A interacao planta-patogeno desencadeia uma serie de sinais que ainda nao estao completamente elucidados. Uma das respostas e a reacao de hipersensibilidade (RH), onde ocorre a morte celular programada no sitio da infeccao, impedindo a proliferacao do patogeno. Acredita que a morte celular e provocada pelo aumento do ERO, principalmente peroxido de hidrogenio (H2O2) e com o acumulo de acido salicilico (AS) que inibe a catalase, enzima responsavel pela transformacao de H2O2 em H2O e O2. Alem disso, ocorre o aumento da sintese e liberacao dos compostos fenolicos e alteracao da parede celular dos vegetais, com o aumento das atividades de diversas enzimas, capazes de degradar a parede celular da planta e do microrganismo invasor, liberando fragmentos que podem atuar como moleculas sinalizadoras, tornando as plantas mais resistentes. Nesse trabalho as celulas de Rubus fruticosus (amora-preta) foram tratadas, separadamente, com tres diferentes moleculas elicitoras, ou seja, moleculas capazes de ativar o mecanismo de defesa das plantas, o acido salicilico (AS), o metil jasmonato (MeJA) e ramnoglucuronogalactana (F-I), na concentracao de 1 Êmol/L durante 1h, para o estudo dos componentes extracelulares liberados e das modificacoes dos monossacarideos da parede celular durante resposta de hipersensibilidade. A concentracao de proteinas totais extracelulares foi aumentada com os indutores F-I e MeJA. A atividade enzimatica de -D-xilosidase nao se alterou na presenca de F-I, AS e MeJA. Entretanto, o MeJA tem a capacidade de aumentar as atividades das enzimas -D-galactosidase, -Dglucosidase, quitinase e laminarinase e inibir as atividades das enzimas galacturonase e -Lfucosidase na concentracao e tempo usado. O AS e F-I provocaram um aumento nas atividades de galacturonase e quitinase e inibiram a laminarinase. A aplicacao exogena de F-I e AS induziram a liberacao de compostos fenolicos para meio extracelular, que provavelmente, foi decorrente da tentativa das celulas de se protegerem de microrganismos invasores, com um decrescimo desses compostos no meio intracelular. O MeJA nao foi capaz de alterar a sintese de compostos fenolicos totais intracelulares e extracelulares e de acucares extracelulares, em tais condicoes. Tambem F-I e AS nao alteraram o teor de acucar redutor extracelular. O MeJA foi mais efetivo na producao de ERO durante 30 minutos de incubacao na concentracao de1 Êmol/L . F-I foi tambem ativador na liberacao de ERO, no entanto, o AS provocou inibicao. Os principais monossacarideos neutros que constitui a parede celular de suspensao de celulas de Rubus fruticosus sao as glucose (55-61%), arabinose (22-29%) e manose (13,8-15%). Ocorrendo em menor concentracoes os monossacarideos de fucose (0,65-1,2%), galactose (0,5-0,8%), xilose (0,5-0,8%) e ramnose (aproximadamente 0,5%).Os monossacarideos ramnose, fucose, xilose e galactose de parede celular tiveram um decrescimo na presenca do AS e um aumento na presenca de MeJA. Entretanto, o AS e o MeJA nao alteraram o percentual de arabinose, manose e glucose. O F-I foi capaz de aumentar o percentual dos monossacarideos ramnose e fucose e diminuir de glucose. Os resultados obtidos demonstram que a via de ativacao dos mecanismos de defesa da celula vegetal, induzida pelo MeJA, difere das vias ativadas pelo AS e F-I, pois o F-I e o AS induziram a liberacao de compostos fenolicos e o MeJA provocou aumento nas atividades enzimaticas, principalmente que atuam na parede celular da propria planta. O AS e o F-I foram mais efetivos no aumento das atividades enzimaticsa relacionadas a defesa da planta, as quais agem nas paredes de diversos fitopatogenos, sendo que as enzimas que podem atuar na parede celular da propria planta foram inibidas ou nao sofreram alteracao. / The plant-pathogen interactions trigger a series of signals that are not yet completely understood. One of the mechanisms is the hypersensitive response (HR), which is characterized by cell death in the infection site in order to prevent pathogen proliferation. Our previous studies with different elicitors demonstrated the correlation between the formation of reactive oxygen species (ROS) and cell wall degradation. Here, the cells were elicited with 1 mol/L salicylic acid (SA), methyl jasmonate (MeJA) or acid polysaccharide (rhamnoglucuronogalactan, F-I) (1mol/L) from characterization the extracellular components released and the modifications of the monosaccharide composition in cell wall during a hypersensitive response in Rubus fruticosus (blackberry-black).The extracellular proteins released to the extracellular were increased with the inducers molecules F-I and MeJA. The -D-xylosidase enzymatic activities didnt change in the presence of F-I, SA and MeJA. The time-course curves for -D-galactosidase, -D-glucosidase activities in fraction E were most effective for MeJA, while F-I and AS inhibited -Dgalactosidase. Also, the MeJA has ability to activate laminarinase and chitinase enzymatic activities and inhibit galacturonase and -L-fucosidase enzymatic activities. After 1h, the SA and F-I caused an increase galacturonase and chitinase activities and inhibited laminarinase enzymatic activity. Also, the time-course curves chitinase in the fraction increased with SA.The F-I and SA increased extracellular phenolic compounds, although they decreased them in the fraction I. MeJA was unable to change the synthesis of either intracellular or extracellular phenolic compounds. The data suggest that F-I and AS modulate the defense responses of plants through a via different that of MeJA. The extracellular reducing sugar didnt change with F-I, SA and MeJA.The MeJA was more effective in the release ROS incubation of 30 minutes at concentration of 1 mol/L. However, the presence of SA caused inhibition and F-I activated of ROS by cells.The main constituents of neutral sugars in the cell wall of Rubus fruticosus were glucose (55-61%), arabinose (22-29%) and mannose (13.8-15%). Minor constituents were fucose (0.65-1.2%), galactose (0.5- 0.8%), xylose (0.5-0.8%) and rhamnose (~0.5%). SA decreased the rhamnose and fucose concentrations; F-I both decreased the percentage of mannose and glucose and increased rhamnose and fucose. MeJA, in turn, increased the percentage of rhamnose, xylose and galactose. The data suggest that F-I and SA modulate the defense responses of plants through a mechanism unrelated to the MeJA via. Since the F-I and the SA induced the release phenolic compounds and the MeJA increased in enzymatic activities, mainly age in the own plant cell wall. The SA and F-I were more effective in the increasing defense enzyme-related activity of the plant that acts on the walls of several phytopathogens, and the enzymes that can act in the cell wall of the plant were inhibited or did not change.

A saúde oral proporciona equilíbrio que interfere diretamente na saúde geral e psicológica. É importante que o dentista faça avaliação detalhada dos esportistas, detectando alterações e patologias que possam comprometer o desempenho durante treinos e/ou competições. As LCNCs apresentam etiologia multifatorial e são caracterizadas pela perda de estrutura dental na região de junção cemento-esmalte (região cervical), não relacionadas à presença de cárie, sendo comumente encontradas na rotina clínica odontológica. A perda de estrutura dental provocado pela presença das LCNCs pode levar a exposição dos túbulos dentinarios, possibilitando o aparecimento da HD. Essa dissertação teve como objetivos principais avaliar a prevalência de LCNCs e HD em atletas profissionais (GA) e a presença de fatores de risco associados ao estilo de vida de atletas. Após autorização do CEP, avaliou-se 264 atletas profissionais com no mínimo 17 anos e que realizavam treinamento mínimo de 10 hrs/semana, e 195 indivíduos no grupo controle. Aplicou-se questionário com tópicos como: dieta, DTM e parafunção. No exame clínico avaliou-se fatores oclusais, periodontais, presença de LCNC e HD. chave). Alguns dos resultados encontrados foram: a média de idade dos atletas foi de 20,33 anos, e do controle 23,75. O GC apresentou maioria do gênero feminino (61,54%, p<0,001), enquanto que o GA foi predominância masculina (90,46%). Os atletas consomem mais isotônicos (26,52%, p<0,001), refrigerantes (68,56%, p=0,010) e suplementos (38,64%, p<0,001) do que o GC. A prevalência de biocorrosão foi de 28,03% no GA e 15,38% no GC. Os incisivos inferiores (25,75%) foram os dentes mais afetados com HD, e os pré-molares com LCNC no GA. Os atletas apresentaram maior número de ausências de pelo menos um dente (21,21%, p<0,001) quando comparadas ao grupo controle. O GA apresentou mais alteração em sua mordida (47,43%, p<0,001) do que o GC. Dentro das limitações do nosso estudo, conclui-se que: a prevalência de LCNC e de HD em atletas foram de 17,42% e 35,25% respectivamente; a prevalência de LCNC e HD no grupo controle foi de 18,97% e 48,20% respectivamente; os atletas apresentaram diversos fatores de risco para o desenvolvimento das alterações, sendo eles: ingestão de isotônicos, refrigerantes e suplementos; presença elevada de placa bacteriana; maior ausência de elementos dentários; alteração maxilo-mandibular, ausência de guia canina e escovação imediata após ingestão de alimentação acida. / The oral health provides balance that directly affects the general and psychological health. It is important that the dentist make detailed evaluation of athletes, detecting changes and conditions that may compromise performance during training and / or competition. The LCNCs have multifactorial etiology and is characterized by loss of tooth structure in the cementum-enamel junction region (neck), unrelated to the presence of caries, it is commonly found in dental practice routine. The loss of tooth structure caused by the presence of LCNCs can lead to exposure of dentinal tubules, allowing the appearance of the HD. Thus, this thesis has as main objectives to assess the prevalence of LCNCs and HD professional athletes (GA), to assess the prevalence of LCNCs and HD in the control group (CG). After approval of the CEP, we evaluated 264 professional athletes with at least 17 years and performed minimal training 10 hrs / week and 195 individuals in the control group. applied questionnaire with topics such as diet, DTM and parafunction. On examination it evaluated occlusal, periodontal factors, presence of LCNC and HD. Some of the results were: the average age of the athletes was 20.33 years, and control 23,75. GC showed most females (61.54%, p<0,001), while the GA was predominantly male (90.46%). Athletes consume more isotonic (26.52%, p<0,001), soft drinks (68.56%, p=0,010) and supplements (38.64%, p<0,001) than the GC. The prevalence of biocorrosion was 28.03% in GA and 15.38% in the control group. The lower incisors (25.75%) were the teeth most affected by HD, and the pre molars with LCNC in GA. The athletes had higher number of absences of at least one tooth (21.21%, p<0,001) compared to the control group. The GA had more change in your bite (47.43%, p<0,001) than the GC. Within the limitations of our study, it is concluded that: the prevalence of LCNC and HD athletes were 17.42% and 35.25% respectively. The prevalence of LCNC and HD in the control group was 18.97% and 48.20% respectively. Athletes had several risk factors for the development of changes, namely: isotonic intake, soft drinks and supplements; high presence of plaque; greater absence of teeth; maxillo-mandibular change, absence of canine guidance and immediate brushing after food intake acidic.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-07-13T11:30:14Z No. of bitstreams: 1 isabeladefilipovieira.pdf: 8371315 bytes, checksum: b4b3254d5ed0348cbbbb19599448153f (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-13T11:51:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 isabeladefilipovieira.pdf: 8371315 bytes, checksum: b4b3254d5ed0348cbbbb19599448153f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T11:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 isabeladefilipovieira.pdf: 8371315 bytes, checksum: b4b3254d5ed0348cbbbb19599448153f (MD5) Previous issue date: 2011-06-20 / O objetivo deste estudo foi verificar a presença e abertura dos túbulos dentinários em pacientes portadores de recessão gengival com e sem hipersensibilidade dentinária por microscopia eletrônica de varredura. Foram selecionados 11 pacientes onde foram avaliados os dentes sensíveis e não sensíveis, sendo constituídos dois grupos (n = 11), onde GE – experimental, onde foram considerados os dentes com hipersensibilidade e GC – controle, os dentes não sensíveis. Para a seleção dos dentes do GE, utilizou-se jato de ar por 3 segundos, sendo escolhido aquele em que o paciente relatou maior dor e para o GC utilizou-se o mesmo procedimento, sendo selecionado, aleatoriamente, um dos dentes em que o paciente não relatou dor. No exame periodontal foi mensurado o nível clínico de inserção no sítio vestibular, sendo o exame realizado por um único examinador devidamente calibrado. A partir das moldagens com silicona de adição foram obtidas réplicas negativas para análise em microscópio eletrônico de varredura para verificação da presença e características dos túbulos dentinários frente aos GE e GC. A medida de 2 mm do nível clínico de inserção foi prevalente com 63,60% (n = 7) para o GC, seguida de 3 mm com 45,50% (n = 5) para o GE. O nível clínico de inserção dos dentes do GC atingiu uma média de 2,45 ± 0,69 mm e do GE, 3,18 ± 1,16 mm. Quanto à presença e características ultramicroscópicas dos túbulos dentinários, a Prova dos Sinais demonstrou que a média de abertura dos túbulos dentinários do GE foi maior que do GC, 57,72 Rm e 34,82 Rm, respectivamente. Quanto ao número de túbulos dentinários, a situação se repetiu, porém com uma média de 1,45 para o GC e 3,18 para o GE (p = 0,044). Portanto, com base nos resultados obtidos neste estudo, foi possível concluir que pacientes portadores de recessão gengival com hipersensibilidade dentinária cervical apresentam túbulos dentinários em maior número e abertos ou semiabertos com diferentes diâmetros e que a técnica da réplica negativa analisada por microscopia eletrônica de varredura demonstrou ser uma importante ferramenta para visualização de túbulos dentinários. / The aim of this study was to determine the presence and opening of dentinal tubules, by scanning electron microscopy, in teeth of patients with gingival recession with and without dentin hypersensitivity. Eleven patients were selected, and sensitive and non-sensitive teeth were evaluated and divided into two groups (n = 11), where GE – experimental, which were considered hypersensitive teeth and GC – control, non-sensitive teeth. For the selection of the teeth of GE, air blast was used for 3 seconds, and was chose the one which the patient reported increased pain and the GC used the same procedure, selecting randomly, a tooth where the patient reported no pain. Periodontal examination measured the clinical attachment level at buccal side, and the examination was performed by a single examiner calibrated. From the impressions with vinyl polysiloxane, negative replica was obtained for analysis in scanning electron microscope to detect the presence and characteristics of dentinal tubules compared to the GE and GC. The measurement of 2 mm of clinical attachment level was prevalent in 63.60% (n = 7) for the GC, followed by 3 mm with 45.50% (n = 5) for GE. The clinical attachment level of the teeth of GC averaged 2.45 ± 0.69 mm and GE, 3.18 ± 1.16 mm. Regarding the presence and ultramicroscopic characteristics of dentinal tubules, the Statistical Test Signals showed that the average opening of dentinal tubules of GE was higher than the GC, 57.72 3m and 34.82 3m, respectively. Regarding the number of dentinal tubules, the situation was repeated, but with an average of 1.45 for GC and 3.18 for GE (p = 0.044). Therefore, based on the results of this study, it can be concluded that patients with gingival recession and dentin hypersensitivity present dentinal tubules in greater numbers and open or half-open with different diameters and that the technique of negative replica analyzed by scanning electron microscopy is an important tool for visualization of dentinal tubules.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-10-04T18:59:22Z No. of bitstreams: 1 rodrigoguerradeoliveira.pdf: 1453787 bytes, checksum: 629265209ed579deb47cf4c16a39a88a (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-10-05T10:52:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rodrigoguerradeoliveira.pdf: 1453787 bytes, checksum: 629265209ed579deb47cf4c16a39a88a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T10:52:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rodrigoguerradeoliveira.pdf: 1453787 bytes, checksum: 629265209ed579deb47cf4c16a39a88a (MD5) Previous issue date: 2010-06-30 / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do Laser de Baixa Intensidade (LLLT) em um modelo de Hipersensibilidade Tardia (RHT). LLLT vem sendo estudado há algum tempo e seus efeitos clínicos, aplicados no tratamento de várias doenças. O laser tem sido testado em diferentes modelos experimentais, mas seus efeitos permanecem obscuros. Tentou-se avaliar os efeitos do LLLT na RHT à ovalbumina (OVA), uma proteína que vem sendo utilizada como antígeno para sensibilizar cobaias. Esse é um modelo amplamente utilizado para avaliar os efeitos de substâncias com potencial para modular o sistema imunológico e as reações inflamatórias. Camundongos Balb/C foram divididos, randomicamente, em quatro grupos, (I) imunizado, não tratado e desafiado (n=6), (II) não imunizado, não tratado e desafiado (n=6); (III) imunizado, tratado com Azatioprina e desafiado (n=6); e o grupo (IV), imunizado, tratado com LLLT e desafiado (n=6). Passadas 48 horas do desafio, os animais foram submetidos a avaliação do edema da pata e foram eutanasiados para análise do coxim plantar. Testes de proliferação foram realizados (espontâneos, na presença de cocanavalina A e ovalbumina) para determinar a produção, em cultura de células, de TNF- , INF- and IL-10. Análises imunohistoquímicas para expressão de COX-2 também foram realizadas. No grupo de animais irradiados com laser e naqueles tratados com AZA, a medida da espessura da pata foi significativamente menor em comparação à do grupo controle. Tal fato foi acompanhado da redução significativa na densidade do infiltrado inflamatório, assim como a redução significativa nos níveis de TNF- , INF- and IL-10 e na expressão de COX-2. Nossos resultados sugerem que o tratamento com laser possui efeito imunomodulador na RHT à OVA e podem contribuir para a imunoterapêutica do transplante renal. / The aim of this study was to evaluate the effect of Low Level Laser Therapy (LLLT) in an experimental model of delayed hypersensitivity reaction (DTH). LLLT has been studied for some time and its clinical effects have been used to treat numerous diseases. LLLT has been tested in different experimental models and some of its effects have yet to be explained. We tried to assess the effects of LLLT on the DTH reaction to ovalbumin (OVA), a protein that has been used as an antigen to sensitize lab animals. This is a broadly used experimental model to assess the effects of substances that have the potential to modulate the immune system and inflammatory reactions. Balb/C mice were randomly divided into four groups, (I) immunized, untreated and challenged (n=6), (II) not immunized, untreated and challenged (n=6); (III) immunized, treated with Azathioprine (AZA) and challenged (n=6); and group (IV) immunized, treated with LLLT and challenged (n=6). Forty-eight hours after the challenge, the animals were submitted to a paw edema check and were euthanized for histopathology analysis of their plantar pads. Proliferations tests were made (spontaneous, in the presence of concanavalin A and Ovalbumin) to determine the production in cell cultures of TNF- , INF- and IL-10. Immunohistochemical analyzes for expression of COX-2 were also performed. In the group of animals irradiated with lasers and those treated with AZA, footpad thickness measurements were significantly reduced in comparison to the control group. This was accompanied by a very significant drop in the density of the inflammatory infiltration as well as by a significant reduction in the levels of concentration of TNF- , INF- and IL-10 and in the expression of COX-2. Our results suggest that treatment with LLLT has immunomodulatory effect and may have important contribution to the immunotherapeutic of kidney transplants.

Orientador: Ricardo de Lima Zollner / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T22:13:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Olivier_CelsoEduardo_D.pdf: 3614236 bytes, checksum: 1ad74cf399538a32c71390e6b3dbd7bc (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A alergia ao leite de vaca é uma condição, até o momento, sem uma solução satisfatória. Dentre as proteínas do leite, a beta-lactoglobulina é uma das mais alergênicas pelo fato de não ser produzida pelo ser humano e sua pouca digestibilidade, mas pouco se sabe sobre a alergenicidade das proteínas bioprocessadas pela indústria de laticínios como a beta-lactoglobulina polimerizada. O objetivo deste trabalho é estudar imunorreatividade da beta-lactoglobulina polimerizada e compará-la com a beta-lactoglobulina nativa. Utilizou-se a polimerização induzida pela transglutaminase em presença de cisteína e a polimerização induzida pelo aquecimento. Cinco grupos de pacientes (dois grupos intolerantes e três grupos tolerantes) provenientes de duas clínicas de características distintas foram estudados segundo a apresentação dos sintomas e submetidos a testes cutâneo-alérgicos e a ensaios analíticos para pesquisa de IgE específica contra a beta-lactoglobulina, assim como avaliação da imunorreatividade mediada por células por testes de enfrentamento ex vivo, monitorados por testes de inibição da aderência leucocitária . Foram realizados testes cutâneos pareados com beta-lactoglobulina nativa e polimerizada em 56 adultos com hipersensibilidade problemática ao leite de vaca previamente diagnosticados como intolerantes à lactose. Realizou-se pesquisa de IgE específica contra a beta-lactoglobulina por ImmunoCAP e imunoblote. Um grupo de 20 indivíduos tolerantes ao leite de vaca e com ausência de IgE contra beta-lactoglobulina detectável por ImmunoCAP e testes cutâneo-alérgicos negativos foram selecionados como controle da técnica do imunoblote. Os resultados mostraram que a detecção analítica por imunoblote de anticorpos da classe IgE é significativamente mais sensível quando se utiliza a beta-lactoglobulina polimerizada no imunoensaio do que quando se utiliza o monômero de betalactoglobulina. Os resultados mostraram que a dosagem de IgE por imunoCAP abaixo dos limites de detecção, ou o teste cutâneo-alérgico não reagente, não descartam a possibilidade de hipersensibilidade mediada por IgE como demonstrado pelo imunoblote. Foram realizados testes cutâneos pareados com beta-lactoglobulina nativa e polimerizada em 22 crianças sintomáticas, com diagnóstico de alergia à betalactoglobulina mediada por IgE, confirmado por ImmunoCAP. Um grupo controle pareado de 22 crianças assintomáticas com IgE específica para beta-lactoglobulina não detectável por ImmunoCAP foi estabelecido para comparação da técnica dos testes cutâneo-alérgicos. Os resultados mostraram nos dois grupos que as reações cutâneas para os testes realizados com a beta-lactoglobulina polimerizada foram significantemente menores que as reações dos testes realizados com a beta-lactoglobulina nativa. A imunorreatividade mediada por células contra a beta-lactoglobulina nativa e contra a beta-lactoglobulina polimerizada pela transglutaminase foi estudada em 49 indivíduos atópicos através de testes pareados de enfrentamento antigênico ex vivo monitorado pelo teste de inibição da aderência leucocitária. Os resultados mostraram que a imunorreatividade mediada por células contra a beta-lactoglobulina nativa não é significantemente diferente da observada contra a betalactoglobulina polimerizada pela transglutaminase quando o enfrentamento ex vivo é monitorado pelo teste de inibição da aderência leucocitária. A polimerização é um método promissor para a indução de imunotolerância às proteínas alimentares, uma vez que diminui a imunorreatividade in vivo e não destrói os epítopos alergênicos como demonstrado nos ensaios in vitro e ex vivo / Abstract: Cow's milk allergy is a debilitating condition of difficult diagnosis and, until the moment, without a definitive solution that can be presented to the patient by the medical attendant. Amongst the dozens of proteins of the cow's milk, the beta-lactoglobulin (Bos d 5) is one of most allergenic for the fact that it is not produced by the human being and because of its hard digestibility. The allergenicity of beta-lactoglobulin in human beings is a subject well studied but little is known about the allergenicity of bioprocessed proteins as the polymerized beta-lactoglobulin. The objective of the present work is to study the immunoreactivity of the polymerized beta-lactoglobulin and to compare it with the immunoreactivity of the native beta-lactoglobulin in patients with and without clinical diagnosis of hypersensitivity/intolerance to cow's milk. It was used thermically induced polymerization and polymerization induced by transglutaminase in presence of cystein. Five groups of patients (two intolerant groups and three tolerant groups) proceeding from two clinics of distinct characteristics had been studied according to presentation of the symptoms and submitted to allergic cutaneous tests and immunoassays for research of specific-IgE against beta-lactoglobulin, as well evaluation of cell-mediated immunoreactivity by challenge tests monitored by Leukocyte Adherence Inhibition Test. Side to side cutaneous tests with native and polymerized beta-lactoglobulin in 56 adults with problematic hypersensitivity to cow's milk previously diagnosed as intolerants to the lactose had been carried through, as well research of specific-IgE against betalactoglobulin by ImmunoCAP and immunoblot. A control group of 20 subjects tolerant to cow's milk people with absence of specific-IgE against beta-lactoglobulin (detectable by ImmunoCAP or by allergic skin tests) had been selected for control of the technique of immunoblot. The results had shown that the analytical detection by immunoblot of specific-IgE is significantly more sensible when the polymerized beta-lactoglobulin is used in the immunoassay instead of the beta-lactoglobulin monomer. The results had shown that the research of specific-IgE by ImmunoCAP below of the detection limits, or the absence of cutaneous reactivity does not discard the possibility of IgE-mediated hypersensitivity as demonstrated by immunoblot. Side to side cutaneous tests with native and polymerized beta-lactoglobulin had been carried through in 22 symptomatic children, with confirmed by ImmunoCAP diagnosis of IgE-mediated allergy to beta-lactoglobulin. A matched control group of 22 asymptomatic children with not detectable specific-IgE for beta-lactoglobulin by ImmunoCAP was established for comparison of the technique of the skin tests. The results had shown that the cutaneous reactions carried through with the polymerized beta-lactoglobulin had been significantly lesser that the reactions of the cutaneous reactions carried through with the native beta-lactoglobulin. The cell-mediated immunoreactivity was studied on 49 atopic subjects by paired ex vivo allergen challenges monitored by the leukocyte adherence inhibition test. The results did not shown significant difference between the immunoreactivity against native versus polymerized beta-lactoglobulin. The polymerization of proteic antigens is a promising study model to be further investigated as a potential tool for the therapeutic induction of immune tolerance to alimentary proteins, because it decreases the in vivo immunoreactivity and does not destroy the allergenic epitopes as demonstrated by the in vitro and ex vivo assays / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Flavia Maria Netto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-20T14:16:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VillasBoas_MarianaBattaglin_D.pdf: 3357506 bytes, checksum: 10d878e81440a9db2f379bd1dd93146f (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Tratamento térmico, alta pressão ou hidrólise enzimática, utilizados em conjunto ou separadamente, podem alterar determinantes antigênicos (epítopos) presentes nas proteínas, e têm sido estudados como estratégia para obtenção de produtos com menor potencial alergênico, porém ainda com sucesso limitado. A enzima transglutaminase (TG), que catalisa a reação de ligação cruzada inter ou intramolecular em diversas proteínas, também tem sido utilizada com este propósito. A associação da hidrólise enzimática com a polimerização por TG é uma estratégia ainda pouco explorada, mas que oferece boas perspectivas em relação à redução da antigenicidade de proteínas. Diante disso, o presente estudo teve como objetivos obter e caracterizar a ß-Lactoglobulina (ß-Lg) polimerizada por TG e a ß-Lg polimerizada pré e pós hidrólise enzimática com as proteases Alcalase, Neutrase ou bromelina, e avaliar o efeito destes processos na antigenicidade da proteína. A melhor condição de hidrólise da ß-Lg, com cada uma das proteases estudadas foi definida a partir de um delineamento composto central rotacional (DCCR), tendo como variáveis independentes a concentração de proteína (2,2 -7,8% p/v) e relação enzima : substrato (E:S), 6,9 - 28 U g-1 proteína e, como variável dependente o grau de hidrólise (GH), determinado pelo método pH-stat. A condição selecionada, 3% de proteína e E:S 25 U g-1, foi a utilizada para a hidrólise da ß-Lg pré ou pós polimerização com a enzima TG. As condições experimentais foram: (1) hidrólise da ß-Lg com as três enzimas, seguida de polimerização com TG (10 ou 25 U g-1) ou (2) polimerização da ß-Lg (7%p/v) com TG (10U TG g-1) realizada pós tratamento térmico ou na presença de agente redutor Cys (0,1 mol L-1), seguido por hidrólise com as diferentes proteases. As amostras hidrolisadas e as polimerizadas pré ou pós hidrólise foram caracterizadas por eletroforese SDS-PAGE/tricina, cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa (CLAE-FR), cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (MS) e ensaios imunoquímicos (ELISA e Imunoblote). Os hidrolisados obtidos com Alcalase apresentaram 12,7% de GH e com Neutrase e bromelina aproximadamente 4%. Os perfis eletroforéticos da ß-Lg polimerizada pós tratamento térmico (ß-Lg TT TG) ou na presença de Cys (ß-Lg Cys TG), apresentaram bandas de massa molecular (MM) alta, porém a polimerização pós hidrólise, avaliada por eletroforese e cromatografia, não resultou em aumento da MM aparente dos hidrolisados. A ligação isopeptídica e-(?-Gln)Lys, catalisada pela TG, foi detectada em concentração mais elevada no material polimerizado pós hidrólise com alcalase, seguido do tratamento de polimerização da presença de Cys. No estudo da polimerização pré hidrólise, a alcalase foi a enzima que hidrolisou mais eficientemente tanto a ß-Lg como seus polímeros. Os polimerizados pre ou pós hidrólise com neutrase ou bromelina apresentaram ß-Lg residual, observada no perfil eletroforético e cromatográfico, sendo que para os hidrolisados com neutrase, a fração correspondente à ß-Lg residual apresentou maior intensidade. O tratamento isolado de hidrólise, principalmente com alcalase ou bromelina, ou a associação deste processo com a TG foram capazes de reduzir significativamente a resposta antigênica da ß-Lg. Os hidrolisados da ß-Lg com neutrase apresentaram reação antígeno-anticorpo apenas na região correspondente ao monômero da ß-Lg, sendo que a reação foi menos intensa após a polimerização do hidrolisado com a TG. As amostras foram submetidas à digestão in vitro e avaliadas por espectrometria de massas (MS/MS) quanto à identificação de epítopos lineares. Verificou-se que tanto a ß-Lg polimerizada após tratamento térmico ou na presença de Cys como a amostras polimerizadas pré ou pós hidrólise com bromelina apresentaram alguns fragmentos correspondentes aos epítopos, embora em menor número quando comparados aos epítopos identificados na ß-Lg nativa. Para o tratamento com a alcalase, isolado ou associado à TG, não foram identificados fragmentos correspondentes aos epítopos após digestão gastrointestinal das amostras. Os resultados obtidos indicaram que a hidrólise, principalmente com alcalase, associada ou não à polimerização com TG, foi capaz de reduzir a antigenicidade da ß-Lg, mostrando-se uma alternativa para a produção de alimentos hipoalergênicos / Abstract: Heat treatment, high pressure and enzymatic hydrolysis have been studied aiming at obtaining products with low allergenic potential since they can alter antigenic determinants (epitopes) in the protein. The transglutaminase (TG), an enzyme that catalyzes inter or intramolecular cross-link in different proteins has also been used to reduce the protein antigenicity. The association of enzymatic hydrolysis and polymerization by TG is another strategy for reducing the antigenicity of food proteins, promising that needs further research. Therefore, the present study aimed to obtain and characterize the ß-Lg polymerized by TG before or after enzymatic hydrolysis with the proteases alcalase, neutrase or bromelain and evaluate the effect of these processes on the protein antigenic response. The optimum conditions for hydrolysis of ß-Lg, obtained with the three different enzymes, were defined using a central composite rotatable design (CCRD), where the independent variables were protein concentration (2.2% -7.8 w / v) and enzyme: substrate ratio (E:S), 6.9 to 28 U g-1 protein, and the dependent variable (response) was the degree of hydrolysis (DH) determined by the pH-stat method. The hydrolysis condition defined by CCRD was 3% of protein (w/v) and E:S ratio 25 U g-1. The experimental conditions were: (1) hydrolysis of ß-Lg with the three enzymes used separately, followed by polymerization by TG (10 or 25 U g-1) or (2) polymerization of ß-Lg (7% w/v) by TG (10U g TG-1) after heat-treatment (80 °C/60 min) or in presence of reducing agent Cys (0.1 mol L-1), followed by hydrolysis. The samples were characterized by SDS-PAGE/tricine, reverse phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC), liquid chromatography coupled to mass spectrometry (HPLC-MS) and by immunochemical assays (ELISA and Imunoblote). The highest DH of the ß-Lg was obtained with alcalase (12.6%), while with neutrase or bromelain a DH of 4% approximately was achieved. The electrophoresis profiles of ß-Lg polymerized after heat treatment (ß-Lg TT TG) or in the presence of Cys (ß-Lg Cys TG) showed bands with high molecular mass (MM). On the other hand, the post-hydrolysis polymerization, analyzed by SDS-PAGE and RP-HPLC, resulted in no increase in the MM of the hydrolysates. The highest concentration of the cross-link, by formation of the isopeptide bound e-(?-Gln) Lys, was found in the sample polymerized after hydrolysis with alcalase, followed by the sample ß-Lg Cys TG. The polymerized pre or pos hydrolysis with neutrase or with bromelain showed residual ß-Lg, observed in electrophoretic and chromatographic profiles, and for hydrolysates with neutrase, the band corresponding to ß-Lg showed higher residual intensity. Alcalase was the enzyme which hydrolysed more efficiently both untreated and polymerized ß-Lg. Using neutrase or bromelain to hydrolyse polymerized ß-Lg, a residual ß-Lg (18.3 kDa) was observed in the electrophoretic and chromatographic profiles. The avaluation of antigenicity showed that hydrolysis treatment used alone, especially with alcalase or bromelain, or the combination of this process with TG was capable to reduce significantly the antigenic response of ß-Lg. The ß-Lg hydrolysed with neutrase showed antigen-antibody reaction only in the region corresponding to the ß-Lg monomer, and this reaction was less intense after the association of hydrolysis with neutrase and polymerization by TG. The samples were submitted to in vitro digestion and then analyzed by mass spectrometry (MS / MS) to identification of linear epitopes in the protein. It was verified that the polymerized samples (ß-Lg TT TG or ß-Lg Cys TG) as well as those polymerized before or after hydrolysis with bromelain, retained some fragments corresponding to the epitopes, although to a lesser extent when compared to the epitopes identified in the untreated ß-Lg. Interestingly that for the treatment with alcalase, associated or not with the TG, no epitopes were identified after gastrointestinal digestion. These results indicated that the hydrolysis, especially with alcalase, and the association of hydrolysis with polymerization, were capable to reduce the ß-Lg antigenicity and could be an alternative for elaboration of hypoallergenic products / Doutorado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Doutor em Alimentos e Nutrição

Os antibióticos beta-lactâmicos, principalmente as aminopenicilinas (ampicilina e amoxicilina) são causa freqüente de exantema maculo papular e urticária tardia em pacientes tratados com estes medicamentos. Entretanto, a falta de métodos para diagnóstico destas reações constitui uma lacuna na abordagem destes indivíduos. Objetivos: Os objetivos deste estudo foram determinara a freqüência e significância de testes cutâneos positivos em pacientes com história de exantema maculo-papular e urticária tardias induzidos por antibióticos beta-lactâmicos e determinar a sensibilidade e especificade dos testes diagnósticos in vitro para o diagnóstico de alergia a drogas: proliferação linfocitária e dosagem de citocinas no sobrenadante da cultura linfocitária.. Métodos: Os pacientes foram submetidos à dosagem de IgE específica para os seguintes determinantes: benzilpeniciloil, amoxiciloil e ampiciloil. Testes cutâneos de puntura e intradérmico com benzilpeniciloil polilisina, mistura de determinantes menores da penicilina, benzilpenicilina (10.000 UI/ml), amoxicilina (2 mg/ml) e ampicilina (2mg/ml) foram realizados em todos os pacientes com leituras após 20 minutos, 48 horas e 72 horas. Foi realizado teste de contato com os mesmos medicamentos (amoxicilina 5%, ampicilina 5% e penicilina G 5000UI/g de vaselina sólida). Todos os testes foram feitos em duplicata com controles positivo e negativo. Amostras de sangue foram coletadas para a proliferação linfocitária (incorporação de timidina triciada) e dosagem de citocinas no sobrenadante da cultura (IL-5, IFN-gama e TNF- 17 alfa) através de ELISA. Resultados: Foram estudados 20 pacientes e 15 controles. Nenhum dos pacientes ou controles apresentou teste cutâneo de leitura imediata positivo. Três pacientes reagiram positivamente aos testes cutâneos de leitura tardia nas leituras de 48 e 72 horas. Não houve nenhum resultado positivo dos testes cutâneos no grupo controle. A proliferação linfocitária mostrou-se positiva em somente 2 controles (13%) e 10 pacientes (50%). A sensibilidade dos experimentos de proliferações linfocitária variou entre 25% com penicilina na concentração de 250 ?g/ml até 55% com ampicilina 1000 ?g/ml. Sua especificidade foi de 80% a 100%. Conclusão: os testes cutâneos de leitura tardia não constituíram métodos diagnósticos eficazes para as reações tardias aos antibióticos beta-lactâmicos. A proliferação linfocitária apresentou baixa sensibilidade, porém, alta especificidade para o diagnóstico das mesmas reações. A detecção de IFN-gama e IL-5 evidenciaram alta especificidade e baixa sensibilidade, enquanto a dosagem de TNF-alfa mostrou-se altamente sensível (95%), porém, pouco específica (40%) / The beta-lactam antibiotic, mainly aminopenicillins: ampicillin (AMP) and amoxicillin (AMX), are frequently cited as causes of morbiliforme eruptions and late onset urticaria. A major problem with existing data on beta-lactam reactions of the delayed type includes a lack of standardized testing methods. Objectives: The goal of this study is to establish the frequency and significance of positive skin testing in patients with history of beta-lactam induced maculo-papular exanthema and late onset urticaria and the sensibility/specificity of in vitro tests for drug allergy investigation: lymphocyte proliferation assay and cytokine detection. Methods: Patients were submitted to complete penicillin (PEN) allergy test: specific detection for serum IgE antibody to benzyl penicilloyl polylysine, amoxicilloyl polylysine and ampicilloyl polylysine; puncture and intradermal skin test with benzyl penicilloyl polylysine and minor determinants mixture, benzylpenicillin (10.000 UI/ml), amoxicillin (2mg/ml), ampicillin (2mg/ml) were performed and read at 20 minutes, 48hours and 72 hours. All patients had epicutaneous patch testing done with the same drugs (5% amoxicillin, 5% ampicillin and 5000 IU/g penicillin G all in petrolatum). All tests were performed in duplicate with positive and negative controls. All subjects had blood collected for lymphocyte proliferation assay (H3-thymidine incorporation assay) and IL-5, TNF-alpha and IFN-gamma profile were analyzed in culture supernatant by ELISA. Results: None of the patients or controls had positive immediated skin test. Only three patients reacted positively to the 48 and 72 hours 15 reading of intradermal skin test and patch test with the same reagents. There was no positive skin test result among the control group. The lymphocyte proliferation test (LTT) was positive in only two control subjects, while in the study group, 10 patients had positive proliferation tests (50%). The LTT sensitivity varied from 25% to 55% depending on the drug and concentration tested. The specificity ranged from 80% to 100%. IFN-gamma and IL-5 detection had a high specificity, but low sensitivity, while TNF-alpha showed high sensitivity (95%) and low specificity (40%)

Momordica charantia é uma espécie de planta pertencente à família Cucurbitaceae. No Brasil, é conhecida pelo nome popular de Melão de São Caetano. É encontrada em grande parte do globo terrestre, sendo que no Brasil é observada nas regiões litorâneas e principalmente nas regiões do interior do país. Escolhemos o estudo com Momordica charantia devido suas propriedades terapêuticas conhecidas serem de grande interesse. Ela vem ganhando cada vez mais reconhecimento através de pesquisas científicas realizadas, visto que, já é utilizada a milhares de anos através da cultura popular. Tais pesquisas têm confirmado e entendido cada vez mais as propriedades medicamentosas desta planta e os mecanismos responsáveis por tais funções nesta espécie, sendo as propriedades antidiabéticas, antivirais e anticancerígenas as de maior destaque. Os experimentos realizados em torno da Momordica charantia, na busca destes compostos foram todos realizados utilizando extratos retirados dos próprios tecidos já diferenciados na planta adulta (sementes, folhas, raízes e frutos). Neste trabalho, foi realizado a pesquisa de metabólitos secundários produzidos pela cultura de células em suspensão de Momordica charantia durante a fase de crescimento desta e após a realização de ensaios de elicitação com Ácido Salicílico (AS). Nosso laboratório vem se dedicando aos estudos da composição da parede celular vegetal e suas alterações, bem como dos mecanismos de defesa empregados pelas células em suspensão em condições de estresse biótico e abiótico. O ácido salicílico é um dos hormônios vegetais envolvido em vários mecanismos de respostas que envolve o estresse vegetal e de desenvolvimento da planta tais como o de garantir resistência a patógenos por exemplo. Quando ocorre algum processo de infecção ou lesivo para a planta, ocorre um aumento na concentração de AS no interior da planta. Esse aumento leva a ativação de certas vias metabólicas que culminam na produção de metabólitos secundários e na degradação, fragmentação ou espessamento da parede celular. Como reposta dos ensaios de elicitação realizados podemos comprovar os efeitos do AS mediados na produção de metabólitos secundários que foram aumentados conforme a concentração de AS. Foi utilizado para os ensaios de elicitação AS nas concentrações de 0,5 , 1,0 e 5 mmol/L. Para o monitoramento da cultura e averiguação da efetividade dos ensaios de elicitação foi utilizado a monitoria através da dosagem de proteínas totais, compostos fenólicos totais e açúcares redutores totais tanto liberados para o meio extracelular quanto produzidos no meio intracelular. Foi determinado as variações dos componentes da parede celular durante a fase de crescimento e após os ensaios de elicitação onde foi comprovado que quanto maior a concentração de AS, maiores são os fragmentos de açúcares fragmentados da parede celular. Foi evidenciado também a presença de triterpenos na cultura celular (em comparação com os padrões isolados da planta), tanto na fase de crescimento e também após a indução com os ensaios de elicitação com AS. / Momordica charantia is a plant from the Cucurbitaceae family. In Brazil, it is known by the popular name of Melão de São Caetano. It is found across the whole world, and in Brazil it can be found in coastal and interior regions of the country. The aim to study Momordica charantia is due to its known therapeutic properties that are already used for thousands of years through popular culture. The studies have confirmed and understood various drug-like properties of this plant and the mechanisms responsible for such functions in this species, such as antidiabetic, antiviral and anticancer properties. The researches with Momordica charantia were all performed using extracts obtained from seeds, leaves, roots and fruit. In this work, the isolation and characterization of metabolites as standards from leaves and stems of Momordica charantia was performed. The research of secondary metabolites produced in cell culture suspension of Momordica charantia without elicitor or after elicitation with salicylic acid (SA) was conducted. Salicylic acid is a plant hormone involved in various mechanisms of responses. When the plant suffers an infection or injury, it is followed by an increase in AS concentration. This increase leads to activation of certain metabolic pathways that culminate in the production of secondary metabolites and degradation, fragmentation or cell wall thickening. AS was utilized for the elicitation experiments at 0.5, 1.0 and 5 mmol/L. For the monitoring of plant cell culture, it was determinate the total protein, phenolic compounds and reducing sugars content, into the extra and intra cellular medium. Where it was verified that AS modulates the production of these molecules in culture. After this, we determined the variation in the oligosaccharides in the extracellular medium obtained in the presence or absence of AS. It was observed the degree of polymerization of oligosaccharides higher when increase AS concentration in the medium. In conclusion, this study can demonstrate the effects of SA on the production of secondary metabolites in plant cell culture, which were increased as the concentration of AS increased. The presence of triterpenes in cell culture was confirmed to compare the molecules obtained from culture with that isolated from plant standards.

O objetivo deste estudo foi o de avaliar os efeitos da irradiação laser de Er,Cr:YSGG em superfícies dentinárias no tratamento da hipersensibilidade dentinária cervical, em busca de um protocolo para ser aplicado clinicamente. Para o teste de permeabilidade, foram preparados 144 pré-molares, as coroas seccionadas e as raízes impermeabilizadas. Duas áreas de irradiação antagônicas foram delimitadas e livres da impermeabilização (controle e experimental). A seguir, os dentes foram subdivididos em dois sub-grupos, diferindo o condicionamento da superfície irradiada (EDTA 24% e ácido fosfórico 35%) e em grupos diferindo o protocolo:G1)Er:YAG, 60mJ/2Hz; G2)0,25W; G3)0,5W; G4)0,75W; G5)1W, G6)1,25W; G7)1,50W; G8)1,75W G9)2W. Após as irradiações, os espécimes foram imersos em azul de metileno 2% por 4 horas, e incluídos em resina epóxica para a realização dos cortes longitudinais. Estes tiveram suas imagens trabalhadas em computador para mensuração do nível de infiltração. Os dados foram submetidos à análise estatística. O Sub-grupo 1, condicionado com EDTA, apresentou diferenças entre os grupos sendo que as amostras irradiadas com Er:YAG demonstraram menor infiltração, diferindo estatisticamente dos grupos 3, 6 e 9. Os resultados do sub-grupo 2 mostraram que as médias das amostras irradiadas com Er:YAG tenderam a zero entretanto, não houve diferença entre os grupos. Na Fase B, fragmentos de dentina foram obtidos da região cervical de dentes humanos, preparados para análise em microscopia eletrônica de varredura. Morfologicamente, observou-se oclusão parcial dos túbulos dentinários após irradiação com Er:YAG e Er,Cr:YSGG nas condições de 0,25W e 0,50W. A partir de 0.75W, foi observado abertura dos túbulos e à medida que as energias aumentaram, foram observadas carbonização e fendas. De posse dos resultados dos trabalhos in vitro, foram selecionados os parâmetros para a aplicação e o acompanhamento clínico de 1 mês: G1)controle (placebo); G2)Er:YAG; G3)Er,Cr:YSGG 0,25W e G4)Er,Cr:YSGG 0,75W. Após a triagem, foram selecionados voluntários de acordo com critérios de exclusão e inclusão. O nível de sensibilidade de cada voluntário foi avaliado através da escala visual analógica de dor (VAS) com auxílio do ar da seringa tríplice 1 semana antes (Pré-1), 5 minutos anterior ao tratamento (Pré-2), após 5 minutos (Pós-1), 1 semana (Pós-2) e 1 mês após o tratamento (Pós-3). Os dados foram coletados e submetidos à análise estatística separadamente para os dois estímulos realizados: spray de ar e sonda exploradora. Tanto para o estímulo ar quanto para o estímulo sonda, não foram observadas diferenças estatisticamente significantes nas escalas Pré-1 e Pré-2, concluindo que os pacientes estavam padronizados e não houve efeito da profilaxia nos níveis de dor. Ao estímulo do spray de ar, nota-se uma redução nos níveis de dor na escala Pós-1, porém há uma estabilidade dos valores das escalas seguintes. O grupo 2 (Er:YAG) apresentou o menor nível de dor quando comparado aos outros grupos. Ao estímulo mecânico foi observado que o grupo 4 (Er,Cr:YSGG 0,50W) demonstrou o decréscimo de dor mais acentuado imediatamente após o tratamento, porém ao final do estudo, apresentou os maiores níveis de dor. Os grupos 1, 2 e 3 apresentam redução de dor, porém estatisticamente diferentes do grupo 4. Com base nos resultados apresentados e dentro dos limites e parâmetros estudados, pode-se concluir que nenhuma condição foi capaz de eliminar completamente a microinfiltração e diminuir a permeabilidade dentinária; porém o laser de Er:YAG e o laser de Er,Cr:YSGG 0,25W apresentaram resultados satisfatórios nos três estudos realizados. / The aim of the present study was to determine the correct parameters of the Er,Cr:YSGG laser in the treatment of cervical dentin hypersensitivity. This work was presented in 3 different stages. In the first one, it was evaluated the decrease in dentin permeability of dentinal tubules after Er,Cr:YSGG laser irradiation in radicular surfaces. Ninety premolars were prepared with its crows sectioned, and the roots completely impermeabilized. Two antagonist areas of irradiation were determined as control and experimental. Each surface was conditioned with EDTA 24% (sub-group1) and phosphoric acid 35% (sub-group2) and the selected parameters were: 1)Er:YAG, 60mJ, 2Hz, 4 irradiations of 20sec each, defocused mode; and groups 2 to 9 received irradiation with Er,Cr:YSGG laser, 20Hz, Z6 tip, 600µm diameter, defocus mode, 0% of air and water: 2)Er,Cr:YSGG 0,25W; 3) 0,5W; 4) 0,75W; 5) 1,0W; 6) 1,25W, 7) 1,50W, 8) 2W; 9) 2 W. After irradiation, samples were immersed in a solution of methylene blue for 4 hours, washed for 5 min and included in epoxy resin to allow longitudinal cuts. The images were digitalized and computed worked. Data was statistically analyzed. Although the samples irradiated with Er:YAG showed less microleakage, the sub-group 1 showed differences between the groups, statistically different from groups 3, 6 e 9. The results of the sub-group 2 showed that the mean values of the Er:YAG samples had a tendency to be negative, however, no differences were detected between the groups. In the second stage, cuts from the cervical area were obtained and prepared for scanning electron microscopy to evaluate the superficial morphology. It was observed the partial closure of dentinal tubules after the irradiation with Er:YAG and Er,Cr:YSGG laser in the 0.25 and 0.50W protocols. From the 0.75W until 2W, it was observed the dentinal tubules opened as the energy densities raised. With the results of the in vitro studies, the parameters were selected: G1)control; G2)Er:YAG; G3)Er,Cr:YSGG 0,25W e G4)Er,Cr:YSGG 0,75W. Thirty subjects, who met the entry criteria, were admitted into the study. The assessment method used to quantify sensitivity was the cold air syringe, recorded by the visual analogue scale (VAS), prior to treatment as baseline (Pre-1), immediately before (Pre-2) and immediately after (Post-1) the topical treatment, after 1 week (Post-2) and after 1 month (Post-3). Teeth were assigned to the 4 groups. After the follow-up, data was collected and submitted to statistical analysis for both kinds of stimulus: evaporative (air) and mechanical (probe). For both air and probe it was not observed differences among the Pre-1 and Pre-2 moments, for what it can be concluded that patients were standardized. Analyzing the evaporative stimulus, it can be observed the reduction in the pain level immediately after the treatment; however there was stability in the next values. Group 2 (Er:YAG) showed the least level of pain. Throughout the mechanical stimulus, it was observed that group 4 (Er,Cr:YSGG 0,50W) showed the most pronounced decrease of pain immediately after treatment, however, at the end of the study, the levels of pain increased. Groups 1, 2 e 3 showed reduction of pain, statistically different from the group 4. Based on the results and within the limits of this study, it can be concluded that none of the parameters and lasers studied were capable of eliminate the microleakage and decrease the dentin permeability, however, the Er:YAG and Er,Cr:YSGG 0,25W lasers showed satisfactory results in the three studies performed.

INTRODUÇÃO: A pneumonite de hipersensibilidade (PH) é uma doença intersticial causada pela inalação de antígenos orgânicos específicos ou substâncias de baixo peso molecular em indivíduos geneticamente suscetíveis. A PH crônica representa seu estágio final, na qual a exposição antigênica prolongada leva à fibrose. Na PH crônica, o envolvimento das pequenas vias aéreas (PVA) é proeminente; entretanto, uma avaliação detalhada através de métodos funcionais e de avaliação quantitativa e automatizada pela tomografia computadorizada (TC) não foi realizada previamente. MÉTODOS: estudo transversal de 28 pacientes com PH crônica, com avaliação através de provas de função pulmonar (PFPs); oscilometria forçada (FOT); análise automatizada do volume pulmonar através da TC, incluindo quantificação de aprisionamento aéreo; e teste cardiopulmonar de exercício (TCPE) incremental em cicloergômetro para avaliar performance ao exercício, incluindo medidas seriadas da capacidade inspiratória e hiperinsuflação dinâmica (HD). Foram incluídos pacientes entre 18 a 75 anos, com diagnóstico confirmado pela combinação de achados tomográficos, exposição antigênica e biópsia compatível e/ou LBA com linfocitose. Foram excluídos pacientes com CVF e/ou VEF1 < 30% predito, tabagismo > 20 anos-maço, uso de oxigênio suplementar; diagnóstico prévio de asma ou DPOC, diagnóstico de hipertensão arterial pulmonar ou impossibilidade de realizar TCPE. Os dados foram comparados com controles saudáveis. RESULTADOS: 28 pacientes (16 mulheres; idade média 56 +- 11 anos; CVF 57 +- 17% predito) foram avaliados, e todos apresentavam padrão ventilatório restritivo sem resposta broncodilatadora. Na FOT, 4 pacientes apresentaram resistência aumentada a 5 Hz (R5), enquanto todos apresentaram baixa reactância (X5), sendo que nenhum apresentou resposta broncodilatadora significativa. Pacientes com PH crônica tiveram menor capacidade de exercício com menor O2 de pico, diminuição da reserva ventilatória, hiperventilação, dessaturação de oxigênio e escores de dispneia (Borg) aumentados quando comparado aos controles. A prevalência de HD foi encontrada em apenas 18% da coorte. Ao comparar pacientes com PH crônica com O2 normal e baixo (< 84% predito, LIN), o último grupo apresentou maior hiperventilação (slope E/CO2), um menor volume corrente e menores escores de capacidade física na avaliação do questionário de qualidade de vida (SF-36). A análise da curva ROC mostrou que volumes pulmonares reduzidos (CVF%, CPT% e DLCO%) foram preditores de baixa capacidade ao exercício. Na TC, a PH crônica teve aumento de áreas com alta densidade em unidades Hounsfield, inferindo maior extensão de opacidades em vidro fosco e fibrose em relação aos controles saudáveis. A extensão das áreas de atenuação reduzida (AAR) e aprisionamento aéreo em relação ao volume pulmonar total é pequena, e não se correlaciona com índices funcionais obstrutivos; entretanto, pacientes com maior percentual dessas áreas apresentam menos fibrose e função pulmonar mais preservada. CONCLUSÃO: a PH crônica se caracterizou por um acometimento eminentemente restritivo, e não de obstrução de vias aéreas, nos diferentes métodos diagnósticos aplicados. A redução da capacidade de exercício foi prevalente devido à limitação ventilatória e de troca gasosa, a exemplo de outras doenças intersticiais pulmonares, e não pela HD. Redução dos volumes pulmonares foram bons preditores das respostas ventilatórias durante o exercício / INTRODUCTION: Hypersensitivity pneumonitis (HP) is an interstitial lung disease caused by the inhalation of specific organic antigens or low molecular weight substances in genetically susceptible individuals. Chronic HP represents its final stage, in which prolonged antigenic exposure causes fibrosis. In chronic HP, small airway involvement is prominent; however, a detailed characterization through functional evaluation and through automatic quantitative evaluation of computed tomography (CT) has not been previously assessed. METHODS: Cross-sectional study with 28 chronic HP patients, with evaluation by pulmonary function tests (PFTs), forced oscillometry (FOT), automated lung volume analysis through CT, including quantification of air trapping (AT); and incremental cardiopulmonary exercise testing (CPET) on a cycle ergometer to evaluate exercise performance, including serial measurements of inspiratory capacity to establish dynamic hyperinflation (DH). Inclusion criteria: patients aged 18 to 75 years, with a chronic HP diagnosis confirmed by the combination of CT findings, known antigenic exposure and compatible biopsy and / or BAL with lymphocytosis. Exclusion criteria: FVC and / or FEV1 < 30% predicted, smoking > 20 pack-years, supplemental oxygen use; previous diagnosis of asthma or COPD; pulmonary arterial hypertension, or medical conditions that could interfere with CPET. Data were compared with healthy controls. RESULTS: All patients (16 women; mean age 56 +- 11 years; FVC 57 +- 17% predicted) had restrictive ventilatory pattern without bronchodilator response. In FOT, 4 patients had increased resistance at 5 Hz (R5), all patients presented low reactance (X5) values, and none presented a significant bronchodilator response. Chronic HP patients had reduced exercise performance with lower peak V?O2, diminished breathing reserve, hyperventilation, oxygen desaturation and augmented Borg dyspnea scores when compared with controls. The prevalence of DH was only found in 18% of patients. When comparing chronic HP patients with normal and low peak VO2 (< 84%predicted, LLN), the later exhibited higher hyperventilation (VE/VCO2 slope), lower tidal volumes, and poorer physical functioning scores on Short-form-36 health survey. ROC curve analysis showed that reduced lung volumes (FVC%, TLC% and DLCO%) were high predictors of poor exercise capacity. On CT, chronic HP is characterized by increased pulmonary densities (Hounsfield Units) inferring the extension of ground glass opacities and fibrosis when compared with healthy subjects. The extension of low attenuation areas (LAA) and AT in relation to the hole lung volume is low and does not correlate with PFT indexes of obstruction; however, patients with greater extension of these areas had less fibrosis and more preserved PFTs. CONCLUSIONS: Chronic HP was characterized by an imminently restrictive lung disorder, and not by airway obstruction, according to the different diagnostic methods applied in this study. Reduction of exercise capacity was prevalent due to ventilatory and gas exchange limitation, similarly to other fibrotic interstitial lung diseases, rather than due to DH. Reduced lung volumes were good predictors of ventilatory responses during exercise