Orientador: Marcio Antonio Brunetto / Coorientador: Aulus Cavalieri Carciofi / Banca: Helio Jose Montassier / Banca: Ricardo Souza Vasconcellos / Resumo: Acredita-se que as frações ativas de mananoproteinas (FAM), obtidas a partir da extração e fracionamento da parede celular de leveduras (Saccharomyces cerevisiae) possam modular de forma benéfica o sistema imune. Este estudo avaliou os efeitos imunológicos das FAM em cães adultos e idosos. Foram empregadas três dietas extrusadas, isonutritivas com inclusão de 0% (T0); 0,04% (T400) e 0,08% de FAM (T800). No total, foram utilizados 36 cães da raça beagle. Os tratamentos resultaram da combinação de idade (adultos e idosos) e dieta (T0, T400 e T800), gerando seis tratamentos experimentais. Para cada dieta foram utilizados seis cães adultos (4,0±2,0 anos) e seis cães idosos (11,0±1,0 anos). O experimento seguiu delineamento em blocos, com três blocos de 12 cães (seis adultos e seis idosos, dois cães por idade e dieta). Nos dias zero, 14 e 28, amostras de sangue foram coletadas para fenotipagem dos leucócitos sanguíneos e ensaio de fagocitose. Nos dias zero e 28 foram realizados: hemogramas, análises bioquímicas, teste de linfoproliferação, produção de intermediários reativos do oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO), avaliação da concentração de imunoglobulina A fecal e teste de hipersensibilidade cutânea tardia (DTH). Os dados foram submetidos à análise de variância com medidas repetidas no tempo, exceto o DTH, no qual se analisou separadamente cada tempo do período experimental. As médias foram comparadas pelo teste de Tukey (p≤0,05). A FAM mostrou-se segura nos teores e períodos estudados. Aos 28 dias, cães adultos alimentados com a dieta T400 em relação à T0 apresentaram contagens mais elevadas de linfócitos totais (p<0,05). Ao analisar a fenotipagem dos leucócitos sanguíneos demonstrou-se que, mais especificamente, o consumo de 0,04% de FAM pelos cães adultos elevou a contagem de linfócitos T totais (p=0,05). Independente da idade, neutrófilos de cães alimentados com T400, em relação à dieta ... / Abstract: It is believed that the active fractions mananoproteínas (AFM), obtained from the extraction and fractionation of cell wall of yeast (Saccharomyces cerevisiae), may beneficially modulate the immune system. This study evaluated the immunological effects of FAM in adults or elderly dogs. Three extruded diets with isonutritives including 0% (T0); 0.04% (T400) and 0.08% of AFM (T800) were used. In total, 36 beagle dogs were used. The treatments resulted from the combination of age (adults and elderly) and diet (T0, T400 and T800), generating six experimental treatments. For each diet six adult dogs (4.0 ± 2.0 years) and six elderly dogs (11.0 ± 1.0 years) were used. The experiment was randomized complete block design with three blocks of 12 dogs (six older and six adults, two dogs by age and diet). At zero, 14 and 28 days, blood samples were collected for phenotyping of blood leukocytes and evaluation of phagocytic activity. In zero and 28 days, hemogram, biochemical analysis, lymphocyte proliferation, production of hydrogen peroxide (H2O2), nitric oxide (NO), evaluation of the concentration of fecal immunoglobulin A and delayed test hypersensitivity (DTH) were performed. Data were subjected to analysis of variance with repeated measures, except DTH, in which we analyzed separately each time the trial period. Means were compared by Tukey test (p≤0.05). The AFM was safe in the levels and periods. At 28 days, adult dogs fed the diet T400 relative to T0 had higher counts of total lymphocytes (p<0.05). By analyzing the phenotype of the blood leucocytes was shown that, more specifically, adult dogs consuming 0.04% of the AFM increased the amount of total T-lymphocytes (p=0.05). Regardless of age, neutrophils from dogs fed T400, relative to T0 diet, tended to produce more H2O2 (p=0.09). Higher percentage of phagocytic activity of neutrophils were observed in adult dogs fed on T400 compared to the T800 diet (p<0.05). The skin response ... / Mestre

Orientador: Aulus Cavalieri Carciofi / Coorientador: Hélio José Montassier / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Silvio Luis de Oliveira / Banca: Lucia Helena Faccioli / Banca: Ricardo Souza Vasconcellos / Resumo: Estudos sobre os possíveis efeitos de beta-glucanos sobre a resposta imune têm sido realizados há muito tempo, pois a imunomodulação que eles podem causar pode auxiliar na resistência a doenças e, até mesmo, tumores. Assim sendo, foram realizados dois experimentos para avaliar a ação de um beta-glucano derivado da parede celular de levedura sobre parâmetros imunológicos na espécie canina. O experimento 1 avaliou a ação ex vivo do composto, leucócitos caninos receberam 3 doses de beta-glucano e foi encontrado que a substância estimulou, de maneira dose-dependente, a produção de espécies reativas do oxigênio e nitrogênio, em neutrófilos e monócitos. O experimento 2 estudou a ação da substância sobre parâmetros imunes de cadelas submetidas a uma situação de imunossupressão: anestesia e cirurgia de castração. Foram utilizadas 28 cadelas adultas de diferentes raças e divididas em três grupos: controle (CT - n=10), suplementadas com 0,1% de beta-glucano na dieta extrusada (BG-E - n=9) e suplementadas com a mesma dose, mas administrada em cápsulas (BG-C - n=9). As avaliações foram realizadas em quatro períodos, 14 dias antes da cirurgia, pré-operatório imediato, pós-operatório imediato e 14 dias após a cirurgia. Os testes realizados para se investigar os efeitos deste nutracêutico foram avaliação hematológica, imunofenotipagem de leucócitos periféricos, avaliação de fagocitose de leucócitos periféricos, dosagem de citocinas em sobrenadante de cultura de células mononucleares, determinação da produção de intermediários reativos do oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO), e dosagem de proteína-C reativa sérica. O tratamento BG-C levou a uma maior porcentagem de fagocitose de monócitos. Apenas as cadelas do grupo controle tiveram uma tendência a aumento da concentração de proteína C-reativa após a cirurgia. O procedimento cirúrgico foi capaz de alterar o número de células e função ... / Abstract: Studies evaluating the effects of beta-glucans on the immune response have been made long ago; because of the immunemodulation that they cause can lead to increase resistance to infections and even to tumors. Thus, we conducted two experiments to evaluate the action of a yeast-derived beta-glucan in dogs. In the experiment 1 the ex vivo action was studied, canine leukocytes were treated with 3 different doses of beta-glucan and the results showed that the production of oxygen and nitrogen reactive species by neutrophils and monocytes was stimulated in a dose-dependent manner. In the experiment 2 the action of beta-glucan on immune parameters of bitches undergoing ovary-hysterectomy was evaluated, as a situation of immunosuppression. Twenty-eight bitches of different breeds were divided into three groups: control (CT - n=10), 0.1% beta-glucan in the extruded diet (BG-E - n=9) and supplemented with the same dose, but administered in capsules (BG-C - n=9). Evaluations were performed in four periods, 14 days before the surgery, immediate preoperative and postoperative and 14 days after the surgery. The tests performed included complete blood count, evaluation of leukocyte subsets, phagocytosis test, production of cytokines in supernatant of cell culture, production of oxygen and nitrogen reactive species and serum C-reactive protein. BG-C treatment lead to higher percentage of phagocytosis by monocytes. Only the control group tended to increase the concentration of C-reactive protein after the surgery. Surgical procedure was capable of changing the number of cells and their function. In conclusion, beta-glucan acted on the immunity considering the presented models / Doutor

Orientador: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Banca: Flávio Ruas de Moraes / Banca: Marco Antônio de Andrade Belo / Banca: Eduardo Gianini Abimorad / Banca: Leonardo Susumu Takahashi / Resumo: A saponina de quilaia (SQ) está presente na casca de árvores chilenas e brasileiras da mesma família, Rosaceae e, de acordo com relatos, melhora o desempenho zootécnico e atua no sistema imune de aves, ratos, camarões e peixes. Assim sendo, este estudo objetivou avaliar os efeitos da inclusão de níveis crescentes de extrato purificado de SQ (0,0; 100,0; 200,0; 300,0; 400,0 mg kg-1) para juvenis de pacu. O estudo teve três etapas experimentais distintas, compostas por períodos de consumo da dieta por sete, 15 e 30 dias. Em cada etapa, foram utilizados 350 peixes, totalizando 1050 peixes. Esses foram distribuídos em 25 aquários (200L), num delineamento inteiramente casualizado. No segundo capítulo, os peixes foram anestesiados para a coleta de sangue e órgãos (fígado e intestino). Os parâmetros avaliados foram desempenho (ganho de peso, conversão alimentar e consumo de ração), sobrevivência, parâmetros fisiológicos e histológicos [glicose, cortisol, proteína total, colesterol, triglicerídeos, índice hepatossomático (IHS) e histologia de intestino]. Houve alteração no perfil de lipídios circulantes, com redução do IHS aos 30 dias e das concentrações séricas de triglicerídeos aos sete dias de consumo de SQ, respectivamente. Com 15 dias, foram observados sinais de inflamação no intestino do pacu. Não houve mortalidade durante o período de alimentação dos peixes. No terceiro capítulo, após o período de alimentação, cerca de 325 peixes foram inoculados com a bactéria Aeromonas hydrophila e transferidos para outro sistema experimental, sendo distribuídos em 25 aquários (160L), onde foram observados durante seis dias, quanto aos sinais clínicos da doença e ocorrência de mortalidade. Os peixes foram anestesiados para a coleta de sangue antes e após o desafio bacteriano. As análises fisiológicas foram de glicose, proteína total, albumina e globulina ... / Abstract: The quillaja saponin (QS) is present in the bark of Chilean and Brazilian trees of the same family, Rosaceae and, it's able to promote performance and the immune system of animals. Thus, this study evaluated the effect of consuming diets containing increasing levels of QS (0,0; 100,0; 200,0; 300,0; 400,0 mg kg-1) by pacu. Three distinct steps in different consumption diets periods compound by seven, 15, and 30 days. At each step, was used a total of 350 fish, totaling 1050 fishes. These fishes were distributed into 25 cages (200L), in a completely randomized design. In the second chapter, after the feeding period (seven, 15 and 30 days), fish were anesthetized to blood collect and organs for physiological, histological and performance evaluation. The parameters evaluated were the performance (weight gain, apparent feed conversion and feed intake), survival, physiological and histological parameters [hepatosomatic index (HSI), blood cortisol, glucose, cholesterol, triglycerides and intestine histology]. The addition of all levels of QS in the diets of juvenile pacu reduced the triglycerides levels at seven days and HSI at 30 days of feeding. At 15 days of feeding QS diets were observed signals intestinal inflammation in pacu. There was no mortality during the experimental period. In the third chapter, after the feeding period (seven, 15 and 30 days), about 325 fishes were inoculated with the Aeromonas hydrophila and transferred to another experimental system, divided into 25 cages (160L) and during six days were observed clinical signs of disease and occurrence of mortality. The fishes were anesthetized for blood collection before and after bacterial challenge. The physiological analyzes were glucose, total protein and albumin. The immunological variables measured were activity serum lysozyme, leukocytes respiratory activity (LRA), differential and leukocyte count and globulin and ... / Doutor

O atraso vacinal configura-se quando uma criança não recebe algumas das vacinas que estavam indicadas e programadas para ela, conforme preconizado pelo calendário vacinal vigente. A criança com atraso vacinal possui risco aumentado para contrair doenças imunopreveníveis, como também diminui a resistência na rede de imunidade comunitária. Elementos contribuintes para estes atrasos incluem desde características socio-demográficas da mãe e dos familiares a conhecimentos e atitudes em relação a vacinação a fatores estruturais relacionados aos serviços de saúde e às oportunidades perdidas de vacinação. A importância destes fatores tende a variar entre as regiões e uma melhor compreensão acerca dos fatores atuantes no nível local, pode auxiliar na elaboração de estratégias preventivas e corretivas para minimizar o problema e contribuir para a melhoria do cuidado à população infantil. Nesse sentido, esta pesquisa teve como objetivo compreender fatores relacionados ao atraso vacinal de crianças acompanhadas no Programa de Imunizações do Centro de Saúde-Escola de Umuarama-PR. Para tanto, o estudo foi executado por meio de uma pesquisa de caráter exploratório, com abordagem qualitativa, realizada no período de junho a outubro de 2009, no Centro de Saúde-Escola de Umuarama. De um total de 52 crianças consideradas inicialmente como em atraso, fizeram parte da pesquisa de 05 (cinco) famílias com menores de dois anos confirmadamente em situação de atraso vacinal.. Como instrumento de coleta de dados, utilizou-se um roteiro de entrevista semi-estruturada. Além das famílias, um profissional atuante na sala de vacina do trabalho foi também entrevistado, buscando-se compreender modus operandi da Unidade, que pudesse estar contribuindo para os atrasos vacinais, ou dificultando sua identificação. Foi possível constatar mais atrasos entre as crianças do sexo masculino, e em três casos, a criança em foco era filho único, residentes na área urbana. Quanto às imunizações em atraso, verificou-se atrasos nas vacinas contra poliomielite, tríplice bacteriana (1 reforço); terceira dose da poliomielite, tetravalente, febre amarela, rotavírus e hepatite B. Considerando que as crianças menores de 2 anos fazem parte do grupo prioritário para o Programa Ampliado de Imunização, tal indicativo é preocupante. Os resultados sugerem que os fatores implicados no atraso vacinal na unidade pesquisada estão relacionados às dificuldades cotidianas e esquecimentos da mãe em não averiguar o cartão vacinal da criança regularmente, o que pode em parte estar atrelado ao grande número de filhos e o grau de atribuições decorrentes das funções exercidas no lar. Outros fatores implicam em oportunidades perdidas, como as falsas contra-indicações, esquecimento do funcionário em solicitar o cartão durante o atendimento de rotina, falhas nas orientações por parte dos profissionais de saúde e a falta de vacinas na unidade. Sugere-se à Unidade de saúde pesquisada que, além das atividades tradicionais, passe a implementar de forma efetiva as visitas domiciliares para avaliar o estado vacinal, identificando crianças em faixa etária própria à vacinação, procedendo a uma busca ativa dos atrasos vacinais, entre outros aspectos. / The vaccine delay is configured when a child does not receive some from the vaccines that were indicated and programmed for it, as praised by the effective vaccine calendar. The child with vaccine delay possesses increased risk to contract immunopreventable illnesses, as well as diminishes the resistance in the net of communitarian immunity. In this direction, the research had as objective to understand factors related to the vaccine delay of children followed in the Program of Immunizations of the Center of Health-School of Umuarama-PR. For in such a way, the study it was executed by means of a research of exploratory character, with qualitative boarding, carried through in the period of June the October of 2009, in the Center of Health-School of Umuarama. Of a total of 52 children considered initially as behind schedule, they had been part of the research of 05 (five) families with minors of two years confirmed in situation of vaccine delay. Beyond the families, an operating professional in the vaccine room of the work. As instrument of collection of data, a script of half-structuralized interview was used. She was possible to evidence more delays between the children of the masculine sex, and in three cases, the child in focus was only son, residents in the urban area. How much to the immunizations behind schedule, one verified delays in vaccines against polio, DTP vaccine (1 reinforcement); third dose of the polio, tetravalent, yellow fever, rotavirus and hepatitis B. Considering that the lesser children of 2 years are part of with priority group for the Extended Program of Immunization, such indicative is preoccupying. The results suggest that the factors implied in the vaccine delay in the searched unit are related to the disengagement of the mother in regularly not inquiring the vaccine card of the child; forgetfulness of the vaccination, that can be linked to the great number of children and the degree of decurrently attributions of the functions exerted in the home. Other factors imply in lost chances, as the false contraindications, forgetfulness of the employee in requesting the card during the routine attendance, imperfections in the orientations on the part of the health professionals and the vaccine lack in the unit. The Unit of searched health is suggested it that, beyond the traditional activities, pass to implement of form accomplishes the visits domiciliary to evaluate the vaccine state, identifying children in proper aged to the vaccination, proceeding to an active search from the vaccine delays, among others aspects.

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A infec??o persistente por HPVs de alto risco, em conjunto com eventos adicionais desencadeados pela exposi??o a fatores f?sicos, qu?micos e ambientais, disfun??o do sitema imune podem favorecer o desenvolvimento de les?es pr?-malignas e malignas da c?rvice uterina. O objetivo deste estudo foi estimar a preval?ncia do HPV e avaliar o perfil da resposta imune em mulheres infectadas pelo HPV, por meio dos n?veis de express?o de citocinas, TLR9 e Myd88, e correlacion?-las com a presen?a ou n?o de les?es. Foram inclu?das no estudo, mulheres com idade entre 16 e 85 anos, m?dia de 36,2 anos, desvio padr?o de 11.26. Do total de 225 mulheres, 126 foram recrutadas entre as atendidas pelo programa de rastreio do c?ncer de colo do ?tero e 99 que foram encaminhadas ? Maternidade Janu?rio Cicco com suspeita de les?o da c?rvice uterina. As pacientes que concordaram participar do estudo passaram por entrevista para obten??o de dados s?cio-demogr?ficos, seguida de exame cl?nico e coletas de dois esp?cimes de raspado cervical, um para an?lise citol?gica e outra para analise molecular destinado a detec??o do HPV. Nas mulheres com suspeita de les?o foi realizada a colposcopia para detec??o de poss?veis altera??es, e coletados dois fragmentos de tecido por bi?psia, um para an?lise histopatol?gica, e outro para obten??o de ?cidos nucleicos, destinado ? detec??o do HPV por PCR convencional e a an?lise da express?o de citocinas, TLR9 e MyD88 por PCR em tempo real. A preval?ncia global do HPV foi de 39,5%, sendo 18,8% em pacientes sem les?es, e 61,1% em mulheres com les?es na c?rvice uterina. As mulheres com m?ltiplos parceiros apresentaram maiores riscos de infec??o pelo HPV, enquanto que as que tiveram duas ou mais gesta??es tiveram um fator protetor. Observou-se correla??o entre altera??es cervicais e a infec??o pelo HPV. Os n?veis de express?o de RNA-m das citocinas pr?-inflamat?rias INF-?, TNF-?, IL-17 e anti-inflamat?ria IL-10 de pacientes infectados pelo HPV, tiveram seus n?veis de express?o mais alto no grupo com les?o em compara??o ao sem les?o, em rela??o ao controle. ? poss?vel que, o aumento na express?o das citocinas, principalmente IL-10 e IL-17, esteja associado a um processo inflamat?rio de natureza cr?nica presente nas les?es e pode estar relacionadas ao favorecimento da persist?ncia viral e prov?vel progress?o para les?es malignas. / Genital human papillomavirus (HPV) infection is one of the most common causes of sexually transmitted diseases in both genders, with a higher infection prevalence among young women sexually active, consisting in a serious public health problem. The persistent high-risk HPV infection with epigenetic events triggered by exposure to physical, chemical, environmental, beyond the dysfunction of the immune system, can favor the development of premalignant and malignant lesions of the uterine cervix. The objective of this study was estimate the HPV prevalence and evaluate the profile of the immune response in women, with and without cervical lesions associated with it; through the expression levels of cytokines, TLR9 and Myd88 in the uterine mucosa, establishing a correlation with the presence or absence of lesions and HPV. The study included women aged between 16 and 85 years, with an average of 36,2 years and standard deviation of 11.26. A total of 225 women participated of this study, 126 were recruited among women attending the screening program for cervical cancer and the other 99 were sent to maternity Janu?rio Cicco with a suspected uterine cervix injury. Patients who agreed to participate, were submitted to an interview to obtain socio-demographic data, followed by clinical examination and collection of two cervical scrape specimens, one for cytological analysis and another for molecular analysis in order to detect HPV. Colposcopy was performed in women who had suspected injury to detect these possible changes. It was collected two fragments of tissue in each biopsy, one for histopathological analysis and other to obtain nucleic acid, destined to detection of HPV by conventional PCR and, analysis of receptors and cytokines expression involved in the immune response by real-time PCR. The overall HPV prevalence was 39.5%, 61,1% in patients with lesions and 18,8% % in patients without lesions. Women with multiple partners, and those who had two or more pregnancies had higher risk of HPV infection. There was a correlation between cervical changes and HPV infection. The RNA-m expression levels of The pro-inflammatory cytokines INF-?, TNF-?, IL-17 and the anti-inflammatory IL-10 showed higher expression levels in the positive HPV injury group compared to uninjured, compared to control. It is possible that the increased expression of cytokines, especially IL-10 and IL-17 is associated with a chronic inflammatory process present in the lesions and can be related to favor viral persistence and likely to progress to malignant lesions.

Os receptores do tipo toll (toll-like receptors ou TLRs) são uma família de receptores na primeira linha de defesa do sistema imune inato que são capazes de reconhecer padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs), dentre os patógenos mais importantes encontra-se Plasmodium. Variações genéticas nesses receptores estão associadas à resistência ou suscetibilidade a uma variedade de doenças infecciosas. Sabe-se que as freqüências destas mutações também podem variar de acordo com a ancestralidade biogeográfica dos indivíduos. Este trabalho avaliou a relação entre 24 polimorfismos em TLRs, ancestralidade e malária em 195 indivíduos residentes em área de Mata Atlântica do Estado de São Paulo. A ancestralidade genômica individual foi estimada usando marcadores autossômicos de inserção/deleção (INDELs) e os polimorfismos em TLR foram genotipados por PCR-RFLP, sequenciamento e eletroforese capilar. Dados prévios de malária presente ou pregressa obtidos por métodos moleculares e sorológicos foram utilizados para avaliar a relação dos polimorfismos em TLRs e malária nesses indivíduos. Os resultados mostraram que: (i) nove SNPs e um microssatélite foram polimórficos; (ii) a maior parte dos indivíduos analisados apresentou maior proporção de ancestralidade europeia; (iii) as proporções médias de ancestralidade europeia diferiram significantemente nos genótipos de TLR1 (I602S) e TLR6 (P249S); (iv) a probabilidade de ter o alelo variante G em TLR1 aumenta com o aumento da ancestralidade européia assim como aumenta a probabilidade de ter o alelo variante T no TLR6; (v) o polimorfismo em TLR9 -1237T/C foi fortemente relacionado à malária, sendo demonstrado que a presença de pelo menos um alelo C nessa posição aumentou o risco para malária 2,3 vezes; e (vi) TLR9 -1486T/C em associação com o TLR6 foi protetor, pois a associação dos alelos variantes reduziu o risco de malária em 4,4 vezes. O alelo G em TLR1 tem sido relacionado a uma resposta imune diminuída, o que poderia explicar a alta prevalência de casos de malária assintomática em áreas do sudeste brasileiro. O TLR9 tem sido relacionado com a patogênese da malária em estudos em animais e em humanos, sendo possivelmente modulado por polimorfismos na região promotora. Nossos dados também reforçam a necessidade de incluir marcadores de ancestralidade em estudos de associação genética para evitar resultados enviesados. Por fim, este é o primeiro estudo a associar polimorfismos em genes de imunidade inata e malária em amostras de Mata Atlântica. / Toll-like receptors (TLRs) are a family of receptors in the first line of defense of the innate immune system and they are able to recognize molecular patterns associated with pathogens (PAMPs), among the most important pathogens is Plasmodium. Genetic variations in these receptors are associated with resistance or susceptibility to a variety of infectious diseases. It is known that the frequencies of these mutations can also vary according to the biogeographic ancestry of the individuals. This work evaluated the relationship among 24 polymorphisms in TLRs, ancestry and malaria in 195 individuals living in the Atlantic Forest area of the São Paulo State. Individual genomic ancestry was estimated using autosomal insertion/deletion markers (INDELs) and TLR polymorphisms were genotyped by PCR-RFLP, sequencing and capillary electrophoresis. Previous data about present or previous malaria were obtained by molecular and serological methods and were used to evaluate the relationship of polymorphisms in TLRs and malaria in these individuals. The results showed that: (i) nine SNPs and one microsatellite were polymorphic; (ii) the majority of the individuals analyzed presented a greater proportion of European ancestry; (iii) the average proportions of European ancestry differed significantly in the genotypes of TLR1 (I602S) and TLR6 (P249S); (iv) the probability of having the variant G allele in TLR1 increases with increasing European ancestry as well as increases the probability of having the T allele variant in TLR6; (v) the TLR9 -1237T/C polymorphism was strongly related to malaria, and the presence of at least one C allele in this position was shown to increase the risk for malaria 2.3 times; and (vi) TLR9-1486T/C in combination with TLR6 was protective, since the association of variant alleles reduced the risk of malaria by 4.4 times. The G allele in TLR1 has been related to a decreased immune response, which could explain the high prevalence of cases of asymptomatic malaria in areas of southeastern Brazil. TLR9 has been linked to the pathogenesis of malaria in animal and human studies, possibly being modulated by polymorphisms in the promoter region. Our data also reinforce the need to include ancestral markers in genetic association studies to avoid biased results. Finally, this is the first study to associate polymorphisms in genes of innate immunity and malaria in Atlantic Forest samples.

A manutenção da resposta imune depende de uma fina regulação da ativação dos linfócitos. A ativação das células T requer dois sinais, um mediado pelo complexo TCR, após o reconhecimento do antígeno, e o outro mediado pela interação dos receptores coestimulatórios. CD28 e ICOS são receptores estimuladores, enquanto CTLA-4 e PD-1 induzem um sinal inibitório para a ativação das células T. Para compreender o envolvimento de células T na progressão da doença periodontal humana avaliamos o perfil de ativação de células T sangüíneas, a presença destas células no foco da infecção, bem como os fatores que estas células estariam produzindo. Os resultados mostraram que linfócitos sangüíneos de pacientes com doenças periodontais proliferaram frente à estimulação policlonal, de maneira similar aos linfócitos de indivíduos saudáveis. Entretanto, a estimulação com antígenos de Aa e Pg induziu apenas um discreto aumento na resposta proliferativa de linfócitos de pacientes com gengivite. Os dados também demonstraram que antígenos de periodontopatógenos induzem a produção de citocinas, IFN- e IL-10, por linfócitos de pacientes e indivíduos controle. As células sangüíneas de indivíduos com doenças periodontais apresentaram uma alta expressão de moléculas inibitórias, PD-1 e CTLA-4. Entretanto, o bloqueio da via PD- 1/PD-L não alterou a resposta proliferativa de células T de pacientes com periodontite crônica, mas modulou positivamente a produção de IFN- e IL-10. Ao avaliar o número total de células isoladas do tecido gengival de pacientes com periodontite crônica observou-se um significante aumento quando comparado ao grupo com gengivite e o controle. Em adição, os ensaios de fenotipagem indicaram que não existe diferença na composição do infiltrado celular. Contudo, foram observadas diferenças entre os grupos quanto ao perfil de ativação celular. Os linfócitos T CD3+ representam a principal população de leucócitos encontrados nas lesões de pacientes com periodontite crônica, gengivite e saudáveis, tendo sido detectado uma alta percentagem de células T CD4+ de memória no grupo com periodontite crônica. Adicionalmente, o número de células B foi similar em todos os grupos. Os dados sobre a expressão de moléculas co-estimulatórias mostraram que uma considerável parcela da população de linfócitos T CD4+ e CD8+ das lesões de pacientes com periodontite crônica coexpressam PD-1 e CTLA-4, quando comparada com os pacientes com gengivite e indivíduos saudáveis. Uma baixa freqüência de positividade para a IFN- foi observada nas lesões de pacientes com periodontite crônica, e alta freqüência para IL-10 nos grupos com gengivite e periodontite crônica. Esses resultados agrupados sustentam a hipótese de que a expressão de PD-1 e CTLA-4 estão envolvidas na patogênese da doença periodontal humana. / Negative co-stimulatory signals mediated via cell surface molecules such as cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 (CTLA-4) and programmed death-1 (PD-1) play a critical role in down-modulation immune responses and maintaining peripheral tolerance. Both CTLA-4 and PD-1 are induced on activated T cells, and these are involved in the immunopathogenesis of periodontal diseases. However, there are no reports linking PD-1 with periodontal diseases. We investigated the possible association between CD28, CTLA-4 and PD-1 expression and cytokine production with putative lymphocytes dysfunction in patients with periodontal diseases. Blastogenic response to PHA was no difference between groups. However, blastogenic response to Aa and Pg antigen was increased in gingivitis group. After stimulation with antigens or PHA, IL-10 and IFN- production was induced in vitro by PBMCs from patients with periodontal disease and healthy subjects. The expression of CTLA-4 and PD-1 was higher in blood T cells from patients as compared with the healthy groups. However, blockage of PD-1 did not modify blastogenic response, but resulted in modulation of IFN- and IL-10 production. In situ, we observed a significant increase in the total number of leukocytes from chronic periodontitis lesion as compared with the gingivitis and healthy groups. Additionally, there was no difference in the composition of cellular infiltrate. The results showed that CD3+ T cells represented the main population; in particular, the proportion of CD4+ T cells was significantly higher than CD8+ T cells, in chronic periodontitis groups. The expression of CD28 was similar in both groups studied. On the other hand, the expression of CTLA-4 and PD-1 was significantly higher in T cells from chronic periodontitis groups as compared with the gingivitis group. Importantly, PD-1 expression was observed primarily in CD4+ T cells. Similar amounts of T cells expressing CD28+ and CTLA-4+ were found in gingivitis and chronic periodontitis patients. This study demonstrates the expression of PD-1 and CTLA-4 in T cells of blood and lesions from patients with periodontal diseases and suggests the possible involvement of these molecules on immune regulation of periodontal disease.

Com o objetivo de avaliar as imunidades humoral e celular de pacientes com endometriose, analisamos as concentrações das Imunoglobulinas ( A, G e M ) e das Interleucinas (1β, 10 e IFγ) no soro e no líquido peritonial. Também analisamos a sua associação com a presença de infertilidade, o nível de dor apresentado e a extensão da endometriose. Foram coletadas amostras de soro e líquido peritonial de 43 pacientes submetidas a laparoscopia, que foram divididas em 4 grupos : 20 pacientes inférteis com endometriose, 9 pacientes inférteis sem endometriose, 4 pacientes férteis com endometriose e 10 pacientes férteis sem endometriose. As concentrações de IL-1β, IL-10 e IFγ foram determinadas pela método de ELISA e as concentrações de IgA, IgG e IgM foram feitas pela técnica de imunodifusão radial. Nas pacientes com endometriose, as concentrações de IgA no soro e do líquido peritonial foram maiores nas pacientes inférteis do que nas férteis. A IgG estava mais elevada nas pacientes sem endometriose do que nas pacientes com endometriose, todas inférteis. Os níveis de interleucina 10 no líquido peritonial de pacientes com endometriose foram mais elevados nas pacientes inférteis do que nas férteis e Interferon γ apresentou concentrações mais baixas no soro e no líquido peritonial de pacientes inférteis sem endometriose. Não houve diferenças significativas entre os grupos para as concentrações de IgM e IL-1β, bem como nas correlações entre os níveis de citocinas e imunoglobulinas entre os diferentes grupos com os graus de endometriose e os níveis de dor nessas pacientes.

O rompimento eritrocítico característico do ciclo de vida do Plasmodium resulta na liberação de ATP, o qual é reconhecido pelo receptor P2X7. Este estudo da malária experimental causada pelo P. chabaudi em camundongos P2X7-/- mostraram que estes animais são mais suscetíveis à infecção. Tanto in vitro, como ex vivo, as populações celulares fagocíticas mostraram-se sensíveis ao ATP extracelular, de uma forma P2X7 dependente, e a infecção pelo P. chabaudi mostrou ser um fator que aumenta esta sensibilidade. Estudos fenotípicos do baço e do fígado dos animais P2X7-/- indicaram que, com exceção da população CD11b+ Ly6G+, estes animais apresentam número inferior de células fagocíticas quando comparados aos animais C57BL/6. Além disso, há uma leve deficiência na ativação dos fagócitos, na produção de IFN-g e no número de células produtoras de IFN-g, TNF-a e IL-10 no baço dos animais P2X7-/- em relação aos C57BL/6. A maior suscetibilidade dos camundongos P2X7-/- à infecção pelo P. chabaudi deve-se, portanto, a uma resposta imunológica deficiente nestes animais. / The erythrocyte rupture is a step of the life cycle of Plasmodium in which ATP is released and is recognized by the P2X7. This study of experimental malaria caused by P. chabaudi in P2X7-/- mice showed that these mice are more susceptible to the infection. Either in vitro or ex vivo, the phagocyte cell populations were sensible to extracellular ATP in a P2X7-dependent way and the P. chabaudi infection acted as a component that increases this sensitivity. Phenotypic analysis of the spleen and liver from P2X7-/- mice showed that, excepted for the CD11b+ Ly6G+ population, these mice have a lower number of phagocyte cells when compared to C57BL/6 mice. Furthermore, there was a slight deficiency in phagocyte activation, IFN-g production and number of cells that produce important cytokines as IFN-g, IL-10 and TNF-a in P2X7-/- mice in comparison with C57BL/6 mice. The increased susceptibility of P2X7-/- mice to the P. chabaudi infection is due to a deficient immune response.

Introdução: Sabe-se que a cirurgia de revascularização miocárdica está associada com alteração dos mediadores inflamatórios e da função imunitária, com ativação precoce dos linfócitos que poderia ser responsável pela linfopenia e diminuição da atividade dos linfócitos no pós-operatório. A elevação enzimática está diminuída na cirurgia sem circulação extracorpórea mas este achado não está associado a melhor evolução clínica. Nesta tese, testamos a hipótese de que a cirurgia de revascularização miocárdica realizada sem circulação extracorpórea pode levar a uma ativação linfocitária de menor intensidade do que a cirurgia com circulação extracorpórea. Métodos: A resposta da ativação linfocitária foi estudada durante o período trans e pósoperatório em 28 pacientes randomizados para cirurgia de coronária sem circulação extracorpórea (n=13) ou cirurgia convencional com circulação extracorpórea (n=15), utilizando citometria de fluxo para determinar a expressão de CD25, CD26, CD69 e DR em linfócitos T (CD3+) e B (CD19+), em sangue periférico. No mesmo período foram realizadas dosagens de troponina I por quimioluminescência e realizado ecocardiograma uni-bidimensional antes e após a cirurgia. Resultados: Não houve diferença estatisticamente significativa para nenhum dos marcadores de ativação linfocitária quando comparados os grupos operados sem ou com circulação extracorpórea (ANOVA bicaudal para medidas repetidas, p>0,05). Considerando todos os pacientes estudados, houve uma elevação da expressão proporcional de CD25 e CD69 em linfócitos T (CD3+) e B (CD19+). Nos linfócitos T, o valor proporcional médio mais elevado (+ EP) de CD69 foi observado 6 horas após terem sido completadas as anastomoses (+75 + 476%) e CD25 teve uma elevação mais gradual, com o pico de seu valor médio (+48 + 24 %) ocorrendo 24 horas após a revascularização. Em linfócitos B, o pico do valor médio de CD69 (+104 + 269 %) ocorreu também após o fim das anastomoses. CD25 teve seu pico de valor médio (+150 + 773 %) 112 horas após a revascularização e seu último valor medido ainda estava elevado. A expressão de CD26 em linfócitos T teve um aparente declínio nos seus valores proporcionais médios (-42 + 32 %) 12 horas após o fim das anastomoses. Não houve diferença significativa na elevação enzimática entre os dois grupos (teste estatístico >0,05). No ecocardiograma, o grupo operado sem circulação extracorpórea apresentou diminuição do volume diastólico (p=0,001) de da fração de ejeção (P=0,012), enquanto no grupo com circulação extracorpórea, diminuíram os volumes diastólico (p=0,006) e sistólico (p=0,01). Conclusões: 1) Comparando a cirurgia de revascularização miocárdica com circulação extracorpórea, a cirurgia sem circulação extracorpórea não reduz a ativação dos linfócitos. 2) A cirurgia de revascularização miocárdica produz uma ativação precoce dos linfócitos, com aumento da expressão de CD69 e CD25 em linfócitos T (CD3+) e B (CD19+), em sangue periférico. A elevação precoce de CD69, e elevação mais tardia de CD25, pode indicar duas partes de uma seqüência de ativação linfocitária. 3) O comportamento das enzimas cardíacas e dos achados ecocardiográficos não sugere benefício da cirurgia sem circulação extracorpórea sobre o dano miocárdio. / Background: Coronary artery bypass surgery is known to be associated with alteration of inflammatory mediators and immune function, with early phase lymphocyte activation, that could be responsible for postoperative lymphopenia and lymphocyte unresponsiveness. There is lower enzymatic elevation in of-pump surgery but it is not associated with better clinical outcome. In this thesis, we test the hypothesis that off- pump coronary bypass surgery might result in less lymphocyte activation than on-pump coronary surgery. The influence of extra corporeal circulation on myocardium is evaluated by the evolution of cardiac enzymes (troponin I) and echocardiographic findings. We also study lymphocyte activation markers behavior during trans and post-operative period. Methods: We studied lymphocyte activation response during the operative and postoperative period in 28 patients randomized to off-pump coronary surgery (n = 13) or conventional on-pump coronary surgery (n = 15) using flow cytometry to determine expression of CD23, CD25, CD26, CD69 and DR on T (CD3+) and B (CD19+) lymphocytes in the peripheral blood. At the same period, blood samples where tested for troponin I by chemo luminescent method. Uni-bidimentional echocardiograms where done previously and after surgery. Results: There were no significant differences in any of the lymphocyte activation markers off-pump compared to on-pump coronary surgery (2 way ANOVA for repeated measures, P > 0.05). Considering all patients studied, there was an elevation of the proportional expression of CD69 and CD25 in T (CD3+) and B (CD19+) lymphocytes. In T lymphocytes, the higher proportional median value (+ SE) of CD69 was observed 6 hours after completion of anastomosis (+75 + 476 %), and CD25 had a more gradual elevation, with its peak median value (+48 + 24 %) occurring 24 hours after revascularization. In Blymphocytes, CD69 peak median value (+104 + 269 %) occurred also 6 hours after the end of anastomosis. CD25 had its peak median value (+150 + 773 %) 12 hours after revascularization and its last measured value was elevated. The expression of CD 26 in T lymphocytes had an apparent decrease in proportional median values (-42 + 32 %) 12 hours after end of anastomosis. There were no significant differences in enzymatic elevation between groups. By echocardiography, off-pump patients presented reduction of diastolic volume (p=0,001) and ejection fraction (p=0,012), and on-pump presented reduction of diastolic (p=0,006) and systolic (p=0,01) volumes). Conclusions: 1) Compared to on-pump cardiopulmonary bypass, off-pump surgery does not reduce lymphocyte activation. 2) Coronary bypass surgery results in early activation of lymphocytes, with increased expression of CD69 and CD25 on T (CD3+) and B (CD19+) peripheral blood cells. The early elevation of CD69, and late elevation of CD25, may indicate two parts of a sequence of lymphocyte activation. 3) Cardiac enzymes and echocardiographic measurements behavior do not suggest better results on myocardial damage with off-pump surgery.