As dosagens de estradiol e progesterona são utilizadas em grande número de pesquisas em reprodução animal. Vários métodos e anticorpos para quantificação vêm sendo desenvolvidos, porém cada metodologia analítica possui vantagens e limitações. O radioimunoensaio é o mais utilizado, mas tem como principal desvantagem o envolvimento de material radioativo. A preocupação neste setor aliada às exigências das legislações em questões ambientais, têm aumentado a necessidade do desenvolvimento de novas técnicas sem a utilização de material radioativo. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a técnica xMAP-Multiplex® para dosagem de estradiol e progesterona em vacas, ovelhas e búfalas. Foram utilizados cinco animais de cada espécies. O ciclo estral dos animais foi sincronizado com a utilização de prostaglandina e amostras sanguíneas foram coletadas durante o ciclo estral. As concentrações séricas de progesterona e estradiol dos animais do estudo foram obtidas pelo MILLIPLEX® MAP Multi Species Steroid kit (STTHMAG-21K; Millipore, Billerica, MA). Nas condições em que este experimento foi realizado, os resultados mostraram que esta técnina é viável para a avaliação do perfil progesterônico destas espécies, mas não para avaliar o perfil estrogênico. / Quantification of estradiol and progesterone are used in a big number of animal´s reproduction´s researches. Several methods and antibodies to quantify them have been developed, but each analytical methodology has advantages and limitations. Radioimmunoassay is the most widely used method, but it has as major disavantage the use of radioactive material. The concerns at this area added to the requirements of legislations about environmental topics have increased the need to development techniques without the use of radioactive material. The aim of this research was to evaluate the xMAP-Multiplex® technique to quantify progesterone and estradiol in ovines, bovines and bubalins. Five animals of each species were used. The estrous cycle of the animals was synchronized by prostaglandin and blood samples were collected during the estrous cycle. The seric concentrations of progesterone and estradiol were obtained by MILLIPLEX® MAP Multi Species Steroid kit (STTHMAG-21K; Millipore, Billerica, MA). Under the conditios of this experiment the results showed that this technique is practicable to evaluate progesterone´s profile in those animals, but not to evaluate their estradiol´s profile.

Pouco se conhece acerca dos aspectos fisiológicos da reprodução de ranfastídeos, sendo estas informações importantes para sua conservação e criação em cativeiro. Métodos não-invasivos permitem análises a longo prazo e em espécies pequenas, além de facilitar estudos em vida livre e minimizar o estresse causado aos animais. Este trabalho teve por intuito a dosagem de metabólitos de testosterona (machos e fêmeas), progesterona e estradiol (somente fêmeas) nas excretas de 3 casais de tucano-toco (Ramphastos toco) e 3 casais de tucano-de-bico-verde (Ramphastos dicolorus), dentro e fora da estação reprodutiva. Dados de observações comportamentais mostraram que os animais foram mais ativos durante a estação reprodutiva, porém comportamentos sociais e proximidade entre o casal se mostraram raros nas duas fases durante as seções de observação. Concentrações de metabólitos de progesterona foram obtidos para as duas espécies na Fase Reprodutiva, mas não foram detectados nos ensaios para a Fase Não-reprodutiva. Metabólitos de testosterona puderam ser dosados em ambas as espécies, nas duas fases, tanto em machos quanto em fêmeas; sendo que os resultados mostraram para a maioria dos indivíduos concentrações maiores na Fase Reprodutiva. Aumentos acima de variações basais de metabólitos de testosterona foram associados à ocorrência de posturas, que ocorreram durante a Fase Reprodutiva numa das fêmeas de R. toco. Não foram obtidos resultados de metabólitos de estradiol em nenhuma das duas espécies, possivelmente pela falha do anticorpo utilizado em reconhecer os metabólitos. No entanto, este trabalho mostrou que a técnica utilizada foi eficaz para dosagem de metabólitos de testosterona e progesterona nas excretas destas espécies, evidenciando variações sazonais nas concentrações hormonais e indicando uma relação entre a concentração de metabólitos de testosterona e as posturas. / Little is known about reproductive physiology in Ranfastidae and this knowledge is needed for the development of conservation programs and for successful captive breeding. Non-invasive methods allow long-term analysis in small animals, facilitate studies with free-living animals and minimize the handling stress. The purpose of this work was to measure the testosterone (males and females), progesterone and oestrogen (females) metabolites concentrations in the droppings of Toco-toucan (Ramphastos toco) and Red-billed-toucan (Ramphastos dicolorus), inside and outside the reproductive season. Three captive couples of each species were studied. Collected behavioural data showed that the animals were more active during reproductive season, but social behaviours and the couple proximity were rare in the two phases during the observation sessions. Progesterone metabolites concentrations could be obtained in the Reproductive Phase for both species, but weren`t detected in the Nonreproductive Phase. Testosterone metabolites could be measured for both species in the two phases, in males and females; and the results showed higher concentrations in most of individuals in the Reproductive Phase. Concentrations of testosterone metabolites above basal levels were associated to egg laying, which occurred during Reproductive Phase in one of the R. toco females. Results of oestrogen metabolites concentrations could not be obtained in both species, probably because the fail of the antibody in detecting these metabolites. However, this work showed that the utilized technique was efficient to measure testosterone and progesterone metabolites in those species droppings, evidencing seasonal variations in hormonal concentrations and indicating a relationship between testosterone concentrations and oviposition.

Quatro experimentos foram realizados para avaliar as concentrações plasmáticas de progesterona ([P4]) e as taxas de fertilidade na inseminação artificial em tempo fixo (IATF) após o uso de diferentes dispositivos de liberação lenta de progesterona (DP). No primeiro experimento foram utilizadas 4 novilhas ovariectomizadas. Esses animais receberam 5 diferentes tipos de DP, nos quais se variou a superfície de contato (50cm² ou 100 cm² e a dose de progesterona (0,5g; 1,0g e 2,0g) Os dispositivos foram inseridos aos pares durante 7 dias e se estabeleceu um intervalo entre tratamentos de pelo menos 30 dias. Com os dados de [P4] 24 horas e sete dias após a inserção do DP obtiveram-se as seguintes equações de regressão, respectivamente: [P4]24h = 0,238 + 0,0343(área) + 0,513(dose); (R²=0,94) e [P4] 7d = 0,331+ 0,0056(área) + 0,329(dose); (R²=0,71). No segundo experimento foram comparados dois dos dispositivos testados no primeiro estudo: P50-1,0 (50 cm2 área; 1,0g dose P4) e P50-1,5 (50 cm² área; 1,5g dose P4) com dois dispositivos comerciais: CIDR (120 cm² área; 1,9g P4 dose) e DIB (120 cm² área; 1,0g P4 dose). Os dispositivos foram inseridos em 15 novilhas Nelore pré-puberes para avaliação das [P4] obtendo-se, após 24 horas de inserção, para CIDR, DIB, P50-1,5 e P50-1,0, respectivamente: 7,7±2,8ª ; 4,5±0,75b; 5,9±2,5b e 2,1±0,5c ng/ml e após 8 dias, respectivamente: 3,3±0,7ª ; 2,6±2,0ª; 3,0±2,4ª e 1,1±0,27bng/ml. As regressões obtidas no primeiro experimento não foram eficientes para estimar as [P4] obtidas no estudo 2. Nos experimentos 3 e 4 comparou-se a eficiência dos dispositivos DIB e P50-1,5 em 431 vacas de corte zebuínas e cruzadas, com bezerros ao pé e multíparas, após uso em um programa de IATF no qual os dispositivos permaneciam nos animais durante 8 dias; quando da colocação desses dispositivos, eram aplicados 2mg de benzoato de estradiol (BE) e, na retirada, 400UI de eCG. Uma última dose de BE foi administrada 24 horas após a retirada dos DP, e a IATF foi realizada 54 horas após a retirada dos DP. Não foram encontradas diferenças nas taxas de concepção da IATF entre dispositivos. As taxas de concepção variaram entre 30 e 51,6% nos lotes tratados. O tratamento diminuiu o intervalo tratamento-parto de 365 para 317 dias, comparado à monta natural. / Four studies have been made to evaluate the plasmatic progesterone concentration ([P4]) of different intravaginal low delivery progesterone devices (PD) and the fertility rates after their use in timed artificial insemination (TAI). In the first study there were used 4 ovariectomized heifers. These animals received 5 kinds of prototypes PD on which varied the contact surface (50 or 100 cm²) and the progesterone doses (0,5; 1,0 or 2g). These PD were inserted in the vaginas in pairs and the interval between treatments was higher than 30 days. With the data of [P4] there were found the fallowing regressive equations for the days 1 and 7 after the insertion , respectively: [P4]24h = 0,238 + 0,0343(surface) + 0,513(dose); (R²=0,94) and [P4]7d = 0,331+ 0,0056(surface) + 0,329(dose); (R²=0,71). In the second study there were compared 2 prototypes PD based on the first study: P50-1,0 (50 cm² surface; 1,0g dose P4) and P50-1,5 (50 cm² surface; 1,5g dose P4) with two commercial PD: CIDR (120 cm² surface; 1,9g P4 dose) and DIB (120 cm² surface; 1,0g P4 dose). These PD were inserted in 15 prepuberal Nelore heifers to evaluate the [P4] The [P4] (in ng/ml) found after 24 hours were for CIDR, DIB, P50-1,5 e P50-1,0, respectively: 7.7±2.8ª ; 4.5±0.75b; 5.9±2.5b e 2.1±0.5c ng/ml and after 8 days, respectively: 3.3±0.7ª ; 2.6±2.0ª; 3.0±2.4ª e 1.1±0.27b ng/ml. The regressive equations found in the first study were not efficient to estimate the [P4] for the prototypes PDs. In the studies 3 and 4 there were compared the PD DIB and P50-1.5 for TAI in 431 Nelore and cross-breed lactating postpartum beef cows. The TAI protocol was: PD insertion per 8 days, administration of 2 mg estradiol benzoate (EB) in the insertion day - 400 UI of eCG in the PD removal - 1mg EB 24 hours after PD removal- TAI 54 hours after the PD removal. There were no differences in TAI conception rates between PD. The TAI conception rates ranged from 30 to 51.6% in the treated herds. The treatment has decreased the treatment-partum interval from 365 to 317 days on animals submitted to natural mating.

O objetivo do experimento I foi avaliar a redução do tempo de permanência do dispositivo de P4 de 9 para 7 dias sob parâmetros reprodutivos de vacas Nelore. Foram utilizadas 674 vacas lactantes entre 40-60 dias pós parto que receberam no início do protocolo (d0) BE + CIDR. No momento da retirada do CIDR foi administrado PGF2 &#945;, ECP e eCG. A IATF ocorreu 55 e 48 horas após a retirada do dispositivo nos tratamentos 7d-CIDR e 9d-CIDR, respectivamente. Dez dias após a IA foi realizada colheita de sangue para dosagem de P4 sérica e confirmação da ovulação. Vacas tratadas com 7d-CIDR apresentaram menor (p < 0,01) folículo ovulatório em relação ao 9d-CIDR. No entanto, a concentração de P4 pós-IA, taxas de ovulação, detecção de estro e prenhez não foram influenciadas pelo tempo de permanência do CIDR. Assim, o uso do CIDR por 7 dias promoveu desempenho reprodutivo semelhante em vacas Nelore comparado ao protocolo com 9 dias. O experimento II teve o objetivo de avaliar os efeitos da reutilização do CIDR por até 35 dias de uso em vacas e 42 dias em novilhas Nelore. Utilizou-se 749 vacas lactantes 40-60 dias pós parto e 92 novilhas púberes. No d0 os animais receberam BE + CIDR novo (CIDR1) ou previamente usado por 7 (CIDR2), 14 (CIDR3), 21 (CIDR4), 28 (CIDR5) e 35 (CIDR6) dias. No momento da retirada do CIDR (d7) foi administrado PGF2 &#945;, ECP, eCG e exame de US para mensuração do maior folículo (FD), além de colheita de sangue para dosagem de P4. A IATF ocorreu 55 horas após a retirada do dispositivo. O diâmetro do FD foi maior (p < 0,01) de acordo com o maior número de usos do CIDR nas vacas, a concentração de P4 reduziu nos CIDRs reutilizados porém se mantiveram acima de 1,5 ng/ml e a taxa de prenhez não foi afetada pela reutilização do dispositivo por até 5 vezes em vacas e o sexto uso em novilhas. O protocolo com 7 dias de permanência permite a reutilização do CIDR por até 6 vezes mantendo a mesma eficiência reprodutiva. No experimento III o objetivo foi avaliar se a aplicação do eCG dois dias antes da retirada do dispositivo aumenta o tamanho do FO, CL e taxa de prenhez. Foram utilizadas 681 vacas lactantes 40-60 dias pós parto e 182 novilhas púberes. Os animais foram distribuídos em dois tratamentos com aplicação de eCG no quinto (5d-eCG) ou sétimo dia (7d-eCG). No d0, os animais receberam BE + CIDR e no dia 7 o CIDR foi retirado e administrado PGF2 &#945; e ECP. Dez dias após a IA foi realizada US para mensuração do CL e colheita de sangue para dosagem de P4. A IATF ocorreu 55 horas após a retirada do dispositivo. O tratamento 5d-eCG aumentou (p < 0,01) o FO nas vacas em relação ao grupo 7deCG e o mesmo ocorreu nas novilhas. Em vacas, a concentração de P4 pós IA foi mais alta (p = 0,04) no 5d-eCG. Em novilhas o diâmetro do CL pós-IA foi maior (p < 0,01) no 5d-eCG. No entanto, a antecipação da aplicação do eCG foi eficiente em aumentar o folículo ovulatório no momento da IATF, mas não aumentou a taxa de prenhez / The aim of the experiment I was to evaluate the reduction of the time of P4 device from 9 (9d-CIDR) to 7 (7d-CIDR) days and its impacts on reproductive parameters of Nellore cows. Six hundred and seventy-four suckling cows 40-60 days postpartum received EB + CIDR at d0 of the protocol. At CIDR removal, there were administered PGF2 &#945;, ECP, eCG. The FTAI occurred 55 and 48 hours after device removal in the treatment 7d-CIDR and 9d-CIDR, respectively. Ten days after AI blood samples were collected for P4 analysis and ovulation rate. Cows of treatment 7d-CIDR showed lower (p <0.01) ovulatory follicle (OF) than 9d-CIDR. The CIDR length in cows and heifers did not influence concentration of P4, ovulation rate, estrus detection rate and pregnancy rate. Thus, the use of CIDR by 7 days did not impacted reproductive result in suckling cows and Nellore heifers. The aim of experiment II was to evaluate the effects of the CIDR reuse up to 35 days in cows and heifers on reproductive characteristics. We used 749 suckling cows 40-60 days postpartum and 92 pubertal heifers. In d0 animals received EB + new CIDR (CIDR1) or previously used by 7 (CIDR2), 14 (CIDR3), 21 (CIDR4), 28 (CIDR5) and 35 (CIDR6) days. At CIDR removal were administered PGF2 &#945;, ECP, eCG and US to measure the largest follicle (LF), and blood collection for P4 analysis. The TAI occurred 55 hours after device removal. The LF diameter was greater (p <0.01) in CIDR reused in cows. P4 concentration was lower in CIDR reused, but was higher than 1.5 ng / mL, and the device reused up to 5 times in cows and 6 times heifers did not affect pregnancy rate. The 7d-CIDR protocol allowed the reuse of CIDR up to 6 times keeping the same efficiency of CIDR new. In the experiment III the objective was to evaluate whether the application of eCG two days before the device removal increases the size of OF, CL and pregnancy rates. Six hundred and eighty-one suckling cows 40-60 days postpartum and 182 pubertal heifers were used. The animals were divided into two treatments with eCG application in fifth (5d-eCG) or seventh day (7d-eCG) of protocol. In d0, the animals received EB + CIDR and day 7 CIDR was removed and administered PGF2 and ECP. Ten days after AI, US was performed to measure the size of CL and blood collection for P4 analysis. The TAI occurred 55 hours after CIDR removal. The treatment d5 eCG increased (p < 0.01) OF. In cows, the concentration of P4 after AI was higher (p = 0.04) in 5d-eCG. In heifers, the CL diameter was higher in 5d-eCG. However, the 5d-eCG did not increase (p > 0.1) pregnancy rate. The strategy of eCG application in d5 was efficient to increase ovulatory follicle, but did not increase pregnancy rate

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T16:21:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanatelli_Marianna_M.pdf: 26022421 bytes, checksum: 23b2b9c60198cc10c0b2a25abeb3f837 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A próstata feminina é uma glândula funcionalmente ativa encontrada em diversas espécies de mamíferos, incluindo humanos e roedores. Em fêmeas adultas de gerbilos, a próstata apresenta localização parauretral, exibindo íntimo contato com a parede da uretra média. Esta glândula é homóloga à próstata ventral de roedores machos, sendo formada por um conjunto de ácinos e ductos inseridos em um estroma fibromuscular. O estudo da morfofisiologia prostática nas fases do ciclo estral tem demonstrado que a próstata feminina é influenciada pelas oscilações nos níveis séricos de estradiol e progesterona, com picos nas fases de estro e diestro II, respectivamente. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da administração combinada e prolongada de estradiol e progesterona sobre a próstata de fêmeas de gerbilo ovariectomizadas. A ovariectomia causou regressão glandular e diminuição da atividade secretora, aspectos sugeridos, entre outros, pela diminuição da massa prostática e a quase ausência de secreção glicoprotéica. Essas mudanças estão ligadas à supressão hormonal causada pela retirada dos ovários. A posterior reposição pelo estradiol e pela progesterona em associação mostrou uma grande recuperação da estrutura e fisiologia geral da próstata, evidenciada pelo aumento da altura do epitélio, da massa prostática e da atividade secretora. Os níveis hormonais aumentaram, justificando a recuperação da glândula, porém não atingiram o mesmo perfil observado no grupo controle. Também foram avaliadas as alterações na expressão de AR, ER?, ER? e no indicador de proliferação celular, PCNA, que mostraram maior imunorreatividade e maior número de células proliferativas no grupo tratado. A integridade da próstata não se relaciona apenas com os níveis de estrógeno e progesterona, mas também com o balanço cíclico entre esses hormônios no organismo feminino. Por fim, estudos sobre as ações do estrógeno e da progesterona na próstata podem abrir caminho para o desenvolvimento de tratamentos de importantes doenças prostáticas, as quais acometem tanto indivíduos do sexo masculino quanto do sexo feminino / Abstract: The female prostate is a gland functionally active found in several species of mammals, including humans and rodents. In adult female gerbils, the prostate presents paraurethral location, showing close contact with the wall of the median urethra. This gland is homologous to the ventral prostate of male rodents and it is formed by a set of acini and ducts embedded in a fibromuscular stroma. The study of prostatic morphophysiology in the estrous cycle phases has shown that the female prostate is influenced by fluctuations in serum of estradiol and progesterone, with peaks in estrous and diestrus II phases, respectively. Therefore, this study aimed to evaluate the effect of combined and prolonged administration of estradiol and progesterone on the prostate of ovariectomized female gerbil. Ovariectomy caused regression and decreased glandular secretory activity, aspects suggested by the shrinkage of the prostate and the almost absence of glycoprotein secretion. These changes are linked to hormonal supply caused by the ovaries removal. The subsequent replacement by estradiol and progesterone in combination showed a greater recovery of the structure and general physiology of the prostate, as evidenced by increased epithelial height, prostatic mass and secretory activity. The hormone levels increased, justifying the recovery of the gland, but did not achieve the same profile observed in the control group. We also evaluated the changes in the expression of AR, ER?, ER? and the cell proliferation marker, PCNA, which showed increased immunoreactivity and increased number of proliferating cells in the treated group. The integrity of the prostate is not only related to the levels of estrogen and progesterone, but also with the cyclical balance between these hormones in the female body. Finally, studies about the actions of estrogen and progesterone in prostate may be the starter for the development of treatments for important prostate diseases, which affect both males and females / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

A gonadotrofina coriônica equina (eCG) tem sido utilizada em programas de sincronização para inseminação artificial em tempo fixo e normalmente promove o aumento do volume do corpo lúteo e a da produção de progesterona. Além disso, esta mesma gonadotrofina pode ser utilizada para superovulação. Desse modo, hipóteses relativas aos mecanismos pelos quais gonadotrofinas exógenas alteram as funções celulares nos corpos lúteos resultantes foram formuladas. Para testar tais hipóteses, 18 vacas (Bos indicus) foram divididas em grupos: controle (n=5), estimulado (n=6) e superovulado (n=7) e a ovulação das mesmas foi sincronizada usando um protocolo já estabelecido com dispositivo de progesterona. Os animais estimulados receberam 400 UI de eCG no dia de remoção do dispositivo de progesterona e os animais superovulados 4 dias antes. No dia 7 após injeção de GnRh, os animais foram abatidos para a coleta de CLL e sangue. Análises de peso e volume de CL, concentração de progesterona (P4), bem como da expressão gênica e proteica de fatores angiogênicos e de proteínas esteroidogênicas foram realizadas. Além disso, o transcriptoma foi analisado por microarranjo. Foi observado que o volume do CL foi maior nos animais do grupo estimulado (1177,37 ± 167,07 mm3) e ainda maior nos do superovulado (1495,18 ± 137,01 mm3) quando comparados ao grupo controle (830,33 ± 234,99 mm3; p = 0,03). A concentração média de progesterona por CL nos animais do grupo estimulado foi maior que nos animais do grupo controle (5,95 ± 0,17 vs 3,69 ± 0,72 ng/ml; p = 0,03) e que nos superovulados (4,11 ± 0.73; p = 0,01). Além disso, os tratamentos com eCG aumentaram a expressão do FGFR2 e também da STAR nos animais estimulados e superovulados (p < 0,05). Quanto aos resultados do microarranjo, no total 242 transcritos foram aumentados e 111 foram diminuídos nos animais estimulados e 111 foram aumentados e 113 diminuídos nos animais superovulados em relação aos animais controle (~1,5 vezes, p 0.05). Entre os genes diferencialmente expressos, muitos estavam envolvidos na síntese de lipídios e na produção de progesterona, tais como: PPARG, HMGCR, STAR, receptores de prolactina e folistatina. Estes achados demonstraram que os tratamentos com eCG modularam a expressão gênica diferencialmente, dependendo do tratamento, e que nossos dados contribuem para entender as vias relacionadas ao aumento do volume do CL e da produção de progesterona observada após os tratamentos. Em um segundo experimento, foi realizado análises da influência do FSH na expressão de VEGF no cultivo de células da granulosa. Neste experimento foi possível observar que o FSH aumentou a expressão gênica e proteica do VEGF, colaborando com a ideia de que as gonadotrofinas têm propriedades angiogênicas. / Equine chorionic gonadotropin (eCG) has been widely used in synchronization protocol to artificial insemination program and usually promote corpus luteum (CL) volume increases and stimulates progesterone production. Furthermore the same gonadotropin can be used to superovulation protocols. Thus, hypotheses concerning the mechanisms by which exogenous gonadotropins alter cellular functions in resulting corpora lutea were formulated. To test that hypothesis, 18 (Bos indicus) cows were divided into control (n=5), stimulated (n=6) and superovulated groups (n=7). Ovulation was synchronized using a progesterone device-based protocol. Stimulated animals received 400 IU of eCG of device removal and superovulated animals received 2000 IU of eCG 4 days prior. Corpora lutea (CLL) and blood samples were collected seven days after GnRH administration. Analyses of CL weight and volume, progesterone (P4) concentration, as well as the gene and protein expression of angiogenic and steroidogenic proteins were performed. Furthermore, the transcriptome was evaluated by microarray. The CL volume was higher in superovulated (1495.18 ± 137.01) than in stimulated (1177.37 ± 167.07) cows and higher in stimulated than in the control (830.33 ± 234.99) cows, and the P4 concentration per CL was higher in stimulated (5.95 ± 0.17 ng/ml) animals than in the control (3.69 ± 0.72 ng/ml) and superovulated (4.11 ± 0.73 ng/ml; P = 0.01) animals. Overall, 242 transcripts were up-regulated and 111 transcripts were downregulated in stimulated cows (P 0.05) and 111 were up-regulated and 113 down-regulated in superovulated cows in relation to the control (1.5 fold, P 0.05). Among the differentially expressed genes, many were involved in lipid biosynthesis and progesterone production, as PPARG, HMGCR, STAR, prolactin receptors and follistatin. In conclusion, eCG modulates gene expression differently depending on the treatment. Our data contribute to the understanding of the pathways involved in increased CL volume and progesterone levels observed after eCG treatment. In a second experiment, analyzes were performed about the influence of FSH on the expression of VEGF in the culture of granulosa cells. In this experiment it was observed that FSH increases the expression of the VEGF gene and protein, these finding collaborate with the idea that gonadotrophins have angiogenic properties.

Memoria para optar al título de Ingeniero en Alimentos

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La gonadotrofina coriónica humana (hCG) es una de las hormonas más usadas para inducir ovulación en yeguas ciclantes. Su uso produce la ovulación 24 - 48 h post tratamiento, acortando el estro y disminuyendo el número de montas/ciclo, sin afectar aparentemente la tasa de preñez. Sin embargo, existen evidencias sobre posibles efectos adversos asociados a su uso, como la generación de anticuerpos anti-hCG, aumento de la mortalidad embrionaria y menores tasas de preñez. El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de la inducción de la ovulación con hCG sobre el tamaño del cuerpo lúteo (CL) y la concentración plasmática de progesterona ( [P4] ) al inicio de la preñez en yeguas FSC. Un total de 33 yeguas FSC fueron distribuidas en 2 grupos: 21 yeguas (grupo hCG) a las que se aplicó 2500 UI de hCG e.v., al presentar un folículo preovulatorio entre 35 y 42mm, edema uterino y aceptación del potro, indicándose monta 12 - 24 h post-tratamiento, y, otro de 12 yeguas (grupo C), montadas al presentar un folículo preovulatorio > 45 mm con características ovulatorias, edema uterino y aceptación del potro. Se realizó un seguimiento ecográfico diario de las características foliculares y uterinas durante el estro. Ocurrida la ovulación, se midió el tamaño del CL los días 1, 2, 3, 4, 8, 12, 16, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 60, 75 y 90 postovulación (Po). A partir del día 12 Po también se evaluó el tamaño y las características del saco gestacional. En forma simultánea con la evaluación ecográfica, se obtuvo muestras de sangre para medir la [P4] mediante radioinmunoanálisis (RIA). El tamaño folicular preovulatorio del grupo hCG (39,2 ± 2,7 mm) fue menor (p<0,0001) al del grupo C (51,0 ± 1,8 mm). En ambos grupos, la duración del celo fue similar (hCG: 4,7 ± 1,7 d; C: 5,6 ± 1,3 d). El número de montas por ciclo y por preñez fue menor en el grupo hCG (p<0,05). El total de las yeguas del grupo hCG ovuló 24 - 48 h post-tratamiento. Entre las yeguas preñadas (hCG P y C P), sólo se detectaron diferencias en el tamaño del CL los días 1, 3, 40 y 45 Po, siendo el tamaño del CL menor en el grupo hCG P (p<0,05). El tamaño del CL de las yeguas no preñadas fue similar (excepto el día 3 Po; hCG NP > C NP). La [P4] fue igual en todos los grupos hasta el día 8 Po, donde en los subgrupos hCG NP y C NP, la [P4] bajó a concentraciones basales. Entre los subgrupos hCG P y C P, desde el día 8 al 90 Po no se detectaron diferencias en la [P4]. El tamaño del saco gestacional fue igual en los subgrupos hCG P y C P. Sólo el día 1 Po, se observó una relación positiva entre el tamaño del folículo preovulatorio y el del CL. Entre el tamaño del CL y la [P4] no se detectó asociación. La tasa de preñez/ciclo fue un 26,2% menor en el grupo hCG (hCG: 57,1%; C: 83,3%). La tasa de preñez/temporada fue similar en ambos grupos (hCG: 85,7%; C: 91,6%). No se observaron diferencias significativas para ambas características. Se concluye que la inducción temprana de la ovulación con hCG produce CLs más pequeños sólo los primeros días Po, sin afectar la [P4]. Una vez que las yeguas se preñan, sin importar el tamaño del CL, la [P4] es igual entre grupos, manteniendo las yeguas hCG P y C P de igual manera la gestación. A pesar de ello, un número importante de yeguas inducidas con hCG no quedaron preñadas, afectando negativamente la tasa de preñez/ciclo / Fondo de Investigación Veterinaria (FIV) 4602005

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-12T18:51:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 447945 bytes, checksum: 57f3a352809e2ac38ba5baa109cbc118 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T18:51:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 447945 bytes, checksum: 57f3a352809e2ac38ba5baa109cbc118 (MD5) Previous issue date: 2004-03-26 / Este trabalho foi realizado com os seguintes objetivos: A) Estudar a eficiência reprodutiva das cabras das raças Alpina e Saanen tratadas com hormônios. Neste trabalho, cabras em lactação, das raças Alpina (83) e Saanen (60), na estação de acasalamento, induzidas pelo programa de fotoperíodo artificial, foram distribuídas em dois tratamentos, após a cobrição. As cabras do tratamento 1 (controle ou T1) receberam solução salina (1 mL) e as do tratamento 2 (tratadas ou T2) receberam 250 UI de hCG, via intramuscular (1 mL), no terceiro dia no pós-estro. A taxa de gestação, detectada por exame ultra-sonográfico realizado no 35 o dia após a cobrição, das cabras das raças Alpina e Saanen, controles e tratadas, foi de 80,35 e 70,27%, e 72,73 e 81,48%, respectivamente. O hCG não afetou a taxa de gestação dos animais dentro de tratamentos nem entre raças, e a taxa média de gestação foi de 77,2 e 75,0 % para os controles e tratados, respectivamente. Também a duração média das gestações nas cabras não foi afetada pelo tratamento (P>0,05), sendo 151 ± 3 dias (34) para os animais do T1 e 151 ± 2 dias (47) para os de T2. As amostras de sangue para análise da concentração plasmática de progesterona (P4) foram coletadas de cinco cabras Alpinas por tratamento, no dia do estro (dia 0), no dia de aplicação do hCG ( dia 3), e nos dias 8, viii15, 21, 42 e 60 após o estro. Não houve diferença na concentração plasmática média de P4 entre os tratamentos (P>0,05), sendo 5,84 ng/mL nos animais-controle e de 5,76 ng/mL nos animais tratados, porém houve diferença em relação aos dias de coleta (P<0,05); B) Verificar a efetividade da redução do tempo de permanência da esponja intravaginal impregnada com acetato de medroxiprogesterona (60 mg de MAP) sobre a indução e sincronização do estro. Foram utilizadas 28 fêmeas Saanen nulíparas, 17 não- lactantes e 46 em lactação (91 animais), fora da estação de acasalamento, distribuídas aleatoriamente em dois tratamentos (T1: 14 nulíparas, 8 não-lactantes e, 21 lactantes, e T2: 14 nulíparas, 9 não-lactantes e 25 lactantes). Nestes tratamentos, as esponjas intravaginais foram mantidas por seis e nove dias, respectivamente. Independentemente do tratamento, 24 horas antes da retirada das esponjas, os animais receberam 200 UI de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG) e 25 μg de análogo de prostaglandina F 2á , (cloprostenol = PGF). Não se verificou diferença em relação à taxa de manifestação de estro entre as cabras dos tratamentos dentro das categorias (P>0,05), sendo nulíparas 78,57 e 85,71%, não-lactantes 87,50 e 66,67%, e lactantes 85,71 e 88,00% no T1 e T2, respectivamente. O início do estro e sua duração não variaram com o tratamento (P>0,05), apenas apresentando diferença de acordo com a categoria animal, visto que, as cabras nulíparas entraram em estro mais cedo que as não-lactantes e as lactantes (P<0,05), com valores de 25,36; 49,21; e 42,77 horas após a retirada da esponja, respectivamente. A duração do estro foi maior nas cabras nulíparas que nas lactantes, 35,0 vs 23,7 horas (P<0,05), mas não diferiu das não-lactantes (28,2 horas) e as duas últimas não diferiram entre si (P>0,05). A percentagem de cabras gestantes não diferiu entre os tratamentos (P>0,05), sendo de 72,97% no T1 e de 73,68% no T2. O número de crias ao parto não diferiu entre as cabras dos tratamentos (P>0,05), sendo de 1,82±0,13 e de 1,58±0,16 no T1 e T2, respectivamente; C) 1 - Verificar, a eficácia da PGF em provocar o retorno ao estro das cabras (13), quando aplicado no terceiro dia no pós- estro. A taxa de retorno ao estro foi de 66,00 e 70,00% para as cabras Saanen e Alpina, respectivamente (P>0,05), com taxa média geral de 69,23%, durante a estação de acasalamento induzida por fotoperíodo artificial. A taxa de gestação avaliada no 35 o dia após a cobrição por ultra-sonografia foi de 87,5%; C) 2 - Comparar o protocolo padrão (T1), que emprega duas aplicações de 125 μg PGF intervaladas de dez dias, com o protocolo de tempo reduzido (T2), cujas aplicações são intervaladas de sete dias, durante a estação reprodutiva natural. No sétimo dia, aplicaram-se nos animais duas doses intervaladas de 10 horas, totalizando 250 μg de PGF. A taxa de indução de estro foi similar para as cabras do T1 e T2, sendo de 87,50 e 75,00%, respectivamente, após a primeira aplicação, porém, após a segunda aplicação verificou-se uma taxa de 66,6% e 100,0% para as de T1 e de T2, respectivamente. O intervalo tratamento-início do segundo estro foi menor para o protocolo reduzido, em relação ao padrão (28,86±5,40 x 46,50±7,55 horas, P<0,05). Não houve diferenças entre a duração do estro (36,00±27,28 e 34,29±12,83 horas) e o tempo decorrido do início do estro à ovulação (31,50±27,44 e 27,43±7,63 horas) e nem para o número de ovulações (1,25±0,50 e 1,86±0,69) entre as cabras do T1 e o T2, respectivamente (P>0,05); C) 3 - Comparar a taxa de indução, o intervalo e a duração do estro em cabras das raças Saanen e Alpina, utilizando-se dois protocolos com intervalos de aplicações de PGF de sete dias, sendo T1 com duas aplicações de 125 μg de PGF no sétimo dia, intervaladas de 10 horas e o T2 com uma única aplicação de 125 μg de PGF no sétimo dia, durante o período de transição entre a estação de reprodução natural e a de anestro estacional . As cabras apresentaram taxa de retorno ao estro inferior aos experimentos anteriores, sendo 55,56 e 44,44% de estros no T1 e T2, respectivamente, mas a taxa de resposta à segunda aplicação de PGF foi de 80,00 e 100,00% de estros no T1 e T2, respectivamente, com média geral de 88,89%. Não houve diferenças do intervalo tratamento-início de estro e duração do estro, tanto após a primeira quanto após a segunda aplicação (dia sete), com observação de menor duração média de estro (27,00±11,86 horas) nas cabras dos dois tratamentos, quando comparado aos outros experimentos. Concluiu-se que o hCG aplicado no terceiro dia após o estro não altera a concentração plasmática de P4 e não melhora a taxa de gestação das cabras. A redução da duração do tempo de tratamento com MAP em cabras da raça Saanen foi eficiente em induzir e sincronizar o estro. O corpo lúteo de cabras das raças Alpina e Saanen é sensível à ação da PGF no terceiro dia de sua formação, e o protocolo de tempo reduzido (sete dias) é igualmente eficaz em induzir e sincronizar o estro. / This work was realized with the following objectives: A) To study the reproductive efficiency of the Alpine and Saanen breed goats, treated with hormones. In the first experiment were used 83 Alpine and 60 Saanen dairy goats, during the artificial photoperiod induced breeding season program. The animals were allocated in two treatments, after mating, treatment 1 (T1): the goats received identical volume of saline solution intramuscularly (1 mL), and in treatment 2 (T2): the animals received 250 IU of hCG (1 mL) in the third day after estrus. The gestation rate detected by ultrasound equipment in the thirty fifth day after mating, for the Alpine and Saanen goats in T1 and T2 treatments were: 80.35 and 70.27, 72.73 and 81.48%, respectively, and did not differ among themselves (P>0.05). The gestation rate means were: 77.20 and 75.00% for the controls and treated animals, respectively. The goats gestation length were not affected by the hCG treatment compared to the control animals (151±2 x 151±3 days). Blood samples from 5 Alpine does per treatment were collected at the estrus time (day 0) and on days 3, 8, 15, 21, 42 and 60 after estrus, for progesterone plasma determination. The progesterone concentration means were 5.84 and 5.76 ng/mL for the control and treated does, respectively, and was not affected by the treatment (P>0.05). A xisignificant differences in relation to the days of collections (P<0.05) were observed; B) To check the efficacy of reducing the insertion time of the intravaginal sponge impregnated with 60 mg of medroxiprogesterone acetate (MAP) on the induction and synchronization of estrus. Ninety one animals whose estrus were induced by the use of intravaginal sponges, were allocated randomly into two treatments. In the treatment one (T1, n = 43), 14 nuliparous, 8 non-lactating and 21 lactating, and in T2 (n = 43) 14 nuliparous, 9 non-lactating, and 25 lactating goats, the intravaginal sponges were left in situ for six and nine days, respectively. Besides, animals from both treatments received 200 IU of equine chorionic gonadotropin (eCG) 24 hours before sponge withdrawal and 25 μg of prostaglandin F 2á analogue (cloprostenol). The percentage of animals showing estrus between the treatments did not differ, being 78.57, 85.71 and 87.50 and 66.67, 85.71 and 88.00% for the nuliparous, non-lactating and lactating ones, for T1 and T2, respectively. The onset of estrus and its duration did not vary among animals in the treatments, but the nulíparous does started estrus earlier than non-lactating and lactating ones 25.36, 49.21 and 42.77 hours (P<0.05) after the sponge withdrawal. The estrus duration was greater for nulíparous goats 35.09 hours comparing to the lactating ones 23.65 (P<0.05), but did not differ from non-lactating 28.21 hours and the last two ones did not differ between themselves (P>0.05). The gestation rate and litters size means were: 72.97 and 73.68% and 1.82±0.13 and 1.58±0.16 kids for T1 and T2 animals, respectively and were not affected by the treatment (P>0.05); C) 1 – To check the efficacy of PGF to induce the estrus in the goats, when applied in the third day after estrus, during breeding season induced by the photoperiod. The estrus rate was 66.00 and 70.00%, for Alpine and Saanen does, respectively (P>0.05), with a general mean of 69.23%. The gestation rate, by ultrasonography, in the 35 th day after mate was 87.50%; C) 2 - To compare the standard protocol (T1 ; two doses of 125 μg at 10 days interval day 0 and day 10), with the short time protocol (three doses of 125 μg of PGF) at 7 days interval (day 0, day 7 with two doses with 10 hours interval) during the normal breeding season. After the first application, the estrus return rate was similar among the does in the two protocols (87.50 and 75.00%), respectively, and after the second application the return rate was 66.67% for the standard protocol and 100.00% for the short time protocol. The interval PGF injection to the onset of the second estrus was shorter for the short time protocol than the standard one, (28.86±5.40 x 46.50±7.55 hours, P<0.05). The estrus duration, the interval from estrus-ovulation and the numbers of ovulation did not xiidiffer among the animals from the reduced and standard protocol (36.00±27.28 and 34.29±12.83 hours, 31.50±27.44 and 27.43±7.63 hours and 1.25±0.50 and 1.86±0.69, respectively, P>0.05); C) 3 – To compare two reduced protocols (T) of seven days for the Saanen and Alpine breed goats for the induction and synchronization of estrus, during the transition period, between the normal breeding season and the anestrous season. In the first one (T1) the animals received two injections of 125 μg of PGF at seven days interval (day 0 and day 7), and in the second one (T2) the animals received three injections of 125 μg PGF (day 0 and two doses at day 7 with 10 hours interval). The does, in this experiment, showed a smaller estrus rate than in the two previous experiments, with 44.44 and 55.56 % for the T1 and T2, respectively, but the estrus rate after the 7 th day application was 100.00 and 80.00 % for T1 and T2 does, with a general mean of 88.89%. The does interval treatment-estrus and the duration of estrus did not differ between the first and the second applications of PGF, but the mean estrus duration of 27.00±11.86 hours in this experiment, was smaller than in the previous two ones. It is concluded that the corpora lutea of the does after the third day of life span is sensitive to the action of the PGF, and the short time protocol for 7 days is effective to induce and synchronize the estrus.

A proliferação celular mediada pela progesterona (P4) é essencial para a funcão uterina. Dessa forma, alterações nesse processo podem comprometer a reprodução. O diabetes do tipo 1 (DM1) está associado a diversos distúrbios reprodutivos. No entanto, o impacto do DM1 sobre a ação da P4 no ambiente uterino ainda não é conhecido. Para isso, utilizamos fêmeas de camundongo DM1 induzidas por aloxana, submetidas à ovarectomia (OVX) e reposição por P4. Verificamos por meio de histomorfometria e imunohistoquímica (PCNA) uma diminuição da área de estroma uterino e do índice de proliferação. As quantificações proteícas por Western blot monstraram um aumento do PR-A nas fêmeas diabéticas OVX e nas tratadas pela P4. Ressalta-se que as fêmeas DM1 tratados pela P4 não apresentaram a mesma expressão do RNAm para o fator de crescimento Hoxa-10. Houve também um aumento do RNAm da p27 nas fêmeas DM1 não tratadas, visto por qPCR. Nossos resultados demonstraram que o DM1 interfere negativamente na resposta proliferativa promovida pela P4. Contribuindo para compreensão dos mecanismos biológicos pelos quais o diabetes compromete as funções reprodutivas. / Progesterone (P4)-mediated cell proliferation is essential for uterine function. Therefore, alteration in this process could compromise reproduction. The type 1 diabetes (DM1) relates to several reproductive disturbs. However, the impact of DM1 on the P4 function is still not elucidated. Thus, we used alloxan-induced diabetic mice females subjected to ovariectomy and hormonal replacement therapy with P4. Histomorphometrical and immunohistochemistry to PCNA approaches showed a decrease of the uterine stromal area and the cell proliferation index. Protein quantification by Western blot showed increased levels of PR-A in both ovariectomized and P4-treated diabetic females. Importantly, P4 did not recovered the mRNA expression to the Hoxa-10 transcription factor in diabetic females. Additionally, qPCR analysis revealed increased level of p27 mRNA in diabetic females non-treated with P4. Together these results show that DM1 has a negative action on the P4-mediated cell proliferative response. These are new and important results to a better understand of the biological mechanisms by which diabetes affects the reproductive functions.