Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2017-09-29T17:43:14Z No. of bitstreams: 1 camilamontoromfelicio_tese.pdf: 3396879 bytes, checksum: 0568a8c449b9fa50634fd25925b2f3e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-29T17:43:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 camilamontoromfelicio_tese.pdf: 3396879 bytes, checksum: 0568a8c449b9fa50634fd25925b2f3e7 (MD5) Previous issue date: 2016-09-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Background: The use of kidneys from extended criteria donors (ECD) is associated with organs of inferior quality and, therefore, a high discarding rate. Clinical and histological tools available to assess non-ideal organs and predict outcomes of ECD have conflicting results. Objectives: To evaluated differences in the intragraft cytokine genes expression in ECD and SCD (standard criteria donors) kidney biopsies (Bx) pre and post-transplant (Tx) and sought possible changes induced by immunosuppressive regimens (ISS). Methodology: SCD and ECD recipients (RTx) were randomized to tacrolimus (Tac) or everolimus (Eve) and Bx were collected pre-implantation (T0 Bx; n = 80) and after 15 (T15 Bx; n = 64) and 90 days (T90 Bx; n = 51) post-Tx. Subgroups SCD-Tac, ECD-Tac, SCD-Eve and ECD-Eve were analyzed for clinical outcomes and clinical data were correlated with intragraft gene expression. Results: Overall, ECD-Eve and ECD-Tac had inferior one-year patient survival and ECD-Tac had lower graft survival than other groups while cytomegalovirus and de novo diabetes pos-Tx were higher in patients with Tac. After one year ECD-Eve patients had higher serum creatinine than ECD-Tac (p = 0.03). Acute rejection rates were higher in Eve group regardless donor type. T0 Bx of ECD showed higher expression of MCP-1, RANTES, TGF-β1 and IL-10 when compared with SCD. TGF-β1 related to the serum creatinine at harvesting the organ while length of donor hospitalization and ECD donor type were associated with upregulation of MCP-1 and RANTES. T15 Bx of patients from both groups taking Eve had increased FOXP3 and MCP-1. RANTES were upregulated only in the SCD-Eve group. Eve was the only variable associated with upregulation of FOXP3, MCP-1 and RANTES. Molecular profiling at T90 was similar except by an increase in FOXP3 transcripts restrict to SCD-Eve group. Positive expression of FOXP3 was associated with the use of Eve and delayed graft function (DGF) with the increased expression of MCP-1 and IL -10. We subtracted from Bx T15 and T90 gene expression values obtained in Bx T0 and two distinct types of molecular profile were found to SCD and ECD. SCD kidneys showed upregulation for all molecules, except TGF-β1 regardless of the ISS system, and ECD kidneys showed negative regulatory molecules for the same, except for slight positive FOXP3 and RANTES expressions. Conclusion: Pre-implantation Bx of ECD kidneys had an inflammatory molecular profile clearly distinct from SCD, with higher expression of RANTES, MCP-1, TGF-β1 and IL-10. Post-Tx, the ISS given modifies the initial cytokine expression pattern at different time points. / Introdução: O uso de rins de doadores com critérios estendidos (DCE) está associado com órgãos de qualidade inferior e, por isso acabam gerando alta taxa de descarte desses órgãos. Os métodos clínicos e histológicos usados como ferramentas para avaliar os órgãos “não ideais” e prever os desfechos dos DCE têm resultados conflitantes. Objetivos: Avaliar as diferenças na expressão gênica de biópsias (Bx) renais em DCE e doadores com critérios padrões (DCS) no pré e pós-transplante (Tx) e buscar possíveis alterações induzidas pelos regimes de imunossupressão (ISS). Metodologia: Receptores (RTx) de DCS e DCE foram randomizados para tacrolimo (Tac) ou everolimo (Eve) e as Bx foram coletadas no pré-transplante (T0 Bx; n = 80) e após 15 (T15 Bx; n = 64) e 90 dias (T90 Bx; n = 51) pós-Tx. Os subgrupos DCS-Tac, DCE-Tac, DCS-Eve e DCE-Eve foram analisados para os desfechos clínicos e os dados foram correlacionados com a expressão gênica intra-enxerto. Resultados: Receptores de DCE-Eve e DCE-Tac tiveram menor sobrevida em um ano pós-Tx. Infecção por citomegalovírus e diabetes mellitus pós-Tx foram maiores em pacientes tratados com Tac. Após um ano, receptores de DCE-Eve apresentaram creatinina sérica (sCr) mais elevada do que DCE-Tac. As taxas de rejeição aguda foram maiores no grupo Eve, independente do tipo de doador. Bx T0 de rins de DCE mostraram maior expressão de MCP-1, RANTES, TGF-β1 e IL-10 quando comparado com rins de DCS. TGF-β1 foi relacionado com a sCr na retirada do órgão, enquanto que o tempo de hospitalização de DCE foi associado com maior expressão de MCP-1 e RANTES. Bx T15 de pacientes dos grupos Eve apresentaram aumento de FOXP3 e MCP-1. A expressão de RANTES foi mais elevada no grupo DCS-Eve. O uso de Eve foi à única variável associada com maior expressão de FOXP3, MCP-1 e RANTES. O perfil das Bx após 90 dias foi similar exceto pelo aumento dos transcritos de FOXP3 restritos ao grupo DCS-Eve. A maior expressão de FOXP3 foi associada com o uso de Eve e a função tardia do enxerto com o aumento na expressão de MCP-1 e IL-10. Foram subtraídos das Bx T15 e T90, os valores de expressão gênica obtidos nas Bx T0, e dois tipos distintos de perfil molecular foram encontrados para DCS e DCE. Rins de DCS apresentaram maior expressão para todas as moléculas, exceto TGF-β1, independentemente do regime de ISS. Os rins de DCE mostraram menor expressão para as mesmas moléculas, exceto por aumento discreto na expressão de FOXP3 e RANTES. Conclusão: Bx pré-implantação de rins de DCE tiveram um perfil molecular inflamatório diferente de rins de DCS, com maior expressão de RANTES, MCP-1, TGF-β1 e IL-10. No pós-Tx, a ISS modificou o padrão inicial de expressão de citocinas nos tempos estudados.

Estudos sobre profilaxia antibiótica em pacientes imunossuprimidos submetidos a procedimentos cruentos odontológicos são bastante escassos, no entanto já existe um consenso de que estes pacientes são sabidamente de risco para infecção de sítio cirúrgico odontológico e que, portanto, necessitam de profilaxia antibiótica. Não é definido, no entanto, o regime profilático ideal para estes pacientes. O objetivo deste estudo é comparar a duração de antibioticoprofilaxia através de dois esquemas para prevenção de infecção após procedimentos odontológicos cruentos em pacientes imunossuprimidos transplantados renais ou hepáticos e em pacientes imunossuprimidos por quimioterapia. Este ensaio clínico foi randomizado e avaliou pacientes consecutivos com neoplasia e que fizeram uso de quimioterapia anti-neoplásica no último mês e pacientes transplantados de órgãos sólidos com medicação imunossupressora anti-rejeição, que necessitavam de exodontia e/ou raspagem periodontal como tratamento odontológico. O atendimento foi realizado na Divisão de Odontologia do Hospital das Clínicas da Faculdade Medicina da Universidade de São Paulo e foram incluídos pacientes da rotina do ambulatório que atendiam aos critérios de inclusão para participarem do protocolo da pesquisa e que concordaram em participar, assinando o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Os pacientes foram randomizados para um dos dois grupos de regime profilático (grupo 1 - uma cápsula de 500mg de amoxicilina duas horas antes do procedimento odontológico; grupo 2 duas cápsulas de 500mg de amoxicilina, sendo a primeira duas horas antes do procedimento e a segunda oito horas após a primeira) e realizaram exame de sangue para avaliação da cultura hematológica após a realização do procedimento, sendo acompanhados durante um mês. A amostra calculada foi de 414 pacientes, sendo 207 em cada grupo. Os dados foram analisados através do programa SPSS Windows (versão 13.0, Chicago IL) e a partir daí foi obtida uma tabela descritiva e utilizado o teste qui-quadrado para comparação das variáveis entre os dois grupos. O nível de significância foi de p< ou = 0,05. Foi realizada também uma análise multivariada. A amostra foi analisada durante o período de novembro de 2006 a novembro de 2007. Não ocorreram os seguintes desfechos: infecção do sítio cirúrgico, antibiótico introduzido pelo médico no pós-operatório em até 30 dias após o procedimento odontológico e morte até o 15º dia após o procedimento odontológico. Os desfechos encontrados foram: necessidade de tomar analgésico após o 3º dia e até o 15º dia após o procedimento (3 no grupo 1 e 1 no grupo 2) e internação hospitalar até o 15º dia após o procedimento (2 no grupo 1 e 1 no grupo 2). A análise multivariada não alterou os resultados. Este estudo não demonstrou uma diferença entre utilizar uma ou duas doses de amoxicilina como profilaxia em procedimentos invasivos dentários em pacientes imunosuprimidos / Studies about antibiotic prophylaxis in immunosuppressed patients submitted to odontological invasive procedures are scarse, however there is already a consensus that these patients are in risk for post-operative infection in dentistry and that, therefore, they need antibiotic prophylaxis. It is not defined, however, the best prophylactic regimen for these patients. The aim of this study was to compare two regimens of antimicrobial prophylaxis in dental invasive procedures in immunosuppressed patients by chemotherapy for cancer or solid organ transplants. This is a randomized controlled study and it evaluated consecutive patients with cancer and that were submitted to chemotherapy in the last month and solid organ transplanted patients who needed exodontia or periodontal scaling and root planning as odontological treatment. This study was done in the Divisão de Odontologia of Hospital das Clínicas of Faculdade Medicina of the Universidade de São Paulo and it was included patients from the routine of the ambulatory who presented all the inclusion criteria and signed the informed consent. Patients were randomly assigned to one of the groups of prophylactic regimens (group 1 amoxicillin 500mg administered orally two hours before the procedure; group 2 amoxicillin 500mg administered orally two hours before the procedure and a second dose eight hours later) and had blood sample collected for culture immediately after the procedure, being followed up for one month. The total sample size was of 414 patients, being 207 in each group. Data were analyzed using the software SPSS Windows (version 13.0, Chicago IL). The characteristics of the patients of the 2 groups were compared using the chi-square test. The two groups were compared as to each outcome. A multivariate analysis was performed evaluating the groups as to the occurrence of any of the outcomes, by multiple logistic regression. The sample was evaluated between november of 2006 and november of 2007. The following outcomes did not occur: surgical site infection; systemic use of an antimicrobial drug within 30 days after the procedure and death by any reason within 15 days after the procedure. The other outcomes were: use of medication against pain after 3rd day after the procedure (three in group 1 and one in group 2) and hospitalization for any reason within 15 days after the procedure (two in group 1 and one in group 2). The multivariate analyses did not alter the results. This study did not demonstrate a difference between using one or two doses of amoxicillin as prophylaxis in invasive odontological procedures in immunosuppressed patients

Introdução: A terapêutica da psoríase foi modificada pela introdução dos imunobiológicos, que permitem melhor controle da doença e melhor qualidade de vida aos pacientes, mas promovem aumento do risco de tuberculose latente, exigindo diagnóstico antecedendo seu início. Objetivo: Avaliar o desempenho do teste T-SPOT.TB no diagnóstico de infecção tuberculosa latente em pacientes com psoríase. Métodos: Em estudo experimental, prospectivo, analítico, com comparação de grupos,de prevenção primária, para validade de teste diagnóstico, 33 pacientes com psoríase (grupo psoríase) e 30 pacientes com outras doenças dermatológicas (grupo base), atendidos nos Ambulatório de Dermatologia Geral ou de Psoríase do Centro de Estudos Dermatológicos do Recife, da Santa Casa de Misericórdia, entre fevereiro e novembro de 2009, foram submetidos aos testes do PPD e T-SPOT.TB. Para ambos os grupos, admitiu-se inclusão com idade mínima de 18 anos e critérios de exclusão doenças ou condições fisiológicas que comprometessem a competência imunológica, exceto psoríase, para o grupo psoríase. Adotou-se a técnica de Mantoux para o teste do PPD e uma variante simplificada da técnica Enzyme-Linked Immunospot para a determinação de células T efetoras, secretoras de IFN-g em resposta à estimulação pelos antígenos específicos do M. tuberculosis para o teste T-SPOT.TB. As variáveis dependentes foram os resultados do teste T-SPOT.TB contra antígenos ESAT-6, CFP-10, e os resultados do teste do PPD, considerando enduração de 0-4 mm: não reator; 5-9 mm: reator fraco; &#8805; 10 mm: reator forte. As variáveis independentes foram: idade, sexo, cor da pele, tempo de evolução da psoríase, ocupação, história de contato intradomiciliar e renda, alcoolismo e gravidade da doença. Foram submetidos a teste Qui quadrado ou exato de Fisher, em nível de significância de 0, 05, assim como ao teste de Mantel-Haenszel, três modelos comparando o teste T-SPOT.TB com teste do PPD, contato intradomiciliar e associação teste do PPD e contato intradomiciliar. A pesquisa foi aprovada pelos Comitês de Ética da Universidade Federal de Pernambuco e Universidade de São Paulo. Resultados: O grupo psoríase diferiu do grupo base quanto a razão de sexo com predomino do masculino (razão=0,7:1; p=0,047); maior idade média 42,1±1,9 anos (contra 34,1±1,4 anos no grupo base, p=0,023); fototipos I e II (p=0,020); menor nível de instrução e renda média mensal e contato intradomiciliar com tuberculose menos freqüente (p=0,001). Os grupos também diferiram quanto à positividade do teste do PPD (maior no grupo base; p=0,001). O teste T-SPOT.TB apresentou sensibilidade e especificidade de 9,1% e 95,5%, no modelo 1, 27,3% e 60%, no modelo 2, e valores de 60% e 53,3%, respectivamente no modelo 3. Foi no modelo 1 do grupo psoríase que o teste TSPOT. TB mostrou a maior concordância e o maior valor de Odds Ratio ponderado pelo teste de Mantel-Haenszel, tendo esses dois parâmetros significância estatística, quando comparados aos outros dois modelos. Conclusões: O teste T-SPOT.TB apresentou maior capacidade de diagnosticar casos negativos para tuberculose latente, constituindo-se numa opção para triagem de pacientes na instituição de terapêutica com imunobiológicos. / Introduction: The therapy for psoriasis was modified by the introduction of immunebiological products that allow better disease control and better quality of life for patients, but promotes increased risk forf latent tuberculosis, requiring diagnosis shortly before its establishment. Purpose: To assess the performance of T-SPOT.TB test for the diagnosis of latent tuberculosis infection in patients with psoriasis. Methods: Within a experimental, prospective, analytic, clinical assay type study, with comparison of groups, to validate a diagnostic test, 33 patients with psoriasis (psoriasis group) and 30 patients with other dermatological diseases (basis group), attempted at General Dermatology and Psoriasis Out-patients Departments of Recife\'s Dermatological Studies Center of Santa Casa de Misericórdia, from February to November 2009, were submitted to PPD and TSPOT. TB tests. For both groups, we admitted 18 years as minimal age for inclusion. The exclusion criteria included disease ou physiological conditions that compromised immunological competence, except psoriasis to psoriasis group. We used Mantoux technique for PPD test and a simplified variant of Enzyme-Linked Immunospot technique to determine effector T cells, secretors of IFN-g in response to M. tuberculosis specific antigens, to T-SPOT.TB test. Dependent variables were the results of T-SPOT.TB test against ESAT-6 and CPF-10 antigens, and the results to PPD test, considering enduration of 0-4 mm as non reactor; 5-10 mm weak reactor and &#8805; 10 mm, strong reactor. Independent variables were age, sex, skin color, psoriasis evolution time, occupation, history of intradomiciliar contact and income, alcoolism and disease grade. Three models, comparing T-SPOT.TB test to PPD test, intradomiciliar contact and both, were submitted to Qui Squared test or Exact Fisher Test, at significance level of 0.05, as well as to Mantel- Haenszel test. The research has been approved by Ethics Committee of Universidade Federal de Pernambuco e Universidade de São Paulo. Results: Psoriasis group differed from base group on sex ratio with predominance of male gender (rate=0.7:1; p=0,047), major mean age (42,1 ± 1.9 years against 34,1 ± 1.4 years in basic group, p = 0,023) phototypes I and II (p = 0,020); lower scholarship, income and less frequent intradomiciliar contact with tuberculosis (p = 0,001). The groups also differed on the positivity of PPD test (greater in base group; p = 0,001). T-SPOT.TB test had sensibility and specificity of 9,1% and 95.5%, in model 1; 27,3% and 60%, in model 2, and values of 60% and 53,3% respectively in model 3. Model 1 showed greater concordance and highest value of Odds Ratio test weighted by Mantel-Haenszel test, having these two parameters statistical significance when compared to the other two models. Conclusions: T-SPOT.TB test had great ability to diagnose negative cases for latent tuberculosis, and constitutes an option for screening patients to immunobiological therapy administration.

Introdução: A globulina anti-timocitária (ATG) é um anticorpo policlonal depletor de linfócitos amplamente utilizado no transplante de órgãos. O monitoramento deste agente em receptores de transplante renal pode ser realizado por contagem de linfócitos totais e células T CD3+ no sangue periférico. Objetivo: Avaliar a correlação entre estas duas formas de monitorização. Métodos: Estudo retrospectivo, centro único, avaliou 226 pacientes que receberam enxerto renal entre 2008 e 2013 e que foram tratados com ATG para terapia de indução ou para tratamento de rejeição celular aguda grave. A primeira dose foi administrada no intra-operatório e as subsequentes de acordo com os níveis de células T CD3+ ou número de linfócitos totais no sangue periférico. Os coeficientes de correlação e concordância foram avaliados em amostras pareadas. Resultados: No total 664 amostras pareadas foram analisadas para o número de linfócitos totais e células T CD3+. O coeficiente de correlação de Spearman enre os resultados foi 0.416 (P <0.001) para a amostra geral, 0.435 (P < 0.001) para os pacientes em indução e 0.285 (P<0.005) para os pacientes em tratamento de rejeição. O coeficiente de concordância Kappa entre as amostras gerais foi 0.267 (P < 0.001), 0.280 (P < 0.001) para indução e 0.155 (P<0.081) para pacientes em tratamento. Os parâmetros diagnósticos para a contagem de linfócitos totais foram calculados usando o número de células T CD3+ como padrão-ouro com o ponto de corte de > 20 células/mm³. Na curva ROC o melhor ponto (256 linfócitos/mm3) apresenta área sobre a curva de 0.71 (95% CI: 0.67-0.75) com sensibilidade de 66.8%, especificidade 66.5%, valor preditivo positivo 46.6% e valor preditivo negativo 82.1%. Conclusão: Baseados nestes resultados consideramos que a monitorização da administração e do intervalo das doses de ATG deva ser realizada através da contagem de células T CD3+, por citometria de fluxo, em detrimento dos linfócitos totais no sangue periférico. / Background: Anti-thymocyte globulin (ATG) is a preparation of depleting antibodies largely utilized in organ transplantation. The monitoring of this agent in renal transplant recipients can be accomplished by counting total lymphocytes and CD3+T cells in the peripheral blood. Objective: Evaluated the correlation between these two measurements. Methods: Retrospective study, single center study that evaluated 226 patients who received a kidney graft between 2008 and 2013 and where treated with ATG either for induction therapy or for treatment a severe acute cellular rejection. The first dose was given intra-operatively and subsequent doses were administered according to the levels of CD3+ T cells or number of total lymphocytes in the peripheral blood. Correlation and concordance coefficients were evaluated in paired samples. Results: A total of 664 paired samples were analyzed for the number of lymphocytes and CD3+ T. The Spearman’s correlation coefficient between the results was 0.416 (P < 0.001) to all samples, 0.435 (P < 0.001) for induction therapy samples and 0.285 (P<0.005) for therapeutic samples. The Kappa’s concordance coefficient between samples was 0.267 (P < 0.001) to all samples, 0.280 (P < 0.001) for induction therapy samples and 0.155 (P<0.081) for therapeutic samples. The diagnostic parameters for the total lymphocyte counting were calculated using number of CD3+ T cells as the gold standard at the cut off at > 20 cells/mm³. At the ROC curve using the best cut off (256 lymphocytes/mm3) an AUC of 0.71 (95% CI: 0.67-0.75) was found along with a sensitivity 68.8%, specificity 66.5%, positive predictive value 46.6% and negative predictive value 82.1%. Conclusion: Based upon these results it is not possible to reliably replace the flow cytometric assay for CD3+ T cells by the counting of total lymphocytes in the peripheral blood in the monitoring of ATG administration in kidney transplant recipients.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The nematode Strongyloides stercoralis responsible for strongyloidiasis diagnosed by detection of larvae in feces. However, the elimination of low larvae hampers the detection of disease particularly in cases of immunosuppression. Immunodiagnostic tests have been developed, but the difficulty of obtaining larvae of S. stercoralis for the production of homologous antigenic extract, thereby Strongyloides venezuelensis and their different evolutionary forms for the production of antigen extracts. The aim of this study was to evaluate the detection of antibodies anti S. venezuelensis against alkaline extracts of L3 larvae, parthenogenetic females or eggs in experimental strongyloidiasis associated with immunosuppression. Male rats were divided into two groups: non-immunosuppressed and immunosuppressed experimentally infected and serum from all animals were obtained at 0, 5th, 8th, 13th and 21th days post infection (d.p.i.). The test enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was performed to compare the reactive potential of alkaline extracts of L3 larvae, parthenogenetic females and eggs of S. venezuelensis in rats non-immunosuppressed and immunosuppressed. Immunoblotting was also evaluated for detection of IgG anti S. venezuelensis in both groups front to alkaline of the three developmental forms of the parasite extracts. In all comparative ELISA extracts were skilled in detecting IgG S. venezuelensis. The extract of larvae showed reactivity from the 5th dpi ceasing at 21th d.p.i in the non-immunosuppressed group while the group immunosuppressed this reactivity remained at 21th d.p.i. immunoblotting showed the reactivity profile with immunoreactive fractions in immunosuppressed group from the 5th d.p.i. while the non-immunosuppressed group reactivity from 8th d.p.i. The alkali extracts of parthenogenetic females and eggs showed a similar profile of reactivity in both ELISA and immunoblotting. Immunoreactive protein fractions of 26 and 17 kDa present in the alkaline extract of larvae presented as important markers of infection in immunosuppressed animals. It is concluded that all alkali extracts have diagnostic potential in experimental strongyloidiasis especially the larval extract in cases of immunosuppression, and immunoblotting an important complementary diagnostic tool. / O nematódeo Strongyloides stercoralis é responsável pela estrongiloidíase cujo diagnóstico é realizado pela detecção de larvas nas fezes. Porém a baixa eliminação de larvas dificulta a detecção da doença em especial em casos de imunossupressão. Testes imunodiagnósticos têm sido desenvolvidos, porém há dificuldade de se obter larvas de S. stercoralis para a produção de extrato antigênico homólogo assim o parasito Strongyloides venezuelensis e suas diferentes formas evolutivas são utilizados para produção de extratos antigênicos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a detecção de anticorpos anti S. venezuelensis a partir de extratos alcalinos de larvas L3, fêmeas partenogenéticas ou ovos na estrongiloidíase experimental associada à imunossupressão. Ratos machos foram divididos em dois grupos: não-imunossuprimidos e imunossuprimidos experimentalmente infectados e o soro de todos os animais foram obtidos no 0, 5º, 8º, 13º e 21º dias pós-infecção (d.p.i.). O teste enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) foi realizado para comparar o potencial reativo dos extratos alcalinos de larva L3, fêmeas partenogenéticas e ovos de S. venezuelensis em ratos não-imunossuprimidos e imunossuprimido. Immunoblotting foi avaliado quanto sua detecção de IgG anti S. venezuelensis em ambos os grupos frente aos extratos alcalinos das três formas evolutivas do parasito. No ELISA comparativo todos extratos foram efetivos na detecção de anti-IgG de S. venezuelensis. O extrato de larvas apresentou reatividade a partir do 5º d.p.i cessando no 21º d.p.i. no grupo não-imunossuprimido enquanto o grupo imunossuprimido essa reatividade permaneceu no 21º d.p.i.. O immunoblotting apresentou perfil de reatividade com frações imunorreativas no grupo imunossuprimido a partir do 5º d.p.i. enquanto o grupo não-imunossuprimido a reatividade a partir do 8º d.p.i. Os extratos alcalinos de fêmeas partenogenéticas e de ovos apresentaram similar perfil de reatividade tanto no ELISA comparativo quanto no immunoblotting. Frações proteicas imunorreativas de 26 e 17 kDa presentes no extrato alcalino de larvas apresentaram como importantes marcadores de infecção em animais imunossuprimidos. Conclui-se que todos os extratos alcalinos possuem potencial diagnóstico na estrongiloidíase experimental com destaque para o extrato de larvas em casos de imunossupressão, sendo o immunoblotting uma importante ferramenta diagnóstica complementar. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:56:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1184583 bytes, checksum: e7d5f827d1dea31a7b5d11cc69a3c72d (MD5) Previous issue date: 2009-12-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of the present study was to assess the oral health status of children infected with HIV virus. A prospective, observational, descriptive, case-control study was carried out in the city of João Pessoa, PB, Brazil. The sample consisted of a study group (SG) made up of 21 children infected with HIV in treatment at the Infectology Unit of the Clementino Fraga Hospital Complex and a control group (CG) of 28 children with no history of HIV infection covered by the Jardim Miramar II Family Health Program. Dental caries indices, (DMFT and deft), gingival status indices (VPI, GBA, OHI-S), resting and stimulated salivary flow and salivary buffer capacity were determined. The deft index was 3.19 ± 3.21(95%CI 1.73-4.66) in the SG and 2.54 ± 1.9 (95%CI 1.78-3.29) in the CG; the DMFT was 3.52 ± 2.6 (95%CI 2.34-4.71) in the SG and 1.32 ± 1.4 (95%CI 0.74-1.90) in the CG (p=0.002). There were statistically significant differences between groups in the decayed component for both the primary (p=0.02) and permanent (p<0.0001) dentition as well as in the filled component for the primary dentition (p<0.0001). The presence of visible biofilm was 52.9% in the SG and 47.1% in the CG (p=0.031). Gingivitis, measured by the gingival bleeding index (GBI) was absent in 57.1% of the SG and 78.5% of the CG (p=0.09). There was a difference between groups in resting saliva flow (p=0.01). There was a high frequency of caries in the SG. The most prevalent need for treatment in the SG was extraction, whereas the most prevalent treatment need in the CG was for procedures of low complexity. The organization of services is suggested for addressing this clinical demand and a health promotion program should be implemented for this population. / Este estudo teve como objetivo avaliar as condições de saúde bucal de crianças infectadas ou não pelo vírus HIV. A amostra foi composta por um grupo de estudo (GE), constituído por 21 crianças infectadas pelo HIV, atendidas no setor de infectologia do Complexo Hospitalar Clementino Fraga e por um grupo controle (GC) de 28 crianças sem história de infecção pelo HIV, atendidas no Programa de Saúde da Família Jardim Miramar II. A pesquisa é do tipo descritiva, observacional, prospectiva, e do tipo caso-controle, e foi desenvolvido em João Pessoa, PB, Brasil. Em ambos os grupos foram determinados o índice de cárie dentária (ceo-d e CPO-D), índices da condição gengival (IPV, ISG, IHO-S), além do fluxo salivar em repouso e o estimulado, e a capacidade tampão da saliva. A análise estatística foi feita através de testes de associação, como o Qui-quadrado e Exato de Fisher, além do teste de Mann-Whitney; todos com nível de significância de 95% (p<0,05). Observou-se ceo-d de 3,19 ± 3,21(IC95% 1,73 - 4,66) GE e 2,54 ± 1,9 (IC95% 1,78- 3,29) GC, já o CPO-D foi de 3,52 ± 2,6 (IC 95% 2,34 - 4,71) GE e 1,32 ± 1,4 (IC95% 0,74 - 1,90) GC (p=0,002). Em relação aos componentes verificou-se diferença estatística para o componente c cariado tanto na dentição decídua (p=0,02) como na permanente (p<0,0001) e para o componente O obturado na dentição decídua (p<0,0001). Observou-se presença de biofilme visível em 52,9% (GE) e 47,1% (GC) (p=0,031). A ausência de gengivite pelo índice de Sangramento Gengival (ISG) foi de 57,1% (GE) e 78,5% (GC) (p=0,09). Observou-se diferença entre os grupos para o fluxo salivar em repouso (p=0,01). Verificou-se alto índice de cárie nas crianças do GE. A necessidade de tratamento mais prevalente foi a extração (GE), enquanto que para o GC foi de procedimentos de baixa complexidade. As condições da saúde bucal das crianças com HIV não foram satisfatórias quando comparadas às do GC.

Introdução: A não adesão aos imunossupressores no transplante renal constitui uma importante barreira à obtenção dos resultados terapêuticos e manutenção do enxerto. Estudar a não adesão indica a real extensão deste comportamento e seus fatores de risco, sendo possível planejar estratégias de intervenção. Objetivos: Avaliar a prevalência da não adesão ao tratamento imunossupressor e verificar seus fatores de risco em uma amostra de pacientes transplantados renais. Metodologia: Estudo transversal realizado no Hospital de Clínicas de Porto Alegre com pacientes transplantados renais adultos com pelo menos um ano de transplante, selecionados e incluídos entre março e novembro de 2010 durante o atendimento ambulatorial. Não adesão aos imunossupressores foi aferida utilizando os métodos autorrelato, dispensação dos imunossupressores, níveis sanguíneos dos imunossupressores e uma combinação dos métodos autorrelato e dispensação. Verificou-se a associação de não adesão com variáveis demográficas e clínicas. Análises estatísticas com Qui-Quadrado, Teste t, Mann-Whitney, Kappa e modelo linear generalizado por distribuição Normal e de Poisson. Levados à análise multivariada para cálculo da razão de prevalência (RP), variáveis com p≤0,15 na análise univariada. Consideraram-se significativos valores de p<0,05. Resultados: Estudou-se 288 pacientes com prevalência de não adesão de 61,8% no autorrelato; 58,7% na dispensação; 29% nos níveis; e 37,4% na adesão combinada. Associações significativas foram encontradas entre não adesão e paciente não branco e idade mais jovem no método autorrelato; paciente em atividade laboral, em uso de tacrolimus e níveis de imunossupressores mais baixos na dispensação; receptor de doador vivo e tempo maior de transplante nos níveis; paciente não branco, idade mais jovem e níveis de imunossupressores mais baixos na adesão combinada. Pela análise multivariada, no método autorrelato etnia branca (RP=0,81) e ano adicional de idade (RP=0,986) foram identificados como fatores de proteção para prevalência de não adesão. Na análise pelos métodos da dispensação, níveis e adesão combinada a RP para não adesão foi significativamente maior em paciente em uso de tacrolimus (RP=1,347), receptor de doador vivo (RP=1,166) e etnia não branca (RP=1,39) respectivamente. Conclusão: Encontrou-se alta prevalência de não adesão e um risco maior para comportamento não aderente aos imunossupressores em pacientes mais jovens, de etnia não branca, em uso do imunossupressor tacrolimus e receptor de doador vivo. / Introduction: Non-adherence to immunosuppressive treatment in renal transplant is an obstacle to achieving an optimal allograft performance. The study of non-adherence may indicate the true extent of this behavior and its risk factors, to plan intervention strategies. Objective: To evaluate the prevalence and risk factors of non-adherence to immunosuppressive treatment in renal transplant recipient. Methodology: Cross-sectional study performed at Hospital de Clínicas de Porto Alegre with adult kidney transplant patients with at least one year of transplantation, selected and included between March and November 2010 on outpatient care. Non-adherence to immunosuppressants was assessed by self-report, dispensing of immunosuppressive, immunosuppressant blood levels and a combination of self-report and dispensing methods. An association of non-adherence with socio-demographic and clinical variables was verified. Statistical analysis used Chi-Square test, Student’s t-test, Mann-Whitney, Kappa, and generalized linear model for Poisson and normal distribution to calculate the Prevalence Ratio (PR). Including in multivariate analysis variables with p ≤ 0.15 in the univariate analysis. Values of p < 0.05 were considered significant. Results: We studied 288 patients with non-adherence prevalence of 61.8% in self-report, 58.7% in the dispensation; 29% in the immunosuppressant blood levels, and 37.4% in the combined method. Significant associations were found of nom-adherence and: non-white and younger (self-report); activity working, tacrolimus-treated and lower immunosuppressant levels patients (dispensation); recipients living donor transplants and higher time after transplantation (blood levels); patient non-white, younger and lower immunosuppressive levels (combined method). On multivariate analysis, in the method self-reported, white (PR = 0.81) and additional year of age (PR = 0.986) were identified as protective factors for the prevalence of non-adherence. In the methods of dispensing, blood levels and combined method the PR for non-adherence was statistically significantly higher in patients using tacrolimus (PR = 1.347), recipient of living donor transplant (PR = 1.166) and non-white (PR = 1.39) respectively. Conclusion: High prevalence of non-adhesion with higher risk in younger, non-white, and live donor recipient patients was found.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012 / Fundos para pesquisa em Cirurgia Plástica da Universidade de Pittsburgh / Introdução: Os mecanismos regulatorios desempenham papel importante na manutencao da tolerancia no transplante. pretende-se, neste estudo, desenvolver uma estrategia de tolerancia baseada na associacao de tacrolimo com rapamicina. Objetivo: Estudar efeitos de tacrolimo e rapamicina sobre as celulas T regulatorias em transplante composto de tecido alogeno. Metodos: O modelo foi de transplante composto de Ratos Brown-Norway para Lewis. Foram feitos 2 experimentos. Um para avaliar atividade reguladora dos tranplantes e outro para identificar o mecanismo de acao. No experimento 1 dividimos os ratos em 4 grupos, o experimental (tacrolimus do PO 0 ao 7 e rapamicina do PO 8 ao 21). Os outros tres: Rapamicina 21d, Tacrolimus 21d e Ambas 21d. Amostras de sangue foram colhidas para citometria de fluxo ao PO 21, PO 45. Em segundo experimento, animais divididos em 4 grupos com terapeutica semelhante ao primeiro, foram submetidos ao mesmo procedimento com coleta de sangue para a medicao dos niveis Idoleamina 2,3di-oxigenase no PO 0,5,10,15,21. Resultados: No grupo experimental nao houve rejeicao no PO 150 de 66% dos animais, em dois grupos houve 100% de rejeicao e no ultimo 75% de rejeicao. No grupo experimental houve significativo aumento nos niveis de celulas T reguladoras no PO 45 em comparacao ao PO 21. No segundo experimento, observou-se uma baixa atividade da IDO no PO 5 em animais recebendo exclusivamente tacrolimus. Conclusao: A associacao de tacrolimus e rapamicina de forma sequencial leva a um aumento de celulas T regulatoria e a tolerancia, bem como uma reduzida atividade da IDO no PO 5 em individuos recebendo exclusivamente tacrolimus / Introduction: Regulatory mechanisms play an important role on manteinance of tolerance in transplant. The intend of this study is develop a strategy for tolerance besed in the sequential association of Tacrolimus and Rapamycin. Aim: Study the efects of Tacrolimus and Rapamycin on T regulatory cells in Composite allotransplantation. Methods: The model was hind limb transplant from Brown-Norway to Lewis rats. 2 experiments were made. One to evaluate regulatory activity of transplants and another to identify its mechanism of action. On experiment 1 rats were divided in 4 groups, the experimental (Tacrolimus from POD 0 to 7 and Rapamycin from POD 8 to 21). The other 3: Rapamycin 21d, Tacrolimus 21d and both 21d. Blood samples were collected for flow cytometry on POD 21 and 45. In a second experiment animals divided in 4 groups with similar therapeutics than experiment 1, submited to the same procedure, with collect of blood samples to measure the levels of Idoleamine 2,3dioxigenase on POD 0,5,10,15,21.. Results: On experimental group there was not rejection no POD 150 of 66% of the animals, in two groups 100% rejected and in the last 75% rejected. In the experimental group was a significant increase of T regulatory cells on POD 45 comparing to POD21. ON second experiment was observed a low activity of IDO on POD 5 in animals receiving exclusevily Tacrolimus. Conclusion: The association of Tacrolimus and Rapamycin sequentialy leads to an increase of T regulatory and to tolerance and reduced activity of IDO on POD 5 of animals receiving exclusevily Tacrolimus as well. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-08-11T12:37:22Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) danielly_sequeira_ipec_mest_2012.pdf: 2424681 bytes, checksum: ed24d6708879c54afddd527d203840cd (MD5) danielly_sequeira_ipec_mest_2012.pdf.txt: 173996 bytes, checksum: ecd8de971059c558c0dce338c325180f (MD5) danielly_sequeira_ipec_mest_2012.pdf.jpg: 1397 bytes, checksum: c17355da56b89d0e6c266d9afe07e708 (MD5) Previous issue date: 2014-05-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Paecilomyces lilacinus é um fungo filamentoso, hialino, assexuado e agente causal da hialohifomicose. Esse fungo é considerado um patógeno emergente e oportunista capaz de infectar crianças, adultos imunossuprimidos, como também imunocompetentes. O presente trabalho objetivou estudar a resposta à infecção, in vivo, de camundongos C57BL/6, imunocompetentes e imunossuprimidos, frente a P. lilacinus. Dois isolados de origem humana do fungo foram avaliados quanto à virulência, tendo como critérios, sinais clínicos, sobrevivência, índice esplênico, lesões histológicas nos animais e reisolamento de células fúngicas viáveis do baço. Além disso, o perfil imunológico dos animais foi feito através da quantificação de células T CD4+ e CD8+ esplênicas, seus perfis de marcadores de ativação e memória em linfócitos T (CD25, CD69 e CD62L), e da avaliação de anticorpos no plasma contra epítopos de P. lilacinus Os resultados demonstraram que ambos os isolados fúngicos apresentaram características morfológicas compatíveis com a espécie e foram capazes de infectar os animais do grupo dos imunocompetentes e provocar a doença, com manifestações clínicas, no modelo imunossuprimido. Um dos isolados, proveniente de lesão cutânea, foi considerado mais virulento, pelos critérios avaliados, que o isolado proveniente de lesão subcutânea na região da tíbia. A avaliação imunológica mostrou diferenças na cinética de expressão de moléculas de ativação pelos linfócitos CD4+ e CD8+ dos animais inoculados com os dois isolados, sendo mais recente para o isolado da região tibial, e tardia para o isolado de pele Foi possível também verificar que esse padrão se mantinha nos animais imunossuprimidos, mas com um grau de ativação aparentemente mais elevado do que nas células obtidas dos animais imunocompetentes. Com relação a avaliação da produção de anticorpos específicos contra o fungo, nossos dados sugerem que a imunossupressão não exerceu influência na resposta humoral, visto que ambos os grupos de animais, imunocompetentes e imunossuprimidos, inoculados com o fungo foram capazes de produzir anticorpos IgG específicos anti-P. lilacinus / Paecilomyces lilacinus is a filamentous, hyaline, asexual fungus and causal agent of hyalohyphomycosis. This fungus is considered an emergent and opportunist ic pathogen , to be able to infect child ren and adults i mmunosuppressed, as well as immunocompetent ones . This study investigated the response to infection, in vivo , of the immunocompetent and i mmunosuppressed C57BL/6 mice inoculated with P. lilacinus . Two strains fro m human lesions were evaluated regarding virulence using the following criteria: clinical signs, survival, splenic index, histopathological lesions and the number of viable fungal cells recovered from spleen. Besides, the immunological profile of the mice was done by quantification of CD4+ and CD8+ on splenocytes and their profiles of activation markers on T lymphocytes (CD25 and CD69), as well as memory markers (CD62L), and evaluation of antibodies in plasma against P. lilacinus epitopes . The results demon strated that both strains showed morphological features compatible with the species and were able to infect the immunocompetent group of animals and cause disease, with clinical manifestations, in the immuno supressed model. One of the strains from skin les ions was considered to be more virulent than the strain from subcutaneous lesion of the tibia area . The immunological evaluation showed differences in the activation molecules expression in CD4+ and CD8+ T cells obtained from animals infected with each fu ngal strain. Activation happened earl ier in cells from the tibia strain infected animals, when compared to those obtained from animals infected with the skin isolated strain. We were also able to observe the same pattern of expression in cells obtained f rom Immunosuppressed infected animals, although the degree of activation seem to be much higher than those observed in the immunocompetent mice. It was also possible to suggest that the immunosuppression did not interfere in the humoral immune response, s ince both groups of the animals, immunocompetent and immunosuppressed, inoculated with the fungus were able to produce specific IgG anti - P. lilacinus antibodies .

Introdução: A dieta para neutropênicos foi desenvolvida para prevenir infecções por patógenos transmitidos por alimentos em pacientes com a imunidade comprometida pelo tratamento antineoplásico. Baseia-se no conceito hipotético que alguns alimentos possuem maior carga microbiana e seriam potencialmente danosos aos indivíduos neutropênicos. As restrições impostas pela dieta podem ocasionar deficiências de nutrientes. Objetivo: comparar a qualidade microbiológica e a composição nutricional de uma dieta padrão hospitalar com a dieta oferecida para pacientes pediátricos neutropênicos em um hospital de Porto Alegre, RS. Métodos: para a análise microbiológica, amostras de alimentos da dieta padrão (n=18) e da dieta para neutropênicos (n=18) foram coletadas no momento da entrega aos pacientes. Ambas as dietas foram produzidas sob cuidados de higiene e manipulação de alimentos preconizados pela legislação brasileira. As amostras foram testadas quanto à contaminação para E. coli, Salmonella sp., Bacillus cereus e Staphylococcus coagulase positiva. Para a análise da qualidade nutricional foi calculada a composição nutricional da alimentação oferecida ao longo de seis dias e a adequação das dietas de acordo com as recomendações estabelecidas. Foi calculada a composição nutricional da dieta padrão hospitalar e, para a dieta para neutropênicos foram consideradas duas versões: uma que permite frutas de casca grossa e outra estrita, sem nenhum alimento cru. Os resultados foram apresentados em média, desvio padrão e frequência. Para comparação entre variáveis categóricas dicotomizadas independentes foi aplicado o teste exato de Fisher. A comparação da composição nutricional das dietas foi realizada através da aplicação do teste t de Student para amostras independentes. Realizou-se o cálculo de razão de chances para contaminação microbiológica entre as dietas com intervalo de 95% de confiança. Resultados: das 36 amostras de alimentos analisadas quanto à contaminação por patógenos, 5 (13,89%) apresentaram contaminação microbiana acima do permitido, sendo 4 por Bacillus cereus e 1 por Staphylococcus coagulase positiva. Nenhuma amostra apresentou contaminação por Salmonella sp e E. Coli. Das contaminações microbiológicas, 3 foram provenientes da dieta para neutropênicos e 2 da dieta padrão livre, não havendo diferença entre as dietas analisadas (p=1.00). A razão de chances para contaminação microbiológica entre as dietas também não apresentou diferença (OR=0,62; IC95%= 0,05 – 6,35; p=0,63). A dieta para neutropênicos estrita apresentou menor quantidade de vitamina C (p=0,01) e fibras (p=0,05) quando comparada à dieta padrão. Conclusão: a dieta padrão hospitalar apresentou-se similar em relação à carga microbiana e com maior conteúdo nutricional comparativamente à dieta para neutropênicos no hospital em que foi realizado o estudo. / Introduction: The neutropenic diet was developed to prevent food-related infections in patients with impaired immunity caused by oncologic treatment. It is based on the hypothetical theory that some foods carry greater microbe content that would be potentially harmful for neutropenic subjects. The diet restrictions can lead to several nutrient deficiencies. Objective: the present study aimed to analyze and compare the microbiological profile and nutritional content of the regular and neutropenic diets offered to pediatric patients at a Hospital at Porto Alegre, RS. Methods: microbiological analyses of food samples from the general hospital diet (n=18) and neutropenic diet (n=18) served to pediatric patients were performed. It was investigated the contamination by E. coli, Salmonella sp., Bacillus cereus and coagulase-positive Staphylococcus. Nutritional content of the diets offered to the patients during a 6 day period were calculated to assess nutritional quality. For the neutropenic diet it was considered 2 versions: one that allowed fruits that can be peeled and one strict, with no raw foods. Data was described as mean, standard deviation and frequency. Fisher's exact test was applied for comparison between independent dichotomized categorical variables. Nutritional content comparison between the diets was assessed applying Student’s t test for independent samples. The odds ratio was calculated for microbiological contamination between diets with 95% confidence interval. Results: for the microbiologic content 36 food samples were analyzed, 5 (13,89%) presented microbiologic contamination above recommended limits, 4 by Bacillus cereus and 1 by coagulase-positive Staphylococcus. Contamination by Salmonella sp e E. Coli were absent in all samples. Regarding the microbiologic contamination, 3 food samples were from the neutropenic diet and 2 from the general hospital diet, with no statistical differences between the diets (p=1.00). The odds ratio for microbiological contamination between the diets did not presented differences (OR=0,62; 95%CI=0,05 – 6,35; p=0,63). The strict neutropenic diet had lower content of vitamin C (p=0,01) and fiber (p=0,05) when compared to general hospital diet. Conclusion: the general hospital diet was similar in terms of microbiological content and with greater nutritional content when compared to the neutropenic diet produced in the hospital where the study was conducted.