas cutâneas, mediante avaliação histológica. Foram utilizados 36 ratos albinos Wistar, no qual duas feridas foram feitas, no mesmo animal, na região mediana dorsal. Nada foi aplicado a uma ferida e a mesma foi preenchida apenas com o coágulo (Grupo Controle), enquanto que na outra aplicou-se o PRP (Grupo Experimental). Os animais foram eutanasiados no 2º dia (nove animais), no 4º dia (nove animais), no 7º dia (nove animais) e no 14º dia (nove animais) após o procedimento cirúrgico, e os espécimes foram processados para analise microscópica. Os resultados mostraram que nos períodos avaliados não houve diferenças histomorfológicas relevantes entre as feridas tratadas com o PRP e as controle e não houve diferenças estatísticas em relação às variáveis estudadas nos dois grupos. / The repair of injured tissues can occur by regeneration or healing, and the beginning of this healing process takes place by the activity of growth factors at the injury site stimulating chemotaxis, angiogenesis and tissue fibroplasia. The use of Platelet Rich Plasma (PRP) in tissue lesions has great therapeutic potential because it stimulates healing and regeneration, promotes neovascularization, reduce inflammation and the risk of infection, as well as to provide rapid hemostasis at the injury site. Through the induction of wounds on the dorsal region of rats, we evaluated, by histological approaches, the effect of PRP on wound healing. We used 36 albino Wistar rats in which two incisions were made on the dorsal medial region. Nothing was applied to one of the wounds, and thus, it was only filled with the blood clot (Control Group); while the other wound received PRP (Experimental Group). Animals were euthanized on day 2 (nine animals), 4 (nine animals), 7 (nine animals), and 14 (nine animals) after the surgery procedure, and tissue samples were processed for macroscopic and microscopic analyses. Results failed to show significant morphometric differences between PRP-treated and control wounds.

Durante a gestação, observamos um influxo de linfócitos para a região mesometrial de camundongos denominados de células Natural Killer Uterinas (uNK). Estas células desempenham funções importantes no início da gestação, como a manutenção da tolerância materna ao feto, angiogênese e remodelação das artérias espiraladas. Sua capacidade citolítica é reduzida podendo ser ativada caso haja algum desequilíbrio entre citocinas pró e anti-inflamatórias durante a gestação. A ciclofosfamida é um medicamento usado no tratamento de doenças autoimunes e câncer. Trata-se de um teratógeno, sendo que seu uso pode levar a alterações macroscópicas e microscópicas, bem como, a redução da viabilidade gestacional em camundongos. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da ciclofosfamida no útero e nas células uNK de camundongos no 10° ddg, por meio da análise morfológica, citoquímica e estereológica concomitantemente a análise da viabilidade gestacional e no comportamento destes animais nos parâmetros de depressão e ansiedade. Nossos resultados mostraram que a ciclofosfamida provoca rapidamente o aumento de células uNK no útero, bem como, diminuição na expressão de N-acetil-D-galactosamina em seus grânulos e superfície, atingindo primeiramente células uNK menos diferenciadas próximas ao mesométrio, e posteriormente células mais diferenciadas em regiões mais próximas ao embrião. Seu efeito drástico na gestação provocou ainda diminuição no número de células uNK após 48h de sua administração, concomitante ao aparecimento de muitos sítios em reabsorção, diminuindo a viabilidade gestacional, bem como, estabelecimento de comportamento semelhante ao doentio nesses animais, causando 100% de perda embrionária diagnosticada em nosso estudo da prenhez a termo / During pregnancy, we observed an influx of lymphocytes into the region of mice mesometrial decidua. These cells are natural killer cells (NK), presenting different behavior and phenotype of circulating NK cells. Uterine Natural Killer Cells (uNK) play important roles in early pregnancy, such as maintaining maternal tolerance to the fetus, angiogenesis and remodeling of the spiral arteries. Their cytolytic capacity is reduced during pregnancy and can be activated if there is an imbalance between pro and anti-inflammatory cytokines. Cyclophosphamide is a drug used in treating autoimmune diseases and cancer. It is known that it is a teratogen, and its use can lead to macroscopic and microscopic changes, as well as the reduction of viability pregnancy in mice. The objective of this study was to evaluate the effects of cyclophosphamide in the uterus and in cells uNK (morphological analysis, cytochemistry and stereological) on the 10th ddg, as well as its effects on behavior related to depression and anxiety. Our results showed that cyclophosphamide rapidly increased uNK cells number in the uterus as well as decreased expression of N-acetyl-D-galactosamine in their granules and surface, early reaching less differentiated uNK cells near the mesometrium, and latter more differentiated uNK cells closer to the embryo. His dramatic effect on pregnancy still caused a decreasing in the number of uNK cells 48 after the drug administration, concomitant with the appearance of many resorption implantation sites, decreasing of gestational viability, as well as, establishment of sickness-like behavior, causing 100% of embryo loss diagnosed in the pregnancy to term. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Pseudomonas aeruginosa é um importante patógeno humano oportunista capaz de causar severas infecções em pacientes imunodeprimidos e em pacientes que apresentam fibrose cística. Para desencadear uma resposta efetiva contra a infecção pela P. aeruginosa é necessário uma primeira linha de reconhecimento desta bactéria pelo sistema imunológico inato. Apesar do desencadeamento da resposta imune inata ser benéfica no controle da infecção pela P. aeruginosa, esta resposta deve ser controlada. Estudos recentes têm começado a esclarecer como os miRNAs desempenham papéis fundamentais na regulação de processos como infecção, resposta imune e inflamação participando da modulação da resposta imune. Dada a relevância da bactéria P. aeruginosa nos processos infecciosos em humanos e estimulados pela necessidade de desvendar os mecanismos de regulação da reposta imune contra esta bactéria, o objetivo deste trabalho foi avaliar o papel do mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p expressos em camundongos infectados pelas cepas ATCC 27853 e PA14 da bactéria P. aeruginosa. Para avaliar o nível de expressão dos mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p e das citocinas IL-1β, IL-6 e IL-12 in vitro, o RNA total foi extraído de células Raw 264.7, macrófagos derivados da medula óssea (BMDM) e de células dendríticas derivadas da medula óssea (BMDC) para análise de PCR em tempo real. Após a infecção das células Raw 264.7, BMDMs e BMDCs foi possível observar que a expressão dos miRNAs e das citocinas ocorreu de forma dependente em cada tipo celular infectado. Para as análises in vivo camundongos C57BL/6 foram infectados via intratraqueal com as cepas ATCC 27853 e PA14 de P. aeruginosa para análises de UFCs, RT-qPCR, histopatologia e estereologia. Apenas a cepa PA14 foi recuperada no pulmão e baço dos animais, onde não foi observado variação na expressão do mmu-miR-155-5p nem aumento significativo de uma série de citocinas efetoras. As análises histopatológicas demostraram intenso processo inflamatório difuso apresentando número maior de células inflamatórias, diminuição no número de alvéolos e do volume da estrela quando comparados aos animais não infectados e animais infectados pela cepa avirulenta. No pulmão dos animais infectados com a cepa ATCC 27853, observou-se aumento de expressão de mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p, das citocinas inflamatórias. A identificação das redes de regulação dos miRNAs em estudo mostrou importantes alvos diretos e indiretos associados à resposta imune inata que podem estar comprometidas durante a expressão diferencial de mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p em favorecimento ou em detrimento da resolução da infecção pela P. aeruginosa. Os resultados obtidos até o momento permitem sugerir que a infecção pela P. aeruginosa exerce uma modulação na expressão de miRNAs e consequentemente na resposta imune contra esta bactéria e que a virulência de diferentes cepas de P. aeruginosa influenciam na expressão dos miRNAs mmu-miR-155-5p e mmu-miR-146b-5p, de citocinas pró-inflamatórias e na patologia. Mais estudos são necessários para desvendar os mecanismos pelos quais cepas virulentas da P. aeruginosa conseguem subverter a resposta imune e garantir a sua replicação no hospedeiro. / Pseudomonas aeruginosa is an important opportunistic human pathogen capable of causing severe infections in immunocompromised patients and in patients with cystic fibrosis. To trigger an effective response against infection by P. aeruginosa is required a first line of recognition of this bacterium by the innate immune system. Although the innate immune response is beneficial in the control of P. aeruginosa infection, this response should be controlled. Recent studies have begun to clarify how miRNAs play key roles in regulating processes such as infection, immune response and inflammation by participating in the immune response modulation. Due to the importance of the P. aeruginosa bacterium in infectious processes in humans and stimulated by the need to uncover the mechanisms of regulation of the immune response against this bacterium, the objective of this study was to evaluate the role of mmu-miR-155-5p and mmu-miR-146b -5p expressed in mice infected with strains ATCC 27853 and PA14 of the bacterium P. aeruginosa. To assess the level of expression of mmu-miR-155-5p and mmu-miR-146b-5p and the cytokines IL-1β, IL-6 and IL-12 in vitro, the total RNA was extracted from Raw 264.7 cells, bone marrow derived macrophages (BMDM) and bone marrow-derived dendritic cells (BMDC) for real-time PCR analysis. After infection of the Raw 264.7, BMDMs and BMDCs cells, it was possible to observe that the expression of miRNAs and cytokines occurred in a dependent manner in each infected cell type. For the in vivo analyzes C57BL / 6 mice were infected intratracheally with the strains ATCC 27853 and PA14 of P. aeruginosa for analysis of CFU, RT-qPCR, histopathology and stereology. Only the PA14 strain was recovered in the lungs and spleens of the animals, where no variation in the expression of mmu-miR-155-5p or a significant increase in a series of effector cytokines was observed. Histopathological analyzes demonstrated an intense diffuse inflammatory process, presenting a larger number of inflammatory cells, a decrease in the number of alveoli and the volume of the star when compared to uninfected animals and animals infected by the avirulent strain. In the lung of animals infected with ATCC 27853 strain, increased expression of mmu-miR-155-5p and mmu-miR-146b-5p, of inflammatory cytokines was observed. The identification of regulatory networks of the miRNAs under study showed important direct and indirect targets associated with the innate immune response that may be compromised during the differential expression of mmu-miR-155-5p and mmu-miR-146b-5p in favor or detriment of P. aeruginosa infection. The results obtained to date suggest that the infection by P. aeruginosa exerts a modulation in the expression of miRNAs and consequently in the immune response against this bacterium and that the virulence of different strains of P. aeruginosa influence the expression of miRNAs mmu-miR- 155-5p and mmu-miR-146b-5p, of proinflammatory cytokines and in pathology. Further studies are needed to uncover the mechanisms by which virulent P. aeruginosa strains can subvert the immune response and ensure replication in its host. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Made available in DSpace on 2015-03-04T18:57:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Nayra.pdf: 2967499 bytes, checksum: a3fbc3f85195a8b2ca04057e9efda7af (MD5) Previous issue date: 2013-06-14 / The study of the diversity and microbial taxonomy is very important to better understand of the micro-organisms ecology. The microbial taxonomy has undergone important changes with the advent of genomic. Until recently the taxonomy exclusively depended of the DNA-DNA hybridization for define species and to describe new species. From the analysis of the genomic signatures (Average Amino Acid Identity (AAI) e Karlin signature) is possible to determine the similarity between microbial genomes. However, the calculations of those signatures requires time. The automation those calculations using a software was the objective of this dissertation. For develop the software was chosen, for its multiplatform characteristics, the Java language, which allows the use of the software in operational systems Windows, Linux and iOS. For develop was used Eclipse VE and batch files for integrate with Blast 2.2.25+ used for comparison of the identity between genomes. The new software performs calculations AAI and Karlin signature for multiple genomes and metagenomes in real time. It s allowed studies about the genus Mycoplasma and the species Phrochlorococcus marinus. This species comprises 10 species according to the analysis of Karlin and AAI and indicates the need for taxonomy review. The Mycoplasma genus is polyphyletic and possibly comprises different genera. This study advances the taxonomic knowledge about relevant groups in marine habitats, besides create a useful tool for analyses of genome and metagenome. / O estudo da diversidade e taxonomia microbiana é de suma importância para o melhor entendimento da ecologia de microrganismos. A taxonomia microbiana tem passado por importantes transformações com o advento da genômica. Até recentemente a taxonomia dependia exclusivamente da hibridização de DNA-DNA para determinação de espécies e descrição de espécies novas. A partir da análise de assinaturas genômicas (Identidade Média de Aminoácidos (AAI) e Assinatura de Karlin) é possível agora determinar a similaridade entre genomas microbianos. Porém, o cálculo destas assinaturas também consome tempo. A automatização destes cálculos por meio de um software foi o objetivo desta dissertação de mestrado. Para a construção do software foi escolhida a linguagem Java por sua característica multiplataforma, que permite utilização em sistemas operacionais Windows, Linux e iOS. Para o desenvolvimento foi utilizado o software Eclipse VE e arquivos batch para integração com o Blast versão 2.2.25+ utilizado para comparação de identidade entre genomas. O novo software realiza os cálculos de AAI e assinatura de Karlin para múltiplos genomas e metagenomas em tempo real. O novo software permitiu o estudo da taxonomia do gênero Mycoplasma e da espécie Phrochlorococcus marinus. De acordo com as análises da assinatura e AAI esta espécie compreenderia 10 outras espécies, o que indica a necessidade de revisão taxonômica. Já o gênero Mycoplasma é polifilético e compreende possivelmente diferentes gêneros. O presente estudo avança o conhecimento taxonômico de grupos relevantes no meio marinho, além de criar uma ferramenta útil para análise de genomas e metagenomas.

O protocolo conhecido como Dynamic Clamp consiste em utilizar um computador para introduzir condutâncias artificiais em um neurônio biológico. O modo como estas condutâncias dependem da voltagem da membrana ou do tempo são modelado por equações diferenciais que são integradas em tempo real por um computador conectado ao neurônio biológico. Resumidamente, o computador tem acesso ao potencial de membrana dos neurônios através de eletrodos intracelulares conectados a conversores analógico-digitais (ADCs), calcula as correntes a serem injetadas nos neurônios e produz os sinais de saída através de conversores digitalanalógicos (DACs) que produzem a injeção das correntes nos eletrodos intracelulares. De um certo modo, o Dynamic Clamp utiliza os neurônios como simuladores, permitindo investigar a importância de um tipo de condutância para a atividade elétrica de um neurônio, assim como determinar o efeito produzido pelas sinapses em uma rede, combinando o controle e flexibilidade de uma simulação no computador com a acurácia e o realismo de um experimento em eletrofisiologia. Descrevemos a implementação de um protocolo de Dynamic Clamp utilizando um computador pessoal tipo IBM-PC que permitiu contornar 3 das principais limitações que apresentam alguns dos programas de Dynamic Clamp comerciais/gratuitos disponíveis atualmente: (a) Garantia de que o sistema roda em tempo real - nossa implementação é baseada em um programa de Dynamic Clamp que roda em uma plataforma Linux Real-Time que além de controlar os experimentos em tempo real consiste em software livre com codigo fonte aberto e que pode ser instalado gratuitamente; (b) Não necessita de hardware de aquisição de dados dedicado para eletrofisiologia - utilizamos uma placa ADC/DAC comercial comum marca National Instruments modelo PCIMIO16E4. Com o driver COMEDI instalado para placas de aquisição de dados Linux, a maioria das placas ADC/DAC tipo PCI disponíveis no mercado podem ser utilizadas em implementações futuras; (c) Aumentar o número de neurônios que podem ser conectados simultaneamente - desenvolvemos um circuito demultiplex analógico que permite controlar até 8 neurônios biológicos/artificiais a partir das duas saídas analógicas que as placas DAC comerciais possuem e ainda atingir frequências de atualização da corrente de até 3 kHz (para 8 correntes de saída). Apresentamos os resultados de diversos testes que fizemos usando o programa adaptado e o circuito demultiplex para produzir sinapses em tempo real e conectar diversos neurônios artificiais em pequenas redes. Também mostramos alguns resultados preliminares obtidos com a primeira implementação de um modelo de neurônio estocástico tipo Hodgkin-Huxley em um programa de Dynamic Clamp. / The Dynamic Clamp protocol consists in using a computer to introduce artificial conductances in a biological neuron. The voltage- and time-dependency of each conductance is modeled by differential equations integrated in real-time by the computer connected to the biological neurons. In short, the computer executes a 3-phase cycle in which the membrane potential of the neurons is measured by intracellular electrodes and digitized by analog-to-digital converters (ADCs), the currents are calculated based in the digitized membrane potentials and current signals are generated by digital-to-analog converters (DACs). These currents are actually injected in the neurons by other intracellular electrodes. In some extent the Dynamic Clamp uses the neurons as simulators, allowing one to investigate the role of a specific conductance in the intrinsic activity of a neuron as well as to look for the effects of a synapse in the behavior of a small network. The Dynamic Clamp combines the control and flexibility of a computer simulation with the reality of an experiment in electrophysiology. We describe an implementation of a Dynamic Clamp protocol that allowed us to surmount 3 of the main drawbacks present in some commercial/freely available Dynamic Clamp programs: (a) Runs in real time - our implementation is based in a program that runs in a Real-Time Linux platform. This operating system not only ensures the experiments will be controlled in real time but also consists in open source software that can be freely downloaded and installed; (b) No need of special electrophysiology acquisition hardware - we used a commercial ADC/DAC acquisition board model PCI-MIO16E4 from National Instruments. With the COMEDI Linux package driver that is used most of the PCI commercial ADC/DAC boards can be used in future implementations with no change needed in the program itself. (c) We can connect more than two neurons with artificial synapses - we developed an analog demultiplex circuit that allowed us to control simultaneously up to 8 biological/artificial neurons from the two analog outputs available in most of the commercial ADC/DAC boards and we could still reach current update rates of about 3 kHz (for 8 current outputs enabled). We present the results of several tests we performed using the program adapted to control the analog demultiplex to establish synapses and to connect several artificial neurons in small neural networks. Preliminary results from the first implementation of a stochastic whole cell Hodgkin-Huxley model neuron in a real time Dynamic Clamp program are also shown.

Submitted by Suelen Santos (suelen@fdv.br) on 2018-08-15T16:01:02Z No. of bitstreams: 1 ALEXANDRE CAIADO RIBEIRO DALLA BERNARDINA.pdf: 1032508 bytes, checksum: f446f7bf6e2cac44e93ec54ad23a9b57 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Galdino (repositorio@fdv.br) on 2018-08-15T19:18:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ALEXANDRE CAIADO RIBEIRO DALLA BERNARDINA.pdf: 1032508 bytes, checksum: f446f7bf6e2cac44e93ec54ad23a9b57 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T19:18:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ALEXANDRE CAIADO RIBEIRO DALLA BERNARDINA.pdf: 1032508 bytes, checksum: f446f7bf6e2cac44e93ec54ad23a9b57 (MD5) Previous issue date: 2006-03-13 / O estudo refere-se à Argüição de Descumprimento Preceito Fundamental prevista no artigo 102, §1º da Constituição Federal de 1988 e regulamentada pela Lei nº 9.822/99. O objetivo desta pesquisa é analisar o objeto da ADPF e os pressupostos de admissibilidade desta ação previstos na Lei nº 9.822/99. O método científico utilizado caracteriza-se por uma abordagem dialética e pela utilização de técnicas de pesquisa bibliográfica e documental. O referencial teórico é a doutrina kelseniana e seus postulados. Serão analisados conceitos de teoria geral do direito, conceitos próprios de direito constitucional e institutos estrangeiros que inspiraram o legislador brasileiro na regulamentação da ADPF. O desconhecimento da comunidade jurídica e a interpretação atualmente prevalecente, inclusive perante a Corte Suprema, em relação a conceitos basilares da ADPF e seus pressupostos amesquinham a relevância desta ação constitucional. Esta pesquisa demonstra a necessidade de uma revisão dos conceitos, atualmente preponderantes na comunidade jurídica nacional, acerca do âmbito de impugnação e dos pressupostos da ADPF para que seja assegurada a efetiva utilização desta ação como principal instrumento de defesa dos preceitos constitucionais fundamentais. / The present work addresses the Challenge based on default of Fundamental Precept (ADPF) pursuant to article 102, first paragraph of the 1988 Federal Constitution of the Federative Republic of Brazil and regulated by Law 9,822/99. The main goal of this research is to analyze the object of the ADPF and the right of action pursuant to Law 9,822/99. The scientific method used is characterized by a dialectic approach and by the use of bibliographical and documental research techniques. The theoretical reference is the doctrine of Hans Kelsen and its postulates. Concepts of the Theory of Law, concepts of Constitutional Law and foreign statutes that have inspired the Brazilian Lawmaker in the regulation of the ADPF will be analyzed. The lack of knowledge in the legal community and the current case law, including in the Brazilian Supreme Court, as to the basic concepts of the ADPF and its conjecture belittle the relevance of such constitutional remedy. This research demonstrates the need for a review of the current prevailing concepts among the national legal community regarding the means of impugnation and the conjecture of the ADPF in order to safeguard the effective use of such action as the main instrument of defense of the fundamental constitutional precepts.

Submitted by Leticia Alvarenga (leticiaalvarenga@fdv.br) on 2018-08-15T18:08:03Z No. of bitstreams: 1 JOÃO CLÁUDIO GONÇALVES LEAL.pdf: 842557 bytes, checksum: df199164635b4c7b34707eb1eda17bb1 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Galdino (repositorio@fdv.br) on 2018-08-15T20:11:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JOÃO CLÁUDIO GONÇALVES LEAL.pdf: 842557 bytes, checksum: df199164635b4c7b34707eb1eda17bb1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T20:11:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JOÃO CLÁUDIO GONÇALVES LEAL.pdf: 842557 bytes, checksum: df199164635b4c7b34707eb1eda17bb1 (MD5) Previous issue date: 2005-08-29 / A pesquisa diz respeito aos possíveis efeitos temporais da decisão que declara a inconstitucionalidade de norma por violação a direitos fundamentais. O estudo visa à análise da aplicabilidade dos artigos 27 da Lei n° 9.868/99 e 11 da Lei n° 9.882/99, que trazem a possibilidade de não adoção do efeito ex tunc, tradição no direito brasileiro. O problema foi analisado sob a perspectiva dogmática, sendo utilizado o método analítico-descritivo e os postulados da teoria pura do direito como referencial teórico. Foram analisados conceitos de teoria geral do direito, conceitos próprios de direito constitucional e os mecanismos de controle de constitucionalidade adotados no Brasil, relacionando-o com aqueles existentes nos EUA e na Áustria. A partir da análise do ordenamento jurídico brasileiro, concluiu-se que não obstante a declaração de inconstitucionalidade com efeito ex tunc ser a predominante na prática dos tribunais brasileiros, é possível, e em certos casos necessário, limitar o efeito temporal no controle abstrato de constitucionalidade, inclusive quando estiver em questão a violação a direitos fundamentais. / The research is about the temporary effects on judicial review, when constitutional rights are not respected. The study aims at analyzing article 27 of Federal Statute n° 9.868/99 and article 11 of Federal Statute n° 9.882 /99, which establishes other temporary effects besides ex tunc effect, the tradition in Brazil. The problem was analyzed by a dogmatic view, using analytical method and the pure theory of law as a theoretical reference. Concepts of general theory, constitutional law and the judicial review in Brazil were analyzed and related to North-American and Austrian models of judicial review. After the analysis of the Brazilian law, the study concluded that the ex tunc effect predominates in the Brazilian judicial review. However, non retroactive decisions, including when constitutional rights are not respected, are possible and sometimes necessary.