Le parasite protozoaire Leishmania possède un cycle de vie dimorphique; le stade promastigote présent chez l'insecte vecteur et le stade amastigote présent dans les phagolysosomes des macrophages de l'hôte vertébré. L'étude des gènes exprimés préférentiellement ou spécifiquement au stade intracellulaire pourrait nous en apprendre d'avantage sur les mécanismes de survie du parasite à l'intérieur des macrophages. Parmi les gènes exprimés préférentiellement au stade amastigote nous avons identifié la famille des amastines qui codent pour des protéines de surface. Cette famille est présente chez plusieurs espèces de Leishmania où on retrouve en moyenne 50 membres. Toutes les amastines possèdent une séquence signature de 11 acides aminés qui leur est unique. La majorité des amastines sont plus abondantes au stade amastigote et cette régulation implique des séquences situées en 3'UTR. La comparaison des génomes de deux espèces de Leishmania causant des pathologies distinctes, soit L. major et L. infantum a révélé une grande conservation au niveau de la synténie du génome. Cela suggère que ce qui est responsable de chaque pathologie se situe au niveau des quelques gènes uniques à chaque espèce ou encore au niveau de l'expression différentielle des gènes communs. Pour identifier de nouveaux gènes exprimés au stade intracellulaire et également identifier des gènes impliqués dans le tropisme, une analyse du transcriptome entier a été effectuée à l'aide de la technologie de puces à ADN. Lors de cette étude, où des parasites intracellulaires ont été utilisés, les résultats ont montré que chez L. infantum, 7.1 % des gènes étaient différemment exprimés entre les deux stades tandis que 9.3% l'étaient chez L. major. Parmi ces gènes modulés très peu (=10%) sont communs aux deux espèces. Une expérience indépendante avec les puces a été réalisée avec des parasites axéniques de L. infantum, pour comparer les deux stades de développement mais aussi pour évaluer la pertinence du système de culture axénique pour les amastigotes par rapport aux amastigotes obtenus de macrophages ou d'animaux infectés. Cette expérience a révélé que 12.8% des gènes étaient modulés entre les deux stades et que parmi ces gènes très peu étaient en commun avec ceux identifiés chez les amastigotes intracellulaires.

O presente trabalho teve como objetivos a clonagem, expressão e purificação da proteína HGPRT de Leishimania tarentolae, para a caracterização e cristalização dessa enzima, a fim do seu estudo estrutural e funcional. O gene da HGPRT foi amplificado a partir de uma biblioteca genômica de Leishmania tarentolae da cepa UC Lambda ZAP Express BamHI-Sal3A I. Esse gene foi clonado no vetor de expressão pET29a(+) e usado na transformação da bactéria Escherichia coli BL21 (DE3). Esse sistema de expressão apresentou uma superexpressão da proteína recombinante, que foi purificada em cromatografia de forma iônica, com o uso da coluna de troca anônica POROS 20HQ. A proteína purificada foi utilizada para sua caracterização, como a determinação das constantes cinéticas (Km, Vmax e Kcat) para os diferentes substratos. A proteína foi encontrada como dímero em solução e o pI de aproximadamente 8,2. Além disso, essa proteína foi utilizada nos ensaios de cristalização pelo método de difusão de vapor em gotas suspensas. Os cristais obtidos foram utilizados nos testes da difração de raios-X sendo coletado um conjunto de dados no Laboratório Nacional de Luz Síncroton. Os dados de difração de raios-X foram processados com o uso do pacote de programa HKL. A resolução da estrutura cristalográfica foi obtida pelo método de substituição molecular através do programa AmoRe. Para o refinamento da estrutura foram utilizados os programas de refinamento automático CNS e REFMAC, e a manipulação na estação gráfica foi realizada através do programa O. A estrutura da HGPRT foi resolvida a 2,1 &#197 de resolução com os fatores de concordância Rwork e Rfree finais de 17,34 e 21,53%, respectivamente. / The aims of this work were the cloning, expression and purification of the protein HGPRT from Leishimania tarentolae, for the characterization and crystallization of the enzyme for it structural and functional study. The full-length hgprt gene was isolated from a leishmania tarentolae UC strain Lambda ZAP Express BamHI-Sal3A I genomic library. This gene was cloned in the expression vector pET29a+, and used in the transformation of the bacteria Escherichia coli BL21(DE3). This expression system presented a super-expression of the recombinant protein, which was purified by ionic change chromatography, utilizing the anionic change column POROS 20HQ. The purified protein was utilized for its characterization, including its kinetics constants (Km, Vmax e Kcat) for different substrates. The protein was found to be a dimmer in solution with pI close to 8.2. Besides, this protein was used in the crystallization assays by the steam diffusion in suspended drop technique. The obtained crystals were utilized in the x-ray diffraction studies. The data collection was performed in the Laboratório Nacional de Luz Síncroton. The X-ray diffraction data were processed utilizing the package program HKL. The crystallographic structure resolution was obtained by the molecular replacement method from the AmoRe program. For the structure refinement, the automatic refinement programs CNS and REFMAC were used, and the graphic manipulation was made through the O program. The structure of the HGPRT was resolved with 2,1 &#197 of resolution and final agreement factors Rwork and Rfree of 17,34% and 21,53%, respectively.

Fungos endofíticos estão presentes em plantas de diversos ambientes e produzem compostos com amplas propriedades químicas e aplicações, tanto na área médico-farmacológica quanto na agronômica. Entretanto, ainda há muito a ser investigado sobre seu potencial biotecnológico, principalmente em locais pouco explorados. As ilhas apresentam um ambiente particular e altamente vulnerável, tornando-as locais promissores na busca de organismos pouco comuns ou ainda endêmicos. Sendo assim, neste trabalho foi realizado o isolamento e estudo químico e biológico de fungos endofíticos isolados de 2 espécies plantas do gênero Anthurium da Ilha de Alcatrazes-SP. Para isto, fragmentos foliares das plantas A. loefgrenii (HRCB 46467) e A. alctrazense (HRCB 46465 - endêmica da ilha) foram inoculados em 10 meios de cultivo com diferentes composições, resultando no isolamento de 106 fungos endofíticos. Por meio de análises químicas por MALDI-TOF-MS e ensaio biológico contra fitopatógenos, foram selecionados 3 fungos para estudo. Estes foram identificados por técnicas morfológicas e moleculares como sendo Penicillium citrinum (P2MSF2F3), Penicillium simplicissimum (P210-4F2) e Aureobasidium melanogenum (P7AF2F3). No estudo dos metabólitos secundários de P. citrinum foi isolado o composto citrinina, o qual apresentou atividade inibitória do crescimento micelial dos fitopatógenos Colletotrichum gloeosporioides (MIC= 125 μg mL-1), Colletotrichum lindemuthianum (MIC= 0,48 μg mL-1), Phomopsis sojae (MIC= 250 μg mL-1) e Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli (MIC= 125 μg mL-1). Outras frações obtidas do meio metabólico de P. citrinum (fração F3a3 e citrinina) apresentaram atividade inibitória (100% de inibição) à formas promastigotas de Leishmania infantum. No estudo dos metabólitos secundários de P. simplicissimum foi obtida a fração F2b, ativa contra L. infantum (100% de inibição), da qual foram isolados os compostos andrastina A e penicisoquinolina, sendo o primeiro relato de sua produção por esta espécie, além de outros 5 compostos ainda não identificados. No estudo dos metabólitos secundários de A. melanogenum foi isolado o composto metil-orselinato, relatado pela primeira vez para este fungo. Do mesmo fungo foi obtida a fração F1d2l ativa contra L. infantum (100% inibição), da qual foram isolados 2 compostos ainda não identificados. Este é o primeiro relato de fungos isolados de antúrios da ilha de Alcatrazes, bem como do estudo de seus metabólitos secundários. Este trabalho apresenta contribuição no conhecimento sobre fungos endofíticos e seu potencial metabólico, com aplicações nas áreas agronômica e médico-farmacológica. / Endophytic fungi are present in plants in various environments and produce compounds with wide chemical properties and applications, both in the medical and in agronomic field. However, much remains to be investigated about their biotechnological potential, especially in unexplored places. Islands have a particular and highly vulnerable environment, making them promising sites in search of unusual or endemic organisms. Thus, this work represents the isolation and chemical and biological study of endophytic fungi isolated from 2 species of plants of the genus Anthurium of Alcatrazes island-SP. For this, leaf fragments from plants A. loefgrenii (HRCB 46467) and A. alcatrazense (HRCB 46465 - endemic plant from the Island) were inoculated onto 10 culture media with different composition, resulting in the isolation of 106 endophytic fungi. Three strains were selected to be studied through chemical analysis by MALDI-TOF-MS and bioassay against phytopathogens. These were identified by morphological and molecular techniques as Penicillium citrinum (P2MSF2F3), Penicillium simplicissimum (P210-4F2) and Aureobasidium melanogenum (P7AF2F3). In the study of secondary metabolites of P. citrinum it was isolated the compound citrinin, which showed inibitory activity against the plant pathogens Colletotrichum gloeosporioides (MIC= 125 μg mL-1), Colletotrichum lindemuthianum (MIC= 0.48 μg mL-1), Phomopsis sojae (MIC= 250 μg mL-1) and Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli (MIC= 125 μg mL-1). Other fraction obtained from the metabolic extract of P. citrinum (F3a3 fraction and citrinin), showed inibitory activity (100% inibition) to Leishmania infantum promastigotes. In the study of secondary metabolites of P. simplicissimum it was obtained F2b fraction, active against L. infantum (100% inhibition), which were isolated andrastin A and penicisoquinoline compounds, the first report of its production for this species, as well 5 unidentified compounds. In the study of secondary metabolites from A. melanogenum was isolated the methyl-orsellinate compound, first reported for this fungus. From the same strain was obtained F1d2l fraction, active against L. infantum (100% inhibition), from which were isolated 2 unidentified compounds. This is the first report of fungi isolated from Alcatrazes Island anthuriums and the study of their secondary metabolites. This study presents contribution to knowledge of endophytic fungi and their metabolic potential with applications in the medical and agronomic fields.

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é doença endêmica no Brasil onde apresenta aumento contínuo do número de casos bem como expansão da área geográfica de detecção de casos. Na Amazônia, a situação epidemiológica da LTA é ainda mais complexa, pois há várias espécies de leishmânia como agente causal da doença, cada espécie com seus reservatórios e vetores próprios podendo determinar diferentes quadros clínicos com diversas respostas ao tratamento medicamentoso. O município de Santarém situa-se no oeste do estado do Pará, onde há alta endemicidade da LTA. A participação de cada espécie de leishmânia nos casos de leishmaniose cutânea (LC) na região não é ainda conhecida através de estudos definitivos. Este trabalho tem como objetivo principal identificar as espécies de leishmânia nos casos de pacientes portadores de LC atendidos no Centro de Controle de Zoonoses de Santarém (CCZS) no ano de 2003, e estudar a possibilidade de diferenças significativas na apresentação clínica das lesões causadas pelas diferentes espécies do parasito. Através de duas técnicas moleculares, uma através de identificação de sequência de nucleotídeos que codifica a subunidade menor do RNA ribossomal e outra que identifica sequência de gene que codifica a enzima glicose-6-fosfato desidrogenase, aplicadas em material de biópsia de 93 pacientes atendidos no CCZS, durante o ano de 2003, identificamos espécies de leishmânias. Com os métodos realizados consegue-se diferenciar Leishmania (V.) braziliensis, Leishmania (L.) amazonensis e o grupo de outras espécies do gênero Leishmania (V.) que não Leishmania (V.) braziliensis a que chamamos Leishmania (L.) outras espécies. As espécies encontradas e suas proporções foram: Leishmania (V.) braziliensis 57%, Leishmania (V.) outras espécies 37% e Leishmania (L.) amazonensis 5%. Encontrou-se maior proporção de lesões em membros inferiores nos casos ocasionados por Leishmania (V.) braziliensis. Não foram encontradas diferenças significativas em outras características clínicas analisadas, tais como sexo, idade e número de lesões. / Tegumentary leishmaniasis (TL) is an endemic disease in Brazil, where it shows a continual rise in the number of cases, as well as geographic expansion in the area of detected cases. In the Amazon, the epidemiological situation of TL is even more complex because there are several species of leishmania as causal agent of the disease, each species with its own reservoir hosts and sandfly vectors being able to determine different clinical expressions with diverse responses to medical treatment. The municipality of Santarem is located in the western part of the state of Pará, where there are high endemic levels of TL. The participation of each species of leishmania in the cases of cutaneous leishmaniasis (CL) in the region has not yet been determined through definitive studies. The principal object of this study is to identify the species of leishmania in the cases of carriers who were patients at the Santarem Zoonosis Control Center in the year 2003, and to study the possibility of significant differences in the clinical presentation of lesions caused by different species of the parasite. We identified species of Leishmania using two molecular techniques, the first through identifying the sequence of nucleotides that encodes the smaller subunit of ribossomal RNA and another that identifies the gene sequence that encodes the enzyme glicose-6-phosphate desidrogenasis applied to biopsy material from 93 patients of the Santarem Zoonosis Control Center, during the year 2003. Using these methods we were able to differentiate Leishmania (V.) braziliensis, Leishmania (L.) amazonensis and the other species of the genus Leishmania (V.) that were not Leishmania (V.) braziliensis which we call Leishmania (L.) of other species. The species found and their proportions were: Leishmania (V.) braziliensis 57%, Leishmania (V.) other species 37%, and Leishmania (L.) amazonensis 5%. A greater proportion of lesions was found in inferior members in the cases of Leishmania (V.) braziliensis. Significant differences were not found in other analyzed clinical characteristics, such as sex, age, and number of lesions.

Os flebotomíneos são dípteros hematófagos pertencentes à família Psychodidae e subfamília Phlebotominae. Considerando o processo migratório da doença no Estado de São Paulo e a complexidade da relação parasito/vetor/hospedeiros da Leishmaniose é necessário realizar estudo sobre os aspectos ecológicos e epidemiológicos desta doença. A expansão da Leishmaniose no interior paulista está associada aos processos antrópicos e ao desequilíbrio ambiental. O município de Bom Jesus dos Perdões passa por um crescente processo de urbanização onde não é conhecida a fauna de flebotomíneos, bem como a pesquisa de parasitas do gênero Leishmania nestes vetores. O presente projeto teve por objetivo principal, a Identificação da fauna de flebotomíneos (Diptera, Psychodidae, Phlebotominae) e detecção molecular de parasitas do gênero Leishmania no Município de Bom Jesus dos perdões, Estado de São Paulo. Os flebotomíneos foram coletados com armadilha do tipo CDC e armadilha de Shannon, em 12 pontos em três diferentes ambientes, sendo áreas de mata, área Periurbana e áreas urbanas. A taxonomia alfa foi baseada na chave dicotômica descrita por Galati (2003) e o nome das espécies foram abreviado segundo Marcondes (2007). Para a pesquisa de parasitas do gênero Leishmania foram utilizados marcadores baseados nos genes SSU rDNA, citocromo e quitinase. No município de Bom Jesus dos Perdões foi registrada uma riqueza de 12 espécies de flebotomíneos distribuídos em duas Subtribos: Subtribo Lutzomyiina com Migonemyia migonei, Pintomyia fischeri, Pintomyia monticola, Pintomyia misionensis, Evandromyia edwardsi e a Subtribo Psychodopygina com Psathyromyia lanei, Psathyromyia sp (série forattiniella), Martinsmyia alphabetica, Psychodopygus arthuri, Psychodopygus lloydi, Psychodopygus ayrozai e Nyssomyia whitmani. A análise molecular baseado no gene de quitinase identificou a espécie Leishmania (L.) infantum chagasi em Pi. fischeri, Mg. migonei e Ma. alphabetica e espécies de Leishmania sp. causadoras da doença na forma tegumentar em Migonemyia migonei, Pintomyia fischeri, Evandromyia edwardsi, Martinsmyia alphabetica, Psychodopygus lloydi, Psychodopygus ayrozai e Nyssomyia whitmani. Os resultados obtidos alertam para o aumento do risco de transmissão das Leishmanioses e aponta para uma maior importância das medidas de vigilância entomológica, da fiscalização do uso e ocupação do solo e de estudos mais detalhados sobre as espécies desses vetores e de sua relação com os reservatórios silvestres ou urbanos e a população vulnerável no município e região / Sand flies are bloodsucking Diptera belonging to the Psychodidae family and subfamily Phlebotominae. Considering the migration process of the disease in the state of São Paulo and the complexity of the relation parasite / vector / Leishmaniasis of hosts is necessary to conduct study on the ecological and epidemiological aspects of this disease. The expansion of Leishmaniasis in the interior is associated with anthropogenic processes and environmental imbalance. The municipality of Bom Jesus of Pardons goes through a growing process of urbanization which is not known to sandfly fauna as well as the search for parasites of the genus Leishmania in these vectors. This project has as main objective the identification of the sand fly fauna (Diptera, Psychodidae, Phlebotominae) and molecular detection of Leishmania species in the Municipality of Bom Jesus of Pardons, State of Sao Paulo. The sandflies were collected with CDC trap type and trap Shannon on 12 points in three different environments, and forested areas, peri-urban area and urban areas. Alpha taxonomy was based on the dichotomous key described by Galati (2003) and the name of the species were abbreviated according to Marcondes (2007). For the research of the genus Leishmania parasites were used based markers in genes SSU rDNA, cytochrome and chitinase. In the city of Bom Jesus of Pardons has recorded a wealth of 12 species of sand flies distributed into two sub-tribes: Subtribe Lutzomyiina with Migonemyia migonei, Pintomyia fischeri, Pintomyia monticola, misionensis Pintomyia, Evandromyia edwardsi and Subtribe Psychodopygina with Psathyromyia lanei, Psathyromyia sp (series forattiniella) alphabetica Martinsmyia, Psychodopygus arthuri, Psychodopygus lloydi, Psychodopygus ayrozai and Nyssomyia whitmani. Molecular analysis based on the chitinase gene identified Leishmania (L.) infantum chagasi Pi. fischeri, Mg. migonei and Ma. alphabetica and species of Leishmania. causing disease in cutaneous leishmaniasis in Migonemyia migonei, Pintomyia fischeri, Evandromyia edwardsi, alphabetica Martinsmyia, Psychodopygus lloydi, Psychodopygus ayrozai and Nyssomyia whitmani. The results warn of the increased risk of transmission of Leishmaniasis and points to greater importance of entomological surveillance measures, surveillance of land use and occupation and more detailed studies of the species of these vectors and their relationship to the reservoirs wild or urban and the vulnerable population in the municipality and region

A caracterização de sequências codificadoras presentes nas vizinhanças do gene META 1 permitiu a identificação de alguns genes expressos preferencialmente em estágios infectivos de L. (L.) amazonensis. Um dos genes presentes é regulado de forma distinta, observando-se maior abundância do RNA em formas amastigotas. Este gene foi denominado LaLRR17 por codificar uma proteína contendo em sua região central 6 repetições ricas em leucina (LRR). As LRR são motivos presentes em diversas famílias de proteínas e são responsáveis pela formação de uma estrutura capaz de estabelecer interações protéicas. A região central da proteína LRR17 apresentou similaridade com a porção carboxi-terminal da proteína NOD 3 humana. A proteína LRR17 foi localizada no citosol de macrófagos infectados com L. (L.) amazonensis. Para caracterizar a função da proteína LRR17 foram obtidas linhagens de L. (L.) amazonensis expressoras do gene LmjLRR17. Essas linhagens mutantes foram mais infectivas em macrófagos in vitro quando comparadas com a linhagem selvagem. Avaliamos também o papel das proteínas NOD 1 e NOD 2 na infecção por L. (L.) amazonensis e L. (L.) major para estabelecer a possível relação da proteína LRR17 na interação com essas vias de defesa celular do macrófago. / The characterization of coding sequences in the vicinity of the META 1 gene allowed the identification of some genes preferentially expressed in L. (L.) amazonensis infective stages. One of the identified transcripts presents a distinct pattern of expression with higher levels of mRNA in amastigotes. This gene was named LaLRR17 since it encodes a 72 kDa protein with 6 leucine-rich repeats (LRR) in its central region. Leucine-rich repeats (LRR) are present in several families of proteins and are responsible for the formation of a structure capable of establishing protein interactions. The central region of the LRR17 protein showed similarity with the carboxyl-terminal portion of the NOD 3 human protein. The LaLRR17 protein is secreted to the cytoplasm of L. (L.) amazonensis-infected macrophages. To characterize the function of the LRR17 protein we obtained strains of L. (L.) amazonensis expressing the LmjLRR17 gene. These mutant strains were more infective to macrophages in vitro when compared with the wild type strain. We also evaluated the role of NOD 1 and NOD 2 proteins in infections with L. (L.) amazonensis and L. (L.) major to investigate a possible role of the LRR17 protein in the interaction with these defense pathways in macrophages.

A leishmaniose tegumentar é uma doença infecciosa, amplamente disseminada, sendo L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis, no Brasil, as espécies de maior importância médico-epidemiológica. Devido ao impacto epidemiológico da leishmaniose, medidas profiláticas devem ser desenvolvidas para o controle da doença, tal como vacinas. Portanto, o presente trabalho objetivou avaliar a imunogenicidade e potencial protetor de dois imunógenos denominados como ferro superóxido dismutase (FSD) e serino peptidase (SP). Os genes codificadores dos antígenos foram sintetizados e clonados no plasmídeo pVAX1 (pVAX1-FSD e pVAX1-SP). Camundongos BALB/c foram imunizados com ambos os alvos na concentração de 1,0 ug/uL, por três vezes, a intervalos regulares de 15 dias, e desafiados ou não com formas promastigotas de L. (L.) amazonensis. Os animais foram avaliados clínica, parasitológica e imunologicamente nos estudos de imunogenicidade e proteção. Os resultados obtidos demonstraram que ambas os imunógenos foram pouco imunogênicos, não apresentando alterações em linfócito T CD4; por outro lado, detectaram-se frequências diminuídas de linfócito TCD8 produtores de IFN-y e TNF-alfa. Entretanto, nos experimentos de desafio, verificou-se que os animais imunizados com pVAX1-FSD apresentaram uma resposta mista Th1 e Th2, devido ao aumento de linfócitos T produtores de IFN-y e IL-4, o que se associou a níveis altos de IgG1 e IgG2a, levando a uma diminuição da carga parasitária. O alvo pVAX1-SP também induziu resposta imunológica mista nos animais, todavia foi detectado frequências elevadas de linfócitos T CD8 produtores IL-10, e esta resposta foi associada a ausência de proteção nesses animais / American tegumentar leishmaniasis is an infectious disease, widespread, and in Brazil the species L. (V.) braziliensis and L. (L.) amazonensis are the most relevant in medical-epidemiological studies. Due to the epidemiological impact of leishmaniasis, prophylactic measures should be developed to control this disease, such as vaccines. Therefore, the present study aimed to evaluate the immunogenicity and the protective potential of two vaccine candidates known as iron superoxide dismutase (FSD) and serine peptidase (SP). FSD- and SP-coding genes were synthesized and cloned into plasmid pVAX1 (pVAX1-FSD and pVAX1-SP). BALB/c mice were immunized with both candidates at a concentration of 1.0 ug/uL, three times at intervals of 15 days and challenged or not with L. (L.) amazonensis promastigotes. Animals were evaluated clinically, immunologically and parasitologically in the studies of immunogenicity and protection. The results showed that both vaccines presented low immunogenicity, and after immunization BALB/c mice did not show significant changes in CD4 T lymphocytes, by the other side, the frequency of IFN-y and TNF-alfa producing cells were low. However, after challenge pVAX1-FSD-immunized mice presented a mixed Th1 and Th2 immune response, due to the high frequencies of IFN-ye IL-4-producing T lymphocytes, with association to high levels of IgG1 and IgG2a isotypes, leading to parasite burden decreasing. pVAX1-SP vaccine candidate also induced mixed immune response in animals, however high frequencies of IL-10-producing CD8 T lymphocytes was found, justifying the absence of protection in these animals

A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é doença endêmica no Brasil onde apresenta aumento contínuo do número de casos bem como expansão da área geográfica de detecção de casos. Na Amazônia, a situação epidemiológica da LTA é ainda mais complexa, pois há várias espécies de leishmânia como agente causal da doença, cada espécie com seus reservatórios e vetores próprios podendo determinar diferentes quadros clínicos com diversas respostas ao tratamento medicamentoso. O município de Santarém situa-se no oeste do estado do Pará, onde há alta endemicidade da LTA. A participação de cada espécie de leishmânia nos casos de leishmaniose cutânea (LC) na região não é ainda conhecida através de estudos definitivos. Este trabalho tem como objetivo principal identificar as espécies de leishmânia nos casos de pacientes portadores de LC atendidos no Centro de Controle de Zoonoses de Santarém (CCZS) no ano de 2003, e estudar a possibilidade de diferenças significativas na apresentação clínica das lesões causadas pelas diferentes espécies do parasito. Através de duas técnicas moleculares, uma através de identificação de sequência de nucleotídeos que codifica a subunidade menor do RNA ribossomal e outra que identifica sequência de gene que codifica a enzima glicose-6-fosfato desidrogenase, aplicadas em material de biópsia de 93 pacientes atendidos no CCZS, durante o ano de 2003, identificamos espécies de leishmânias. Com os métodos realizados consegue-se diferenciar Leishmania (V.) braziliensis, Leishmania (L.) amazonensis e o grupo de outras espécies do gênero Leishmania (V.) que não Leishmania (V.) braziliensis a que chamamos Leishmania (L.) outras espécies. As espécies encontradas e suas proporções foram: Leishmania (V.) braziliensis 57%, Leishmania (V.) outras espécies 37% e Leishmania (L.) amazonensis 5%. Encontrou-se maior proporção de lesões em membros inferiores nos casos ocasionados por Leishmania (V.) braziliensis. Não foram encontradas diferenças significativas em outras características clínicas analisadas, tais como sexo, idade e número de lesões. / Tegumentary leishmaniasis (TL) is an endemic disease in Brazil, where it shows a continual rise in the number of cases, as well as geographic expansion in the area of detected cases. In the Amazon, the epidemiological situation of TL is even more complex because there are several species of leishmania as causal agent of the disease, each species with its own reservoir hosts and sandfly vectors being able to determine different clinical expressions with diverse responses to medical treatment. The municipality of Santarem is located in the western part of the state of Pará, where there are high endemic levels of TL. The participation of each species of leishmania in the cases of cutaneous leishmaniasis (CL) in the region has not yet been determined through definitive studies. The principal object of this study is to identify the species of leishmania in the cases of carriers who were patients at the Santarem Zoonosis Control Center in the year 2003, and to study the possibility of significant differences in the clinical presentation of lesions caused by different species of the parasite. We identified species of Leishmania using two molecular techniques, the first through identifying the sequence of nucleotides that encodes the smaller subunit of ribossomal RNA and another that identifies the gene sequence that encodes the enzyme glicose-6-phosphate desidrogenasis applied to biopsy material from 93 patients of the Santarem Zoonosis Control Center, during the year 2003. Using these methods we were able to differentiate Leishmania (V.) braziliensis, Leishmania (L.) amazonensis and the other species of the genus Leishmania (V.) that were not Leishmania (V.) braziliensis which we call Leishmania (L.) of other species. The species found and their proportions were: Leishmania (V.) braziliensis 57%, Leishmania (V.) other species 37%, and Leishmania (L.) amazonensis 5%. A greater proportion of lesions was found in inferior members in the cases of Leishmania (V.) braziliensis. Significant differences were not found in other analyzed clinical characteristics, such as sex, age, and number of lesions.

Fungos endofíticos estão presentes em plantas de diversos ambientes e produzem compostos com amplas propriedades químicas e aplicações, tanto na área médico-farmacológica quanto na agronômica. Entretanto, ainda há muito a ser investigado sobre seu potencial biotecnológico, principalmente em locais pouco explorados. As ilhas apresentam um ambiente particular e altamente vulnerável, tornando-as locais promissores na busca de organismos pouco comuns ou ainda endêmicos. Sendo assim, neste trabalho foi realizado o isolamento e estudo químico e biológico de fungos endofíticos isolados de 2 espécies plantas do gênero Anthurium da Ilha de Alcatrazes-SP. Para isto, fragmentos foliares das plantas A. loefgrenii (HRCB 46467) e A. alctrazense (HRCB 46465 - endêmica da ilha) foram inoculados em 10 meios de cultivo com diferentes composições, resultando no isolamento de 106 fungos endofíticos. Por meio de análises químicas por MALDI-TOF-MS e ensaio biológico contra fitopatógenos, foram selecionados 3 fungos para estudo. Estes foram identificados por técnicas morfológicas e moleculares como sendo Penicillium citrinum (P2MSF2F3), Penicillium simplicissimum (P210-4F2) e Aureobasidium melanogenum (P7AF2F3). No estudo dos metabólitos secundários de P. citrinum foi isolado o composto citrinina, o qual apresentou atividade inibitória do crescimento micelial dos fitopatógenos Colletotrichum gloeosporioides (MIC= 125 μg mL-1), Colletotrichum lindemuthianum (MIC= 0,48 μg mL-1), Phomopsis sojae (MIC= 250 μg mL-1) e Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli (MIC= 125 μg mL-1). Outras frações obtidas do meio metabólico de P. citrinum (fração F3a3 e citrinina) apresentaram atividade inibitória (100% de inibição) à formas promastigotas de Leishmania infantum. No estudo dos metabólitos secundários de P. simplicissimum foi obtida a fração F2b, ativa contra L. infantum (100% de inibição), da qual foram isolados os compostos andrastina A e penicisoquinolina, sendo o primeiro relato de sua produção por esta espécie, além de outros 5 compostos ainda não identificados. No estudo dos metabólitos secundários de A. melanogenum foi isolado o composto metil-orselinato, relatado pela primeira vez para este fungo. Do mesmo fungo foi obtida a fração F1d2l ativa contra L. infantum (100% inibição), da qual foram isolados 2 compostos ainda não identificados. Este é o primeiro relato de fungos isolados de antúrios da ilha de Alcatrazes, bem como do estudo de seus metabólitos secundários. Este trabalho apresenta contribuição no conhecimento sobre fungos endofíticos e seu potencial metabólico, com aplicações nas áreas agronômica e médico-farmacológica. / Endophytic fungi are present in plants in various environments and produce compounds with wide chemical properties and applications, both in the medical and in agronomic field. However, much remains to be investigated about their biotechnological potential, especially in unexplored places. Islands have a particular and highly vulnerable environment, making them promising sites in search of unusual or endemic organisms. Thus, this work represents the isolation and chemical and biological study of endophytic fungi isolated from 2 species of plants of the genus Anthurium of Alcatrazes island-SP. For this, leaf fragments from plants A. loefgrenii (HRCB 46467) and A. alcatrazense (HRCB 46465 - endemic plant from the Island) were inoculated onto 10 culture media with different composition, resulting in the isolation of 106 endophytic fungi. Three strains were selected to be studied through chemical analysis by MALDI-TOF-MS and bioassay against phytopathogens. These were identified by morphological and molecular techniques as Penicillium citrinum (P2MSF2F3), Penicillium simplicissimum (P210-4F2) and Aureobasidium melanogenum (P7AF2F3). In the study of secondary metabolites of P. citrinum it was isolated the compound citrinin, which showed inibitory activity against the plant pathogens Colletotrichum gloeosporioides (MIC= 125 μg mL-1), Colletotrichum lindemuthianum (MIC= 0.48 μg mL-1), Phomopsis sojae (MIC= 250 μg mL-1) and Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli (MIC= 125 μg mL-1). Other fraction obtained from the metabolic extract of P. citrinum (F3a3 fraction and citrinin), showed inibitory activity (100% inibition) to Leishmania infantum promastigotes. In the study of secondary metabolites of P. simplicissimum it was obtained F2b fraction, active against L. infantum (100% inhibition), which were isolated andrastin A and penicisoquinoline compounds, the first report of its production for this species, as well 5 unidentified compounds. In the study of secondary metabolites from A. melanogenum was isolated the methyl-orsellinate compound, first reported for this fungus. From the same strain was obtained F1d2l fraction, active against L. infantum (100% inhibition), from which were isolated 2 unidentified compounds. This is the first report of fungi isolated from Alcatrazes Island anthuriums and the study of their secondary metabolites. This study presents contribution to knowledge of endophytic fungi and their metabolic potential with applications in the medical and agronomic fields.

Made available in DSpace on 2016-08-19T17:47:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vera Lucia Lopes Barros.pdf: 356672 bytes, checksum: fa9fcb65e8732da1508a875220de3fc2 (MD5) Previous issue date: 2006-11-27 / The Lutzomyia longipalpis vector of the Leishmania chagasi, etiológico agent of Leishmaniose American Visceral (LVA). One verified the hens influence in the distribution and longipalpis maintenance of Lutzomyia in the human environment. The study intra was carried through in environments and peridomicílio of 12 houses in the Preiçueira city of Is Jose de Ribamar-MA, with the 06 lumisosas traps CDC of the 18 hs. It of the 512 flebótomos was studied relative abudancia and had been captured L.longipalpis, being 105 units in the houses without hen house and 407 in the houses with hen house. In the distance of the hen houses for the habitations human beings and the influence of the hens in the attraction of the vector for the intradomicílio. In this Goal the repetitions had been captured 36 added specimens. The effect of the hen house in the accessibility of the habitation human being for the flebótomos was resulted in 320 l L.longipalpis units of in the interior of an abandoned house, was observed that in the last night, with the addition of longipalpis females of L., 78.8% of the total sample were captured. For ends of comparison of the importance of the hen in the attraction of the Lutzomya longipalpis, hens had been carried through captures during 4 nights using only isca. One verified that the bird continued attracting the vector for the intradomicílio had been collected 55 specimens of this insect, in the first night with 5 (9%), second 16 (29%), third 16 (29%) and in the fourth night with 18 (33%) of the total sample. In all the carried through goals the hen was important in the attraction of flebotómo, more isca of females of the same species was the one that more attracted the Lutzomyia longipalpis for the interior of the domiciles. / Americana (LVA). Verificou-se as galinhas influenciam na distribuição e manutenção de Lutzomyia longipalpis no ambiente humano. O estudo foi realizado nos ambientes intra e peridomicílio de 12 casas na Preiçueira município de São José de Ribamar-MA, com armadilhas lumisosas CDC das 18 as 06 hs. Estudou-se a abudancia relativa dos flebótomos e foram capturados 512 L.longipalpis, sendo 105 exemplares nas casas sem galinheiro e 407 nas casas com galinheiro. A distância dos galinheiros para as habitações humanas e a influência das galinhas na atração do vetor para o intradomicílio. Nesta Meta foram capturados 36 espécimes somados as repetições. O efeito do galinheiro na acessibilidade da habitação humana pelos os flebótomos resultou-se em 320 exemplares de L. longipalpis no interior de uma casa abandonada, observou-se que na última noite, com o acréscimo de fêmeas de L. longipalpis, capturou-se 78,8% da amostra total. Para fins de comparação da importância da galinha na atração da Lutzomya longipalpis, foram realizadas capturas durante 4 noites usando apenas a isca galinhas. Verificou-se que a ave continuou atraindo o vetor para o intradomicílio foram coletados 55 espécimes deste inseto, na primeira noite com 5 (9%), segunda 16 (29%), terceira 16 (29%) e na quarta noite com 18 (33%) da amostra total. Em todas as metas realizadas a galinha foi importante na atração do flebotómo, mais a isca de fêmeas da mesma espécie foi a que mais atraiu a Lutzomyia longipalis para o interior dos domicílios.