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EL PERSONAJE INFECTADO: SU RELACIÓN CON LA MULTITUD Y LA METÁFORA EN LAS PELÍCULAS DE DAVID CRONENBERGMolina Pardo, Vicente 06 November 2017 (has links)
Aquesta tesi estudia les representacions que Cronenberg fa dels individus, dels grups d'infectats i de la seua forma d'exhibir-los.
Les subjectivitats aplicades a les multituds mitjançant l'ús de metàfores i constructes varis, són eines que des de fa molt de temps són descrites, aplicades i estudiades en els mitjans argumentatius que coneixem (continguts informatius, documentals, socio-lògics, discursos filosòfics, etc.). L'objectiu principal d'aquesta tesi serà esbrinar si les problemàtiques que estudiem en aquests mitjans argumentatius, en relació a la psico-logia de les masses i les metàfores d'infectats, són aplicables també a les pel·lícules de David Cronenberg. David Cronenberg va rodar algunes de les seues pel·lícules quan en televisió es construïen els primers públics i es planificaven els primers directes, així els seus personatges infectats es combinen sovint amb aparicions de masses o multituds. La reflexió entorn als imaginaris construïts per David Cronenberg al voltant d'aquests discursos és un altre dels principals objectius d'aquesta tesi. Hem emprat una metodologia qualitativa i hermenèutica amb la finalitat de combinar aquests tres elements funcionant conjuntament: infectats, multitud i metàfora.
Si totes les regles del món argumentatiu sobre la problemàtica de la representació de masses i la seua metàfora no són suficients per a comprendre millor la ficció de David Cronenberg cal imaginar una evolució lògica del mercat dels infectats en el marc del gènere de terror. El terrorífic ha d'evolucionar a pitjor. L'elecció d'un determinat tipus de massa i la relació social d'infectats seria una eina més per a millorar el mètode de la ponderació de mals, s'usarien indiscriminadament les novetats o les metàfores tecno-lògiques associades als coneixements del moment per a construir el pitjor de mals imaginables. A més, totes les narracions d'infectats i multituds arrosseguen metàfores per inèrcia, la cobertura que el director fa de nocions tan qualitatives i subjectives com a massa, poble, públic, multitud o munió, són combinades amb el concepte d'infecció sempre. Bàsicament, David Croneberg crea obstacles que trunquen les carreres de moltes d'aqueixes metàfores que arribaven immaculades fins als nostres dies. A més a més, David Cronenberg no pren partit, no intenta argumentar ni molt menys convén-cer, això no obstant, els recursos dels mitjans argumentatius estan ací. David Cronen-berg mostra sistemàticament invertits tots els constructes multitud-metàfora-infectats als quals estem acostumats en la narrativa tradicional, queden al descobert les possi-bles intencions ocultes de l'ús de la metàfora perdent així tota superioritat qualitativa possible. / Esta tesis estudia las representaciones que David Cronenberg hace de los individuos o grupos de infectados, así como su forma de exhibirlos.
Las subjetividades aplicadas a las multitudes mediante el uso de metáforas y construc-tos varios son herramientas que desde hace mucho tiempo vienen siendo descritas, aplicadas y estudiadas en los medios argumentativos que conocemos (contenidos informativos, documental, sociología, discurso filosófico o antropológico). La refle-xión relativa a los imaginarios sociales creados por la narrativa es un campo de pen-samiento fecundo y esperamos tenga un prometedor futuro.
El objetivo principal de esta tesis será averiguar si las problemáticas que estudiamos en estos medios argumentativos, relativa a la psicología de las masas y las metáforas de infectados, son aplicables también a las películas de David Cronenberg, este direc-tor canadiense rodó algunas de sus películas cuando en televisión se construían los primeros públicos y se planificaban los primeros directos, sus personajes infectados se combinan a menudo con apariciones de masas o multitudes. La reflexión en torno a imaginarios construidos por David Cronenberg en torno a estos discursos es otro de los principales objetivos de esta tesis. Hemos empleado una metodología cualitativa y hermenéutica con el fin de combinar estos tres elementos funcionando conjuntamente: infectados, multitud y metáfora.
Si todas las reglas del mundo argumentativo sobre la problemática de la representa-ción de masas y su metáfora no son suficientes para comprender mejor la ficción de David Cronenberg, cabe imaginar una evolución lógica del mercado de los infectados en el marco del género de terror. Lo terrorífico debe evolucionar a peor. La elección de un determinado tipo de masa y relación social de infectados sería una herramienta más para mejorar el método de la ponderación de males, se usarían indiscriminadamente las novedades o metáforas tecnológicas asociadas a los conocimientos del momento para construir el peor de males imaginables. Además, todas las narraciones de infectados y multitudes arrastran metáforas por inercia, la cobertura que el director hace de nociones tan cualitativas y subjetivas como masa, pueblo, público, multitud o muchedumbre, son combinadas con el concepto de infección siempre. Básicamente, David Croneberg crea obstáculos que truncan las carreras de muchas de esas metáforas que llegaban inmaculadas hasta nuestros días. Además, David Cronenberg no toma partido, no intenta argumentar ni mucho menos convencer, sin embargo, los recursos de los medios argumentativos están ahí. David Cronenberg muestra sistemáticamente invertidos todos los constructos relacionados con multitud- metáfora- infectados a los que estamos acostumbrados en la narrativa tradicional, quedan al descubierto las posibles intenciones ocultas del uso de la metáfora perdiendo así toda superioridad cualitativa posible. / This thesis studies the representations that David Cronenberg makes of the infected individuals or groups, as well as their way of exhibiting them.
The subjectivities applied to the multitudes through the use of metaphors and several constructs are tools that have long been described, applied and studied in the argumentative media we know (information content, documentary, sociology, philosophical discourse, anthropological, etc.) . The reflection on the social image created by the narrative is a productive field of thought and hopefully have a promising future.
The main objective of this thesis will be to find out if the problems that we study in these argumentative meanings, the one related to the psychology of the masses and the metaphors of infected, also apply to the films of David Cronenberg, this Canadian director filmed some of his movies when on television the first public viewings were built and the first direct ones were planned, their infected characters are often combined with the appearance of masses or multitudes. The reflection around images built by David Cronenberg around these speeches is another of the main objectives of this thesis. We have used a qualitative and hermeneutical methodology in order to combi-ne these three elements working together: infected, multitude and metaphor.
If all the rules of the argumentative world on the problem of mass representation and its metaphor are not enough to better understand the fiction of David Cronenberg it can imagine a logical evolution of the market of the infected in the framework of the horror genre. The terrifying must evolve to worse. The choice of a certain type of mass and social relation of infected would be one more tool to improve the method of weighing evils, would be used indiscriminately the news or technological metaphors associated with the knowledge of the moment to construct the worst imaginable evils. In addition, all narratives of infected and multitudes drag metaphors by inertia, the coverage that the director makes of such qualitative and subjective notions as a mass, people, public, crowd or mobs, are always combined with the concept of infection. Basically, David Croneberg creates obstacles that cut across the careers of many of those metaphors that came immaculate to the present day. In addition, David Cronen-berg does not take sides, does not try to argue much less convince, however, the re-sources of the argumentative media are there. David Cronenberg systematically reveals all the multi-metaphor-infected constructs to which we are accustomed in the traditional narrative, are exposed the possible hidden intentions of the use of the me-taphor thus losing any qualitative superiority possible. / Molina Pardo, V. (2017). EL PERSONAJE INFECTADO: SU RELACIÓN CON LA MULTITUD Y LA METÁFORA EN LAS PELÍCULAS DE DAVID CRONENBERG [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/90551 / TESIS
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Estudio microbiológico en implantes inmediatos postexodoncia en alvéolos con lesiones periapicalesLuchetti, César Gabriel January 2015 (has links)
La colocación inmediata de implantes dentales postexodoncia en alvéolos infectados sigue siendo un tema controvertido en implantología oral.
Objetivos:
Evaluar los resultados de la colocación inmediata de implantes dentales en alvéolos infectados con respecto al nivel del hueso marginal y la estabilidad del implante en comparación con implantes colocados en los alvéolos sanos y evaluar un procedimiento de limpieza a fin de eliminar los microorganismos presentes en estas situaciones.
Material y Métodos:
Fueron seleccionados cincuenta (50) pacientes con dientes con infecciones crónicas que requieren extracción y recibieron 50 implantes dentales. (Grupo E). Todos los casos fueron dientes unirradiculares en el maxilar superior.
Se evaluaron los aspectos microbiológicos y el procedimiento de limpieza tomando una secuencia de muestras para cultivos de la siguiente manera: 1-Muestra del fluido crevicular. 2- Muestra luego de la extracción del diente. 3- Muestra después del desbridamiento utilizando curetas manuales y 4- Muestra después de aplicar ácido cítrico al 2% durante 1 minuto.
Después de esto, los implantes fueron colocados y se tomaron Valores Periotest (VPT) iniciales y el nivel de hueso marginal. A los 4 meses (segunda fase), antes de iniciar la parte protésica, se registraron nuevos valores Periotest y nivel de hueso marginal. Otros datos se obtuvieron a los 12 y 24 meses.
Cincuenta implantes colocados en alvéolos sanos en cincuenta pacientes sirvieron como control. (Grupo C)
Resultados:
Se produjo un fracaso en cada grupo durante el período de evaluación. Los valores Periotest (VPT) promedio en el grupo E fueron: Inicial: -3,19 (0,66), 2da Fase: -3,77 (0,29), 12 meses: -3.89 (0,15) y 24 meses: -3,95 (0,12). Mientras que los valores Periotest promedio en el grupo E fueron: Inicial: -3,25 (0,90), 2da Fase: -3,91 (0,72), 12 meses: -3,99 (0,23) y 24 meses: -4,03 (0,27). No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos.
El nivel óseo marginal fue considerado cero al inicio, con el fin de evaluar luego los cambios. El nivel óseo promedio, en milímetros, en el grupo E fue: 2da Fase: -0,21 (0,12), 12 meses: -0,52 (0,35) y 24 meses: -0,61 (0,24). El nivel óseo promedio, en milímetros, en el grupo C fue: 2da Fase: -0,18 (0,07), 12 meses: -0,55 (0,17) y 24 meses: -0,67 (0,23).
No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos.
Los microorganismos más comúnmente encontrados fueron Streptococos grupos C, H (S. sanguis) y K (S. salivarius), Staphylococcus aureus, Bacteroides forsythus and Fusobacterium nucleatum. También se observó Candida albicans en algunas muestras.
Los antimicrobianos más eficaces fueron ciprofloxacina, amoxicilina más ácido clavulánico y metronidazol. Fluconazol fue el antimicótico más eficaz.
El desbridamiento manual con curetas no fue capaz de producir una limpieza adecuada del alveolo. Sin embargo, la misma mejoró después de la aplicación de ácido cítrico al 2% como se demostró en los cultivos.
Conclusiones:
Dentro de las limitaciones del presente estudio, la colocación de implantes inmediatos en alvéolos infectados podría ser considerado un procedimiento predecible. No hubo diferencias estadísticamente significativas en comparación con los implantes colocados en los alvéolos sanos. El desbridamiento manual por sí solo no fue suficiente para realizar una limpieza adecuada. En este estudio, el ácido cítrico al 2% mostró resultados interesantes en cuanto a control microbiológico.
Los Valores Periotest mejoraron durante los 2 años de seguimiento. El nivel del hueso marginal mostró una cierta pérdida, pero esta fue similar en ambos grupos.
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Testes de elisa e vírus-neutralização na detecção de anticorpos contra o vírus da diarréia viral bovina no soro e leite / Performance of virus neutralizing test and elisa for detection of antibodies and identification of herds with bovine viral diarrhea virus infectionSturza, Diego Artemio Franco 02 June 2011 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The success of control/eradication programs of bovine viral diarrhea virus (BVDV)
infection necessarily includes the identification and elimination of persistently infected (PI)
animals. Since these animals continuously shed virus, the prevalence and titers of antibodies
in herds with PI animals are often high. Hence, bulk milk and serum samples were subjected
to two serological tests in order to establish the most appropriate for herd screening. For this,
767 samples of bulk milk and 701 serum samples were analyzed by a commercial ELISA kit
and by virus-neutralization test (VNT). The toxic effects of milk for cell cultures on VNT was
abolished by increasing the final volume of medium during the incubation. Among the tested
milk samples, 177 and 139 were positive in VNT and ELISA, respectively. Thus, the VNT
showed a sensitivity (Se) of 76.8% and a specificity (Sp) of 99.5%. The Kappa index (k) was
0.82, demonstrating an excellent agreement between the two techniques. The analysis of the
correlation coefficient between the absorbance values in ELISA (OD) and antibody titers in
positive samples in VNT showed a moderate positivity (r = 0.57) with p<0.05. In serum
samples, 442 and 602 were positive in ELISA and VNT, respectively. This resulted in a VNT
sensitivity (Se) of 92.7% and specificity (Sp) of 27.1%, with (k) of 0.23, reflecting a weak
agreement between the two techniques. The correlation coefficient between OD and antibody
titers showed a moderate positivity (r = 0.54) with p<0.05. Testing of both milk and serum
revealed a considerable number of samples with high VN titers and low ODs. On the other
side, many samples with low VN titers showed high ODs in the ELISA. Based on the above
mentioned results, and assuming that the presence of PI animals usually results in VN titers ≥
80, we conclude that the VNT is more appropriate to conduct herd screening in bulk milk
when the objective is to detect herds with high titers of neutralizing antibodies, potentially
harboring PI animals. / O sucesso nas estratégias de controle e erradicação do vírus da diarréia viral bovina
(BVDV), passa pela identificação e eliminação dos animais persistentemente infectados (PI).
Como esses animais excretam continuamente o vírus, a prevalência e os títulos de anticorpos
nos rebanhos que os possuem são geralmente altos. Por isso, amostras de tanques coletivos de
leite são frequentemente utilizadas na triagem de rebanhos. No presente trabalho, amostras
coletivas de leite e amostras de soro foram submetidas a duas técnicas sorológicas, a fim de
estabelecer a mais adequada para esta finalidade. Para tal, 767 amostras coletivas de leite e
701 amostras de soro bovino foram testadas com um kit ELISA indireto (teste padrão) e pela
técnica de vírus-neutralização (VNT). Devido aos efeitos tóxicos do leite sobre o cultivo
celular, a VNT foi adaptada, o que consistiu no aumento do volume final na etapa de
incubação com os cultivos celulares. No teste do leite, foram positivas 177 e 139 amostras, no
ELISA e na VNT, respectivamente. Com isso, a VNT adaptada apresentou uma sensibilidade
(Se) de 76,8% e uma especificidade (Sp) de 99,5%. O índice Kappa (k) foi de 0,82,
demonstrando uma ótima concordância entre as duas técnicas. A análise do coeficiente de
correlação entre os valores de absorbância no ELISA (OD) e os títulos de anticorpos na VNT
nas amostras positivas, demonstrou uma correlação moderada positiva (r = 0,57) com p<0,05.
No teste do soro, foram positivas 442 e 602 amostras no ELISA (teste padrão) e na VNT,
respectivamente. Observou-se uma (Se) de 92,7% e (Sp) de 27,1%, com (k) de 0,23,
demonstrando uma fraca concordância entre as duas técnicas. O coeficiente de correlação
entre OD e os títulos de anticorpos demonstrou uma correlação moderada positiva (r = 0,54)
com p<0,05. Observaram-se nos testes do leite e do soro, várias amostras com títulos altos na
VNT apresentando ODs baixas a medianas. Por outro lado, várias amostras com títulos
neutralizantes baixos apresentaram ODs altas. Baseado nos resultados, e partindo do
pressuposto que a presença de animais PI reflete-se em títulos neutralizantes geralmente ≥ 80,
conclui-se que a VNT é mais adequada para a realização de triagem em amostras coletivas de
leite quando objetiva-se detectar rebanhos com altos títulos de anticorpos neutralizantes,
possíveis portadores de animais PI.
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ESTUDO DA INFECÇÃO E DOENÇA NO CÃO (Canis familiares) POR Leishmania (Leishmania) chagasi EM UMA ÁREA ENDÊMICA NA ILHA DE SÃO LUÍS-MARANHÃO, BRASIL / STUDY OF INFECTION AND DISEASE IN DOG (Canis family) BY Leishmania (Leishmania) chagasi in an endemic area on the island of St. Louis-Maranhão, BrazilGarcia, Arnaldo Muniz 28 January 2004 (has links)
Made available in DSpace on 2016-08-19T17:47:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Arnaldo Muniz Garcia.pdf: 655892 bytes, checksum: f9f5eda07bd90764780889b563437e7f (MD5)
Previous issue date: 2004-01-28 / A cohort prospective study was carried with 350 dogs of various ages at localities Vila Nova
and Bom Viver in the municipality of Raposa-MA, from March of 2002 to December of 2003.
The objective is to avaluate the behavior of L. (L.) chagasi infection. The chosen areas are a
result of the disordered occupation process, contributing with 60% of LVH and LVC cases that
were notified by the municipal district. At first, the procedure was made by doing the
populational inquiry the two places by means of canine census. The study was processed in
two phases, with interval of 7 months among the same ones. In the first phase, 350 dogs
participated of the study and by a visiting process a questionnaire with epidemiological,
demographical, clinical and behavioral data about the dogs was applied. The testing of
Montenegro intradermoreaction (IDRM) was made with the antigen of L. (L.) amazonensis
and adapted for dogs, serological examination testing Enzyme Linked Immunsorbent Assay
(ELISA), clinical e parasitical were also made in positive animals to IDRM and/or ELISA
tests. Starting from clinical and immunological parameters already referred in literature, were
defined four diagnoses categories, classifying the dogs according to its evolutionary course in
not infected dogs (195), infected (100), Oligosymptomatic sick (41) and polysymptomatic sick
(14). The second phase was accomplished with application of the same tests of the first phase
with 230 dogs, that reduction was due in function of the losses (36,28%) caused by death,
address change and missing. The positive dogs for an or both tests were accompanied
bimonthly with reevaluation of the clinical exams. The initial and final prevalence and
incidence of the infection were 8,57%, 6,52% and 8% for IDRM; by ELISA 39,71%, 32,6%
and 16%; for ELISA and IDRM 44,29%, 37,39% and 21,6% respectively. In what the clinical
form refers, the dogs were classified in the following way: infected (28,57%),
oligosymptomatic sick (11,71%) and polysymptomatic sick (4%). in agreement with the
statistical analyses not adjusted and adjusted, the variable age, race, secondary lesion, physical
condition and place were associated the infection for L. (L.) chagasi. The infection for L. (L.)
chagasi was present in 52,97% of the canine population of Vila Bom Viver and 34,55% in
Vila Nova, demonstrating that in endemic area happens the intense and active circulation of
Leishmania. / Realizou-se um estudo de coorte prospectivo com 350 cães com idades variadas nas
localidades de Vila Nova e Bom Viver no município da Raposa-MA no período de
março de 2002 a dezembro de 2003, com o objetivo de avaliar o comportamento da
infecção por L. (L.) chagasi. As áreas escolhidas são resultantes do processo de
ocupação desordenada, contribuindo em média com 60% dos casos de LVH e LVC
notificados pelo município. Procedeu-se inicialmente com o inquérito populacional
nas duas localidades por meio do censo canino. O estudo processou-se em duas
fases, com intervalo de 7 meses entre as mesmas. Na primeira fase participaram do
estudo 350 cães, e por meio de visita casa/casa aplicou-se um questionário com
dados epidemiológicos, demográficos, clínicos e comportamentais dos cães.
Realizou-se o teste de intradermorreação de Montenegro (IDRM) com antígeno de
L. amazonensis e adequado para cães, teste sorológico Enzyme Linked
Immunsorbent Assay (ELISA), clínico e parasitológico dos animais positivos para os
testes IDRM e/ou ELISA. A partir de parâmetros clínico e imunológico já referidos
na literatura, foram definidas quatro categorias de diagnóstico, classificando os cães
segundo o seu curso evolutivo em cães não infectados (195), infectados (100),
doente oligossintomático (41) e doente polissintomático (14). A segunda fase foi
realizada com aplicação dos mesmos testes da primeira fase com 230 cães, essa
redução deveu-se em função das perdas (36,28%) ocasionadas por óbitos, mudança
de endereço e desaparecidos. Os cães positivos para um ou ambos os testes foram
acompanhados bimestralmente com reavaliação dos exames clínicos. A prevalência
inicial, final e incidência da infecção foram 8,57%, 6,52% e 8% por IDRM; por
ELISA 39,71%, 32,6% e 16%; por ELISA e IDRM 44,29%, 37,39% e 21,6%
respectivamente. No que se refere a forma clinica, os cães foram classificados da
seguinte forma: infectados (28,57%), doente oligossintomático (11,71%) e doente
polissintomático (4%). De acordo com as análises estatísticas não ajustada e ajustada,
as variáveis idade, raça, lesão secundária, condição física e localidade foram
associadas a infecção por L. (L.) chagasi. A infecção por L. (L.) chagasi estava
presente 52,97% da população canina de Vila Bom Viver e 34,55% em Vila Nova,
demonstrando que em área endêmica ocorre a intensa e ativa circulação da
Leishmania.
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Soro de animais submetidos à sépsis grave ou infectados experimentalmente com o Trypanosoma cruzi induz perda da distrofina em culturas de cardiomiócitos: o papel da ativação e bloqueio da calpaína / Serum from animals subjected to severe sepsis or experimentally infected with Trypanosoma cruzi induces dystrophin loss in cardiomyocytes cultured: role of calpain activation and blockedMalvestio, Lygia Maria Mouri 19 February 2014 (has links)
O complexo distrofina-glicoproteínas associadas (DGC) localiza-se no sarcolema das células musculares esqueléticas e cardíacas e tem como função principal proporcionar ligação mecânica entre o citoesqueleto intracelular e a matriz extracelular. Estudos prévios realizados em nosso laboratório, focalizando o complexo DGC, demonstraram perda de proteínas importantes desse complexo. As situações avaliadas anteriormente foram: infecção experimental por Trypanosoma cruzi (T. cruzi) e sépsis experimental. Em ambas as situações verificou-se a perda da distrofina acompanhada por disfunção contrátil e aumento nos níveis da calpaína, protease dependente de cálcio implicada na proteólise da distrofina. Todavia, o mecanismo responsável pela ativação das calpaínas e proteólise da distrofina na infecção experimental por T. cruzi e na sépsis experimental não está totalmente definido. O objetivo desse trabalho foi avaliar in vitro o mecanismo responsável pela ativação das calpaínas nas culturas de cardiomiócitos desafiadas com o soro dos animais infectados experimentalmente com T. cruzi ou com o soro dos animais submetidos à sépsis grave experimental. Camundongos C57BL/6 foram submetidos à sépsis grave ou infectados com a cepa Y de T. cruzi. No pico de expressão das citocinas pró-inflamatórias, 12 dias após inoculação do parasito ou 6 horas após a indução da sépsis, o sangue foi coletado e o soro separado. Corações de camundongos recém-nascidos foram isolados para o cultivo dos cardiomiócitos. No quinto dia após o início das culturas, as células foram estimuladas com 10% do soro de animais infectados com T. cruzi ou o soro de animais submetidos à sépsis grave durante 24 horas. Após, as células foram coletadas para análises de Western blotting e imunofluorescência para verificar a expressão da distrofina e calpaína-1. Avaliou-se também, por imunofluorescência, a expressão do NF-B. Os cardiomiócitos foram estimulados e tratados com o dantrolene, inibidor da liberação de cálcio do retículo sarcoplasmático, ou ALLN, inibidor da calpaína-1, e após coletados para verificar a expressão da distrofina e calpaína-1 por Western blotting e imunofluorescência. Nossos resultados mostraram uma redução significativa na expressão da distrofina com desarranjo das miofibrilas contráteis e formação de bolhas citoplasmáticas, além de um aumento nos níveis da calpaína-1 e do NF-B. O tratamento com dantrolene nas culturas estimuladas com o soro de animais infectados experimentalmente com T. cruzi ou com o soro dos animais submetidos à sépsis grave, recuperou a expressão da distrofina e reduziu os níveis da calpaína-1. O tratamento com ALLN nos cardiomiócitos estimulados com o soro de animais infectados experimentalmente com T. cruzi recuperou a expressão da distrofina e não alterou os níveis da calpaína-1. Nas culturas estimuladas com o soro dos animais submetidos à sépsis grave, o tratamento com o ALLN recuperou a expressão da distrofina e reduziu os níveis da calpaína-1. Nossos resultados demonstraram que citocinas pró-inflamatórias presentes no soro dos animais infectados experimentalmente com T. cruzi como também no soro dos animais submetidos à sépsis grave induziriam um aumento no influxo de cálcio com consequente ativação das calpaínas, as quais atuariam na ativação do NF-B e na degradação da distrofina. Esse mecanismo poderia ser responsável pela proteólise da distrofina cardíaca observada na infecção experimental por Trypanosoma cruzi como também sépsis experimental. Mais estudos são necessários para elucidar este mecanismo, principalmente em relação a inibidores dos canais de cálcio, das citocinas pró-inflamatórias e das calpaínas, com o objetivo de fornecer novas vias de intervenção na prevenção de alterações cardíacas observadas na doença de Chagas e na sépsis. / The dystrophin-glycoprotein complex (DGC), located in the sarcolemma of cardiac and skeletal muscle cells and concentrated along the plasma membrane in costameric structures provides a framework that connects the intracellular cytoskeleton to the extracellular matrix. Previous studies from our laboratory clearly demonstrated disruption of DGC proteins in experimentally-induced T. cruzi infection and experimental sepsis. Both situation presented dystrophin disruption associated with contractile dysfunction and increased calpain levels, calcium dependent protease responsible for dystrophin proteolysis. However, the mechanism responsible for calpain activation and dystrophin proteolysis in experimentally-induced T. cruzi infection and experimental sepsis is not totally understood. The aim of this study was to evaluate in vitro the mechanism responsible for calpain activation in cultured cardiomyocytes challenged with serum from animals experimentally infected with T. cruzi or subjected to severe sepsis. Mice C57BL/6 were subjected to sepsis induction or infected with Y strain from T. cruzi. At the peak of proinflammatory cytokines expression, 12 days after parasite inoculation or 6 hours after sepsis induction, the blood was collected and the serum separated. Hearts from newborn mice were isolated for culture of cardiomyocytes. After 5 days of incubation, the cardiac cells were stimulated with 10% of serum from animals experimentally infected with T. cruzi or subjected to severe sepsis during 24 hours, and collected for Western blotting and immunofluorescence analysis to verify dystrophin and calpain-1 expression. The expression of NF-B was evaluated by immunofluorescence. The treatments with dantrolene, inhibitor of calcium release from sarcoplasmic reticulum, or ALLN, calpain-1 inhibitor, were performed in cultured cardiomyocytes stimulated during 24 hours with serum from animals infected with T. cruzi or subjected to severe sepsis, and dystrophin and calpain-1 expression were analyzed by Western blotting and immunofluorescence. Our results demonstrated loss of dystrophin associated with myofibers derangement and presence of cytoplasmic blebs as well increase of calpain-1 and NF-B expression. The dantrolene treatment in cultures stimulated with serum from animals infected with T. cruzi or subjected to severe sepsis recovey dystrophin expression and reduced calpain-1 levels. The ALLN treatment in cardiomyocytes stimulated with serum from animals infected with T. cruzi recovery dystrophin expression and preserved calpain-1 levels. In cultures stimulated with serum from animals subjected to severe sepsis, the ALLN treatment recovery dystrophin expression and decreased calpain-1 levels. Our results demonstrated that proinflammatory cytokines in serum from mice infected with T. cruzi or subjected to severe sepsis could induce an increase calcium influx with calpain activation, which could act in NF-B activation and dystrophin disruption. Possibly, this mechanism could be responsible to dystrophin proteolysis observed in experimentally-induced acute T. cruzi infection and experimental sepsis. More studies are needed to elucidate this mechanism, especially in relation to calcium channel blockers and inhibitors of pro-inflammatory cytokines and calpains, which may provide new routes for intervention to prevent cardiac damage in Chagas disease and sepsis.
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Soro de animais submetidos à sépsis grave ou infectados experimentalmente com o Trypanosoma cruzi induz perda da distrofina em culturas de cardiomiócitos: o papel da ativação e bloqueio da calpaína / Serum from animals subjected to severe sepsis or experimentally infected with Trypanosoma cruzi induces dystrophin loss in cardiomyocytes cultured: role of calpain activation and blockedLygia Maria Mouri Malvestio 19 February 2014 (has links)
O complexo distrofina-glicoproteínas associadas (DGC) localiza-se no sarcolema das células musculares esqueléticas e cardíacas e tem como função principal proporcionar ligação mecânica entre o citoesqueleto intracelular e a matriz extracelular. Estudos prévios realizados em nosso laboratório, focalizando o complexo DGC, demonstraram perda de proteínas importantes desse complexo. As situações avaliadas anteriormente foram: infecção experimental por Trypanosoma cruzi (T. cruzi) e sépsis experimental. Em ambas as situações verificou-se a perda da distrofina acompanhada por disfunção contrátil e aumento nos níveis da calpaína, protease dependente de cálcio implicada na proteólise da distrofina. Todavia, o mecanismo responsável pela ativação das calpaínas e proteólise da distrofina na infecção experimental por T. cruzi e na sépsis experimental não está totalmente definido. O objetivo desse trabalho foi avaliar in vitro o mecanismo responsável pela ativação das calpaínas nas culturas de cardiomiócitos desafiadas com o soro dos animais infectados experimentalmente com T. cruzi ou com o soro dos animais submetidos à sépsis grave experimental. Camundongos C57BL/6 foram submetidos à sépsis grave ou infectados com a cepa Y de T. cruzi. No pico de expressão das citocinas pró-inflamatórias, 12 dias após inoculação do parasito ou 6 horas após a indução da sépsis, o sangue foi coletado e o soro separado. Corações de camundongos recém-nascidos foram isolados para o cultivo dos cardiomiócitos. No quinto dia após o início das culturas, as células foram estimuladas com 10% do soro de animais infectados com T. cruzi ou o soro de animais submetidos à sépsis grave durante 24 horas. Após, as células foram coletadas para análises de Western blotting e imunofluorescência para verificar a expressão da distrofina e calpaína-1. Avaliou-se também, por imunofluorescência, a expressão do NF-B. Os cardiomiócitos foram estimulados e tratados com o dantrolene, inibidor da liberação de cálcio do retículo sarcoplasmático, ou ALLN, inibidor da calpaína-1, e após coletados para verificar a expressão da distrofina e calpaína-1 por Western blotting e imunofluorescência. Nossos resultados mostraram uma redução significativa na expressão da distrofina com desarranjo das miofibrilas contráteis e formação de bolhas citoplasmáticas, além de um aumento nos níveis da calpaína-1 e do NF-B. O tratamento com dantrolene nas culturas estimuladas com o soro de animais infectados experimentalmente com T. cruzi ou com o soro dos animais submetidos à sépsis grave, recuperou a expressão da distrofina e reduziu os níveis da calpaína-1. O tratamento com ALLN nos cardiomiócitos estimulados com o soro de animais infectados experimentalmente com T. cruzi recuperou a expressão da distrofina e não alterou os níveis da calpaína-1. Nas culturas estimuladas com o soro dos animais submetidos à sépsis grave, o tratamento com o ALLN recuperou a expressão da distrofina e reduziu os níveis da calpaína-1. Nossos resultados demonstraram que citocinas pró-inflamatórias presentes no soro dos animais infectados experimentalmente com T. cruzi como também no soro dos animais submetidos à sépsis grave induziriam um aumento no influxo de cálcio com consequente ativação das calpaínas, as quais atuariam na ativação do NF-B e na degradação da distrofina. Esse mecanismo poderia ser responsável pela proteólise da distrofina cardíaca observada na infecção experimental por Trypanosoma cruzi como também sépsis experimental. Mais estudos são necessários para elucidar este mecanismo, principalmente em relação a inibidores dos canais de cálcio, das citocinas pró-inflamatórias e das calpaínas, com o objetivo de fornecer novas vias de intervenção na prevenção de alterações cardíacas observadas na doença de Chagas e na sépsis. / The dystrophin-glycoprotein complex (DGC), located in the sarcolemma of cardiac and skeletal muscle cells and concentrated along the plasma membrane in costameric structures provides a framework that connects the intracellular cytoskeleton to the extracellular matrix. Previous studies from our laboratory clearly demonstrated disruption of DGC proteins in experimentally-induced T. cruzi infection and experimental sepsis. Both situation presented dystrophin disruption associated with contractile dysfunction and increased calpain levels, calcium dependent protease responsible for dystrophin proteolysis. However, the mechanism responsible for calpain activation and dystrophin proteolysis in experimentally-induced T. cruzi infection and experimental sepsis is not totally understood. The aim of this study was to evaluate in vitro the mechanism responsible for calpain activation in cultured cardiomyocytes challenged with serum from animals experimentally infected with T. cruzi or subjected to severe sepsis. Mice C57BL/6 were subjected to sepsis induction or infected with Y strain from T. cruzi. At the peak of proinflammatory cytokines expression, 12 days after parasite inoculation or 6 hours after sepsis induction, the blood was collected and the serum separated. Hearts from newborn mice were isolated for culture of cardiomyocytes. After 5 days of incubation, the cardiac cells were stimulated with 10% of serum from animals experimentally infected with T. cruzi or subjected to severe sepsis during 24 hours, and collected for Western blotting and immunofluorescence analysis to verify dystrophin and calpain-1 expression. The expression of NF-B was evaluated by immunofluorescence. The treatments with dantrolene, inhibitor of calcium release from sarcoplasmic reticulum, or ALLN, calpain-1 inhibitor, were performed in cultured cardiomyocytes stimulated during 24 hours with serum from animals infected with T. cruzi or subjected to severe sepsis, and dystrophin and calpain-1 expression were analyzed by Western blotting and immunofluorescence. Our results demonstrated loss of dystrophin associated with myofibers derangement and presence of cytoplasmic blebs as well increase of calpain-1 and NF-B expression. The dantrolene treatment in cultures stimulated with serum from animals infected with T. cruzi or subjected to severe sepsis recovey dystrophin expression and reduced calpain-1 levels. The ALLN treatment in cardiomyocytes stimulated with serum from animals infected with T. cruzi recovery dystrophin expression and preserved calpain-1 levels. In cultures stimulated with serum from animals subjected to severe sepsis, the ALLN treatment recovery dystrophin expression and decreased calpain-1 levels. Our results demonstrated that proinflammatory cytokines in serum from mice infected with T. cruzi or subjected to severe sepsis could induce an increase calcium influx with calpain activation, which could act in NF-B activation and dystrophin disruption. Possibly, this mechanism could be responsible to dystrophin proteolysis observed in experimentally-induced acute T. cruzi infection and experimental sepsis. More studies are needed to elucidate this mechanism, especially in relation to calcium channel blockers and inhibitors of pro-inflammatory cytokines and calpains, which may provide new routes for intervention to prevent cardiac damage in Chagas disease and sepsis.
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Pesquisa de anticorpos antitoxina diftérica e fenotipagem de linfócitos T em indivíduos soronegativos e soropositivos para o HIV-1 acompanhados no Instituto de Biologia do Exército Rio de JaneiroFrancisco Almeida Braga Speranza 21 September 2010 (has links)
Dados sorológicos sobre doenças imunopreveníveis são úteis para avaliar o sucesso de programas de imunização e a identificação de populações suscetíveis. Nos últimos 20 anos, as campanhas de imunização na infância foram eficientes no controle da difteria em muitos países. No entanto, uma taxa importante da população adulta continua suscetível à doença, uma vez que os níveis de anticorpos protetores reduzem com o passar do tempo. A infecção pelo HIV-1 leva a uma perda progressiva das funções imunes. Com o aumento da expectativa de vida dos pacientes HIV-1, e a maior incidência de infecções, torna-se importante a avaliação dos níveis de anticorpos antitoxina diftérica nestes grupos. O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis de anticorpos antitoxina diftérica e a contagem de linfócitos T (LT) em indivíduos infectados ou não pelo HIV -1, assistidos no Instituto de Biologia do Exército (IBEx). Investigamos a correlação entre níveis de anticorpos específicos e os seguintes parâmetros dos grupos de estudo: sexo, faixa etária, categoria militar ou civil; vacinação prévia contra difteria; número de LT CD4+ e CD8+; e entre os indivíduos HIV-1 positivos a correlação com a carga viral e a terapia com antirretrovirais potentes (HAART). Para a quantificação de anticorpos antitoxina diftérica utilizou-se um kit ELISA (IBL Immuno-Biological Laboratories, Hamburg, Alemanha) e amostras de sangue de 180 indivíduos, sendo que 75 eram doadores de sangue e 105 eram pacientes positivos para o HIV-1. Aproximadamente 60% dos indivíduos estavam parcialmente protegidos contra a difteria (IgG específica ≥ 0,1 < 1,0 UI/mL). Entre os doadores de sangue, 56% dos indivíduos estavam protegidos (IgG específica ≥ 1,0 UI/mL) contra a doença, contra apenas 29 % dos indivíduos positivos para HIV-1. Em relação aos doadores de sangues de origem civil não se observou correlação entre os níveis de IgG e a idade, enquanto que, para os militares observou-se uma correlação inversa. Não houve diferença significativa na resposta de anticorpos para difteria entre os indivíduos soropositivos com CD4+ baixo ou normal. Pacientes com HAART mostraram uma resposta significativamente mais baixa de anticorpos (média geométrica de 0.39 IU/mL, n = 84) do que os pacientes não tratados (média geométrica de 0.58 IU/mL, n = 19). A diferença na idade média dos pacientes não tratados (46 anos) e tratados com HAART (35 anos) provavelmente influenciou estes resultados, já que os níveis de anticorpos contra a difteria declinam com o tempo. A existência em nossa comunidade de adultos (militares e civis) suscetíveis à difteria, incluindo os indivíduos soropositivos, reforça que a imunização a cada 10 anos e os estudos soroepidemiológicos são muito importantes e devem ser estimulados. / Serologic data on diseases that are preventable by vaccine are useful to evaluate the success of immunization programs and to identify susceptible subgroups. In the last 20 years the childhood immunization program has been efficient in the control of the diphtheria in many countries. However, an important rate of adult population remains susceptible to the illness, since diphtheria protective antibodies decline with time. HIV-1 infection leads to a progressive loss of immune functions. With the increase of life expectancy of HIV-1 patients, and also the increment of infections, it is important to known the antibody levels to diphtheria toxin in these population. The aim of this study was to evaluate the IgG levels to diphtheria toxin and T lymphocytes (LT) counts in HIV-1 infected and non- infected individuals assisted at the Instituto de Biologia do Exército (IBEx), Rio de Janeiro. We investigated the correlation between specific antibody levels and the following parameters of the study groups: gender, age-group, military or civilian origin, previous diphtheria immunization, CD4+ and CD8+ counts. For HIV-1 patients, we also analysed the correlation of specific antibodies with viral load and the use of highly active antiretroviral therapy HAART. A commercial diphtheria-ELISA kit (IBL Immuno-Biological Laboratories, Hamburg, Alemanha) was used to evaluate IgG levels in serum samples of 180 individuals. Blood donors accounted for 75 individuals and 105 subjects were HIV-1 patients. About 60% of individuals were partially protected against diphtheria (specific IgG levels ≥ 0,1 < 1,0 IU/mL). About 56% of blood donors were protected against diphtheria (specific IgG > 1.0 IU/mL). Howerver, only 29% of HIV-1 patients showed the same level of protective antibodies. For the civilian blood donors, there were no correlation between specific antibody levels and age group. In contrast, a negative correlation was observed in the military group. There were no differences in diphtheria serology according to CD4+ counts of HIV-1 patients or blood donors. Interesting, HAART- treated (n = 84) patients showed a significantly lower antibody response (geomean of 0.39 IU/mL) than untreated patients (geomean of 0.58 IU/mL, n = 19). As tetanus and diphtheria antibodies tend to decrease with time, the difference in age between HAART-treated patients (mean of 46 years) and those not being treated (mean of 35 years) might introduce a bias in the study. Concluding, the existence of susceptible military and civilian adults in our community, including HIV-1 patients, reinforce that reliable seroepidemiological data and immunization campaigns should be routinely stimulated.
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Pesquisa de anticorpos antitoxina diftérica e fenotipagem de linfócitos T em indivíduos soronegativos e soropositivos para o HIV-1 acompanhados no Instituto de Biologia do Exército Rio de JaneiroFrancisco Almeida Braga Speranza 21 September 2010 (has links)
Dados sorológicos sobre doenças imunopreveníveis são úteis para avaliar o sucesso de programas de imunização e a identificação de populações suscetíveis. Nos últimos 20 anos, as campanhas de imunização na infância foram eficientes no controle da difteria em muitos países. No entanto, uma taxa importante da população adulta continua suscetível à doença, uma vez que os níveis de anticorpos protetores reduzem com o passar do tempo. A infecção pelo HIV-1 leva a uma perda progressiva das funções imunes. Com o aumento da expectativa de vida dos pacientes HIV-1, e a maior incidência de infecções, torna-se importante a avaliação dos níveis de anticorpos antitoxina diftérica nestes grupos. O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis de anticorpos antitoxina diftérica e a contagem de linfócitos T (LT) em indivíduos infectados ou não pelo HIV -1, assistidos no Instituto de Biologia do Exército (IBEx). Investigamos a correlação entre níveis de anticorpos específicos e os seguintes parâmetros dos grupos de estudo: sexo, faixa etária, categoria militar ou civil; vacinação prévia contra difteria; número de LT CD4+ e CD8+; e entre os indivíduos HIV-1 positivos a correlação com a carga viral e a terapia com antirretrovirais potentes (HAART). Para a quantificação de anticorpos antitoxina diftérica utilizou-se um kit ELISA (IBL Immuno-Biological Laboratories, Hamburg, Alemanha) e amostras de sangue de 180 indivíduos, sendo que 75 eram doadores de sangue e 105 eram pacientes positivos para o HIV-1. Aproximadamente 60% dos indivíduos estavam parcialmente protegidos contra a difteria (IgG específica ≥ 0,1 < 1,0 UI/mL). Entre os doadores de sangue, 56% dos indivíduos estavam protegidos (IgG específica ≥ 1,0 UI/mL) contra a doença, contra apenas 29 % dos indivíduos positivos para HIV-1. Em relação aos doadores de sangues de origem civil não se observou correlação entre os níveis de IgG e a idade, enquanto que, para os militares observou-se uma correlação inversa. Não houve diferença significativa na resposta de anticorpos para difteria entre os indivíduos soropositivos com CD4+ baixo ou normal. Pacientes com HAART mostraram uma resposta significativamente mais baixa de anticorpos (média geométrica de 0.39 IU/mL, n = 84) do que os pacientes não tratados (média geométrica de 0.58 IU/mL, n = 19). A diferença na idade média dos pacientes não tratados (46 anos) e tratados com HAART (35 anos) provavelmente influenciou estes resultados, já que os níveis de anticorpos contra a difteria declinam com o tempo. A existência em nossa comunidade de adultos (militares e civis) suscetíveis à difteria, incluindo os indivíduos soropositivos, reforça que a imunização a cada 10 anos e os estudos soroepidemiológicos são muito importantes e devem ser estimulados. / Serologic data on diseases that are preventable by vaccine are useful to evaluate the success of immunization programs and to identify susceptible subgroups. In the last 20 years the childhood immunization program has been efficient in the control of the diphtheria in many countries. However, an important rate of adult population remains susceptible to the illness, since diphtheria protective antibodies decline with time. HIV-1 infection leads to a progressive loss of immune functions. With the increase of life expectancy of HIV-1 patients, and also the increment of infections, it is important to known the antibody levels to diphtheria toxin in these population. The aim of this study was to evaluate the IgG levels to diphtheria toxin and T lymphocytes (LT) counts in HIV-1 infected and non- infected individuals assisted at the Instituto de Biologia do Exército (IBEx), Rio de Janeiro. We investigated the correlation between specific antibody levels and the following parameters of the study groups: gender, age-group, military or civilian origin, previous diphtheria immunization, CD4+ and CD8+ counts. For HIV-1 patients, we also analysed the correlation of specific antibodies with viral load and the use of highly active antiretroviral therapy HAART. A commercial diphtheria-ELISA kit (IBL Immuno-Biological Laboratories, Hamburg, Alemanha) was used to evaluate IgG levels in serum samples of 180 individuals. Blood donors accounted for 75 individuals and 105 subjects were HIV-1 patients. About 60% of individuals were partially protected against diphtheria (specific IgG levels ≥ 0,1 < 1,0 IU/mL). About 56% of blood donors were protected against diphtheria (specific IgG > 1.0 IU/mL). Howerver, only 29% of HIV-1 patients showed the same level of protective antibodies. For the civilian blood donors, there were no correlation between specific antibody levels and age group. In contrast, a negative correlation was observed in the military group. There were no differences in diphtheria serology according to CD4+ counts of HIV-1 patients or blood donors. Interesting, HAART- treated (n = 84) patients showed a significantly lower antibody response (geomean of 0.39 IU/mL) than untreated patients (geomean of 0.58 IU/mL, n = 19). As tetanus and diphtheria antibodies tend to decrease with time, the difference in age between HAART-treated patients (mean of 46 years) and those not being treated (mean of 35 years) might introduce a bias in the study. Concluding, the existence of susceptible military and civilian adults in our community, including HIV-1 patients, reinforce that reliable seroepidemiological data and immunization campaigns should be routinely stimulated.
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