Estudaram-se os efeitos da influência do Reiki na evolução do granuloma induzido experimentalmente pela inoculação do BCG no coxim plantar de hamsters, assim como os efeitos da mesma terapia em camundongos portadores do tumor ascítico de Ehrlich in vivo e in vitro. No modelo de inflamação granulomatosa crônica, utilizou-se 40 hamsters machos, os quais após serem inoculados com BCG no dia 0 no coxim da pata posterior direita, foram separados em dois grupos contendo 20 animais em cada. Um grupo denominado controle o qual não recebeu nenhum tratamento, e um grupo denominado Reiki, o qual recebeu reiki por 15 minutos, diariamente, a uma distância de 30 cm. Imediatamente antes da inoculação foi realizada a medida do diâmetro da pata a ser inoculada, sendo que as medições continuaram até o momento do sacrifício dos animais, sendo realizadas em dias alternados. No modelo de tumor ascítico de Ehrlich, foram utilzadas 26 camundongos fêmeas, as quais foram injetadas com células de Tumor de Ehrlich pela via intraperitoneal, sendo este considerado dia 0 do experimento. Em seguida estes camundongos foram separados em 3 grupos: controle (n=8), reiki A (n=9) e reiki B (n=9). Grupo controle não recebeu nenhum tipo de tratamento, grupo Reiki A recebeu reiki por 10 minutos, diariamente, à uma distância de 30 cm e grupo Reiki B recebeu manipulação e uma técnica diferente de Reiki. Os animais então foram observados diariamente até o dia de óbito. Em relação ao edema de pata, foi observada diminuição deste nos hamsters inoculados com BCG e tratados com Reiki. Com respeito à avaliação da taxa de sobrevida em camundongos com tumor ascítico de Ehrlich, observou-se maior taxa de sobrevida nos camundongos inoculados pertencentes ao grupo Reiki A. / We studied the effects of the influence of Reiki in the evolution of the experimental induced granuloma by the inoculation of BCG in the footpad of hamsters, and the effects of the same therapy in mice with Ehrlich ascitic tumor in vivo and in vitro. In the chronic granulomatous inflammation model, it was used, 40 male hamsters, which, after been inoculated with BCG in day 0, it was separated in two groups with 20 animals per group: control and reiki. The control group received no treatment, and reiki group, which was treated with Reiki by 15 minutes, daily, from 30 cm of the box. Immediately before the inoculation, the footpad diameter was measured, and after this measure was made in every other day, until complete 54 days. In the Ehrlich ascitic tumor model, it was used, 26 female mice inoculated with Ehrlich tumor cells, by intraperitoneal via, in the day 0. After that, the mice were separated in three groups: control (n=8), reiki A (n=9) and reiki B (n=9). The control group received no treatment, reiki A group received Reiki treatment by 10 minutes, daily, from 30 cm of the box, and reiki B group, which was manipulated and received a different way of Reiki treatment. The mice were observed daily until death in order to analyze survival rate. As regards granuloma evaluation it was observed a reduced footpad edema in hamsters inoculated with BCG and treated with Reiki. In relation to survival rate assay, it was observed an increased lifespan of those mice of the reiki A group.

A doença granulomatosa inflamatória envolve interações coordenadas entre linfócitos, monócitos/macrófagos, células epitelióides, eosinófilos, neutrófilos e fibroblastos. A comunicação intercelular mediada por junções gap, constituídas por conexinas, é responsável pela homeostase tecidual. A Cx43 está presente em células linfóides, células mielóides, fibroblastos e outras. Assim, para compreendermos o possível envolvimento das conexinas no granuloma, nós analisamos o efeito da deleção heterozigótica de uma Gja1 (gene Cx43) na formação e desenvolvimento dos granulomas hepáticos, induzidos por ovos de Schistosoma mansoni. Para tanto, camundongos heterozigotos (Cx43+/-) e selvagens (Cx43+/+) foram infectados com cercárias de Schistosoma mansoni e avaliados nos tempos: 6, 8 e 12 semanas após a infecção. As células dos granulomas apresentaram expressão de conexina 43, notadamente após 12 semanas de infecção. As lesões dos camundongos Cx43+/- apresentaram índice de proliferação reduzido e aumento na deposição de colágeno em fases tardias da doença. Apesar desses achados, não se encontrou redução no tamanho e celularidade das lesões em comparação aos camundongos selvagens. Também não obtivemos diferenças em relação ao hemograma ou população de linfócitos esplênicos CD4, CD8 e CD19. As células peritoneais dos animais de ambos genótipos apresentaram produção de NO e H<SUB2O<SUB2 similares. Contudo, os neutrófilos e monócitos sanguíneos dos animais Cx43+/-, estimulados por PMA, apresentaram aumento significante do burst oxidativo. Concluindo, nossos resultados indicam que a deleção de um alelo do gene da Cx43 modifica claramente a evolução da doença granulomatosa, mostrando um papel desta conexina no desenvolvimento do granuloma. / Inflammatory granulomatous disease involves coordinated interactions among lymphocytes, monocytes/macrophages, epithelioid cells, eosinophils, neutrophils and fibroblasts. Intercellular communication mediated by gap junctions constituted of connexins, is responsible for tissue homeostasis. Cx43 is present in lymphoid cells, myelogenous cells, fibroblasts and others. In order to understand the possible involvement of connexins in granuloma, we analyzed the effect of the heterologous deletion of a Gja1 (Cx43 gene) on the formation and development of hepatic granulomas induced by Schistosoma mansoni eggs. Heterozigous (Cx43+/-) and wild-type (Cx43+/+) mice were infected with S. mansoni cercarie and evaluated after 6, 8 and 12 weeks. Granuloma cells express Cx43, with considerable reduction in Cx43+/- mice. Moreover, granuloma cells from Cx43v+/- mice displayed reduced proliferation and increased collagen deposition at late phases of the disease. Despite these findings, no reduction of size or cellularity of the lesions was found in comparison to wild-type mice. We didn?t find differences in relation to blood count and splenic lymphocyte population CD4, CD8 and CD19. Peritoneal cells from animals of both genotypes presented similar production of NO and H2O2. However, blood neutrophils and monocytes from Cx43+/- mice, stimulated by PMA, displayed significantly increased oxidative burst. In conclusion, our results indicate that the deletion of one allele of the Cx43 gene clearly modifies the evolution of a granulomatous disease, supporting a role for this connexin on granuloma development.

O óxido nítrico (NO) é um radical livre gasoso que participa de uma série de processos biológicos fisiológicos sendo produzido por enzimas denominadas óxido nítrico sintases (NOS). Diversos estudos vem demonstrando sua participação na resposta inflamatória crônica, na qual as células inflamatórias, com destaque para os macrófagos, são estimuladas a sintetizarem NOS, que por esse motivo são denominadas induzíveis (iNOS) e passam a produzir o óxido nítrico que vai atuar na modulação do processo. A fim de comprovar sua participação filogenética na resposta granulomatosa, utilizou-se como modelo experimental a inoculação de onco-BCG na musculatura de tilápias-do-Nilo (Oreochromys niloticus) e de girinos de rã touro-gigante (Rana catesbeiana), na região plantar de tartarugas ?red ear? (Trachemys scripta elegans) e no coxim plantar de hamsters sírios (Mesocricetus auratus). Fragmentos da lesão foram colhidos aos 14, 28 e 42 dias pós-inoculação, fixados em Carnoy por quatro horas, sendo em seguida transferidos para álcool 70o GL. Procedeu-se a confecção de preparados histopatológicos segundo métodos de rotina que foram corados pelo método da hematoxilina e eosina. Imunoistoquímica foi realizada para a verificação da produção de óxido nítrico indiretamente através da marcação da iNOS com anticorpos anti-iNOS humana biotinilados produzidos em coelhos. Observou-se em todos os animais desenvolvimento de granulomas que mostraram tendência a maior organização aos 42 dias; as características celulares foram semelhantes, com algumas variações específicas. Constatou-se marcação imunoistoquímica em macrófagos presentes nas lesões produzidas pela inoculação de BCG em todos os grupos experimentais, exceto nos girinos aos 14 dias, cuja marcação foi irrelevante. Os resultados permitiram concluir que o óxido nítrico participa da resposta inflamatória granulomatosa, bem como a utilização de imunoistoquímica mostrou-se método eficiente para evidenciar sua produção em estudos filogenéticos. Pesquisas futuras deverão qualificar e quantificar mediadores químicos envolvidos na regulação da participação do óxido nítrico para melhor compreender sua fisiopatologia na modulação do granuloma inflamatório. / Nitric oxide (NO) is a gaseous free radical that takes part in a series of biological physiological processes. It is produced by enzymes called nitric oxide synthetases (NOS). Several studies have demonstrated its role in chronic inflammatory response, in which inflammatory cells, mainly macrophages, are stimulated to synthesize NOS, being called then inducible nitric oxide synthetases (iNOS). Nitric oxide is then produced and acts in the modulation of the process. In order to corroborate its phylogenetic role in granulomatous response, the inoculation of onco-BCG experimental model was used in the muscle of Nile tilapias (Oreochromys niloticus) and bullfrog tadpoles (Rana catesbeiana), in the plantar region of red eared sliders (Trachemys scripta elegans) and in the plantar pad of hamsters (Mesocricetus auratus). Fragments of the lesions were collected at 14, 28 and 42 days after inoculation, fixed in Carnoy for four hours, and then transferred to alcohol 70o GL. After that, histopathological slides were prepared following routine methods, and stained by hematoxylin-eosin. Immunohistochemical tests were performed in order to assess the production of nitric oxide indirectly by means of marking iNOS with biotinylated human anti-iNOS antibodies produced by rabbits. It was observed in all animals that the development of granulomas showed greater tendency of organization at 42 days; cell characteristics were similar, with some specific variations. Immunohistochemical marking was observed in macrophages present in lesions produced by BCG inoculation in all experimental groups, except in tadpoles at 14 days, which showed irrelevant marking. Results enabled the conclusion that nitric oxide takes part in granulomatous inflammatory response. Besides, the use of immunohistochemistry showed to be an efficient method for evidencing the production of nitric oxide in phylogenetic studies. Future research studies should qualify and quantify chemical mediators involved in the regulation nitric oxide role in order to better understand its physiopathology in the modulation of inflammatory granuloma.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides sp. A doença é endêmica na maior parte dos países da América Latina, sendo os pulmões os órgãos mais afetados. O diagnóstico de PCM é feito com base na história clínica e epidemiológica, e confirmado pela visualização microscópica das estruturas fúngicas do Paracoccidioides a partir de secreções ou tecidos. Por vezes, a apresentação clínica e os achados histopatológicos da PCM simulam os de outras doenças, como a sarcoidose, e ocasionalmente são encontradas nas lesões formas excepcionalmente pequenas do Paracoccidioides, que podem ser confundidas com outros fungos, como o Histoplasma capsulatum. O presente trabalho objetivou identificar e caracterizar os casos que simularam sarcoidose e os que apresentaram formas pequenas de Paracoccidioides dentre os 856 casos de paracoccidioidomicose diagnosticados no Laboratório de Micologia do Complexo Hospitalar Santa Casa de Porto Alegre, no período de 1981 a dezembro de 2013. Foram identificados 8 casos mimetizando a sarcoidose e 12 apresentando formas pequenas de Paracoccidoides. Dos casos que simularam a sarcoidose, todos eram fumantes do sexo masculino, com idades variando entre 27 e 59 anos (média = 42,5 anos) e apresentaram tosse produtiva, infiltrado fibronodular bilateral aos exames de imagem e granulomas sarcoides na biópsia pulmonar, recebendo prednisona como tratamento inicial. O diagnóstico de PCM, nestes casos, foi realizado por meio de cortes histológicos corados ao GMS (n=8), exame direto do escarro (n=2) e imunodifusão (n=4). Dentre os casos que apresentaram formas pequenas do Paracoccidioides, todos eram fumantes, tinham idades variando entre 33 e 68 anos (média = 55,58 anos), 10 eram do sexo masculino, e 10 apresentavam sintomas consistentes com os da PCM (dois pacientes eram assintomáticos). O diagnóstico etiológico, em todos os casos, foi realizado por meio de cortes histológicos seriados corados ao GMS (que revelaram as formas multibrotantes patognomônicas do Paracoccidioides) e corroborado por exame direto do escarro (n=3), imunodifusão (n=6) e cultura (n=1). Com isto, ressalta-se a importância da consideração dos diagnósticos diferenciais da paracoccidioidomicose. Visto que a sarcoidose é um diagnóstico de exclusão, o achado de granulomas epitelioides sem necrose deve incitar a busca ativa por agentes etiológicos com a utilização das colorações de ZN e GMS. E nos casos em que se encontram formas pequenas ou pouco usuais do Paracoccidioides, devem-se realizar cortes histológicos seriados e escalonados corados ao GMS e utilizar técnicas laboratoriais complementares, como imunodifusão e cultura, para assegurar o seu diagnóstico. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic infection caused by the fungus Paracoccidioides sp. The disease is endemic in most Latin American countries, and the lungs are the most affected organs. The diagnosis of PCM is based on clinical and epidemiological features, and confirmed by the microscopic visualization of yeasts of Paracoccidioides from clinical specimens. Sometimes the clinical presentation and histopathological findings of PCM mimic those of other diseases, such as sarcoidosis, and occasionally exceedingly small forms of Paracoccidioides are found in lesions, which can be confused with other fungi, such as Histoplasma capsulatum. This study aimed to identify and characterize the cases that simulated sarcoidosis and those with small forms of Paracoccidioides among the 856 cases of paracoccidioidomycosis diagnosed in the Mycology Laboratory of the Hospital Complex Santa Casa de Porto Alegre, from 1981 to December 2013. 8 cases were identified mimicking sarcoidosis and 12 with small forms of Paracoccidoides. All the cases that mimicked sarcoidosis were male smokers, aged between 27 and 59 years (mean = 42.5 years) and had productive cough, bilateral fibronodular infiltrates on X-ray and sarcoid granulomas in the lung biopsy, receiving prednisone as initial treatment. The diagnosis of PCM in these cases was carried out by histological sections stained with GMS (n = 8), direct examination of sputum (n = 2) and immunodiffusion (n = 4). Among the cases with small forms of Paracoccidioides, all were smokers, aged between 33 and 68 years (mean = 55.58 years), 10 were male, and 10 had symptoms consistent with PCM (two patients were asymptomatic). The etiologic diagnosis in all the 12 cases was made by serial tissue sections stained with GMS (which revealed the multibudding pathognomonic forms of Paracoccidioides) and confirmed by direct examination of sputum (n = 3), immunodiffusion (n = 6) and culture (n = 1). In conclusion, it is emphasized the importance of considering the differential diagnosis of paracoccidioidomycosis. Since sarcoidosis is a diagnosis of exclusion, the finding of epithelioid granulomas without necrosis should encourage the active search for etiologic agents with the use of ZN and GMS stains. And in cases in which small or unusual forms of Paracoccidioides are found, serial histological sections stained with GMS and complementary laboratory techniques such as immunodiffusion and culture should be performed to ensure their diagnosis.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2057820 bytes, checksum: 0cb5f0c3fdc5c5044b76d4c489d4ae15 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Thirty eight cases of canine leproid granuloma (CLG) were diagnosed between 2000 and 2008. Diagnosis was based on clinical and histopathological findings along with acid fast bacilli in skin sections. The lesions included papules, plaques and nodules, with or without ulceration, localized mainly on the pinna. Boxers, short haired and large breeds dogs were the most affected. The dogs were otherwise healthy, with no recurrence, and the prognosis was good. Histopathological findings included a nodular to diffuse granulomatous or pyogranulomatous and lymphoplasmocytic inflammatory infiltrate, with or without necrosis, localized in the dermis or subcutaneous tissue. The bacillar loading and morphology were variable among lesions. There were not significant correlations between bacterial load and histopathological pattern, main inflammatory infiltration, necrosis or the numbers of giant cells. Correlation between giant cells and histopathological pattern was not observed as well. In the majority of cases, PCR assay identified Mycobacterium murphy as the main etiologic agent for the CLG. However, others Mycobacterium species were also involved as causative agent. / Foram analisados 38 casos de granuloma lepróide canino (GLC) diagnosticados no período entre 2000 e 2008. O diagnóstico baseou-se nos achados clínicos e histopatológicos, com a detecção de bacilos álcool ácido resistentes nos fragmentos cutâneos. As lesões incluíram pápulas, placas, nódulos, tumores dérmicos e subcutâneos, ulcerados ou não, localizados principalmente na superfície convexa dos pavilhões auriculares. Os cães da raça Boxer, aqueles de pelagem curta e de grande porte foram mais acometidos. Os animais eram sistemicamente saudáveis e o prognóstico foi favorável, sem recidiva das lesões. A histopatologia demonstrou padrão nodular a difuso, com infiltrado inflamatório predominantemente granulomatoso ou piogranulomatoso e linfoplasmocitário, na derme e tecido subcutâneo, com ou sem necrose, e bacilos em quantidade e morfologia variáveis. Não foi verificada associação estatística significativa entre a quantidade de bacilos com o padrão histopatológico, com o infiltrado inflamatório predominante, com a necrose ou com a quantidade de células gigantes. Também não foi observada associação entre a quantidade de células gigantes e o padrão histopatológico. A reação em cadeia de polimerase e o sequenciamento genético parcial do gene 16srRNA identificou Mycobacterium murphy na maioria dos casos. Outras micobactérias, ainda não descritas na literatura, também foram encontradas nas lesões, sugerindo maior diversidade de espécies envolvidas no GLC.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma infecção sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides sp. A doença é endêmica na maior parte dos países da América Latina, sendo os pulmões os órgãos mais afetados. O diagnóstico de PCM é feito com base na história clínica e epidemiológica, e confirmado pela visualização microscópica das estruturas fúngicas do Paracoccidioides a partir de secreções ou tecidos. Por vezes, a apresentação clínica e os achados histopatológicos da PCM simulam os de outras doenças, como a sarcoidose, e ocasionalmente são encontradas nas lesões formas excepcionalmente pequenas do Paracoccidioides, que podem ser confundidas com outros fungos, como o Histoplasma capsulatum. O presente trabalho objetivou identificar e caracterizar os casos que simularam sarcoidose e os que apresentaram formas pequenas de Paracoccidioides dentre os 856 casos de paracoccidioidomicose diagnosticados no Laboratório de Micologia do Complexo Hospitalar Santa Casa de Porto Alegre, no período de 1981 a dezembro de 2013. Foram identificados 8 casos mimetizando a sarcoidose e 12 apresentando formas pequenas de Paracoccidoides. Dos casos que simularam a sarcoidose, todos eram fumantes do sexo masculino, com idades variando entre 27 e 59 anos (média = 42,5 anos) e apresentaram tosse produtiva, infiltrado fibronodular bilateral aos exames de imagem e granulomas sarcoides na biópsia pulmonar, recebendo prednisona como tratamento inicial. O diagnóstico de PCM, nestes casos, foi realizado por meio de cortes histológicos corados ao GMS (n=8), exame direto do escarro (n=2) e imunodifusão (n=4). Dentre os casos que apresentaram formas pequenas do Paracoccidioides, todos eram fumantes, tinham idades variando entre 33 e 68 anos (média = 55,58 anos), 10 eram do sexo masculino, e 10 apresentavam sintomas consistentes com os da PCM (dois pacientes eram assintomáticos). O diagnóstico etiológico, em todos os casos, foi realizado por meio de cortes histológicos seriados corados ao GMS (que revelaram as formas multibrotantes patognomônicas do Paracoccidioides) e corroborado por exame direto do escarro (n=3), imunodifusão (n=6) e cultura (n=1). Com isto, ressalta-se a importância da consideração dos diagnósticos diferenciais da paracoccidioidomicose. Visto que a sarcoidose é um diagnóstico de exclusão, o achado de granulomas epitelioides sem necrose deve incitar a busca ativa por agentes etiológicos com a utilização das colorações de ZN e GMS. E nos casos em que se encontram formas pequenas ou pouco usuais do Paracoccidioides, devem-se realizar cortes histológicos seriados e escalonados corados ao GMS e utilizar técnicas laboratoriais complementares, como imunodifusão e cultura, para assegurar o seu diagnóstico. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic infection caused by the fungus Paracoccidioides sp. The disease is endemic in most Latin American countries, and the lungs are the most affected organs. The diagnosis of PCM is based on clinical and epidemiological features, and confirmed by the microscopic visualization of yeasts of Paracoccidioides from clinical specimens. Sometimes the clinical presentation and histopathological findings of PCM mimic those of other diseases, such as sarcoidosis, and occasionally exceedingly small forms of Paracoccidioides are found in lesions, which can be confused with other fungi, such as Histoplasma capsulatum. This study aimed to identify and characterize the cases that simulated sarcoidosis and those with small forms of Paracoccidioides among the 856 cases of paracoccidioidomycosis diagnosed in the Mycology Laboratory of the Hospital Complex Santa Casa de Porto Alegre, from 1981 to December 2013. 8 cases were identified mimicking sarcoidosis and 12 with small forms of Paracoccidoides. All the cases that mimicked sarcoidosis were male smokers, aged between 27 and 59 years (mean = 42.5 years) and had productive cough, bilateral fibronodular infiltrates on X-ray and sarcoid granulomas in the lung biopsy, receiving prednisone as initial treatment. The diagnosis of PCM in these cases was carried out by histological sections stained with GMS (n = 8), direct examination of sputum (n = 2) and immunodiffusion (n = 4). Among the cases with small forms of Paracoccidioides, all were smokers, aged between 33 and 68 years (mean = 55.58 years), 10 were male, and 10 had symptoms consistent with PCM (two patients were asymptomatic). The etiologic diagnosis in all the 12 cases was made by serial tissue sections stained with GMS (which revealed the multibudding pathognomonic forms of Paracoccidioides) and confirmed by direct examination of sputum (n = 3), immunodiffusion (n = 6) and culture (n = 1). In conclusion, it is emphasized the importance of considering the differential diagnosis of paracoccidioidomycosis. Since sarcoidosis is a diagnosis of exclusion, the finding of epithelioid granulomas without necrosis should encourage the active search for etiologic agents with the use of ZN and GMS stains. And in cases in which small or unusual forms of Paracoccidioides are found, serial histological sections stained with GMS and complementary laboratory techniques such as immunodiffusion and culture should be performed to ensure their diagnosis.

A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica caracterizada por ser uma doença granulomatosa. As formas benignas da doença são caracterizadas por uma infecção localizada, contendo granulomas compactos com poucos fungos; já nas formas mais graves, ocorre um processo granulomatoso frouxo com focos de necrose e intensa disseminação fúngica. Objetivou-se avaliar o desenvolvimento de lesões granulomatosas em baço, fígado, pulmão e epiplon de camundongos, após infecção pela via intraperitoneal com o isolado de alta virulência, Pb18, em diferentes períodos de infecção após tratamento com fármacos, os quais possuem mecanismo de ação relacionado com a alteração no balanço entre a síntese e degradação dos produtos do colágeno, interferindo diretamente na formação do granuloma A citocina IFN-<font face=\"Symbol\">g, o antibiótico Tetraciclina e as drogas antiinflamatórias Lumiracoxib e Celecoxib. Avaliamos a presença de alguns componentes do granuloma (colágeno, células do infiltrado inflamatório, de citocinas primordiais para sintese/degradação da MEC do granuloma, presença de P. brasiliensis). / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis that is endemic in Latin America, whose causative agent is the thermal dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb). PCM is a granulomatous disease, and the formation of granulomas can be understood as a mechanism of the body to block and limit the invasiveness of the fungus or its antigenic components, once unable to lyse them. Bening forms of the disease are characterized by a localized infection, where granulomasa are compact and contain few fungi. More severe forms present loose granulomatous processes with foci of necrosis and severe fungal. Studies in which granulomatous response was developed in resistant (A/J) and susceptible (B10.A) mice to the high virulence isolate Pb18 showed the presence of different patterns of injuries related to the type of extracellular matrix (ECM) components and the different cells types in the area, suggesting a important role of these elements in the formation and constitution of the granuloma and thus the outcome of infection. In our project, we aimed to evaluate the development of granulomatous lesions in the spleen, liver, lung and omentum of mice susceptible to PCM after intraperitoneal infection with Pb18, at different periods of infection (acute and chronic) with or without treatment with drugs. These drugs have mechanisms of action closely related to the change in the balance between synthesis and degradation of collagen Thus, they interfere directly in the granuloma formation and in maintaining the viability of fungi and also with the development of fibrosis. Which is a common and devastating sequelae of numerous infections including the PCM, with the characteristic proliferation of fibroblasts and deposition of ECM. The treatments were chosen based on prior knowledge on their effects on the course of experimental murine PCM. IFN-<font face=\"Symbol\">g was chosen due to its antifibrotic effect, being an activator of macrophages in infection by P. brasiliensis and increasing the fungicidal effect of neutrophils. The antibiotic tetracycline was used because of its inhibitory effect on the synthesis of extracellular matrix, limiting antimicrobial activity and the ability of collagenase to degrade ECM. Finally, the antiinflammatory drugs Celecoxib and Lumiracoxib (inhibitors of the COX-2 enzyme) 11 were used because they cause an increase in the expression of collagen type III and type IV. We analyzed the components of the granuloma (collagen, inflammatory cells, cytokines essential for synthesis / degradation of the ECM of the granuloma, the presence of P. brasiliensis). Among the cytokines analyzed, we studied the importance of TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 in the formation of granulomas and regulation of matrix metalloproteinases (MMP) synthesis and function. We analyzed TGF-<font face=\"Symbol\">b because it negatively modulate the secretion of nitric oxide by macrophages and promote the accumulation of ECM and is believed to be the central mediator of the process of fibrosis in several pathologies. IFN-<font face=\"Symbol\">g was studied because of its correlation to the preferential Th1 immune response in diseases and infectious processes of fungal and bacterial infections, and also because it modulates fibroblast function.

A presença de IFN-<font face=\"symbol\">g, NO, OPN e MMPs foi avaliada em camundongos infectados com o fungo Paracoccidioides brasiliensis (Pb). Aos 15 dias, IFN-<font face=\"symbol\">g foi observado em granulomas (Gr), aumentando em resistentes (A/J) aos 120d. Suscetíveis (B10.A) tiveram mais macrófagos e células gigantes (CGs) OPN+, alta carga fúngica e baixo NO aos 15d. A/J tiveram aumento em OPN, maior NO e menor carga fúngica do que B10.A aos 120d. Camundongos infectados apresentaram MMP9 em macrófagos, GCs e Pb e atividade de MMP9 e MMP2. Aos 15d, KOiNOS tiveram Gr com necrose, debris de Pb e OPN e seus controles, Gr com muitos Pbs e OPN. Aos 120d, os controles apresentaram Gr extensos contendo muitos Pbs e expressão de OPN; KOiNOS tiveram Gr compactos com células OPN+ ou lesões residuais com pouca OPN e baixa carga fúngica. Maiores níveis de OPN foram detectados em KOiNOS. A OPN está associada com gravidade no início da infecção, mas com certo controle na fase tardia e no desenvolvimento e organização do Gr. Sugere-se que a presença de MMPs exerça influência no padrão do Gr e na disseminação fúngica. / We studied IFN-<font face=\"symbol\">g, NO, OPN and MMPs in mice infected with the fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb). IFN-<font face=\"symbol\">g was found in granulomas (Gr) at 15d and increased in resistant mice (A/J) at 120d. At 15d, macrophages and giant cells (MGCs) were more OPN+ in susceptible mice (B10.A) which had high fungal load and low NO. At 120d, A/J had numerous intensely stained OPN(+) cells and higher NO and lower fungal load than B10.A. MMP9 was found in macrophages, MGCs and Pb of infected mice, which had MMP9 and MMP2 activity. At 15d, KOiNOS had Gr with necrosis, altered Pb and OPN; controls had Gr with many Pb and OPN. At 120d, controls had large Gr with many Pb and OPN expression; KOiNOS had compact Gr with OPN+ cells or residual Gr with weak OPN and decreased fungal load. More OPN levels were detected in KOiNOS. OPN is associated with infection severity at the beginning and with some control at later stages of infection and is involved in Gr development and organization. We show the presence of MMPs and suggest their influence in Gr pattern and in Pb dissemination.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-28T13:34:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - Gabriela Calixto - Versão digital.pdf: 1903341 bytes, checksum: 0172917edb1a1f8a1512d8519caed260 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T13:34:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - Gabriela Calixto - Versão digital.pdf: 1903341 bytes, checksum: 0172917edb1a1f8a1512d8519caed260 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CNPq / Infecções maternas por Schistosoma mansoni modulam a imunidade de descendentes adultos em infecções pós-natais. Avaliou-se separadamente o efeito da amamentação ou gestação neste fenômeno através do grau de fibrose hepática, produção de citocinas Th1, Th2 e regulatórias, frequência de macrófagos produtores de NO e IL-10 e linfócitos T regulatórios em camundongos adultos, descendentes de mães esquistossomóticas, quando submetidos a infecção pós-natal. Para isto, fêmeas Swiss webster foram submetidas a infecção com S. mansoni (20 cercárias), sincronização do estro e acasalamento. Após nascimento, foi realizada a amamentação adotiva, em que descendentes de mães infectadas mamaram nas mães não infectadas (MI) e filhotes de mães não infectadas foram amamentados pelas mães infectadas (AI). Outro grupo de animais nascidos de mães esquistossomóticas permaneceu amamentando nas próprias mães (MIAI). Para grupo CONTROLE utilizou-se animais nascidos e amamentados em mães não infectadas. Descendentes adultos (machos) foram infectados (80 cercárias) e 60 dias pós-infecção, os animais tiveram os esplenócitos cultivados apenas com meio de cultura ou acrescentado de SWAP (12,5 μg/mL) ou ConA (5 μg/ml). Após 24 h e 72 h os sobrenadantes foram dosados para IL-4; IL-5; IL-10; IFN-γ, TGF-β; NO e as células usadas para imunofenotipagem, com anticorpos monoclonais ligados a fluorocromos para CD4+FoxP3, CD16/CD32+NOS2, CD14+IL-10+. O tecido hepático dos animais foi submetido a histomorfometria. Em relação ao Controle, o grupo MI apresentou frequênciaaumentada de CD16/CD32+NOS2+, maior produção de NO, IL-5 e IL-10, com diminuição de IFN- e, em comparação ao grupo MIAI, maior número e tamanho dos granulomas. O grupo AI, em relação ao Controle, obteve maior frequência de CD16/CD32+NOS2+, maiores níveis de TGF-β, menos IL-5, NO e IFN-. Em relação ao MIAI, tamanho maior de granuloma. O grupo MIAI apresentou menor número e tamanho de granulomas com menor produção de IFN- e NO, maior de IL-10 e TGF-β, além de maior frequência de células CD4+/FoxP3+. Não houve diferença nos níveis de células CD14+/IL-10+. Em conclusão, a gestação seguida da amamentação em mães esquistossomóticas proporcionou uma diminuição da reação granulomatosa e, além da produção da IL-10 (dependente da gestação) e de TGF-β (dependente da amamentação), as células T com fenótipo regulatório são requeridas para este fenômeno. / Maternal infections by Schistosoma mansoni modulate adult offspring immunity in postnatal infections. Here, was evaluated separately the effect of breastfeeding and pregnancy in this phenomenon by the degree of hepatic fibrosis, the production of Th1, Th2 and regulatory cytokines, the expression of macrophages producing NO and IL-10, and regulatory T lymphocytes in adult offspring from schistosomotic mothers when subjected to post-natal infection.Swiss webster females were subjected to infection with S. mansoni (20 cercariae), synchronization of estrus and mating. After birth, adoptive breastfeeding was held in which offspring of infected mothers breastfed in uninfected mothers (BIM) and offspring of uninfected mothers were breastfed by infected mothers (SIM). Another group of animals born in schistosomotic mothers breastfeeding remained in their mothers (BSIM). To control group was used animals born and breastfed in uninfected mothers. Male offsprings were infected when adults (80 cercariae) and 60 days post-infection animals splenocytes were cultured with medium alone or added with SWAP (12.5 μg/ml) and ConA (5 μg/ml). After 24 h and 72 h the supernatants were assayed for IL-4; IL-5; IL-10; INF-γ; TGF-β; NO and the cells used for immunophenotyping with monoclonal antibodies bound to fluorochromes for CD4+FoxP3+, CD16/CD32+NOS2+, CD14+IL-10+. The liver tissue were subjected to histomorphometry. Compared to control, the BIM group showed increased frequency of CD16/CD32+NOS2+, increased production of NO, IL-5 and IL-10, a reduction of IFN- and compared to BSIM group, the greater number and size of granulomas. The SIM group compared control, had a higher frequency of CD16/CD32+NOS2+, higher TGF-β levels, less IL-5, NO and IFN-. Regarding BSIM, greater granuloma size. The BSIM group showed smaller number and size of granulomas with lower production of IFN- and NO, increased IL-10 and TGF-β, as well as higher frequency of CD4+/FoxP3+ cells. There was no difference in the levels of CD14+/IL-10+ cells. In conclusion, gestation followed by breastfeeding in schistosomotic mothers provided a reduction in granulomatous reaction, and besides the production of IL-10 (dependent on gestation) and TGF-β (dependent breast feeding) T cells with regulatory phenotype are required to this phenomenon.

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Neste sentido, a lignana Arctiina extraída da espécie Arctium lappa, cujas funções anti-inflamatórias e antiproliferativas já foram descritas na literatura, se tornou alvo do nosso estudo. O nosso propósito foi pesquisar a sua ação esquistossomicida através de testes in vitro e em modelo murino. A substância foi utilizada nas concentrações de 30, 60, 120 e 240 µg/mL nos ensaios in vitro. Após o período de incubação, em nenhuma das concentrações, a molécula foi capaz de promover modificação na viabilidade do parasito em cultura quando comparado ao grupo controle. Após a administração por via intraperitoneal, para verificar a presença da substância no plasma murino, foi realizada uma análise cromatográfica. A análise da amostra de arctiina pura, diluída em metanol, e diluída em plasma murino não tratado mostrou um pico no cromatograma medido a 254 nm, com retenção de 5 minutos. A amostra de plasma animal coletada após uma hora de tratamento com arctiina, sob as mesmas condições experimentais, revelou um pico semelhante ao da amostra pura, confirmando que a arctiina está disponível no plasma após administração. Os testes in vivo, foram realizados em camundongos fêmeas da linhagem Swiis que receberam por via intraperitoneal duas dosagens de arctiina (50 mg/kg), sendo a primeira administrada 20 dias após a infecção e a segunda após duas semanas. Nos parâmetros analisados: peso hepático, leucometria global, redução da carga parasitária e alteração no oograma, não foi verificado nenhuma alteração significativa em relação aos parâmetros encontrados no grupo controle infectado, tratado com praziquantel (200 mg/kg) e Dimetilsulfóxido (0,5%). O resultado mais promissor foi uma redução das médias das áreas dos granulomas, a administração da arctiina provocou uma redução em torno de 20% em comparação com o controle infectado. Mais estudos devem ser realizados a fim de verificar o possível mecanismo de atuação sobre os componentes inflamatórios presentes na formação do granuloma. / Schistosomiasis is one of the most significant neglected tropical diseases in the world. Only one drug is currently available for the treatment and control of schistosomiasis, therefore there is an urgent need for the development of new schistosomicide compounds, being natural products an important source of these molecules. Hence, in this work we studied the lignan arctiin extracted from Arctium lappa species, whose anti-inflammatory and antiproliferative functions have been previously described. Our aim was to investigate in vitro and in vivo its schistosomicidal activity. We tested the compound in vitro at the follow concentrations 30, 60, 120 and 240 ug/ml. There was no difference in all tested concentrations in the viability of the parasite in the culture after the incubation when compared to the control group. In addition we verified the plasmatic concentration of arctiin after intraperitoneal administration in mice by chromatographic analysis. The analysis of pure arctiin diluted in either methanol or mouse plasma showed a peak in the chromatogram at retention time of 5 minutes, absorbance was measured at 254 nm. Animal plasma sample collected one hour after treatment with arctiin was analyzed under same experimental conditions and revealed a similar peak, confirming the availability of arctiin in the plasma following administration. The in vivo tests were performed in Swiss female mice, those were intraperitoneally injected with two dosages of arctiin (50 mg/kg) - the first administered 20 days after infection and the second two weeks later. The follow parameters were analyzed: liver weight, white blood cell count, parasitic load and oogram. We did not find any significant change in those parameters comparing infected control groups treated either with praziquantel (200 mg / kg) or dimethyl sulfoxide (0.5 %) to the group treated with arctiin. The most promising result was the reduction around 20% of the average area of the granuloma in the arctiin group compared with the infected control. More studies are needed to verify possible mechanisms of action of this molecule in inflammatory components that play a role in granuloma formation.