Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O cultivo de girassol e pimenta como plantas ornamentais envasadas vem se destacando na floricultura por serem produtos inovadores e de grande atratividade, fazendo-se inÃdito a produÃÃo e conduÃÃo de pesquisas com estas espÃcies nas condiÃÃes climÃticas de Fortaleza e CearÃ. Visando a manipulaÃÃo da arquitetura de plantas, na busca de menores alturas e adequados aspectos ornamentais para o cultivo em vasos faz-se necessÃrio a utilizaÃÃo de substÃncias redutoras de crescimento e de substratos para sua produÃÃo. Dentre deste foco, foram realizados dois experimentos com o objetivo de avaliar, nas condiÃÃes climÃticas de Fortaleza, o efeito de trÃs aplicaÃÃes de diferentes concentraÃÃes do redutor de crescimento daminozide em plantas de pimenta e girassol ornamental em vasos contendo como substratos fibra de cÃco (FC) e areia. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetaÃÃo e distribuÃdos em um delineamento inteiramente casualizado seguindo um esquema fatorial 2x5 constituÃdo por dois tipos de substrato (FC e areia) e cinco concentraÃÃes de daminozide (0 (controle), 2, 4, 6 e 8 g.L-1 ) na qual foram aplicadas por trÃs vezes a intervalos quinzenais. Referente ao experimento com pimenta ornamental, a primeira aplicaÃÃo do regulador foi realizada aos 25 DAS, no qual foram analisadas as seguintes variÃveis: Ãndice relativo de clorofila (spad) e trocas gasosas foliares, aos 80 DAS, altura da planta (cm), diÃmetro do caule (mm), massa seca (g) de folhas, caules, raÃzes e frutos, Ãrea foliar (cmÂ), razÃo de Ãrea foliar (cmÂ.g-1), Ãrea foliar especÃfica (cmÂ.g-1), razÃo raiz parte Ãrea, nÃmero, largura, comprimento (mm), relaÃÃo comprimento/largura dos frutos, aos 83 DAS. No experimento com girassol, a primeira aplicaÃÃo foi realizada aos 15 DAS, sendo analisadas as variÃveis: Ãndice relativo de clorofila (spad) e trocas gasosas foliares, aos 37 DAS, altura da planta (cm), diÃmetro do caule (mm), diÃmetro interno do capÃtulo (mm), dias da semeadura atà a antese, nÃmero de capÃtulos por planta, massa seca de folhas, caules e raÃzes (g), Ãrea foliar (cmÂ), razÃo de Ãrea foliar (cmÂ.g-1), Ãrea foliar especÃfica (cmÂ.g-1) e razÃo raiz parte Ãrea, aos 53 DAS.Tanto para pimenta quanto para girassol as concentraÃÃes do regulador foram eficientes em reduzir o porte das plantas nos dois substratos utilizados, notando que as plantas cultivadas na areia mostraram-se com menor altura, vigor e desenvolvimento em relaÃÃo as plantas na FC. Verificou-se em plantas de pimenta que o aumento das concentraÃÃes causou aumentos no diÃmetro de seus caules, reduÃÃo no nÃmero, largura e comprimento dos frutos, em sua Ãrea foliar, aumento na espessura de suas folhas, na qual apresentaram-se com coloraÃÃo verde intensa. Houve interaÃÃo significativa entre substratos e concentraÃÃes de daminozide na condutÃncia estomÃtica das pimenteiras, sendo sua transpiraÃÃo e fotossÃntese lÃquida influenciadas apenas pelas concentraÃÃes do regulador. Em plantas de girassol verificou-se que com o aumento das concentraÃÃes houve reduÃÃes no diÃmetro de seus caules, no diÃmetro interno dos capÃtulos, atrasos em sua antese, folhas mais espessas e com verde mais intenso e reduÃÃes em sua Ãrea foliar. CondutÃncia estomÃtica, transpiraÃÃo e fotossÃntese lÃquida nas plantas de girassol sofreram apenas efeito dos substratos, no qual plantas cultivadas fibra de coco apresentaram maior atividade fotossintÃtica. / The culture of sunflower and pepper as potted ornamental plants has been highlighted in flower farming by being innovative products of great attractiveness. And there is no record on the production and researches with these species under climatic conditions of Fortaleza and Cearà State. Aiming the manipulation of plant architecture and the search for species with lower heights and suitable ornamental traits for the culture in pots it is necessary to use growth-reducing substances and substrates that maximize their production. With this, two experiments were performed with the purpose to evaluate, under the climatic conditions of Fortaleza, the effect of three applications of different levels of the growth regulator daminozide in ornamental plants of pepper and sunflower in pots containing coconut fiber (FC) and sand. The experiments were conducted in greenhouse and distributed into a completely randomized design in a factorial scheme 2x5 composed of two types of substrate (FC and sand) and five levels of daminozide (0 (control), 2, 4, 6 and 8 g.L-1) in which were applied three times at fortnightly intervals. In relation to the ornamental pepper, the first application of the regulator was performed at 25 DAS, being analyzed the following variables: relative chlorophyll index (spad) and leaf gas exchange, at 80 DAS, plant height (cm), stem diameter (mm), dry matter (g) of leaf, stem, root, and fruit, leaf area (cmÂ), leaf area ratio (cmÂ.g-1), specific leaf area (cmÂ.g-1), dry root: dry shoot ratio, number, width, length (mm) and length:width ratio of fruits , at 83 DAS. In the experiment with the sunflower, the first application was made at 15 DAS, being analyzed the variables: relative chlorophyll index and leaf gas exchange, at 37 DAS, plant height (cm), stem diameter (mm), internal diameter of the head (mm), days from sowing to anthesis, number of head per plant, dry matter of leaf, stem and root (g), leaf area (cmÂ), leaf area ratio (cmÂ.g-1), specific leaf area (cmÂ.g1), dry root: dry shoot ratio, at 53 DAS. Both for pepper and sunflower, the levels of the growth regulator were effective to reduce the size of the plants in the two substrates, but in the sand, the plants have had lower height, vigor and development compared with the plants on the FC. In pepper plants, increased levels led to increased stem diameter, reduction in the number, width and length of fruit, in leaf area, increase in leaf thickness, which had intense green color. A significant interaction was detected between the substrates and the levels of daminozide in the stomatal conductance of pepper plants, and the transpiration rate and net photosynthesis were only influenced by the levels of the growth regulator. In sunflower plants, higher levels caused reduction in stem diameter, in internal diameter of head, late anthesis, thicker leaves with intense green color, and reduced leaf area. Stomatal conductance, transpiration, and net photosynthesis of sunflower plants were only affected by substrates, with the plants grown on FC presenting a higher photosynthetic rate.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As plantas sintetizam proteÃnas que possuem propriedades antimicrobianas, podendo ser utilizadas em substituiÃÃo aos defensivos quÃmicos no campo e como fonte de novas drogas para o controle de infecÃÃes bacterianas em humanos. Dentre as diversas estruturas vegetais, ÃrgÃos reprodutivos como as flores parecem ser uma fonte promissora de tais molÃculas ativas contra patÃgenos, particularmente se considerado o seu relevante papel fisiolÃgico, o qual deve ser preservado. Nesse contexto, a presente pesquisa experimental teve como objetivos a prospecÃÃo de proteÃnas com aÃÃo antimicrobiana em flores silvestres e posterior purificaÃÃo, caracterizaÃÃo bioquÃmica e avaliaÃÃo da atividade antimicrobiana de um inibidor de tripsina presente em flores de Cassia fistula Linn. (Chuva-de-ouro). O extrato total das flores de C. fistula foi preparado em tampÃo fosfato de sÃdio 50 mM, pH 7,5. Esse extrato apresentou atividade inibitÃria de tripsina (42,41 Â 0,35 UI/mgP) e de papaÃna (27,10 Â 0,23 UI/mgP), alÃm de mostrar a presenÃa de peroxidase (20,0 Â 0,18 UAP/mgP) e quitinase (1,70 Â 0,21 ηkatal/mgP), estando ausentes as atividades hemaglutinante, β-1,3-glucanÃsica, ureÃsica e proteÃsica. O inibidor de tripsina de C. fistula, denominado CfTI, foi purificado do extrato total por fracionamento com Ãcido tricloroacÃtico (2,5%), seguido de cromatografias de afinidade (anidrotripsina-Sepharose-4B) e fase reversa (Vydac C-18TP 522). CfTI Ã uma glicoproteÃna com massa molecular aparente de 22,2 kDa, pI 5,0 e sequÃncia NH2-terminal exibindo alta similaridade com o inibidor de tripsina da soja do tipo Kunitz (SBTI). O inibidor mostrou-se pouco estÃvel ao calor, reduzindo sua atividade inibitÃria para 23,4% quando incubado a 60 ÂC, durante 15 minutos. No entanto, ele se mostrou bastante estÃvel a variaÃÃes no pH. CfTI (100 Âg/mL) retardou o crescimento dos fungos fitopatogÃnicos de importÃncia agrÃcola, Colletotrichum lindemuthianum e Fusarium solani, alÃm de apresentar atividade antibacteriana frente Ãs bactÃrias patogÃnicas ao homem, Staphylococcus aureus e Enterobacter aerogenes. Os resultados obtidos demonstram o potencial das flores como fonte diversificada de proteÃnas bioativas, evidenciando o inibidor de tripsina presente em flores de C. fistula, fomentando sua aplicaÃÃo biotecnolÃgica frente a fungos e bactÃrias de relevÃncia para a Agricultura e SaÃde. / Plants synthesize proteins that have antimicrobial properties, which can be used to substitute chemical pesticides in agriculture and as new drugs for the control of bacterial infections in humans. Among the various plant structures, the flowers seem to be a promising source of active molecules against pathogens, particularly if considered its important physiological role, which should be preserved. Therefore, this experimental research aimed at the prospection of novel proteins with antimicrobial activity in wild flowers and to subsequent purification, biochemical characterization and evaluation of antimicrobial activity of a trypsin inhibitor present in flowers of Cassia fistula Linn (the golden shower tree). The total extract of C. fistula flowers was prepared in 50 mM sodium phosphate buffer, pH 7.5. This extract presented trypsin inhibitory activity (42.41 Â 0.35 IU/mgP) and papain (27.10 Â 0.23 IU/mgP), besides to the presence of peroxidase (20.0 Â 0.18 UAP/mgP) and chitinase (1.70 Â 0.21 ηkatal/mgP). On the other hand, the hemagglutinating, β-1,3-glucanase, protease and urease activities were not detected. The trypsin inhibitor of C. fistula, named CfTI, was purified by fractionating the crude extract with trichloroacetic acid (2.5%) followed by affinity (anidrotripsina-Sepharose-4B) and reverse phase (Vydac C-18TP 522) chromatographies. CfTI is a glycoprotein with an apparent molecular mass of 22.2 kDa, pI 5.0 and NH2-terminal sequence showing high similarity with Kunitz soybean trypsin inhibitor (SBTI). The inhibitor was not stable to heat, and loss 23.4% when incubated at 60 ÂC for 15 minutes. However, it proved to be stable to changes of pH. CfTI (100 Âg/mL) slowed the growth of pathogenic fungi of agricultural importance, Colletotrichum lindemuthianum and Fusarium solani, and also presented antibacterial activity against the human pathogenic bacteria, Staphylococcus aureus and Enterobacter aerogenes. The results demonstrate the potential of the flowers as a source of diverse bioactive proteins, as the trypsin inhibitor present in C. fistula flowers, promoting its biotechnological potential application against fungi and bacteria of relevance to Agriculture and human health.

Submitted by Eduardo Barros de Almeida Silva (eduardo.philippe@ufpe.br) on 2015-04-17T12:26:06Z No. of bitstreams: 2 Tese Francis Gomes.pdf: 5639938 bytes, checksum: b41b350b8bb203e515d1ec8c699ab414 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T12:26:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Francis Gomes.pdf: 5639938 bytes, checksum: b41b350b8bb203e515d1ec8c699ab414 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-08-26 / CAPES / Schinus terebinthifolius (aroeira-da-praia) e Myracrodruon urundeuva (aroeira-dosertão) são plantas utilizadas na medicina popular para tratamento de doenças humanas causadas por microorganismos. Este trabalho relata 1) o isolamento e caracterização estrutural das lectinas isoladas de folha (SteLL) e entrecasca (SteBL) de S. terebinthifolius e do inibidor de tripsina isolado de entrecasca de S. terebinthifolius (SteBI) e 2) a investigação da atividade antimicrobiana de infusão e extrato metanólico de entrecasca de S. terebinthifolius, de SteLL, SteBL, SteBI e de lectinas de entrecasca (MuBL), folha (MuLL) e cerne (MuHL) de M. urundeuva isoladas de acordo com procedimentos previamente estabelecidos. Bactérias e fungo que causam doenças em humanos e em peixes foram utilizados nos ensaios e os valores de concentrações mínima inibitória (CMI), bactericida (CMB) e fungicida (CMF) foram determinados. Adicionalmente foi avaliado o efeito das lectinas de M. urundeuva na aderência e capacidade invasiva de bactérias em células de peixe (SAF-1) e humanas (HeLa) bem como na produção de produtos extracelulares por bactérias. SteLL, isolada após eluição da coluna de quitina com ácido acético 1 M, é um glicopeptídeo de 14 kDa com atividade hemaglutinante (AH) inibida por N-acetilglicosamina, não afetada por Ca2+ e Mg2+, estável entre 30 e 100 °C e pH 5,0-8,0. SteBL, isolada após eluição da coluna de quitina com ácido acético 1 M, é um peptídeo não-glicosilado de 20 kDa, com maior AH em pH 7,5 e inibida por N-acetilglicosamina e fetuína. SteBI, isolado durante o mesmo procedimento cromatográfico que isolou SteBL, representando a fração protéica ao suporte cromatográfico, é um peptídeo de 16 kDa que inibiu em 89,5% a atividade de tripsina bovina. SteLL apresentou atividade antibacteriana contra Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enteritidis e Staphylococcus aureus. Maiores efeitos bacteriostáticos e bactericidas foram detectadas para S. enteritidis (CMI: 0,45 μg/ml) e S. aureus (CMB: 7,18 μg/ml), respectivamente. SteLL inibiu o crescimento (CMI: 6,5 μg/ml) e matou (CMF: 26 μg/ml) Candida albicans. SteBL mostrou atividade bacteriostática contra E. coli, S. aureus, Enterococcus faecalis (CMI: 200 μg/ml), atividade bactericida contra S. aureus (CMB: 400 μg/ml) e não apresentou atividade antifúngica contra C. albicans. SteBI não apresentou atividade antibacteriana e foi fungicida (CMF: 7,5 μg/ml) contra C. albicans. MuBL, MuHL e MuLL apresentaram atividade bacteriostática e bactericida contra S. aureus, E. coli e Photobacterium damselae subsp. piscicida (CMI e CMB de 1 a 122 e 2 a 225 μg/ml, respectivamente) e bacteriostática contra linhagens de Yersinia ruckeri (CMI entre 34 a 489,8 μg/ml). A infusão da entrecasca de S. terebinthifolius foi bactericida contra S. aureus, E. faecalis e E. coli (CMB de 14,85 a 29,7 mg/mL de proteínas e 0,026 a 0,052 mg/mL de fenóis) e fungicida contra C. albicans (CMF de 3,71 mg/mL de proteínas e 0,007 mg/mL de fenóis). Extrato metanólico mostrou atividade bactericida contra S. aureus e E. faecalis, com CMB de 13,19 e 3,29 mg/mL de proteínas e 4,1 e 1,02 mg/mL de fenóis, respectivamente e não contem atividade antifúngica. As lectinas de M. urundeuva promoveram redução na adesão e capacidade invasiva de S. aureus, E. coli, Y. ruckeri e P. damselae subsp. piscicida em SAF-1 e HeLa e alteração no padrão de produtos extracelulares liberados por S. aureus, E. coli, Y. ruckeri e P. damselae subsp. piscicida. O estudo demonstrou a purificação, caracterização e propriedades biológicas de lectinas ligadoras de quitina e inibidor de tripsina presentes em tecidos de S. terebinthifolius e M. urundeuva. Adicionalmente o estudo confirmou a ação antimicrobiana da infusão da entrecasca de S. terebinthifolius usada pela população para tratar infecções.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-06-15T20:56:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertacão - Petain Jose Ferreira Neto - 2015.pdf: 1935098 bytes, checksum: 58b97940c1a11dda51ddc983a41e4bd9 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-06-28T13:06:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacão - Petain Jose Ferreira Neto - 2015.pdf: 1935098 bytes, checksum: 58b97940c1a11dda51ddc983a41e4bd9 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-28T13:06:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacão - Petain Jose Ferreira Neto - 2015.pdf: 1935098 bytes, checksum: 58b97940c1a11dda51ddc983a41e4bd9 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) Previous issue date: 2015-07-13 / The Cerrado is the second largest biome in Brazil. Such an environment has a different soil several other regions. There are various living beings in this biome, among them, the actinobacteria. They are microorganisms whose cell wall Gram-positive, >50% G+C (guanine + cytosine) in its DNA, produce substances with high economic value. Actinobacteria are major producers of enzymes useful to humans. L-asparaginase enzyme is used in acute limphoblastic leukemias therapy (ALL) also being used in the pre-treatment of foods rich in reducing sugars, inhibiting the formation of acrylamide. The aim of this study was to produce L-asparaginase enzyme isolated from a soil actinobacteria, characterize the enzyme and identify the species of bacteria isolated. A soil sample from Cerrado was collected and submited to a pretreatment. Chemotaxis of Actinoplanetes spores used for the selection of this organism. Nineteen morphspecies were recovered. We used a medium inducing L-asparaginase, and the pink halo around the colony measured. Isolated BC-A.1 produced the largest halo in less time, with an average enzyme content of 4.1. After the completion of the production steps, partial purification and optimization of enzymatic activity, it was realized that the enzyme produced by isolated morphospecies is very efficient at 40 ° C and pH 8.0. Biochemical, physiological and molecular tests were performed, and the observation with optical microscopy and scanning electron microscopy, but it was not possible to identify the species isolated, probably belongs to the genus Streptomyces. / O Cerrado é o segundo maior bioma do Brasil. Tal ambiente possui um solo diferenciado de várias outras regiões. Existem vários seres vivos neste Bioma, dentre estes, as actinobactérias. São micro-organismos cujas células têm parede celular Gram-positiva, >50% de G+C (guanina + citosina) em seu DNA, produzem diversas substâncias com alto valor agregado. Actinobactérias são importantes produtores de enzimas úteis aos seres humanos. A enzima L-asparaginase é utilizada na terapia de Leucemias Linfoblásticas Agudas (ALL) sendo também empregada no pré-tratamento de alimentos ricos em açúcares redutores, inibindo a formação de acrilamida. O objetivo deste estudo foi produzir a enzima L-asparaginase a partir de uma actinobactéria isolada do solo, caracterizar a enzima e identificar a espécie do isolado bacteriano. Uma amostra do solo foi coletada no Cerrado e passou por um pré-tratamento. Foi utilizada a quimiotaxia dos esporos de Actinoplanetes para a seleção deste organismo. Foram recuperadas 19 morfoespécies. Utilizou-se um meio indutor de L-asparaginase, e o halo róseo ao redor da colônia medido. O isolado BC-A.1 produziu o maior halo em tempo menor, com índice enzimático médio de 4,1. Após a realização das etapas de produção, purificação parcial e otimização da atividade enzimática, percebeu-se que a enzima produzida pela morfoespécie isolada é muito eficiente a 40°C e pH 8,0. Foram realizados testes bioquímicos, fisiológicos e moleculares, bem como a observação em microscopia óptica e microscopia eletrônica de varredura, mas não foi possível identificar a espécie do isolado, provavelmente pertence ao gênero Streptomyces.

Neste trabalho foi realizada a síntese de amidas, bem como de ácidos e ésteres borônicos, derivados dos aminoácidos L-cistina e L-cisteína, através de rota sintética simples, curta e de baixo custo, com o intuito de busca e a identificação de novo(s) inibidor(es) do proteassomo 20S. Esta classe de compostos possui estrutura que permite a inserção de diversos grupos funcionais, o que confere versatilidade e a construção de biblioteca de compostos que contém partes hidrofílicas e hidrofóbicas importantes para posterior avaliação inibitória. Para tanto, empregou-se rota sintética química convencional e rota biocatalisada para a formação da ligação amida. Os compostos derivados de L-cisteína foram obtidos via síntese clássica de peptídeos a qual forneceu os compostos desejados em rendimentos de até 85%. Por outro lado, tentativas de obtenção das amidas via biocatálise não se mostraram efetivas. Já amidas derivadas de L-cistina foram obtidas em rendimentos de até 79%, via síntese tradicional e até 100% de conversão através de rota biocatalítica. A inserção do átomo de boro nas estruturas se deu utilizando-se metodologias sintéticas já bem estabelecidas na literatura. Os ésteres borônicos derivados de L-cisteína foram obtidos em bons rendimentos (até 78%), enquanto que não foi possível obter-se compostos de boro derivados de L-cistina. Por sua vez, os compostos contendo ácido borônico na estrutura foram sintetizados via reação de hidrólise dos respectivos ésteres borônicos, em rendimentos moderados (até 34%). Após a obtenção dos compostos contendo grupamentos organoboro realizou-se avaliação inibitória dos mesmos frente ao proteassomo 20S. Valores de IC50 iguais a 52 µM foram obtidos para composto derivado de L-cisteína contendo grupamento éster borônico, que se mostraram inibidores moderados e reversíveis. Ácidos borônicos se mostraram sem capacidade de inibir o proteassomo 20S. Adicionalmente, realizaram-se estudos de modelagem molecular com a finalidade de elucidar os resultados obtidos experimentalmente. Inicialmente realizaram-se cálculos de modelagem molecular através da realização de docking de alguns compostos e após geração de modelo farmacofórico. De maneira geral observou-se que os inibidores derivados da L-cisteína não ocupam a mesma cavidade que o fármaco bortezomibe, o que pode explicar a diferença na atividade dos compostos frente à inibição do proteassomo 20S. Também se observou que, tendo-se a interação dos inibidores com a enzima, a vizinhança do átomo de boro tem grande influência na capacidade inibitória, uma vez que estes grupamentos determinam qual a região da cavidade do proteassomo 20S será ocupada pelo inibidor. / In our study, amides, boronic acids and esters derivatives from L-cysteine and L-cysteine were synthesized by simple, short and inexpensive synthetic route, in order to search for new inhibitor(s) of the 20S proteasome. This class of compounds has a structure that allows inclusion of various functional groups, giving it versatility and allowing the construction of library compounds containing hydrophilic and hydrophobic moieties, important for further evaluation. To this end, we used conventional chemical synthetic route and biocatalysis for peptide bond formation. The compounds derived from L-cysteine were obtained by classical synthesis of peptides which provided the desired compounds up to 85% yields. On the other hand, attempts to obtain the amides via biocatalysis were not effective. However, amides derived from L-cystine were obtained with up to 79% yields via chemical synthesis and conversion up to 100% using biocatalytic route. The insertion of the boron atom in the structures was possible using synthetic methodologies well established in literature. Boronic esters derived from L-cysteine were obtained in good yields (up to 78%), whereas it was not possible to obtain boron compounds derived from L-cystine. In turn, compounds containing boronic acids in the structure were synthesized by hydrolysis reaction of the respective boronic esters in moderate yields (up to 34%). With organoboron compounds in hand, we turned our attention to inhibitory assessment against the 20S proteasome. IC50 up to 52 µM were obtained when L-cysteine boronic ester derivatives were evaluated. These compounds are moderate and reversible inhibitors. L-cysteine boronic acids derivatives have shown not ability to inhibit the 20S proteasome. Additionally, molecular modeling studies were carried out in order to elucidate the results obtained experimentally. Initially molecular modeling calculations were carried out by performing docking experiments of some compounds. Generation of pharmacophoric model calculations was also executed. In general, it was observed that inhibitors derived from L-cysteine do not occupy the same cavity that drug bortezomib, which may explain the difference in the activity of compounds against the inhibition of 20S proteasome. We also observed that, with the interaction of inhibitors and enzyme, the side chains around boron atom has a great influence on inhibitory capacity, since these groups determine which region of the 20S proteasome cavity is occupied by the inhibitor.

A doença de Alzheimer (DA) é a forma mais comum de demência, representando cerca de 80% dos casos. A DA é caracterizada por um processo de declínio progressivo e irreversível das funções cognitivas e da memória, que se estende para a desorganização do comportamento. Atualmente, 46,8 milhões de pessoas em todo o mundo foram diagnosticadas com demência. Embora vários fatores tenham sido implicados na DA, sua etiologia ainda não é completamente conhecida. Do ponto de vista neuropatológico, é observado no cérebro de indivíduos com DA atrofia cortical difusa, presença de grande número de placas senis, emaranhados neurofibrilares, processo inflamatório e perda neuronal. A progressão dos sintomas está associada a mudanças estruturais nas sinapses colinérgicas em certas regiões do cérebro, que consequentemente, apresentam neurotransmissão colinérgica reduzida. Os vários eventos patológicos interligados contribuem para o avanço da doença e direcionam diversas pesquisas na busca por tratamentos multialvos com base no processo multifatorial de DA. Assim o presente trabalho descreve a síntese de derivados híbridos dual binding site de donepezila-tacrina (fármacos inibidores de acetilcolinesterase), com potencial para agir em dois alvos terapêuticos pela (i) inibição da acetilcolinesterase em ambos os sítios ativo e periférico, como demonstrado pelos estudos de modelagem molecular, e (ii) na agregação do peptídeo A? neurotóxico induzido pela acetilcolinesterase, na tentativa de interromper a progressão da doença. A estratégia sintética envolveu a condensação da 5,6-dimetóxiindanona com a unidade 4-piperidinil carbaldeído, a qual forneceu o intermediário 5,6- dimetóxindan-1-ona-4-piperidinil-metileno-1-[(4-cloroquinolin-2-il)metil], seguido de redução da dupla ligação, gerada na reação de condensação anterior, e substituição do átomo de cloro-quinolina por amino para obtenção do produto final, ou manutenção da função olefina, seguido de substituição do átomo de cloro-quinolina por azido ou amino, gerando cinco híbridos estruturalmente correlacionados. Os híbridos foram testados em ensaio de inibição de acetilcolinesterase e butirilcolinesterase pelo método de Ellman, e o híbrido insaturado, contendo a função amino-quinolina foi o mais ativo da série com IC50 na faixa de nanomolar (0,014 ?M). Futuramente, os intermediários da reação e produto final serão submetidos ao ensaio de inibição da agregação do peptídeo A? neurotóxico pelo método da tioflavina T. Neste trabalho, também são descritos os testes de predição in vitro para permeação pela barreira hematoencefálica, bem como sua absorção intestinal, pelo método PAMPA. / Alzheimer\'s disease (AD) is the most commom form of dementia in almost 80% of the cases. AD is a process that causes a progressive and irreversible decline of cognitive functions, memory and includes disorganized behavior. Currently, 46.8 million people live with dementia around the world. Although several factors have been implicated in AD, its etiology is not fully understood. In the point of neuropathologic view, diffuse cortical atrophy, presence of senile plaques, neurofibrillary tangles, inflammatory process and neuronal loss are observed in the brain of the patients with AD. The progression of the disease symptoms is associated with structural changes in cholinergic synapses in certain brain regions and consequent impairment of cholinergic neurotransmission. The various interconnected pathological events contribute for the progression of the disease and drive several studies in the search for multitarget treatments based on the multifactorial process of AD. Therefore, this work describes the synthesis of dual binding site tacrine-donepezil hybrids, with the potential to act in two therapeutics targets by: (i) inhibition of the acetylcholinesterase in both peripheral and active sites, as demonstrated in molecular modeling studies, and (ii) the peptide A? neurotoxic aggregation induced by acetylcholinesterase, in an attempt to stop the progression of the disease. The synthetic strategy was based on the condensation between 5,6- dimethoxy-indanone and the 4-piperidinyl carbaldehyde core, which afforded the 5,6- dimethoxy-indanone-4-piperidinyl-methylene-1-[(4-chloroquinolin-2-yl)methyl] intermediate, followed by the reduction of the olefinic bond, formed in the previous condensation, and substitution of the chloro-quinoline atom by amine group to give the final product, or keeping the olefin function, followed by replacement of the chloro-quinoline atom by azide or amine to produce five structural related hybrids. The hybrids were tested in acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase inhibition assays using Ellman method, and the unsaturated hybrid containing the amino-quinoline function was the most active of the series with IC50 in a nanomolar range (0,014 ?M). The ability of the hybrids to inhibit protein A? neurotoxic aggregation will be assessed by thioflavin T method. In addition, the blood brain and intestinal barrier permeation by PAMPA methodology were also predicted.

Analisou-se por métodos quantitativos e qualitativos o testículo de roedores histricomorfos nas fases, pré-púbere, púbere e adulto da Paca (Cuniculus paca), Cutia (Dasyprocta leporina) e Porquinho-da-índia (Cavia porcellus). Mediante as técnicas de microscopia de luz, microscopia eletrônica de varredura, microscopia eletrônica de transmissão e método estereológico. Verificou-se a influência do Letrozol um inibidor da enzima aromatase nas dosagens de 0,15mg\\kg e 1,0 mg\\kg, sobre a morfologia testicular de pacas macho. Este modelo animal apresenta importância, comercial e científica sendo excelente alternativa para a pesquisa, colaborando com o desenvolvimento de investigações vitais ao homem e aos próprios animais. Os resultados desta investigação demonstraram, que os aspectos qualitativos da morfologia testicular do Porquinho-da-índia, Cutia e de Paca foram semelhante nas fases pré-púbere, púbere e adulta. As avaliações quantitativas do Porquinho-da-índia e Cutia realizados mediante o método estereológico permitiram quantificar parâmetros, sem hipóteses de forma, tamanho, orientação ou distribuição das partículas contadas, demonstrando ser um método imparcial e confiável para ser aplicado em estudos de reprodução. Considerando o estrógeno ser essencial para a função da espermatogênese, o efeito do Letrozol no testículo da paca (Cuniculus paca), sugeriu que a inibição da enzima aromatase mediante a utilização de Letrozol na dosagem de 0,15mg \\kg, sugeriu em um aumento no número das células de Sertoli, refletindo sobre as demais células testiculares, comparando com o testículo basal (controle). O testículo tratado (Letrozol) demonstrou epitélio germinativo íntegro, sendo este dado importante para a reprodução. No animal púbere houve um aumento no número de células de- Sertoli, semelhante ao descrito anteriormente. O epitélio seminífero mostrou com alterações morfológicas, tais como proliferação celular, presença de células germinativas com características apoptóticas, e vacúolos e núcleos em picnose. Estes dados poderão ser úteis para o estudo da Síndrome da Disgenesia testicular / Analysis by quantitative and qualitative methods testicular histricomorfs rodents in phases, pre-pubertal, pubertal and adult paca (Cuniculus paca), agouti (Dasyprocta leporina) and guinea-pig (Cavia porcellus). By means of light microscopy techniques, scanning electron microscopy, transmission electron microscopy, stereological method and the influence of an aromatase inhibitor, the Letrozole in dosages of 0.15 mg\\kg and 1.0 mg\\kg on testicular male morphology paca. This animal model has importance, excellent commercial and scientific alternative to research, contributing to the development of vital research to humans and from animals themselves. The results of this research have shown that the qualitative aspects of testicular morphology guinea-pig, Agouti and paca were similar in pre-pubertal, pubertal and adult stages. Quantitative assessments of the guinea-pig and agouti performed by the stereological method allowed quantify parameters, no change of shape, size, orientation or distribution of particles counted, it is proving to be a partial and reliable method to be applied to reproduction studies. Considering the estrogen is essential for the function of spermatogenesis, the effect of Letrozole in the testis of paca (Cuniculus paca), suggested that inhibition of aromatase enzyme through the use of Letrozole in a dosage of 0.15 mg\\kg suggested in an increase in number of Sertoli cells, reflecting on the other testicular cells, comparing the baseline testis (control). The treaty testis (Letrozole) showed intact germinal epithelium, which is important data for reproduction. In pubertal animals there was an increase in the number of de Sertoli cells, similar to that described above. The seminiferous epithelium showed to morphological changes such as cell proliferation, the presence of germ cells with apoptotic features and vacuoles and nuclei picnosis. These data may be useful for the study of testicular dysgenesis syndrome

A compreensão dos mecanismos que regulam o endométrio e suas implicações clínicas podem contribuir para melhorar as taxas de implantação do embrião humano. Apesar de muitas proteínas e moléculas influenciarem a receptividade endometrial, sua contribuição coordenada para o processo de implantação do embrião ainda é pouco compreendida. Dentre a complexa rede que guia este processo em direção à preparação de um endométrio receptivo se encontram as citocinas, das quais a interleucina-11 (IL-11) e o fator inibidor de leucemia (LIF) desempenham papel essencial. Estudos demonstram que a interrupção das vias de sinalização celular dessas citocinas prejudica ou mesmo impede a implantação, implicando diretamente na fertilidade feminina. Além disso, a hiperinsulinemia afeta negativamente a fertilidade da mulher. Dentro desse contexto, a metformina, fármaco antidiabético, pode exercer efeitos positivos sobre a expressão da IL-11 e LIF, revertendo o possível prejuízo do excesso de insulina sobre a secreção dessas citocinas. Para avaliar esse efeito, utilizou-se um modelo de cultura primária de células estromais de endométrio humano expostas aos hormônios sexuais femininos estrogênio e progesterona, divididas em grupos: controle, metformina, insulina, e associação insulina e metformina. Utilizando RT-qPCR e ensaio imunoenzimático de ELISA, foram avaliadas a expressão gênica e proteica, respectivamente, das duas citocinas. Não foram observadas diferenças entre os grupos. O ensaio de MTT para avaliar a proliferação celular permitiu a verificação da ação antiproliferativa da metformina sobre o grupo hiperinsulinêmico. Embora as hipóteses formuladas nesse estudo encontrem forte sustentação na literatura, no modelo proposto não foi possível encontrar diferenças na expressão da IL-11 e LIF. Dada a complexa regulação de todos os fatores considerados nessa pesquisa e suas múltiplas inter-relações, mais estudos são necessários para esclarecer os mecanismos que orquestram essa complexa rede. / The understanding of the endometrium regulation and its clinical implications can help to improve implantation rates of the human embryo. Although many proteins and molecules influence the endometrial receptivity, their coordinated contribution to embryo implantation process is still poorly understood. Among the complex pathways involved in this process toward the preparation to a receptive endometrium are the cytokines, including interleukin -11 (IL- 11) and leukemia inhibitory factor (LIF) that play an essential role. It has been shown that disruption of cellular signaling pathways of these cytokines impairs or even prevents implantation, direct implications on fertility. Moreover, the hyperinsulinemia can negatively affected women's fertility. Within this context, metformin, an antidiabetic drug, may exert positive effects on the expression of IL-11 and LIF, reversing the possible effects insulin excess. To evaluate this effect, a model of primary culture of human endometrial stromal cells exposed to female sex hormones estrogen and progesterone was used. Cells were divided in groups: control, metformin, insulin, association insulin and metformin. From qRT-PCR and ELISA immunoenzymatic assay gene expression and protein, respectively, of the two cytokines were evaluated. No differences were observed between groups. Additionally, the assay to evaluate cell proliferation MTT found the important antiproliferative action of metformin on hyperinsulinemic group. In the proposed model could not find differences in the expression of IL-11 and LIF. Given the complex regulation of all factors considered in this study and their multiple interrelationships, more studies are required to unravel the mechanisms that orchestrate this complex network.

Diversos estudos buscam identificar novas moléculas com ações regulatórias sobre a via de sinalização da insulina e consequentemente na homeostase da glicose. Assim, este trabalho visa avaliar o potencial de extratos de frutos no controle da homeostase glicêmica. Os frutos avaliados foram o morango (cv. Toianoca, Camarosa, Oso Grande e Camino Real), a amora-preta e a framboesa vermelha, em dois tempos de amostragem, sendo considerado como tempo A1 e tempo A2. As amostras foram caracterizadas quanto ao seu conteúdo de fenólicos totais, conteúdo de antocianinas monoméricas, capacidade antioxidante, avaliada pelos métodos DPPH e ORAC, ácido elágico total, capacidade de inibição da alfa-glicosidase e captação de glicose e lipólise em tecido adiposo de camundongos (ensaio explante). Dentre os frutos, no primeiro tempo de amostragem, a amora-preta e o morango, cv Oso Grande, foram os que apresentaram maior conteúdo de fenólicos totais (62,36 e 34,89 mg AG/g, respectivamente) no entanto não foram mantidos esses valores no segundo tempo de amostragem, com concentração 30% e 60% inferior, respectivamente; e maior concentração de antocianinas monoméricas (45,33 mg/g e 3,09 mg/g, respectivamente). Em relação a inibição da enzima alfa-glicosidase, avaliado em extrato metanólico, o fruto framboesa vermelha e o morango cv. Camino Real foram as que apresentaram alto potencial inibitório nos dois tempos de amostragem (IC50 0,47 mg FT e IC50 0,57 mg FT para framboesa vermelha e IC50 0,50 mg FT e IC50 0,46 mg FT para Camino Real). Quando avaliado os extratos enriquecidos em fenólicos, o valor de IC50 com maior potencial dentre os frutos avaliados foi da amora-preta, nos dois tempos A1 e A2 (0,0023 mg FT e 0,0021 mg FT, respectivamente). Para captação de glicose em tecido adiposo explate, ao utilizar a insulina para estimular a captação de glicose juntamente com o tratamento (extrato), esse estimulo foi efetivo no aumento da captação de glicose somente com as amostras cv. Camino Real e cv. Oso Grande. Isso pode ser explicado pela alta correlação encontrada de antocianinas identificadas no fruto, como pelargonidina-3-O-glicosídeo. Por outro lado, somente a amora-preta A1 aumentou a lipólise em condição basal, mas nenhuma fruta foi eficiente para reduzir a lipólise em condição estimulada pelo isoproterenol. Sendo assim, frutas vermelhas podem ser boas fontes de compostos bioativos, principalmente antocianinas, as quais podem ter corroborado positivamente com os resultados. / Several studies seek to identify new molecules with regulatory actions on the insulin signaling pathway and consequently on glucose homeostasis. Thus, this work aims to evaluate the potential of fruit extracts in the control of glycemic homeostasis. The fruits evaluated were strawberry (cv. Toianoca, Camarosa, Oso Grande and Camino Real), blackberry and red raspberry, in two sampling times, being considered as time A1 and time A2. Fruits were evaluated for total phenolic, monomeric anthocyanins and contents, antioxidant capacity, evaluated by DPPH and ORAC methods, alpha-glycosidase inhibition capacity and glucose uptake and lipolysis in adipose tissue of mice (explant assay). Among the fruits, in the first sampling period, blackberry and strawberry, cv. Oso Grande, showed the highest total phenolic content (62.36 and 34.89 mg AG / g, respectively), with a decrease of the 30% and 60%, respectively, in the second sampling time; and higher monomeric anthocyanins concentration (45.33 mg/g and 3.09 mg/g, respectively). The methanolic extracts of raspberry and the strawberry cv Camino Real (A1 and A2) presented the highest alpha-glucosidase inhibitory potential. Otherwise, the enriched-polyphenol extract of blackberry (A1 and A2) presented the highest potential among the evaluated fruits. Adipose tissue treated with strawberry cv. Camino Real and cv. Oso Grande was effective in increasing glucose uptake stimulated by insulin. This can be explained by the high correlation with the anthocyanins pelargonidin-3-O-glycoside identified in this fruit. In addition, blackberry A1 was the only sample to increase the lipolysis in basal condition, but all other fruits were not effective to decrease lipolysis in stimulated condition. Thus, berries could be a good sources of bioactive compounds to maintain the glucose homeostasis.

Uma das marcantes características morfológicas e funcionais dos crustáceos e de outros artrópodes é a presença de um exoesqueleto que cria uma barreira física para o crescimento desses animais. Nos crustáceos, a muda é um evento cíclico, dividido em 5 estágios, e um deles compreende a troca desse exoesqueleto, permitindo o aumento de tamanho. O início, período e a frequência do ciclo de muda dependem da idade e do sexo do animal e de fatores ambientais e fisiológicos. Hormônios como os ecdiesteróides e o hormônio inibidor da muda produzidos e secretados pelos órgãos Y e X, respectivamente, atuam diretamente no ciclo de muda, porém outros hormônios podem regular, de forma positiva ou negativa, este processo. A melatonina é um hormônio encontrado amplamente no reino animal, porém em crustáceos, diferentemente do que ocorre nos vertebrados, a sua síntese e secreção não estão relacionadas com a presença ou ausência de luz, e seu papel na muda tem sido pouco investigado. Os animais foram aclimatados no laboratório à temperatura 22±2 °C e ciclo claro-escuro 12h:12h LD, sendo os experimentos realizados nesta mesma condição. Considerando o acima exposto, os objetivos do presente trabalho foram (1) verificar a produção de melatonina no siri azul Callinectes sapidus, através da investigação da expressão das enzimas AANAT e ASMT no pedúnculo óptico e hepatopâncreas, bem como os níveis hemolinfáticos da indolamina; (2) avaliar se existe um perfil oscilatório diário na expressão gênica dos fatores relacionados com a muda, CasMIH e CasEcR1; (3) verificar se a manipulação com melatonina exógena influencia essa expressão. Para isso, técnicas de imunohistoquímica, citometria de fluxo, ensaio imunoenzimático e PCR quantitativo foram empregadas. Nossos resultados demonstraram uma oscilação dos níveis hemolinfáticos de melatonina em siris em pré-muda, com pico às 8 horas; entretanto, no estágio de intermuda os níveis deste hormônio foram menores e constantes ao longo de 24 horas. Não pudemos comprovar a presença das enzimas da via de síntese da melatonina, uma vez que os anticorpos utilizados não apresentaram homologia às proteínas de C. sapidus. Quanto à expressão gênica, uma oscilação diária semelhante nos transcritos dos genes CasMIH e CasEcR1 ocorreu no hepatopâncreas, independente do estágio de muda. No pedúnculo óptico a oscilação dos genes em questão também foi semelhante, mas apenas na pré-muda; na intermuda houve entre eles uma relação de anti-fase. A administração de melatonina exógena (10-7 mol/siri) levou à inibição da expressão dos genes em relação ao controle: no caso de CasMIH foi de 99,7% no pedúnculo óptico e 100% no hepatopâncreas e o CasEcR1 sofreu inibição de 77% no pedúnculo óptico e 99% no hepatopâncreas. A presença de melatonina na hemolinfa é um forte indício de que o animal a sintetiza e pode estar atuando no ciclo de muda, uma vez que a administração deste hormônio inibiu a transcrição dos genes relacionados ao processo. Diante disso, fica mais clara a relevância de entender a flutuação de hormônios que não estão classicamente envolvidos no ciclo de muda, essencial para o crescimento dos crustáceos, mas que podem apresentar a função de regular este processo, como a melatonina. Ademais, a melatonina poderá ser uma boa ferramenta a ser utilizada no cultivo do siri-azul, como agente indutor da redução do período de intermuda levando à uma ecdise precoce / One of the remarkable morphological and functional features of crustaceans and other arthropods is the presence of an exoskeleton that creates a physical barrier for the animal growth. In crustaceans, molting is a cyclic event usually divided into five stages, one of them comprising the exoskeleton exchange what thus allows the increase in size. The onset, period, and frequency of the molt cycle depend on the animal age and sex, as well as on environmental and physiological factors. Hormones such as ecdysteroids and the molt-inhibiting hormone produced and secreted by the Y- and X- organ, respectively, exert direct effects on the molt cycle. Nevertheless, other hormones are known to positively or negatively regulate this process, such as melatonin. Melatonin is a hormone widely found in the animal kingdom, but in crustaceans, differently from what happens in vertebrates, its synthesis and secretion are not regulated by the presence or absence of light. In fact, its role in the molting process has been poorly investigated. The animals were acclimated in the laboratory at 22±2 °C and light-dark cycle 12h:12h LD, and the experiments were performed under the same condition. Considering the above, the objectives of this study were to: 1) verify the production of melatonin in the blue crab Callinectes sapidus, through the evaluation of the expression of key enzymes involved in the synthesis of melatonin, AANAT and ASMT, in the eyestalk and hepatopancreas, as well as melatonin levels in the hemolymph; 2) evaluate whether there exists a daily oscillatory profile in gene expression of the related molt factors, CasMIH and CasEcR1; (3) whether the exogenous melatonin influences the expression of the latter genes. To achieve these goals, immunohistochemistry, flow cytometry, immunoenzymatic assay, and quantitative PCR techniques were used. Our results demonstrated an oscillation of the hemolymphatic levels of melatonin in premolt crabs, peaking at 8 AM; however, in the intermolt stage, the levels of this hormone were smaller and constant along 24 hours. We were not able to show the presence of the enzymes involved in melatonin synthesis, since the antibodies used had no homology with C. sapidus proteins. We also demonstrated a daily oscillatory profile of CasMIH and CasEcR1 transcripts in hepatopancreas independently of the molt stage. In the eyestalk the oscillatory profile of both genes was also similar, but only in the premolt stage; in intermolt, an antiphase relationship between both genes was found. The exogenous administration of melatonin (10-7 mol/crab) inhibited the expression of CasMIH by 99.7 and 100% in eyestalk and hepatopancreas, respectively, whereas CasEcR1 was inhibited by 77% and 99%, in the eyestalk and hepatopancreas, respectively, compared to saline-treated animals. The presence of melatonin in the hemolymph is a reliable indicator that the animal synthesizes the hormone, and thus melatonin may influence the molt cycle since it inhibited the expression of molt-related genes. Therefore, the relevance of understanding the oscillation of hormones that are not classically involved in the molt cycle - essential for crustacean growth - but which can regulate the process, becomes evident. From an economic standpoint, melatonin may be a useful tool in culturing blue crab, which ultimately can shorten the intermolt stage period leading to an early ecdysis