Tese de mestrado. Engenharia Biomédica. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2011

Pertencente ao filo Apicomplexa, Neospora caninum causa infecções associadas à perda fetal e mortalidade neonatal em várias espécies animais. A doença é descrita desde 1984, quando ocorreram os primeiros casos de encefalite e miosite em cães. Estes desempenham um papel fundamental na epidemiologia do protozoário, pois são seus hospedeiros definitivos, assim como os coiotes e o cão australiano dingo. Devido à sua importância no mundo e às diferenças de prevalência nos diversos estados brasileiros há necessidade de investigar a ocorrência do protozoário em cães no Rio Grande do Sul. Amostras de soro de 313 cães de origem urbana e rural do município de Caxias do sul foram testadas para a presença de anticorpos para N. caninum mediante a reação de imunofluorescência indireta (RIFI≥1:50). Na área urbana a prevalência foi de 2% (5/160) e na rural foi de 12% (36/153) (p < 0,0001). Os títulos sorológicos variaram de zero (86,9%) a 1:6400 (0,64%), sendo 1:50 (5,11%), o mais prevalente dentre os positivos. Nenhum dos cães examinados apresentou sinais clínicos de neosporose durante a coleta de sangue. Dos fatores de risco avaliados, a idade dos cães rurais foi o único significativo (p = 0,0053), com prevalência de 1% (2/34) entre aqueles com menos de um ano de idade e de 22% (34/119) entre os com mais de um ano de idade. Quanto aos fatores gênero, alimentação confinamento, contato com bovino e recolhimento de carcaças, os cães rurais não apresentaram diferença significativa em relação à soropositividade. Nos cães urbanos, os fatores gênero, alimentação e idade não apresentaram diferença significativa em relação à positividade dos animais. Este estudo demonstrou que os cães da área rural de Caxias do Sul estão mais predispostos à infecção por N. caninum, principalmente animais com mais de um ano de idade. Nos cães de área urbana o protozoário também se fez presente no município de Caxias do sul, necessitando maiores estudos nessa população. / Belonging to the phylum Apicomplexa, Neospora caninum causes infections associated with fetal loss and neonatal mortality among several animal species. This disease has been reported since 1984, when the first cases of encephalitis and myositis in dogs occurred. They play a key role in the epidemiology of the protozoan, because they are its definite hosts, as well as the coyotes and the Australian dog dingo. Due to its importance in the world and to the differences of prevalence in the several Brazilian states, there is the need to investigate the occurrence of the protozoan among dogs in Rio Grande do Sul. Serum samples from 313 dogs from urban and country areas of Caxias do Sul were tested for the presence of antibodies to N. caninum by indirect immunofluorescence assay (RIFI≥1:50). In urban areas the prevalence was 2% (5/160) and in rural areas was 12% (36/153) (p <0.0001). The serological titers ranged from zero (86.9%) to 1:6400 (0.64%) and 1:50 (5.11%), the most prevalent among the positives. None of the dogs examined showed clinical signs of neosporosis during blood collection. Among the risk factors evaluated, the age of rural dogs was the only significant one (p = 0.0053), with a prevalence of 1% (2/34) among those with less than a year old and 22% (34/119) among the ones which were more than one year old. Concerning the factors gender, feeding, confinement, contact with cattle and carcasses collection, the country dogs did not show significant difference related to seropositivity. Among urban dogs, the factors gender, feeding and age did not show significant difference regarding the positivity of the animals. This study showed that dogs from country areas of Caxias do Sul are more likely to get infected by N. caninum, especially the animals which are more than one year old. In dogs from urban areas the protozoan was also present in Caxias do Sul, requiring further studies among this population.

Submitted by Pós graduação Farmácia (ppgfar@ufba.br) on 2017-05-25T20:04:40Z No. of bitstreams: 1 MILENA SANTANA CABRAL.pdf: 2324817 bytes, checksum: efec4e0396dc2673dceb720f82342942 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2017-06-01T17:35:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MILENA SANTANA CABRAL.pdf: 2324817 bytes, checksum: efec4e0396dc2673dceb720f82342942 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T17:35:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MILENA SANTANA CABRAL.pdf: 2324817 bytes, checksum: efec4e0396dc2673dceb720f82342942 (MD5) / FAPESB e CNPq / A infeção crônica pelo VHC tem como principal característica a associação com diversas manifestações autoimunes. Dentre estas, a aumentada expressão de autoanticorpos não-órgão específicos, como os anticorpos antimúsculo liso, com possível importância na patogênese da doença. Objetivos: (1) Determinar a prevalência de anticorpos antimúsculo liso e sua distribuição conforme o gênero em portadores de HCC; (2) caracterizar a reatividade sorológica dos anticorpos antimúsculo liso usando como referência os padrões de fluorescência previamente determinados; (3) estabelecer as associações entre a reatividade sorológica dos anticorpos antimúsculo liso com os dados clínicos e laboratoriais dos portadores de hepatite C; (4) caracterizar imunoquimicamente os anticorpos frente a antígenos purificados. Pacientes: Foram avaliados 100 portadores de HCC, sem tratamento antiviral prévio, com diagnóstico clínico, sorológico, virológico, e histopatológico, acompanhados no C-HUPES. Métodos: Anticorpos antimúsculo liso e antinúcleo foram pesquisados por imunofluorescência indireta e a especificidade imunoquímica investigada através de imunoblot. Dosagens de fator reumatóide, haptoglobina e IgG foram realizadas por nefelometria. Crioglobulinas foram determinadas por crioprecipitação em tubo e por gel-difusão e a ALT por método cinético. Os dados de genótipo e histopatológico foram obtidos dos prontuários. Resultados: Anticorpos antimúsculo liso foram detectados em 21% dos pacientes (55 homens, 45 mulheres), sendo o padrão de fluorescência AML-v o mais frequentemente observado (81%). A associação de padrões mais prevalente foi AML-v e AML-m (71%). A maioria dos títulos dos autoanticorpos foi baixa, com apenas quatro amostras apresentando títulos superiores a 1/40. Apenas uma amostra apresentou padrão glomerular com título maior que 1/40, e não foi encontrado padrão tubular. Das três proteínas associadas aos AML, os portadores de HCC com AML positivos apresentaram maior frequência de reatividade para a actina-F, ocorrendo em 29% das amostras. A associação entre os AML e este antígeno alvo foi significante (P=0,005). Não houve associação estatisticamente significante entre os antígenos desmina e miosina, com os AML, e a prevalência de reatividade para esses antígenos foi inferior. Com o uso do imunoblot comercial, foi encontrada a presença do autoanticorpo anti-LC1 em 52% das amostras positivas para AML e em 15% das amostras negativas para esse mesmo anticorpo. Foi encontrada também a presença do anti-SLA/LP em 14% das amostras positivas para AML e em 8% das amostras que não apresentavam este autoanticorpo. Os anticorpos AMA-M2 e anti-LKM1 não foram encontrados em nenhum dos grupos avaliados. Conclusões: Uma prevalência de 21% para AML foi encontrada neste estudo, com uma relação homem/mulher de 1,1/1. A presença de AML não foi associada a qualquer dos dados demográficos, clínicos e laboratoriais deste grupo de portadores de HCC, nem associada à lesão tecidual. Determinar os padrões de fluorescência e título das amostras é relevante na detecção dos AML. Apenas a minoria dos AML de portadores de HCC reconhecem as proteínas actina-F, desmina e miosina. Foi documentado elevada expressão de anticorpos anti-LC1 neste grupo de portadores de HCC. / The main characteristic in HCV chronic infection is the association with various autoimmune manifestations. Among them, the increased expression of non-organ specific autoantibodies, such smooth muscle antibody, which possible role in HCV pathogenesis. Objectives: (1) Determine the prevalence of smooth muscle antibodies and their distribution according gender in patients with chronic hepatitis C; (2) characterize the serological reactivity of these autoantibodies in accordance with predetermined patterns of fluorescence; (3) establish associations between serologic reactivity of them with clinical and laboratory data from these patients; (4) characterize the antibodies immunochemically with purified antigens. Patients: 100 HCV carriers before treatment had been evaluated, with previous clinical, serological, virological and histopathological diagnosis, from C-HUPES. Methods: Smooth muscle and antinuclear antibodies were performed by indirect immunofluorescence and immunochemical reactivity was determined by immunoblot. Rheumatoid factor, haptoglobin and IgG were quantified by nephelometry. Cryoglobulins were determined by cryoprecipitation in tube and gel-diffusion and the determination of ALT by UV kinetics. Genotype and histophatological data were obtained from medical records. Results: 21% of HCV carriers presented anti-smooth muscle antibodies (55 men, 45 women); with the AML-v pattern the most found (81%). Also, the AML-v and AML-m patterns were the association more prevalent (71%). The titles of most autoantibodies were low, but four samples showed titles above 1/40. Only one sample showed glomeruli pattern with titles greater than 1/40, and no tubular pattern was found. In the imunoblot, the HCV carriers AML positive presented a major reactivity for F-actin (29%), which association with these autoantibody was significant (P=0.005). There was no association between AML with desmin and myosin, which reactivities of the AML to these proteins were low. Autoantibodies anti-LC1 was found in 52% of samples AML positive and in 15% of samples AML negative. It was also found the presence of anti-SLA/LP in 14% of positive samples for AML and in 8% of the negative samples. AMA-M2 antibodies and anti-LKM1 were not found in any of these groups. Conclusions: This study found an AML prevalence of 21%, with 1.1/1 men/women relation. The AML presence was not associated with any of the demographic, clinical and laboratory data from the HCV carries evaluated or associated with tissue lesion. Determine fluorescence patterns and sample titles are relevant to detect these antibodies. Only the minority of the AML from HCV carriers evaluated recognized the proteins F-actin, desmin and myosin. High expression of anti-LC1 antibodies were found in these HCV carries.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-04T16:51:02Z No. of bitstreams: 1 Daiana Santos de Oliveira Leptospira 2015.pdf: 4808507 bytes, checksum: 3179db44fe75f386418d9e3244499ccf (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-04T16:51:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Daiana Santos de Oliveira Leptospira 2015.pdf: 4808507 bytes, checksum: 3179db44fe75f386418d9e3244499ccf (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-04T16:51:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daiana Santos de Oliveira Leptospira 2015.pdf: 4808507 bytes, checksum: 3179db44fe75f386418d9e3244499ccf (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz, Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia, Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil / A leptospirose é uma zoonose distribuída globalmente causada por bactérias do gênero Leptospira. Rattus norvegicus é o principal reservatório de Leptospira em comunidades urbanas do Brasil e em outros países. As vias de infecção por Leptospira nas populações de roedores são desconhecidas. O objetivo deste trabalho foi identificar a presença de Leptospira em mama e leite como indicadores da transmissão vertical em R. norvegicus. As capturas de roedores foram realizadas em 2013 e 2014 em uma comunidade urbana de Salvador, Brasil. Nós pesquisamos a presença de Leptospira na mama, leite e rins de fêmeas em lactação utilizando testes de Imunofluorescência (IFA), Imunohistoquímica (IHQ), qPCR e exame no microscópio eletrônico de varredura (MEV). Nós examinamos 24 ratas em lactação. Todas as fêmeas foram positivas no rim em pelo menos uma das técnicas utilizadas. 18/24 (75%) foram positivas no leite por IFA e 04/28 (17%) foram confirmadas por qPCR. Na mama 16/24 (67%) ratas foram positivas por IFA ou IHQ. Observamos a presença de Leptospira em 1/4 ratas no exame com MEV. Na mama foram encontradas Leptospira em áreas sem ou com alterações patológicas. A presença de Leptospira na mama (67%) e no leite (75%) sugere que ocorra transmissão vertical pela amamentação nas populações urbanas de R. norvegicus. Estes achados precisam ser confirmados por estudos experimentais. A caracterização das vias de transmissão e manutenção de Leptospira é fundamental para entender a dinâmica do patógeno nos reservatórios, permitindo o desenvolvimento de novos modelos preditivos de risco para leptospirose em roedores e em seres humanos / Leptospirosis is a zoonosis distributed globally caused by bacteria of the genus Leptospira. Rattus norvegicus is the main reservoir of Leptospira in urban communities in Brazil and other countries. The routes of Leptospira infection in the rodent populations are unknown. The objective of this study was to identify the presence of Leptospira in breast milk and as an indicator of vertical transmission in R. norvegicus. The rodents were trapped in 2013 and 2014 in an urban community of Salvador, Brazil. We research the presence of Leptospira in the breast, milk and kidney of lactating females using immunofluorescence test (IFA), Immunohistochemistry (IHC), qPCR and examination in Scanning Electron Microscope (SEM). 24 rats were examined lactating. All were positive in at least one kidney of techniques. 18/24 (75%) tested positive in milk by IFA and 4/28 (17%) were confirmed by qPCR. In breast tissue 16/24 (67%) rats were positive by IFA or IHC. In a breast tissue sample from a rat was examined under SEM four Leptospira presence observed. In the presence of breast Leptospira was observed in areas with or without pathological changes. The presence of Leptospira breast (67) and milk (75%) suggests that vertical transmission occurs by feeding in urban populations of R. norvegicus. These findings need to be confirmed by experimental studies. The characterization of Leptospira transmission routes and maintenance is fundamental to understanding the dynamics of the pathogen in the reservoir allowing the development of new predictive models risk for leptospirosis in rodents and in humans.

Made available in DSpace on 2016-05-11T13:01:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 pedro_manso_ioc_dout_2014.pdf: 3405057 bytes, checksum: 6746c4f31f57631cda4cf25c55563336 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A vacina contra febre amarela é produzida a partir da inoculação do vírus atenuado 17DD em ovos embrionados de galinha. Esta vacina é extremamente eficaz e segura, gerando imunidade que pode perdurar por até trinta e cinco anos. Embora a replicação deste vírus em embriões de galinha seja utilizada desde 1937, pouco se sabe sobre os aspectos da infecção nestes embriões, especialmente que órgãos, tecidos e células são responsáveis pela replicação viral. Nesse trabalho, analisamos embriões de galinha (Gallus gallus) infectados pelo vírus da FA 17DD em diferentes tempos de infecção (24, 48, 72 e 96 horas) conforme as condições empregadas na produção de vacina na Fiocruz. Identificamos o vírus da Febre Amarela através de imunofluorescência em diferentes tecidos, correlacionamos a presença deste agente infeccioso às pequenas reações histopatológicas observadas nos tecidos, validamos essa detecção pela confirmação do material genético viral e seu sequenciamento, e confirmamos que este vírus replica na região onde foi identificado pela presença detecção de seu intermediário replicativo. Nesse sentido observamos que as alterações histopatológicas que ocorrem nos embriões de galinha infectados pelo vírus FA 17DD se apresenta branda e sistêmica ao longo do tempo analisado. Nossos dados apontam que as primeiras células a manifestar a infecção são mioblastos com aspecto mesenquimal que puderam ser observados no coração e no músculo esquelético a partir de 48 horas de infecção Após 72 horas, o vírus FA 17DD replica em células do músculo esquelético, cardiomiócitos, células da glia e neurônios, no epitélio tubular renal, parênquima pulmonar e fibroblastos. Nossos dados permitem sugerir o tecido muscular esquelético como um local privilegiado na produção das partículas virais. Após 96 horas a infecção se torna mais intensa no sistema nervoso e se mantém nos mesmos níveis nos demais tecidos já infectados. O conjunto de dados gerados nesse trabalho contribui para elucidar aspectos importantes sobre a patologia da febre amarela em embriões de galinha, e evidenciar os tecidos e células responsáveis pela produção do vírus FA 17DD nestes embriões. Estes dados podem ser úteis na compreensão e formulação de novas estratégias de produção da vacina, além de impactar no desenvolvimento de estratégias baseadas no uso do vírus FA 17DD como plataforma de produção para outras vacinas / Yellow fever vaccine is produced from the inoculation of attenuated virus YF 17DD in embryonated chicken eggs. This vaccine is extremely effective and safe, generating immunity that can persist across up to thirty-five years. Although replication of this virus in chicken embryos is used since 1937, little is known about aspects of infection in these embryos, especially that organs, tissues and cells are responsible for viral replication. In this study we analyzed chicken embryos (Gallus gallus) infected in vaccine production (Biomanguinhos) with YF 17DD virus in different times post infection (24, 48, 72 and 96 hours). Here it was possible to detect the Yellow Fever Virus by immunofluorescence, to correlate this presence with tiny tissue reactions, to validate it by genomic RNA detection and to sequence it in the same studied area, confirming that this virus is replicated in these regions by the replicative intermediate detection. In this thesis the histopathological changes that occur in chicken embryos infected by YF 17DD virus during the production of yellow fever vaccine were observed in a kinetic way. We observed that the infection in these embryos presented itself mild and systemic. Our data show that the first cells which express infection are myoblasts with mesenchymal shape that could be observed in the heart and skeletal muscle at 48 hours of infection. After 72 hours the yellow fever virus 17DD replicates mainly in skeletal muscle cells, cardiomyocytes, glial cells and neurons, but also in the renal tubular epithelium, lung parenchyma and fibroblasts. Our findings suggested skeletal muscle tissue as a main place in the production of viral particles. After 96 hours the infection becomes more intense in the nervous system and is maintained at the same levels in other tissues already infected. The data generated in this study contributes to elucidate important aspects of the yellow fever pathology in chicken embryos, and elucidate the tissues and cells responsible for YF 17DD virus production in this model. Our data may be helpful in the understanding and design new strategies of vaccine production, and impact in development of strategies based on the use of the virus YF 17DD as a platform for other vaccines production.

Submitted by Raquel Vasconcelos Guimarães de Castro null (rvgcastro@hotmail.com) on 2016-06-10T17:22:52Z No. of bitstreams: 1 Definitivo v11 VERSÃO IMPRESSA.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-15T17:22:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 castro_rvg_me_jabo.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T17:22:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 castro_rvg_me_jabo.pdf: 3954271 bytes, checksum: fbf5e7559a791827787906302174080b (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A pele é um órgão extenso e de fácil acesso, e possui vários tipos celulares diferentes que estão em constante renovação. Dentre estas células, alguns tipos de células-tronco com potencial proliferativo, de autorrenovação e de diferenciação, são responsáveis pela manutenção da homeostase deste órgão e pela cura de feridas. Estudos anteriores sugerem a existência de um nicho de células-tronco presente no “bulge” dos folículos pilosos, que contém populações positivas para CD200 e CD34. Este trabalho foi realizado com o intuito de: 1- Obter tecidos derivados da pele de cães adultos e fetos, isolar e cultivar as células in vitro derivadas destes, empregando um método de isolamento celular através de digestão enzimática simples 2- Comprovar a presença de células do “bulge”, positivas para CD200 e CD34 após cultivo celular in vitro, comparando com a análise do tecido; Uma coloração por hematoxilina e eosina foi realizada da pele de cães adultos e fetos, e biopsias e células cultivadas in vitro foram caracterizadas pela presença das proteínas CD200 e CD34 através de imunofluorescência, imunocitoquímica e citometria de fluxo. Os resultados da imunofluorescência foram negativos para ambos CD200 e CD34 nas peles de feto e adulto. Na imunocitoquímica, as células foram positivas para CD34 e CD200, tanto em fetos quanto adultos. Adicionalmente, o marcador de pluripotência OCT4 foi testado, sendo expresso em células de feto. Por citometria de fluxo, a porcentagem média de células marcadas duplamente por CD200 e CD34 nos adultos foi de 3,1% e nos fetos de 0,33% (n=3). A marcação somente por CD200 foi encontrada somente nos adultos, sendo de 2,8% (n=3). Os resultados sugerem ser possível a obtenção de células-tronco do “bulge” do folículo piloso através do método de digestão enzimática simples, utilizado neste trabalho. Este estudo é o primeiro passo para novas pesquisas que envolvam esse nicho, na pele de cães. / Skin is an extensive and easily accessible organ, possessing various cell types which are in constant renovation. Some stem cell types found in the skin have the potential of self-renewal, proliferation and differentiation, processes which are responsible for the organ’s maintenance of homeostasis and the healing of wounds. Previous studies suggested the presence of a stem cell niche at the bulge region of the hair follicle, which contains cell populations positive for CD200 and CD34. Thus, this work sought to identify these cell populations in canine cultures using the following methods: 1. 1- Collecting samples of adult and fetus canine skin, isolating and culturing these cells in vitro using a method of simple enzymatic digestion; 2- Testing the cell cultures for CD200 and CD34 in vitro, comparing them with analyzed tissue material. Hematoxylin and eosin staining were conducted for the biopsies and analysis of fetal and adult canine skin, with the extracted cell cultures being characterized for the presence of the proteins CD200 and CD34 through immunofluorescence, immunocytochemistry and flow cytometry. In both adult and fetal tissue samples, CD200 and CD34 immunofluorescence results were negative. In immunocytochemistry, both fetal and adult cultures cells tested positive for CD34 and CD200. The pluripotency marker OCT4 was also tested, and was positive for fetal culture cells. Flow cytometer results showed that, for samples with a double staining of CD200 and CD34 the average percentage of marked cells was 3.1% in adults and 0.33% in fetal cells (n=3). For the CD200 marker alone, positive cells were found only in adult cultures, representing 2.8% of the total population (n=3). In conclusion, the results suggest that obtaining bulge stem cells from both fetuses and adults, with use of CD200 and CD34 markers, is validated through the simple enzymatic digestion and cell culture methods utilized in this study. The present work is the first step towards developing new research involving this niche in dogs.

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-05-03T23:16:23Z No. of bitstreams: 1 EryckHolmesAlvesDaSilva_DISSERT.pdf: 2716639 bytes, checksum: 9de0ee927da81a43df483ba25e5b69ae (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-05-14T21:45:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 EryckHolmesAlvesDaSilva_DISSERT.pdf: 2716639 bytes, checksum: 9de0ee927da81a43df483ba25e5b69ae (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-14T21:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EryckHolmesAlvesDaSilva_DISSERT.pdf: 2716639 bytes, checksum: 9de0ee927da81a43df483ba25e5b69ae (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O sistema auditivo é de extrema importância para a sobrevivência das espécies. Tanto os animais que vivem em seu ambiente natural, bem como aqueles criados em condições controladas de laboratório precisam da audição para detectar perigos, tais como predadores e veículos motorizados e responder a vocalização de animais da mesma ou de outras espécies. A orelha é denominada de órgão vestíbulococlear, por participar diretamente da audição e da manutenção do equilíbrio. A navegação espacial por parte dos quirópteros está amplamente associada ao mecanismo de ecolocalização, o qual consiste na emissão de ondas sonoras pelo aparelho fonador e consequente reflexo em forma de eco, captado pelo aparelho vestíbulococlear. Embora diversos estudos abordem a dinâmica funcional dos sistemas de ecolocalização de quirópteros, poucos trabalhos se dedicam a uma análise morfológica dos centros neurais envolvidos no processamento de tais informações. O presente estudo tem como objetivo descrever a organização morfoquantitativa e neuroquímica do complexo coclear no encéfalo do morcego Artibeus planirostris. Utilizando o método de Nissl foram identificadas todas as subdivisões clássicas descritas até o presente em outras espécies: núcleo coclear ventral (parte anterior, parte posterior e camada granular) e núcleo coclear dorsal (camada profunda, camada fusiforme e camada molecular). A análise neuroquímica das proteínas ligantes de cálcio, através da técnica de imunofluorescência permitiu identificar a presença de terminais e pericários imunorreativos a CB, CR e PV de formas distintas, apresentando especificidades em cada porção do complexo coclear. Traçando um comparativo entre os vertebrados, o presente estudo fornece a primeira descrição detalhada dos aspectos morfoquantitativos do morcego Artibeus planirostris que se mostrou bastante similar às características encontradas nos roedores, especificamente o rato e a chinchila. A neuroquímica se mostra diferente aos primatas humanos e não humanos, podendo ser uma relação direta com a ecolocalização utilizada pelo modelo experimental. / The auditory system is extremely important for the survival of the species. Those that live in your natural environment, as well as those created under controlled conditions of laboratory need the hearing to detect dangers such as predators and motor vehicles, respond to vocalizations of animals of the same or other species. The ear is called a vestibulocochlear organ, because it participates directly in hearing and in maintaining balance. Spatial navigation by chiroptera is widely associated with the mechanism of echolocation, which consists of the emission of sound waves by the vocal apparatus and consequent echo reflex, captured by the vestibulocochlear apparatus. Although several studies address the functional dynamics of the chiroptera echolocation systems, few papers are dedicate to a morphological analysis of the neural centers involved in the processing of such information. The present study aims to describe the morphoquantitative and neurochemical organization of the cochlear complex in bat Artibeus planirostris brains. Using the Nissl’s method all classical subdivisions described up to the present in other species were identified: ventral cochlear nucleus (anterior part, posterior part and granular layer) and dorsal cochlear nucleus (deep layer, fusiform layer and molecular layer). The neurochemical analysis of the calcium binding proteins by means of the immunofluorescence technique allowed to identify the presence of immunoreactive terminals and pericals to CB, CR and PV in different ways, presenting specificities in each part of the cochlear complex. Comparing vertebrates, the present study provides a first detailed description of the morphoquantitative aspects of the bat Artibeus planirostris, which was very similar to the characteristics found in rodents, specifically the rat and the chinchilla. The neurochemistry is different to human and non-human primates, and may be a direct relation with the echolocation used by the experimental model.

This study evaluated the prevalence and analysis of risk factors for Neospora spp. and Toxoplasma gondii in horses (horses, mules and ponies), within rural and urban areas of Uberlândia. Serum samples from 257 horses were evaluated for the presence of antibodies against Neospora spp.e T. gondii by the indirect immunofluorescence assay (IFA) and molecular diagnosis by the method of polymerase chain reaction (PCR). In addition, a survey was conducted to evaluate the possible risk factors (genetic group, age, gender, economic activity, history of miscarriage, contact with domestic and wild animals and ECC). Of 257 blood samples evaluated, 13.2% (34/257) had a positive by IIF for Neospora spp. PCR and the overall prevalence of 1.2% (3/257) was found. There was a significant difference when comparing the frequency of positive animals between techniques. Of the factors studied, age was considered a risk factor for Neospora spp. Compared to Toxoplasma gondii, 9.7% (25/257) had a positive by IIF, and PCR were 10.9% (28/257). When comparing rural and urban areas, only the PCR was no statistically significant difference. By IIF only gender and age were risk factors. On the PCR technique, the only significant risk factor was the genetic group. Therefore, it is concluded that there is a T. gondii and Neospora spp. distributed throughout the city of Uberlândia and its prevalence is independent of rural or urban area. Being the genetic group, age and gender considered risk factors for Toxoplasma gondii and Neospora spp age for. / Este estudo avaliou a prevalência e análise dos fatores de risco do Neospora spp. e Toxoplasma gondii em equídeos (cavalos, mulas e pôneis), dentro de áreas rurais e urbanas do Município de Uberlândia. Amostras de soro de 257 equídeos, foram avaliadas para a presença de anticorpos contra Neospora spp.e T. gondii por meio do teste de Imunofluorescência indireta (IFI) e diagnóstico molecular através do método de Reação em cadeia Polimerase (PCR). Além disso, um inquérito epidemiológico foi realizado para avaliar os possíveis fatores de risco (grupo genético, idade, gênero, atividade econômica, histórico de abortamento, contato com animais domésticos e silvestres e ECC). Das 257 amostras sanguíneas avaliadas, 13,2% (34/257) resultaram em positivas na IFI para Neospora spp. e na PCR foi encontrada a prevalência geral de 1,2% (3/257). Houve diferença significativa ao comparar a frequência de animais positivos entre as técnicas. Dos fatores pesquisados a idade foi considerada fator de risco para o Neospora spp. Em relação ao Toxoplasma gondii, 9,7% (25/257) resultaram em positivas na IFI, e na PCR foram 10,9% (28/257). Ao comparar zona rural e urbana, apenas na PCR houve diferença estatística significativa. Na IFI somente o gênero e a idade foram considerados fatores de risco. Na técnica da PCR, o único fator de risco significativo foi o grupo genético. Logo, concluiu-se que há a presença de Toxoplasma gondii e Neospora spp. distribuídos em todo o município de Uberlândia e sua prevalência independe de ser zona rural ou urbana. Sendo o grupo genético, idade e gênero considerados fatores de risco para o Toxoplasma gondii e a idade para o Neospora spp. / Mestre em Ciências Veterinárias

Pertencente ao filo Apicomplexa, Neospora caninum causa infecções associadas à perda fetal e mortalidade neonatal em várias espécies animais. A doença é descrita desde 1984, quando ocorreram os primeiros casos de encefalite e miosite em cães. Estes desempenham um papel fundamental na epidemiologia do protozoário, pois são seus hospedeiros definitivos, assim como os coiotes e o cão australiano dingo. Devido à sua importância no mundo e às diferenças de prevalência nos diversos estados brasileiros há necessidade de investigar a ocorrência do protozoário em cães no Rio Grande do Sul. Amostras de soro de 313 cães de origem urbana e rural do município de Caxias do sul foram testadas para a presença de anticorpos para N. caninum mediante a reação de imunofluorescência indireta (RIFI≥1:50). Na área urbana a prevalência foi de 2% (5/160) e na rural foi de 12% (36/153) (p < 0,0001). Os títulos sorológicos variaram de zero (86,9%) a 1:6400 (0,64%), sendo 1:50 (5,11%), o mais prevalente dentre os positivos. Nenhum dos cães examinados apresentou sinais clínicos de neosporose durante a coleta de sangue. Dos fatores de risco avaliados, a idade dos cães rurais foi o único significativo (p = 0,0053), com prevalência de 1% (2/34) entre aqueles com menos de um ano de idade e de 22% (34/119) entre os com mais de um ano de idade. Quanto aos fatores gênero, alimentação confinamento, contato com bovino e recolhimento de carcaças, os cães rurais não apresentaram diferença significativa em relação à soropositividade. Nos cães urbanos, os fatores gênero, alimentação e idade não apresentaram diferença significativa em relação à positividade dos animais. Este estudo demonstrou que os cães da área rural de Caxias do Sul estão mais predispostos à infecção por N. caninum, principalmente animais com mais de um ano de idade. Nos cães de área urbana o protozoário também se fez presente no município de Caxias do sul, necessitando maiores estudos nessa população. / Belonging to the phylum Apicomplexa, Neospora caninum causes infections associated with fetal loss and neonatal mortality among several animal species. This disease has been reported since 1984, when the first cases of encephalitis and myositis in dogs occurred. They play a key role in the epidemiology of the protozoan, because they are its definite hosts, as well as the coyotes and the Australian dog dingo. Due to its importance in the world and to the differences of prevalence in the several Brazilian states, there is the need to investigate the occurrence of the protozoan among dogs in Rio Grande do Sul. Serum samples from 313 dogs from urban and country areas of Caxias do Sul were tested for the presence of antibodies to N. caninum by indirect immunofluorescence assay (RIFI≥1:50). In urban areas the prevalence was 2% (5/160) and in rural areas was 12% (36/153) (p <0.0001). The serological titers ranged from zero (86.9%) to 1:6400 (0.64%) and 1:50 (5.11%), the most prevalent among the positives. None of the dogs examined showed clinical signs of neosporosis during blood collection. Among the risk factors evaluated, the age of rural dogs was the only significant one (p = 0.0053), with a prevalence of 1% (2/34) among those with less than a year old and 22% (34/119) among the ones which were more than one year old. Concerning the factors gender, feeding, confinement, contact with cattle and carcasses collection, the country dogs did not show significant difference related to seropositivity. Among urban dogs, the factors gender, feeding and age did not show significant difference regarding the positivity of the animals. This study showed that dogs from country areas of Caxias do Sul are more likely to get infected by N. caninum, especially the animals which are more than one year old. In dogs from urban areas the protozoan was also present in Caxias do Sul, requiring further studies among this population.

Com o propósito de colaborar na elucidação da fisiopatologia do pênfigo foliáceo endêmico (PFE), realizou-se titulação de anticorpos séricos e quantificação das células de Langerhans (CL) e células dendríticas dérmicas (CD) na pele de pacientes com PFE. Sangue e biopsia de pele de lesão ativa foram colhidos de 22 pacientes com PFE e, em 13 deles realizou-se também biopsia de pele normal não adjacente à lesão, em área não exposta ao sol. Dos 22 pacientes, 13 apresentavam a forma clínica localizada e 9, generalizada; 11 estavam em tratamento. O grupo controle constituiu-se de pele normal obtida da região torácica anterior de 8 cadáveres e de 12 mulheres submetidas à cirurgia plástica (mastoplastia). A imunofluorescência indireta (IFI) foi realizada com pele humana normal da região abdominal como substrato e anti-IgG humana. A identificação das CL e CD foi feita pela técnica imunohistoquímica da avidina-biotina-peroxidase com o anticorpo anti-CD1a e quantificação por análise morfométrica. Houve correlação entre a titulação de anticorpos séricos por IFI e a forma clínica do PFE, sendo esse maior na forma generalizada. O número de CL na lesão (60,18 CL/ mm2; 5,00 CL/ mm de membrana basal (MB); 3,55 CL/mm de camada córnea) e na pele normal do PFE (28,45 CL/ mm2; 2,50 CL/ mm de MB; 2,87 CL/mm de camada córnea) foi semelhante ao número de CL na pele dos grupos controles de cirurgia plástica (72,35 CL/ mm2; 4,53 CL/ mm de MB; 4,42 CL/mm de camada córnea) e de cadáveres (47,15 CL/ mm2; 2,53 CL/ mm de MB; 2,42 CL/mm de camada córnea). O número de CD dérmicas na pele lesada de PFE (0,98 CD/ mm de MB) foi semelhante ao do grupo controle de plástica de mama (0,48 CD/ mm de MB), porém maior do que o do grupo cadáver (0,13 CD/ mm de MB). A razão entre o número de CL e CD dérmicas foi menor na pele lesada do paciente com PFE comparada à dos grupos controles, confirmando maior número de CD na derme. Num mesmo paciente, as CL e CD da derme encontravam-se em maior número na lesão de PFE (61,50 CL/ mm2; 5,49 CL/ mm de MB; 6,64 CL/mm de camada córnea, 0,86 CD dérmicas/ mm de MB) quando comparadas à pele normal (28,45 CL/ mm2; 2,50 CL/ mm de MB; 2,87 CL/mm de camada córnea; 0,04 CD dérmicas/ mm de MB). Houve correlação direta entre o número de CD dérmicas na lesão de PFE e a titulação de anticorpos séricos por IFI (r=0,4779, p<0,05), indicativo de que as CD dérmicas poderiam estar participando da patogênese do PFE. Poder-se-ia supor que as CD estariam transitando pela derme em direção ao linfonodo regional, exercendo função estimuladora de linfócitos T na indução da resposta imune e produção de auto-anticorpos. / In order to contribute to the elucidation of pathophysiology of Endemic Pemphigus Foliaceus (EPF) titration of serum antibodies and quantification of Langerhans Cells (LC) and dermal dendritic cells (DC) in skin of patients with EPF were made. Blood and skin biopsies (lesional skin) of 22 EPF patients were collected and, in 13 of them, biopsies of normal sun-protected skin of non perilesional area were collected too. 13 patients had localized lesions and 9, generalized; 11 were in treatment. Control groups consisted of thoracic normal skin from 8 cadavers and 12 women submitted to breast plastic surgery. For indirect immunofluorescence (IFI), abdominal normal skin as substrate and anti-IgG were used. LC and dermal DC identification was done by immunohistochemistry with anti-CD1a antibody and quantification by morfometric analysis. It was found association between titration of serum antibodies by IFI and clinical form of EPF, with greater titration in the generalized one. LC number in lesion (60.18 LC/ mm2, 5.00 LC/ mm basement membrane (BM), 3.55 LC/mm stratum corneum) and normal skin of EPF patients (28.45 LC/ mm2, 2.50 LC/ mm BM, 2.87 LC/mm stratum corneum) was similar to LC number in skin of plastic surgery (72.35 LC/ mm2, 4.53 LC/ mm BM, 4.42 LC/mm stratum corneum) and cadaver controls (47.15 LC/ mm2, 2.53 LC/ mm BM, 2.42 LC/mm stratum corneum). Dermal DC number in lesional skin of EPF patients (0.98 DC/ mm BM) was similar to the DC number of plastic surgery controls (0.48 DC/ mm BM), but greater than DC number in cadaver controls (0.13 DC/ mm BM). The ratio LC number/ dermal DC number was smaller in lesional EPF skin than in controls, confirming the greatest DC number in dermis. In the same patient, LC and dermal DC were in greater amounts in EPF lesional skin (61.50 LC/ mm2, 5.49 LC/ mm BM, 6.64 LC/mm stratum corneum, 0.86 dermal DC/ mm BM) than in normal skin (28.45 LC/ mm2, 2.50 LC/ mm BM, 2.87 LC/mm stratum corneum, 0.04 dermal DC/ mm BM). It was found direct association between dermal DC number in lesional skin of EPF patients and titration of antibodies by IFI (r=0.4779, p<0.05), confirming that dermal DC could play an important role in EPF pathogenesis. It could be proposed that DC would be in transit through the dermis towards the regional lymph node, stimulating T lymphocytes to produce autoantibodies.