Submitted by Renorbio (renorbioba@ufba.br) on 2018-04-25T17:41:58Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Maria da Conceição Aquino de Sá.pdf: 3251110 bytes, checksum: f7580c2d7b59b8cd7c2c1409212927e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2018-05-04T14:16:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Maria da Conceição Aquino de Sá.pdf: 3251110 bytes, checksum: f7580c2d7b59b8cd7c2c1409212927e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-04T14:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Maria da Conceição Aquino de Sá.pdf: 3251110 bytes, checksum: f7580c2d7b59b8cd7c2c1409212927e0 (MD5) / FUNDACAO DE AMPARO A PESQUISA DO ESTADO DA BAHIA - EDITAL 013/2014 Programa De Bolsas De Mestrado e Doutorado / A procura por produtos da caprino-ovinocultura é frequente e contribui para aumentar a economia mundial, por isso é necessário produzir em larga escala e com qualidade para atender à demanda da população. Entretanto, diversos fatores na criação desses animais ainda necessitam melhorar, principalmente na área sanitária, na qual muitas doenças acometem o rebanho, dentre elas, a Linfadenite Caseosa, doença causada por Corynebacterium pseudotuberculosis, uma bactéria que apresenta sua toxicidade através de genes de virulência, assim como pela produção de biofilme, que protege a bactéria de ambientes hostis. Dessa forma, estudos sobre esse patógeno são necessários, a exemplo do sequenciamento genômico, na busca de conhecer genes para análises de biomoléculas e com isso compreender melhor a sua antigenicidade e imunogenicidade com o objetivo de melhorar a especificidade e sensibilidade de testes sorológicos, utilizados como prevenção da doença no rebanho. Além disso, é essencial entender o mecanismo de patogenicidade desta bactéria no hospedeiro e suas formas de defesa no sistema imunológico do animal. Assim, no presente estudo, foram caracterizados os genomas de quatro cepas de C. pseudotuberculosis, comparando as cepas produtoras (OVI2C, CAPJ4) e não produtoras (OVI03, CAP3W) de biofilme. As cepas foram extraídas para produção de antígenos somáticos e de superfícies. A partir de estudos prévios com immunoblotting, foram escolhidas as cepas de origem caprina (CAPJ4 e CAP3W) para o estudo in vivo com dezoito caprinos da raça Canindé, divididos em três grupos experimentais, um grupo controle e dois grupos infectados com cepas de C. pseudotuberculosis, para avaliar a patogenia clinicamente, realizando hemograma, além de outras análises sorológicas através do ensaio de ELISA e Western Blotting. Também foi realizada a cultura de células sanguíneas para o estudo da imunidade celular com IFN- e cultivo de células mononucleares do sangue periférico para observar a modulação da expressão de proteínas do sistema GTPases, Rab 5 e Rab 7. Após esses estudos, observou-se que os genes contidos no genoma das cepas de C. pseudotuberculosis possuem similaridade, mostrando que eles são altamente conservados. A extração das bactérias resultou em antígenos de superfície F3, que apresentaram reatividade no immunoblotting frente aos soros de ovinos experimentalmente infectados. De todos os antígenos, os de origem caprina, apresentaram melhor antigenicidade. No experimento in vivo, após a infecção dos animais, foram realizadas outras colheitas de sangue e foi possível observar que a cepa produtora de biofilme é mais resistente, causando danos maiores aos animais. Para as condições de infecção experimental, os valores do hemograma estão dentro dos parâmetros. Na análise sorológica os caprinos infectados experimentalmente responderam à exposição primária, o que contribui para o aumento da imunoglobulina IgG. A produção de IFN-  também foi observada. Foi verificado que as cepas de C. pseudotuberculosis produtora e não produtora de biofilme podem alterar a expressão de proteínas Rab 5 e Rab 7 em macrófagos derivados de células mononucleares do sangue periférico cultivados in vitro. Esses resultados forneceram informações importantes para a produção de testes diagnósticos, com maior acurácia. / The consumption of sheep and goat products is frequent and increases the values of world economy, so it is necessary to produce large scale and quality to meet the demand of population. However, several factors in the breeding of these animals still have to improve, especially in sanitary area, where many diseases affect the cattle, among them, Caseous Lymphadenitis, caused by Corynebacterium pseudotuberculosis, a bacterium that presents its toxicity through virulence genes, also by production of biofilm that protects the bacteria from hostile environments. Thus, studies of this pathogen are necessary, such as genomic sequencing, in search to know antigenic genes for biomolecule analysis and with this to understand better its antigenicity and immunogenicity, to be possible improve the specificity and sensitivity of serological tests, that are used as prevention of disease in the herd. Besides, it is essential to understand the mechanism of pathogenicity of this bacterium in host and its forms of defense against the animals immune system. At the present study, the genomes of four strains of C. pseudotuberculosis were characterized, comparing the biofilm producing (OVI2C, CAPJ4) and non-producing (OVI03, CAP3W) strains. These strains were extracted for production of somatic and surfaces antigens. From previous studies with immunoblottingting, strains of goat origin (CAPJ4 and CAP3W) were chosen for in vivo study with 18 Canindé goats, divided into three experimental groups, one control group and two groups infected with strains of C. pseudotuberculosis, to evaluate clinically the pathogenesis and through hemogram, in addition to other serological tests as ELISA assay and Western Blotting. Also was performed blood cell culture for the study of cellular immunity with IFN-, as culture of peripheral blood mononuclear cells to observe the modulation of expression of GTPases, Rab 5 and Rab 7 system proteins. After these studies, it was observed that the genes contained in the genome of the strains of C. pseudotuberculosis are genetically homogeneous, showing that they are highly conserved. The extraction of bacteria resulted in F3 surface antigens, that showed reactivity in immunoblottingting against sera from experimentally infected sheep. Of all antigens, those of goat origin had better antigenicity. At the in vivo experiment, after the infection of animals, other blood samples were collected and it was possible to observe that the biofilm producing strain is more resistant, causing greater damages to animals. For the conditions of experimental infection, blood count values are between normal limits. In the serological analysis, the experimentally infected goats responded to primary exposure, which contributes to increase of immunoglobulin IgG. The production of IFN- was also observed. In conclusion, it was observed that strains of C. pseudotuberculosis producing and not producing biofilm can modify the expression of Rab proteins in macrophages derived from mononuclear cells of peripheral blood cultivated in vitro. These results provided important information for production of diagnostic tests, with greater accuracy.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-07-13T17:37:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Renato Carminati.pdf: 854115 bytes, checksum: 8d88e20d9828adf29e18fda53a89e4b8 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-08-23T15:46:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Renato Carminati.pdf: 854115 bytes, checksum: 8d88e20d9828adf29e18fda53a89e4b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-23T15:46:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Renato Carminati.pdf: 854115 bytes, checksum: 8d88e20d9828adf29e18fda53a89e4b8 (MD5) / A linfadenite caseosa é uma doença crônica que acomete principalmente caprinos e ovinos. O agente etiológico é a bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis e a doença caracteriza-se pela formação de granulomas nos linfonodos internos ou superficiais e em outros órgãos. A avaliação da resposta imune humoral é uma importante ferramenta para localização de animais possivelmente infectados, dificultando desta forma a disseminação do agente. O presente estudo avaliou a sensibilidade e especificidade de quatro ensaios imunoenzimáticos (ELISA), tendo como padrão ouro o isolamento microbiológico, confirmado por PCR. Foram utilizados dois antígenos sendo o primeiro o sobrenadante da cultura de C. pseudotuberculosis em caldo BHI e o outro obtido a partir do fracionamento em três fases (TPP) do sobrenadante de cultura de C. pseudotuberculosis, no mesmo meio. Foram usadas 49 amostras de soro de caprinos que apresentavam granulomas superficiais, dos quais isolou-se C. pseudotuberculosis, as bactérias isoladas e identificadas por provas bioquímicas foram submetidas a reação de polimerase em cadeia. Foram usadas 50 amostras de soro de caprinos clinicamente sadios. A sensibilidade e especificidade do ELISA indireto BHI foi de 98% e 98%. Para o ELISA indireto TPP obteve-se uma sensibilidade e especificidade de 100% e 100%. Para o ELISA sanduíche BHI a sensibilidade e especificidade foram, de respectivamente 86% e 84%. A sensibilidade e especificidade para o ELISA sanduíche TPP, foram 74% e 72%. A banda de 815 bp para do fragmento 16S RNA de C. pseudotuberculosis foi amplificada para todas as 49 amostras isoladas.

As infecções por Mycobacterium sp. têm grande importância na suinocultura devido às perdas econômicas decorrentes da alteração do destino de carcaças, tais como condenação total, aproveitamento condicional, ou mercado interno. As principais causadoras de linfadenite granulomatosa (LG), encontradas em matadouros frigoríficos, são as micobactérias pertencentes ao complexo Mycobacterium avium-intracellulare. Na inspeção post mortem não há como determinar a espécie de micobactéria envolvida na linfadenite granulomatosa. Por esse motivo, as carcaças e vísceras dos suínos com lesões granulomatosas em linfonodos seguem a destinação prevista para casos de tuberculose. Em 2009, verificou-se aumento nas condenações por LG em um frigorífico de suínos, sob inspeção federal, na região do Vale do Taquari, RS. Na tentativa de identificar as causas e, possivelmente, adequar os critérios para tais condenações, o presente estudo teve como objetivo determinar a prevalência de LG no período de 2008 a 2011, através da inspeção visual e através de exames histopatológicos e microbiológicos em 47 linfonodos das regiões mesentérica, traqueobrônquica e submandibular, amostrados na linha de abate que foram processados pelos métodos de rotina histológica e corados pela técnica de Ziehl-Neelsen. Em vinte e uma amostras, realizou-se, também, a técnica de PCR quantitativo para circovirus suíno tipo 2 (PCV2) e em 26 amostras exame bacteriológico de rotina. Em vinte (42,6%), dos 47 linfonodos analisados, a lesão foi classificada, visualmente, como cisto sendo 90% destes confirmados pela histologia. Entre os 27 linfonodos classificados como LG na inspeção visual, 19 (70,4%) foram confirmados na histologia. As principais diferenciações da lesão cística para LG, ao exame visual, incluíram a fácil remoção do conteúdo sob leve pressão e a ausência de granuloma ao corte. Na análise histopatológica, observaram-se áreas císticas com conteúdo proteináceo, algumas amostras com infiltrado linfocítico. PCV2 não foi detectado nas amostras testadas e identificou-se Corynebacterium (1/26), Staphylococcus coagulase negativa (4/26) e Staphylococcus hyicus (2/26). A adoção de novos critérios na diferenciação entre lesões tuberculoides e císticas, à inspeção post mortem de linfonodos mesentéricos, determinou a redução da prevalência das condenações por LG de 5,81% em 2009 para 1,47%, em 2011. Não foram detectados agentes infecciosos associados à lesão cística de linfonodos mesentéricos. No entanto, a etiologia dessas lesões císticas não foi determinada. / Infection by Mycobacterium sp. has a great economic impact on the swine industry due to the economic looses associated with condemnation or altered destination of the carcass in slaughterhouse. The main causes of granulomatous lymphadenitis (GL) in pigs are bacterium belonging to the Mycobacterium avium-intracellularis group. Since visual differentiation among Mycobacterium species involved in GL is not possible, carcass and viscera from GL-affected pigs follow the same destination from that of tuberculosis. An increased number of condemnations due to GL in a swine slaughterhouse under federal inspection in the region of Taquari Valley were recorded. In an attempting to identify the causes and to adapt the inspection criteria for such condemnations, this study aimed to determine the prevalence of GL from 2008 to 2011 through visual inspection, histopathological and microbiological examinations in lymph nodes. Forty seven lymph nodes were collected and processed by the routine histological methods and stained by Ziehl-Neelsen. In 21 samples, quantitative PCR for PCV2 was performed. The other 26 samples were analyzed by standard bacteriology. From 47 lymph nodes analyzed, 20 (42.6 %) were classified as cysts by visual inspection, 90% of which were confirmed by histology. A total of 19 (70.4%) of the 27 lymph nodes visually classified as GL were confirmed by histology. The main visual differences between cysts and GL were the easy content removal under light pressure and absence of granuloma at the cut surface. At histopathological examination, cysts showed areas with proteinaceous contents, some of them with histiocytic infiltrate. PCV2 was not detected in the tested samples. Bacteriological analysis identified Corynebacterium (1/26), Staphylococcus coagulase negative (4/26) and Staphylococcus hyicus (2/26). Adoption of a new criteria for differentiating cystic from tuberculous lesions, at the post mortem inspection of mesenteric lymph nodes, decreased the prevalence of 5.81% recorded in 2009 to 1.47% in 2011, in the condemnation due to GL. It is suggested that most lesions previously classified as GL were truly cysts. No infectious agents were associated with such lesions. However, the etiology of these lymph nodal cystic lesions could not be determined.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2014-10-20T17:43:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Priscilla Carolinne Bagano Vilas Boas.pdf: 1837183 bytes, checksum: 784433b804bcd85b98b7c4fdf2b6a40f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-20T17:43:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Priscilla Carolinne Bagano Vilas Boas.pdf: 1837183 bytes, checksum: 784433b804bcd85b98b7c4fdf2b6a40f (MD5) / FAPESB / Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico de diversas doenças crônicas infecto-contagiosas em diferentes espécies de mamíferos, sendo a linfadenite caseosa a mais importante delas, encontrada em caprinos e ovinos. Esta patologia leva à formação de granulomas nos linfonodos superficiais e internos, e em alguns órgãos como os pulmões, fígado e baço, acarretando em diversas perdas econômicas para a caprino-ovinocultura. Neste trabalho, camundongos BALB/c foram imunizados com proteínas de um antígeno somático hidrofóbico extraído de uma linhagem virulenta de C. pseudotuberculosis. Os esplenócitos obtidos foram fusionados com células mielomatosas da linhagem SP2/0 e os hibridomas produzidos através desta fusão foram submetidos a testes de ELISA para identificação dos clones produtores de anticorpos específicos para o antígeno somático hidrofóbico. Foram selecionados quatro clones, posteriormente injetados intraperitonialmente em camundongos BALB/c, para produção de líquido ascítico. Os líquidos ascíticos foram testados por western blotting, usando o antígeno somático hidrofóbico submetido à eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) a 12,5 e 15%. Em SDS-PAGE a 12,5% todos os líquidos obtidos reconheceram duas bandas, com pesos moleculares estimados em 31 e 34 kDa e o clone 3-12C CL9A, também reconheceu uma banda com peso molecular de 19 kDa. Em SDS-PAGE a 15%, o clone 1-6G CL10 manteve o reconhecimento de apenas duas bandas de 31 e 34 kDa. Os demais apresentaram reconhecimento de outras bandas, além destas duas. Bandas proteicas com pesos moleculares similares aos aqui encontrados, já foram descritas na literatura em estudos realizados com soro de caprinos e ovinos infectados por C. pseudotuberculosis. Os anticorpos produzidos neste trabalho possuem potencial para utilização em imunoensaios, visando o aprofundamento de estudos sobre a relação micro-organismo hospedeiro, assim como a possibilidade de produção de um kit para o diagnóstico da infecção

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-15. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:10Z : No. of bitstreams: 1 000870617.pdf: 699760 bytes, checksum: d53af1d75b85732b5ff9277249a531f1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Recent years have seen a growing interest in sheep for meat production, mainly in São Paulo Northwest. In order to achieve greater productivity, greater food security and decreased expenditures and stemmed losses of diseases it is essential to recognize these problems, so that we can trace combat strategies of these, in addition to establishing preventive measures, so that you can reduce economic losses, maximize profits and provide a safe food. Through detailed analysis of questionnaires, direct observation in properties and sampling was done to characterize the sheep flock of micro-Araçatuba-SP, which is composed of seven municipalities. The animals were submitted to clinical and general examination by history, inspection and palpation, appropriate notes being made for the conditions of health, reproductive and nutritional management of these animals in their properties. During the visits to the properties they were made fecal collection of the rectum for monitoring by counting eggs per gram. Also punctures were performed nodules, when detected palpation for microbial culture. RESULTS: A lymphadenitis 50% history of properties, but was found in only 8.3% of these. Got an association between lymphadenitis history and mortality (p = 0.0693). It was found a history of foot problems in 91.6% of the properties was observed in 50% of them. It was found that foot problems and conducting foot baths are related (p = 0.0455). A mastitis history was obtained in 41.6% of properties, which was observed in 25% of them. About contagious ecthyma, it was reported by 25% of the properties, however, was not observed during the physical examination. The properties in its entirety declared conduct immunization against clostridial diseases. 25% had other types of vaccines. In 91.6% of the properties animals were observed with symptoms of worms. The Fisher exact test showed association between mortality...(complete abstract, electronic access below) / FAPESP: 2013/144336

Orientador: Jane Megid / Banca: Adriana Cortez / Banca: Júlio Cesar de Freitas / Resumo: A carne suína é a fonte de proteína de origem animal mais consumida no mundo, tendo o Brasil como o quarto maior produtor e exportador. A brucelose é uma das mais importantes e amplamente distribuidas zoonoses mundial. A prevenção da brucelose humana depende do controle da doença nos animais. O diagnóstico definitivo é o isolamento da bactéria, porém técnicas de biologia molecular permitem a detecção do agente e diferenciação em espécies e biótipos reduzindo o tempo necessário para o diagnóstico final. Os programas de controle e erradicação utilizam os testes sorológicos para o diagnóstico da doença existindo, no entanto, variação quanto ao tipo de teste utilizado de acordo com diferentes países e pesquisadores. No Brasil relatos de soropositividade para brucelose em suínos variam de zero a 100% de acordo com a região, amostragem e metodologia utilizada, porém estudos da enfermidade em suideos com lesões de linfadenite não são encontrados. Este trabalho pretende descrever a situação epidemiológica da brucelose em suínos no Brasil, avaliar os meios de cultura ágar Brucella, CITA e Farrell para isolamento desta bactéria e detectar a presença do agente em linfonodos de suínos e javalis, com linfadenite, abatidos em frigoríficos no estado de São Paulo, e destinados ao consumo humano / Abstract: Pork is the most consumed source of animal protein in worldwide. Brucellosis is one of the most important and worldwide distributed zoonosis. The prevention of human brucellosis depends on controlling the disease in animals. The bacteria isolation is the standard technique but new molecular methods allow the detection and differentiation the agent in species and biotypes reducing the time required for the final diagnosis. The control and eradication programs are based in serological tests for the diagnosis, however, variation in these tests according to different countries and researchers are common. In Brazil reports for seropositivity in swine range from zero to 100% depending on region, sampling and methodology, but studies of the disease in suidae with lymphadenitis are not found. This study aims to describe the epidemiological situation of brucellosis in pigs in Brazil and evaluate Brucella agar, CITA and Farrell culture media for isolation of the bacteria and to detect the presence of the agent in lymph nodes of pigs and boars with lymphadenitis slaughtered in the state of São Paulo and sent for human consumption / Mestre

Resumo:Nos últimos anos houve um crescente interesse na criação de ovinos para a produção de carne, principalmente na região Noroeste do Estado de São Paulo. A fim de se obter maior produtividade, maior segurança alimentar e diminuição de gastos e perdas provindos de enfermidades torna-se imprescindível o reconhecimento de tais problemas, para que se possa traçar estratégias de combate e prevenção destes. Por meio de análise detalhada de questionários, observação direta em doze propriedades e coleta de amostras de 633 animais, foi feita a caracterização do rebanho ovino da microrregião de Araçatuba-SP, que é composta por sete municípios. Os animais foram submetidos ao exame clínico-geral, por meio da anamnese, inspeção e palpação, sendo feitas as devidas anotações quanto às condições de manejo sanitário, reprodutivo e nutricional desses animais em suas respectivas propriedades. Durante as visitas às propriedades foram feitas as coletas de fezes da ampola retal para acompanhamento por contagem de ovos por grama. Também foram realizadas punções de nódulos, quando detectados a palpação, para cultura microbiana. Constatou-se um histórico de linfadenite em 50% das propriedades, porém houve identificação da doença em apenas 8,3% destas. Constatou-se um histórico de afecções podais em 91,6% das propriedades, observou-se em 50% delas. Um histórico de mastite foi obtido em 41,6% das propriedades, a qual foi observada em 25% delas. Sobre ectima contagioso, foi relatado por 25% das propriedades, porém, não foi observado durante os exames físicos. As propriedades em sua totalidade declararam realizar vacinação contra clostridioses. 25% realizavam outros tipos de vacinas. Em 91,6% das propriedades foram observados animais com sintomatologia de verminose. Práticas de higienização das instalações e ambientes e técnicas de manejo sanitário eram adotadas em...(resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:Recent years have seen a growing interest in sheep for meat production, mainly in São Paulo Northwest. In order to achieve greater productivity, greater food security and decreased expenditures and stemmed losses of diseases it is essential to recognize these problems, so that we can trace combat strategies of these, in addition to establishing preventive measures, so that you can reduce economic losses, maximize profits and provide a safe food. Through detailed analysis of questionnaires, direct observation in properties and sampling was done to characterize the sheep flock of micro-Araçatuba-SP, which is composed of seven municipalities. The animals were submitted to clinical and general examination by history, inspection and palpation, appropriate notes being made for the conditions of health, reproductive and nutritional management of these animals in their properties. During the visits to the properties they were made fecal collection of the rectum for monitoring by counting eggs per gram. Also punctures were performed nodules, when detected palpation for microbial culture. RESULTS: A lymphadenitis 50% history of properties, but was found in only 8.3% of these. Got an association between lymphadenitis history and mortality (p = 0.0693). It was found a history of foot problems in 91.6% of the properties was observed in 50% of them. It was found that foot problems and conducting foot baths are related (p = 0.0455). A mastitis history was obtained in 41.6% of properties, which was observed in 25% of them. About contagious ecthyma, it was reported by 25% of the properties, however, was not observed during the physical examination. The properties in its entirety declared conduct immunization against clostridial diseases. 25% had other types of vaccines. In 91.6% of the properties animals were observed with symptoms of worms. The Fisher exact test showed association between mortality...(complete abstract, electronic access below) / Orientador:Luiz Cláudio Nogueira Mendes / Banca:Vera Cláudia Lorenzetti Magalhães Curci / Banca:Luzia Helena Queiroz / Mestre

As infecções por Mycobacterium sp. têm grande importância na suinocultura devido às perdas econômicas decorrentes da alteração do destino de carcaças, tais como condenação total, aproveitamento condicional, ou mercado interno. As principais causadoras de linfadenite granulomatosa (LG), encontradas em matadouros frigoríficos, são as micobactérias pertencentes ao complexo Mycobacterium avium-intracellulare. Na inspeção post mortem não há como determinar a espécie de micobactéria envolvida na linfadenite granulomatosa. Por esse motivo, as carcaças e vísceras dos suínos com lesões granulomatosas em linfonodos seguem a destinação prevista para casos de tuberculose. Em 2009, verificou-se aumento nas condenações por LG em um frigorífico de suínos, sob inspeção federal, na região do Vale do Taquari, RS. Na tentativa de identificar as causas e, possivelmente, adequar os critérios para tais condenações, o presente estudo teve como objetivo determinar a prevalência de LG no período de 2008 a 2011, através da inspeção visual e através de exames histopatológicos e microbiológicos em 47 linfonodos das regiões mesentérica, traqueobrônquica e submandibular, amostrados na linha de abate que foram processados pelos métodos de rotina histológica e corados pela técnica de Ziehl-Neelsen. Em vinte e uma amostras, realizou-se, também, a técnica de PCR quantitativo para circovirus suíno tipo 2 (PCV2) e em 26 amostras exame bacteriológico de rotina. Em vinte (42,6%), dos 47 linfonodos analisados, a lesão foi classificada, visualmente, como cisto sendo 90% destes confirmados pela histologia. Entre os 27 linfonodos classificados como LG na inspeção visual, 19 (70,4%) foram confirmados na histologia. As principais diferenciações da lesão cística para LG, ao exame visual, incluíram a fácil remoção do conteúdo sob leve pressão e a ausência de granuloma ao corte. Na análise histopatológica, observaram-se áreas císticas com conteúdo proteináceo, algumas amostras com infiltrado linfocítico. PCV2 não foi detectado nas amostras testadas e identificou-se Corynebacterium (1/26), Staphylococcus coagulase negativa (4/26) e Staphylococcus hyicus (2/26). A adoção de novos critérios na diferenciação entre lesões tuberculoides e císticas, à inspeção post mortem de linfonodos mesentéricos, determinou a redução da prevalência das condenações por LG de 5,81% em 2009 para 1,47%, em 2011. Não foram detectados agentes infecciosos associados à lesão cística de linfonodos mesentéricos. No entanto, a etiologia dessas lesões císticas não foi determinada. / Infection by Mycobacterium sp. has a great economic impact on the swine industry due to the economic looses associated with condemnation or altered destination of the carcass in slaughterhouse. The main causes of granulomatous lymphadenitis (GL) in pigs are bacterium belonging to the Mycobacterium avium-intracellularis group. Since visual differentiation among Mycobacterium species involved in GL is not possible, carcass and viscera from GL-affected pigs follow the same destination from that of tuberculosis. An increased number of condemnations due to GL in a swine slaughterhouse under federal inspection in the region of Taquari Valley were recorded. In an attempting to identify the causes and to adapt the inspection criteria for such condemnations, this study aimed to determine the prevalence of GL from 2008 to 2011 through visual inspection, histopathological and microbiological examinations in lymph nodes. Forty seven lymph nodes were collected and processed by the routine histological methods and stained by Ziehl-Neelsen. In 21 samples, quantitative PCR for PCV2 was performed. The other 26 samples were analyzed by standard bacteriology. From 47 lymph nodes analyzed, 20 (42.6 %) were classified as cysts by visual inspection, 90% of which were confirmed by histology. A total of 19 (70.4%) of the 27 lymph nodes visually classified as GL were confirmed by histology. The main visual differences between cysts and GL were the easy content removal under light pressure and absence of granuloma at the cut surface. At histopathological examination, cysts showed areas with proteinaceous contents, some of them with histiocytic infiltrate. PCV2 was not detected in the tested samples. Bacteriological analysis identified Corynebacterium (1/26), Staphylococcus coagulase negative (4/26) and Staphylococcus hyicus (2/26). Adoption of a new criteria for differentiating cystic from tuberculous lesions, at the post mortem inspection of mesenteric lymph nodes, decreased the prevalence of 5.81% recorded in 2009 to 1.47% in 2011, in the condemnation due to GL. It is suggested that most lesions previously classified as GL were truly cysts. No infectious agents were associated with such lesions. However, the etiology of these lymph nodal cystic lesions could not be determined.

INTRODUÇÃO: A presença de metástase cervical é um dos principais fatores prognósticos em pacientes com carcinoma epidermoide de laringe. A análise rotineira dos linfonodos não inclui a avaliação da reatividade linfonodal, nem pesquisa de micrometástases, podendo ser desprezada informações prognóstica relevantes neste grupo de pacientes. OBJETIVOS: Relacionar a reatividade linfonodal com a recidiva e mortalidade de pacientes com carcinoma epidermoide de laringe estadiados como pT3 e pT4, pN0, identificar através de marcadores imuno-histoquímicos (AE1/AE3, citoqueratina 7 e citoqueratina 5/6) a incidência de micrometástases e relacionar com o prognóstico dos pacientes. MÉTODO: Entre 2002 e 2005, foram selecionados 105 pacientes estadiados como pN0 com carcinoma epidermoide de laringe submetidos à laringectomia total e esvaziamento cervical seletivo dos níveis II, III e IV bilateralmente, com a maioria dos pacientes (69) submetidos à radioterapia adjuvante. Todos os linfonodos foram analisados conforme os padrões de reatividade: hiperplasia folicular (associada à resposta imune humoral), hiperplasia paracortical (associada à resposta imune celular), histiocitose sinusal, linfonodo normal e depleção linfonodal. Apenas os dois primeiros padrões são considerados como linfonodos estimulados e os demais como não estimulados. O padrão linfonodal mais frequente de cada caso foi considerado na análise da recidiva da doença e mortalidade. Todos os linfonodos foram submetidos à análise imuno-histoquímica com o clone de citoqueratinas AE1/AE3, e nos casos de positividade utilizou-se as citoqueratinas 5/6 e 7 para a diferenciação entre micrometástases e inclusões epiteliais benignas. RESULTADOS: Foram analisados um total de 3.648 linfonodos, com uma média de 34,7 linfonodos por paciente. O padrão de reatividade mais frequente foi a histiocitose sinusal (50 casos) seguido da hiperplasia paracortical (35 casos) e hiperplasia folicular (20 casos), não havendo relação entre esta análise e a recidiva (p = 0,98) ou mortalidade (p = 0,49). A resposta imune humoral esteve relacionada com maior mortalidade (p = 0,05), com sobrevida global em 5 anos de 76%, comparado a 60% de sobrevida no grupo com imunidade celular estimulada (log-rank = 0,05). A pesquisa imuno-histoquímica utilizando o clone de citoqueratinas AE1/AE3 foi positiva em 17 pacientes (16,2%) tendo esta análise relação com a recidiva da doença (p = 0,03) e com a mortalidade (p = 0,04). No grupo com AE1/AE3 positivo, a radioterapia associou-se a uma tendência de proteção à recidiva regional (p = 0,06). A citoqueratina 5/6 confirmou a presença de micrometástases em 4 (3,81%) casos e estas não apresentaram relação prognóstica com a recidiva (p = 0,66) e mortalidade (p = 0,66). A citoqueratina 7 diagnosticou inclusões epiteliais benignas em 11 (10,47%) casos. CONCLUSÕES: Pacientes com imunidade celular estimulada (hiperplasia paracortical) apresentaram menor mortalidade comparados aos pacientes com resposta imune humoral (hiperplasia folicular) (p = 0,05). A positividade na pesquisa com o clone de citoqueratinas AE1/AE3 apresentou relação com significância com a recidiva (p = 0,03) e com a mortalidade (p = 0,04). A incidência de micrometástases na pesquisa com citoqueratina 5/6 foi de 3,86% (4 casos de 105) e de inclusões epiteliais benignas foi de 10,47% (11 casos de 105). / INTRODUCTION: The presence of neck metastasis is one of the most important prognostic factors in patients with squamous cell carcinoma of the larynx. Immunohistochemical analysis for lymph node reactivity, micrometastasis and presence of benign epithelial inclusions are not included in routine anatomopathological exam, leading to potential missing of important prognostic information in this group of patients. OBJECTIVES: 1- To analyze if lymph node reactivity is associated with recurrence and mortality in patients with pT3/pT4, pNo SCCa of the larynx. 2- To identify, with the aid of hystochemical markers AE1/AE3, cytokeratin 7 and cytokeratin 5/6), the incidence of micrometastasis and benign intraepithelial inclusions and to evaluate the relationship of these findings with the patient`s prognosis. METHODS: One hundred and five patients with SCCa of the larynx underwent total laryngectomy and bilateral selective neck dissection of the levels II, III, and IV between 2002 and 2005. Sixty-nine patients also received postoperative radiotherapy. All 105 patients were N0 at the time of diagnosis. The lymph nodes were analyzed according to their reactivity pattern: Follicular hyperplasia (associated to humoral immune response), paracortical hyperplasia (associated to cellular immune response), sinusoidal histiocytosis, normal lymph node, lymphoid depletion. Only the he first two patterns are associated with stimulated lymph nodes. The predominant pattern on each case was recorded and the relationship between these patterns and tumor recurrence and mortality was assessed. All the lymph nodes were tested for cytokeratin AE1/AE3, and the positive cases were than tested for cytokeratin 5/6 and 7 to further differentiate micrometastasis from benign epithelial inclusions. RESULTS: A total of 3648 lymph nodes were analyzed (average of 34.7 lymph nodes/patient). The most common reactivity pattern was paracortical hyperplasia (49 cases), followed by sinusoidal histiocytosis (36 cases) and follicular hyperplasia (20 cases). There was no association between these different patterns and recurrence (p=0.98) or mortality (p=0.49). The humoral immune response was associated with increased mortality (p=0.005). The 5-year overall survival was 76%, compared to 60% on the stimulated cellular response group (LogRank=0.05). Seventeen patients (16.2%) were positive for cytokeratin AE1/AE3, and this was associated with tumor recurrence (p=0.03%) and mortality (p=0.004). In the positive cytokeratin group, the use of radiation therapy showed a tendency to protect against regional recurrence (p=0.06). The use of cytokeratin 5/6 confirmed the presence of micrometastasis in 4 cases (3.81%), but this finding was not associated with local recurrence (p=0.66) or mortality (p=0.66). Cytokeratin 7 has diagnosed benign epithelial inclusions in 11 cases (10.47%). CONCLUSION: Patients with stimulated cellular immunity experienced decreased mortality when compared to humoral immune response (p=0.05). AE1/AE3 positivity was significantly related to recurrence (p=0.03) and mortality (p=0.04). The incidence of micrometastasis was 3.86% (4 cases in 105 patients), and of benign ephitelia inclusions was 10.47% (11 cases in 105 patients).

Haja vista a existência de quatro famílias de M. avium molecularmente distintas circulando na população de suínos do Sul do Brasil, a diferença de virulência constatada entre essas quatro famílias, a influência da virulência nos mecanismos de transmissão, as dúvidas existentes a respeito da existência e da importância da transmissão horizontal de M. avium em suínos e do significado desse conhecimento para o estabelecimento de métodos de controle eficientes, o presente projeto tem por objetivos: 1) Padronizar método de isolamento de micobactérias a partir de fezes suínas; 2) Caracterizar a eliminação de M.avium pelas fezes em suínos experimentalmente infectados pela via oral; 3) Verificar se existe transmissão horizontal entre suínos durante a fase de eliminação ativa, através de experimentos envolvendo infecção oral e exposição de animais contactantes; 4) Estudar, através de modelagem matemática, a dinâmica da infecção por M.avium em uma população suína. Como resultados, para cada um dos itens obteve-se: 1) Houve diferença significativa entre os protocolos de recuperação de micobactérias a partir de fezes de suínos (p< 0,05) e o método ácido com ressuspensão em solução de anfotericina B e semeadura em meio de Lowenstein-Jensen com antibióticos apresentou o maior percentual de recuperação (87%); 2) Foram constados dois períodos de eliminação fecal de MAC em suínos: um inicial, relativo à eliminação residual do inóculo, do 1º ao 4º, e um segundo, com início no 18º e término no 62º dias pós-inoculação, este último é resultado de suposta lesão aberta para a luz do intestino; 3) Cinco, dos sete animais contactantes, infectaram-se com o M.avium, estirpe PIG B e 4) A simulação matemática da doença, considerando a transmissão horizontal como mecanismo principal da ocorrência de condenações em matadouro por linfadenite granulomatosa é inconsistente com o que se observa na população. Portanto, o componente ambiental tem papel preponderante na dinâmica das infecções micobacterianas dos suínos produzidos no Brasil. / Considering four genetic distinct M. avium families within the swine population of the Southern Brazil, the virulence difference detected among them, the virulence influence on the transmission mechanisms, the current doubts concerning M. avium horizontal transmission existence and importance in swine and about its knowledge meaning in order to stablish efficient control programs, the objectives of the present study were: 1) to set in a standard mycobacterial isolation method from swine feces; 2) to characterize M. avium excretion through feces in swine infected orally; 3) to verify the existence of horizontal transmission among swine during the active elimination phase, by experiments involving oral infection and exposure of contacting animals; 4) to study, through mathematical modelling, M. avium infection dynamics in a swine population. These are the attained results for each of the items: 1) there was a significant difference (p<0.05) between the mycobacterial recovery protocols from swine feces and the acid method with suspension in amphotericin solution and inoculation in Lowenstein-Jensen media with antibiotics presented the greatest recovery percentage (87%); 2) two fecal elimination periods of M. avium in swine feces were observed: an initial one, relative to the residual elimination of the inoculum, within days 1 and 4, and a second one, starting at day 18 and ending at day 62 post inoculation - the last one results from a supposed lesion opened to the intestinal lumen. 3) Five out of seven contacting animals were infected with M. avium; 4) The mathematical simulation of the disease, considering the horizontal transmission as the major mechanism of occurrence of condemnation at slaughterhouses due to granulomatous lymphadenitis is not consistent with what is observed in the population. Therefore, the environmental component plays a preponderant role in the mycobacterial infections dynamics of swine raised in Brazil.