Determina la frecuencia de los fenotipos metabólicos y resistencia a la insulina en adultos aparentemente sanos que acuden a un programa preventivo promocional de ECNT del Instituto de Investigaciones Clínicas de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM) durante el lapso 2017-2018. Realiza un estudio transversal retrospectivo. Se analizó la base de datos de la investigación Estudio de riesgo cardiometabólico en personas con peso normal y en obesos, ejecutado en el Instituto de Investigaciones de Clínicas de la Facultad de Medicina de la UNMSM con sede en el Hospital Dos de Mayo, durante el lapso 2017-2018 Se incluyó un total de 260 participantes, 230 (88,5%) tenían un fenotipo metabólico anormal dentro del cual 46 (20,8%) eran personas de peso normal, 89 (38,7%) eran personas con sobrepeso y 95(41,3%) personas con obesidad. Del total, 30 (11,5%) tenían fenotipo metabólico normal, de los cuales 21 (70%) eran de peso normal, 8(26,7%) eran personas con sobrepeso y solo hubo 1 persona (3,3%) obesa en este grupo. Se observó que 116 personas (50,4%) tuvo resistencia a la insulina. Concluye que existe una alta proporción de fenotipo metabólico anormal en y de resistencia a la insulina en personas aparentemente sanas. / Tesis

Resultados controversos têm sido obtidos em estudos experimentais e clínicos com a infusão de insulina e glicose na lesão isquemia-reperfusão, havendo muito á ser esclarecido sobre os mecanismos deste tratamento. No coração, a insulina tem efeitos sobre a utilização dos substratos, fluxo coronariano, atua como antiinflamatório e, propõem-se efeitos diretos na sobrevivência celular; estes efeitos devem-se a ativação da via fosfatidilinositol 3-cinase (PI3k)-Akt. As interações intracelulares entre os sistemas de sinalização da insulina e da angiotensina-II são muitas, salientando-se a possível importância do cross-talk angiotensina-II/insulina. Apesar da popularidade das preparações em corações isolados no estudo das lesões isquemia-reperfusão, diversos protocolos vêm sendo utilizados quanto a duração da isquemia, dificultanto a escolha do melhor período de isquemia para se testar os efeitos de fármacos sobre a recuperação da função cardíaca. Nesse trabalho objetivamos: determinar o melhor tempo de isquemia para investigar a recuperação funcional e a capacidade de resposta do sistema reninaangiotensina (SRA) tecidual em coração isolado e os efeitos da insulina associada a um inibidor do SRA sobre os mecanismos de cardioproteção à lesão isquemia-reperfusão. No estudo 1 investigamos a recuperação funcional e a capacidade de resposta do SRA tecidual em corações isolados e submetidos a diferentes períodos de isquemia. Os corações foram submetidos a diferentes períodos de isquemia global (20, 25 ou 30 min) e reperfundidos (30 min) com diferentes soluções: Krebs-Henseleit (KH) (grupo KH), KH + angiotensina-I (grupo Angio) ou KH + angiotensina-I + captopril (grupo AC). O índice de contratilidade ventricular (dP/dtmax) e o duplo produto foram reduzidos nos corações expostos à 25 min (~73%) e 30 min de isquemia (~80%) vs 20 min de isquemia. A pressão ventricular diastólica (PVD) e a pressão de perfusão (PP) aumentaram nos corações expostos à 25 min (5,5 e 1,08 vezes, respectivamente) e 30 min de isquemia (6 e 1,10 vezes, respectivamente) vs 20 min de isquemia. A angiotensina-I causou uma diminuição no dP/dtmax e no duplo produto (~85-94%) em todos os períodos isquêmicos, e um aumento na PVD e na PP (6,9 e 1,25 vezes, respectivamente) apenas aos 20 min isquemia. O captopril reverteu parcialmente ou totalmente os efeitos da angiotensina-I sobre a recuperação funcional, somente nos períodos 20 e 25 min de isquemia. Esses dados sugerem que a transição de dano pós-isquêmico leve/moderado para severo ocorre após 20 min de isquemia. Dessa forma, 20 min de isquemia é o melhor período de tempo para se estudar os efeitos de abordagens farmacológicas sobre a recuperação funcional. No estudo 2 investigamos os efeitos da insulina associada a um inibidor do SRA sobre os mecanismos de cardioproteção à lesão isquemia-reperfusão. Os corações foram submetidos a um período de isquemia global (20 min) e reperfundidos (30 min) com diferentes soluções: KH (grupo KH), KH + angiotensina-I (grupo Angio), KH + angiotensina-I + captopril (grupo AC), KH + insulina (grupo Insulina), KH + insulina + angiotensina-I (grupo IA) e KH + insulina + angiotensina-I + captopril (grupo IAC). Durante a recuperação, o grupo Angio apresentou uma redução de ~24% na pressão ventricular desenvolvida (PVDes) e de ~29% no dP/dtmáx vs período basal, e apresentou um aumento de ~2,7 vezes na PVD vs período basal, estes efeitos foram revertidos parcialmente ou totalmente pelos tratamentos AC, IA e IAC. O grupo Angio apresentou uma redução de ~24% no duplo produto vs período basal, este efeito foi revertido pelo tratamento IA, que também foi maior vs grupos KH e AC. Os grupos Angio e IA apresentaram um aumento de ~20% na PP vs período basal, e todos os grupos (exceto o insulina) foram maiores vs grupo KH; os grupos AC e IAC não diferiram dos grupos Angio e insulina. A Akt fosforilada foi maior nos grupos insulina e IA vs grupos KH (~47% e ~42%, respectivamente) e Angio (~60% e ~55%, respectivamente), os grupos AC e IAC não diferem dos demais. A AMPK fosforilada foi ~31% maior nos grupos insulina, IA e IAC vs grupos KH, Angio e AC. Os níveis de TBA-RS no grupo KH foram ~73% maior vs outros grupos; a quimiluminescência também foi maior (~2,2 vezes) no grupo KH vs outros grupos, e o grupo IA foi ~35% menor vs grupo Angio. A atividade da SOD não foi alterada pelos tratamentos, mas a atividade da catalase foi ~28% maior no grupo KH vs outros grupos (exceto o IA, P = 0,058) e a atividade da GST foi menor no grupo insulina vs grupos Angio e AC (~45% e ~50%, respectivamente). Os grupos Angio, AC e IAC apresentaram uma menor concentração da Cu/ZnSOD vs grupo KH (~40%, ~43% e ~27%, respectivamente), os grupos insulina e IA não diferem do grupo KH. Nenhum dos tratamentos alterou a concentração das enzimas GST e eNOS, os níveis de NOX ou a translocação do GLUT-4. Assim, a insulina ativa a via PI3k-Akt e parece exercer uma melhor regulação do estado redox celular, podendo ainda ativar a AMPK e ambas atuarem sinergicamente para um melhor perfil metabólico do miocárdio. Desse modo, a insulina administrada no inicio da reperfusão opõe-se aos efeitos deletérios da angiotensina-II e exerce um efeito cardioprotetor.

Objetivo general: Determinar el rol de la angiogénesis insular en el mecanismo por el cual el INGAP-PP induce un aumento de la masa y función secretora de las células β pancreáticas. Objetivos particulares: Modelo <i>in vivo</i> (administración de INGAP-PP a ratas normales durante 10 días): - Determinar los cambios en distintos parámetros séricos (glucemia, insulinemia, trigliceridemia, TBARS). - Determinar el patrón de secreción de insulina en respuesta a diferentes concentraciones de glucosa. - Determinar los cambios ocurridos sobre el tamaño insular. - Verificar la expresión de distintos marcadores de desarrollo y función β. - Determinar los cambios ocurridos a nivel de la expresión génica del VEGF-A y de su receptor (VEGF-A R2) en las células endoteliales insulares. - Determinar los cambios ocurridos en la cantidad de células endoteliales insulares utilizando CD31 como marcador de las mismas. - Cuantificar los cambios ocurridos en el componente mayoritario de las membranas basales insulares (lamininas). Modelo <i>in vitro</i> (cultivo de islotes normales en presencia o ausencia de INGAP-PP durante 4 días): - Estudiar el efecto directo del VEGF-A sobre la secreción de insulina en respuesta a la glucosa. - Determinar el efecto de INGAP-PP sobre la liberación de VEGF-A en islotes cultivados.

INTRODUCTION Carnitine palmitoyltransferase I, which is expressed in the pancreas as the liver isoform (LCPTI), catalyzes the rate-limiting step in the transport of fatty acids into the mitochondria for their oxidation. To directly examine whether the availability of long-chain fatty acyl-CoA affects the regulation of insulin secretion in the Beta-cell, we infected INS(832/13) cells and rat islets with an adenovirus encoding a mutant form of LCPTI (Ad-LCPTI M593S) that is insensitive to its inhibitor malonyl-CoA. C75 is described as a potential drug for treatment of obesity and type 2 diabetes. First known as a synthetic inhibitor of fatty acid synthase, it has been also described as an activator of CPTI, increasing peripheral energy utilization and fatty acid oxidation in mice. To further investigate the C75/CPTI interaction, we have characterized the effects of C75 on CPTI in vitro and in vivo.OBJECTIVES 1) Study of the malonyl-CoA/CPTI interaction in the pancreatic Beta-cell and its involvement in glucose-stimulated insulin secretion (GSIS). 2) Construction of an INS stable cell line overexpressing LCPTI wt and LCPTI M593S. 3) Determine the effect of C75 on the CPTI activity and palmitate oxidation in pancreatic Beta-cells. RESULTS. In Ad-LCPTI M593S infected INS(832/13) cells LCPTI activity increased six-fold. This was associated with enhanced fatty acid oxidation, at any glucose concentration, and a 60% suppression of GSIS. In isolated rat islets in which LCPTI M593S was overexpressed, GSIS decreased 40%. At high glucose concentration, overexpression of LCPTI M593S reduced partitioning of exogenous palmitate into lipid esterification products, and decreased PKC activation. Moreover, LCPTI M593S expression impaired KATP channel-independent GSIS in INS(832/13) cells. INS-1 stable clones of LCPTIwt and LCPTImut were constructed, however none of them resulted in an increase in LCPTI protein expression compared to endogenous LCPTI nor in CPTI activity. Therefore, slight basal overexpression of LCPTI could probably be toxic for the cells, as a result of which only those cells that do not contain the LCPTI plasmids survived throughout cell passages. When INS(823/13) cells are incubated with C75, CPTI activity is inhibited, as is fatty acid oxidation. In vivo, a single intraperitoneal injection of C75 to mice produces a short-term inhibition of CPTI activity in mitochondria from liver and pancreas.DISCUSSION. The results with LCPTImut provide direct support for the hypothesis proposing that the malonyl-CoA/CPTI interaction is a component of a metabolic signalling network that controls insulin secretion. Overall, the findings with C75 provide compelling evidence that the drug is a potent inhibitor of CPTI.

Las proteínas sustrato del receptor de insulina (de sus siglas en Inglés: IRS) son mediadores clave en la señalización dependiente de insulina y del factor de crecimiento semejante a insulina tipo 1 (IGF1). En ratones, la supresión de Irs2 causa diabetes tanto en los machos como en las hembras. Las hembras son infértiles, sin embargo, el papel de IRS2 en el sistema reproductor de los machos aún no se conoce. Por ello, los objetivos del presente estudio se centraron en determinar si la ausencia de Irs2 altera el desarrollo y función testicular. Los ratones macho adultos deficientes en Irs2 presentan una reducción significativa en el peso y en el tamaño de los testículos. Existe una disminución significativa en el número de células de Sertoli, espermatogonias, espermatocitos y espermatozoas, sin embargo no existen diferencias en el número de células de Leydig ni se detectan cambios en la concentración plasmática de testosterona. Aparentemente, la morfología testicular no parece verse afectada. Las asociaciones celulares observadas son normales y tampoco se aprecian anormalidades en el tracto epitelial del tubo seminífero. La expresión a nivel génico y de proteína de IRS1, IRS3 e IRS4 no mostró cambios significativos en ratones deficientes en Irs2 indicando que los otros miembros de esta familia de proteínas no compensan la pérdida de expresión de Irs2. La expresión del ARN mensajero del receptor de la hormona de crecimiento y la expresión proteica de SOX9 se encuentran significativamente reducidas en ratones deficientes para Irs2. Los ratones Irs2-/- presentaron mayores niveles de fosforilación de AKT, GSK3β y ERK en comparación a los silvestres pero no mostraron diferencias en la expresión de ciclina D1 o p27, proteínas relacionadas con el control del ciclo celular. En resumen, los resultados presentados en este estudio demuestran que IRS2 juega un papel crítico en la regulación del tamaño testicular. IRS2 podría modular el tamaño de los testículos al reducir o retrasar la proliferación de células de Sertoli durante el desarrollo embrionario y/o en estadíos postnatales tempranos. Los presentes resultados proporcionan una importante base con fundamentos para entender los efectos de la señalización dependiente de IRS2 y la diabetes en la función del sistema reproductor masculino. / Insulin receptor substrate (IRS) proteins are key mediators of insulin and insulin-like growth factor (IGF) 1 signaling. In mice, deletion of Irs2 causes diabetes and females are infertile. However, the role of IRS2 in male reproduction is unknown. Therefore, the objectives of these studies were to determine if Irs2-deficiency alters testicular development and function. Irs2-deficient adult and neonatal male mice exhibited reduced testicular size and weight. There was a reduction in the number of Sertoli cells, spermatogonia, spermatocytes, and spermatozoa, however there were no differences in the number of Leydig cells or the concentration of testosterone in serum. Testicular morphology appeared unaffected, and there were normal cellular associations without obvious abnormalities in the seminiferous epithelium. Gene and protein expression of IRS1, 3, and 4 were unchanged in Irs2-deficient mice indicating that the other IRS proteins did not overcompensate for the loss of Irs2. Gene expression of growth hormone receptor and protein expression of SOX9 were significantly reduced in Irs2-deficient mice. There was increased phosphorylation of AKT, GSK3β, and ERK in the testes of Irs2-/- mice but no differences in protein expression of cell cycle regulatory proteins cyclin D or p27. In summary, the results from these studies demonstrate that IRS2 plays a critical role in the regulation of testis size, and that IRS2 may modulate testis size by reducing or delaying Sertoli cell proliferation during embryonic and early postnatal development. These results provide an important platform for further understanding the effects of IRS2 signaling and diabetes on male reproductive function

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000386777-Texto+Completo-0.pdf: 1331431 bytes, checksum: 9edac4706a3d3ef38e1923efe97de1f0 (MD5) Previous issue date: 2006 / Objective: To observe the variations in serum glucose and insulin levels induced by the peritoneal exposition to glucose solution during a peritoneal equilibration test (PET), and to relate the findings with the solutes peritoneal transport rate. Patients and Method: A cross-sectional, observational, study using a modified PET procedure (4,25% glucose solution) that enrolled 34 prevalent peritoneal dialysis patients. Glucose and insulin serum levels were sequentially determined (at zero, 15, 30, 60, 120, 180, and 240 minutes) along the procedure, and an insulin resistance index (IR-HOMA) was computed. Categories of peritoneal transport were separated by quartiles of the dialisate/serum creatinine rate after 240 minutes of peritoneal exposition to the infused fluid (D4/PCr). Demographic and clinical variables were examined, and possible correlations among variables and categories of peritoneal transport were tested. Results: No difference for IR-HOMA, glucose and insulin levels was demonstrated among peritoneal transport categories. A direct correlation between the early glucose, and insulin peak increment and D4/PCr was evidenced. IR-HOMA was associated with the body mass index. Conclusion: Early glucose and insulin peak increment were associated with the solutes transport rate, as measured by the PET. The meaning of the findings on the outcome of patients with high peritoneal transport rate must be further evaluated. / Objetivo: Observar as variações de glicemia e insulinemia induzidas pela exposição da cavidade peritoneal à solução de glicose, durante teste de equilíbrio peritoneal (PET), e buscar relação com a velocidade de transporte peritoneal de pequenos solutos. Pacientes e Método: Estudo transversal, observacional, com 34 pacientes prevalentes em diálise peritoneal, submetidos a PET modificado (uso de glicose a 4,25%). Glicemia e insulinemia foram seqüencialmente determinadas sete vezes (em zero, 15, 30, 60 120, 180 e 240 minutos) ao longo do teste e índice de resistência a insulina (IR-HOMA) foi calculado. Categorias de transporte peritoneal foram definidas, na amostra, por quartís da razão dialisado/soro das concentrações de creatinina após 240 minutos de exposição do peritônio ao líquido (D4/PCr). Variáveis demográficas e clínicas foram computadas e possíveis correlações entre variáveis e categorias de transporte peritoneal foram testadas. Resultados: Não houve diferença para o IR-HOMA ou para medidas de glicemia e de insulinemia, entre as categorias de transporte peritoneal. Houve correlação direta entre os incrementos iniciais da glicemia, bem como a variação máxima de insulinemia e a variável D4/PCr – uma medida de velocidade de transporte de solutos pelo peritônio. O IR-HOMA relacionou-se diretamente com o índice de massa corporal. Conclusão: Os incrementos iniciais de glicemia e o pico máximo de insulinemia estão associados à velocidade de transporte peritoneal de pequenos solutos medida pelo PET. O significado destes achados sobre o prognóstico de pacientes com alto transporte deve ser mais bem avaliado.

Orientador: Doris Hissako Sumida / Banca: Marília Afonso Rabelo Buzalaf / Banca: Suzely Adas Saliba Moimaz / Resumo: Nos dias atuais, a crescente incidência de diabetes mellitus no mundo torna fundamental a idéia de se identificar fatores de risco que levam ao desenvolvimento da doença e proporcionar sua prevenção. Diversos estudos têm levado a considerar as condições bucais não mais de maneira isolada, mas em suas relações com o corpo humano. Este posicionamento também é válido para as periodontopatias, que têm sido apontadas por diversos estudos como fator de risco para o desenvolvimento de doenças, entre elas o parto prematuro de bebês com baixo peso e o diabetes mellitus. O nascimento prematuro sobressai‐se como o maior problema peri‐natal em muitos países, contribuindo substancialmente para a mortalidade infantil e para o desenvolvimento de uma infância repleta de problemas. Há ainda estudos que apontam que adultos que nasceram com baixo peso tem um maior risco de desenvolver diabetes mellitus na vida adulta. A revisão destes estudos demonstra a inter‐relação entre estas doenças e alguns dos mecanismos biológicos envolvidos, buscando alertar quanto ao estilo de vida propício ao desenvolvimento de periodontopatias e a busca por hábitos preventivos, além da necessidade de mais estudos para elucidar os mecanismos envolvidos nesta inter‐relação. / Abstract: Currently, the increasing incidence of diabetes mellitus in the world makes the idea of identifying risk factors which can lead to the development of the disease and ways to prevent it as an important matter. Several studies have considered oral conditions in an integrated approach with the general health conditions. This approach is also valid for periodontal diseases, which have been pointed as a risk factor for the development of some diseases, like preterm birth, low weight babies and diabetes mellitus. Premature birth has been pointed out as the major prenatal problem in several countries, contributing substantially with infant mortality and the development of other infant problems. There are also studies showing that adults with a preterm birth history have a higher risk of developing diabetes mellitus. The review of these researches demonstrate the inter‐relation between these diseases and some of the involved biological mechanisms, aiming to alert population about life style conditions which can lead to periodontal diseases and also to promote preventive measures, as well as the need of more studies to elucidate the involved mechanisms of this inter‐relation. / Mestre

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:06:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Introdução: O tecido adiposo armazena energia e secreta várias moléculas endócrino/parácrina como a angiotensina II (AII) e expressa receptores como de insulina e de AII (AT1 e AT2). Esses hormônios estão envolvidos em várias patologias tais como a obesidade, hipertensão, diabetes e aterosclerose. Objetivos: Caracterização morfológica da cultura primária de adipócitos humanos e da resposta ao estímulo dos hormônios AII e insulina. Métodos: Para caracterização morfológica fez-se a coloração com Oil red O, gotículas de lipídios, MitoTracker red, mitocôndrias e ERTracker, retículo endoplasmático. Determinaram-se também as fases do ciclo celular, tamanho e complexidade das populações das células cultivadas e dispersas através da citometria de fluxo. O cultivo das células foi realizado de acordo com Hauner et al. (1989). Para as medidas do Ca2+ intracelular foi utilizada a análise por microscopia de fluorescência de alta resolução. As células adiposas foram caracterizadas por imunocitoquímica utilizando-se anticorpos para insulina, AT1 da AII, receptor de insulina e lectina conjugados com um marcador fluorescente. Resultados: Por microscopia confocal verificou-se a presença de várias gotículas lipídicas, citoesqueleto, mitocôndrias, retículo endoplasmático e membrana celular preservados, e próprios dos pré adipócitos, Os pré-adipócitos apresentaram receptores e grânulos de insulina e o receptor AT1. Também se verificou por citometria de fluxo a amostra de células rescém-dispersas que pôde ser classificada como pré- adipócito. A avaliação temporal dos níveis de Ca2+ nas células de pré-adipócitos humanos estimuladas com a AII e insulina induzem respostas transientes no caso da AII o aumento imediato das [Ca2+]i seguido da diminuição desta resposta e no caso da insulina apresentou oscilações nas [Ca2+]i na presença deste agonista. Conclusões: Determinou-se a caracterização morfológica da cultura primária de adipócitos humanos como pré-adipócitos por:apresentarem morfologia semelhante a fibroblastos e inúmeras gotículas de lipídios; evidenciado a presença dos receptores de angiotensina II (AT1) e insulina (RI) por imunofluorescência. As células presentes na amostra do tecido adiposo apresentaram tamanho e complexidade de pré-adipócitos; Nos pré-adipócitos humanos cultivados verificou-se o aumento dos níveis intracelulares de Ca2+ que foi transiente para o estímulo com angiotensina II e oscilatório para a insulina. / Introduction: The adipose tissue stores energy and secretes several endocrine/paracrine molecules as the angiotensin II (AII) and expresses receptors as of insulin and of AII (AT1 and AT2). These hormones are involved in several pathologies such as the obesity, hypertension, diabetes and atherosclerosis. Objectives: Morphologic characterization of the primary culture of human adipocytes and of the answer to the incentive of the AII hormones and insulin. Methods: For morphologic characterization the coloration with Oil red O, lipids droplets, MitoTracker red, mitochondrias and ERTracker, endoplasmic reticulum was made. It also determined the phases of the cellular cycle, size and the populations complexity of the cultivated cells and disperse through the flow cytometry. The cells cultivation was accomplished in agreement with Hauner et al. (1989). For the Ca2+ intracellular measures the analysis by fluorescence microscope of high resolution was used. The adipose cells were characterized by immunocytochemistry using antibodies for insulin, AT1 of AII, insulin receptor and lectina conjugated with a fluorescent marker. Results: For confocal microscope was verified the presence of several lipidics droplets, cytoskeleton, mitochondrias, endoplasmic reticulum and cellular membrane preserved, characteristic on preadipocytes. The preadipocytes presented receptors and insulin granules and AT1 receptor It was also verified by flow cytometry the sample of newly-dispersed cells that could be classified as preadipocyte. The temporary evaluation of the Ca2+ levels in the human adipocytes cells which were stimulated with AII and insulin showed that AII induced transient answers, by the immediate increase of the [Ca2+]i followed by the decrease of this response. The insulin presented oscillations in the [Ca2+]i during the presence of this agonist. Conclusions: For confocal microscopy was determined the morphologic characterization of the primary culture of human adipocytes as preadipocytes and evidenced the presence of the receivers of angiotensina II (AT1) and insulin (RI) for imunofluorescência. The present cells in the sample of the fatty fabric presented size and preadipocytes complexity; In the cultivated human preadipocytes the increase of the levels intracelulares of Ca2+ was verified that was transient for the incentive with angiotensina II and oscillatory for the insulin. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Magíster en Bioquímica, área de especialización Bioquímica Toxicológica y Diagnóstico Molecular / Memoria para optar al Título de Bioquímica / La obesidad y la diabetes son condiciones altamente prevalentes que representan un importante factor de riesgo para el desarrollo de patologías cardiovasculares, principal causa de muerte entre los pacientes diabéticos. La lipotoxicidad y las alteraciones metabólicas juegan un papel fundamental en la resistencia a la hormona insulina y el daño cardiaco en estos pacientes. Los cardiomiocitos son las unidades funcionales del corazón y poseen un alto requerimiento energético que depende en su mayor parte de la función mitocondrial. Las mitocondrias forman una red dinámica que se remodela constantemente por eventos de fisión y fusión. La mantención de una morfología mitocondrial balanceada es fundamental para mantener una funcionalidad adecuada de este organelo. El objetivo de este trabajo fue investigar el efecto de las ceramidas, que derivan del metabolismo lipídico, en la señalización de la insulina y la dinámica mitocondrial en cultivos primarios de cardiomiocitos de rata. La señalización de insulina se evaluó mediante Western blot para Akt fosforilada y la morfología mitocondrial por microscopía confocal en células teñidas con Mitotracker Green. El tratamiento de los cardiomiocitos con C2-ceramida (40 μM, 3 h) disminuyó la fosforilación de Akt basalmente y en respuesta a insulina y favoreció la fisión mitocondrial, aumentando la translocación de la proteína de fisión Drp-1 hacia este organelo. Para evaluar si ambos efectos estaban relacionados, se inhibió la actividad de Drp-1 mediante el uso de un dominante negativo y de un inhibidor químico, antes del tratamiento con C2-ceramida. La inhibición de Drp-1 mediante ambas herramientas previno la fisión mitocondrial causada por C2-ceramida y rescató la fosforilación de Akt en respuesta a insulina. Trabajos previos de nuestro laboratorio muestran que el tratamiento de los cardiomiocitos con palmitato 500 μM durante 3 h también induce fisión de la red mitocondrial. En este trabajo se mostró que al inhibir la síntesis de ceramidas a partir de palmitato se previene, en parte, los efectos de este ácido graso sobre la dinámica mitocondrial de los cardiomiocitos. En conclusión, la fragmentación de la red mitocondrial inducida por ceramidas es necesaria para la disminución de la señalización de insulina en los cardiomiocitos. Además, la fisión mitocondrial inducida por palmitato en este modelo depende en parte de la generación de ceramidas. / Obesity and diabetes are highly prevalent conditions that represent an important risk factor for the development of cardiovascular diseases, the main cause of death in diabetic patients. Lipotoxicity and metabolic alterations take part in insulin resistance and heart damage in these patients. Cardiomyocytes are the functional basic units of the heart and have a high energy requirement that depends largely on mitochondrial function. Mitochondria form a dynamic network that is constantly remodelled by fission and fusion events. The maintenance of a balanced mitochondrial morphology is critical to maintain a proper functionality of this organelle. The aim of this study was to investigate the effect of ceramides, derived from lipid metabolism, in insulin signalling and mitochondrial dynamics in primary cultures of rat cardiomyocytes. Insulin signalling was assessed by Western blot for phosphorylated Akt and mitochondrial morphology by confocal microscopy in Mitotracker Green-stained cells. Treatment of cardiomyocytes with C2-ceramide (40 μM, 3 h) decreased the phosphorylation of Akt at baseline and in response to insulin and induced mitochondrial fission, increasing the translocation of the fission protein Drp-1 to this organelle. To assess whether both effects were related, Drp-1 activity was inhibited by using a dominant negative and a chemical inhibitor, before treatment with C2-ceramide. The inhibition of Drp-1 by both tools prevented mitochondrial fission caused by C2-ceramide and rescued Akt phosphorylation in response to insulin. Previous work in our laboratory showed that treatment of cardiomyocytes with palmitate 500 μM for 3 h also induces mitochondrial fission. We showed that inhibiting the synthesis of ceramides from palmitate prevented in part the effects of this fatty acid on mitochondrial dynamics in cardiomyocytes. In conclusion, the mitochondrial network fragmentation induced by ceramides is required for the decrease of insulin signalling in cardiomyocytes. Furthermore, palmitate-induced mitochondrial fission in this model depends in part on the generation of ceramides. / Fondap, Fondecyt