Orientadores: Ilka de Fatima Santana Ferreira Boin, Raquel Silveira Bello Stucchi / Tese (doutorador) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T02:50:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_AnaCarolinaGuardiada_D.pdf: 4973684 bytes, checksum: b2c754b94b99a119ae7e84ac207a9555 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Introdução: As infecções oportunistas constituem um dos principais problemas para os transplantados de fígado. O Citomegalovírus (CMV) e o Herpesvirus humano 6 (HHV- 6) são patógenos oportunistas freqüentes nesses pacientes, e o HHV-6 tem sido associado a várias desordens tais como a encefalite. A PCR em tempo real (RT-PCR) é o padrão ouro de diagnóstico para os herpesvirus, pois tem melhor precisão, maior rendimento e menos risco de contaminação em comparação com outros testes convencionais. Objetivo: Este estudo teve como objetivo avaliar a cinética viral do HHV-6 e CMV por RT-PCR nos pacientes submetidos ao transplante hepático correlacionando-a com a presença de encefalite e complicações clínicas ocorridas no período pós-transplante. Método: Foram analisadas prospectivamente pela RT- PCR a carga viral do CMV e HHV-6 de 30 pacientes transplantados de fígado. A monitorização dos pacientes foi realizada prospectivamente desde o pré-transplante (imediatamente antes do ato cirúrgico - dia zero) com amostras do doador e receptor, e no pós-transplante: 2ª, 3ª, 4ª, 6ª, 8ª, 10ª e 12ª semanas, somando 270 amostras de soro. O protocolo foi seguido de acordo com os requerimentos para pesquisas e foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisada da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Estadual de Campinas (CEP nº 430/2003). Os achados clínicos foram obtidos através dos prontuários. Para a detecção e quantificação do DNA dos vírus CMV e HHV-6 foram usados os Kits comerciais "CMV Real-TM Quant" e "HHV-6 Real-TM Quant". Os testes de Nested-PCR e antigenemia foram realizados rotineiramente para o vírus CMV, pelos laboratórios do HC-Unicamp, e seu resultados obtidos eletronicamente. A análise estatística comparou as variáveis categóricas usando o teste exato de Fisher. Para identificar os fatores associados ao aumento da carga viral foi utilizado o método das Equações de Estimação Generalizadas e medidas de acurácia. Resultados: Treze (43%) dos 30 pacientes apresentaram infecção pelo HHV-6 e 26 (86%) apresentaram infecção pelo CMV. Nove pacientes apresentaram encefalite após o transplante de fígado sendo que sete deles tiveram infecção pelo HHV-6 (p=0,0012), assim com o aumento da carga viral do HHV-6 se constatou a presença de encefalite após o transplante de fígado (p= 0.0226). O RT- PCR (p= 0,0306) para o CMV mostrou aumento significativo na segunda a quarta semana e décima a décima segunda semanas em relação aos outros testes, mostrando-se também mais sensível. Conclusão: concluímos que o aumento da carga viral do HHV-6 foi associado com a presença de encefalite após o transplante de fígado e a técnica de PCR em tempo real se mostrou como o teste mais sensível para detecção e monitorização do CMV nos pacientes transplantados de fígado / Abstract: Introduction: Opportunistic infections are a major problem for liver transplantation patients. Cytomegalovirus (CMV) and human herpesvirus 6 (HHV-6) are opportunistic common pathogens and HHV-6 has been associated with several disorders such as encephalitis. Real-time PCR (RT-PCR) is the gold standard for diagnosis of herpesvirus, as it has better accuracy, higher efficiency and less risk of contamination compared to other conventional tests. Objective: The aim of study was to evaluate the viral kinetics of HHV-6 and CMV by RT-PCR in patients undergoing liver transplantation and correlated with the presence of encephalitis complications occurring in the post-transplant period. Methods: We prospectively analyzed by RT-PCR the viral load of CMV and HHV-6 in 30 liver transplant patients. Monitoring of patients was performed prospectively from pretransplant (immediately before surgery-day zero) with donor and recipient samples and posttransplant: 2nd, 3rd, 4th, 6th, 8th, 10th and 12th weeks with a total of 270 serum samples. The protocol was followed according to the requirements for research and was approved by the Ethics Research Committee of the Faculty of Medical Sciences State University of Campinas (CEP nº 430/2003). The clinical findings were obtained from the medical records. For detection and quantification of DNA of the CMV and HHV-6 virus the commercial kits "Real- CMV Quant TM" and "HHV-6 Real -TM Quant" were used. Nested-PCR and antigenemia tests were performed routinely for CMV virus and their results obtained electronically. Statistical analysis comparing categorical variables was applied using Fisher exact test. To identify associated factors with increased viral load the method of Generalized Estimation Equation (GEE) and the accuracy and precision was used. Results: Thirteen (43 %) of the thirty patients had HHV-6; 26 (86 %) had CMV infection. Nine patients had encephalitis after liver transplantation and seven of them had HHV-6 (p = 0.0012) and with an increasing viral load of HHV-6 the presence of encephalitis after liver transplantation was found (p = 0.0226). RT-PCR (P = 0.0306 ) CMV showed a significant increase at the 2nd to 4th week and 10th to 12th week compared to the other tests, having also more sensibility. Conclusion: We concluded that the increase in viral load of HHV-6 was associated with the presence of encephalitis after liver transplantation and the technique of real-time PCR was shown to be the best sensibility test for the detection and monitoring of CMV in our liver transplant patient / Doutorado / Fisiopatologia Cirúrgica / Doutora em Ciências da Cirurgia

A radioterapia para tratamento das neoplasias malignas em região de cabeça e pescoço é acompanhada de diversas complicações, decorrentes do comprometimento dos tecidos radiossensíveis localizados próximos ao tumor. Entre essas complicações a mucosite é a que merece maior destaque. A mucosite é uma reação tóxica inflamatória da mucosa oral causada pelo tratamento citorredutivo induzido pela radioterapia (RT) ou pela quimioterapia (QT). Ela manifesta-se com sinais de edema, eritema, úlcera e formação pseudomembrana, resultando em sintomas de ardência, que pode progredir para dor intensa e consequente prejuízo na alimentação e comunicação verbal. Infecções bacterianas, fúngicas ou virais podem acometer a mucosa bucal irradiada e exacerbar a manifestação da mucosite oral por meio da ativação de fatores de transcrição da resposta inflamatória. Existem poucos dados na literatura sobre a participação dos herpesvirus humanos na mucosite oral induzida pela radioterapia. A proposta desse trabalho foi avaliar a excreção oral dos herpesvirus humanos (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, VZV, HHV6, HHV7 e HHV8) e sua possível associação com o desenvolvimento e agravamento da mucosite oral, em pacientes diagnosticados com carcinoma epidermoide (CEC) de boca e orofaringe, submetidos à radioterapia associado à quimioterapia. Nesse estudo foram analisadas 158 amostras de lavado bucal, de 20 pacientes, submetidos à radioterapia para CEC em região de cabeça e pescoço, coletadas semanalmente, durante todo o tratamento. Foi realizada a extração do DNA dessas amostras e em seguida sua amplificação através da PCR utilizando dois conjuntos de primers: HSVP1/P2 para os subtipos HSV-1, HSV-2, EBV, CMV e HHV-8 e o VZVP1/P2 para os subtipos VZV, HHV-6 e HHV-7. As amostras positivas foram submetidas à digestão enzimática com enzimas de restrição BamHI e BstUI para determinação específica de cada um dos oito herpesvirus. Foi também avaliada clinicamente, a mucosite oral, em cada uma das coletas, seguindo os critérios da OMS e NCIC. As análises da amostra mostraram a excreção do EBV, HHV-6 e HHV-7, em todas as semanas de tratamento radioterápico, enquanto que a excreção do HSV1 não pode ser observada no momento da triagem. Considerando-se todos os períodos em conjunto (Triagem, semanas de radioterapia e Controle), a maior frequência foi de pacientes que excretaram EBV (55,0%), seguida daqueles que excretaram HHV-7 (20,5%). A frequência de excreção de EBV foi significativamente maior do que a dos demais vírus (Teste ?2, p<0.001 para todos os cruzamentos). A frequência de excreção de HHV-7 foi significativamente maior do que a de HSV-1 (5,9%) e HHV-6 (5,5%) (Teste ?2, p=0.001 para ambos os cruzamentos). Não houve diferenças estatísticas significantes entre as frequências de HSV-1 e HHV-6. Como conclusão, verificou-se uma correlação positiva entre a excreção oral do EBV e a presença de mucosite induzida pela associação de radioterapia e quimioterapia com graus >=2, sobretudo se considerarmos as três últimas semanas de radioterapia, período este em que a severidade da mucosite foi estatisticamente maior. Esses achados nos possibilitam inferir que o ambiente inflamatório local de mucosites com grau >=2 seja mais favorável para excreção oral do EBV. / The radiotherapy (RT) treatment for head and neck tumors is accompanied by various complications resulting from the damage of the radiosensitive tissues located close to the tumor. Among these complications, mucositis is the one that deserves a special attention. Mucositis is an inflammatory toxic reaction of the oral mucosa caused by cytoreductive treatment induced by radiotherapy (RT) or chemotherapy (QT). The clinical manifestations of mucositis are: edema, erythema, ulcers and pseudo membrane formation, resulting in symptoms of burning, which may progress to severe pain and consequent loss in deglutition and verbal communication. The development of bacterial, fungal or viral infections, may affect the oral mucosa that has been irradiated, exacerbating the manifestation of oral mucositis through the activation of transcription factors of the inflammatory response. There are few data in the literature on the participation of human herpesvirus in oral mucositis caused by radiotherapy treatment. The aim of this study is to evaluate the oral excretion of human herpesvirus (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, VZV, HHV6, HHV7 and HHV-8) and its possible association with the development and aggravation of oral mucositis, in patients diagnosed with squamous cell carcinoma (CEC) of oral cavity and oropharynx, undergoing radiotherapy treatment associated with chemotherapy. On our study, we analyzed 158 oral rinsing samples, collected weekly, from 20 patients during the whole radiotherapy treatment for squamous cell carcinoma in head and neck. From these samples, we extracted the DNA and afterwards we amplified them with PCR using two sets of primers: HSVP1/P2 for the subtypes HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, and HHV-8 and VZVP1/P2 for the subtypes VZV, HHV 6, and HHV-7. The positive samples were subjected to enzymatic digestion with BamHI and BstUI restriction enzymes for specific determination of each one, of the eight\'s herpesvirus. It has also been clinically evaluated in each time, the oral mucositis, following the WHO and NCIC criteria. The analysis of the sample showed the excretion of EBV, HHV-6 and HHV-7, in all the weeks of radiotherapy, whereas the excretion of HSV-1 could not be observed during screening. Considering all periods together (Screening, weeks of radiotherapy and Follow up), the highest frequency was of patients with EBV excretion (55.0%), followed by those with HHV-7 excretion (20.5%). EBV shedding frequency was significantly higher than the other viruses (?2 test, p <0.001 for all junctions). The frequency of HHV-7 excretion was significantly higher than the HSV-1 excretion (5.9%), and HHV-6 excretion (5.5%) (?2 Test, p = 0.001 for both junctions). There were no statistically significant differences between the frequencies of HSV-1 and HHV- 6. In conclusion, there was a positive correlation between oral EBV excretion and the presence of grade >=2 of mucositis caused by radiotherapy associated with chemotherapy, particularly if we consider the last three weeks of radiotherapy, a period in which the severity of mucositis was statistically higher. These findings allow us to infer that the local inflammatory environment of mucositis grade >=2, is more favorable for oral excretion of EBV.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 433347.pdf: 402554 bytes, checksum: 52bf760eed71594340bcbb1efd3cb4a1 (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / O Herpesv?rus Humano tipo 6 (HHV-6) ? um v?rus da fam?lia Herpesviridae associado ao desenvolvimento de ros?ola infantil ou exantema s?bito, doen?a caracterizada por febre alta, rash cut?neo e ocasionalmente convuls?es febris. A preval?ncia mundial de infec??o por HHV-6 ? alta. Estima-se que cerca de 83% das crian?as at? 13 meses e mais de 95% das com idade at? 2 anos j? entraram em contato com o v?rus. Existem duas variantes do HHV-6 j? identificadas, as variantes A e B, sendo o HHV-6B o agente principal relacionado aos casos de ros?ola infantil. Epilepsia ? um termo aplicado a um grupo de patologias cr?nicas caracterizadas, principalmente, pela ocorr?ncia de crises epil?pticas. As epilepsias representam em torno de 1% dos dist?rbios neurol?gicos que afetam a popula??o mundial. As crises s?o provocadas por uma disfun??o da atividade el?trica cerebral associada a anormalidades estruturais e metab?licas causadas, em alguns casos, pela presen?a de v?rus no sistema nervoso central. Por apresentar caracter?sticas como neurotropismo e lat?ncia no sistema nervoso central, procuramos relacionar o HHV-6 com a epilepsia do lobo temporal mesial (ELTM). Atrav?s de rea??o em cadeia da polimerase (PCR), pesquisamos a presen?a do v?rus em 42 amostras de hipocampo de 14 pacientes com epilepsia do lobo temporal mesial (ELTM) submetidos a am?gdalo-hipocampectomia (AH) ou lobectomia temporal anterior (LTA) como tratamento para a epilepsia. Tr?s amostras de cada paciente foram analisadas: cabe?a, corpo e cauda do hipocampo. O DNA do HHV-6 foi detectado em 12 dos 14 pacientes (85,7%) com ELTM. Tr?s pacientes foram positivos em todas as tr?s amostras, 4 pacientes foram positivos em duas amostras e 5 em apenas uma amostra. Com rela??o ? origem das amostras, 7 foram positivas na cabe?a do hipocampo, 8 no corpo do hipocampo e 7 na cauda do hipocampo, demonstrando n?o haver um s?tio de prefer?ncia para o estabelecimento do v?rus. A positividade para HHV-6 encontrada nos pacientes deste estudo ? maior do que os dados encontrados na literatura. Uma poss?vel explica??o para esta elevada positividade poderia ser as diferen?as na concep??o do estudo, com tr?s amostras coletadas de cada paciente, o que II pode ser mais representativo do que a coleta de apenas uma amostra. Nossos resultados refor?am a hip?tese de um poss?vel papel da infec??o pelo HHV-6 na epilepsia.

A radioterapia para tratamento das neoplasias malignas em região de cabeça e pescoço é acompanhada de diversas complicações, decorrentes do comprometimento dos tecidos radiossensíveis localizados próximos ao tumor. Entre essas complicações a mucosite é a que merece maior destaque. A mucosite é uma reação tóxica inflamatória da mucosa oral causada pelo tratamento citorredutivo induzido pela radioterapia (RT) ou pela quimioterapia (QT). Ela manifesta-se com sinais de edema, eritema, úlcera e formação pseudomembrana, resultando em sintomas de ardência, que pode progredir para dor intensa e consequente prejuízo na alimentação e comunicação verbal. Infecções bacterianas, fúngicas ou virais podem acometer a mucosa bucal irradiada e exacerbar a manifestação da mucosite oral por meio da ativação de fatores de transcrição da resposta inflamatória. Existem poucos dados na literatura sobre a participação dos herpesvirus humanos na mucosite oral induzida pela radioterapia. A proposta desse trabalho foi avaliar a excreção oral dos herpesvirus humanos (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, VZV, HHV6, HHV7 e HHV8) e sua possível associação com o desenvolvimento e agravamento da mucosite oral, em pacientes diagnosticados com carcinoma epidermoide (CEC) de boca e orofaringe, submetidos à radioterapia associado à quimioterapia. Nesse estudo foram analisadas 158 amostras de lavado bucal, de 20 pacientes, submetidos à radioterapia para CEC em região de cabeça e pescoço, coletadas semanalmente, durante todo o tratamento. Foi realizada a extração do DNA dessas amostras e em seguida sua amplificação através da PCR utilizando dois conjuntos de primers: HSVP1/P2 para os subtipos HSV-1, HSV-2, EBV, CMV e HHV-8 e o VZVP1/P2 para os subtipos VZV, HHV-6 e HHV-7. As amostras positivas foram submetidas à digestão enzimática com enzimas de restrição BamHI e BstUI para determinação específica de cada um dos oito herpesvirus. Foi também avaliada clinicamente, a mucosite oral, em cada uma das coletas, seguindo os critérios da OMS e NCIC. As análises da amostra mostraram a excreção do EBV, HHV-6 e HHV-7, em todas as semanas de tratamento radioterápico, enquanto que a excreção do HSV1 não pode ser observada no momento da triagem. Considerando-se todos os períodos em conjunto (Triagem, semanas de radioterapia e Controle), a maior frequência foi de pacientes que excretaram EBV (55,0%), seguida daqueles que excretaram HHV-7 (20,5%). A frequência de excreção de EBV foi significativamente maior do que a dos demais vírus (Teste ?2, p<0.001 para todos os cruzamentos). A frequência de excreção de HHV-7 foi significativamente maior do que a de HSV-1 (5,9%) e HHV-6 (5,5%) (Teste ?2, p=0.001 para ambos os cruzamentos). Não houve diferenças estatísticas significantes entre as frequências de HSV-1 e HHV-6. Como conclusão, verificou-se uma correlação positiva entre a excreção oral do EBV e a presença de mucosite induzida pela associação de radioterapia e quimioterapia com graus >=2, sobretudo se considerarmos as três últimas semanas de radioterapia, período este em que a severidade da mucosite foi estatisticamente maior. Esses achados nos possibilitam inferir que o ambiente inflamatório local de mucosites com grau >=2 seja mais favorável para excreção oral do EBV. / The radiotherapy (RT) treatment for head and neck tumors is accompanied by various complications resulting from the damage of the radiosensitive tissues located close to the tumor. Among these complications, mucositis is the one that deserves a special attention. Mucositis is an inflammatory toxic reaction of the oral mucosa caused by cytoreductive treatment induced by radiotherapy (RT) or chemotherapy (QT). The clinical manifestations of mucositis are: edema, erythema, ulcers and pseudo membrane formation, resulting in symptoms of burning, which may progress to severe pain and consequent loss in deglutition and verbal communication. The development of bacterial, fungal or viral infections, may affect the oral mucosa that has been irradiated, exacerbating the manifestation of oral mucositis through the activation of transcription factors of the inflammatory response. There are few data in the literature on the participation of human herpesvirus in oral mucositis caused by radiotherapy treatment. The aim of this study is to evaluate the oral excretion of human herpesvirus (HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, VZV, HHV6, HHV7 and HHV-8) and its possible association with the development and aggravation of oral mucositis, in patients diagnosed with squamous cell carcinoma (CEC) of oral cavity and oropharynx, undergoing radiotherapy treatment associated with chemotherapy. On our study, we analyzed 158 oral rinsing samples, collected weekly, from 20 patients during the whole radiotherapy treatment for squamous cell carcinoma in head and neck. From these samples, we extracted the DNA and afterwards we amplified them with PCR using two sets of primers: HSVP1/P2 for the subtypes HSV-1, HSV-2, EBV, CMV, and HHV-8 and VZVP1/P2 for the subtypes VZV, HHV 6, and HHV-7. The positive samples were subjected to enzymatic digestion with BamHI and BstUI restriction enzymes for specific determination of each one, of the eight\'s herpesvirus. It has also been clinically evaluated in each time, the oral mucositis, following the WHO and NCIC criteria. The analysis of the sample showed the excretion of EBV, HHV-6 and HHV-7, in all the weeks of radiotherapy, whereas the excretion of HSV-1 could not be observed during screening. Considering all periods together (Screening, weeks of radiotherapy and Follow up), the highest frequency was of patients with EBV excretion (55.0%), followed by those with HHV-7 excretion (20.5%). EBV shedding frequency was significantly higher than the other viruses (?2 test, p <0.001 for all junctions). The frequency of HHV-7 excretion was significantly higher than the HSV-1 excretion (5.9%), and HHV-6 excretion (5.5%) (?2 Test, p = 0.001 for both junctions). There were no statistically significant differences between the frequencies of HSV-1 and HHV- 6. In conclusion, there was a positive correlation between oral EBV excretion and the presence of grade >=2 of mucositis caused by radiotherapy associated with chemotherapy, particularly if we consider the last three weeks of radiotherapy, a period in which the severity of mucositis was statistically higher. These findings allow us to infer that the local inflammatory environment of mucositis grade >=2, is more favorable for oral excretion of EBV.

Orientador: Estela Kaminagakura / Coorientadora: Patrícia Pimentel de Barros / Banca: Ana Sueli Rodrigues Cavalcant / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Lia Mizobe Ono / Banca: Luciana Yamamoto de Almeida / Resumo: A papilomatose laríngea é uma neoplasia benigna causada pelo papilomavírus humano (HPV), sendo os tipos 6 e 11 os mais comuns, e que ocorre em dois grupos etários, juvenil e adulto. A possível coinfecção viral tem sido sugerida em lesões de cabeça e pescoço; nesse sentido, o Epstein Barr vírus (EBV), que também apresenta tropismo por células epiteliais vem sendo estudado neste grupo de lesões. Os objetivos deste estudo foram genotipar os HPVs, investigar a presença de EBV-DNA por PCR e EBV-RNA por hibridização in situ. Além disso, associar a presença de EBV com a imunoexpressão de CD21, os resultados obtidos com a escala laringoscópica de Derkay et al. (1998) e com os dados clinicopatológicos. Oitenta casos de papilomatose laríngea, juvenil (n=36) e adulta (n=44), foram retrospectivamente analisados e subdivididos em grupos de menor e maior severidade, baseando-se na escala de Derkay. Todas as amostras foram HPV posivitas, com 49 casos HPV 6, 26 casos HPV 11, 4 casos HPV 6 e 11, e 1 caso HPV 16. A presença de EBV-DNA foi detectada em 9 amostras, entretanto EBV-RNA não foi não foi identificado em nenhuma amostra. Assim como a presença do EBV-DNA, a imunoexpressão de CD21 não se associou estatisticamente com quaisquer variáveis. A presença de HPV 6 foi mais comum em PLA e, o HPV 11 foi mais comum (p=0,02) e maior em casos de maior severidade (p=0,04), no grupo juvenil. A presença do EBV provavelmente não desempenha papel importante na progressão/severidade desta patologia. / Doutor

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2000Bitstream added on 2015-03-03T12:06:22Z : No. of bitstreams: 1 000800314_20160307.pdf: 286328 bytes, checksum: 0f0b5c545f16ee37737e2e8c5a43a17c (MD5) Bitstreams deleted on 2016-03-07T11:06:17Z: 000800314_20160307.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T11:07:08Z : No. of bitstreams: 1 000800314.pdf: 1268218 bytes, checksum: f4729461b52712f8f52075ab13040415 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O líquen plano caracteriza-se como uma doença inflamatória crônica mucocutânea relativamente comum na população. Possui etiologia incerta, sendo possivelmente associado a fatores genéticos, psicológicos e infecciosos, dentre os quais o último vem ocupando um maior destaque devido a uma possível correlação com o vírus do papiloma humano (HPV) e com o Epstein-Barr vírus (EBV). O HPV possui alguns tipos considerados oncogênicos associados ao câncer de colo de útero e fortemente associado ao carcinoma espinocelular (CEC) de orofaringe. O EBV pertence à família herpesvirus humano e está relacionado com o carcinoma nasofaríngeo, linfoma de Burkitt e linfoma não-Hodgkin e sua possível relação com o CEC vem sendo estudada. O objetivo deste estudo foi detectar a presença do DNA do HPV e do EBV em amostras de tecido fresco, plasma sanguíneo, saliva e células esfoliadas orais, extraídas de um grupo pareado por sexo e idade de pacientes portadores de líquen plano bucal (LPB) e de um grupo de pacientes sem lesões de LPB, além de correlacionar as variáveis epidemiológicas dos grupos estudados com a presença viral e verificar se as fontes materiais testadas por este estudo são fontes viáveis para detecção do HPV e do EBV. Foram avaliados 24 pacientes portadores de LPB (Grupo caso) e 17 pacientes sem lesões de LPB (Grupo controle). A extração de DNA das amostras foi realizada após confirmar a presença e integridade do DNA. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística (Teste exato de Fisher e Teste do Qui-Quadrado Mantel-Haenszel, ambos, com nível de significância de 5%). A nPCR foi utilizada para detecção do HPV e do EBV. Obteve-se a positividade viral para o HPV em 41,7% das amostras teciduais, em 12,5% das amostras de células esfoliadas e em nenhuma amostra de plasma sanguíneo e saliva dos pacientes do Grupo / Lichen planus is characterized as a chronic inflammatory mucocutaneous disease relatively common in the population. It has uncertain etiology, possibly associated with genetic, psychological and infectious factors. The infectious factor has excelled due the possible correlation of lichen planus with human papilloma virus (HPV) and Epstein-Barr virus (EBV). HPV has some types considered oncogenic, associated with cervical cancer and strongly associated with squamous cell carcinoma (SCC) of oropharynx. EBV belongs to human herpesvirus family and is associated with nasopharyngeal carcinoma, Burkitt's lymphoma and non-Hodgkin lymphoma. Its possible relation to SCC has been studied. The aim of this study was to detect the presence of the DNA of the HPV and EBV in fresh tissue samples, blood plasma, saliva and oral exfoliated cells extracted from a group of patients with oral lichen planus (OLP) paired by age and gender and from a group of patients without OLP lesions, and also correlate the epidemiological variables of the studied groups with the viral presence and verify that the source materials tested in this study are viable for HPV and EBV detection. It was evaluated 24 patients with OLP (Case group) and 17 patients without OLP lesions (Control group). DNA extraction of samples was performed after confirming the presence and integrity of DNA. The results were subjected to statistical analysis (Fisher's exact test and Mantel-Haenszel 19 chi-square test, both with a significance level of 5%). The nPCR was used to detect the presence of HPV and EBV. Was obtained the viral positivity for HPV in 41.7% of tissue samples and in 12.5% of exfoliated cells samples. No samples of blood plasma and saliva were positive in the Case group. On the other hand, the Control group / FAPESP: 11/05499-8

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: O linfoma difuso de grandes celulas B do idoso Epstein-Barr positivo (EBV+DLBCLe) afeta individuos com mais de 50 anos sem imunodefiCiência previa documentada, e apresenta evolucao clinica desfavoravel. Atualmente nao existe um padrao caracteristico da expressao de microRNAs (miRNAs) nesta doenca. Portanto, este estudo tem por objetivo caracterizar um perfil de assinatura para esta nova entidade e explorar miRNAs como biomarcadores e potenciais alvos terapeuticos alternativos para EBV+DLBCLe. Metodos: Setenta e um pacientes com mais de 50 anos e diagnostico de LDGCB foram considerados potenciais candidatos a serem EBV+DLBCLe. A deteccao do EBV (EBER-1) foi realizada por hibridacao in situ. Quatro amostras EBV+ e quatro amostras EBV negativas foram analisadas atraves de PCR quantitativo em tempo real (qPCR). O RNA foi extraido a partir de blocos de parafina e o cDNA inserido em duas plataformas contendo, cada uma, 384 miRNAs humanos. Consideramos miRNAs diferencialmente expressos aqueles que apresentaram expressao com valor acima ou abaixo de 1,5. Resultados: 8,5% dos pacientes com LDGCB foram considerados EBV positivos. A sobrevida global dos pacientes com EBV+DLBCLe foi inferior a dos pacientes EBV negativos (p= 0,0201, teste Log-rank). Foram encontrados 10 miRNAs diferencialmente expressos entre os dois grupos, mas apenas sete alcancaram diferencas estatisticamente significantes a serem validadas em uma coorte multicentrica (29 EBV + DLBCLe versus 65 LDGCB). Confirmamos o aumento de expressao de hsa-miR-126, hsa-miR-146a, hsa-miR-146b, hsa-miR-150 e hsa-miR-222, e tambem a diminuicao de expressao de hsa-miR-151 nos casos EBV+DLBCLe quando casos EBV+ foram comparados com EBV negativos. Utilizando o cutoff de 1,5, o hsa-miR-146b mostrou especificidade de 91,4 %, para identificar os casos EBV+, AUC = 0,8849. Embora o hsa-miR-222 tenha presentado aumento de expressao em menos de 1/3 dos casos, tambem mostrou alta especificidade (98,5%) e valor preditivo positivo (90%), AUC = 0,8180, no grupo EBV + quando comparado com o grupo EBV negativo, com o mesmo cutoff. Conclusoes: O merito do presente estudo foi propor uma assinatura de miRNA para uma doenca recentemente descrita e destacar o hsa-miR-146b e hsa-miR-222 como possiveis biomarcadores e alvos terapeuticos para EBV+DLBCLe. Antagomirs para hsa-miR-146b e hsa-miR-222 (este ultimo em teste em alguns tipos de cancer) tambem poderiam ser utilizados como terapia adjuvante ao R-CHOP nos casos de EBV+DLBCLe, nos quais confirmamos pior prognostico / FAPESP: 2010/17668-6 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-22T12:52:26Z No. of bitstreams: 1 TESE COMPLETA Guilherme P P Zolini.pdf: 5332439 bytes, checksum: 59494ecd480af09a4c7fc97891dfd358 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-22T12:52:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE COMPLETA Guilherme P P Zolini.pdf: 5332439 bytes, checksum: 59494ecd480af09a4c7fc97891dfd358 (MD5) / FIOCRUZ - Fundação Oswaldo Cruz (PAPES IV / PAPES V) CPqRR – Centro de Pesquisa René Rachou CNPq – Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG – Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais INCTV – Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Vacinas / Este trabalho foi realizado no laboratório de Imunopatologia do Centro de Pesquisa René Rachou (CPqRR) e no Laboratório de Vírus (Labvirus) da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG). Os herpesvirus possuem genoma DNA e são envelopados. Aproximadamente 70% dos adultos já tiveram contato com Herpes Simplex tipo 1 (HSV-1). O HSV-1 causa úlceras ou até mesmo lesões mais graves como encefalite, e após a infecção, o vírus comumente fica latente e pode ser ou não reativado. Células do sistema immune inato, através dos “Receptores do Tipo Toll” (TLRs), reconhecem “padrões moleculares associados a patógenos” (PAMPs) orquestrando a resposta imune contra o vírus. Quando ativados, TLRs iniciam uma cascata de sinalização que culmina na ativação de genes relacionados à defesa imune inata (óxido nítrico-NO, citocinas e quimiocinas). Outros estudos do grupo mostraram que animais nocautes (KO) para TLR9 ou TLR2/9 apresentam alta mortalidade na infecção por HSV-1, ao contrário dos C57BL/6 selvagens (WT) e TLR2KO, que são capazes de controlar o vírus. Objetivamos pesquisar a interrelação na expressão dos TLRs 1, 2, 3, 6, 7 e 9 em animais TLR2 KO, TLR9 KO e TLR2/9 KO infectados por HSV-1 e principais citocinas, células e mecanismos imune celulares contra infecção por HSV-1. No presente trabalho camundongos WT, TLR2KO, TLR9KO e TLR2/9KO foram infectados via intranasal com 106 u.f.p. de HSV-1, e seus controles receberam PBS. A eutanásia dos animais foi realizada no 5º dia após infecção (dpi), que previamente já foi demonstrado ser o pico da infecção neste modelo, e então gânglios trigêmeos (TG) e cérebros foram coletados. A expressão de TLRs 1, 2, 3, 6, 7 e 9 foi avaliada por PCR em Tempo Real. Camundongos WT infectados apresentaram diferença significativa na expressão destes TLRs comparados com seus respectivos controles no TG, mas não no cérebro. Nos KOs, houve aumento da expressão dos TLRs tanto nos TGs (mas com níveis mais moderados comparado aos WT) quanto nos cérebros. Também foi avaliada a expressão de gp91phox, p22phox e iNOS. A expressão de iNOS em C57BL/6 WT infectados foi maior que nos outros grupos, mas o mesmo não ocorreu para gp91phox, p22phox. Adicionalmente, foi mensurada a produção de NO por macrófagos intraperitoneais, através da reação de Griess, que demonstrou maior produção por macrófagos WT, comparados aos grupos TLR KOs. Ensaios de histopatologia e imunofluorescência demonstraram maior celularidade nos TGs infectados, além de confirmar a presença de CD8, macrófagos, e aumento da produção de iNOS nos C57BL/6 WT infectados, o que não ocorreu com os camundongos TLRs KO. Em ensaio de sobrevivência com C57BL/6 WT, CCL3 KO, CD8 KO, RAG KO e iNOS KO a importância das células T e do iNOS foi confirmada, uma vez que CD8 KO, RAG KO e iNOS KO tiveram 0% de sobrevida. Camundongos C57BL/6 WT, RAG KO, CCL3 KO e iNOS KO tiveram seus TGs analisados por PCR em tempo real para verificar a expressão do gene viral VP-16 e MCP-1, iNOS, IP-10, Rantes e TNF-_ no 5º dpi. Estes dados indicaram a relevância de iNOS e das célúlas T na resposta inata contra o HSV-1, uma vez que os RAG KO foram irresponsivos à expressão das citocinas, enquanto os iNOS KO apresentaram uma resposta exacerbada das mesmas. Ensaio de citometria indicou que IFN_ produzido pelas células T CD8, nos TGs, e produzido pelas células T CD4 e Natural Killer (NK), nos linfonodos regionais, são um possível mecanismo de controle contra a infecção de HSV-1 dos animais WT infectados. Hipotetizamos que a expressão coordenada de TLRs reflete na orquestração eficiente do sistema imune inato, através da produção equilibrada de quimiocinas e citocinas e da atividade imune celular adequada, com produção de NO por macrófagos e ação de células T CD8, T CD4 e NK controlando a infecção por HSV-1. / This work was carried out in the Immunopathology laboratory of the Centro de Pesquisa René Rachou (CPqRR) and Virus laboratory (Labvirus) of the Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG). Herpes viruses have DNA genome and are enveloped. Approximately 70% of adult people have had contact with the Herpes Simplex Virus type 1 (HSV-1). After infection, HSV-1 cause cold sores, or more serious injuries such as encephalitis, and after infection, the virus usually become latent and may be reactivated or not. Cells of innate immune system recognize the “pathogen associated molecular patterns” (PAMPs) through “Toll Like Receptors” (TLRs), orchestrating the immune response against the virus. When activated, TLRs start a signalization cascade that culminates in the activation of genes related to the innate immune defense (NO, cytokines and chemokines). Previous research from our group demonstrated that knockout (KO) mice to TLR9 and TLR2/9 showed high mortality after HSV-1 infection, unlike C57BL/6 wild type (WT) and TLR2KO, which were able to control the virus. Research aimed in interrelation of the expression of TLRs 1, 2, 3, 6, 7 and 9 in TLR2 KO, TLR9 KO and TLR2 / 9 KO mice infected with HSV-1 and the main cytokines, cells and cellular immune mechanisms against infection by HSV-1. In this work, TLR2KO, TLR9KO, TLR2/9KO and C57BL/6 WT mice were intranasally infected with 106 p.f.u. of HSV-1, and their respective controls received PBS. Mice euthanasia was at the 5th day post infection (dpi), previously showed to be the viral multiplication peak in our model, and then trigeminal ganglia (TG) and brain were collected. The expression of TLRs 1, 2, 3, 6, 7 and 9 were measured by Real Time PCR. Infected WT mice showed significant increase in the expression of these TLRs compared to respective controls in TG, but not in brain.KOs mice had increased expression of TLRs in TG (but in more moderated levels compared to WT) and in the brains. The expression of gp91phox, p22phox and iNOS were also measured. iNOS expression in infected C57BL/6 WT was higher than in other groups, that not occurs to gp91phox, p22phox. In addition, NO production by intraperitoneal macrophages was measured through Griess reaction, that demonstrated a more pronounced production by WT macrophages, compared to TLR KOs groups. Histopathology and immunofluorescence assays demonstrated higher cellularity in infected TG, and besides confirmed the CD8 and macrophages presence and increase of iNOS production in infected C57BL/6 WT, what did not occurred with TLR KO mice. In survival assay with C57BL/6 WT, CCL3 KO, CD8 KO, RAG KO and iNOS KO, we showed the importance of the T cells and iNOS, because CD8 KO, RAG KO and iNOS KO had 0% of survival. C57BL/6 WT, RAG KO, CCL3 KO and iNOS KO mice had their TG analyzed by Real Time PCR, to verify the expression of viral gene VP-16 and MCP-1, iNOS, IP-10, Rantes and TNF-_ in 5th dpi. These data show us that iNOS and T cells are important in innate responses against HSV-1, once RAG KO were irresponsive to cytokines expression, while iNOS KO showed an excessive response to cytokines expression. The cytometry assay indicated that IFN_ produced by T CD8 cells, in the TG, and by T CD4 and Natural Killer cells (NK), in region lymph nodes, are a possible mechanism to control HSV-1 infection of WT infected mice. We hypothesize that coordinated expression of TLRs leads to an efficient orchestration of the innate immunity system, through cytokines and chemokines stable production and proper cellular immune activity, with NO production by macrophages and T CD8, T CD4 e NK cells action controlling HSV-1 infection.

Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-09-24T17:47:05Z No. of bitstreams: 1 amanda_p_silva_io_mt_0006_2011.pdf: 1231256 bytes, checksum: d1e9813db1567df0bd9f68f2b0c3e8aa (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-24T17:47:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 amanda_p_silva_io_mt_0006_2011.pdf: 1231256 bytes, checksum: d1e9813db1567df0bd9f68f2b0c3e8aa (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O vírus do herpes simples é uma importante causa de morbidade, especialmente em pacientes imunossuprimidos. O vírus herpes simplex tipo 1 (HSV-1) é um patógeno humano pertencente à família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae. O HSV-1 infecta a mucosa oral e provoca a maioria das formas de herpes não genital, embora também possa infectar a mucosa genital em humanos. Os objetivos deste estudo foram otimizar a reação de PCR em tempo real para auxiliar o diagnóstico, detecção e quantificação do HSV-1 em pacientes imunodeprimidos; e avaliar o uso do RNA de interferencia (siRNA) para inibir a replicação do vírus HSV-1 in vitro, como uma alternativa para terapia antiviral. Para o diagnóstico do HSV-1 foram analisadas 27 amostras de pacientes; amostras de saliva e raspado da lesão (swab) de 6 pacientes com lesões caracteristicas da infecção pelo HSV-1 e 21 amostras de pacientes infectados com o HSV-1 e HIV (vírus da imunodeficiência humana). Para o estudo do silenciamento do HSV-1, três seqüências específicas de siRNA foram avaliadas ( seqüência 1, 2 e 3) como uma estratégia contra o gene UL 39 do HSV-1. Este gene é uma subunidade da ribonucleotídeo redutase, que tem a função de catalisar o passo limitante na síntese do deoxiribonucleotídeos necessários para a síntese de DNA. Nos pacientes infectados com o HSV-1, todas as amostras foram positivas na detecção do HSV-DNA por PCR em tempo real e em70% destas amostras foi possível o isolamento viral. Entre os pacientes infectados com HIV , 90,48% foram positivas para anti-HSV e a co-infecção HIV/HSV foi detectada em 100% das amostras estudadas por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o PCR em tempo real foi eficiente na detecção e quantificação do HSV-1 em diferentes tipos de amostras, e os níveis de carga viral variaram entre 100-104. Foi demostrado que a melhor concentração de siRNA utilizada para inibir o gene UL 39 do HSV-1 foi estabelecido em 10µM através da curva dose-dependentes com as três seqüências inibindo a replicação viral, no entanto a seqüência 1 foi capaz de inibir até 99% da replicação da cepa KOS e da amostra de isolado viral de um paciente infectado com HSV-1. Os resultados demostraram que o PCR em tempo real fornece resultados rápidos, com excelente sensibilidade e especificidade, e isso é especialmente importante para o diagnóstico em pacientes imunodeprimidos. As sequências de siRNA analisadas foram eficazes na inibição da replicação do HSV- 1 in vitro, porém outras investigações sobre os possíveis efeitos beneficos do siRNA in vivo são necessários / The herpes simplex virus is a major cause of morbidity, especially in immunocompromised patients. The herpes simplex virus type 1 (HSV-1) is a human pathogen belonging to the family Herpesviridae, subfamily Alphaherpesvirinae. HSV-1 infects the oral mucosa and causes most forms of non-genital herpes , although it can infect the genital mucosa in humans. The objectives of this study were to optimize the real time PCR for the diagnosis, detection and quantification of HSV-1 in immunocompromised patients and to evaluate the use of RNA interference (siRNA) to inhibit HSV-1 in vitro replication, as an alternative to antiviral therapy. For the diagnosis of HSV-1 were analyzed 27 patient samples; the saliva samples and swab of 6 patients with lesions characteristic of HSV-1 infection and 21 samples from patients infected with HSV-1 and HIV (human immunodeficiency virus). To study the HSV-1 silencing, three RNA especifc sequences were evaluated (sequence 1, 2 and 3) as a strategy against UL 39 gene of HSV-1. This gene is a subunit of ribonucleotide reductase, which functions catalyze the limiting step in the deoxiribonucleotídeos synthesis required for DNA synthesis. In patients HSV-1 infected, all samples were positive by real time PCR, and 70% of these samples were possible by virus isolation. In HIV infected patients, 90.48% were positive for anti-HSV, and co-infection by HIV / HSV was detected in 100% of the samples studied by real time PCR. The results showed that real-time PCR was able to detect and quantify HSV-1 in different types of samples, and viral load levels ranged from 100 to 104. The results of siRNA demonstrated the best concentration used to inhibit UL 39 gene was established by 10µM using and it was dose dependent and the three sequences inhibited of viral replication, but the sequence 1 was able to inhibit up to 99% of replication of the KOS strain and the viral isolate from a patient infected with HSV-1. The results show that the real-time PCR provides rapid results, with excellent sensitivity and specificity, and this is especially important for diagnosis in immunocompromised patients. The siRNA sequences analyzed were effective in inhibiting HSV-1 replication in vitro, however further investigations on the possible beneficial effects of siRNA in vivo are needed

Made available in DSpace on 2015-10-16T12:52:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 junia_rodrigues_ini_mest_2006.pdf: 1072175 bytes, checksum: 643d4af44e5104b30cafa3faf1968ed8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-05-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Introdução: O HSV-2 é a principal causa de herpes genital, sendo a maior parte destas infecções assintomática. A infecção pelo HSV-2 pode ser um fator de risco para a aquisição e transmissão de outras DST, inclusive da infecção causada pelo HIV. Objetivo: Estimar a prevalência e identificar os fatores de risco associados à infecção pelo HSV-2 em uma coorte de homens que fazem sexo com homens da Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil. Métodos: Estudo transversal, com avaliação de dados sócio-demográficos, comportamentais e laboratoriais referentes à linha de base de 403 voluntários incluídos na referida coorte, no período de 1994-1998. As amostras foram testadas através do ELISA para detecção de anticorpos tipo-específicos contra a gG2 do HSV-2 (HerpeSelect - Focus Technologies) Resultados: A prevalência para anticorpos anti-HSV-2 encontrada nesta população foi de 65,2%. Após análise multivariada, os fatores que se mostraram independentemente associados à infecção pelo HSV-2 foram idade mais elevada (\2265 26 anos), raça não branca, ter sorologia positiva para sífilis (TPHA), ter feito sexo desprotegido com parceria sexual masculina e ter feito sexo desprotegido com parceria sexual feminina nos seis meses que antecederam a visita. Conclusão: Este estudo mostra uma elevada prevalência da infecção pelo HSV-2 neste grupo e associação dessa infecção com outras DST, em concordância com outros estudos. Estes dados podem ter uma importante contribuição no sentido de avaliar estratégias que possam contribuir para a prevenção desta infecção na população de homens que fazem sexo com homens, que é tida como uma população vulnerável e central à dinâmica da disseminação do HSV-2 em todo o mundo / Introduction: HSV - 2 is the primary cause of genital herpes and most of the infections are asymptomatic. The infection by HSV - 2 may be a risk factor to acquisition and transmission of other sexually transmitted diseases (STD), including infection by HIV virus. Objective : Estimate the prevalence and identify the risk factors associated of infection by HSV - 2 in a cohort of men who have sex with men (MSM) in Fundação Oswaldo Cruz [Oswaldo Cruz Foundation], Rio de Janeiro, Brazil. Methods : Cross - sectional study, evaluating sociodemographic, behavioral, and laboratorial data from baseline of 403 volunteers included in this cohort, in the period of 1994 - 1998. The samples were tested by ELISA to de tect type - specific antibodies against HSV - 2 gG2 (HerpeSelect - Focus Technologies). Results : The prevalence to antibodies anti - HV2 - 2 observed in this population was 65.2%. After multivariate analysis, the factors independently associated to HSV - 2 infectio n were older age ( > 26 years), non - white race, positive serology for syphilis (TPHA), history of unprotected sex with male partners and history of unprotected sex with female partners in the last six months before the visit. Conclusion : This study shows a high prevalence of HSV - 2 infection in this group and association with other STD, consistent with other studies. This data may have a significant contribution to evaluate strategies that may contribute to prevent this infection among MSM, as this is conside red a vulnerable core - population to the dynamics of HSV - 2 spreading all over the world.