Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2015-05-19T21:42:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_TratamentoAcidoAscorbico.pdf: 1866293 bytes, checksum: aac264823155a87fb2745313a4c5179b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2015-05-20T17:23:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_TratamentoAcidoAscorbico.pdf: 1866293 bytes, checksum: aac264823155a87fb2745313a4c5179b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-20T17:23:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_TratamentoAcidoAscorbico.pdf: 1866293 bytes, checksum: aac264823155a87fb2745313a4c5179b (MD5) Previous issue date: 2015 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / O tratamento com ácido ascórbico acelera o processo de reparo do tendão calcâneo em modelo de lesão tendínea em ratos SOUZA, Martha Costa de SILVA, Anderson Manoel Herculano Oliveira da Tendinopatia Ácido ascórbico Estresse oxidativo Terapêutica A ruptura do tendão calcâneo acomete uma grande parte da população, principalmente atletas e idosos e seu processo de reparo ainda necessita de maiores esclarecimentos, possibilitando novos tratamentos. O ácido ascórbico (AA) é uma substância conhecida pela participação na hidroxilação de prolina e lisina, importante para síntese da matriz extracelular, bem como eficiência comprovada em diversos tratamentos por suas propriedades antioxidantes. Dessa forma, o presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito do tratamento local com AA nos parâmetros de reparo tecidual e funcional no tendão calcâneo de ratos. O trabalho foi aprovado pelo comitê de ética da instituição (CEPAE-UFPA) sob o parecer 161-13. Os animais foram submetidos à ruptura do tendão calcâneo, em três grupos (n=18): Controle; Injúria+AA (30mM); Injúria+veículo (NaCl 0,9%). Todos os tratamentos foram realizados por injeção local, a partir do segundo dia pós-lesão e a cada dois dias até o 14º dia ou 21º dia. Foi avaliado a marcha dos animais pelo Índice funcional de Aquiles (IFA) nos dias 7(n=6), 14(n=6) e 21(n=3) dias pós-lesão, o número de células por marcação com DAPI no 14º(n=9) e 21º(n=9) dia pós –lesão e a estrutura do tecido por marcação com HE, nos mesmos dias. Os animais não diferiram no ganho de massa corporal. O grupo Injúria+AA(-39.51±15.3) apresentou melhora funcional principalmente no 14º dia, se comparado ao grupo Injúria+veículo(-89.22±16.57, p<0,01). A análise histológica demonstrou sob contagem do número de células, que o grupo Injúria+AA(762±29.6) apresentou um menor número de células no 21º dia em relação ao grupo Injúria+veículo(916±57.0, p<0,01). A análise da autofluorescência do colágeno e HE demostrou que o grupo tratado com AA apresentou uma estrutura tecidual mais conservada em 14 e 21 dias pós-lesão em relação ao grupo veículo que, por sua vez, difere bastante do grupo controle. Nossos resultados sugerem que o ácido ascórbico acelera o processo de reparo da lesão tendínea, apresentando melhoras teciduais e funcionais 21 dias após a lesão. / Tendon rupture affects a large part of the population in special seniors and athletes.The repair process requires more studies which can indicate the possibility of new treatments. The ascorbic acid (AA) is a well known substance by its requirement for proline and lysine hydroxylase activity during the collagen synthesisis and the efficiency of this vitamin for various treatments, because of its antioxidant properties. So, the aim of the present study is to evaluate the local treatments effects with this substance on tissue and functional repair the Achilles tendon from rats. The study was approved by the ethics committee of the institution (CEPAE-UFPA) according to the license 161-13. The animals were submitted to rupture of Achilles tendon, divided into three groups (n=27): control, injury+AA (30 mM), injury+vehicle (0.9% NaCl). All treatments were performed by local injection, from the second day after injury and every other day until day 14 or 21. The walk of the animals was assessed by functional index of Achilles (IFA) on days 7(n=6), 14(n=6) e 21(n=3), cells number was assessed by staining with DAPI and tissue organization by staining with HE and autofluorescence, at 14(n=9) and 21(n=9) days of injury. The animals did not differ in body mass gain. The injury+AA group (-39.51±15.3) showed functional improvement especially at day 14 when compared to the injury+vehicle (-89.22±16.57, p<0.01). The histological examination demonstrated in counting the number of cells that the injury+AA group (762±29.6) showed a smaller number of cells on day 21 (762±29.6) in relation to the groups injury+vehicle (916±57.0, p<0.01). The analysis of autofluorescence of collagen and HE showed that the injury+AA group achieved better ECM organization on day 14 and 21 in relation to the groups injury+vehicle, in turn, differs significantly from the control group. Our results suggest that AA accelerates the healing process of tendon injury, presenting tissue and functional improvements 21 days after injury.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T13:59:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseMorfologicaMolecular.pdf: 1631378 bytes, checksum: 5757c5c8705000ab31e5fe11f2a6a2d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:33:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseMorfologicaMolecular.pdf: 1631378 bytes, checksum: 5757c5c8705000ab31e5fe11f2a6a2d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:33:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseMorfologicaMolecular.pdf: 1631378 bytes, checksum: 5757c5c8705000ab31e5fe11f2a6a2d0 (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A espécie Lepidosiren paradoxa pertence à ordem Dipnoi, juntamente com mais dois gêneros, sendo considerados os peixes pulmonados verdadeiros. Os machos adultos de L. paradoxa diferenciam-se das fêmeas através da presença de filamentos nas nadadeiras pélvicas. Estes filamentos assemelham-se àqueles encontrados em brânquias de peixes e de salamandras neotênicas. Estes filamentos desenvolvem-se e tornam-se vascularizados durante o período de reprodução. Neste trabalho, propomos testar a hipótese de que os filamentos pélvicos de L. paradoxa compartilham características morfológicas e moleculares com filamentos brânquiais. Para tanto, realizamos análise morfológica e molecular dos filamentos das nadadeiras pélvicas entre as estações de estiagem e chuvosa. A análise morfológica ocorreu através de coloração de hematoxilina e eosina (HE) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Por fim, foi feita a quantificação de expressão gênica de marcadores enriquecidos em brânquias de peixes, através de PCR em Tempo Real (RT-PCR), utilizando a nadadeira peitoral como referência. O comprimento dos filamentos da estação chuvosa e de estiagem apresentaram os valores de média e desvio padrão de, 4,31 mm±0,186 e 1,63 mm±0,104, respectivamente. Nas imagens de MEV foram observadas algumas células com microvilosidades e/ou microciliadas e algumas células menores. Nas análises de HE os filamentos apresentaram uniformidade no seu epitélio formada com 4 camadas de células, sendo preenchido por tecido conjuntivo e por fim tornam-se mais vascularizados na estação chuvosa. Na analise molecular de RT-PCR os marcadores selecionados não apresentaram variação quando comparados com a nadadeira peitoral e entre as estações. Em conclusão, apesar de existirem semelhanças morfológicas entre filamentos pélvicos de L. paradoxa e filamentos brânquiais de peixes e anfíbios, os dados moleculares aqui obtidos não suportam a hipótese de que estes filamentos realizem trocas gasosas. / The Lepidosiren paradoxa species belongs to Dipnoi order, along with two genre and are considered true lungfishes. Adult males of L. paradoxa differ from females by the presence of filaments in the pelvic fin. These filaments resemble those found in gills of fish and neotenic salamanders. These filaments are grow and become vascularized during the reproduction period. In this work we tested the hypothesis that the pelvic filament of L. paradoxa share morphological and molecular characteristics with gill filaments. Thus, we performed morphological and molecular analyses of the filaments of the pelvic fins between the dry and rainy seasons. Morphological analysis was perfomed through hematoxylin and eosin (HE) and scanning electron microscopy (SEM). Finally, we quantified gene expression of gill markers by RT-PCR using pectoral fin as reference. The mean length and standard deviation of the filaments during rainy and dry season were 4,31mm of ± 0.186 and 1,63mm ± 0.104, respectively. In the SEM images, we observed with a few cell microvilli and/or microplicae and some smaller cells. In the HE analyzes we found that the filaments have uniform epithelium formed with four layers of cells being filled by connective tissue and finally become more vascularized the rainy season. Molecular analysis through RT-PCR did not show any change when compared to the pectoral fin and between the stations. In conclusion, despite morphological and molecular similarities between gill filaments and pelvic fin filaments, our findings do not support a role for L. paradoxa pelvic filaments in gas exchange.

Resumo: Nesta pesquisa foram realizadas a histologia e morfometria de ovários, ovidutos e úteros de cadelas. Foram utilizados 15 animais distribuídos em grupos (G) de acordo com as idades em anos, G1 (1 até 3), G2 (maiores de 3 até 5) e G3 (maiores de 5 até 7). Após a realização da ovariosalpingo-histerectomia, ovários, fragmentos de tubas uterinas e útero foram fixados e processados rotineiramente para a inclusão em parafina. As amostras foram coradas pela técnica da Hematoxilina-eosina. Os parâmetros morfométricos analisados foram: diâmetros máximo e mínimo (æm), perímetro (æm), área (æmø), fator de forma do citoplasma e núcleo dos oócitos dos diferentes tipos de folículos e espessura das camadas salpíngicas e uterinas. Os procedimentos estatísticos utilizados foram ANOVA e o teste Tukey (5%). Houve diferenças significativas entre os grupos experimentais para os parâmetros do citoplasma e núcleo de oócitos foliculares e para a espessura das camadas salpíngicas e uterinas. Concluiu-se que de acordo com os resultados desta pesquisa a maturação in vitro, obtém melhores desempenhos na utilização de oócitos de folículos primordiais nas fêmeas correspondentes ao G3 e para oócitos inclusos em folículos secundários e terciários, as do G2; as diferenças nas espessuras das camadas uterinas podem ser uma das explicações para o desenvolvimento diferenciado dos fetos em fêmeas caninas; os valores obtidos neste estudo servirão como subsídios para a biotecnologia da reprodução, diagnóstico e prognóstico de enfermidades que acometem esta espécie. / Abstract: The objectives of this work were the histologyc and morphometric study of ovaries, oviducts and uterus of canines females. There were 15 animals distributed in groups involved according to their age, Group 1 (G1), Group 2 (G2) and Group 3 (G3). To the histological analysis after the accomplishment of the ovariehisterectomy, the ovaries, fragments of oviducts and uterus were fixed and processed routinely for inclusion in paraffin. The samples were stained by haematoxilyn-eosin technique. The morphometric parameters studied were: maximum and minimum diameters (æm), perimeter (æm), area (æm2), roundness factor of nucleus and cytoplasm of oocytes of different kinds of follicles and thickness of oviduct and uterine layers. The statistical procedures used were ANOVA and Tukey's test. There was significantly difference in oocytes of follicles: primordials in the cytoplasm for maximum and minimum diameters, perimeter and area between the G1 and G3, unilaminar primary in the cytoplasm for roundness factor between the G1 and G2, secondary in the nucleus for maximum and minimum diameters, perimeter and area between the G1 and G2 and G2 and G3, tertiary in the nucleus for minimum diameter, perimeter and area between the G1 and G2 and G2 and G3. In the oviduct there was significantly difference in: the infundibulum for mucosa between the G2 and G3, and the serose between the G1 and G3, the ampulla for mucosa and serose between the G1 and G2, the isthmus for serose between the G1 and G2 and G1 and G3. In the uterus there was significantly difference in: the segment 1 of myometrium between the G1 and G3 and G2 and G3, the segment 2 of miometrium between the G1 and G2 and G1 and G3. It concludes that this study will serve as subsidy for the biotechnology of the reproduction, the diagnosis and prognostic of diseases that impaired this specie. / Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Coorientador: Maria Rita Pacheco / Banca: Ivo Walter dos Santos / Banca: Marion Burkhardt de Koivisto / Mestre

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do colostro bovino liofilizado (CBL), utilizado como fonte parcial da dieta protéica, sobre as características histológicas do epitélio intestinal de juvenis de pacu (Piaractus mesopotamicus) e dourado (Salminus brasiliensis). Os juvenis foram distribuídos num delineamento experimental inteiramente casualizado em esquema fatorial 3x2. Foram utilizadas dietas com três níveis de inclusão de CBL (0%, 10% e 20%) e dois períodos experimentais (30 e 60 dias), oferecidas duas vezes ao dia até a saciedade aparente. Para o estudo histológico, o intestino foi dividido em três segmentos, S1, S2 e reto para pacu e S1, S2 e intestino posterior para dourado. Foram avaliadas a espessura da camada muscular; o volume parcial da mucosa absortiva (Vv); o número das células caliciformes contendo mucinas ácidas e neutras e totais, e os subtipos ácidas - sialomucinas e sufomucinas. Nos juvenis de pacu, a inclusão de 20% de CBL alterou a distribuição das células caliciformes contendo as mucinas ácidas, neutras e totais, os subtipos sialomucinas e sulfomucinas, e a espessura da camada muscular, enquanto o Vv foi afetado apenas pelo período experimental. Nos juvenis de dourados, efeito de período experimental foi observado para células caliciformes contendo mucinas ácidas, neutras e totais e os subtipos sialomucinas e sulfomucinas, espessura da camada muscular e Vv. A adição de 10% de CBL afetou apenas o Vv no segmento S1. Considerando os aspectos avaliados no presente estudo, a presença do colostro bovino liofilizado na dieta influenciou, no período estudado, as características histológicas entéricas de juvenis de pacu, enquanto que nos juvenis de dourado influencia desta secreção láctea não foi observada. / The aim of this study was to evaluate the effect of lyophilized bovine colostrum (LBC), used as partial source of protein in the diet, on the histological characteristics of the intestinal epithelium of juvenile pacu (Piaractus mesopotamicus) and juvenile dourado (Salminus brasiliensis). Juveniles were distributed in a completely randomized design in a factorial scheme 3x2. Three diets were used with different levels of LBC inclusion (0%, 10% and 20%) and two experimental periods (30 and 60 days) offered twice daily until apparent satiation. For the histological study, the intestine was divided into three segments, S1, S2 and rectum to the pacu and S1, S2 and posterior intestine to the dourado. The muscle layer thickness; the mucosal absorptive volume (Vv); the number of goblet cells containing acidic and neutral mucins and the acidic subtypes - sialomucin and sulphomucin were evaluated. In juvenile pacu, the inclusion of 20% of LBC changed the distribution of goblet cells containing acidic, neutral and total mucins, the subtypes sialomucins and sulphomucins, and the thickness of the muscle layer, while the Vv was affected only by the experimental period. In juvenile dourado, effect of experimental period was observed for goblet cells containing acidic, neutral and total mucins and subtypes sialomucins, sulphomucins, thickness of muscle layer and Vv. The addition of 10% of LBC affected only Vv in the segment S1. Considering the aspects studied, the presence of lyophilized bovine colostrum in the diet influenced, in the period studied, the enteric histological characteristics of juvenile pacu, while the juvenile dourado influence of this lacteal secretion was not observed.

Os organismos do filo Myxozoa são endoparasitas obrigatórios que infectam principalmente peixes em diversas regiões do mundo, estando entre os mais importantes patógenos de peixes, com mais de 2180 espécies descritas porém, pouco se conhece deste parasita em peixes do Brasil. Neste estudo foram realizadas coletas entre abril de 2011 a agosto de 2012, onde foram coletados oito exemplares de piapara (Leporinus obtusidens) e dezessete exemplares de dourado (Salminus brasiliensis), oriundos do rio Mogi-Guaçu, próximo a Cachoeira de Emas, localizada no município de Pirassununga, estado de São Paulo. As análises morfológicas (microscopia de luz, histologia e a análise ultraestrutural), técnicas de biologia molecular (PCR e sequenciamento) foram utilizadas na identificação de duas novas espécies de Henneguya e análise filogenética do gene 18S rDNA foi realizada para avaliar a relação filogenética desta duas novas espécies com outras espécies de mixosporídeos. Duas novas espécies foram encontradas neste estudo. Uma delas foi encontrada infectando a nadadeira de L. obtusidens e é descrita neste estudo como Henneguya sp. 1 e uma outra espécie encontrada infectando a membrana do arco da branquial e na membrana entre os raios da nadadeira de S. brasiliensis, a qual foi aqui descrita como Henneguya sp. 2. A análise histopatológica revelou que Henneguya sp. 1 ocasionou uma leve compressão no tecido adjacente. A análise ultra-estrutural permitiu a compreensão da interface parasita-hospedeiro e o processo de esporogênese das duas espécies descritas; além disso, foi observado a presença de vesículas esbranquiçadas para Henneguya sp. 2, com função ainda desconhecida. Nos estudos filogenéticos, utilizando os métodos máxima parcimônia e máxima verossimilhança para ambas as espécies, foi avaliado no estudo 1 que Henneguya sp. 1, parasita de peixe characiforme, aparece isolado dando origem a um clado irmão de Henneguya spp., parasitas de siluriformes, characifomes e esociformes; já no estudo 2, a análise filogenética da espécie Henneguya sp. 2, também parasita de peixe characiforme, foi observado a formação de um clado com 3 espécies parasitas de characiformes, sendo duas espécies de Henneguya descritas neste estudo e o Myxobolus oliveirai. / The parasites of Myxozoa are endoparasites that infect mainly fishes in several parts of the world, being this group considered one of the most important pathogens of fishes, with more than 2180 species described. However little is known about this group of parasite in Brazil. During this study, eight piapara (Leporinus obtusidens) and seventeen dourado (Salminus brasiliensis) were caught in Mogi-Guaçu river in a period from April 2011 to August 2012, near waterfall Cachoeira de Emas located at Pirassununga city, state of São Paulo, Brazil. Morphological analyses (light microscopy, histology and ultrastructure) and molecular biology techniques (PCR and sequencing) where done to identify two new species of Henneguya and phylogenetic analyses using the 18S rDNA gene were performed to evaluate the phylogenetic relationship of this two new species among others myxosporeans available on GenBank. Henneguya sp. 1 has been described infecting the fin of L. obtusidens and Henneguya sp. 2 has been described infecting the gill arch membrane and the fin membrane of S. brasiliensis. The histopathological analyses revealed that Henneguya sp. 1 occasioned a small compression of adjacent tissue of the host. Ultraestructural analyses showed the host-parasite\'s interface and the sporogenesis of the two Henneguya spp. furthermore Henneguya sp. 2 showed several whitish vesicles with an unknown function. Phylogenetic studies using the maximum parsimony and maximum likelihood methods, showed in the first study Henneguya sp .1 appearing alone as a basal branch of a sister clade composed by Henneguya parasites of siluriforms, characiforms and esociforms fishes, and the second study showed Henneguya sp. 2 grouped with Hennegua sp. 1 and Myxobolus oliveirai, both parasites of characiforms fishes.

O Callithrix penicillata (sagui-de-tufo-preto) mesmo sendo utilizado em algumas pesquisas e também mantido tanto em zoológicos como animal de estimação, possui ainda diversas lacunas acerca de sua anatomia. Assim, utilizamos 10 animais somente para o estudo da topografia, do padrão de irrigação vascular e de alguns índices biométricos do estômago, e outros cinco animais para estudos microscópicos. Ambos tendo com o objetivo caracterizar a anatomia do estômago e comparar as variações entre os sexos e eventualmente com outras espécies. Para o padrão vascular realizamos injeção de neoprene látex corado na aorta torácica com posterior dissecação dos ramos abdominais e no caso do estudo biométrico o mesmo foi realizado com o uso de um paquímetro digital, fita métrica e transferidor. E procedimentos tanto para a microscopia de luz com colorações de Hematoxilina-Eosina e Tricrômio de Masson quanto para a microscopia eletrônica de varredura foram efetuados. Com base no estudo ora realizado verificamos que o estômago localizava-se medialmente da 9° a 12° costelas e os aspectos biométricos revelam os padrões primários para este órgão, não se registrando diferenças entre machos e fêmeas. A artéria celíaca surge como o primeiro ramo da aorta abdominal, ocorrendo maior prevalência (70%) de trifurcação a partir desta artéria, com a emissão da artéria lienal, artéria gástrica esquerda e artéria hepática. A artéria lienal acompanhou a curvatura maior do estômago dando origem à artéria gastroepiplóica esquerda. A artéria gástrica esquerda no seu trajeto acompanhava a região da cárdia e do esôfago abdominal, cedendo-lhes contribuições. Já a artéria hepática originava a artéria gástrica direita e a artéria gastroduodenal. E esta por sua vez fornecia a artéria gastroepiplóica direita e a artéria pancreático-duodenal. Quanto aos aspectos microscópicos observamos a presença de quatro camadas: mucosa, submucosa, muscular e serosa e a presença de pregas da mucosa. Desta forma nesta oportunidade visamos contribuir para o estudo da anatomia comparativa, o que procuramos por vezes realizar neste trabalho, a fim também de oferecer subsídios indispensáveis em procedimentos clínico-cirúrgicos nesta espécie. / The Callithrix penicillata (black-tufted-ear-marmoset), have being used in some research and also kept both in zoos and pet. There are still many questions to be answered about their anatomy. Then to study the topography, the vascular pattern of irrigation and some biometric indices of the stomach, we used 10 animals and five other animals to microscopic studies. Both group of animals were studied in order to characterize the anatomy of the stomach and compare the variations between the sexes and possibly other species. To perform the vascular standard thoracic aorta was stained with injection of neoprene latex. Subsequently, we performed the dissection of the abdominal branches and in the case of the same biometric study was conducted using a digital caliper, tape measure and protractor. Procedures for both light microscopy with hematoxylin-eosin staining and Massons Trichrome as for scanning electron microscopy were perfomed. Based on our study we verified that the stomach was located medially from 9° to 12° ribs and biometric aspects reveal the primary standards body for this, not registering differences between males and females. The celiac artery arises as the first branch of the abdominal aorta, causing a higher prevalence (70%) from the trifurcation of the artery, originating the lienal artery, left gastric artery and the hepatic artery. Lienal artery accompanied the greater curvature of the stomach giving rise to the left gastroepiploic artery. The left gastric artery in its course follow and irrigate the region of the abdominal esophagus and cardia, originating new branches for that region. In its turn the hepatic artery originated the right gastric artery and gastroduodenal artery which gives rise to the right gastroepiploic artery and pancreatic-duodenal artery. In regards to the microscopic aspects we observed the presence of four layers: mucosa, submucosa, muscle and serosa and the presence of mucosal folds. Thus we aim to contribute to the study of comparative anatomy, in order to offer indispensable subsidies in clinical and surgical procedures in this specie.

Akademisk avhandling--Karolinska institutet, Stockholm. / Added t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411954-Texto+Completo-0.pdf: 1943189 bytes, checksum: b8512a0b7a8966dc29fb921e76e53ab4 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: The bone grafts are still used frequently in the resolution of clinical situations with loss of bone substance. The viability of bone cells transferred with the graft is crucial in the mechanical and physiological properties of the graft. A question inherent to the surgical procedure when using vascularised bone grafts is: will the bone graft maintain its viability through the vascular pedicle over time? Through an experimental model, we desire to create inferences about the viability of vascularised bone graft from the iliac crest in rats and check their histological features. Methods: We used 23 isogenic male Kyoto rats, which were divided into two groups, the first consisting of animals subjected to the technique of vascularised bone graft from the iliac crest and pedicled on the iliac branch of the iliolumbar artery, and the second (control group) underwent the same procedure the first with the addition of ligation of the vascular pedicle. The viability of bone grafts was observed for three weeks, by direct observation of the graft, histology and immunohistochemistry. Results: All vascularised grafts evaluated in the first week showed viability by direct observation, histology and immunohistochemistry. Meanwhile in the second and third weeks the grafts were shown to be not viable in 75% of cases when subjected to evaluation by the direct observation and 50% of cases when performed for histological analysis and immunohistochemistry. Conclusions: Some vascularised grafts in their design have become unviable and began to behave as if non-vascularised grafts under the direct observation and histology. Despite the possibility of failure, the use of vascularized bone grafts should be encouraged, because the descriptive histology showed greater cell density in the portion medullary bone, osteocytes with greater functionality in the deposition of bone matrix, with intra-vascular network bone preserved. / Introdução: Os enxertos ósseos continuam sendo utilizados com freqüência na resolução de situações clínicas com perda de substância óssea. A viabilidade das células ósseas transferidas com o enxerto é um dos fatores determinantes para as propriedades mecânicas e fisiológicas do enxerto. Uma dúvida inerente ao procedimento cirúrgico quando se utiliza enxertos ósseos vascularizados é: será que o enxerto ósseo manterá sua viabilidade através do pedículo vascular com o decorrer do tempo? Através de um modelo experimental, almejamos criar inferências sobre a viabilidade do enxerto ósseo vascularizado da crista ilíaca em ratos e verificar suas características histológicas. Métodos: Foram utilizados 23 ratos machos isogênicos da linhagem Kyoto, os quais foram divididos em dois grupos, o primeiro composto por animais submetidos à técnica do enxerto ósseo vascularizado da crista ilíaca baseado no ramo ilíaco da artéria iliolombar, e o segundo (grupo controle) submetidos ao mesmo procedimento que o primeiro com a adição da ligadura do pedículo vascular. A viabilidade dos enxertos ósseos foi verificada durante três semanas, através da visualização direta do enxerto, histologia e imuno-histoquímica. Resultados: Todos os enxertos vascularizados avaliados na primeira semana apresentaram viabilidade segundo a observação direta, histologia e imuno-histoquímica. Entretanto na segunda e terceira semana os enxertos mostraram-se inviáveis em 75% dos casos quando submetidos à avaliação segundo a observação direta e em 50% dos casos quando realizada a análise histológica e imuno-histoquímica. Conclusão: Alguns enxertos vascularizados em sua concepção tornaram-se inviáveis e passaram a se comportar como enxertos não-vascularizados sob a análise da observação direta e histológica. Apesar da possibilidade de falha, o uso de enxertos ósseos vascularizados deve ser incentivado, pois a histologia descritiva demonstrou maior densidade celular na porção óssea medular, osteócitos com maior funcionalidade na deposição de matriz óssea, com rede vascular intra-óssea preservada.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000410177-Texto+Completo-0.pdf: 3937581 bytes, checksum: 9588bb7a228c103426c20b2050c969d6 (MD5) Previous issue date: 2009 / Epilepsy affects 1% of the world population and 30% of these patients are refractory to medication now available. Stem cells host hope in the treatment of epilepsy. Given their ability to proliferate, differentiate and regenerate tissues they could fix neural circuits and reestablish the physiological excitability of neurons. This study aimed to verify the therapeutic potential of mesenchymal stem cells (MSC) and cells that underwent a process or lysis obtained from the bone marrow on seizure control and on progressive neuronal loss induced by experimental epilepsy. Experimental status epilepticus (SE) was induced by lithium-pilocarpine injection (127 mg/kg; ip and 60 mg/kg; ip respectively). Seizures were scored by Racine’s scale. The duration of SE was controlled with diazepan (10mg/kg; ip; 90 minutes after SE onset). Control animals received saline other than pilocarpine. Twenty-two days after SE, rats were randomly assigned into five groups: PILO; PILO+MSC; PILO+Lysis, Control and Control+MSC. MSC groups received cell transplantation (obtained from EGFP C57BL/6 mice). PILO+Lysis rats also received cells obtained from the bone marrow of EGFP C57BL/6 mice, but that previously underwent lysis. The other groups received saline in the same volume. All transplants were via tail vein (104-6 cells, 200μL).Pilocarpine-treated animals were monitored for the presence of spontaneous seizures for 21 days (7 prior to cell transplant and 14 afterwards). Forty-five days later rats were evaluated in: the Morris water maze (MWM), the object recognition task, open field and the elevated plus maze. Twenty-four hours, 7, 14, 21, 60 and 135 days after the transplant rats were sacrificed. The hippocampi were collected in order to verify the presence of EGFP using PCR. Rats included in the histological evaluation were sacrificed 4 months after transplantation. The hippocampal volume, volumes of CA1, CA2, CA3 and CA4, as well as density and total of cells were evaluated. Finally, MSC bone marrow cells were evaluated via flow cytometry before and after culture. Our results show that MSC do not reduced the frequency of spontaneous seizures. On the other hand, animals given lysed cells had reduced seizure frequency. In addtion, epileptic rats treated with MSC had improved performance in the object recognition task, but not in the MWM. On the other hand, the treatment with lysed cells did not lead to improvement in any of the aforementioned tasks. We also observed that lithium-pilocarpine-treated animals showed lower cell count, density and hippocampal volume when compared to control rats. Furthermore, neither MSC or Lise led to significative changes in any of the analysed variables, except for hippocampal volume, which was increased in PILO+MSC and PILO+Lysis when compared to PILO animals. The flow cytometry analysis of the samples revealed that MSC were positive to CD45, CD19, CD34, CD117 and Sca-1. Finally, we detected EGFP in samples obtained from the hippocampus of transplanted animals. During the last years much has been done to study the application of stem cells in several neurodegenerative diseases. In the future, this kind of approach can also be valid in the treatment of chronic epilepsy, although the ideal stem cell type remains to be established. / A epilepsia atinge cerca de 1% da população mundial, sendo que aproximadamente 30% desses pacientes não respondem ao tratamento medicamentoso. Por sua vez, as células tronco representam uma esperança de tratamento da epilepsia, porquanto têm grande capacidade de proliferação, diferenciação e regeneração de tecidos, podendo restaurar circuitos neurais e restabelecer a excitabilidade neuronal fisiológica. O objetivo deste estudo foi verificar se as células tronco mesenquimais (CTM) ou se células lisadas (Lise Celular) obtidas da medula óssea apresentam potencial terapêutico no controle das crises epilépticas e do dano neuronal progressivo induzido pela epilepsia experimental. Os animais foram injetados com lítio-pilocarpina (127 mg/kg e 60 Mg/kg i. p., respectivamente) para indução de status epilepticus (SE). As crises comportamentais foram classificadas de acordo com a escala de Racine e a duração do SE foi controlada com diazepam (10 mg/kg, i. p., 90 minutos). Os animais controle receberam solução salina. Após 22 dias, o total dos animais foi dividido em cinco grupos: PILO; PILO+CTM, PILO+Lise, Salina e Salina+CTM. Os grupos CTM receberam transplante de células tronco mesenquimais, obtidas da medula óssea de camundongos EGFP C57BL/6. O grupo PILO+Lise recebeu células também provenientes da medula óssea desses animais, mas que passaram previamente por um processo de lise celular. Os animais dos grupos Salina e PILO receberam solução salina. Todos os transplantes foram feitos via veia da cauda (104-6 células, 200μL).Os animais tratados com pilocarpina (PILO) foram monitorados por vídeo durante sete dias pré-transplante, e outros catorze dias após o procedimento, para observação e computação de crises espontâneas recorrentes (CERs). Ainda, 45 dias depois da injeção das células os animais foram avaliados nas seguintes tarefas: labirinto aquático de Morris (LAM), reconhecimento de objetos, campo aberto e labirinto em cruz elevado. Decorridos 24 horas, 07 dias, 14 dias, 21 dias, 60 dias e 135 dias do transplante os animais foram sacrificados, e foram coletados os hipocampos direito e esquerdo para análise da presença de EGFP por PCR. Para a avaliação histológica, os animais foram sacrificados 04 meses após o transplante, tendo sido analisados o volume hipocampal, o volume dos núcleos CA1, CA2, CA3 e CA4, bem como a densidade e o número total de células nestes núcleos. Finalmente, as células provenientes da medula óssea de camundongos C57/BL6 antes e após serem cultivadas foram avaliadas por citometria de fluxo. Nossos resultados demonstram que as células mesenquimais injetadas não reduzem as CERs. Já para os animais tratados com lisado celular, verificamos que há redução na freqüência de crises. A administração de CTM aos animais tratados com PILO promoveu melhora cognitiva no paradigma do reconhecimento de objetos, sem, porém, melhorar a performance destes animais no LAM. O tratamento com lisado celular, por sua vez, não levou a melhor desempenho em quaisquer dos paradigmas cognitivos citados acima. Por meio da análise histológica podemos observar que os animais tratados com lítio-pilocarpina apresentavam contagem total de células, densidade e volume inferiores aos animais controle. Ainda, CTM ou Lise não produziram aumento significativo em nenhuma das variáveis analisadas, com exceção do volume hipocampal, que se apresentou maior nos grupos PILO+CTM no hemisfério direito e PILO+Lise em ambos os hemisférios. Por outro lado, a análise dos dados obtidos na citometria de fluxo revelou que as CTM são positivas para os seguintes marcadores de superfície CD45, CD19, CD34, CD117 e Sca-1. Finalmente, detectamos a presença de EGFP em amostras obtidas do hipocampo de animais transplantados com CTM, resultado que demonstra que as células administradas intravenosamente migram ao sistema nervoso central. Nos últimos anos, estudos que buscam tratamentos baseados em células tronco para as mais diversas doenças neurodegenerativas foram vistos com muito interesse. Este tipo de tratamento pode, no futuro, ser útil também no tratamento da epilepsia crônica, embora ainda seja preciso estabelecer com mais clareza o tipo de célula tronco ideal.

Apesar dos avanços recentes na tecnologia dos aparelhos de ressonância magnética (RM) permitirem a aquisição de imagens de alta resolução, ainda não é possível delinear de forma confiável os limites entre regiões de diferentes citoarquiteturas baseando-se somente nesta modalidade. As imagens de histologia são mandatórias quando se necessita saber o limite exato entre diferentes regiões neuroanatômicas. Contudo, o processamento histológico inevitavelmente causa grandes deforma¸coes no tecido, o que torna a compara- ção direta entre as duas modalidades inviável. Os estudos de neuroimagem/neuroanatomia que necessitam de comparação com a histologia devem necessariamente incluir uma etapa de alinhamento entre as duas modalidades; tarefa que muitas vezes acaba sendo realizada manualmente. Entretanto, o registro manual ´e demorado e pouco acurado, se tornando inviável quando os exames de histologia geram centenas de imagens. Este trabalho propõe um método para registro de imagens de histologia e RM, composto por um conjunto de recomenda¸coes para o preparo das imagens cujo objetivo ´e otimizá-las para o registro; e por uma pipeline computacional capaz de registrar as imagens consideradas. O trabalho aqui descrito foi desenvolvido primeiramente com o intuito de registrar imagens de espécimens de hipocampo provenientes do projeto CINAPCE e, posteriormente, para registro de imagens de encéfalo inteiro provenientes do Banco de Cérebros da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. A pipeline computacional foi testada com sucesso em imagens reais de dois encéfalos inteiros. A avaliação quantitativa dos registros realizados foi feita comparando segmenta¸coes manuais do hipocampo direito, núcleo caudado esquerdo e ventrículos laterais superiores, realizadas no volume de RM e da histologia registrada. A quantificação do resultado foi feita através do cálculo das métricas coeficiente de Dice (CSD) e distancia espectral ponderada (DEP) sobre as segmentações. A pipeline obteve um CSD médio de aproximadamente 0,77 e um DEP médio de aproximadamente 0,003. Os resultados mostraram que o método foi capaz de registrar as imagens de histologia nas respectivas imagens de RM exigindo interação mínima com o usuário. / Although latest advances in MRI technology have allowed the acquisition of higher resolution images, reliable delineation of cytoarchitectural boundaries is not yet possible based solely on that modality. Histological images are regularly required to locate the exact limits between neuroanatomical structures. Histological processing is nevertheless prone to cause a high amount of tissue distortion, which prevents direct comparison between the two modalities. Neuroimage/neuroanatomy studies that require direct comparison between histology am MRI must include a registration step. Such task is usually manually performed, but that becames infeasible for large histology volumes. Moreover, manual registration is time consuming and inaccurate. This thesis proposes a set of tissue processing recommendations aiming at optimizing the registration proccess, together with a computational pipeline for registering histology to MRI. The herein described work was initially designed to proccess hippocampi specimens from the CINAPCE project and posteriorly improved to process full brain images from the Brain Bank of the Brazilian Aging Brain Study Group. The pipeline was tested on two full brain histology volumes from the Brain Bank of the Brazilian Aging Brain Study Group. Results were assessed by comparison of manual segmentations of the left caudate nucleus, right hippocampus and superior lateral ventricles, performend on both MRIs and registered histology volumes. Quatitative evaluation was performed by computing the Dice coeficient (DC) and normalized weighted spectral distance (WESD) on the segmentations. The pipeline precessing yielded mean DC of 0.77 and mean WESD of 0.0033. The described method was able to sucessfuly register histology to their corresponding MRI volumes with minimal user interaction.