Resultados controversos têm sido obtidos em estudos experimentais e clínicos com a infusão de insulina e glicose na lesão isquemia-reperfusão, havendo muito á ser esclarecido sobre os mecanismos deste tratamento. No coração, a insulina tem efeitos sobre a utilização dos substratos, fluxo coronariano, atua como antiinflamatório e, propõem-se efeitos diretos na sobrevivência celular; estes efeitos devem-se a ativação da via fosfatidilinositol 3-cinase (PI3k)-Akt. As interações intracelulares entre os sistemas de sinalização da insulina e da angiotensina-II são muitas, salientando-se a possível importância do cross-talk angiotensina-II/insulina. Apesar da popularidade das preparações em corações isolados no estudo das lesões isquemia-reperfusão, diversos protocolos vêm sendo utilizados quanto a duração da isquemia, dificultanto a escolha do melhor período de isquemia para se testar os efeitos de fármacos sobre a recuperação da função cardíaca. Nesse trabalho objetivamos: determinar o melhor tempo de isquemia para investigar a recuperação funcional e a capacidade de resposta do sistema reninaangiotensina (SRA) tecidual em coração isolado e os efeitos da insulina associada a um inibidor do SRA sobre os mecanismos de cardioproteção à lesão isquemia-reperfusão. No estudo 1 investigamos a recuperação funcional e a capacidade de resposta do SRA tecidual em corações isolados e submetidos a diferentes períodos de isquemia. Os corações foram submetidos a diferentes períodos de isquemia global (20, 25 ou 30 min) e reperfundidos (30 min) com diferentes soluções: Krebs-Henseleit (KH) (grupo KH), KH + angiotensina-I (grupo Angio) ou KH + angiotensina-I + captopril (grupo AC). O índice de contratilidade ventricular (dP/dtmax) e o duplo produto foram reduzidos nos corações expostos à 25 min (~73%) e 30 min de isquemia (~80%) vs 20 min de isquemia. A pressão ventricular diastólica (PVD) e a pressão de perfusão (PP) aumentaram nos corações expostos à 25 min (5,5 e 1,08 vezes, respectivamente) e 30 min de isquemia (6 e 1,10 vezes, respectivamente) vs 20 min de isquemia. A angiotensina-I causou uma diminuição no dP/dtmax e no duplo produto (~85-94%) em todos os períodos isquêmicos, e um aumento na PVD e na PP (6,9 e 1,25 vezes, respectivamente) apenas aos 20 min isquemia. O captopril reverteu parcialmente ou totalmente os efeitos da angiotensina-I sobre a recuperação funcional, somente nos períodos 20 e 25 min de isquemia. Esses dados sugerem que a transição de dano pós-isquêmico leve/moderado para severo ocorre após 20 min de isquemia. Dessa forma, 20 min de isquemia é o melhor período de tempo para se estudar os efeitos de abordagens farmacológicas sobre a recuperação funcional. No estudo 2 investigamos os efeitos da insulina associada a um inibidor do SRA sobre os mecanismos de cardioproteção à lesão isquemia-reperfusão. Os corações foram submetidos a um período de isquemia global (20 min) e reperfundidos (30 min) com diferentes soluções: KH (grupo KH), KH + angiotensina-I (grupo Angio), KH + angiotensina-I + captopril (grupo AC), KH + insulina (grupo Insulina), KH + insulina + angiotensina-I (grupo IA) e KH + insulina + angiotensina-I + captopril (grupo IAC). Durante a recuperação, o grupo Angio apresentou uma redução de ~24% na pressão ventricular desenvolvida (PVDes) e de ~29% no dP/dtmáx vs período basal, e apresentou um aumento de ~2,7 vezes na PVD vs período basal, estes efeitos foram revertidos parcialmente ou totalmente pelos tratamentos AC, IA e IAC. O grupo Angio apresentou uma redução de ~24% no duplo produto vs período basal, este efeito foi revertido pelo tratamento IA, que também foi maior vs grupos KH e AC. Os grupos Angio e IA apresentaram um aumento de ~20% na PP vs período basal, e todos os grupos (exceto o insulina) foram maiores vs grupo KH; os grupos AC e IAC não diferiram dos grupos Angio e insulina. A Akt fosforilada foi maior nos grupos insulina e IA vs grupos KH (~47% e ~42%, respectivamente) e Angio (~60% e ~55%, respectivamente), os grupos AC e IAC não diferem dos demais. A AMPK fosforilada foi ~31% maior nos grupos insulina, IA e IAC vs grupos KH, Angio e AC. Os níveis de TBA-RS no grupo KH foram ~73% maior vs outros grupos; a quimiluminescência também foi maior (~2,2 vezes) no grupo KH vs outros grupos, e o grupo IA foi ~35% menor vs grupo Angio. A atividade da SOD não foi alterada pelos tratamentos, mas a atividade da catalase foi ~28% maior no grupo KH vs outros grupos (exceto o IA, P = 0,058) e a atividade da GST foi menor no grupo insulina vs grupos Angio e AC (~45% e ~50%, respectivamente). Os grupos Angio, AC e IAC apresentaram uma menor concentração da Cu/ZnSOD vs grupo KH (~40%, ~43% e ~27%, respectivamente), os grupos insulina e IA não diferem do grupo KH. Nenhum dos tratamentos alterou a concentração das enzimas GST e eNOS, os níveis de NOX ou a translocação do GLUT-4. Assim, a insulina ativa a via PI3k-Akt e parece exercer uma melhor regulação do estado redox celular, podendo ainda ativar a AMPK e ambas atuarem sinergicamente para um melhor perfil metabólico do miocárdio. Desse modo, a insulina administrada no inicio da reperfusão opõe-se aos efeitos deletérios da angiotensina-II e exerce um efeito cardioprotetor.

Introdução Tem sido demonstrado que o tratamento intensivo com insulina (TII) reduz morbidade e mortalidade em pacientes criticamente doentes. No entanto, ainda não está avaliado se este tratamento melhora o prognóstico de pacientes com trauma crânio encefálico (TCE) grave. Materiais e Métodos Nós realizamos um ensaio clínico randomizado no qual pacientes adultos, portadores de TCE contuso grave, com escala de coma de Glasgow ≤ 8, admitidos no centro de tratamento intensivo (CTI) do Hospital de Porto Socorro Municipal de Porto Alegre, foram randomizados para receber TII (com o objetivo de manter a glicemia capilar entre 80 e 110 mg/dl utilizando infusão contínua de insulina) ou tratamento convencional da glicemia (TCG) (com o objetivo de manter a glicemia menor do que 180 mg/dl com insulina subcutânea, no qual a infusão de insulina foi utilizada somente quando a glicemia ultrapassasse 220 mg/dl). O desfecho principal foi Escala de Glasgow de Desfecho 6 meses depois do trauma. Desfechos secundários foram: hipoglicemia, incidência de infecção e tempo de internação na CTI. Resultados Dos 88 pacientes randomizados, 42 foram designados para receber TTI e 46 foram designados para receber TCG. Houve, 3 exclusões no grupo de TTI e 6 no grupo de TCG. Houve um pequeno benefício para o grupo de TTI, com relação ao desfecho neurológico em 6 meses. O escore da Escala de Glasgow de Desfecho >3, que caracteriza um bom desfecho neurológico foi observado em 15 (39,5 %) pacientes no TII e em 13 (32,5%) pacientes no TCG respectivamente, mas esta pequena diferença não foi estatisticamente significativa (p= 0,63). Os pacientes do TII tiveram mais hipoglicemia: 23 (60,5%), comparado a 4 (10%) no grupo de TCG (p< 0,001). Não houve diferença no número de dias de internação na CTI (18,2 27,6 vs. 12,9 12,7) tampouco nas taxas de sepsis (84,6%vs 80%) entre os dois grupos. Conclusão Neste estudo, o TII não melhorou o desfecho neurológico dos pacientes com TCE grave mas aumentou o risco de hipoglicemia quando comparado ao TCG. / Introduction Intensive insulin therapy (IIT) has been shown to reduce morbidity and mortality in critical ill patients. Whether it improves the prognosis of patients with severe traumatic brain injury (STBI) has been little investigated. Materials and Methods We conducted a prospective controlled study where adult patients with blunt STBI, with Glasgow Coma Scale ≤ 8, admitted to the Intensive Care Unit (ICU) were randomly assigned to receive either IIT (maintenance of blood glucose between 80 and 110 mg/dl with continuous insulin infusion) or conventional glycemic therapy (CGT) (maintenance of blood glucose below 180 mg/dl with subcutaneous insulin and insulin infusion only if blood glucose levels exceeded 220 mg/dl). The main outcome was Glasgow outcome scale (GOS) 6 month after trauma. Secondary measures were: hypoglycemia, incidence of infections and days in ICU. Results Of the 88 patients randomized, 42 were assigned to IIT and 46 to CGT. There was no statistical difference (P=0.63) in neurological outcomes between treatment groups: GOS>3 was observed in 15 (39.5 %) patients in the IIT and in 13 (32.5%) patients in the CGT respectively. More patients in the IIT group had hypoglycemia: 23 (60.5%), compared to 4 (10%) in the CGT group (p<0.001). There were no differences in the number of days spent in the ICU (18.2 27.6 vs. 12.9 12.7) nor in the sepsis rates (84.6%vs 80%) between the groups. Conclusion In our study, IIT did not improve the neurological outcome of patients with STBI but did increase the risk of hypoglycemia compared to CGT.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2016-01-28T16:23:31Z No. of bitstreams: 1 2015_Ana Paula Meireles de Melo .pdf: 4334434 bytes, checksum: a6bad31e27ea897e23a8b7bf5c8f1415 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-01-29T11:54:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_Ana Paula Meireles de Melo .pdf: 4334434 bytes, checksum: a6bad31e27ea897e23a8b7bf5c8f1415 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-29T11:54:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_Ana Paula Meireles de Melo .pdf: 4334434 bytes, checksum: a6bad31e27ea897e23a8b7bf5c8f1415 (MD5) / Introdução: Hipercortisolismo leve é descrito em algumas séries de portadores de diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Ela relaciona-se com a presença de resistência insulínica (RI) e Síndrome Metabólica (SM). Entretanto, alterações da atividade do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HAA) não são consistentemente observadas entre diferentes estudos, nem estão definidos os possíveis fatores a ela associados. Objetivo: descrever a atividade do eixo HHA em pacientes com DM2 e correlacioná-la comvariáveis clínicas e bioquímicas. Métodos: estudo observacional em 54 pacientes com DM2 (40 mulheres, 14 homens), selecionados em dois hospitais de Goiânia. Foram avaliados cortisol sérico e ACTH matinais, cortisol salivar noturno e cortisol sérico e salivar após dexametasona (0,5mg, 1mg e 2 mg);além de variáveis demográficas, clínicas, antropométricas [índice de massa corporal (IMC), índice de adiposidade corporal (IAC), circunferência abdominal (CA), relação circunferência-quadril (RCQ)]e bioquímicas (glicemia de jejum, HbA1c, HOMA-IR, peptídeo C, perfil lipídico). Resultados: a média de idade e de tempo de diagnóstico foram, respectivamente, de 58,7±8,4 e 10,6±7,9 anos. As medidas de tendência central do cortisol e ACTH matinais, cortisol salivar noturno e cortisol após dexametasona foram normais. Variáveis relacionadas à atividade do eixo HHA associaram-se à presença de SM (cortisol salivar noturno e cortisol sérico após 1 mg de dexametasona superiores em pacientes com SM), RCQ (ACTH matinal correlacionado negativamente com RCQ), IAC (cortisol sérico após 2 mg de dexametasona correlacionado negativamente com IAC), porém não com o controle glicêmico ou sexo. Entre os 54 portadores de DM2, 3,8% apresentaram cortisol sérico às 8h aumentado, 3,8% ACTH às 8h aumentado e 13,5% cortisol salivar às 23h aumentado. Onze pacientes falharam em suprimir o cortisol sérico após 0,5mg de dexametasona (20,4%), quatro após 1mg (7,5%) e um após 2mg (1,9%). Falha em suprimir o cortisol salivar para valores abaixo do p75 após 0,5mg, 1mg e 2mg ocorreu em 12 (23,5%), 7(14,5%) e 7 (13,4%) pacientes, respectivamente. O cortisol salivar noturno correlacionou-se positivamente com a idade; houve associação positiva entre cortisol sérico e salivar após 1 mg e concentração sérica de peptídeo C enegativa entre cortisol salivar após 0,5 mg de dexametasona acima do p75 e IMC.A concentração média do ACTH matinal foi maior nos pacientes com doença cardiovascular do que nossem doença cardiovascular (p=0,017).Conclusão: a frequência de alterações nos resultados dos testes de atividade do eixo HHA foi semelhante à encontrada em estudos prévios. A associação entre resultados indicativos de hiperatividade do eixo HHA e variáveis relacionadas a obesidade abdominal, idade avançada e doença cardiovascular, embora não ao controle glicêmico ou diagnóstico definido de SM, sugere que alterações do eixo HHA, em portadores de DM2, possam estar relacionadas à obesidade central, envelhecimento e complicações crônicas. / Background: Hypercortisolism is described in type 2 diabetes (T2D) patients in some studies and is associated with insulin resistance and metabolic syndrome (MS). However, hypothalamus-pituitary-adrenal (HPA) axis changes are not consistently observed in different studies and it is not clear which factors may be associated with it. The aim of this study was to describe HPA axis changes in T2D patients and correlate them with clinical and biochemical variables. Methods:This was an observational study involving 54 T2D patients (40 women and 14 men) recruited from two hospitals in Goiania. Serum morning cortisol and ACTH levels, night salivary cortisol levels and serum and salivary cortisol levels in response to dexamethasone (0.5 mg, 1 mg and 2 mg) were determined. Demographic, clinical, anthropometric [body mass index (BMI), body adiposity index (BAI), abdominal circumference (AC) and waist to hip ratio (WHR)] and biochemical (fasting glucose, HbA1c, HOMA-IR, C-peptide and lipid profile) were also measured. Results: Mean age and time from initial T2D diagnosis were, respectively, 58.7±8.4 e 10.6±7.9 years. Measures of central tendency of morning cortisol and ACTH, late salivary cortisol and post-dexamethasone salivary and serum cortisol were normal. Variables related to HPA axis were associated with the presence of MS (late salivary cortisol and serum cortisol post-1 mg dexamethasone were higher in patients with MS), WHR (morning ACTH levels were negatively correlated with WHR), BAI (serum cortisol post-2 mg dexamethasone was negatively correlated with BAI), but not with glucose control or gender. Among the 54 T2D patients, 3.8% had increased morning serum cortisol levels, 3.8% had increased morning ACTH levels and 13.5% had increased late salivary cortisol levels. Eleven (20.4%) patients failed to suppress serum cortisol secretion in response to 0.5 mg dexamethasone, four (7.5%) in response to 1 mg dexamethasone and one (1.9%) in response to 2 mg dexamethasone. Late salivary cortisol levels were positively associated with age; serum and salivary cortisol levels post-1mg dexamethasone were positively associated with serum C-peptide levels and salivary cortisol post-0.5 mg dexamethasone >p75 was negatively associated with BMI. Mean morning ACTH levels were higher in patients with cardiovascular diseasethan in patients without cardiovascular disease (p=0,017).Conclusion: The frequency of HPA axis tests alterations was similar to that previously described. The association of findings suggestive of HPA hyperactivity with abdominal obesity, increasing age and cardiovascular disease, but not to glycemic control or the diagnosis of MS, suggests that HPA alterations in T2D patients may be related to visceral obesity, aging and chronic complications.

Tese de Doutorado Apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para obtenção do título de Doutor em Ciências da Saúde. / Conhecimento: A dieta hiperlipidica induz a obesidade e com isso um aumento no estresse oxidativo e resistência à insulina em vários tecidos, por meio das lipasses como, por exemplo, o lípase hormônio sensitivo, triglicerol lípase do tecido adiposo (ATGL), os receptores de adiponectina (AdipoR1 e AdipoR2) e proteína de adaptação endosomal (APPL1). Por outro lado o treinamento físico reduz o tecido adiposo, aumenta o status oxidante, previne progressão da resistência a insulina. Objetivo: Verificar a contribuição do treinamento físico nos parâmetros de estresse oxidativo e resistência a insulina em tecidos periféricos de animais expostos a dieta hiperlipidica. Método: Foram utilizados 24 camundongos divididos em 4 grupos (n=6); Controle (C); Controle e Exercício (C+Ex); Obeso (DHL) e Obeso + exercício (DHL+Ex). Os animais foram submetidos a uma dieta hiperlipidica por 90 dias e a um protocolo de treinamento físico, crônico, na modalidade de natação e sua intensidade controlada pela analise de lactato. Os animais mortos após 48 horas depois da última sessão de exercício e foram retirados cirurgicamente amostras de tecido adiposo, fígado e músculo esquelético para avaliar a via da sinalização molecular e parâmetros de estresse oxidativo. Resultados: houve ganho de peso corporal após 90 dias de dieta hiperlipidica e o treinamento físico preveniu o ganho excessivo. No tecido adiposo aumentou a peroxidação lipídica e carbonilação das proteínas e diminuiu significativamente após o treinamento físico, níveis de proteína CGI-58 foi reduzida e FAS foi aumentada no obeso, e no treinado houve aumento de ATGL. A fosforilação do receptor da insulina e substrato do receptor da insulina e Akt foram diminuídas em todos nos tecidos avaliados quando comparados DHL com C, o mesmo ocorreu com AdipoR1 (adiposo e músculo esquelético) e AdipoR2 (fígado) e a APPL1, no entanto o treinamento físico demonstrou capacidade de melhorar a fosforilação nestes tecidos. Conclusão: O exercício físico tem um importante papel da redução de estresse oxidativo e na regulação das proteínas que envolvem a lipólise em obesos. Resultados semelhantes foram observados na ação da insulina que também apresentou melhoras por meio dos receptores de adiponectina e APLL1 em todos os tecidos avaliados (adiposo, músculo e fígado) de camundongos obesos.

O efeito de refeições ricas em carboidratos e lipídeos sobre a sensibilidade à insulina foi avaliado. Além disso, investigou-se o conteúdo da proteína GLUT4 em músculo esquelético e tecido adiposo branco. Ratos foram realimentados por 1, 2, 4 e 6 horas com: refeição balanceada (B); rica em carboidrato (C) e rica em lipídeo (L). O índice glicose/insulina revelou que C e L apresentavam resistência à insulina 2 horas após o início da ingestão. No teste de tolerância à insulina, uma redução (~47%) na sensibilidade à insulina foi observada em C após 2 e 4 horas de realimentação. O teste de tolerância à glicose confirmou a resistência à insulina em C e L após 2 horas de ingestão. Não houve alteração no conteúdo de GLUT4, nos momentos em que se verificou alteração na sensibilidade à insulina. Tais resultados indicam que, em ratos, refeições não balanceadas (alto teor de carboidrato ou alto teor de lipídeo), induzem menor sensibilidade à insulina 2 horas após o início da ingestão, e este fenômeno não envolve alterações no conteúdo de GLUT4 nos tecidos avaliados. / The effect of high carbohydrate and fat meals on the insulin sensitivity was evaluated. Furthermore, it was investigated the content of GLUT4 protein on the skeletal muscle and white adipose tissue. Rats were refed for 1, 2, 4 and 6 hours with: balanced meal (B); high carbohydrate meal (C) and high fat meal (L). The glucose/insulin index shows that C and L meals exhibited insulin resistance after 2 hours of ingestion. In the insulin tolerance test, a reduction (~47%) in the insulin sensitivity was observed in C group after 2 and 4 hours of refeeding. The glucose tolerance test confirmed the insulin resistance in C and L-groups after 2 hours of ingestion and such phenomena did not involve alterations in the GLUT4 content on both skeletal muscle or white adipose tissue.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-09Bitstream added on 2014-06-13T18:08:41Z : No. of bitstreams: 1 mota_csa_me_rcla.pdf: 584210 bytes, checksum: 95f9148701500f746ca20fa7b7629183 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Na identificação da síndrome metabólica existem controvérsias, pois não há um único critério internacional para a descrição definitiva. As alterações comuns encontradas na tentativa de definir essa síndrome incluem resistência à insulina, com ou sem diabetes mellitus tipo 2, hipertensão arterial, obesidade, dislipidemia, disfunção endotelial, entre outras. Na busca de um modelo experimental adequado ao estudo da síndrome metabólica, o presente estudo visou analisar características metabólicas de ratos submetidos ao tratamento neonatal com aloxana e/ou à dieta hipercalórica altamente palatável a partir do desmame (28 dias) à idade adulta (120 dias). Como o exercício físico tem sido indicado no tratamento desta doença, este estudo visou também avaliar a capacidade aeróbia dos animais. Foram utilizados ratos da linhagem Wistar, que receberam, aos seis dias de idade, injeção intraperitonial de aloxana – grupo aloxana (250mg/Kg de peso corporal); ou tampão citrato 0,01M – grupo controle. Após o desmame (28 dias), os grupos foram subdivididos conforme a dieta recebida, balanceada ou hipercalória, compondo 4 grupos: Controle (C), Hipercalórica (H), Aloxana (A) e Aloxana Hipercalórica (AH). Foram analisados peso corporal, tolerância à glicose e sensibilidade periférica à insulina, pressão sistólica, concentrações séricas de glicose, insulina, triglicerídeos, colesterol total, colesterol HDL, colesterol LDL e AGL, concentrações hepáticas de lipídeos e glicogênio, peso e concentrações de lipídeos nas diferentes regiões do tecido adiposo, secreção de insulina por ilhotas pancreáticas isoladas, composição química da carcaça além das respostas dos animais a um teste de 2 esforço para avaliar a capacidade aeróbia. A partir dos resultados obtidos, foi possível verificar que a associação entre dieta hipercalórica e aloxana (AH)... / There are many controversial points in the metabolic syndrome characterization, since it does not exist an international agreement on the definitive metabolic syndrome concept. Some disorders as insulin resistance, with or without type 2 diabetes, hypertension, obesity, dyslipidemia, endothelial dysfunction are often found among the characteristics included set a definition to metabolic syndrome. In order to establish an adequate model to study the role of exercise on preventing from metabolic syndrome, the present study aimed to evaluate the metabolic characteristics of Wistar rats submitted to neonatal alloxan treatment and /or high palatable diet from weaning (28 days) to adult age (120 days). As physical exercise has used in the treatment of the disease, this study aimed, also, to evaluate the animals’ aerobic capacity. Wistar rats received intraperitonial injection of alloxan – Alloxan group (250mg/kg of body weigh); or citrate buffer 0,01M – Control group. After weaning (28 days), the groups were subdivided according to the diet: balanced (Control) or high caloric diet, forming 4 groups: Control (C), High caloric diet (H), Alloxan (A) and Alloxan High caloric (AH). Body weight gain, glucose tolerance and peripheral insulin sensibility, systolic blood pressure, serum glucose, insulin, triglycerides, total cholesterol, HDL cholesterol, LDL cholesterol and AGL concentration and liver lipid and glycogen concentrations, weight and lipid concentrations in distict regions from adipose tissue, glucose-induced insulin secretion by the isolated pancreatic islets, and the carcass chemical composition were analyzed. The animals responses to an effort tests to evaluate the aerobic capacity were also analyzed. The association between high caloric diet and alloxan was found to be efficient in inducing metabolic syndrome characteristics, since the animals (AH group) presented high body weigh... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-10-31Bitstream added on 2014-06-13T20:49:47Z : No. of bitstreams: 1 destro_m_me_botib.pdf: 1170172 bytes, checksum: dde49d0cf6d568f068e97098c9cdebe7 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O aumento da secreção de insulina estimulada por glicose é um mecanismo adaptativo observado nas ilhotas pancreáticas de animais resistentes à insulina. Estudos relatam que os ácidos graxos livres estimulam a secreção de insulina através da ativação do GPR40. Diante destes fatos, investigamos a secreção de insulina, a expressão de proteínas da via do GPR40 nas células ß e a participação dos lipídios na resistência à insulina induzida por dexametasona, através do tratamento com o redutor de lipídios bezafibrato. Os grupos receberam gavagem uma vez ao dia durante 28 dias: Controle (CTL) e DEXA com goma arábica 5% (1 ml/kg, peso corpóreo); BEZA e BEZA-DEXA com bezafibrato (300 mg/kg, p.c.). Nos últimos 5 dias de tratamento os grupos receberam injeções intraperitoniais: CTL e BEZA de solução salina (1 ml/kg, p.c.); DEXA e BEZA-DEXA de dexametasona (Decadron® 1,0 mg/kg, p.c). A secreção de insulina estimulada por glicose aumentou nos grupos BEZA e DEXA. BEZA-DEXA exibiu diminuição dos níveis de ácidos graxos livres, triglicérides e de insulina, mas não houve elevação dos níveis de glicose no sangue. Além disso, houve melhora na resistência à insulina e restauração do padrão de secreção de insulina, em comparação ao grupo DEXA. Nas ilhotas dos animais BEZA-DEXA a expressão das proteínas GPR40, PLCß1 e PKCδ foi significativamente maior em relação aos valores obtidos em DEXA. Esta via permaneceu inalterada nas ilhotas de DEXA e BEZA. Em conclusão, o tratamento com bezafibrato melhorou a função das células ß e impediu a indução de resistência à insulina pelo tratamento com dexametasona, mas os mecanismos não são conhecidos. O aumento na secreção de insulina em DEXA aparentemente não está relacionado com a ativação do GPR40. Contrariando a literatura, apesar da redução na secreção de insulina, as ilhotas dos animais BEZA-DEXA apresentaram ativação da via do GPR40 / Increased glucose-stimulated insulin secretion is an adaptive mechanism exhibited by pancreatic islets from insulin resistant animal. Studies report that the free fatty acids stimulate the insulin secretion via GPR40. As such, we investigate the expression of GPR40 in ß-cells and the involvement of lipids in dexamethasone-induced IR, by lipid-lowering therapy with bezafibrate. Groups received once daily gavage for 28 days: Control (CTL) and DEXA with gum Arabic 5% (1.0 mg/kg, body weight); BEZA and BEZA-DEXA with bezafibrate (300 mg/kg, b.w.). In the last 5 days of the treatment groups received intraperitoneal injections: CTL and BEZA of saline (1.0 mg/kg, b.w.); DEXA and BEZA-DEXA of dexamethasone (Decadron® 1.0 mg/kg, b.w.). The glucose-stimulated insulin secretion increased in the DEXA and BEZA groups. BEZA-DEXA shows decrease in fatty acids, triglycerides and insulin levels, but not raised blood glucose levels. In addition, there was improved in insulin resistance and restoration the insulin secretory pattern, when compared to DEXA group. In BEZA-DEXA islets, GPR40, PLCß1 and PKCδ protein content was significantly higher than DEXA. This pathway remained unchanged in DEXA and BEZA islets. In conclusion, bezafibrate treatment improved ß-cell function and prevented dexamethasone-induced IR, but the mechanisms are not known. Augmented insulin secretion in DEXA appears to be unrelated to the activation of the GPR40. Contrary to the literature, despite the reduction in insulin secretion, BEZA-DEXA islets showed activation of the GPR40 pathway

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-30Bitstream added on 2014-06-13T18:52:00Z : No. of bitstreams: 1 rosa_lc_me_botfm.pdf: 636625 bytes, checksum: 4e80c747550326696f8ac42a9a3aed5a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O diabetes tipo I é uma doença causada pela destruição autoimune das células do pâncreas que resulta em deficiência na produção de insulina. O objetivo deste projeto foi, inicialmente, avaliar o potencial profilático de seis estratégias vacinais no controle do diabetes experimental induzido por estreptozotocina (STZ) em camundongos C57BL/6. As três primeiras são específicas e baseadas na imunização com insulina em condições tolerogênicas que incluem associação com alúmen, dexametasona ou Adjuvante Incompleto de Freund (AIF). As outras três são não-específicas e baseadas em estratégias do tipo prime-boost. Neste caso foram testadas as seguintes combinações: BCG/DNAhsp65, BCG/hsp65 e DNAhsp65/BCG. Nos três protocolos iniciais, camundongos C57BL/6 machos foram imunizados e posteriormente inoculados com múltiplas doses de streptozotocina para desencadeamento do diabetes tipo I. Para avaliação inicial do efeito protetor foram determinados os seguintes parâmetros: peso, glicemia, análise histopatológica do pâncreas e perfil de citocinas produzidas por células esplênicas. Dentre todos os protocolos testados com o modelo STZ, os resultados observados no grupo imunizado por priming com BCG seguido de boost com DNAhsp65 forneceu os resultados mais promissores. Neste caso, a hiperglicemia foi menor, ocorreu proteção parcial contra a insulite e produção significativa de IL-10 por células estimuladas in vitro com hsp65. Por último, avaliamos o efeito da estratégia BCG/DNAhsp65 na evolução do diabetes no modelo NOD. Esta imunização determinou maior ganho de peso, proteção contra a hiperglicemia, aumento na produção de citocinas e diminuição na porcentagem de ilhotas inflamadas quando comparado ao grupo de camundongos NOD não imunizados. Esta proteção se mostra promissora e deverá ser confirmada em estudos futuros / Diabetes type I is a disease caused by autoimmune destruction of the beta cells in the pancreas that leads to a deficiency in insulin production. The aim of this project was, initially, to evaluate the prophylactic potential of six different vaccine strategies on diabetes type 1 induced by streptozotocin (STZ) in C57BL/6 mice. The first three strategies were specific for diabetes and based on immunization with insulin in tolerogenic conditions including insulin associated with Incomplete Freund Adjuvant (IFA), alum or dexamethasone. The other three were based on prime-boost strategies involving BCG and the DNAhsp65 vaccine: BCG/DNAhsp65, BCG/hsp65 e DNAhsp65/BCG. In the first three experimental protocols, male C57BL/6 mice were immunized with one of the vaccine strategies and later diabetes was induced with multiple low doses of STZ. The following parameters were analyzed to evaluate the prophylactic potential: body weight, glycemic levels, pancreatic islets histopathological analysis and cytokine production by spleen cells. From all strategies tested in the STZ model, the one with the most promising results was BCG as a primer followed by a booster with DNAhsp65. In this case, we observed protection against weight loss and against hyperglycemia, a decreased islet inflammation and significantly increased production of IL-10 induced by in vitro stimulation with hsp65. As a final point, we evaluated the effect of BCG/DNAhsp65 in the evolution of diabetes in NOD mice. This immunization determined weight gain, protection against hyperglycemia, decreased islet inflammation and higher levels of cytokine production when compared with non-immunized NOD mice. These findings are very interesting and deserve further investigations

Orientador: Doris Hissako Sumida / Banca: Roberta Okamoto / Banca: Sérgio Eduardo de Andrade Perez / Resumo: O flúor é um elemento traço essencial para a manuten ção da saúde óssea, devido à capacidade de estimular a proliferação osteoblástica, levando ao aumento da formação óssea. No entanto, a ingestão excessiva de fluoreto de sódio pode prejudicar o metabolismo dos carboidratos, promovendo hiperglicemia, resistê ncia à insulina e alterações no sinal insulínico. Dessa forma, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do tratamento crônico com NaF no metabolismo ósseo, na sinalização insulínica e nas concentrações plasmáticas de glicose, insulina, flúor, TNF - α e osteocalcina em ratas ovariectomizadas. Trinta e seis ratas Wistar ovariectomizadas foram distribuídas aleatoriamente em dois grupos: OVX - C, como grupo controle, e grupo OVX - F, que foi submetido ao tratamento com NaF (50 mg F/L) na água de beber durante 42 dias. Foram determinadas as concentrações plasmáticas de glicose e insulina, seguido pelo cálculo do HOMA - IR. A fosforilação em serina da Akt foi avaliada pelo método de Western blotting. As tíbias direita e esquerda foram coletadas para análises imuno - histoquímica e histomorfométrica. Os resultados do presente estudo demonstraram que o tratamento crónico com NaF promoveu resistência à insulina, diminuição do sinal insulínico, aumento das concentrações plasmáticas de insulina, flúor, osteocalcina e TNF - α ; diminuição da área óssea trabecular da tíbia e alterações nos marcadores do metabolismo ósseo em ratas ovariectomizadas. Esses resultados sugerem cautela no uso de NaF para o tratamento da osteoporose, especialmente em mulheres na pós-menopausa / Abstract: Fluoride is an essential trace element for the maintenance of bone health due its capacity of stimulating the proliferation and osteoblastic activity that can lead to increase bone formation. However, excessive sodium fluoride intake can impair carbohydrate metabolism, promoting hyperglycemia, insulin resistance and change in insulin signal. Thus, this study aimed to evaluate the effect of chronic treatment with NaF in bone metabolism; insulin signaling; plasma concentrations of glucose, insulin, TNF-α, osteocalcin and fluoride in ovariectomized rats. Thirty six ovariectomized Wistar rats were randomly distributed into two groups: OVX-C, as control group, and OVX-F group, undergoing treatment with NaF (50mg F/L) in drinking water for 42 days. Plasma concentration of glucose and insulin were assessed, followed by homeostasis model assessment of insulin resistance (HOMA-IR). The Akt serine phosphorylation was evaluated by western blotting. The right and left tibias were collected for immunohistochemical and histomorphometric analysis, respectively. The chronic treatment with NaF promoted insulin resistance; decreased insulin signal; increase in the plasma concentration of insulin, fluoride, osteocalcin and TNF-α; decreased trabecular bone area of the tibia and changes in bone metabolism markers in ovariectomized rats. These results suggest caution in the use of NaF for the treatment of osteoporosis especially in postmenopausal woman / Mestre

Orientador: André Sampaio Pupo / Banca: Oduvaldo Câmara Marques Pereira / Banca: Suma Imura Shimuta / Resumo: Os α1-ARs são membros da superfamília de receptores acoplados à proteína G (GPCR), podendo ser divididos em três diferentes subtipos (α1A-, α1B- e α1D-ARs), sendo todos semelhantemente ativados pela noradrenalina e adrenalina. Os agonistas seletivos de α1-ARs podem ser classificados em duas classes químicas, as feniletilaminas e as imidazolinas e são utilizados, por exemplo, para tratamento de hipotensão e também como descongestionantes nasais. O presente estudo investigou a capacidade dos agonistas de α1-ARs induzirem taquifilaxia nas contrações do ducto deferente de rato e internalização de α1A-ARs conjugados com proteína fluorescente verde (GFP) expressos em células HEK293. Os resultados mostram que dentre todos os agonistas testados da classe das feniletilaminas (noradrenalina, metoxamina e fenilefrina) e imidazolinas (A61603, nafazolina e oximetazolina) apenas a oximetazolina foi capaz de induzir taquifilaxia em curvas concentração-resposta consecutivas próprias e também em curvas concentraçãoresposta de noradrenalina feitas em preparações de ducto deferente de rato. A taquifilaxia induzida pela oximetazolina é dependente da ativação de α1A-ARs, uma vez que a incubação concomitante da oximetazolina com o antagonista seletivo de α1-ARs, o prazosin, inibiu a taquifilaxia. Estudos feitos com microscopia confocal utilizando α1A-ARs conjugados com GFP mostram que a oximetazolina é capaz de induzir um aumento da fluorescência intracelular já nos primeiros 5 minutos de incubação enquanto que a noradrenalina não é capaz de induzir aumento do mesmo parâmetro mesmo após 30 minutos de incubação. Esse aumento da fluorescência intracelular é um indicativo do processo de internalização dos α1A-ARs conjugados com GFP induzido pela oximetazolina mas não pela noradrenalina e pode estar relacionado com a taquifilaxia observada nos experimentos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The α1-ARs are G-protein coupled receptors (GPCR) composed by three subtypes (α1A-, α1B- e α1D-ARs), similarly activated by epinephrine an norepinephrine. The selective agonists of α1-ARs can be classified into two different chemical classes, the phenylethylamines and imidazolines, which are used for treatment of hypertension and as nasal decongestants. The present study investigated the ability of some α1-ARs agonists to induce tachyphylaxis in the contractions of rat vas deferens and internalization of the α1A-ARs tagget with green fluorescent protein (GFP) expressed in HEK293 cells. It was observed in the rat vas deferens that, among all agonists tested (the phenylethylamines norepinephrine, metoxamine, phenylephrine and imidazolines A61603, naphazoline and oxymetazoline), only oxymetazoline can induce tachyphylaxis in consecutive concentration-response curves and also in concentration-response curves to norepinephrine. The tachyphylaxis induced by oxymetazoline is dependent on α1-ARs activation, since it was inhibited in presence of prazosin, a α1-ARs selective antagonist. Confocal microscopy studies of HEK 293 cells expressing α1A-ARs tagget with GFP show that oxymetazoline can induce prompt and time-dependent increase in intracellular fluorescence already after 5 minutes of incubation, whereas norepinheprine was unable to increase intracellular fluorescence even after 30 minutes of incubation. This increase in intracellular fluorescence indicates that oxymetazoline, but not norepinephrine, induces internalization of the α1A-ARs tagget with the GFP. The internalization of α1A-ARs tagget with the GFP induced by oxymetazoline may be related to the tachyphylaxis observed in funtional experiments. However, other studies are necessary to understand the mechanisms of tachyphylaxis and internalization induced by oxymetazoline in the present study. / Mestre