Abelhas adultas produzem vitelogenina, a principal proteína da hemolinfa. Ela está envolvida na reprodução, comportamento, imunidade, longevidade e regulação da organização social. A interferência por RNA interference é a mais promissora ferramenta para estudos de função gênica, baseada na introdução de duplex de RNA (dsRNA) que induz a degradação de transcritos alvo-específicos. Injeção de dsRNA altera a transcrição de vitelogenina, mas evidências apontam que a ativação do sistema imune em abelhas seja um efeito colateral destaa manipulação. Desenvolvemos um método para o silenciamento do gene codificador de vitelogenina no desenvolvimento pós-embrionário, que minimiza os efeitos da manipulação, onde 0,5 ?g de dsRNA de vitelogenina (dsVg) ou de GFP (controle exógeno, dsGFP) foi oferecido na dieta natural de larvas de segundo estágio, as quais foram mantidas na colônia. Nosso enfoque principal foi a compreensão dos efeitos do silenciamento pós-transcricional de rainhas e operárias de A. mellifera, em especial na fase larval. Operárias adultas reconhecem larvas tratadas e as remove. Mantemos certa distância entre as células de cria que recebiam o tratamento e a remoção de larvas tratadas diminuiu consideravelmente. A expressão de transcritos de vitelogenina em indivíduos sem tratamento e tratados foi analisada no quinto estágio larval de ambas as castas, bem como em operárias adultas de 7 dias e rainhas recémnascidas, utilizando-se PCR em tempo real e a expressão do gene codificador de actina como controle endógeno. Em adultos, controles sem tratamento e dsGFP expressaram quantidades similares de transcritos de vitelogenina. Os grupos alimentados com dsVg tiveram expressão reduzida de vitelogenina, a saber: quinto estágio larval de operárias (91%) e de rainhas (71%), operárias de 7 dias (88%) e rainhas recém-nascidas (70%). O silenciamento da vitelogenina não afetou a morfologia dos adultos, mas sim a fisiologia de larvas de ambas as castas, como nos títulos de hormônio juvenil e concentração de proteínas circulantes na hemolinfa. Concluímos que a ingestão de dsRNA é um método não-invasivo que induz silenciamento gênico e, assim, uma ferramenta eficiente para estudos funcionais pós-genoma. Os mecanismos regulatórios do gene codificador de vitelogenina e seu papel na diferenciação de castas estão em discussão. / Adult bees produce vitellogenin (Vg), the main protein in hemolymph; it is involved in honey bee (Apis mellifera) reproduction, behavior, immunity, longevity and regulation of social organization. Genetic interference mediated by injection of double-stranded RNA (dsRNA) is a powerful tool for the analysis of gene function in Apis mellifera. Injection of dsRNA effectively alters vitellogenin transcription; however, evidence has been found of immune system activation in treated bees, which could be a collateral effect of treatment. Consequently, we developed a non-invasive protocol for disruption of the A. mellifera genes exemplified by vitellogenin mRNA silencing, to understand it, mainly, in the female larval context. Second instar larvae were treated as follows: the treatment group received 0,5 ?g of double-stranded vitellogenin RNA (dsVg) mixed with larval food deposited in the worker brood cells; control group 1 was left to develop without treatment, while control group 2 received dsGFP (Green Fluorescent Protein), as an exogenous control. Treated and control larvae were maintained in the colony until adult emergence. Workers recognized dsRNAtreated larvae and frequently removed them. To circumvent this problem we increased the distance between the treatment groups. Vg gene expression were determined for fifth instar larvae of both castes and for 7 day-old workers and newly-emerged queens, evaluated by quantitative real time PCR, using actin as an endogenous control. For adults, we found that controls, dsGFP- and non-treated bees expressed similar amounts of Vg transcripts. The dsVg-fed groups had significantly reduced Vg gene expression in fifth instar larvae of workers (91%) and queens (71%) and, also, in 7 day-old workers (88%) and newly-emerged queens (70%). Disruption of the Vg gene did not affect adults morphology but physiological larval traits of both castes, as juvenile hormone titre and protein concentration. We conclude that dsRNA ingestion is an effective non-invasive method for inducing knockdown and an efficient approach for post-genome functional studies. The regulatory mechanisms of vitellogenin gene and its rules during caste differentiation are discussed.

Orientadores: Arlete Maria dos Santos Fernandes, Elizabeth João Pavin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T14:21:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SilvadosSantos_Priscilla_M.pdf: 1821889 bytes, checksum: c110ddab19340961ac150d3b6f057876 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O acetato de medroxiprogesterona de depósito (AMPD) é um contraceptivo de uso trimestral, considerado seguro e altamente eficaz, dispensado pelo setor público de vários países entre eles o Sistema Único de Saúde, SUS. Usuárias de contraceptivos hormonais frequentemente se preocupam com efeitos imediatos do uso, entre eles o ganho de peso corporal. Os estudos sobre variação de peso em usuárias de AMPD mostram resultados controversos e, entre os que mostram ganho de peso em gordura em parte das usuárias, não é clara a etiologia do ganho. Poucos estudos avaliaram a ingestão alimentar e gasto energético destas usuárias. Objetivos: Avaliar a ingestão alimentar, ganho de peso e a composição corporal em novas usuárias do contraceptivo acetato de medroxiprogesterona de depósito (AMPD). Desenho do estudo: Ensaio clínico com 20 usuárias de DPMA e 20 de dispositivo intrauterino de cobre (DIU TCu380A), pareadas por idade (±1) e IMC (±1), seguidas por 12 meses. Incluídas mulheres saudáveis, de 18-40 anos, sem antecedentes que pudessem interferir no peso corporal, não obesas e nunca usuárias de AMPD. Avaliou-se a ingestão alimentar (recordatório alimentar), composição corporal (DXA), medidas de cincunferência e dobras cutâneas. As variáveis foram: sociodemográficas, hábitos, valor energético total (VET), gasto energético, peso, IMC, percentagem e medidas de gordura em dobras, relação cintura-quadril e medidas de massa gorda, magra, massa total e razão androide-ginecóide. Resultados: A idade variou de 20-38 anos, mediana de 29 e 30,5 anos, e médias de IMC 24,8 e 24,5kg/m2, respectivamente nos grupos AMPD e DIU. Não houve diferenças no ganho de peso e composição corporal entre os grupos. Aos 12 meses foi observado, no grupo de usuárias de AMPD, aumento nas circunferências da cintura e quadril, aumento significativo do VET associado à maior ingestão de carboidratos, gorduras e proteínas, e do gasto energético associado ao grupo de AMPD. 8/20 usuárias de AMPD ganharam ?5% de peso (média 4,6kg), e apresentaram maiores variações nos depósitos e centralização da gordura em relação às demais usuárias. Conclusões: As usuárias de DPMA apresentaram aumento do apetite aos 12 meses. Estudos deverão comprovar estes resultados em outras populações de mulheres / Resumo: O acetato de medroxiprogesterona de depósito (AMPD) é um contraceptivo de uso trimestral, considerado seguro e altamente eficaz, dispensado pelo setor público de vários países entre eles o Sistema Único de Saúde, SUS. Usuárias de contraceptivos hormonais frequentemente se preocupam com efeitos imediatos do uso, entre eles o ganho de peso corporal. Os estudos sobre variação de peso em usuárias de AMPD mostram resultados controversos e, entre os que mostram ganho de peso em gordura em parte das usuárias, não é clara a etiologia do ganho. Poucos estudos avaliaram a ingestão alimentar e gasto energético destas usuárias. Objetivos: Avaliar a ingestão alimentar, ganho de peso e a composição corporal em novas usuárias do contraceptivo acetato de medroxiprogesterona de depósito (AMPD). Desenho do estudo: Ensaio clínico com 20 usuárias de DPMA e 20 de dispositivo intrauterino de cobre (DIU TCu380A), pareadas por idade (±1) e IMC (±1), seguidas por 12 meses. Incluídas mulheres saudáveis, de 18-40 anos, sem antecedentes que pudessem interferir no peso corporal, não obesas e nunca usuárias de AMPD. Avaliou-se a ingestão alimentar (recordatório alimentar), composição corporal (DXA), medidas de cincunferência e dobras cutâneas. As variáveis foram: sociodemográficas, hábitos, valor energético total (VET), gasto energético, peso, IMC, percentagem e medidas de gordura em dobras, relação cintura-quadril e medidas de massa gorda, magra, massa total e razão androide-ginecóide. Resultados: A idade variou de 20-38 anos, mediana de 29 e 30,5 anos, e médias de IMC 24,8 e 24,5kg/m2, respectivamente nos grupos AMPD e DIU. Não houve diferenças no ganho de peso e composição corporal entre os grupos. Aos 12 meses foi observado, no grupo de usuárias de AMPD, aumento nas circunferências da cintura e quadril, aumento significativo do VET associado à maior ingestão de carboidratos, gorduras e proteínas, e do gasto energético associado ao grupo de AMPD. 8/20 usuárias de AMPD ganharam ?5% de peso (média 4,6kg), e apresentaram maiores variações nos depósitos e centralização da gordura em relação às demais usuárias. Conclusões: As usuárias de DPMA apresentaram aumento do apetite aos 12 meses. Estudos deverão comprovar estes resultados em outras populações de mulheres / Abstract: The depot medroxyprogesterone acetate (DMPA) is a contraceptive used quarterly, considered safe and highly effective, dispensed by the public sector in several countries, including the Health System of Brazil. Hormonal contraceptive users often care about the immediate effects of the use, such as the change in body weight. Studies about weight change in DMPA users show controversial results, and among which show weight gain in fat part of the users, it isn't clear the etiology this gain. Few studies have assessed food intake and energy expenditure of these users. Objectives: To evaluate food intake, weight gain and body composition in new users of depot medroxyprogesterone acetate (DMPA) as a contraceptive. Study design: A clinical trial followed up 20 DMPA users and 20 copper intrauterine device (TCu380A IUD) users, paired for age (±1 year) and body mass index (BMI ± 1kg/m2), for a 12-month period. Healthy, non-obese women aged 18-40 years with no prior conditions that could affect their body weight and who had never used DMPA were enrolled. Food intake (food intake recording), body composition (dual-energy X-ray absorptiometry), circumferences and skinfold thickness were evaluated. Sociodemographic variables, habits, total energy intake, energy expenditure, weight, BMI, body fat percentage, skinfold thickness, waist-to-hip ratio, fat and lean body mass, total body mass and android-gynoid fat ratio were evaluated. Results: Median age was 29 and 30.5 years and mean BMI was 24.8 and 24.5kg/m2 in the DMPA and IUD groups, respectively. There were no differences in weight gain or body composition between the groups. At 12 months, an increase was found in waist and hip circumference in the DMPA users, as well as a significant increase in total energy intake associated with greater carbohydrate, fat and protein intake, and a significant increase in energy expenditure. In the DMPA group, 8/20 users gained ?5% in weight (mean 4.6kg), with more variations in fat deposits and centralization. Conclusions: Appetite was greater in DMPA users at 12 months. Studies should be conducted to confirm these results in other populations of women / Abstract: The depot medroxyprogesterone acetate (DMPA) is a contraceptive used quarterly, considered safe and highly effective, dispensed by the public sector in several countries, including the Health System of Brazil. Hormonal contraceptive users often care about the immediate effects of the use, such as the change in body weight. Studies about weight change in DMPA users show controversial results, and among which show weight gain in fat part of the users, it isn't clear the etiology this gain. Few studies have assessed food intake and energy expenditure of these users. Objectives: To evaluate food intake, weight gain and body composition in new users of depot medroxyprogesterone acetate (DMPA) as a contraceptive. Study design: A clinical trial followed up 20 DMPA users and 20 copper intrauterine device (TCu380A IUD) users, paired for age (±1 year) and body mass index (BMI ± 1kg/m2), for a 12-month period. Healthy, non-obese women aged 18-40 years with no prior conditions that could affect their body weight and who had never used DMPA were enrolled. Food intake (food intake recording), body composition (dual-energy X-ray absorptiometry), circumferences and skinfold thickness were evaluated. Sociodemographic variables, habits, total energy intake, energy expenditure, weight, BMI, body fat percentage, skinfold thickness, waist-to-hip ratio, fat and lean body mass, total body mass and android-gynoid fat ratio were evaluated. Results: Median age was 29 and 30.5 years and mean BMI was 24.8 and 24.5kg/m2 in the DMPA and IUD groups, respectively. There were no differences in weight gain or body composition between the groups. At 12 months, an increase was found in waist and hip circumference in the DMPA users, as well as a significant increase in total energy intake associated with greater carbohydrate, fat and protein intake, and a significant increase in energy expenditure. In the DMPA group, 8/20 users gained ?5% in weight (mean 4.6kg), with more variations in fat deposits and centralization. Conclusions: Appetite was greater in DMPA users at 12 months. Studies should be conducted to confirm these results in other populations of women / Mestrado / Fisiopatologia Ginecológica / Mestra em Ciências da Saúde

Orientador: Antonio de Azevedo Barros Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T22:36:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_HelenRoseCamargo_M.pdf: 2514186 bytes, checksum: 816408a812c2437749c004d35b296357 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Introdução: Mudanças no padrão alimentar e de atividades físicas durante os últimos 30 anos foram propulsoras para o excedente de peso em crianças e adolescentes, pois estimularam o consumo excessivo de energia combinado ao reduzido gasto energético em atividades. Ações preventivas devem ser baseadas em evidências e neste contexto, quantificar as alterações na ingestão e no gasto energético pode servir de base para o desenvolvimento de formas eficazes de prevenção. Objetivos: (1) Realizar uma revisão dos artigos que investigam a magnitude do desequilíbrio energético associado ao aumento do peso em crianças e adolescentes, (2) estimar o grau de desequilíbrio energético de adolescentes eutróficos, com sobrepeso e obesos, e o viés causado pela subnotificação do consumo alimentar. Métodos: Estudo transversal com adolescentes entre 11 e 17 anos. Foram utilizadas as médias de três registros alimentares e três registros de atividade física, preenchidos simultaneamente. A avaliação nutricional foi composta por medida do peso e estatura, cálculo do índice de massa corporal, avaliação do total de tecido adiposo e da sua distribuição. A ingestão energética relatada foi confrontada com as necessidades estimadas pelas Dietary Reference Intakes (2002) e avaliada a subnotificação do consumo. Foi calculado o balanço energético a partir da ingestão energética relatada e estimada. Para a análise dos resultados, os adolescentes foram divididos de acordo com o estado nutricional segundo critérios da World Health Organization (2007). Resultados: Foram avaliados 39 indivíduos eutróficos, 33 com sobrepeso e 32 obesos. Todos os grupos apresentaram baixo gasto energético em atividades físicas, alto tempo despendido em atividades sedentárias, alto consumo de açúcares e alta proporção de gorduras na dieta, independente do estado nutricional. A frequência da subnotificação do consumo alimentar foi significativa entre os adolescentes (58%), principalmente entre os obesos (76%). O balanço energético calculado a partir do consumo alimentar relatado foi positivo nos eutróficos (+240kcal) e nos sobrepesos (+60kcal) e negativo nos obesos (-700kcal). Calculado a partir da ingestão energética estimada, eutróficos, sobrepesos e obesos apresentaram respectivamente consumo de 180kcal, 240kcal e 150kcal acima do gasto energético. Conclusão: Adolescentes ingerem mais calorias do que gastam independente do estado nutricional. Quando se analisa o grau de desequilíbrio energético a partir da ingestão relatada e pelas estimativas teóricas, observa-se que os adolescentes subnotificam o consumo, levando ao paradoxo de que os obesos encontram-se em balanço energético negativo, enquanto os eutróficos encontram-se em balanço energético positivo / Abstract: Introduction: Changes in dietary intake and physical activity patterns during the last 30 years have been drivers for overweight, once estimulated excessive energy intake with reduced energy expenditure on activities. Preventive actions must be based on evidence and in this context, quantify the changes in energy intake and energy expenditure, responsible for changes in body weight, serve as a basis for developing effective ways of prevention. Objective: (1) review the main articles related to energy imbalance and obesity in order to measure the energy excess associated with weight gain in children, (2) estimate the degree of energy imbalance in eutrophic adolescents, overweight and obesity and underreporting of food intake. Methods: Cross sectional study of adolescents between 11 and 17 years. It has been used the average of three food records and three records of physical activity, fulfilled simultaneously. The nutritional assessment has been prepared by measuring the height and weight, calculating the Body Mass Index (BMI) and evaluation of the total and the distribution of adipose tissue. The reported energy intake was confronted with the requirements estimated by the Dietary Reference Intakes (2002) and assessed the underreporting of intake. It has been calculated the energy balance from the reported energy intake also estimated. In order to analyze the results, adolescents were divided according to the nutritional criteria of WHO (2007). Results: It has been studied 39 eutrophic, 33 overweight and 32 obese. All groups had low energy expenditure in physical activity, high time spent in sedentary activities, high consumption of sugars and high proportion of dietary fat, regardless of nutritional status. The frequency of underreporting of dietary intake among adolescents was significant (58%), especially among obese patients (76%). The energy balance calculated from the reported food intake was positive in the eutrophic (+240kcal) and overweight (+60kcal) and negative in obeses (-700kcal). Calculated from the estimated energy intake, normal weight, overweight and obese subjects showed, respectively, consumption of 180kcal, 240 kcal and 150kcal above energy expenditure. Conclusion: When analyzing the degree of energy imbalance from the reported energy intake and the theoretical estimates, it is observed that adolescents underreport their intake, leading to the paradox that the obese are in negative energy balance while eutrophics are in positive energy balance / Mestrado / Saude da Criança e do Adolescente / Mestre em Ciências

Orientador: Patrícia de Oliveira Prada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T14:40:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Penteado_Erica_M.pdf: 2591549 bytes, checksum: 18851851d9a1a75cb2bd1ef2c4f7cb86 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O topiramato (TPM) é utilizado atualmente no tratamento da epilepsia e da enxaqueca por ser antagonista do receptor AMPA/KA e por aumentar o receptor de GABA, desencadeando a estabilização dos canais de sódio e cálcio. O efeito colateral mais conhecido dessa droga é a perda de peso, o aumento do gasto energético e da termogênese. Os hormônios anorexigênicos insulina e leptina regulam a atividade de populações distintas de neurônios que controlam o balanço energético via ativação da via IR/PI3K/Akt e OBR/JAK2/STAT3 respectivamente. Entretanto, desconhece-se se o efeito do TPM na perda de peso é decorrente de alterações da ação insulínica ou de leptina no hipotálamo. Assim, o objetivo do estudo é investigar se o tratamento com essa droga altera a sinalização da insulina e da leptina em hipotálamo de camundongos alimentados com dieta hiperlipídica (DH) ou ração padrão. Camundongos Swiss obesos ou com dieta padrão foram submetidos à cirurgia estereotáxica para inserção de cânula no ventrículo lateral. Após uma semana de recuperação, as cânulas foram testadas, e os animais foram tratados com 110mg/kg/dia de TPM, via gavagem, por sete dias, tendo sua ingestão alimentar e peso corpóreo monitorados diariamente. Observou-se que os animais em DH, tratados com TPM, possuem um menor ganho de peso e de ingestão alimentar do que seus controles, tratados com veículo. Não houve, porém, diferença quanto ao ganho de peso e ingestão alimentar dos animais tratados com a droga não obesos. Observou-se um aumento da termogênese nos animais obesos tratados com TPM pelo aumento da expressão da proteína UCP1, proteína desacopladora mitocondrial do tecido adiposo marrom, e também pelo aumento do consumo de O2 e produção de CO2, marcadores de termogênese. A nível molecular, os animais obesos apresentaram redução da fosforilação do receptor de insulina, IRS-1 e Akt induzidos por insulina e redução da fosforilação de OBR/JAK2/STAT3 induzida por leptina em hipotálamo. Entretanto, o tratamento com TPM reverteu este efeito, sugerindo que o tratamento com a droga induz uma melhora da ação/sinalização insulínica e de leptina no hipotálamo de camundongos obesos. Dessa maneira, sugere-se que o tratamento com TPM, pelo menos a curto prazo, melhora da ação e sinalização da insulina e leptina em hipotálamo, podendo ser um dos mecanismos pelos quais ocorre redução da ingestão alimentar e aumento do gasto energético nesses animais. Essa alteração de ingestão e de termogênese pode contribuir para a redução da adiposidade de camundongos obesos tratados com topiramato. Assim, essa droga parece ter um potencial terapêutico no tratamento da obesidade e da resistência à insulina / Abstract: Topiramate (TPM) is an anticonvulsant drug used for the treatment of epilepsy and prophylaxis of migraine. Weight loss is a frequently side effect reported in patients and animal models treated with TPM. In animal models topiramate may increase levels of hypothalamic corticotropic-releasing hormone (CRH), which is an anorexigenic neuropeptide and may decrease food intake. Some studies showed that topiramate may decrease energy storage, and thus increase energy expenditure and thermogenesis. However, the mechanisms by which TPM reduces body weight are not completely known so far. The hypothalamus is acknowledged as an important regulator of whole-body energy homeostasis by integrating nutrient and hormones signals from central and peripheral inputs. Anorexigenic hormones such as insulin and leptin regulate the activity of distinct neuron populations that control energy balance via IR/PI3K/Akt/Foxo1 pathway or OBR/JAK2/STAT3 pathway respectively. However, if topiramate alters hypothalamic insulin or leptin sensitivity is not known. Thus, in the present study, we asked whether topiramate treatment alters energy balance by altering insulin and leptin action/signaling in the hypothalamus from control and diet-induced obesity (DIO) mice. Our data provide evidence that short treatment with topiramate improves hypothalamic insulin and leptin signaling and action in obese mice. The improvement of hypothalamic insulin and leptin may reduce food ingestion and increase energy expenditure by increases in CRH and TRH mRNA expression. The lower food intake and higher energy expenditure induced by topiramate treatment may reduce obesity in mice on high fat feeding and may be an alternative therapy for obese treatment / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Patrícia de Oliveira Prada / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T18:26:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Areias_MariaFernandaCondes_D.pdf: 914463 bytes, checksum: a03d2c15dfaa827247604af7078cc199 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A insulina tem efeitos anorexigênicos, reduzindo o peso corporal. Entretanto, a maior parte dos estudos teve como foco a ação e sinalização de insulina no hipotálamo. Assim, o primeiro objetivo do trabalho foi investigar a expressão e grau de fosforilação das proteínas da via de sinalização de insulina (IR/Akt), assim como a modulação da ingestão alimentar após estímulo com insulina na região da amígdala em animais controles. No segundo objetivo, investigamos se o bloqueio farmacológico da via da insulina com LY24002 na amígdala alterou a ingestão alimentar em resposta à insulina. O consumo de dieta hiperlipídica tem sido associado à resistência à insulina no hipotálamo. Assim, o terceiro objetivo foi investigar se a obesidade induz resistência à insulina nessa região e em adição investigar se a via inflamatória IKK/NFkB e o ER stress estavam alterados em amígdala de animais obesos. Obervou-se que após a injeção de insulina na amígdala, não houve diferença no peso corpóreo após 24 horas em animais controles. Em relação à ingestão alimentar, quatro horas após a injeção de insulina na amígdala, não houve diferença, entretanto, após 8, 12 e 24 horas houve uma diminuição na ingestão alimentar em animais controles. Após o bloqueio da PI3q com o inibidor farmacológico LY (240002), trinta minutos antes da injeção de insulina, observou se que a insulina não foi capaz de reduzir a ingestão alimentar. Verificou-se, após a injeção de insulina na região da amígdala, um aumento da fosforilação do receptor de insulina (IR) e da AKT em animais controles. Para confirmação da dissecção da amígdala, testou-se a expressão protéica FKBP5, que é expressa especificamente na região da amígdala. Os animais foram submetidos à dieta hiperlipídica e padrão por 3 meses e realizou-se um ITT (Teste Tolerância Insulina) para verificar a resistência à insulina dos animais. Observou-se que os animais obesos ficaram resistentes à insulina. Em relação ao peso corpóreo, houve um aumento de peso entre os obesos. Já em relação à ingestão alimentar, não houve diferença na ingestão após 4, 8, 12 e 24 horas entre os animais obesos. Após a injeção de insulina na região da amígdala, não se observou diferença na fosforilação da AKT de animais obesos quando comparada ao controle. Observou-se um aumento da fosforilação da JNK, da IKK alfa e beta, além da PERK e IRE1 no grupo submetido à dieta hiperlipídica quando comparada ao controle. Sendo assim, concluí-se que: o controle da ingestão alimentar é realizado, pelo menos em parte, pela ação da insulina na amígdala; e que o efeito da insulina na amígdala é via IR/PI3q/Akt. Os animais obesos apresentam resistência à ação da insulina na amígdala e esta é associada à redução da ativação da via IR/Akt. Acredita-se também que a dieta hiperlipídica aumenta a ativação, na amígdala, de serinas quinases que participam da via inflamatória e do stress do retículo endoplasmático, o que pode justificar a resistência à insulina / Abstract: Insulin has anorexigenic effects, reducing body weight. However most part of the studies has focused on hypothalamic insulin signaling. Thus the aim of the study was too investigated if insulin activates IR/Akt pathway in the amygdale and if this activation controls feeding. Besides this, it was investigated if the inhibition of PI3K by LY294002 alters food intake. In obese animals models insulin induces IR/PI3K/Akt pathway is impaired in the hypothalamus. Low grade inflammation characterized at cellular level by an activation of IKK/IKB/NF-KB pathway and JNK activation, and also induce of endoplasmatic reticulum (ER) stress are molecular mechanisms involved in insulin resistance in the hypothalamus of obese roedents. So, it was investigated if high fat diet impairs insulin signaling and action in the amygdale and if low grade inflammation and ER stress were present in this brain region. Food intake is decreased and IR and Akt phosphorylation were increased in response to insulin in the amygdale of control rats. In order to confirm whether the dissections of amygdale were corrected, the membranes with anti-co-chaperone FK506 binding protein 51 (FKBP5) antibody were re-blotted. FKBP51 is expressed in the amygdale region but not in striatum. It was observed the presence of FKBP5 in their membranes, indicating that the dissections of amygdale were appropriated. The administration of LY prior to insulin in the amygdale abolished this effect and also impaired Akt not IR phosphorylation in response to insulin. Body weight was increased in rats fed with HFD compared to control rats. Insulin tolerance test showed that obese rats were insulin resistant in comparison to control rats. Insulin injected in the amygdale did not decrease food intake after 4, 8, 12, 24 h. The IR and Akt phosphorylation were blunted in rats on HFD. The IKK and JNK phosphorylation were also increased in the amygdale of obese rats. In order to evaluate ER stress, it was investigated whether high fat feeding alters the protein expression of RNA-activated protein kinase-like ER resident kinase (PERK) and inositol-requiring kinase (IRE1). PERK and IRE1 protein expression were increased in the amygdale of rats fed a HFD compared to control rats, suggesting increased ER stress in the amygdale of obese rats Summing up, it was suggested that amygdale is an important region for food intake regulation in response to insulin and this regulation is disrupted in obese rats. It was also shown that food intake is regulated in a PI3K/Akt manner in the amygdale similarly to what occurs in the hypothalamus. Besides, data were provided suggesting that obese rats may have low grade inflammation and ER stress in parallel to insulin resistance in the amygdale / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Ciências

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-05T17:02:47Z No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Cynthia Godoy.pdf: 2543225 bytes, checksum: 40707bd0a6660ac374739b3e3d184be1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T17:02:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Cynthia Godoy.pdf: 2543225 bytes, checksum: 40707bd0a6660ac374739b3e3d184be1 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-12 / Dentre os componentes restritivos pacientes submetidos a DGYR podem ter intolerância alimentar, com ou sem complicações. Métodos: O estudo foi realizado por método quantitativo do tipo analítico observacional com pacientes submetidos ao BGYR sem anel no Hospital Universitário do Rio Grande do Norte – Natal/RN no período de julho de 2005 a agosto de 2010.Dos 176 pacientes que estavam sendo acompanhados pela equipe interdisciplinar 47 participaram da pesquisa. Nela foram utilizados dois questionários. Um elaborado por Suter et al e outro para caracterizar a escolaridade e o nível socioeconômico. Na avaliação da tolerância alimentar levou-se em consideração a satisfação do paciente em comer, os tipos de alimentos mais tolerados e a frequência de vômitos e/ou regurgitação. Após aplicação do primeiro questionário um escore foi gerado e caracterizou a tolerância alimentar. Resultados Dos 47 pacientes avaliados, 85,1 % classificaram seu grau de satisfação alimentar como bom ou excelente. Entre os alimentos avaliados quanto à tolerância, a carne vermelha foi a mais citada como difícil ingestão (38,3%) e foi responsável por um impacto significativo no grau de tolerância geral (P<0,001); 48,9% dos participantes apresentaram vômitos raramente, o que resultou em escore médio para tolerância alimentar de 23,02 (2,87±DP).Além disso, o nível socioeconômico apresentou correlação significativa com o grau de tolerância (P=0,032). Conclusão O grau de tolerância alimentar foi melhor que os observados em outros estudos que utilizaram metodologia semelhante. O questionário utilizado mostrou-se útil para avaliar a qualidade alimentar e comparar os resultados após a cirurgia. O nível socioeconômico teve correlação com o grau de tolerância alimentar.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Contamination of water resources has been caused great impact to the environment. The water constitutes the greatest source of food, and its value for health is incalculable. Despite this, the presence of contaminants in water for consumption in Brazil is a topic with few researches and sources of information. The main contamination of drinking water takes place directly by man, by the abusive use of pesticides or environmental contaminants, with high bioaccumulation potential in the environment, such as perfluorinated and organochlorine compounds. These compounds are present in water in trace levels, and appropriate analytical methods in order to demonstrate the suitability of method, ensuring the reliability of the results are needed. This study presents two multi-residue methods for determination of perfluorinated compounds (PFCs) and for the determination of pesticides in samples of tap water, bottled water and groundwater collected in Brazil, Spain and France. For PFCs was used solid phase extraction automated "in line" method with direct injection of the sample coupled to mass spectrometry with detection limits between 0.15 and 8.76 ng/L, and the determination of pesticides has been carried out by solid phase extraction and analysed using different techniques of separation and ionization LC-ESI-MS/MS, GC-MS/EI and GC-MS/NCI, with detection limits between 1.02 and 48.21 ng/L. The obtained results showed that the tap water have high concentrations of PFCs, especially in Brazil, with an average of 15.83 ng/L, followed by Spain and France with 15.33 and 7.73 ng/L, respectively. For pesticide analyzes, the data found demonstrate that the groundwater obtained in Brazil showed the highest concentrations of investigated contaminants in comparison with tap and bottled water. Regarding the risk of exposure by ingestion through drinking water, PFCs represent greater danger (estimated at 54.8, 58.0 and 75.6 ng/person per day in Spain, France and Brazil) in relation to pesticides (10.23, 29.40, 30.11 ng/person per day in Spain, France and Brazil, respectively). However, despite the levels found in the investigated countries, the consumption of drinking water does not poses imminent risks to contamination associated with PFCs and pesticides. / A contaminação dos recursos hídricos tem causado grande impacto para o meio ambiente. A água constitui-se na maior fonte de alimentação humana, e seu valor para a saúde é incalculável. Apesar disso, a presença de contaminantes em águas para o consumo no Brasil é um tema pouco pesquisado e com escassas fontes de informação. As principais contaminações nas águas potáveis ocorrem diretamente pela ação do homem, através do uso abusivo de agrotóxicos ou por contaminantes ambientais, com alta capacidade de bioacumulação no meio ambiente, como os compostos perfluorados e organoclorados. Estes compostos estão presentes nas águas em níveis de traços, portanto, metodologias analíticas adequadas, a fim de demonstrar que o método é apropriado, garantindo a confiabilidade dos resultados são necessários. Este estudo apresenta dois métodos multirresiduais para determinação de compostos perfluorados (PFCs) e para determinação de agrotóxicos em amostras de água de torneira, água engarrafada e água subterrânea coletadas no Brasil, Espanha e França. Para os PFCs foi utilizado o método de extração em fase sólida automatizada em linha com a injeção direta da amostra acoplada a espectrometria de massas, com limites de detecção entre 0,15 e 8,76 ng/L. Já a determinação de agrotóxicos foi realizada a partir de extração em fase sólida e análise por técnicas distintas de separação e ionização, LC-ESI-MS/MS, GC-MS/EI e GC-MS/NCI, com limites de detecção entre 1,02 e 48,21 ng/L. Os resultados obtidos demonstraram que as águas de torneira apresentam alta concentração de PFCs, especialmente no Brasil, com média de 15.83 ng/L, seguidos pela Espanha e França com 15,33 e 7,73 ng/L, respectivamente. Para as análises de agrotóxicos, os dados encontrados evidenciam que as águas subterrâneas obtidas no Brasil apresentaram as maiores concentrações dos contaminantes investigados, em comparação com as águas de torneira e águas engarrafadas. Em relação ao risco de exposição pela ingestão através do consumo de água, os PFCs representam um perigo maior (estimado em 54,8, 58,0 and 75,6 ng/indivíduo por dia na Espanha, França e Brasil) em relação aos agrotóxicos (23,10, 29,40, 30,11 ng/indivíduo por dia na Espanha, França e Brasil, respectivamente). Contudo, apesar dos níveis encontrados, em nenhum dos países investigados, o consumo de água potável coloca em risco iminente a contaminação associada a PFCs e agrotóxicos.

Orientadores: José Rodrigo Pauli, Dennys Esper Corrêa Cintra / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas / Made available in DSpace on 2018-08-26T10:24:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_BarbaradeAlmeida_M.pdf: 2531599 bytes, checksum: 8ab5a3a29ab7a93465c0db3ffb7c5f4e (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A sinalização da insulina no hipotálamo desempenha papel crucial na manutenção da massa corporal. Uma vez ativada, a proteína Akt aumenta a fosforilação do fator de transcrição FoxO1, que é um importante mediador da sinalização insulina no hipotálamo e estimula a transcrição de neuropeptídeos anorexigênicos. Nesse contexto, devido a capacidade de se ligar diretamente a proteína quinase B (Akt), a Mammalian Homolog of Drosophila Tribbles 3 (TRB3) torna-se uma importante molécula de regulação da sinalização da insulina. Em adição, a sinalização do estresse de retículo endoplasmático (estresse de RE) via proteína quinase de retículo endoplasmático (pPERK) e um fator de transcrição mediador de apoptose denominado CHOP, é considerado como mecanismo responsável pela super-expressão de TRB3 em roedores obesos e diabéticos. Por outro lado, o exercício físico é considerado uma das mais importantes estratégias não farmacológicas para a prevenção e/ou tratamento da obesidade. O exercício é capaz de proteger contra a inflamação, o estresse de RE e aumentar a sinalização da insulina no hipotálamo de roedores obesos. Entretanto, os efeitos do exercício agudo na modulação da TRB3 não foram descritos. O objetivo do presente estudo foi investigar o papel do exercício agudo de natação sobre a expressão da TRB3 e associação TRB3/Akt no hipotálamo de roedores obesos. Foram utilizados ratos wistar divididos em três grupos: Lean (controle magro), alimentados com uma ração padrão para roedores, DIO (alimentados com uma dieta rica em gordura), e DIO-EXE (submetidos a um protocolo de natação aguda de exercício). Para reforçar que o aumento da TRB3 está associada com o estresse de RE, e que uma sessão aguda de exercício é capaz de reverter esse aumento, usamos outros três grupos: controle (Lean) recebendo uma infusão de veículo intracerebroventricular (i.c.v.), magros que receberam i.c.v. de thapsigargina (indutor farmaológico de estresse de RE) e magros que receberam i.c.v. de thapsigargina e submetidos a um protocolo de exercício agudo de natação. O protocolo de exercício físico consistiu de uma sessão de natação, composto por dois períodos de três horas, com uma pausa de 45 minutos. Previamente a eutanásia dos animais, foram realizadas as análises da glicemia, insulinemia, sensibilidade à insulina e a mensuração da ingestão alimentar no período de 12h. Quatro horas após a última sessão de exercício, o tecido hipotalâmico foi removido para análise de proteínas de interesse através das técnicas de imunoprecipitação, imunoblot e de PCR em tempo real. Como resultado, verificou-se que o exercício reduziu os níveis de proteína TRB3 e a interação entre a proteína TRB3 e Akt, aumentou a fosforilação de FoxO1 e restaurou os efeitos anorexígenos de insulina no hipotálamo de ratos DIO-EXE. Além disso, nossos resultados revelaram que a i.c.v. de thapsigargina bloqueou os efeitos anorexígenos mediados por insulina em ratos magros, e o exercício físico restaurou a ação da insulina e a fome, assim, os efeitos supressivos do exercício agudo sobre os níveis de proteína TRB3 pode ser relacionada, no mínimo em parte, pela redução do estresse de RE em neurônios hipotalâmicos / Abstract: Hypothalamic insulin signalling plays an important role in the maintenance of body weight. Once activated, Akt increases the phosphorylation of FoxO1, that is an important mediator of insulin signalling in the hypothalamus and stimulates the transcription of the orexigenic neuropeptides. In this context, due to the capacity to bind directly to protein kinase B (Akt), Mammalian Homolog of Drosophila Tribbles 3 (TRB3) is emerging as an important player in the regulation of insulin signalling. In addition, endoplasmatic reticulum (ER) stress signaling (pPERK and CHOP pathway) has been considered the main mechanism responsible by TRB3 overexpression in obese and diabetic rodent. On the other hand, the exercise is considered one of the most important non-pharmacological strategies to prevent and/or treat obesity. The exercise is able to protect against inflammation and ER stress and to increase insulin signaling in the hypothalamus of obese rodents. However, the effects of acute exercise on TRB3 modulation were not described. Thus, the main aim of the present study was to investigate the role of an acute swimming exercise on the hypothalamic TRB3 expression and the TRB3/Akt association in obese rodents. Male Wistar rats were divided randomly into three groups: control (lean) - fed with a standard rodent chow -, DIO - fed with a high fat diet -, and DIO submitted to a swimming acute exercise protocol (DIO-EXE). In order to reinforce that the TRB3 increase is associated with ER stress and that an acute session of exercise is able to reverse this increase, we used other three groups: control (lean) receiving an intracerebroventricular (i.c.v.) infusion of vehicle, lean receiving an i.c.v. infusion of thapsigargin (an ER stress inducer), and lean receiving an i.c.v infusion of thapsigargin and performed a swimming acute exercise protocol. The physical exercise protocol consisted of a swimming acute session, composed of two periods of three-hours with a break of forty-five minutes. Previously the euthanasia of the animals were performed the analyses of the glycaemia and insulinemia serum, insulin sensitivity through of insulin tolerance test and food intake after i.c.v. insulin injection. Four hours after the last exercise session and anesthesia procedures, the hypothalamic tissue was removed for analysis of the interested proteins through of immunoblotting, immunoprecipitation and PCR real time techniques. In this study, we demonstrated that the exercise reduced the TRB3 protein levels and disrupted the interaction between TRB3 and Akt protein, increased the phosphorylation of Foxo1 and restored the anorexigenic effects of insulin in the hypothalamus of DIO rats. Additionally, our results revealed that intrahypothalamic infusion of thapsigargin blocked the anorexigenic effects mediated by insulin in lean rats and physical exercise restored the suppressive action of insulin on appetite, Thus, the suppressive effects of acute exercise on TRB3 protein levels may be related, at least in part, to the decrease of endoplasmatic reticulum stress in the hypothalamic cells / Mestrado / Metabolismo e Biologia Molecular / Mestra em Ciências da Nutrição e do Esporte e Metabolismo

Orientador: Gabriel Forato Anhê / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T14:26:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mesquita_CarolineCosta_D.pdf: 2692158 bytes, checksum: 5f07d43267a2e976f9b9818ec63ba452 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Os ritmos circadianos de ingestão alimentar se estabelecem com objetivo de manter a homeostasia de nutrientes no meio celular, frente a variações intrínsecas ao ciclo claro/escuro. Neste sentido, a gliconeogênese de roedores é suprimida no período noturno, no qual há ocorrência de um surto alimentar bifásico que compreende aproximadamente 90% de todo o aporte calórico diário. Estes eventos apresentam, entre si, uma relação causal, onde o próprio aumento dos nutrientes circulantes, principalmente a glicose, controla a gliconeogênese. O padrão inverso é observado na fase clara do ciclo claro/escuro. Recentes estudos têm demonstrado que, a ativação farmacológica de vias da Unfolded Protein Response (UPR), no sistema nervoso central, resulta em resistência à ação anorexigênica da insulina e, consequentemente, aumento da ingestão alimentar através de um mecanismo não completamente esclarecido. A UPR é uma resposta celular adaptativa que atenua a taxa de tradução de mRNAs, aumenta a proteólise e, deste modo, recupera o fenótipo celular. Esta reposta, quando ativada cronicamente, pode resultar em morte celular programada e resistência à insulina. No entanto, ainda não estava claro se a via do ATF6 da UPR tem, de fato, uma relação com o ritmo alimentar. Para responder a esse questionamento, realizamos análises da variação circadiana das proteínas envolvidas na via da UPR, imunoprecipitações com animais adrenalectomizados, e aplicação de dexametasona subcutânea. Os resultados demonstram que o ATF6 teve um aumento noturno atingindo o máximo de transição da fase clara para fase escura. A partir desse fato, foram realizados ensaios de imunuprecipitações em ratos adrenalectomizados para evidenciar as associações dos complexos CRTC2/ATF6 e CRTC2/CREB1. Contudo, nossos dados suportam a hipótese que os níveis fisiológicos de glicocorticóides podem reprimir a expressão CRH e estimular a ingestão de alimentos, através de uma via dependente de ATF6. Estes eventos, por consequência, poderão reduzir a atividade transcricional do CREB1, sobre o CRH, corroborando com os dados da literatura que apontam que os glicocorticóides endógenos dos roedores (principalmente a corticosterona) exercem um conhecido papel no controle da ingestão alimentar, decorrente principalmente da modulação da expressão do neurotransmissor anorexigênico CRH / Abstract: The circadian cycles of food intake have an important role in the homeostasis of cellular environment, acting over intrinsic changes to the sleep/wake cycle. Therefore, mice gluconeogenesis is suppressed at night where a food outbreak, responsible by 90% of all daily caloric ingestion, occurs. These events are connected by a causal relation, where the current nutrient increasing, mostly glucose, controls gluconeogenesis. The oppose pattern is verified during the light stage of the sleep/wake cycle. Recent studies have indicated that pharmacological activation of Unfolded Protein Response (UPR) pathways, at central nervous system, implies in resistance to the anorectic insulin effect, and, consequently, increase of the food intake activity trough a not fully explained engine. UPR is an adaptive cellular response that reduces mRNA¿s transcriptional rate, increases proteolysis, and therefore, restores cellular phenotype. This response, when constantly enabled, may induce cellular death and insulin resistance. However, it was not clear yet if the UPR¿s ATF6 pathway has, indeed, a connection with the feed rhythm. To answer to this question, we did several analysis of the circadian variation of the proteins connected to the UPR¿s pathway, adrenalectomized animals immunopreciptations and subcutaneous dexamethasone applications. The results demonstrated that ATF6 has a nightly increase and has reached the maximum of transcription rate from the light to the dark cycle. From this point, it was made immunopreciptations tests in adrenalectomized mice to evidence the association between CRTC2/ATF6 and CRTC2/CREB1 complexes. However, our data support the hypothesis that the physiological levels of glucocorticoids may suppress CHR expression and stimulate food intake trough an ATF6 dependent pathway. Those events, therefore, may reduce CREB1¿s transcriptional activity, confirming other studies data that indicates that endogenous mice glucocorticoids (mainly corticosterone) play an well-known role in food intake control, mainly due from modulation of the expression of the anorectic neurotransmitter CRH / Doutorado / Farmacologia / Doutora em Farmacologia

Orientador: Roberto Carlos Burini / Resumo: A baixa disponibilidade energética, apresenta direta relação com problemas de saúde, podendo afetar desde sistema imunológico, muscular, ósseo, endócrino e reprodutor. Geralmente a preocupação com peso corporal por atletas, freqüentemente verificada em dançarinas, leva a mudanças no comportamento alimentar, sendo este considerado como principal fator desencadeador desde quadro. OBJETIVO: O presente estudo teve como objetivo avaliar a influência do ingestão alimentar, composição corporal e indicadores bioquímicos sobre disponibilidade energética em dançarinas de ballet. MÉTODOS: Em estudo de delineamento transversal, 17 dançarinas de ballet (19,1+7,1 anos) foram inicialmente submetidas a avaliação do consumo alimentar, de forma quantitativa e qualitativa (Recordatório de 24 horas e Questionário de Frequência Alimentar), para posterior cálculo dietético e da disponibilidade energética. Adicionalmente foram submetidas a avaliação de composição corporal (Impedância Bioelétrica), do gasto energético de repouso (Fitmate) e análise de indicadores sanguíneos-bioquímicos. Os dados contínuos foram apresentados em média, mediana e desvio padrão e os categóricos em frequências e percentual. Para análise estatística foi utilizada correlação de Pearson e Regressão Múltipla Stepwise. (p<0,05). RESULTADOS: As dançarinas relataram auto percepção do estado de saúde classificada como boa, sendo que 52,9% já apresentaram quadros de amenorréia. Em relação a composição corporal apresentaram % de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre