Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate acute and subacute renal and hepatic toxicity of the oral administration of tepoxalin in cats submitted to hypotension with isoflurane. Eighteen adult male mongrel cats were used in this study, weighing between 3 and 5 kg and clinically healthy. The animals were divided into three groups, which were anesthetized and submitted to hypotension with isoflurane (CON), or which, in addition, tepoxalin was administered two hours prior to the hypotension procedure (PRE) or after the hypotension procedure (POS). The animals from groups PRE and POS also received the same doses of tepoxalin every 24 hours, during the five days following the procedure. In order to achieve a condition of moderate hypotension, animals were induced and maintained with isoflurane in variable concentration, for maintenance of mean arterial pressure (MAP) between 45 and 60 mmHg, during 60 minutes. Complete blood count and serum concentrations of alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (FA) and urea (U) were evaluated at baseline and 24 hours, 48 hours and 7 days after hypotension. Serum concentration of creatinine (Cr), fractional excretion of sodium (FENa) and urinary concentrations of Cr, gamma-glutamyl transferase (GGT), proteinuria and albuminuria were evaluated at baseline and 24 hours, 48 hours and 7 days after hypotension. The model chosen was efficient in maintaining the proposed condition of hypotension. No physiological changes were observed in complete blood count, serum biochemistry profile (ALT, FA, U and Cr), FENa and urinary GGT. An increase in urine protein-creatinine ratio was observed in CON and PRE at 24 and 48 hours after hypotension. Urine albumin-creatinine ratio showed increase in CON at 24 hours and maintained elevated values with regard to the other groups until 7 days after hypotension. The authors conclude that administration of tepoxalin does not cause changes in hepatic parameters, urea, creatinine, fractional excretion of sodium and urinary GGT in cats submitted to anesthetic hypotension. However, there is a risk of mild renal injury by administering the drug prior to the hypotensive procedure. / Este estudo objetivou avaliar a toxicidade renal e hepática, aguda e subaguda, da administração oral da tepoxalina em gatos submetidos à hipotensão com isofluorano. Foram utilizados 18 gatos, machos, adultos, sem raça definida, com peso entre 3 e 5 kg e comprovadamente hígidos. Os animais foram alocados em três grupos, os quais foram anestesiados e submetidos à hipotensão com isofluorano (CON), ou que ainda receberam tepoxalina duas horas antes do procedimento de hipotensão (PRÉ) ou após a recuperação anestésica do procedimento de hipotensão (PÓS). Os animais dos grupos PRÉ e PÓS também receberam as mesmas doses de tepoxalina a cada 24 horas, durante cinco dias pós procedimento. Para a caracterização de um quadro de hipotensão moderada, os animais foram induzidos e mantidos anestesiados com isofluorano em vaporização variável, para a manutenção da pressão arterial média (PAM) entre 45 e 60 mmHg durante 60 minutos. Foram avaliados hemograma e concentrações séricas de alanina amino-transferase (ALT), fosfatase alcalina (FA) e ureia (U) no período basal e 24 horas, 48 horas e 7 dias após a hipotensão. A concentração sérica de creatinina (Cr), a fração de excreção de sódio (FENa) e as concentrações urinárias de Cr, gama-glutamiltransferase (GGT), proteínas totais e albumina foram avaliadas no momento basal e 24 horas, 48 horas e 7 dias após a hipotensão. O modelo escolhido foi eficiente na manutenção do quadro de hipotensão proposto. Não foram observadas alterações fisiológicas no hemograma, bioquímica sérica (ALT, FA, U e Cr), FENa e na GGT urinária. Observou-se elevação estatística na razão proteína-creatinina na urina no CON e no PRÉ em relação ao PÓS às 24 e às 48 horas de avaliação. A razão albumina-creatinina na urina apresentou elevação estatística no CON em relação aos demais à partir das 24 horas de avaliação, mantendo essa elevação até os 7 dias de avaliação. Concluiuse que a administração de tepoxalina não causou alterações de parâmetros hepáticos, ureia, creatinina, FENa e GGT urinária em gatos submetidos à hipotensão anestésica, entretanto há o risco de ocorrência de injúria renal discreta devido à proteinúria observada no grupo em que a tepoxalina foi administrada antes do procedimento hipotensor.

As prostaglandinas (PGs) são derivadas do metabolismo do ácido aracdônico pela via das enzimas cicloxigenases (COX-1 e COX-2) e participam do controle do metabolismo ósseo. Os anti-inflamatórios não-esteroidais (AINEs), inibidores das COX, podem interferir negativamente com a formação óssea, atrasando o reparo de fratura de ossos longos, a fusão espinhal e a osseointegração de implantes. O presente trabalho teve por objetivo avaliar, quantitativamente, o efeito de diferentes tipos de AINEs (convencional, preferencial e seletivo para COX-2), assim como de um analgésico com efeito anti-inflamatório fraco, sobre o reparo ósseo alveolar, em ratos machos. Os animais foram divididos em 5 grupos experimentais: a) controle (administração de 1 mL água/dia), b) cetorolaco de trometamina (inibidor não-seletivo COX-1/COX-2; ingestão de 4 mg/kg/dia), c) nimesulida (inibidor preferencial de COX-2; ingestão de 5 mg/kg/dia), d) paracetamol (efeito anti-inflamatório fraco; ingestão de 80 mg/kg/dia), e) etoricoxibe (inibidor seletivo de COX-2; ingestão de 10 mg/kg/dia). As dosagens foram baseadas em trabalhos experimentais da literatura e na equivalência com a terapêutica humana. A administração foi realizada por gavage gástrica, iniciando logo após a extração do incisivo superior direito e seguindo por um periódo de 14 dias, após o que os ratos foram sacrificados, as hemi-maxilas contendo os alvéolos em reparação foram coletadas e processadas para inclusão em parafina, orientada de maneira a permitir cortes semi-seriados longitudinais de 6 μm de espessura (a intervalos de 60 μm), que foram corados pela hematoxilina e eosina. O percentual de tecido ósseo neoformado foi estimado por método de contagem diferencial de pontos, utilizando-se um microscópio óptico munido de câmera digital de vídeo para captura de imagens e um programa para histometria. Foram contados cerca de 1200 pontos (1182,9 ± 47,6 pontos; média ± EPM) no terço cervical alveolar de cada animal, em cerca de 8 secções histológicas intercaladas (8,6 ± 0,3 secções; média ± EPM). Após a aplicação de teste que comprovou a normalidade de todas as distribuições (teste de Kolmogorov-Smirnov, p > 0,10) aplicou-se a Análise de Variância (gl=4; F = 1,52; x2 = 0,13), que comprovou que o tratamento com os diferentes tipos de AINEs não interferiu com a formação óssea reparacional, neste modelo experimental. Os presentes resultados, obtidos em animais, não devem ser diretamente extrapolados para humanos, nem conduzir a uma inferência sobre o uso de AINEs na clínica odontológica. No entanto, as numerosas evidências experimentais e clínicas de que os diferentes tipos de AINEs podem ter efeitos indesejados na clínica ortopédica, somadas ao número reduzido de estudos voltados especificamente para a área odontológica, indicam a necessidade de mais investigações nessa área, com variação dos parâmetros experimentais e das ferramentas de avaliação, antes que se descarte a possibilidade de que os AINEs possam ter efeitos indesejados em procedimentos odontológicos que necessitam de formação óssea, principalmente no caso de utilização prolongada. / The cyclooxygenase enzymes COX-1 and COX-2 catalyze the conversion of arachidonic acid to prostaglandins (PGs), eicosanoids important for control of bone metabolism. The non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs), which are COX inhibitors, may negatively interfere with bone formation and delay long bone fracture healing, spinal fusion and implant osseointegration. The aim of the present study was to investigate quantitatively whether different types of NSAIDs (conventional, preferential and COX-2-selective), as well as an analgesic drug with a weak anti-inflammatory action, can hinder alveolar bone healing, in male rats. The animals were divided in 5 experimental groups: a) control (oral administration of 1 mL water/day), b) cetorolac (non-selective COX-1/COX-2 inhibito - 4 mg/kg/day oral dose), c) nimesulide (preferential COX-2 inhibitor - 5 mg/kg/day oral dose), paracetamol (weak anti-inflammatory - 80 mg/kg/day oral dose), etoricoxib (selective COX-2 inhibitor - 10 mg/kg/day oral dose). The doses of NSAIDs were compatible to human therapy and in the range of investigations carried out in laboratory animals. The drugs were administered by gavage from the day of extraction of the upper right incisors until death 2 weeks later, when the hemi-maxillae containing the alveolar sockets were collected, decalcified and processed for paraffin embedding. Semi-serial longitudinal 6-μm-thick sections were cut at 60-μm intervals and stained with hematoxylin and eosin. The degree of new bone formation inside the alveolar socket was estimated by a differential point-counting method, using an optical microscopy with a digital camera for image capture and a public domain histometry software. A total of 1182,9 ± 47,6 points (mean ± SEM) were counted in the cervical alveolar third, in 8,6 ± 0,3 (mean ± SEM) histological sections per alveolus (final magnification 100x), the percentage of points lying on bone trabeculae being proportional to their volume density. After confirmation of a normal distribution (Kolmogorov-Smirnov normality test, p>0,10) and comparison among groups by Analysis of Variance (gl = 4; F = 1,52; x2 = 0,13), histometric data confirmed that none of the anti-inflammatory drugs have detrimental effects in the volume fraction of new bone trabeculae filling the tooth extraction socket. Although experimental results obtained in animals may not be directly extrapolated to human neither induce to inferences about the clinical use of NSAIDs, numerous evidences have confirmed the deleterious effects of NSAIDs in the orthopedic clinic. Considering the reduced amount of studies on this subject pertaining to the dental field, more investigations are needed varying the experimental parameters and techniques, before the possibility of deleterious effects of NSAIDs in dental procedures requiring new bone formation are discharged.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study aimed to evaluate the possible renal and hepatic toxicities, acute and subacute, of the administration of tepoxalin in dogs submitted to hypotension with isoflurane. A total of 12 dogs were used, which received 10 mg kg-1 of tepoxalin PO two hours before induction of hypotension (T) or were only submitted to hypotension with isoflurane (C). For the subacute study, animals in T were treated with tepoxalin during 5 days, following the hypotensive procedure. The dogs were submitted to hypotension (MAP= 50-60mmHg) for isoflurane in a circular circuit valve, with adjusted FR for the ETCO2 remained between 35-45mmHg. ToC was maintained between 37 and 38oC. HR, SAP, MAP, DAP, CVP, ETCO2 and ETIso were evaluated at 0, 10 and every 10 min up to 60min of hipotension. pH, PaO2, PaCO2, SaO2, HCO3-, BD, Na+, K+, Ca2+ and bleeding time evaluations were carried out before hypotension and at 30 and 60min of hipotension. For renal and hepatic evaluation, serum levels of U, Cr, ALT, alkaline phosphatase, GGT and urinary levels of GGT, Cr and GGT:Cr ratio were determined at 12h, 24h and seven days after the procedure. During the anesthetic procedure, only CVP presented elevation in relation to 0min in both groups at 50 and 60min of evaluation. In blood gas and electrolyte measurement, only Na+ presented levels below to basal at 60min in T, and this same group showed increased values at all intervals, in comparison between groups. Moreover, bleeding time was shown to be more elevated at 30min of evaluation in animals in T, when compared to the ones in C. The variables corresponding to creatinine depuration, GGT:Cr ratio and UV remained stable during the evaluations; however, urinary GGT levels presented increased values in animals in C when compared to T, at 60min of evaluation. At this same interval, urinary Cr values were elevated in T. Serum levels of ALT, alkaline phosphatase, U and Cr presented minor alterations, remaining within reference values; however, GGT presented increased values at 60min of evaluation, when compared to 0min. On the seventh day of evaluation, a reduction in leukocyte number was observed in animals in T, when compared to C. Side effects were not observed in both groups. The prior administration of tepoxalin in healthy dogs submitted to hypotension did not cause significant effects upon renal and hepatic functions. Moreover, daily administrations during five days, following the anesthetic procedure, did not alter the functions of the organs mentioned. Therefore, tepoxalin showed to be a safe NSAID to be used in healthy dogs, submitted to hypotension during anesthesia with isoflurane. / Objetivou-se avaliar as possíveis toxicidades renal e hepática, aguda e subaguda, da administração de tepoxalina em cães submetidos à hipotensão com isofluorano. Foram utilizados 12 cães, os quais receberam 10mg kg-1 de tepoxalina VO duas horas antes da indução da hipotensão (T) ou somente foram submetidos à hipotensão com isofluorano (C). Para o estudo subagudo, os animais do T foram tratados com tepoxalina, durante cinco dias, seguidos ao procedimento hipotensor. Os cães foram submetidos à hipotensão (PAM = 50-60mmHg) por isofluorano em circuito circular valvular, com FR ajustada para que o ETCO2 permanecesse entre 35-45mmHg. A TºC foi mantida entre 37 e 38ºC. Avaliaram-se FC, PAS, PAM, PAD, PVC, ETCO2, e ETIso em 0, 10 e a cada 10min até 60min da hipotensão. As avaliações de pH, PaO2, PaCO2, SaO2, HCO3-, DB, Na+, K+ e Ca2+ e tempo de sangramento foram realizadas antes da hipotensão e aos 30 e 60min da hipotensão. Para a avaliação renal e hepática foram determinados os níveis séricos de U, Cr, ALT, FA, GGT e os níveis urinários de GGT, Cr e a proporção GGT:Cr em 12h, 24h e sete dias após o procedimento. Durante o procedimento anestésico somente a PVC apresentou elevação em relação aos 0min, em ambos os grupos aos 50 e 60min de avaliação. Na mensuração dos gases sanguíneos e eletrólitos, apenas o Na+ demonstrou níveis menores que o basal aos 60min no T, e este mesmo grupo apresentou valores aumentados em todos os momentos, na comparação entre os grupos. Ainda, o tempo de sangramento foi maior aos 30min de avaliação, nos animais do T, quando comparado aos do C. As variáveis correspondentes à depuração da creatinina, razão GGT:Cr e DU permaneceram estáveis durante as avaliações, porém, os níveis de GGT urinária apresentaram valores aumentados nos animais do C, quando comparados ao T, aos 60min de avaliação. Nesse mesmo momento, os valores de Cr urinária estavam aumentados dentro do T. Os níveis séricos de ALT, FA, U e Cr apresentaram poucas alterações, permanecendo dentro dos limites de referência, porém, a GGT apresentou valores aumentados aos 60min de avaliação, comparando-se com 0min. No sétimo dia de avaliação, observou-se redução do número de leucócitos nos animais do T, quando comparados aos do C. Não foram observados efeitos colaterais em ambos os grupos. A administração prévia de tepoxalina em cães hígidos submetidos à hipotensão, não ocasionou efeitos significativos sobre as funções renal e hepática dos mesmos. Da mesma forma, administrações diárias durante cinco dias, seguidas ao procedimento anestésico, não alteraram as funções dos referidos órgãos. Portanto, a tepoxalina demonstrou ser um AINE seguro para utilização em cães hígidos, submetidos à hipotensão durante anestesia com isofluorano.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-05T12:23:50Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1922103 bytes, checksum: a207d4c95bf749dd37ae0eb1728c7e80 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-05T12:23:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1922103 bytes, checksum: a207d4c95bf749dd37ae0eb1728c7e80 (MD5) Previous issue date: 2017-04-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Inflammation is an immune response that aims to establish a tissue homeostasis during an infection or injury. Recognized as a beneficial process, an inflammation can become harmful when in excess. Thus, therapeutic therapies that are applied to the resolution of the inflammation are studied and developed, with natural products and their derivatives playing a prominent role in the discoveries of new anti-inflammatory molecules. In this context, the objective of this study was to evaluate the antiinflammatory potential of milonine, a Cissampelos sympodialis Eichl alkaloid, in vivo, against the release of mediators by using the murine model of acute inflammation and pain. Swiss mice pretreated with milonine were submitted to protocols of: paw edema induced by LPS, prostaglandin (PGE2), bradykinin (BK) and serotonin (5-HT) to evaluate the anti-edematogenic activity of the alkaloid; microvascular permeability induced by acetic acid to obtain a total protein concentration and histological analysis of the peritoneum; the models of carrageenan-induced peritonitis to evaluate the effect of milonine on the migration of the total and differential cells; and the formalin test to evaluate its nociceptive activity. The results show that milonine was capable of significantly reduce (p<0.001) the formation of the paw edema induced by LPS, PGE2, BK, however it was not capable to reduce the edema induced by 5-HT; significantly reduced (p<0.05) the extravazation of liquid to the peritoneum induced by acetic acid, maintaining its morphology preserved. The alkaloid was also able to inhibit (p<0.01) the migration of the total leukocytes to the peritoneal cavity during the carrageenan-induced inflammation, decreasing the number of polymorphonuclear cells (PMN) without changing mononuclear cells (MNs). In the formalin test, the paw licking time of the animals was inhibited (p<0.01) only in the second phase through the intraperitoneal (i.p.) administration, corroborating the inhibition of inflammatory mediators. Therefore, this study demonstrates that milonine has an antiinflammatory and analgesic activity due to the inhibition of the action of mediators essential for the start of the inflammatory process. / O processo inflamatório é uma resposta benéfica do organismo frente a uma lesão ou infecção, visando a eliminação da injúria inicial, bem como as consequências dessa injúria. Entretanto, a inflamação, em resposta exagerada, pode ser prejudicial. Dessa forma, se faz necessário o desenvolvimento de novos fármacos com propriedades anti-inflamatória e analgésica, sendo utilizado como estratégia terapêutica a busca por moléculas oriundas de produtos naturais que possuam tais propriedades. Nesse contexto, o objetivo desse estudo foi avaliar o potencial anti-inflamatório da milonina, alcaloide de Cissampelos sympodialis Eichl frente à liberação de mediadores inflamatórios utilizando o modelo murino de inflamação aguda e dor. Camundongos Swiss pré-tratados com milonina foram submetidos aos protocolos de: edema de pata induzido por LPS, prostaglandina (PGE2), bradicinina (BK) e serotonina (5-HT) para avaliar a atividade antiedematogênica do alcaloide; permeabilidade microvascular induzida por ácido acético para obter a concentração de proteínas totais e análise histológica do peritônio; os modelos de peritonite induzida por carragenina para avaliar o efeito da milonina sobre a migração de células totais e diferenciais; e o teste da formalina para avaliar a sua atividade nociceptiva. Os resultados demonstraram que a milonina foi capaz de reduzir significativamente (p<0,001) a formação do edema de pata induzido por LPS, PGE2, BK, porém não foi capaz de reduzir o edema induzido pela 5-HT; diminuiu significativamente (p<0,05) o extravasamento de líquido para o peritônio induzido por ácido acético, mantendo a sua morfologia preservada. O alcaloide também foi capaz de inibir (p<0,01) a migração de leucócitos totais para a cavidade peritoneal durante a inflamação induzida por carragenina, diminuindo o número de células polimorfonucleares (PMN) sem alterar células mononucleares (MNs). No teste da formalina, o tempo de lambida da pata dos animais foi inibida (p<0,01) por milonina apenas na segunda fase quando administrada por via intraperitoneal (i.p.). Portanto, este estudo demonstrou que a milonina possui atividade anti-inflamatória e analgésica por inibir a ação de mediadores essenciais para o início do processo inflamatório.

Submitted by ALEXANDRE BORGES null (alex.brgs@hotmail.com) on 2016-06-28T19:11:21Z No. of bitstreams: 1 ESTUDOS DE MODELAGEM MOLECULAR DE LIGNANAS EM COMPLEXOS COM CICLOOXIGENASES-1 E 2.pdf: 4325586 bytes, checksum: 2f6ab56677aea7746bd28dad4b24ea23 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-29T17:41:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 borges_a_dr_ilha.pdf: 4325586 bytes, checksum: 2f6ab56677aea7746bd28dad4b24ea23 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T17:41:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 borges_a_dr_ilha.pdf: 4325586 bytes, checksum: 2f6ab56677aea7746bd28dad4b24ea23 (MD5) Previous issue date: 2016-05-11 / Os inibidores seletivos da ciclooxigenase-2 (COX-2), como o rofecoxibe (2) e o celecoxibe (1), formam uma importante classe de medicamentos anti-inflamatórios desenvolvidos a partir da descoberta das duas isoformas das ciclooxigenases (COX-1 e COX-2) na década de 1979. A isoforma 1 esta relacionada com a citoproteção gástrica, agregação plaquetária e função renal e a isoforma 2 relacionada a processos inflamatórios. Estes inibidores seletivos apesar de não apresentarem os efeitos colaterais (ulceras e gastrites) dos anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) clássicos por inibirem apenas a COX-2, apresentam grave risco cardiovascular, o que motivou à retirada do rofecoxibe do mercado. Porém, por ser um eficiente inibidor seletivo da COX-2 a estrutura do rofecoxibe tornou-se referência no estudo de novas substâncias capazes de inibir seletivamente a COX-2. Dentre as ferramentas utilizadas na busca destas novas estruturas está a modelagem molecular através de programas como o GOLD 5.1, que foi utilizado neste trabalho. O uso do GOLD 5.1 possibilitou o estudo do comportamento das estruturas avaliadas em ligação com as ciclooxigenases. O objetivo foi obtenção de estruturas com comportamento semelhante ao rofecoxibe (em relação às COXs) como potenciais candidatos ao desenvolvimento de novos inibidores seletivos para a COX-2. O estudo foi realizado com 480 estruturas modeladas a partir de lignanas naturais como a hinoquinina, cubebina, deoxipodofilotoxina e podofilotoxina, que apresentam atividade anti-inflamatória in vivo ou in vitro, além de semelhanças estruturais com o rofecoxibe. A deoxipodofilotoxina por apresentar seletividade para a COX-2 em ensaio in vitro também foi utilizada como estrutura de referência além do rofecoxibe. Os resultados observados a partir da simulação molecular permitiram concluir que embora tanto o rofecoxibe como a deoxipodofilotoxina (3) inibam seletivamente a COX-2 in vitro, o fazem de modo diferente. Em relação a COX-2 as duas estruturas ocupam a mesma região do sítio ativo, mas o rofecoxibe apresenta interações mais fortes com o bolso hidrofílico desta isoforma (condição necessária para a inibição seletiva para os coxibes). Já para a COX-1 enquanto o rofecoxibe ocupa a porção superior do canal hidrofóbico (sítio ativo) como os demais AINEs, a deoxipodofilotoxina ocupa uma região vizinha. Pelos resultados obtidos é possível sugerir que tanto a maior flexibilidade das estruturas como a presença do anel lactônico, são importantes para um comportamento análogo ao rofecoxibe ou à deoxipodofilotoxina. Com relação à interação com o bolso hidrofílico da COX-2, os resultados sugerem que a presença de grupos aceptores de prótons menos volumosos nas posições C3 e C4, C3’ e C4’ ou C4 levam a resultados melhores que grupos aceptores de maior volume. A presença de grupos doadores de prótons apesar de permitirem forte interação com o bolso hidrofílico da COX-2 leva a resultados globais insatisfatórios, pois formam interações fortes com o resíduo Arg120 do sítio ativo da COX-1, interação considerada importante para a inibição não seletiva. Resultado semelhante à deoxipodofilotoxina foi observado apenas para a estrutura 17. As estruturas 37, 188, 266, 267, 348 e a hinoquinina (4) apresentam resultados semelhantes ao rofecoxibe, para as duas isoformas. Deste modo permite-se sugerir a partir dos resultados obtidos neste estudo que a hinoquinina (4) e as estruturas 17, 37, 188, 266, 267 e 348 apresentam-se como possíveis protótipos de fármacos que atuem como inibidores seletivos para a COX-2. / The selective inhibitors of the cyclooxygenase-2 (COX-2) as rofecoxib (2) and celecoxib (1), form an important class of anti-inflammatory drugs developed from the discovery of two isoforms of cyclooxygenases (COX-1 and COX-2) in the late 1979. Isoform 1 is related to the gastric cytoprotection, platelet and renal function and isoform 2 related to inflammatory processes. These selective inhibitors although they did not side effects (ulcers and gastritis) of the classic NSAIDs to inhibit only COX-2, have severe cardiovascular risk, which led to the withdrawal of rofecoxib from the market. However, to be an effective selective COX-2 to rofecoxib structure has a reference in the study of new substances capable of selectively inhibiting COX-2. Among the tools used in the search of these new structures is by molecular modeling program such as GOLD 5.1, which was used in this work. Using GOLD 5.1 made it possible to study the behavior of structures evaluated in binding with the cyclooxygenases. With the objective of obtaining structures with similar behavior to rofecoxib (regarding behavior with COX) as potential candidates for the development of new selective inhibitors for COX-2. The study was conducted with 480 structures modeled from natural lignans as hinokinin, cubebin, deoxypodophyllotoxin and podophyllotoxin, which have anti-inflammatory activity in vivo or in vitro as well as structural similarities with rofecoxib. The deoxypodophyllotoxin for presenting selectivity for COX-2 in the in vitro assay was also used as a reference structure beyond rofecoxib. The results observed from the molecular simulation showed that although both rofecoxib (2) as deoxypodophyllotoxin (3) selectively inhibit COX-2 in vitro, they do differently. In relation to COX-2 the two structures occupy the same region of the active site, but rofecoxib has stronger interactions with the hydrophilic pocket of this isoform (a necessary condition for the selective inhibition for coxibs). As for the COX-1 while rofecoxib occupies the upper portion of the hydrophobic channel (active site) like other NSAIDs, the deoxypodophyllotoxin occupies a neighboring region. From the results it is possible to suggest that the greater flexibility of the structures such as the presence of the lactone ring, are important for a similar behavior to rofecoxib or deoxipodofilotoxina. With respect to the interaction with the hydrophilic pocket COX-2, the results suggest that the presence of acceptors groups less bulky protons in posítions C3 and C4, C3 ' and C4' and C4 lead to better results than acceptors groups of larger volume. The presence of proton donors groups despite allowing strong interaction with the hydrophilic pocket COX-2 lead to poor overall results, since they form strong interactions with Arg120 residue of COX-1 active site, considered important interaction for inhibiting non-selective. Results similar to deoxipodofilotoxina was only observed for structure 17. Structures 37, 188, 266, 267, 348 and hinokinin (4) show results similar to rofecoxib for the two isoforSA. Thus it allows suggest from the results obtained in this study hinokinin (4) and structures 17, 37, 188, 266, 267 and 348 are shown as possible prototype drugs that act as selective inhibitors for COX-2.

Orientador: Rosangela da Silva de Laurentiz / Resumo: Os inibidores seletivos da ciclooxigenase-2 (COX-2), como o rofecoxibe (2) e o celecoxibe (1), formam uma importante classe de medicamentos anti-inflamatórios desenvolvidos a partir da descoberta das duas isoformas das ciclooxigenases (COX-1 e COX-2) na década de 1979. A isoforma 1 esta relacionada com a citoproteção gástrica, agregação plaquetária e função renal e a isoforma 2 relacionada a processos inflamatórios. Estes inibidores seletivos apesar de não apresentarem os efeitos colaterais (ulceras e gastrites) dos anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) clássicos por inibirem apenas a COX-2, apresentam grave risco cardiovascular, o que motivou à retirada do rofecoxibe do mercado. Porém, por ser um eficiente inibidor seletivo da COX-2 a estrutura do rofecoxibe tornou-se referência no estudo de novas substâncias capazes de inibir seletivamente a COX-2. Dentre as ferramentas utilizadas na busca destas novas estruturas está a modelagem molecular através de programas como o GOLD 5.1, que foi utilizado neste trabalho. O uso do GOLD 5.1 possibilitou o estudo do comportamento das estruturas avaliadas em ligação com as ciclooxigenases. O objetivo foi obtenção de estruturas com comportamento semelhante ao rofecoxibe (em relação às COXs) como potenciais candidatos ao desenvolvimento de novos inibidores seletivos para a COX-2. O estudo foi realizado com 480 estruturas modeladas a partir de lignanas naturais como a hinoquinina, cubebina, deoxipodofilotoxina e podofilotoxina, que apre... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The selective inhibitors of the cyclooxygenase-2 (COX-2) as rofecoxib (2) and celecoxib (1), form an important class of anti-inflammatory drugs developed from the discovery of two isoforms of cyclooxygenases (COX-1 and COX-2) in the late 1979. Isoform 1 is related to the gastric cytoprotection, platelet and renal function and isoform 2 related to inflammatory processes. These selective inhibitors although they did not side effects (ulcers and gastritis) of the classic NSAIDs to inhibit only COX-2, have severe cardiovascular risk, which led to the withdrawal of rofecoxib from the market. However, to be an effective selective COX-2 to rofecoxib structure has a reference in the study of new substances capable of selectively inhibiting COX-2. Among the tools used in the search of these new structures is by molecular modeling program such as GOLD 5.1, which was used in this work. Using GOLD 5.1 made it possible to study the behavior of structures evaluated in binding with the cyclooxygenases. With the objective of obtaining structures with similar behavior to rofecoxib (regarding behavior with COX) as potential candidates for the development of new selective inhibitors for COX-2. The study was conducted with 480 structures modeled from natural lignans as hinokinin, cubebin, deoxypodophyllotoxin and podophyllotoxin, which have anti-inflammatory activity in vivo or in vitro as well as structural similarities with rofecoxib. The deoxypodophyllotoxin for presenting selectivity for COX... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A fibrose pulmonar é uma doença pulmonar crônica caracterizada pelo acúmulo excessivo de matriz extracelular (MEC) e um remodelamento na arquitetura pulmonar. Embora já se saiba da participação do estresse oxidativo e da inflamação na fibrose de forma isolada, é importante observar como se comporta o estresse oxidativo na fibrose quando esta ocorre associada a uma doença de base. O presente estudo teve como objetivo investigar o perfil inflamatório e oxidativo na fibrose pulmonar associado ao enfisema pulmonar prévio. Camundongos C57BL/6 foram divididos em três grupos: grupo controle (n=5) que receberam salina intranasal (50 l) e foram sacrificados no 21 dia; grupo bleomicina (BLEO) (n=15) que receberam bleomicina intratraqueal (0.1 U/animal) no dia 0 e foram sacrificados nos 7 (n=5), 14 (n=5) e 21 (n=5) dias e grupo PPE (elastase) + BLEO (n=21) que receberam elastase (3U/animal) e após 14 dias receberam bleomicina e foram sacrificados nos 14(n=7), 21 (n=7), 28 (n=7) e 35 (n=7) dias. Foram realizadas análises histológicas através de H&E e picro-sirius; análises bioquímicas para superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e glutationa-S-transferase (GST) e ELISA para Interleucina (IL)-1&#946; e IL-6. A fibrose pulmonar ocorreu a partir do 14 dia (p<0.001) e o enfisema concomitante a fibrose pulmonar a partir do 28 dia (p<0.001) e um aumento de fibras colágenas no grupo BLEO 21(p<0.001) e PPE + BLEO 21(p<0.001). As enzimas antioxidantes CAT (p<0.01), SOD (p<0.01) e GPx (p<0.01) reduziram e a GST aumentou no grupo BLEO 21 dias (p<0.05). No grupo PPE + BLEO 21 dias houve redução das enzimas antioxidantes CAT, SOD, GPx (p<0.05) e GST. Os níveis de óxido foram altos nos grupos BLEO 21 dias (p<0.01) e PPE + BLEO 21 dias (p<0.01). A IL-1&#946; mostrou-se elevada no grupo BLEO 7 dias quando comparado ao controle (p<0.001) e ao grupo PPE + BLEO 7 dias (p<0.01). Concluímos que a resposta inflamatória inibiu a ação do sistema antioxidante contribuindo para o agravamento da lesão. Isso sugere que terapias anti-inflamatórias podem contribuir tanto para redução da resposta inflamatória quanto de forma indireta no sistema antioxidante. / Pulmonary fibrosis (PF) is a chronic lung disease characterized by excessive accumulation of extracellular matrix (ECM) and remodeling in the lung architecture. Although it is already known the role of oxidative stress and inflammation in the isolated pulmonary fibrosis, it is important to observe how it behaves oxidative stress in pulmonary fibrosis when it occurs associated with an underlying disease. The present study aimed to investigate the inflammatory status and oxidative pulmonary fibrosis associated with pulmonary emphysema prior. C57BL / 6 mice were divided into three groups: control group (n = 5) who received intranasal saline (50l) and were sacrificed at 21 days, bleomycin (BLEO) group (n=15) who received intratracheal bleomycin (0.1U/animal) in the day 0 and were sacrificed at 7 (n=5), 14 (n=5) and 21 (n=5) days and the PPE + BLEO group (n=21) received elastase (PPE)(3U/animals) and 14 days after receiving bleomycin and were sacrificed at 14 (n = 7), 21 (n = 7) 28 (n = 7) and 35 (n = 7) days. Histological analysis was achieved using H&E and Sirius red staining; biochemical analysis for superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx) and glutathione-S-transferase (GST) and ELISA for IL-1&#946; and IL-6 were conducted. Pulmonary fibrosis occurred from day 14 (p<0.001) emphysema and pulmonary fibrosis from day 28 (p <0.001) and occurred an increase of collagen fibers in the BLEO group 21days (p<0.001) and PPE + BLEO 21days (p <0.001). Antioxidant enzymes CAT (p <0.01), SOD (p <0.01), and GPx (p <0.01) were reduced and GST increased in the BLEO group 21 days (p<0,05). In the PPE + BLEO group 21 days occurred an decreased antioxidant enzymes CAT, SOD, GPx (p <0.05), and GST. Oxide levels were higher in the BLEO groups 21 days (p <0.01), and PPE + BLEO group 21 days (p <0:01). IL-1&#946; was elevated in the group BLEO 7 days when compared to control (p <0.001) and the PPE + BLEO group 7 days (p<0.01). The inflammatory response inhibited the action of the antioxidant system contributes to the aggravation of the injury. This suggests that anti-inflammatory therapies may contribute to reducing the inflammatory response as indirectly to the antioxidant system.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3215575 bytes, checksum: 8de9cf3f200ed4dc0ee4d1b0b672ce4f (MD5) Previous issue date: 2012-08-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The number of alkaloids containing the 1-substituted tetrahydroisoquinoline skeleton is extensive and impressive versatility of this pharmacological class arouses interest in experimental pharmacologists. Applying the consecrated Pictet-Spengler reaction of four phenyltetrahydroisoquinoline alkaloids was obtained, three of which are unpublished. Two of them obtained with excellent yield (93.45%) in one step. Starting from allylbenzene that initially passed through an isomerization followed by oxidation by applying the Limieux-Johnson reaction were obtained from two other alkaloids with an overall yield of 50%. In experimental models of acute inflammation, the 1-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)-7-methoxy-1,2,3,4,tetrahydroisoquinoline (MTHP) significantly reduced (p <0.05) cell migration into the abdominal cavity of mice and the release of pro-inflammatory mediators (TNF-α, IL-1 and IL-6) in a dose one hundred thirty-eight times lower dosage than the dose of aspirin administered (200 mg/Kg).The MTHP causes hypotension in non-anesthetized normotensive rats, which can be attributed to the participation of endothelium-derived factors, including NO and metabolites COX. These data suggest that MTHP has anti-inflammatory and hypotensive effect related to different mechanisms, and further studies are needed to explore its potential. / O número de alcaloides que contém o esqueleto tetrahidroisoquinolínico 1-substituído é extenso e a impressionante versatilidade farmacológica desta classe desperta o interesse nos farmacologistas experimentais. Aplicando a consagrada reação de Pictet-Spengler obtivemos quatro alcaloides fenil tetrahidroisoquinolínicos dos quais três são inéditos. Dois deles obtidos com excelente rendimento (93,45%) em uma única etapa. Partindo-se de alilbenzenos que inicialmente passaram por uma isomerização seguida de oxidação via reação de Limieux-Johnson, foram obtidos os outros dois alcaloides com rendimento global de 50%. Em modelo experimental de inflamação aguda, a 1-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-7-metoxi-1,2,3,4,-tetrahidroisoquinolina (MTHP) reduziu significativamente (p<0,05) a migração celular para a cavidade abdominal de camundongos bem como a liberação dos mediadores pró-inflamatórios (TNF-, IL-1 e IL-6) em uma dose cento e trinta e oito vezes menor que a dose de AAS administrada (200mg/Kg i.p.). MTHP provoca hipotensão em ratos normotensos não anestesiados, que pode ser atribuída à participação de derivados do endotélio, incluindo fatores de NO e metabolitos COX. Estes dados sugerem que MTHP tem efeitos anti-inflamatórios e hipotensores relacionados a diferentes mecanismos, e novos estudos são necessários para explorar seu potencial.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-05-16T11:00:44Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Artur Christian Garcia da Silva - 2018.pdf: 3769532 bytes, checksum: e167ec43ef90135ed1fc8434ff29e2b3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-05-16T11:01:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Artur Christian Garcia da Silva - 2018.pdf: 3769532 bytes, checksum: e167ec43ef90135ed1fc8434ff29e2b3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-16T11:01:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Artur Christian Garcia da Silva - 2018.pdf: 3769532 bytes, checksum: e167ec43ef90135ed1fc8434ff29e2b3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-03-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction: Cosmetic products eye toxicity assessment has been performed worldwide using alternative methods since animal testing has been banished for this purpose in many countries. In this context, reconstructed epithelial models have been used internationally for these evaluations, which are not available in Brazil due bureaucratic issues that limit their acquisition and use in national territory. Objective: In this work, an evaluation platform based on cellular inflammatory changes caused by exposure to eye irritants was proposed, as well as the development of a biomimetic corneal model from human keratinocytes, which was characterized and evaluated for applicability in ocular toxicity studies. Methods: Inflammatory profile of HaCat keratinocytes was determined after exposure to 13 different chemicals with different classification for ocular irritation (irritants and non-irritants) using Cytometric Bead Array (CBA) and ELISA methods. 3D models were obtained by cultivating HaCat cell line onto a collagen type I matrix, in air-liquid interface for five days. Morphological characterization was carried out through Hematoxylin-eosin staining and corneal epithelial biomarkers expression was assessed using indirect immunofluorescence. Predictive capacity assessment was performed by exposure of model to test substances with subsequently tissue viability assessment. Finally, applicability of system was verified by testing five marketed eyebrow Henna samples which were considered non-irritants due the lack of adequate labelling. Results and Discussion: A qualitative and quantitative correlation was established regarding the HaCat cells inflammatory profile and eye irritation degree of evaluated substances. The epithelial model presented similar morphology and biomarkers expression patterns similar to the found in human corneal epithelium, so that tissue viability after exposure to test substances reduced proportionately to the irritant potential of them. Furthermore, 3D model classified four of the five evaluated Henna samples as moderate or mild irritants. Conclusion: The developed epithelial model presented morphological and functional properties similar to those founded in human corneal epithelium, which enabled the distinction between irritants and non-irritants and it is also applicable to the investigation of botanical mixtures ocular toxicity potential. / Introdução: A avaliação da toxicidade ocular de produtos cosméticos tem sido mundialmente realizada mediante a utilização de métodos alternativos desde que a experimentação animal foi proibida para esse fim em muitos países. Nesse contexto, os modelos epiteliais reconstruídos têm sido internacionalmente utilizados para essa finalidade, os quais não encontram-se disponíveis no Brasil por questões burocráticas que limitam a importação e utilização dos mesmos no território nacional. Objetivo: Neste estudo, foram propostos uma plataforma de avaliação baseada em alterações celulares inflamatórias ocasionadas pela exposição a agentes irritantes oculares, bem como o desenvolvimento de um modelo biomimético de córnea a partir de queratinócitos humanos, o qual foi caracterizado e avaliado quanto à aplicabilidade para aplicação em estudos de toxicidade ocular. Metodologia: O perfil inflamatório dos queratinócitos HaCat foi determinado após exposição à 13 diferentes substâncias químicas, com diferentes perfis de irritação ocular (irritantes e não irritantes), por meio das técnicas de Cytometric Bead Array (CBA) e ELISA. Os modelos 3D foram obtidos mediante o cultivo da linhagem HaCat sobre uma matriz de colágeno tipo I, em interface ar-líquido por cinco dias. A caracterização morfológica do modelo foi realizada por meio de coloração com Hematoxilina-eosina e a expressão de biomarcadores do tecido epitelial da córnea utilizando-se imunofluorescência indireta. A avaliação da capacidade preditiva do modelo foi realizada mediante exposição deste às substâncias supracitadas, com posterior avaliação da viabilidade tecidual. Por fim, a aplicabilidade do sistema para avaliação de misturas foi verificada avaliando-se cinco amostras de Hena de sobrancelha comercializadas, sendo consideradas não irritantes pela ausência de rotulagem adequada. Resultados e discussão: Foi estabelecida correlação qualitativa e quantitativa em relação ao perfil inflamatório e à severidade das substâncias teste avaliadas. O modelo desenvolvido apresentou morfologia e expressão de biomarcadores semelhantes aos padrões encontrados na córnea humana, de modo que a viabilidade tecidual após a exposição às substâncias reduziu de maneira diretamente proporcional ao potencial irritante das mesmas. Ademais, das cinco amostras de Hena avaliadas, o modelo classificou quatro como irritantes moderados ou leves. Conclusão: O modelo epitelial desenvolvido apresentou características morfológicas e funcionais semelhantes às da córnea humana, permitindo a distinção entre substâncias irritantes e não irritantes, sendo também aplicável à investigação da toxicidade ocular de misturas botânicas.

Introdução: A osteoartrite (OA) é uma doença que comumente afeta os seres humanos, sendo caracterizada como um processo degenerativo que abrange as articulações. A OA afeta a cartilagem articular, osso subcondral, ligamentos, cápsula articular, membrana sinovial e músculos periarticulares. O tratamento para esta desordem se baseia em terapia farmacológica, não farmacológica e cirúrgica, isoladamente ou em combinação, a fim de maximizar os efeitos benéficos e minimizar os efeitos indesejáveis. O presente estudo tem como objetivo avaliar e comparar os efeitos isolados e combinados da terapia farmacológica com anti-inflamatório não-esteroidal (AINE) de uso tópico, aos efeitos da atividade física, e por fim, aos efeitos da laserterapia de baixa potência (LBP), em um modelo experimental de OA. Materiais e Métodos: A OA foi induzida por injeção de papaína intra-articular no joelho direito de ratos Wistar machos. Após 21 dias os animais começaram a ser tratados com AINE de aplicação tópica e/ou com atividade física (natação) e/ou LBP. Os tratamentos foram realizados 03 vezes por semana, durante 08 semanas, perfazendo um total de 24 sessões de terapia. Foram realizadas análises bioquímicas e morfológicas da articulação do joelho, compreendendo análise histológica, contagem total de células, atividade de mieloperoxidase (MPO), RT-PCR (COX-1, COX-2, IL-1&beta;, IL-6, IL-10, TNF-&alpha;, MMP-3 e MMP-13), análise de citocinas pelo método de ELISA (TNF-&alpha;, IL-1&beta;, IL-6 e IL-10), PGE2 e por fim, a análise de Western-Blot (COX-1 e COX-2). Resultados, discussão e conclusão: Os resultados do presente estudo indicam que o tratamento com laserterapia de baixa potência é o mais eficiente em diminuir os danos à articulação e modular o processo inflamatório induzido pela injeção de papaína na articulação do joelho de ratos. / Introduction: Osteoarthritis (OA) is a disease that commonly affects humans and it is characterized as a degenerative process that reachs joints. OA affects the articular cartilage, subchondral bone, ligaments, joint capsule, synovial membrane and periarticular muscles. The treatment for this disorder is based on pharmacological therapy, non-pharmacological therapy and surgery, alone or in combination, in order to maximize the beneficial effects and minimize side effects. This research project aims to evaluate and compare the isolated and combined effects of pharmacological therapy with non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID) of topical use, to effects of physical activity and finally to effects of low-level laser therapy (LLLT) in an experimental model of osteoarthritis. Materials and Methods: OA was induced by intra-articular injection of papain in the right knee of male Wistar rats. After 21 days animals started to be treated with topical NSAID and/or physical activity (swimming) and/or LBP. Treatments was performed 3 times per week for 8 weeks, a total of 24 therapy sessions. It was performed morphological and biochemical analysis of the knee joint, including histology, counting of total cells, activity of myeloperoxidase (MPO), RT-PCR (COX-1, COX-2, IL-1&beta;, IL-6, IL-10, TNF-&alpha;, MMP-3 and MMP-13) cytokines analysis by ELISA (TNF-&alpha;, IL-1&beta;, IL-6 and IL-10), PGE2, and finally Western- Blot analysis (COX-1 and COX-2). Results, discussion and conclusion: The results of this project indicate that treatment with low-level laser therapy is more efficient in order to decrease damage in joint and to modulate inflammatory process induced by papain injection in rats knee join.