A obesidade tem sido apontada como fator de risco para desenvolvimento de carcinoma de mama em mulheres pós-menopáusicas e está associada a pior prognóstico. O objetivo deste estudo foi investigar a relação entre o perfil antropométrico (índice de massa corporal e razão cintura/quadril), frequência e quantidade calórica de consumo alimentar, perfil lipídico e glicemia de jejum com os níveis séricos de adipocinas (Adiponectina e PAI-1) e moléculas de adesão (ICAM-1 e VCAM-1) em uma coorte de mulheres em rastreamento mamográfico sem câncer de mama do Núcleo Mama Porto Alegre (NMPOA). O NMPOA é um projeto de pesquisa público-privado financiado pela Associação Hospitalar Moinhos de Vento em parceria com a Secretaria Municipal de Saúde de Porto Alegre, que tem como objetivo reduzir em 20% a incidência de câncer de mama. Cento e quarenta e cinco mulheres sem câncer de mama participaram deste estudo. Todas foram submetidas à avaliação antropométrica, questionário alimentar e dosagens séricas de adipocinas e moléculas de adesão. Encontramos uma alta prevalência de fatores de risco, incluindo: 39,3% das mulheres com IMC superior a 30 kg/m2; 46,9% com hipertensão arterial; 14,5% com Diabetes Mellitus tipo 2; 31,7% com dislipidemia e 88,3% apresentaram razão cintura/quadril (RCQ) ≥ 0,8. Foi encontrada correlação linear entre os níveis séricos de PAI- 1 e triglicerídeos, entre níveis de séricos de PAI-1 e RCQ, e também correlação linear entre níveis séricos de VCAM-1 e IMC. Em resumo, a amostra de pacientes controle da coorte de prevenção de câncer de Mama do NMPA apresenta perfil de alto risco para doenças relacionadas à obesidade (76% excesso de peso) e níveis séricos dos biomarcadores (PAI-1 e VCAM-1) correlacionados com os indicadores de obesidade e sobrepeso (triglicerídeos, IMC e RCQ). / Obesity has been identified as a risk factor for developing of breast carcinoma in postmenopausal women and is associated with worse prognosis. The study aims to investigate the relationship between anthropometric profile (body mass index and waist/hip ratio), food intake frequency, lipid profile and fasting glycemia with serum levels of adipokines (Apn and PAI-1) and adhesion molecules (ICAM-1 and VCAM-1) in a cohort of women in mammographic screening without breast cancer from the Núcleo Mama Porto Alegre (NMPOA). The NMPOA is a public-private research project funded by the Associação Hospitalar Moinhos de Vento in partnership with the Porto Alegre City Health Department, which aims to reduce by 20% the incidence of breast cancer. One hundred and forty-five women without breast cancer participated in this study. All underwent anthropometric assessment, dietary questionnaire and serum adipokines and adhesion molecules. We found a high prevalence of risk factors in our sample, including 39.3% of women with a BMI above 30 kg/m2; 46.9% had hypertension; 14.5% had type 2 diabetes mellitus, 31.7% had dyslipidemia and 88.3% of women had waist/hip ratio (WHR) an index ≥ 0,8. Linear correlation was found between serum of PAI-1 and triglycerides between levels of serum of PAI-1 and WHR and also linear correlation between serum of VCAM-1 and BMI. In short, the control sample of the NMPA breast cancer prevention cohort presents a high risk profile for obesity-related diseases (76% of overweight or obesity) and serum biomarcadores (PAI-1 e VCAM-1) correlated with indicators of obesity and overweight (triglycerides, BMI, WHR).

Base teórica: O processo de implantação do embrião no ser humano é extremamente complexo e, ao mesmo tempo, essencial para que a mulher possa engravidar. Neste processo, em que o endométrio precisa sofrer uma série de mudanças para tornar-se receptivo, a adequada expressão de MFG-E8 (milk fat globule epidermal growth factor 8), seu receptor a integrina αvβ3 e LIF (leukemia inhibitory factor) parecem ter um papel importante. Além do mais, mulheres com infertilidade e endometriose podem apresentar a falha de implantação como uma grande barreira para obter seu sucesso terapêutico. Objetivos: Avaliar o papel de MFG-E8 e do seu receptor integrina αvβ3 em um modelo de implantação in vitro com uma linhagem celular trofoblástica e outra de epitélio endometrial. Comparar a expressão de MFG-E8, de integrina αvβ3 e de LIF no endométrio de pacientes férteis e inférteis com endometriose durante a janela de implantação. Métodos: No primeiro ensaio, utilizando-se uma linhagem celular bem diferenciada de adenocarcinoma de endométrio (células Ishikawa) e uma linhagem de coriocarcinoma de trofoblasto, o modelo in vitro de implantação humana foi estabelecido. Para investigação do impacto do bloqueio de MFG-E8 e integrina αvβ3, ambas linhagens celulares foram pré-tratadas com anticorpos contra estas proteínas em diferente concentrações antes do ensaio de adesão. No ensaio subsequente, para comparar a expressão de MFG-E8, de integrina αvβ3 e de LIF no endométrio humano, foram realizadas biópsias no período da janela de implantação (LH+7 a LH+10) com cateter de Pipelle. As amostras foram submetidas a imunohistoquímica, e analisadas através do HSCORE. Resultados: Na avaliação in vitro observamos que as células Ishikawa pré-tratadas com anticorpo anti-MFG-E8 causaram diminuição da adesão das esferas Jar dose-dependente. Por outro lado, o pré-tratamento das esferas Jar não resultou em diminuição significativa da adesão. Pré-tratamento com anticorpos anti-integrina αvβ3, tanto de células Ishikawa como de esferas Jar, causaram inibição significativa, dose-dependente, da adesão das esferas. A análise imunohistoquímica das biópsias realizadas durante a janela de implantação mostrou uma expressão aumentada de MFG-E8 em pacientes com endometriose e infertilidade. Além do mais, houve expressão diminuída de LIF no grupo em estudo. Contudo, não houve diferença estatisticamente significativa na expressão de integrina αvβ3 entre os grupos em estudo. Conclusão: Este estudo demonstrou que, quando se bloqueia MFG-E8 ou seu receptor integrina αvβ3 em células Ishikawa em um modelo in vitro, ocorre uma diminuição de adesão das células Jar. Além do mais, bloqueando-se a integrina αvβ3 nas esferas Jar, também ocorre uma diminuição da adesão destas nas células Ishikawa. No entanto, quando estudamos o endométrio in vivo de pacientes com endometriose e infertilidade, encontramos a expressão aumentada de MFG-E8 e diminuída de LIF durante a janela de implantação no endométrio. / Background: The human implantation process is very complex and, at the same time, it is essential for women to achieve pregnancy. In this process, where the human endometrium must go through a lot of changes in order to become receptive, an adequate expression of MFG-E8 (milk fat globule epidermal growth factor 8), integrin αvβ3 and LIF (leukemia inhibitory factor) appear to play an important role. Furthermore, women with endometriosis and infertility may have in their implantation process the key to achieve pregnancy. Objectives: To investigate the role of MFG-E8 and its receptor integrin αvβ3 in the attachment of trophoblast cells to the endometrial epithelium, in an in vitro model. To compare endometrial expression of MFG-E8, integrin αvβ3 and LIF between fertile patients and patients with endometriosis and infertility during the window of implantation. Methods: In our first assay, by using a well-differentiated endometrial adenocarcinoma cell line (Ishikawa cells) and choriocarcinoma human trophoblast cells (Jar cells), an in vitro model mimicking human implantation was established. To investigate the impact of blocking MFG-E8 and integrin αvβ3, the cell lines were pretreated with antibodies against those proteins at different concentrations before the attachment assay. Moreover, to compare endometrial expression of MFG-E8, integrin αvβ3 and LIF, endometrial biopsies were performed during the window of implantation (LH+7 to LH+10) with the Pipelle catheter. The samples were submitted immunochemistry, and analyzed with HSCORE. Results: Pretreatment of Ishikawa cells with anti-MFG-E8 antibody caused a dosedependent and significant inhibition of attachment is our in vitro assay. On the other hand, pretreatment of Jar spheroids did not result in a significant effect on the attachment rate. Pretreatment of Ishikawa cells as well as Jar spheroids with anti-integrin avb3 antibodies resulted in a dose-dependent, significant inhibition of attachment. The immunochemistry analysis of the endometrial biopsies performed during the window of implantation showed increased MFG-E8 expression in patients with endometriosis and infertility. Moreover, there was lower LIF expression in the study group. Conclusion: This study showed that blocking MFG-E8 and its receptor integrin αvβ3 in Ishikawa cells diminishes Jar spheroid attachment in an in vitro model. Moreover, blocking integrin αvβ3 in the trophoblastic cells also diminished their attachment to the Ishikawa monolayer. Nevertheless, when we studied the endometrium of patients with endometriosis and infertility, we saw an increased expression of MFG-E8 and decreased expression of LIF during the window of implantation.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Aranhas do gênero Loxosceles, são responsáveis por acidentes em todo o mundo, com grande importância clínica no Sul do Brasil. Os venenos destas aranhas são compostos por diversas toxinas, entre elas proteínas, responsáveis pelo quadro conhecido como loxoscelismo. No intuito de descrever o perfil transcricional da glândula produtora de veneno da aranha Loxosceles intermedia geramos uma biblioteca de cDNA bastante ampla e seus transcritos foram funcionalmente caracterizados. Após o processamento inicial das sequências, 1.843 ESTs (Expressed Sequence Tags) apresentavam qualidade suficiente para as análises posteriores. Estas sequências foram montadas em 538 clusters, sendo que 281 eram singletons. Após análises de similaridade, mais de 50% das ESTs demonstraram algum grau de semelhança com proteínas conhecidas. As análises de similaridade também demonstraram que os transcritos que codificavam para toxinas, perfaziam 43% de todas as sequências e abrangem uma parte significativa das ESTs. As toxinas mais frequentes foram anotadas como pertencentes à família LiTx de toxinas inseticidas. As fosfolipases-D e as metaloproteases semelhantes à astacinas perfazem, cada uma, cerca de 9% do total de transcritos. Componentes tóxicos tais como inibidores de serino-proteases, hialuronidase e proteínas alergênicas foram também identificadas, porém com menor representação. Quase 10% das ESTs codificam para proteínas envolvidas em processos celulares. O presente trabalho descreve também as etapas para clonagem, expressão heteróloga e purificação de um transcrito semelhante a um inibidor de serino-protease, identificado na biblioteca de cDNA. É sabido que proteínas desta família apresentam um grande potencial de aplicação como drogas antitrombóticas, atuando como agentes terapêuticos que influenciam a atividade de fatores de coagulação. Esses dados fornecem uma visão global do perfil de expressão da glândula de veneno de L. intermedia, revelam diferenças significantes entre venenos de aranhas do gênero Loxosceles e descrevem a produção de uma nova toxina recombinante. / Loxosceles genus spiders are responsible for accidents all over the world and have clinical importance in the South of Brazil. The venom of these spiders is made up of several toxins, including proteins, which are responsible for the clinical pattern called loxoscelism. To describe the transcriptional profile of the L. intermedia venom gland, we generated a wide cDNA library, and its transcripts were functionally and structurally analyzed. After initial analyses, 1,843 ESTs produced readable sequences that were grouped into 538 clusters, 281 of which were singletons. Nine hundred eighty-five reads (53% of total ESTs) matched to known proteins. Similarity searches showed that toxinencoding transcripts totalize 43% of the total library and comprise a great number of ESTs. The most frequent toxins were from the LiTx family, which are known for their insecticidal activity. Both phospholipase-D and astacin-like metalloproteases toxins account for approximately 9% of total transcripts. Toxins components such as serine proteases, hyaluronidases and venom allergens were also found but with minor representation. Almost 10% of the ESTs encode for proteins involved in cellular processes. This work also describes the stages for cloning, heterologous expression and purification of a cDNA similar to a protease inhibitor identified in the cDNA library. It is known that proteins belonging to this family have an application potential as antithrombotic drugs, acting as therapeutic agents that influences the activity of coagulation factors. These data provide an important overview of the L. intermedia venom gland expression scenario, revealed significant differences from profiles of other spiders from the Loxosceles genus and describe the production of a novel recombinant toxin. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

LIMA, I. B. Uso do regulador de crescimento daminozide no cultivo de pimenta (Capsicum annuum L.) e girassol (Helianthus annuus l.) ornamental em vasos com fibra de côco e areia. 2012. 113 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-07-09T20:40:32Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_iblima.pdf: 1587295 bytes, checksum: 2e6b722c0df512f9f122efcac4175b29 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-07-16T20:20:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_iblima.pdf: 1587295 bytes, checksum: 2e6b722c0df512f9f122efcac4175b29 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-16T20:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_iblima.pdf: 1587295 bytes, checksum: 2e6b722c0df512f9f122efcac4175b29 (MD5) Previous issue date: 2012 / The culture of sunflower and pepper as potted ornamental plants has been highlighted in flower farming by being innovative products of great attractiveness. And there is no record on the production and researches with these species under climatic conditions of Fortaleza and Ceará State. Aiming the manipulation of plant architecture and the search for species with lower heights and suitable ornamental traits for the culture in pots it is necessary to use growth-reducing substances and substrates that maximize their production. With this, two experiments were performed with the purpose to evaluate, under the climatic conditions of Fortaleza, the effect of three applications of different levels of the growth regulator daminozide in ornamental plants of pepper and sunflower in pots containing coconut fiber (FC) and sand. The experiments were conducted in greenhouse and distributed into a completely randomized design in a factorial scheme 2x5 composed of two types of substrate (FC and sand) and five levels of daminozide (0 (control), 2, 4, 6 and 8 g.L-1) in which were applied three times at fortnightly intervals. In relation to the ornamental pepper, the first application of the regulator was performed at 25 DAS, being analyzed the following variables: relative chlorophyll index (spad) and leaf gas exchange, at 80 DAS, plant height (cm), stem diameter (mm), dry matter (g) of leaf, stem, root, and fruit, leaf area (cm²), leaf area ratio (cm².g-1), specific leaf area (cm².g-1), dry root: dry shoot ratio, number, width, length (mm) and length:width ratio of fruits , at 83 DAS. In the experiment with the sunflower, the first application was made at 15 DAS, being analyzed the variables: relative chlorophyll index and leaf gas exchange, at 37 DAS, plant height (cm), stem diameter (mm), internal diameter of the head (mm), days from sowing to anthesis, number of head per plant, dry matter of leaf, stem and root (g), leaf area (cm²), leaf area ratio (cm².g-1), specific leaf area (cm².g1), dry root: dry shoot ratio, at 53 DAS. Both for pepper and sunflower, the levels of the growth regulator were effective to reduce the size of the plants in the two substrates, but in the sand, the plants have had lower height, vigor and development compared with the plants on the FC. In pepper plants, increased levels led to increased stem diameter, reduction in the number, width and length of fruit, in leaf area, increase in leaf thickness, which had intense green color. A significant interaction was detected between the substrates and the levels of daminozide in the stomatal conductance of pepper plants, and the transpiration rate and net photosynthesis were only influenced by the levels of the growth regulator. In sunflower plants, higher levels caused reduction in stem diameter, in internal diameter of head, late anthesis, thicker leaves with intense green color, and reduced leaf area. Stomatal conductance, transpiration, and net photosynthesis of sunflower plants were only affected by substrates, with the plants grown on FC presenting a higher photosynthetic rate. / O cultivo de girassol e pimenta como plantas ornamentais envasadas vem se destacando na floricultura por serem produtos inovadores e de grande atratividade, fazendo-se inédito a produção e condução de pesquisas com estas espécies nas condições climáticas de Fortaleza e Ceará. Visando a manipulação da arquitetura de plantas, na busca de menores alturas e adequados aspectos ornamentais para o cultivo em vasos faz-se necessário a utilização de substâncias redutoras de crescimento e de substratos para sua produção. Dentre deste foco, foram realizados dois experimentos com o objetivo de avaliar, nas condições climáticas de Fortaleza, o efeito de três aplicações de diferentes concentrações do redutor de crescimento daminozide em plantas de pimenta e girassol ornamental em vasos contendo como substratos fibra de côco (FC) e areia. Os experimentos foram conduzidos em casa de vegetação e distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado seguindo um esquema fatorial 2x5 constituído por dois tipos de substrato (FC e areia) e cinco concentrações de daminozide (0 (controle), 2, 4, 6 e 8 g.L-1 ) na qual foram aplicadas por três vezes a intervalos quinzenais. Referente ao experimento com pimenta ornamental, a primeira aplicação do regulador foi realizada aos 25 DAS, no qual foram analisadas as seguintes variáveis: índice relativo de clorofila (spad) e trocas gasosas foliares, aos 80 DAS, altura da planta (cm), diâmetro do caule (mm), massa seca (g) de folhas, caules, raízes e frutos, área foliar (cm²), razão de área foliar (cm².g-1), área foliar específica (cm².g-1), razão raiz parte área, número, largura, comprimento (mm), relação comprimento/largura dos frutos, aos 83 DAS. No experimento com girassol, a primeira aplicação foi realizada aos 15 DAS, sendo analisadas as variáveis: índice relativo de clorofila (spad) e trocas gasosas foliares, aos 37 DAS, altura da planta (cm), diâmetro do caule (mm), diâmetro interno do capítulo (mm), dias da semeadura até a antese, número de capítulos por planta, massa seca de folhas, caules e raízes (g), área foliar (cm²), razão de área foliar (cm².g-1), área foliar específica (cm².g-1) e razão raiz parte área, aos 53 DAS.Tanto para pimenta quanto para girassol as concentrações do regulador foram eficientes em reduzir o porte das plantas nos dois substratos utilizados, notando que as plantas cultivadas na areia mostraram-se com menor altura, vigor e desenvolvimento em relação as plantas na FC. Verificou-se em plantas de pimenta que o aumento das concentrações causou aumentos no diâmetro de seus caules, redução no número, largura e comprimento dos frutos, em sua área foliar, aumento na espessura de suas folhas, na qual apresentaram-se com coloração verde intensa. Houve interação significativa entre substratos e concentrações de daminozide na condutância estomática das pimenteiras, sendo sua transpiração e fotossíntese líquida influenciadas apenas pelas concentrações do regulador. Em plantas de girassol verificou-se que com o aumento das concentrações houve reduções no diâmetro de seus caules, no diâmetro interno dos capítulos, atrasos em sua antese, folhas mais espessas e com verde mais intenso e reduções em sua área foliar. Condutância estomática, transpiração e fotossíntese líquida nas plantas de girassol sofreram apenas efeito dos substratos, no qual plantas cultivadas fibra de coco apresentaram maior atividade fotossintética.

Submitted by Maria Creuza Silva (mariakreuza@yahoo.com.br) on 2016-04-14T19:51:38Z No. of bitstreams: 1 Disse MP. Silvia Helena L. Rodrigues. 2015.pdf: 548263 bytes, checksum: 6d3ed80388e26635a912e50c92938c23 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Creuza Silva (mariakreuza@yahoo.com.br) on 2016-04-18T12:22:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Disse MP. Silvia Helena L. Rodrigues. 2015.pdf: 548263 bytes, checksum: 6d3ed80388e26635a912e50c92938c23 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T12:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disse MP. Silvia Helena L. Rodrigues. 2015.pdf: 548263 bytes, checksum: 6d3ed80388e26635a912e50c92938c23 (MD5) / As coagulopatias hereditárias são doenças hemorrágicas decorrentes da deficiência quantitativa/qualitativa de um ou mais fatores de coagulação sanguínea, sendo as hemofilias as mais importantes e frequentes. Os pacientes com hemofilia podem desenvolver anticorpos (inibidores) contra o fator deficiente, o que constitui em um desafio terapêutico. O tratamento das crises hemorrágicas em pacientes com inibidor é realizado com agentes bypassing. Este estudo é importante para se ampliar o conhecimento em base epidemiológica dos pacientes que utilizaram agentes bypassing possibilitando o aprimoramento da assistência prestada. Objetivo: Analisar o perfil de utilização dos agentes bypassing distribuídos pelo Ministério da Saúde durante os anos de 2012 e 2013. Metodologia: Trata-se de um estudo descritivo, transversal, de abordagem quantitativa, com base nos dados dos pacientes cadastrados no sistema Hemovida Web Coagulopatias, que utilizaram agentes bypassing nestes anos. Resultados: o perfil de utilização dos agentes bypassing é representado pelos pacientes na faixa etária até 29 anos (69,5%), ensino fundamental incompleto (23,8%), sexo masculino (83,8%), raça branca (43,6%), residentes na região sudeste (48,9%), com Hemofilia A (63%), forma grave da hemofilia (71%), presença de inibidor positiva (56,9%) e inibidor de altos títulos (60,5%). Embora tenha sido evidenciada a utilização off-label (2,8%) para o tratamento de coagulopatias não descritas na bula destes medicamentos. Considerações: Embora tenha sido evidenciado a utilização off-label, o perfil delineado está de acordo com os achados da literatura sobre os fatores associados ao desenvolvimento de inibidores, principal indicação de uso de agentes bypassing, e com as recomendações do Ministério da Saúde.

Orientador: Prof. Dr. Sergio Daishi Sasaki / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2015. / Embora a doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC)seja uma das maiores causas de morbidade e mortalidade no mundo, ainda não há tratamento que reverta àdestruição do parênquima pulmonarobservadas nestes pacientes. O desenvolvimento de modelos experimentais,que mimetizam as características e os mecanismos fisiopatológicos envolvidos no enfisema,por meioda instilação de uma protease,éde extrema relevância uma vez que podem contribuirpara o desenvolvimento de futuras estratégias terapêuticas. Uma das causas atribuídas para o aparecimento da doença éo tabagismo, no entanto, fatores genéticose fatoresambientais como a poluição também estão envolvidos com o aparecimento da doença em humanos. Algumas enzimas estão envolvidas no processo de instalação da doença como as metaloproteases 9 e 12 e as serinoproteases, especificamente a elastase de neutrófilos humana. Em um projeto anterior,utilizando o inibidor de serinoproteases recombinante rBmTI-Ano modelo de indução deenfisema pulmonar em camundongos,foi observado que esta molécula é capaz de interferir na progressão do enfisema pulmonar, o rBmTI-A é um inibidor pertencente à família Kunitz-BPTI e possui dois domínios inibitórios com atividade sobre tripsina, calicreína plasmática humana e elastase de neutrófilos humana. Neste projeto,foi utilizadooinibidor rBmTI-6,também pertencente à família Kunitz-BPTI,porém contendo três domínios inibitórios com atividade sobre tripsina bovinae plasmina. Uma amostra de rBmTI-6 previamente purificada por cromatografia de afinidadeem tripsina-sepharosefoiaplicada emuma cromatografia de troca iônica, coluna Resource Q,que separou osdomínios inibitóriosem domínio 1 (rBmTI-6-d1)e domínios 2e 3 (rBmTI-6-d2/3). O rBmTI-6-d1teve suaconcentraçãoativa determinada em 1,5µMe a constante de inibição (Ki)sobre tripsina bovina determinado em 1,95nM, este domínio purificado apresentou 77% de atividade específica (inibidor ativo em relação à proteína total da amostra). O rBmTI-6-d1 foi utilizado em um experimentono modelo experimental de enfisema pulmonar.Neste experimento o enfisema foi induzido utilizando a instilação por via nasal de elastase pancreática porcina(PPE)e 1 hora depois da instilaçãocom PPEfoi feito o tratamento coma instilaçãorBmTI-6-d1. Vinte e um dias após a instilação de PPEe rBmTI-6-d1 foi feita a analise da função respiratória para os14 parâmetros de elastância tecidual (Htis),resistência tecidual (Gtis)eresistência das vias aéreas (Raw). Animais induzidos ao enfisema e tratados com o rBmTI-6-d1apresentaram valores de elastância tecidual (Htis)e resistência tecidual (Gtis) próximasaosvalores dosgrupos controles, cujos animais não foram induzidos ao enfisema, os animais não tratados com rBmTI-6-d1 apresentaram aumento de Htis e Gtis. Para o parâmetro de resistência das vias aéreas o resultado mostra uma tendência de redução deste parâmetro para animais tratados com rBmTI-6-d1. Os resultados da medida do intercepto linear médio (Lm), apontam uma tendência ao grupo que foi induzido ao enfisema e tratado com rBmTI-6-d1 de redução da Lm em comparação com o grupo induzido ao enfisema e não tratado.Estes resultados sugerem que o inibidor teve papel de prevenir a instalação do enfisema pulmonar nos animais tratados com rBmTI-6-d1. / Although chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is a major cause of morbidity and mortality worldwide, there is no treatment to reverse the destruction of the lung parenchymaobserved in these patients. The development of experimental models that mimic the characteristics and pathophysiological mechanisms of emphysema by instillationone protease is extremely important since it can contribute to the development of future therapeutic strategies. One of the causes associated with the onset of the disease is smoking, however, genetic factors and environmental factors such as pollutionare also involved in disease in humans. Some enzymes are involved in the installation process of the disease like metalloproteases 9 and 12 and serineproteases, specifically human neutrophil elastase. In a previous study using recombinant serineprotease inhibitor rBmTI-A in a pulmonary emphysema model with mice was observed that this molecule is capable of interfering with the progression of the disease, rBmTI-A is an inhibitor belongingto the Kunitz-BPTI family and has two inhibitory domains with activity towardtrypsin, human plasmakallikreinand human neutrophil elastase. In this project, a sample of rBmTI-6 inhibitor also belongs to the Kunitz-BPTI family, previously purified by affinity chromatography on trypsin-sepharose was used, the sample was purified again using an ion exchange chromatography with Resource Q column, where it was observed a separation of the inhibitory domains. The domain 1 (rBmTI-6-d1) had their active concentration determined in 1,5?M. The rBmTI-6-d1 had a Ki on certain bovine trypsin in 1,95nM this purified domain had 77% specific activity (active inhibitor in the total protein of the sample). The rBmTI-6-d1 was selectedfor the experiments with an experimental model of pulmonary emphysema. In these experiments emphysema was induced by intranasal instillation of porcine pancreatic elastase (PPE) and 1 hour after PPE instillation, the treatment with rBmTI-6-d1. Twenty-one days after instillation of PPE and rBmTI-6-d1 was made the analysis of respiratory function to tissue elastance parameters (Htis), tissue resistance (Gtis) and airway resistance (Raw). Animals induced emphysema and treated with rBmTI-6-d1 showedtissue elastance values (Htis) and tissue resistance (Gtis) close to the values of the control groups, whose animals were not induced emphysema, untreated animals with rBmTI-6-d1 increased by Htis and Gtis. For the air way resistance the result shows a tendency to decrease in this parameter for animals treated with rBmTI-6-d1. The results of measuring the mean linear intercept (Lm), show a tendency to emphysema group that was induced and treated with -rBmTI6-d1 Lm reduced in comparison with the experimental group and the untreated emphysema. These results suggest that the inhibitory role was to prevent the development of pulmonary emphysema in animals treated with rBmTI6-d1.

Orientador: Prof. Dr. Sergio Daishi Sasaki / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2017. / O Feijão Caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp) é uma leguminosa com importante representatividade econômica e nutricional, especialmente no Brasil. Inibidores de serino proteases, como a tripsina, já foram descritos na espécie, assim como em outras plantas. No entanto, nesta espécie, ainda não foram identificados inibidores que apresentem atividade sobre a elastase de neutrófilos humana (HNE), protease envolvida em muitos processos patológicos, como na instalação e progressão da doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). Nesse estudo, purificamos um inibidor a partir do extrato protéico de Vigna unguiculata que apresenta atividade sobre HNE. Inicialmente, foi realizado o processo de extração alcalina de proteínas, seguido de três passos cromatográficos distintos, utilizando as colunas Hitrap-Q (Troca-iônica), Source15RPC (Fase-Reversa) e ACE18 (Fase-Reversa). Essas etapas foram acompanhadas por testes de atividade inibitória, utilizando os substratos fluorogênicos Meo-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-MCA (Elastase) e Z-Phe-Arg-MCA (Tripsina), além de ensaios da quantificação de concentração total de proteínas. Para determinar a massa do inibidor, foram utilizadas as técnicas de espectrometria de massa por MALDI-TOF e SDS-PAGE, o inibidor apresenta massa molecular de 10,99 KDa. O Ki para HNE foi determinado no valor de 9 pM. O inibidor não apresentou atividade inibitória sobre tripsina e trombina, porém foi observada atividade sobre subtilisina e quimotripsina. Estes dados indicam que o inibidor purificado trata-se de uma molécula ainda não caracterizada, devido às suas atividades inibitórias o nomeamos de Vigna unguiculata Elastase Inhibitor (VuEI). / The cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp) is a legume of important economic and nutritional representativeness, especially in Brazil. Serine protease inhibitors, such as trypsin, have been described in many species, as well as in other plants. In this specie an inhibitor with activity on human neutrophil elastase (HNE) has not yet been identified. This protease is involved in many pathological processes, such as the onset and progression of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). We purified and characterized an inhibitor from the protein extract of Vigna unguiculata presenting activity towards HNE. Firstly, we performed the alkaline extraction procedure for proteins followed by three different chromatographic steps using Hitrap Q (ion exchange), Source15RPC (Reversed-Phase) and ACE18 (Reversed Phase) columns. These steps were followed by the inhibitory activity tests using fluorogenic substrates, MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-MCA (elastase) and Z-Phe-Arg-MCA (trypsin), and quantitation assays of protein concentration. To determinate the size of the molecule, we used MALDI-TOF mass spectrometry and SDS-PAGE. The molecular mass of the inhibitor was 10,99 kDa. The dissociation constant (Ki) toward HNE was 9 pM. HNE inhibitor showed no inhibitory activities toward trypsin and thrombin. However, the inhibitor presented activity toward subtilisin and chymotrypsin. These datas indicate that this molecule is a novel inhibitor to HNE and we named it Vigna unguiculata Elastase Inhibitor (VuEI).

A obesidade tem sido apontada como fator de risco para desenvolvimento de carcinoma de mama em mulheres pós-menopáusicas e está associada a pior prognóstico. O objetivo deste estudo foi investigar a relação entre o perfil antropométrico (índice de massa corporal e razão cintura/quadril), frequência e quantidade calórica de consumo alimentar, perfil lipídico e glicemia de jejum com os níveis séricos de adipocinas (Adiponectina e PAI-1) e moléculas de adesão (ICAM-1 e VCAM-1) em uma coorte de mulheres em rastreamento mamográfico sem câncer de mama do Núcleo Mama Porto Alegre (NMPOA). O NMPOA é um projeto de pesquisa público-privado financiado pela Associação Hospitalar Moinhos de Vento em parceria com a Secretaria Municipal de Saúde de Porto Alegre, que tem como objetivo reduzir em 20% a incidência de câncer de mama. Cento e quarenta e cinco mulheres sem câncer de mama participaram deste estudo. Todas foram submetidas à avaliação antropométrica, questionário alimentar e dosagens séricas de adipocinas e moléculas de adesão. Encontramos uma alta prevalência de fatores de risco, incluindo: 39,3% das mulheres com IMC superior a 30 kg/m2; 46,9% com hipertensão arterial; 14,5% com Diabetes Mellitus tipo 2; 31,7% com dislipidemia e 88,3% apresentaram razão cintura/quadril (RCQ) ≥ 0,8. Foi encontrada correlação linear entre os níveis séricos de PAI- 1 e triglicerídeos, entre níveis de séricos de PAI-1 e RCQ, e também correlação linear entre níveis séricos de VCAM-1 e IMC. Em resumo, a amostra de pacientes controle da coorte de prevenção de câncer de Mama do NMPA apresenta perfil de alto risco para doenças relacionadas à obesidade (76% excesso de peso) e níveis séricos dos biomarcadores (PAI-1 e VCAM-1) correlacionados com os indicadores de obesidade e sobrepeso (triglicerídeos, IMC e RCQ). / Obesity has been identified as a risk factor for developing of breast carcinoma in postmenopausal women and is associated with worse prognosis. The study aims to investigate the relationship between anthropometric profile (body mass index and waist/hip ratio), food intake frequency, lipid profile and fasting glycemia with serum levels of adipokines (Apn and PAI-1) and adhesion molecules (ICAM-1 and VCAM-1) in a cohort of women in mammographic screening without breast cancer from the Núcleo Mama Porto Alegre (NMPOA). The NMPOA is a public-private research project funded by the Associação Hospitalar Moinhos de Vento in partnership with the Porto Alegre City Health Department, which aims to reduce by 20% the incidence of breast cancer. One hundred and forty-five women without breast cancer participated in this study. All underwent anthropometric assessment, dietary questionnaire and serum adipokines and adhesion molecules. We found a high prevalence of risk factors in our sample, including 39.3% of women with a BMI above 30 kg/m2; 46.9% had hypertension; 14.5% had type 2 diabetes mellitus, 31.7% had dyslipidemia and 88.3% of women had waist/hip ratio (WHR) an index ≥ 0,8. Linear correlation was found between serum of PAI-1 and triglycerides between levels of serum of PAI-1 and WHR and also linear correlation between serum of VCAM-1 and BMI. In short, the control sample of the NMPA breast cancer prevention cohort presents a high risk profile for obesity-related diseases (76% of overweight or obesity) and serum biomarcadores (PAI-1 e VCAM-1) correlated with indicators of obesity and overweight (triglycerides, BMI, WHR).

Submitted by Rosana Amâncio (rosana.amancio@ufcg.edu.br) on 2018-07-12T22:11:47Z No. of bitstreams: 1 ERICA RENATA NOGUEIRA SÁ CAETANO - DISSERTAÇÃO PPGCNBio 2016..pdf: 2506925 bytes, checksum: 2aee1b855d59914fe68902bb6ec5b3fe (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T22:11:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ERICA RENATA NOGUEIRA SÁ CAETANO - DISSERTAÇÃO PPGCNBio 2016..pdf: 2506925 bytes, checksum: 2aee1b855d59914fe68902bb6ec5b3fe (MD5) Previous issue date: 2016-07-14 / CNPq / Miraculina é uma glicoproteína que possui uma incrível propriedade de converter o sabor amargo em doce. Como a miraculina não apresenta sabor algum e tem um baixo teor calórico, esta proteína pode ser usada como adoçantes direcionados para pacientes com doenças relacionadas ao consumo excessivo de açúcar. Estudos comprovaram que membros da família de proteínas miraculinas também possuem atividade de inibidor de tripsina do tipo Kunitz, atuando como agentes naturais de defesa da planta contra pragas e predadores. Diante disso, proteínas do tipo miraculina são de grande relevância para aplicações biotecnológicas. Esse estudo teve como objetivo geral realizar a caracterização estrutural e funcional comparativa de duas miraculinas de Citrus sinensis, por meio de modelagem e docking molecular. Modelos 3D foram gerados e validados para as miraculinas CsMir1 e CsMir4, tripsina de Acryrthosiphon pisum e para os receptores de sabor doce mT1R2 e T1R3 de Mus musculus. Modelos homodiméricos foram gerados para CsMir1 e CsMir4 e modelo heterodimérico foi gerado para mT1R2-T1R3. Estudos da atividade de inibidor de tripsina foram feitos para CsMir1 e CsMir4 por interação com tripsina. Para analisar a atividade de modificação de sabor doce, foi realizada a interação das miraculinas com o receptor mT1R2-T1R3. Como resultados, os modelos dos monômeros e dímeros criados foram considerados bons modelos, válidos e confiáveis, com representações muito próximas das estruturas nativas dessas proteínas. A miraculina CsMir1, na forma monomérica ligou-se a tripsina de A. pisum e na sua forma dimérica ligou-se ao receptor heterodimérico mT1R2-T1R3 através do domínio ATD da subunidade T1R2, entretanto o potencial para as atividades de inibição de proteases e de indução ou inibição a modificação de sabor amargo/azedo em doce é menor do que para a CsMir4. A miraculina CsMir4, na sua forma monomérica ligou-se a tripsina de A. pisum, possivelmente apresentando atividade de inibição de proteases. CsMir4, na sua forma dimérica, ligou-se ao receptor heterodimérico mT1R2-T1R3, através do domínio ATD da subunidade T1R2, potencialmente apresentando atividade de indução ou inibição a modificação de sabor amargo/azedo em doce em M. musculus. / Miraculins are glycoproteins that displays a remarkable property in bitter to sweet taste conversion. As miraculin does not have any taste and has a low calorie, this protein can be used as sweeteners targeted to patients with diseases related to excessive sugar consumption. Studies have shown that members of miraculins protein family also display inhibitor activity against the Kunitz trypsin, acting as natural agents of plant defense against pests and predators. In this context, miraculin proteins are of great relevance for biotechnological applications. The aim of this research was to characterize structurally and functionally two miraculins of Citrus sinensis using in silico tools. Tridimensional models were built and validated for CsMir1 and CsMir4 miraculins, Acryrthosiphon pisum trypsin and for Mus musculus mT1R2-T1R3 receptor. Homodimeric and hetrodimeric models were generated for miraculins (CsMir1, CsMir4) and mT1R2-T1R3, respectively. Molecular docking simulations were performed to investigate the trypsin inhibitory activity and taste conversion activity of CsMir1 and CsMir4. The results showed that the predicted models were reliable and presented good quality parameters. The monomeric CsMir1 miraculin bound to A. pisum trypsin, while its dimeric form bound to ATD domain of the mT1R2-T1R3, although its potential as trypsin inhibitor and bitter/sweet taste modifier were minor than that presented by its homologous CsMir4. The dimeric form of CsMir4 bound to mT1R2-T1R3 receptor in the ATD domain, which strongly suggests bitter/sweet taste modifier activity in M. musculus.

The anti-inflammatories no esteroidais (AINEs) they are the drugs of larger prescription all over the world, for humans and for animals. They combat the inflammation, the pain, the temperature increase, could also inhibit the aggregation plaques. They act inhibiting the production of the acid araquidônico and ciclooxigenases (COXs) decreasing like this, the prostaglandins production. They become separated in inhibitors no selective for COX-1 and 2, being those the most traditional; and in selective inhibitors for COX-2, considered more modern drugs. AINEs no selective they reduce the production of all of PGs, constituent or not. Already the selective ones just inhibit harmful PGs, that you/they act in the inflammatory reaction, preserving PGs that maintains, for instance, the protection to the stomach and the renal perfusão. In that study the hepatic function of Rattus norvegicus was evaluated after the use of AINE no selective, cetoprofeno and of selective AINE, valdecoxib. The doses administered to the animals were calculated according to the scaling allometric. The allometric is a method that allows to extrapolate dosage indications of more common species and known for species where studies farmacokinects of the drug was not accomplished in subject, taking into account, among other, the corporal size, the metabolism and the basal tax. After the use of AINEs, the animals were appraised for biochemical methods of alanina amino transferase (ALT), aspartato amino transferase (AST) and alkaline fosfatase (FA), and also, for macroscopic and microscopic evaluation of the liver and right kidney, in different times, after you finish them administrations of the drugs, according to the group which the animal belonged. Among other observations it can be told, that the cetoprofeno, can cause the death of mice, according to the allometric already in the second day of administration of the drug; and that the AINE valdecoxib, doesn't produce macroscopic and microscopic alterations worthy of note, in organs as the liver and kidney of Rattus norvegicus / Os antiinflamatórios não esteroidais (AINEs) são as drogas de maior prescrição em todo o mundo, tanto para humanos como para animais. Combatem a inflamação, a dor, a hipertermia, podendo também inibir a agregação plaquetária. Atuam inibindo a produção do ácido araquidônico e ciclooxigenases (COXs) diminuindo assim, a produção de prostaglandinas. Dividem-se em inibidores não seletivos para COX-1 e 2, sendo esses os mais tradicionais; e em inibidores seletivos para COX-2, considerados drogas mais modernas. AINEs não seletivos diminuem a produção de todas as PGs, constitutivas ou não. Já os seletivos inibem apenas as PGs deletérias, que atuam na reação inflamatória, preservando PGs que mantém, por exemplo, a proteção ao estômago e a perfusão renal. Nesse estudo avaliou-se a função hepática de Rattus norvegicus após a utilização do AINE não seletivo, cetoprofeno e do AINE seletivo, valdecoxib. As doses administradas aos animais foram calculadas segundo a escala alométrica. A alometria é um método que permite extrapolar indicações posológicas de espécies mais comuns e conhecidas para espécies onde não foram realizados estudos farmacocinéticos da droga em questão, levando em conta, entre outros, o tamanho corporal, o metabolismo e a taxa basal. Após a utilização dos AINEs, os animais foram avaliados por métodos bioquímicos de alanina amino transferase (ALT), aspartato amino transferase (AST) e fosfatase alcalina (FA), e também, por avaliação macroscópica e microscópica do fígado e rim direito, em diferentes tempos, após as ultimas administrações das drogas, conforme o grupo a qual o animal pertencia. Entre outras observações pode-se relatar, que o cetoprofeno, pode causar a morte de ratos, segundo a alometria já no segundo dia de administração da droga; e que o AINE valdecoxib, não produz alterações macroscópicas e microscópicas dignas de nota, em órgãos como o fígado e rim de Rattus norvegicus