Orientador: Winston Bonetti Yoshida / Coorientador: Marcos Augusto de Moraes Silva / Banca: Marcello Laneza Felicio / Banca: Nelson Leonardo Kerdahi Leite de Campos / Banca: Reinaldo Ayer de Oliveira / Banca: Nilson Antunes / Resumo: Objetivo: Relatar de forma simples e resumida o desenvolvimento da circulação extracorpórea. Métodos: Realizada revisão de literatura sobre a evolução da circulação extracorpórea, seu papel fundamental para cirurgia cardiovascular e as complicações que podem surgir após o seu uso, dentre elas, a hemólise e a inflamação. Resultados: O processo de desenvolvimento da circulação extracorpórea foi fundamental diminuindo as complicações desencadeadas por ela, que acabam por repercutir no paciente, variando de lesões de graus variados até falência de múltiplos órgãos. Os pesquisadores estudaram quais as agressões que a CEC poderia suscitar no organismo humano. Possíveis soluções surgiram e consequentemente, meios mais adequados para uma condução mais segura do pós-operatório foram propostas. Conclusão: A CEC progrediu a passos firmes e seguros ao longo destas últimas décadas desde a sua concepção por Gibbon. Apesar da sua evolução e das condutas realizadas na tentativa de amenizar as complicações, o respeito aos detalhes das funções fisiológicas do paciente são fundamentais / Abstract: Objective: To provide a brief review of the development of cardiopulmonary bypass. Methods: A review of the literature on the development of extracorporeal circulation techniques, their essential role in cardiovascular surgery, and the complications associated with their use, including hemolysis and inflammation. Results: The advancement of extracorporeal circulation techniques has played an essential role in minimizing the complications of cardiopulmonary bypass, which can range from various degrees of tissue injury to multiple organ dysfunction syndrome. Investigators have long researched the ways in which cardiopulmonary bypass may insult the human body. Potential solutions arose and laid the groundwork for development of safer postoperative care strategies. Conclusion: Steady progress has been made in cardiopulmonary bypass in the decades since it was first conceived of by Gibbon. Despite the constant evolution of cardiopulmonary bypass techniques and attempts to minimize their complications, it is still essential that clinicians respect the particularities of each patient's physiological function / Doutor

Orientador: Angelo Berchieri Júnior / Coorientador: Rafael Antonio Casarin Penha Filho / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Luiz Felipe Caron / Resumo: O tifo aviário é uma doença sistêmica causada por Salmonella enterica subesp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG). Esta bactéria é altamente patogênica para aves em qualquer idade, causando mortalidade inclusive em aves adultas. No entanto, a progressão dos sinais clínicos em galinhas pode diferir entre as diferentes variedades de aves. Aves de variedade branca são consideradas mais resistentes e dificilmente se observa mortalidade. Aves de variedade vermelha são suscetíveis e desenvolvem quadros clínicos mais severos com altas taxas de mortalidade. O objetivo do presente estudo foi avaliar o desenvolvimento da doença e infiltrado de linfócitos T γδ durante a infecção por SG em diferentes variedades de aves. Neste trabalho, utilizaram-se 50 aves comerciais para postura de variedade branca e 60 aves comerciais para postura de variedade vermelha que foram distribuídas em quatro grupos: grupo A (controle de aves brancas), grupo B (aves brancas infectadas), grupo C (controle de aves vermelhas) e grupo D (aves vermelhas infectadas). As aves dos grupos B e D foram desafiadas aos 30 dias de vida com SG. Às 6 horas pós-infecção (6 hpi) e 1, 3 e 5 dias pós-infecção (dpi), três aves/grupo foram eutanasiadas para amostragem. A população de linfócitos T γδ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço e amostras de sangue para análises bioquímicas séricas. As lesões macroscópicas foram mais intensas nas aves do grupo D, a partir do 3º dpi, em comparação com as aves do grupo B. As contagens bacterianas no baço e fígado tiveram maiores quantidades nas aves do grupo D no 3° e 5° dpi. Após o 6° dpi, as aves do grupo D começaram a sucumbir ao tifo aviário, diferente das aves do grupo B, que não apresentaram nenhuma mortalidade. Aves do grupo B tiveram maiores quantidades das proteínas ... / Abstract: The fowl typhoid is a systemic disease of chickens caused by Salmonella enteric subsp. enteric serovar Gallinarum biovar Gallinarum. This bacterium is highly pathogenic for chickens at any age, causing mortality even in adult birds. The progress of clinical signs differs among different lines of chickens. White lines of chickens are considered resistant and hardly mortality is observed. Chickens of brown lines are more susceptible and develop severe clinical signs with high mortality rates. The aim of this study was to evaluate the development of the disease and γδ T cells influx during the infection with SG in different varieties of layer-hens. In this study, 50 commercial layer-hens of white lines were used and 60 commercial layer-hens of brown lines were divided into 4 groups: group A (control for white layers), group B (infected white layers), group C (control for brown layers) and group D (infected brown layers). Chickens in groups B and D were challenged at 30 days-old with SG. At 6 hours post-infection (6 hpi) and 1, 3 and 5 days post-infection (dpi), three hens per group were sacrificed for sampling. The population of γδ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver; cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen and samples of serum were used for biochemistry analysis. The macroscopic lesions were more intense in the hens of group D, at 3 dpi, in comparation with the group B. The bacterial numbers in spleen and liver from chickens in the group D were higher at 3 and 5 dpi. After 6 dpi, the mortality caused by fowl typhoid, began in group D. Differently, group B had no mortality. The group B had higher amounts of the proteins ceruloplasmin, albumin and α1- acid glycoprotein, in comparation to group D, but did not show statistical difference (p>0.05). The protein levels PM=99.000 Da, PM=90.000 Da and transferrin were significantly higher in group B (p<0.05) at ... / Mestre

A Síndrome de Sézary (SS) é um dos tipos mais comuns de linfoma cutâneo de células T (CTCL). Esta síndrome é caracterizada por eritrodermia, linfadenopatia generalizada e presença de células tumorais na pele, linfonodos e sangue periférico. A imunidade do hospedeiro está comprometida nesta síndrome, contudo, estudos relacionados à imunidade inata, particularmente sobre as células Natural Killer (NK) são mais escassos. As células NK exercem um papel essencial na resposta imune antitumoral. A proposta deste estudo é caracterizar o perfil fenotípico associado à ativação e inibição das células NK e a capacidade de secreção de citocinas em resposta aos agonistas de receptores Toll-like (TLR), TLR4, TLR7/TLR8 e TLR9 em pacientes com SS. Foram selecionados 14 pacientes com SS (7 homens, 7 mulheres), com 48-85 anos de idade provenientes do Ambulatório de Linfomas Cutâneos do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP, e um grupo controle com 22 indivíduos sadios (11 homens, 11 mulheres, idade de 48-75). Os resultados evidenciaram diminuição percentual de células NK CD56dim do sangue periférico dos pacientes SS, bem como baixa expressão de marcadores de ativação, NKG2D e NKG2C. A forma solúvel dos ligantes de NKG2D, MICB e MICA solúvel (sMICA/MICB), foi detectada em níveis séricos elevados para sMICB, e sMICA foi detectado em apenas 2 pacientes. Houve uma correlação negativa entre os níveis de sMICB e o percentual de células NK CD56brightCD16 NKG2D+. O perfil de secreção de citocinas das células NK, mostra, já na condição sem estímulo, um aumento percentual de TNF e CD107a em células NKCD56dim de pacientes com SS. Após o estímulo com os agonistas de TLR7/TLR8 houve um aumento na produção de CD107a e TNF nas células NKCD56bright e de TNF para as células NKCD56dim. Na produção de citocinas induzidas por agonistas de TLRs nos sobrenadantes de células mononucleares, foi observado que os agonistas TLR2 e TLR4 foram capazes de estimular a produção de IL-6, TNF e IL-10 enquanto o agonista de TLR7/8 mostrou um efeito adjuvante para a secreção de IFN-alfa, IFN-y e IL-10. Além disso, foi observado aumento de expressão de RNAm para TLR2 em células mononucleares avaliada por PCR em tempo real, como também para os fatores relacionados à resposta antiviral, como interferon tipo I (IFN- alfa), receptor de IFN-beta e interferon tipo III (IFN- ) em pacientes com SS. Quanto aos níveis séricos de citocinas, foi detectado aumento de IL-5 (citocina Th2), IL-6 (pró-inflamatória) e IL-10 (reguladora) nos SS, não diferindo quanto aos níveis de IL-1beta, IL-2, IL-17a, TNF e TGF-beta em relação ao grupo controle. Os resultados mostram que há uma diminuição percentual de células NK CD56dim, alteração da expressão dos receptores de ativação e elevação de ligantes solúveis que podem bloquear a ativação das células NK nos pacientes com SS. Além disto, as células NK exibem diminuição da produção de IFN-alfa, que contribuem na diminuição da resposta Th1. Há uma baixa responsividade das células NK aos ligantes de TLRs. Contudo, há um efeito adjuvante dos ligantes de TLRs em células mononucleares dos pacientes com SS, sendo que os agonistas de TLR2/4 e TLR7/8 foram capazes de restaurar parcialmente a produção de citocinas. Os resultados evidenciam que nos pacientes com SS, apesar da redução percentual das células NK, essas células são funcionais, mas que podem ser bloqueadas pelos ligantes solúveis de receptores de ativação. O uso de ligantes de TLRs pode ser uma estratégia para potencializar a produção de citocinas na Síndrome de Sézary / Sézary syndrome (SS) is one of the most common types of cutaneous T-cell lymphoma (CTCL). This syndrome is characterized by erythroderma, generalized lymphadenopathy and presence of tumor cells in the skin, lymph nodes and peripheral blood. Immunity of the host is compromised in syndrome, a study has related an innate immunity, particularly in Natural Killer (NK) cells are more scarce. NK cells play an essential role in the antitumor immune response. The aim of this study is to characterize the phenotypic profile associated with the activation and inhibition of NK cells and cytokine secretion capacity in response to the TLR4, TLR7 / TLR8 and TLR9 receptor agonists in SS patients. METHODS: We selected 14 patients with SS (7 men, 7 women, 48-85 years old) from the Cutaneous Lymphoma Outpatient Clinic of the Medical School of USP, and a control group with 22healthy individuals (11 men , 11 women, 48-75 years old). The results showed a decrease in CD56dim NK cells in the peripheral blood of SS patients, as well as low expression of activation markers, NKG2D and NKG2C. The soluble form of NKG2D, MICB and soluble MICA (sMICA/MICB) ligands was detected at high levels in serum for sMICB, and sMICA was detected in only 2 patients. There was a negative correlation between sMICB levels and the percentage of NK cells CD56brightCD16 NKG2D+. The cytokine secretion profile of NK cells, in the unstimulated condition, showed an increase of TNF and CD107a in NKCD56dim cells of SS patients. Upon stimulation of TLR7 / TLR8 agonists, CD107a and TNF production was higher in NKCD56bright cellsandforTNF in CD56dim cells.The agonists TLR2 and TLR4 in NK cells were able to stimulate the production of IL-6, TNF and IL-10,, while TLR7/8 agonist showed an adjuvant effect for secretion of IFN-alfa, IFN-y e IL-10. In addition, increased expression of TLR2 mRNA was observed in mononuclear cells evaluated by real-time PCR, simirlaly for factors related to antiviral response, such as interferon type I (IFN-alfa), IFN-Type III receptor (IFN - ) in patients with SS. Forserum levels of cytokines, IL- 5 (cytokine Th2), IL-6 (proinflammatory) and IL-10 (regulatory) were detectedhigher in SS, not differing in levels of IL-1beta, IL-2 , IL-17a, TNF and TGF-beta in relation to the control group. The results show that, there is a percentage decreased of CD56dim NK cells, alteration in activation receptor expression and elevation of soluble ligands that block theactivation of NK cells in SS patients. In addition, NK cells exhibit decreased IFN-? production, thatcontribute to the decrease in Th1 response. There is low responsiveness of NK cells to TLR ligands. However, there is an adjuvant effect of TLR ligands on mononuclear cells of SS patients, with TLR2/4 and TLR7 / 8 agonists is able to partially restore cytokine production. The results show that patients with SS, despite the percentage reduction of NK cells, these cells are functional, but can be blocked by soluble ligands of activation receptors. The use of TLR ligands may be a strategy to potentiate a production of cytokines in Sézary Syndrome

Concentrações séricas basais da proteína amiloide sérica A (SAA) estão significativamente aumentadas em pacientes com câncer e alguns autores sugerem uma relação causal. Trabalho anterior do grupo mostrou que a SAA induz a proliferação de duas linhagens de glioblastoma humano e afeta os processos de invasividade in vitro, sustentando um papel pró-tumoral para esta proteína. Com base nesse trabalho, investigamos a abrangência dos efeitos de SAA para outro tipo de célula tumoral e para isso escolhemos um painel de linhagens de melanoma humano e uma linhagem primária obtida a partir de aspirado de linfonodo de paciente com melanoma, por nós isolada. Observamos que apesar da célula precursora de melanomas, isto é, melanócito, não produzir SAA, todas as linhagens de melanoma produziram a proteína e expressaram alguns dos seus receptores. Além disso, quando estas células foram estimuladas com SAA houve uma inibição da proliferação em tempos curtos de exposição (48 horas) e efeitos citotóxicos após um tempo maior (7 dias). A SAA também afetou processos de invasividade e a produção das citocinas IL-6, IL-8 e TNF-&#945;. Aos avaliarmos o efeito da SAA na interação das células de melanoma com células do sistema imune, vimos que a SAA ativou uma resposta imune anti-tumoral aumentando a expressão de moléculas co-estumolatórias, como CD69 e HLA-DR, e sua função citotóxica. Ainda, vimos que a produção de TNF-&#945;, IFN-&#947, IL-10, IL-1&#946; e IL-8 estimuladas por SAA podem contribuir com os efeitos desta. De forma geral estes resultados nos levam a crer que a SAA tem atividade anti-tumoral em melanomas. Finalizando, com base na importância do desenvolvimento da resistência às terapias atuais para o melanoma, observamos que em células resistentes ao PLX4032, um inibidor de BRAF, os efeitos imunomodulatórios induzidos pela SAA estão abolidos, possivelmente identificando um novo componente da resistência. / Basal serum concentrations of the protein serum amyloid A are significantly increased in cancer patients and some authors suggest a causal relationship. Previous work of our research group showed that SAA induces proliferation of two cell lines of human glioblastoma and affects invasiveness processes in vitro, supporting a pro-tumor role for this protein. Based on this work, we investigated the extent of SAA effects to another type of tumor cell and we chose a panel of human melanoma cell lines and primary line obtained from a patient with melanoma by lymph node aspirate. Melanoma cells were isolated by us. We observed that while the precursor cells of melanoma, melanocytes, do not produce SAA, all melanoma cell lines expressed the protein and produced some of their receptors. Moreover, when these cells were stimulated with SAA there was an inhibition of proliferation in short exposure times (48 hours) and cytotoxic effects after a longer period (7 days). SAA also affected invasive procedures and the production of the cytokines IL-6, IL-8 and TNF-&#945;. To evaluate the SAA effect in the interaction of melanoma cells with immune system cells, we found that SAA activated an anti-tumor immune response by increasing the expression of co-estimulatory molecules such as CD69 and HLA-DR, and their cytotoxic function. Furthermore, we found that the production of TNF-&#945;, IFN-&#947;, IL-10, IL-1&#946; and IL-8 stimulated by SAA can contribute to this effect. In general these results lead us to believe that the SAA has anti-tumor activity in melanomas. Finally, based on the importance of the resistance development to current therapies for melanoma we observed that in cells resistant to PLX4032, a BRAF inhibitor, the immunomodulatory effects induced by SAA are abolished, possibly identifying a new resistance component.

A infecção por Rhodococcus equi é a causa mais comum de pneumonia em potros durante os primeiros 6 meses de idade e as medidas utilizadas no controle da infecção são freqüentemente ineficientes. Os protocolos de tratamento são longos, de alto custo e nem sempre eficazes. A prevenção da rodococose através da imunização de potros com vacina eficaz e segura tem sido um desafio. Estudos recentes se baseiam na utilização da proteína A associada a virulência (VapA), que tem sido descrita como importante indutora da imunidade contra R. equi. Este estudo avaliou a resposta clínica e imunitária desenvolvida por potros imunizados com cepa atenuada de S. enterica Typhimurium capaz de expressar o antígeno VapA (grupo teste) ou apenas S. enterica Typhimurium sem o gene vapA (grupo controle), antes e após o desafio experimental. Duas etapas experimentais foram estabelecidas de acordo com a via de imunização: intranasal ou oral em até 12 horas após o nascimento e aos 14 dias de idade. Os animais do grupo teste e do grupo controle foram desafiados experimentalmente com cepa virulenta de R. equi 28 dias após o nascimento. Para acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos, foram realizados exames clínicos, hemogramas e exames complementares de imagem. O padrão de resposta imune desenvolvida foi avaliada através da dosagem de munoglobulinas, mensuração da expressão de citocinas, ensaio de proliferação de linfócitos, isolamento de R. equi e perfil citológico do LTB. As manifestações clínicas foram observadas de maneira menos intensa nos animais do grupo teste da segunda etapa experimental e óbitos decorrentes da rodococose ocorreram apenas nos animais do grupo controle (2/3). Os animais do grupo teste apresentaram uma resposta de IgGb mais intensa quando comparada aos animais do grupo controle, porém não foi observado diferença estatística. A linfoproliferação e a expressão de citocinas de padrão Th1 foram superiores nos animais do grupo teste. Em contraste, os animais do grupo controle apresentaram uma resposta caracterizada pela maior expressão da citocina IL-4. A produção de IgA local foi mais significativa nos animais imunizados com Salmonella carreando vapA. Não foram observados efeitos tóxicos graves resultantes da imunização em nenhuma das etapas experimentais. A vacinação de potros neonatos com S. enterica Typhimurium expressando VapA foi considerada segura, capaz de modular eficientemente a resposta imune e aparentemente capaz de proteger contra a infecção experimental com R. equi. / Rhodoccocus equi is the major cause of pneumonia in foals during the first six months and control measures are frequently ineffective. Treatment protocols are long, expensive and do not always produce good results. Rhodococcosis prevention through immunization of foals using a safe and efficient vaccine is still a challenge. Recent studies are based on the use of the virulence associated protein A (vapA) which has been described as an important inducer of immunity against R. equi. The present study evaluated the clinical and immune response of foals vaccinated with an attenuated strain of S. enterica Typhimurium expressing VapA antigen (test group) or S. enterica Typhimurium without the vapA gene (control group), previous to and following experimental challenge. Two experimental phases were established according to the immunization route: intranasal or oral vaccination up to 12 hrs following birth and at 14 days of age. The experimental and control groups were challenge on day 28 with a virulent stain of R. equi. Clinical examination, complete hemograms and image complementary exams were used to evaluate the development of clinical signs. Immune response patterns were evaluated though immunoglobulin dosage, cytokine expression, lymphocyte proliferation essays, isolation of R. equi and cytological profiles of TBW. Clinical manifestation was less intense in the test group during the second experimental phase, and death occurred only in the control group (2/3) and was due to R. equi pneumonia. The test group produced a more intense IgGb response when compared to controls however no statistical difference was observed. Lymphoproliferation and Th1 cytokine expression were higher in the test group. In contrast, controls produced an IL-4 response. Local IgA was significantly higher in animals immunized with Salmonella carrying vapA. Immunization protocols produced no severe toxic effect. The vaccination of neonatal foals with S. enterica Typhimurium expressing VapA was considered safe, produced efficient modulation of the immune response and is apparently able to protect against experimental R.equi infection.

O mercúrio (Hg), na forma química de metilmercúrio (MeHg) é considerado um dos contaminantes ambientais mais nocivos à saúde humana e ao ambiente, podendo provocar efeitos adversos diversos. A exposição ocorre principalmente pelo consumo de peixes contaminados e é freqüente em populações ribeirinhas da Amazônia Brasileira, incluindo o médio Tapajós. Um dos principais efeitos tóxicos associados à exposição ao MeHg é o estresse oxidativo. Também tem sido relatada a indução do processo inflamatório. Entretanto, a dieta pode modificar consideravelmente os efeitos tóxicos decorrentes da exposição ao MeHg. Além disso, na Região Amazônica a sazonalidade é importante na oferta de alimentos, podendo assim, influenciar nos efeitos da exposição ao Hg, pela diferente oferta de micronutrientes que minimizariam os efeitos após a exposição. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo o de avaliar, em diferentes estações do ano e comunidades ribeirinhas amazônicas, características sociais e demográficas, a exposição ao MeHg, o status de metais essenciais (Cu, Mn, Se e Zn), carotenóides (?-caroteno e licopeno) e vitaminas (A e E) no organismo; bem como os biomarcadores do estresse oxidativo GSH, atividade das enzimas antioxidantes (CAT, GSH-Px e SOD), concentração de MDA, atividade e reativação da ALA-D e marcadores de inflamação (PCRus e as interleucinas 6 e 10). Foi observado que a sazonalidade e a localização da comunidade influenciavam na exposição ao MeHg, no teor de micronutrientes e nos marcadores do estresse oxidativo. A exposição ao MeHg também esteve associada ao aumento da GSH-Px, do MDA e reativação da ALA-D, bem como a diminuição da atividade da ALA-D. Cabe também ressaltar que um aumento da PCRus e expressão das ILs 6 e 10 também se correlacionaram com a exposição ao MeHg. No entanto, para alguns micronutrientes os teores em sangue foram dependentes de fatores sócio-demográficos. Finalmente, observou-se que a dieta é um importante preditor para os biomarcadores do estresse oxidativo GSH, GSH-Px, MDA e ALA-D nos indivíduos expostos ao MeHg. No entanto, dentre os marcadores inflamatórios avaliados somente a IL-10 foi influenciada pelo status nutricional. / Methylmercury (MeHg) is a well-known environmental contaminant and it may cause severe adverse effects to human health. The exposure to this organic form of mercury occurs mainly through consumption of contaminated fish and this source of exposure is common in riparian communities of the Brazilian Amazon, including the Middle Tapajós. One of the main toxic effects related to MeHg exposure is the oxidative stress. MeHg exposure has also been reported to induce inflammatory response. However, components of diet can modify the toxic effects after MeHg exposure. Mopreover, seasonality in the Amazon region is an important factor in food availability and it may also influence the effects of the Hg exposure depending on different populations. Therefore, this study aimed to evaluate, in different seasons and Amazonian riverside communities, social and demographic characteristics, exposure to MeHg, the status of essential metals (Cu, Mn, Se and Zn), carotenoids (?- carotene and lycopene) and vitamins (A and E) in the body as well as biomarkers of oxidative stress GSH, antioxidant enzymes (CAT, GSH-Px and SOD), MDA concentration, activity and reactivation of ALA-D and markers of inflammation (CRPhs and interleukins 6 and 10). The seasonality and community location influenced on the MeHg exposure, micronutrients content and oxidative stress biomarkers. MeHg exposure was also associated with increased GSH-Px, MDA and ALA-D reactivation as well as the decrease on ALA-D activity. The elevations of the CRPhs and interleukins expression were also associated with MeHg exposure. For some micronutrients their levels in blood were dependent on socio-demographic factors. Finally, we found that diet is an important predictor for oxidative stress biomarkers GSH, GSH-Px, MDA and ALA-D in the individuals exposed to MeHg. However, among the inflammatory markers here evaluated only IL-10 was influenced by nutritional status.

Apesar da forte ativação do sistema imune que ocorre durante a infecção pelo Plasmodium, a memória imunológica à infecção é restrita a pacientes residentes em áreas endêmicas. Dessa forma é importante a geração de métodos capazes de induzir uma resposta imune eficaz e duradoura contra o parasito. Nesse contexto o direcionamento de antígenos para células centrais do sistema imune tem se apresentado como uma alternativa promissora. Produzimos e caracterizamos um anticorpo híbrido específico para a molécula DEC205, um receptor endocítico presente nas células dendríticas, acoplado à proteína MSP-1(19) de P. chabaudi, para fins de imunização e análise da resposta imune celular e humoral. Ensaios de imunização mostraram a indução de resposta humoral em camundongos imunizados com anticorpo híbrido e seu controle isotípico, caracterizada pela produção de IgM. Nossos resultados prévios indicam que o direcionamento de antígenos aliado a outras estratégias de imunizações podem resultar na ativação da resposta imune específica ao parasita. / Despite the strong activation of the immune system that occurs during infection by Plasmodium, the immunological memory to infection is restricted to patients residing in endemic areas. Thus it is important to the generation of methods to induce an effective immune response against the parasite. In this context, the targeting of antigens to the central cells of the immune system has emerged as a promising alternative. We produce and characterize a hybrid antibody molecule specific for DEC205, an endocytic receptor present on dendritic cells, coupled to protein MSP-1(19) of P. chabaudi, for immunization and analysis of cellular and humoral immune response. Immunization tests showed the induction of humoral response in mice immunized with hybrid antibody and isotype control, characterized by production of IgM. Our previous results indicate that targeting antigens combined with other strategies for immunization may result in the activation of specific immune response to the parasite.

O período de transição nas vacas leiteiras é caracterizado por alterações fisiológicas como redução de consumo, balanço energético negativo, lipólise e perda de peso, hipocalcemia, queda na função imune e contaminação bacteriana do útero. O estudo avaliou o efeito de duas aplicações de vitamina ADE intramuscular sobre o perfil bioquímico, metabolismo oxidativo e a função de leucócitos polimorfonucleares de vacas holandesas multíparas e primíparas, com dieta a base de silagem de milho e concentrado, no período de transição. Foram utilizados 32 vacas holandesas, randomizadas em dois grupos, sendo que o grupo tratado recebeu vitaminas ADE (270.000 UI vitamina A, 80.000 UI vitamina D e 80 mg vitamina E/mL) na dose de 1mL/50 kg pela via intramuscular profunda, aos 20 e 10 dias antes do parto. Aos -20d;-10d; 0d; 7d; 14d; 28 dias do parto foram colhidas amostras de sangue para análise. As alterações fisiológicas do parto foram evidenciadas pelas variáveis: habilidade de redução férrica plasmática, glicose, ácidos graxos não esterificados, colesterol, aspartato aminotransferase, gamaglutamil transferase e creatinoquinase. O período de transição interferiu tanto na produção de espécies reativas a oxigênio (EROs) quanto na porcentagem de leucócitos polimorfonucleares (PMN) fagocitando sob estímulo de Staphylococcus aureus conjugada com iodeto de propídio (SAPI). Vacas primíparas apresentaram menor desafio metabólico que as vacas multíparas, demonstrado pelos maiores valores da atividade de superóxido dismutase e concentrações plasmáticas de glicose, e menores valores de betahidroxibutirato e gamaglutamil transferase nas primíparas. Além disso, as vacas primíparas apresentaram maior porcentagem de PMN fagocitando e maior produção de EROs frente ao estímulo da SAPI. A suplementação parenteral com vitaminas ADE, na dose utilizada, não foi suficiente para melhorar o status antioxidante das vacas, independente do número de partos, porém a suplementação aumentou a produção de EROs pelos leucócitos PMN quando estimulados com lipopolissacarídeos de Escherichia coli (LPS). / The transition period in dairy cattle is characterized by physiological changes such as reduced feed intake, negative energy balance, weight loss and lipolysis, hypocalcemia, reduced immune function and bacterial contamination of the uterus. This study evaluate the effect of two applications of intramuscular vitamin ADE on the biochemical profile, oxidative metabolism and function of polymorphonuclear leukocytes of primiparous and multiparous Holstein cows with diet based on corn silage and concentrate during the transition period. Thirty-two Holstein cows, randomized into two groups, the treatment group received vitamins ADE (270,000 IU vitamin A, 80,000 IU vitamin D and vitamin E 80 mg/mL) at a dose of 1mL/50 kg by intramuscular injection, at 20 and 10 days before calving. At -20d, -10d, 0d, 7d, 14d, 28 days of postpartum blood samples were collected for analysis. Physiological changes of calving were evidenced in the following variables: ferric reducing ability of plasma, glucose, nonesterified fatty acids, cholesterol, aspartate aminotransferase, gammaglutamil transferase and creatine kinase. Furthermore the transition period interfered in the production of reactive oxygen species (ROS) and the percentage of polymorphonuclear leukocytes (PMN) phagocytosing under stimulus Staphylococcus aureus conjugated with propidium iodide (SAPI). Primiparous dairy cows had lower metabolic challenge that multiparous, demonstrated by higher values of the activity of superoxide dismutase and glucose concentrations, and lower values of betahydroxybutyrate and gammaglutamil transferase in primiparous. Moreover, primiparous cows had higher percentages of phagocytosing PMN and increased production of ROS with SAPI stimulus. Parenteral supplementation with vitamins ADE was not sufficient to improve the antioxidant status of cows, regardless of the number of calving, but supplementation increased the production of ROS by PMN leucocytes when stimulated with lipopolysaccharide of Escherichia coli (LPS).

A leptospirose é causada por bactérias que pertencem ao gênero Leptospira. Em um estudo realizado por nosso grupo, observou-se que as proteases secretadas por leptospiras patogênicas foram capazes de clivar a molécula C3 do Complemento e seus fragmentos C3b e iC3b, além de Fator B, C4b e C2. Neste trabalho expandimos a análise da atividade proteolítica sobre os componentes do Complexo de Ataque à Membrana (MAC): C6, C7, C8 e C9. Nós observamos que essas proteases clivam todos os componentes do MAC inclusive o complexo solúvel formado e que essas clivagens ocorrem de modo tempo-dependente. Além disso, as clivagens dessas moléculas ocorrem de modo seletivo, pois mesmo utilizando quantidades reduzidas de sobrenadantes ainda foi possível observar produtos de clivagem. A atividade proteolítica foi inibida pela 1,10fenantrolina, indicando a participação de metaloproteases. O reconhecimento de quais moléculas do MAC são clivadas por proteases de leptospiras patogênicas pode contribuir para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas na infecção por estes patógenos. / Leptospirosis is a zoonosis caused by spirochetes from the genus Leptospira. In a previous study, our group observed that the proteases secreted by Pathogenic Leptospira were capable of cleaving C3 of Complement, as well as the fragments C3b and iC3b, Factor B (Alternative Pathway), C4 and C2 (Classical and Lectin Pathways). In this work, we analyze the activity of the leptospiral proteases on the components of Membrane Attack Complex (MAC). We observed that the protease cleaves all MAC components including soluble complex formed and that these cleavages occur in a time-dependent manner and in a selective way, since even when reduced quantities of supernatants were used, the cleavage products were still observed. The proteolytic activity was inhibited by 1,10phenanthroline, indicating the participation of metalloproteinases. The recognition that MAC molecules are cleaved by proteases of pathogenic leptospires can contribute to the development of therapeutic strategies for the infection by these pathogens.

A leptospirose é uma zoonose causada por leptospiras patogênicas que possuem estratégias para driblar a ação do sistema complemento ao interagir com diversos reguladores negativos, como a vitronectina. Neste projeto, avaliou-se a interação de vitronectina com três proteínas de membrana de Leptospira: LigA, LigB e LcpA. Verificou-se que essas interações ocorrem nas porções C-terminais das proteínas e nos domínios de ligação com heparina da vitronectina. Essas proteínas também se ligam a C9 e são capazes de impedir a formação do poro in vitro e a formação do MAC em um ensaio clássico de hemólise. Essas proteínas de Leptospira interagem com diversos reguladores negativos do sistema complemento. Ensaios de competição demonstram que estes reguladores interagem simultaneamente com as proteínas através de sítios distintos. A caracterização funcional de proteínas e a descoberta de novos mecanismos utilizados por esse patógeno para sobreviver no hospedeiro podem auxiliar nossa compreensão no que diz respeito a aspectos relacionados à clínica e à prevenção da leptospirose. / Leptospirosis is a zoonotic disease caused by pathogenic Leptospira that have strategies to escape the action of the complement system interacting with several negative regulators, such as vitronectin. In this project, we evaluated the interaction of vitronectin with three Leptospira membrane proteins: LigA, LigB and LcpA. It has been found that such interactions occur at the C-terminal portions of these proteins and the heparin binding domain of vitronectin. These proteins also bind to C9 and are capable of preventing the formation of the pore in vitro and the formation of MAC in a classical test of hemolysis. These proteins interact with various Leptospira negative regulators of the complement system. Competition assays demonstrated that both interact with these regulatory proteins through distinct sites. The functional characterization of these proteins and the discovery of new mechanisms used by this pathogen to survive in the host may help our understanding with regard to clinical aspects and prevention of leptospirosis.