Submitted by Angelo Silva (asilva@icict.fiocruz.br) on 2016-07-20T13:42:38Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 71854.pdf: 3870328 bytes, checksum: e6d51ee1222bd1369079ed339e270c1b (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-08-24T19:10:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 71854.pdf: 3870328 bytes, checksum: e6d51ee1222bd1369079ed339e270c1b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-24T19:10:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 71854.pdf: 3870328 bytes, checksum: e6d51ee1222bd1369079ed339e270c1b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A infecção pelo HIV se caracteriza pela existência de um período de latência clínica (ou período assintomático) entre a infecção aguda e a fase de AIDS, cuja duração é extremamente variável, gerando distintos perfis de progressão entre os indivíduos infectados pelo HIV. Uma pequena fração de indivíduos infectados (5-10%), denominados não progressores de longo termo (LTNP), permanece clinicamente assintomática e com altos valores de TCD4+ (>500 cells/\F06Dl) durante mais de 8 anos de infecção na ausência de tratamento. Alguns desses indivíduos conseguem ainda bloquear quase totalmente a replicação e a evolução viral, gerando uma verdadeira latência evolutiva. O objetivo do presente estudo foi analisar o perfil mutacional do HIV-1 e a dinâmica de emergência e manutenção de mutantes virais de escape da resposta imune em pacientes HIV-1 positivos classificados como LTNPs com diferentes níveis de controle da replicação viral. Para tal, utilizou-se uma casuística de 12 indivíduos LTNPs, classificados como controladores virêmicos (VC) e controladores de elite com (ECB) e sem Blips (EC) de acordo com os seus níveis de controle da infecção. Para cada indivíduo, foram extraídas amostras de DNA a partir de PBMCs obtidos durante a visita mais antiga (V1) e mais recente (VX) disponíveis. O DNA extraído foi utilizado para amplificação e sequenciamento, através de uma metodologia de NGS, dos genes Gag e Nef. As sequências obtidas permitiram o mapeamento do gene nef inteiro (cobertura média de 212.674 seqs/pb) e dos primeiros 1000pbs de Gag (cobertura média de 286.463 seqs/pb) Os consensos de cada mapeamento foram utilizados para as análises de divergência entre V1 e VX e variantes com frequências maior que 0,5% em cada pb mapeado foram consideradas verdadeiras. As análises de evolução evidenciaram o baixo nível de diversidade e divergência dos genes Gag e Nef entre os indivíduos controladores. Indivíduos ECs apresentaram menor perfil mutacional em ambos os genes analisados quando comparados com indivíduos ECB e VC. Enquanto Gag apresentou maior conservação que Nef em VCs, ambos os genes apresentaram semelhante variabilidade in ECs, indicando que o maior controle da viremia limita a evolução em nas duas regiões. Em alguns indivíduos ECBs, evidências de superinfecção e hipermutação mediada por APOBEC3G foi observada. As análises das mutações em regiões de epítopos restritos por CTL demonstraram a presença de mutações indicativas de escape da resposta imune surgidas entre V1 e VX na maioria dos indivíduos. Mutações não sinônimas foram encontradas em baixas frequências para todos os indivíduos, incluindo ECs, indicando que tais variantes surgem, mas a grande maioria não obtém sucesso evolutivo / The HIV infection is characterized by the existence of a clinical latency period (os asymptomatic period) between the acute infection and the AIDS phase, whose duration is extremely variable, generating distinct progression profiles between Hiv infected individuals. A small fraction of infected individuals (5-10%), named long term non progressors (LTNP), remains clinically asymptomatic and with high TCD4+ levels (>500cells/ul) during more than 8 years of infection in absence of treatment. Some of these individuals can even block almost all the viral replication and evolution, generating an evolutionary latency. The objective of this study was to analyze the mutational profile of HIV-1 and the emergency and maintenance dynamic of immune response escape mutants in HIV-1 positive patients classified as LTNPs and with different levels of viral replication control. For this end, a group of 12 LTNP patients, classified as viremic controllers (VC) and Elite Controllers with (ECB) and without Blips (EC) according to their level of viremia control, was used. For each individual, DNA samples were extracted from PBMCs obtained during the earliest (V1) and most recent visits (VX) available. The extracted DNA was used to amplification and sequencing, through a NGS methodology, of the Gag and Nef genes. The sequences obtained allowed to map the whole Nef gene (medium coverage of 286.463 reads/pb) and the first 1000bps of Gag (medium coverage of 212.674 reads/pb) The consensus sequences of each mapping were used to divergence analyses between V1 and VX and variants with frequencies higher than 0,5% in each mapped bp were considered real. The evolution analyses showed a lower degree of diversity and divergence of Gag and Nef genes between controllers. EC individuals presented lower mutational profile in both genes when compared with ECB and VC patients. While Gag presented higher conservation than Nef in VCs, both genes had showed similar variability in ECs, indicating that a higher viremia control limit the evolution in both regions. In some ECB individuals, evidence of superinfection and APOBEC3g mediated Hypermutation was observed. The analyses of mutation along regions of CTL-restricted epitopes had showed the presence of mutations arised between V1 and VX, which were indicative of imune response escape, in most individuals. Non synonymous mutations had been found in lower frequencies in all individuals, including ECs, indicating that those escape variantes arise, but most don\2019t manage to obtain evolutionary success

Resumo não disponível.

A coevolução parasita-hospedeiro pode ser apontada como uma das principais responsáveis pela grande diversificação de genes envolvidos na resposta imunológica. A chamada “região do MHC” (na sigla em inglês para Major Histocompatibility Complex), localizada no braço curto do cromossomo 6 humano, é a região mais polimórfica e densa do nosso genoma. Os três genes mais polimórficos deste locus codificam a cadeia pesada de um complexo referido como MHC de classe I, responsável pela apresentação (na superfície celular) de peptídeos provenientes da degradação de proteínas intracelulares. Este mecanismo é central na resposta antiviral, permitindo que células infectadas sejam identificadas e eliminadas pelos Linfócitos T Citotóxicos. Apesar de estruturalmente similares, cada molécula de MHC apresenta maior afinidade por peptídeos com determinadas características bioquímicas. Assim, quanto maior a variabilidade de MHCs em uma dada população, menor o risco de que todos os indivíduos sejam incapazes de apresentar pelo menos alguns alvos derivados de um determinado vírus. Por outro lado, a resposta imunológica celular e a geração de memória contra este alvo apresentado pelo MHC, depende do reconhecimento específico deste complexo peptídeo:MHC (pMHC) por uma dada população de linfócitos. Neste trabalho empregamos ferramentas de bioinformática para realizar a análise estrutural de complexos pMHC, identificando propriedades envolvidas na estimulação da resposta imunológica celular. Nossos resultados in silico, corroborados por experimentos in vitro e ex vivo, sugerem que a similaridade estrutural de complexos pMHC (em termos de topografia e potencial eletrostático) desempenha um papel central na reatividade cruzada de linfócitos T, com implicações sobre imunidade heteróloga, imunopatologia e desenvolvimento de vacinas. / Host-pathogen coevolution can be implicated as one of the main features driving the great diversity of genes involved with immunological response. The so-called “MHC region” (Major Histocompatibility Complex), located at the short arm of human chromosome 6, is the most polymorphic and dense region of our genome. The three most polymorphic genes in this locus encode the heavy chain of a complex referred as MHC class I, which is responsible for presentation (at cell surface) of peptides derived from the digestion of cytosolic proteins. This mechanism plays a key role in antiviral immune response, allowing infected cells to be identified and eliminated by Cytotoxic T Lymphocytes. Although structurally similar, each MHC molecule presents higher affinity for peptides with certain biochemical properties. Therefore, the greater the variability of MHCs in a given population, the smaller the risk that all individuals are unable to present at least some targets derived from a given virus. On the other hand, cellular immune response and memory generation against the target presented by the MHC, depends on specific recognition of this peptide:MHC (pMHC) complex by a given T cell population. In this work, we use bioinformatics tools to perform structural analysis of pMHC complexes, identifying features involved in triggering cellular immune responses. Our in silico results, corroborated by in vitro and ex vivo experiments suggest that structural similarity among pMHC complexes (topography and electrostatic potential) plays a central role in cross-reactivity of cytotoxic T cells, with implications over heterologous immunity, immunopathology and vaccine development.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Nutrição, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:01:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 320570.pdf: 1538504 bytes, checksum: 1d54f99c06723e0dcaa9b31d39b3187d (MD5) Previous issue date: 2013 / Neoplasias hematológicas compreendem um grupo heterogêneo de doenças, entre elas, destacam-se as leucemias, os linfomas e o mieloma múltiplo. Reconhecidamente, o componente inflamatório é um fator inerente às neoplasias. Deste processo participam células imunitárias e mediadores inflamatórios que podem repercutir sobre o estado nutricional dos indivíduos acometidos. O objetivo deste trabalho foi avaliar as proporções de linfócitos T CD4+, T CD4+IL-17+ e T CD8+, concentrações de citocinas plasmáticas (interleucina(IL)-6, IL-10, IL-17 e fator de necrose tumoral (TNF)), e suas relações com o estado nutricional de indivíduos com neoplasias hematológicas malignas. Este é um estudo descritivo, envolvendo dezesseis indivíduos de ambos os sexos com diagnóstico de neoplasias hematológicas malignas foram incluídos no estudo. Para avaliar as proporções das populações linfocitárias, amostras de sangue foram incubadas por 4h em meio de cultura na presença ou não de estimuladores. Posteriormente, as células foram fixadas, permeabilizadas e marcadas com anticorpos (anti-CD4, anti-IL-17A e anti-CD8) ligados a fluoróforos específicos, e adquiridas por citometria de fluxo. As concentrações de citocinas foram determinadas por citometria de fluxo. O estado nutricional foi avaliado pelos parâmetros: índice de massa corporal (IMC), cincunferência muscular do braço (CMB) e percentual de perda de peso. A proporção de linfócitos T CD4+, T CD4+IL-17+ e T CD8+ encontradas foram, respectivamente, 30,2% (16,8; 39,6), 2,5% (2,1; 10,8) e 19,5% (8,2; 25,5) e a razão CD4+:CD8+ foi 1,5 (1,0; 3,5). Em análise por diagnóstico observou-se que os indivíduos com linfoma apresentaram maior proporção de linfócitos T CD8+ (p=0,024) e uma menor razão CD4+:CD8+ (p=0,006) em relação às leucemias. A proporção de células T CD4+IL-17+ foram correlacionadas negativamente com a razão CD4:CD8 e positivamente com a CMB. A concentração de IL-6 encontrada foi aproximadamente 4 vezes superior aos valores descritos na literatura para indivíduos normais. Os indivíduos participantes não apresentaram comprometimento nutricional, com base nos parâmetros antropométricos. A partir dos resultados foi possível constatar que os indivíduos com neoplasias hematológicas em fase inicial não apresentam comprometimento nutricional, considerando a avaliação antropométrica, embora apresentem um quadro inflamatório pronunciado pela elevação de marcadores inflamatórios. Os indivíduos com linfomas mantiveram melhor a proporção de linfócitos T CD8 em relação às leucemias, e a possível relação positiva entre as células Th17, T CD8 e CMB, soma evidências de que essas células podem desempenhar um papel importante na imunidade antineoplásica e prognóstico.<br> / Abstract : Hematological neoplasms comprise a heterogeneous group of diseases, among them are the leukemias, lymphomas and multiple myeloma. Admittedly, the inflammatory component is a factor inherent to neoplasms. In this process, there is the participation of immune cells and the inflammatory mediators produced by them, which can, among other functions, modify the nutritional status of the affected individuals. The aim of this study was to evaluate the proportions of CD4+, CD4+IL-17+ and CD8+ T cells, plasma cytokine concentrations (interleukin (IL)-6, IL-10, IL-17 and tumor necrosis factor (TNF)), and their relationship to the nutritional status of patients with hematological neoplasms. This is a descriptive study involving sixteen individuals of both sexes diagnosed with hematological neoplasms were included in the study. To assess the proportions of lymphocyte populations, blood samples were incubated for 4h in culture medium in the presence or not of stimulators. Subsequently, the cells were fixed, permeabilized and stained with antibodies specific fluorophores linked to (anti-CD4, anti-IL-17A and anti-CD8) and acquired by flow cytometry. Concentrations of cytokines were determined by flow cytometry. Nutritional status was assessed by parameters: body mass index (BMI), arm muscle circumference (AMC) and percentage of weight loss. The proportion of CD4+ T cells, CD4+IL-17+ and CD8+ T cells were, respectively, 30.2% (16.8, 39.6), 2.5% (2.1, 10.8), and 19.5% (8.2, 25.5) and the CD4+:CD8+ was 1.5 (1.0, 3.5). In diagnostic analysis showed that individuals with lymphoma had a higher proportion of CD8+ T lymphocytes (p = 0.024) and reduced the CD4+:CD8+ ratio (p = 0.006) compared to leukemias. The proportion of CD4+IL-17+ was negatively correlated with the CD4:CD8 ratio and positively with the AMC. The concentration of IL-6 found was approximately 4 times higher than the values reported in the literature for normal subjects. The individuals involved had no nutritional impairment. Based on the results, it was established that individuals with hematologic neoplasms, in early stage, have no nutritional impairment, based in antropometric evaluation, although showed a pronounced elevation in inflammatory markers. Individuals with lymphomas presented a higher proportion of CD8+ T lymphocytes compared to leukemias and a potential positive relationship between Th17 cells, CD8 and AMC. Such data increase evidences that these cells may play an important role in antineoplastic immunity and prognosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-02Bitstream added on 2014-06-13T20:04:26Z : No. of bitstreams: 1 santana_las_dr_jabo.pdf: 557636 bytes, checksum: 26ce65892340f8faf732dffdb9f70b85 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Atualmente, a citometria de fluxo está tornando-se uma ferramenta útil na Medicina Veterinária, particularmente na clínica de pequenos animais. O presente ensaio teve como objetivo imunomarcar as subpopulações linfocitárias CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD21+, com a utilização de marcadores de superfície (anticorpos monoclonais), em quatro diferentes raças de cães domésticos e correlacionar esses dados com o eletroforetograma de proteínas séricas desses animais. Foram utilizados 40 cães adultos, machos e fêmeas, das raças Beagle, Golden Retriever, Bulldog Inglês e sem raça definida, divididos em 4 grupos, sendo 10 cães por grupo experimental. Os cães foram submetidos à avaliação clínica, hematológica (hemograma) e à análise quantitativa, no sangue periférico, das subpopulações de linfócitos CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD21+. Paralelamente, foi realizada a análise qualiquantitativa das proteínas séricas totais e suas frações. As proteínas séricas foram separadas por eletroforese em matriz de gel de poliacrilamida, e suas concentrações determinadas por densitometria computadorizada. O número médio de células obtido para a subpopulação de linfócitos T citotóxicos foi significativamente maior (p<0,05) nos Bulldogs Ingleses e cães SRD, comparativamente aqueles encontrados nos grupos Beagles e Golden Retrievers. Ademais, observou-se que o número médio de células obtido para a subpopulação de linfócitos B foi significavamente maior (p<0,05) nos Bulldogs Ingleses, quando comparado àquele dos Beagles. No presente estudo, não foi possível estabelecer correlação entre as subpopulações linfocitárias analisadas e as proteínas totais e suas frações / Flow cytometry is useful tool in veterinary medicine, particularly in small animal practice. The objective of this study was to determine lymphocyte subsets of CD5+CD4+, CD5+CD8+ and CD21+ in four different breeds of domestic dogs and correlate these data with the electrophoretogram of serum proteins in these animals. A total of 40 adult dogs, males and females of Beagles, Golden Retrievers, English Bulldogs and crossbreed dogs were divided in four groups, with 10 dogs per experimental group. The dogs were submitted to clinical, hematological and quantitative analysis, in peripheral blood, of lymphocyte subsets of CD5+CD4+, CD5+CD8+ and CD21+. Also we performed a qualitative and quantitative analysis of total serum protein and its fractions. The serum proteins were separated by electrophoresis in polyacrylamide gel matrix, and their concentrations were determined by computerized densitometry. The average number of cells obtained for the subsets of cytotoxic T lymphocytes was significantly higher (p<0,05) in the British Bulldogs and crossbreed dogs compared to those found in Beagles and Golden Retrievers. Furthermore, it was observed that the average number of cells obtained for the subsets of B lymphocytes was significavamente higher (p<0,05) in English Bulldogs compared to that of Beagles. In the present study, there was no correlation between lymphocyte subsets with total proteins and its fractions

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / Estudos sugerem que o transtorno bipolar (TB) está associado à disfunção mitocondrial e aumento do estresse oxidativo. O presente estudo tem como objetivo investigar os parâmetros de estresse oxidativo em mitocôndrias isoladas e atividade dos complexos mitocondriais em linfócitos de pacientes com TB durante episódios depressivos ou eutímicos. Este estudo avaliou os níveis de atividades dos complexos mitocondriais (I, II, II-III e IV) em linfócitos de pacientes com TB. Além disso, o presente estudo avaliou os seguintes parâmetros de estresse oxidativo: ânion radical superóxido, superóxido dismutase, espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e níveis de carbonila em partículas submitocondriais de linfócitos de pacientes bipolares. Nesse estudo foram incluídos 51 pacientes bipolares: 34 na fase eutímica e 17 na fase depressiva. As fases do transtorno bipolar foram definidas com base na Escala Young para Mania (YMRS) e Escala de Hamilton para Depressão (HDRS). Os resultados indicaram que os pacientes durante a fase depressiva apresentaram um aumento nos níveis submitocondriais de radical superóxido, de superóxido dismutase, de carbonila e de TBARS. Essas alterações nos parâmetros de estresse oxidativo foram companhados pela diminuição da atividade do complexo II. Além disso, observou-se uma correlação negativa entre HDRS e complexo II nos linfócitos de pacientes depressivos bipolares. Houve uma correlação negativa entre a atividade do complexo II e parâmetros de estresse oxidativo. Ainda, foi observado uma correlação positiva entre HDRS e níveis de radical superóxido, superóxido dismutase, TBARS e carbonila. Os resultados do presente estudo sugerem que o estresse oxidativo mitocondrial e a disfunção do complexo mitocondrial II podem desempenhar papéis importantes na fase depressiva do TB.

Made available in DSpace on 2015-07-02T02:14:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000471496-Texto+Completo-0.pdf: 3473251 bytes, checksum: 4c713013d9c0095e2989171bafa30fb2 (MD5) Previous issue date: 2015 / The elderly population is now the fastest growing in the world. The immune system becomes compromised with age, being less effective in fighting malignancies. An amended fee of CD8 T cells, increased compared to CD4 cells (usually more frequent in the blood) defines the concept of immune risk profile in the elderly (less than 1 ratio). In this research, we studied the immunological profile of 58 women with breast cancer, determining the ratio of CD4+/CD8+ in peripheral blood. We compare this link into groups according to age of the patient (less or more than 60 years), lymph node involvement, tumor size, the immunohistochemical profile, and the occurrence of adverse events (local recurrence, axillary recurrence and metastasis). The ratio of CD4+ /CD8+ lymphocytes average was 1. 87 (1. 1 to 3. 32), therefore, no patient had a concept immune risk profile. Comparing the groups according to age, the presence of lymph node metastases, tumors smaller or higher than 2 cm, were no statistically significant differences. However, the CD4 / CD8 ratio in patients positive for human epidermal growth factor (HER-2 / neu) was higher than in samples of patients with hormone receptor positive carcinoma and Her-2 / neu negative (p = 0. 036 ). As far as was possible to search, these are the first data on CD4+ and CD8 T+ cells specifically in a population with breast cancer. The increase in the number of CD4+/CD8+ current evidenced in these women with Her-2 carcinoma / neu positive, seems to signal an activation of the immune system in women with poor prognosis of tumors. / A população de idosos é hoje a que mais cresce no mundo. O sistema imune torna-se comprometido com a idade, sendo menos eficaz no combate a neoplasias malignas. Uma taxa alterada de células T CD8 positivo (CD8+), aumentada em relação às células CD4 positivo (CD4+) (normalmente mais freqüentes no sangue) define o conceito de perfil de risco imunológico no idoso (relação menor que 1). Nesta pesquisa, estudamos o perfil imunológico de 58 mulheres com câncer de mama, determinando a relação das células T CD4+/CD8+ no sangue periférico. Comparamos esta relação em grupos conforme a idade da paciente (menos ou mais que 60 anos), o comprometimento linfonodal, o tamanho do tumor, o perfil imunohistoquímico, e a ocorrência de eventos adversos (recidiva local, axilar e metástases). A proporção de linfócitos T CD4+/CD8+ média foi 1,87 (1,1 a 3,32), portanto, nenhuma paciente apresentou por conceito perfil imunológico de risco. Comparando os grupos conforme a idade, a presença de metástases linfonodal, tumores menores verso maiores que 2cm não houveram diferenças estatisticamente significativas. No entanto, a relação CD4+/CD8+ em pacientes positivos para o fator de crescimento epidérmico humano (Her-2/neu) foi mais elevada do que em amostras de pacientes com carcinomas receptor hormonal positivos e Her-2/neu negativo (p=0,036). Tanto quanto foi possível pesquisar, estes são os primeiros dados sobre células T CD4+ e CD8+ especificamente em uma população com câncer de mama. O aumento do número de linfócitos T CD4+/CD8+ circulante evidenciado nestas mulheres com carcinoma Her-2/neu positivo, parece sinalizar uma ativação do sistema imunológico em mulheres com tumores de pior prognóstico.

Made available in DSpace on 2015-10-29T01:04:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000475919-Texto+Parcial-0.pdf: 381957 bytes, checksum: c63b236b74973994f585b6bd7db08855 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction : Respiratory Syncytial Virus (RSV) is a major cause of viral lower respiratory tract infection in children under two years of age. Memory CD8 T cell response to VSR does not provide an efficient and long-lasting immune response, so there are recurrent infections throughout life. The role of mTOR (mammalian target of rapamycin) and the purinergic receptor P2X7 in the memory CD8 T cell response during RSV infection has not been investigated. Objectives : To analize the effect of rapamycin on dendritic cells (DCs) during RSV infection, as well as to evaluate the role of P2X7 purinergic receptor in CD8 memory T cells response during RSV infection. Methodology : Bone marrow derived dendritic cells (BMDCs) differentiated from C57BL/6 P2X7-/- and C57BL/6 mice were infected with VSR virus and used to activate T cells purified from C57BL/6 P2X7-/- and C57BL/6 mice in vitro for 96 hours. In addition, BMDCs differentiated from C57BL/6 mice received 20ng/ml rapamycin during 1h prior infection. The following parameters were evaluated: BMDC cell death by apoptosis, memory cells markers by flow cytometry and RNA viral quantitation was performed by real time PCR. Results : Rapamycin treatment in RSV infected BMDCs decreases the frequency of CD8+CD44high cells and increases the level of viral RNA in DCs, but the rapamycin does not affect the viability of the infected dendritic cells. Furthermore, when BMDCs were treated with rapamycin, an increase of BMDC survival occurred, depending on the contact with the T cells. The absence of purinergic receptor P2X7 in T cells leads to a decrease in the frequency of CD8+CD122+KLRG1-, however the absence of purinergic receptor in infected BMDCs increases the frequency of CD8+CD122+ KLRG1- T cells. Conclusion : Our study suggests that P2X7 receptor is involved in memory CD8 T cell response. In addition our data indicated that mTOR inhibition increases the survival of BMDCs in a mechanism dependent on T-cell contact and also suggests that rapamycin treatment on dendritic cells during VSR infection affect CD8 T cell differentiation. / Introdução : O Vírus Sincicial Respiratório (VSR) é um dos principais causadores de infecção viral do trato respiratório inferior em crianças menores de dois anos de idade. A resposta de células T CD8 de memória para VSR não apresenta uma resposta imune eficiente e duradoura, por isso são recorrentes as infecções durante a vida. Até o momento não se tem o conhecimento sobre o envolvimento do mTOR (mammalian target of rapamycin) e do receptor purinérgico P2X7 na resposta de células T CD8 de memória durante a infecção de VSR. Objetivos : Investigar o efeito da rapamicina nas células dendríticas (DCs) durante a infecção viral, bem como, avaliar o efeito do receptor purinérgico P2X7 nas células dendríticas (DCs) infectadas com o vírus VSR na resposta de células T CD8 de memória. Metodologia : Células dendríticas diferenciadas de medula óssea (BMDCs) de camundongos C57BL/6 P2X7-/- e C57BL/6 infectadas com VSR foram utilizadas para ativar células T purificadas de camundongos C57BL/6 P2X7-/- e C57BL/6 durante 96 horas. Além disso, um grupo de BMDCs de camundongos C57BL/6 recebeu 20ng/mL de rapamicina durante 1h antes da infecção. As DCs foram marcadas para investigação de morte celular por apoptose, as células T marcadas para análise células de memória e a quantificação do RNA viral foi realizada através de PCR em tempo real. Resultados : O tratamento com o inibidor de mTOR nas BMDCs infectadas pelo VSR diminuiu a geração de células T CD8+ CD44high e aumentou os níveis de RNA viral nas DCs, porém a rapamicina não influenciou a viabilidade das células dendríticas infectadas. Quando as BMDCs foram tratadas com rapamicina, houve um aumento de sobrevivência das células, dependente do contato com as células T. Na ausência do receptor purinérgico P2X7 nas células T, ocorreu uma diminuição na frequência das células T CD8+CD122+KLRG1-, entretanto a ausência do receptor purinérgico nas BMDCs infectadas aumentou a frequência destas células T CD8+CD122+KLRG1-.Conclusão : Nosso estudo sugere que o receptor P2X7 está envolvido na resposta de células T CD8 de memória durante a infecção pelo VSR. Além disso, sugere-se que as células dendríticas tratadas com rapamicina durante a infecção com VSR prejudica a diferenciação de células T CD8.

Made available in DSpace on 2015-11-06T01:05:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000476006-Texto+Completo-0.pdf: 2870247 bytes, checksum: 76076f40e5be705d3be21ff4d7ceb1f3 (MD5) Previous issue date: 2015 / Aging has been associated with increased generation of free radicals as well as immunosenescence. Previous studies have identified older individuals with inverted T CD4:CD8 cell ratio and increased immunity to cytomegalovirus (CMV). Here, we investigated markers of oxidative stress and antioxidant defences in older individuals with inverted CD4:CD8 T-cell ratio. From 421 healthy community-dwelling older adults recruited, 61 subjects were identified with inverted CD4:CD8 T-cell ratio. Older individuals with a CD4:CD8 ratio < 1 had increased levels of plasma advanced oxidation protein products (AOPP) and Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP), but reduced levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) as compared to subjects with normal CD4:CD8 T-cell ratio. The CMV IgG serology was negatively correlated with CD4:CD8 ratio. These markers were more evident among elderly men than women. Our data suggest a close relationship between chronic CMV infection and oxidative profile in older individuals in the midst of its influence on the peripheral T-cell subsets. / O envelhecimento tem sido associado com o aumento da geração de radicais livres, bem como com a imunossenescência. Estudos anteriores já haviam identificado os idosos que apresentavam a inversão da razão CD4:CD8 e a sorologia mais acentuada para citomegalovírus (CMV). Aqui, investigamos marcadores de estresse oxidativo e as defesas antioxidantes em idosos com a relação invertida entre as células T CD4 e CD8. De um total de 421 idosos recrutados na comunidade, 61 sujeitos foram identificados com a inversão da razão CD4:CD8. Os idosos com CD4:CD8<1 tinham níveis aumentados de produtos proteicos de oxidação avançada (AOPP) e atividade antioxidante total pelo método de redução do ferro (FRAP) no plasma, mas níveis reduzidos de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), em comparação com indivíduos com razão CD4:CD8 normais. A sorologia para CMV (IgG) foi negativamente correlacionada com a razão CD4:CD8. Estes marcadores foram mais evidentes entre os homens do que as mulheres idosas. Nossos dados sugerem uma estreita relação entre a infecção por CMV crônica e perfil oxidativo em indivíduos mais velhos no meio de sua influência sobre os subtipos de células T periféricas.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 parte1.pdf: 1834339 bytes, checksum: 9a90c51efd47d1b0c436c6b761659ab0 (MD5) Previous issue date: 2011-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Initially known as a cardiotonic steroid capable to inhibit the Na+/K+ATPase, ouabain was identified as an endogenous substance present in human plasma, produced by the adrenal, pituitary and hypothalamus and can interfere with various aspects of immune response. In this study, which aimed to study the modulating effect of ouabain on the immune system in vivo and in vitro using mouse models, we demonstrated that treatment for three consecutive days using 0,56 mg/kg ouabain was able to reduce cell migration induced by mitogen Concanavalian A (Con A) to the peritoneum, and this fact reflects a decrease in the number of polymorphonuclear leukocytes, mainly neutrophils. In this same model, ouabain was also able to increase the number of mononuclear leukocytes in the peritoneal cavity. Evaluating the effect of treatment on lymphocytes in peripheral organs, we found that, in lymphocytes from mesenteric lymph nodes, this substance induces a decrease of 20% of T CD3+ lymphocytes, concomitant with an increase in same percentage of B lymphocytes, without, however, modulating the proportion of CD4+ and CD8+ among themselves, as well as the number of regulatory T cells (CD4+/CD25+). In the thymus, the same treatment, does not affect the proportion of lymphocyte subpopulations studied. The analysis qualitative and quantitatively of peripheral blood leukocytes, biometrics and cellularity of spleen, thymus and lymph nodes showed no change in response to ouabain treatment. Comparative studies using treatment for one or two days, with the same dose of 0,56 mg/kg did not trigger modulation, in vivo, in populations of T lymphocytes, B lymphocytes and subpopulations of CD4+ and CD8+ cells in mesenteric lymph nodes. In addition, ouabain was able to inhibit mitochondrial activity of lymphocytes stimulated with Con A, using MTT assay.These findings indicate an immunomodulatory role of ouabain. / Inicialmente, conhecida como um esteróide cardiotônico e por sua propriedade de inibir a Na+/K+ATPase, a ouabaína foi identificada como uma substância endógena presente no plasma humano, produzida pela adrenal, hipófise e hipotálamo e capaz de interferir em vários aspectos da resposta imune. Neste trabalho, que teve como objetivo estudar o efeito modulador da ouabaína no sistema imunológico in vivo e in vitro por meio de modelos murinos, demonstrou-se que o tratamento por três dias consecutivos com ouabaína utilizando a dose de 0,56 mg/kg foi capaz de reduzir a migração celular induzida pelo mitógeno Concanavaliana A (Con A) para o peritôneo, sendo este fato reflexo da redução do número de leucócitos polimorfonucleares, principalmente, neutrófilos. Neste mesmo modelo, a ouabaína também foi capaz de aumentar o número de leucócitos mononucleares no lavado peritoneal. Avaliando-se o efeito desse tratamento no perfil linfocitário de órgãos periféricos, encontrou-se que, em linfócitos de linfonodos mesentéricos, esta substância induz a uma diminuição de 20% de linfócitos T CD3+, concomitante a um aumento de mesmo percentual de linfócitos B, sem, no entanto, modular a proporção de linfócitos TCD4+ e CD8+ entre si, bem como o número de células T regulatórias (CD4+CD25+). No timo, o mesmo tratamento com a ouabaína não interfere na proporção das subpopulações linfocitárias estudadas. As análises qualitativas e quantitativas de leucócitos do sangue periférico, da biometria e celularidade do baço, timo e linfonodos mesentéricos não apresentaram alteração em resposta ao tratamento com a ouabaína. Estudos comparativos utilizando tratamentos de um ou dois dias, com a mesma dose de 0,56 mg/Kg não desencadearam modulação, in vivo, nas populações de linfócitos T, linfócitos B e das subpopulações de linfócitos TCD4+ e CD8+ nos linfonodos mesentéricos. Adicionalmente, a ouabaína foi capaz de inibir a atividade mitocondrial de linfócitos estimulados com Con A, por meio do ensaio de MTT. Estes resultados indicam um papel imunomodulador da ouabaína.