Doenças desencadeadas ou agravadas pela contaminação ambiental resultante dos poluentes atmosféricos vêm se tornando cada vez mais preocupantes, entre as quais se destacam as doenças respiratórias e cardiovasculares. Vários estudos têm mostrado uma associação entre poluição atmosférica e o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, especialmente devido ao material particulado no ar. Este material, por sua vez, possui diversas substâncias em sua composição química, dentre eles os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPAs), os quais têm sido fortemente associados com o processo inflamatório em estudos in vitro. O benzo[a]pireno (BaP) é um dos HPAs mais importantes, sendo que seu metabólito mais utilizado como biomarcador de exposição é o 1-hidroxipireno (1-HP) urinário. Considerando as doenças cardiovasculares, o infarto agudo do miocárdio (IAM) é um dos desfechos clínicos mais relevantes pela sua alta morbidade e mortalidade. Sabe-se que, além dos efeitos da poluição atmosférica, outros fatores são considerados determinantes no desenvolvimento de doenças cardiovasculares, como o tabagismo, sedentarismo, dislipidemias, histórico familiar, entre outros. Neste contexto, o presente trabalho avaliou a possível associação entre exposição ambiental ao benzo[a]pireno, inflamação e biomarcadores do estresse oxidativo em pacientes com IAM. Fizeram parte deste estudo indivíduos diagnosticados com IAM (N=58) e indivíduos não infartados controles (N=41), sendo cada grupo dividido em fumantes e não fumantes. A concentração urinária de 1-HP foi quantificada por CLAE e os resultados corrigidos pela excreção urinária de creatinina. Análises laboratoriais de rotina como exames hematológicos, bioquímicos, bem como biomarcadores inflamatórios (PCRus) foram quantificados, além de biomarcadores do estresse oxidativo (MDA, SOD, δ-ALA-D, CAT, GPx), antioxidantes não-enzimáticos exógenos (β-caroteno, licopeno, vitamina E e retinol) e carboxihemoglobina (COHb), todos em amostras sangüíneas. Os resultados demonstram aumentos significativos dos níveis de 1-HP urinário, PCRus, MDA e das atividades das enzimas CAT e GPx em pacientes pós-infarto (fumantes e não fumantes) e ainda uma inibição da δ-ALA-D somente no grupo pós-infarto não fumantes, comparados aos grupos controles. Além disso, uma diminuição na atividade enzimática de SOD e dos níveis de β-caroteno foram encontrados nos dois grupos pós-infarto comparados aos grupos controles. Os níveis de COHb não apresentaram alterações significativas nos grupos estudados, exceto para os fumantes, independente do infarto. Correlações positivas de MDA (r=0,326, p=0,01) e CAT (r=0,474, p=0,001) com os níveis urinários de 1-HP foram encontradas. Por outro lado, δ-ALA-D (r=-0,353, p=0,01) e β-caroteno (r=-0,309, p=0,05) foram negativamente correlacionados com a excreção urinária de 1-HP; as correlações foram obtidas somente para os grupos não-fumantes. Os resultados indicam que os indivíduos com IAM apresentam maiores níveis do biomarcador inflamatório PCRus, além de alterações em vários biomarcadores de dano oxidativo em conjunto com um aumento da excreção urinária de 1-HP. Desta forma, estes resultados sugerem que, para uma melhor compreensão da exposição ao benzo[a]pireno e eventos cardiovasculares, o tabagismo deve ser excluído. Ainda, os resultados demonstram que o BaP tende a aumentar a peroxidação lipídica, apesar de aumentar a atividade da catalase. Além disso, o BaP demonstrou inibir a enzima δ-ALA-D e atuar na depleção de β-caroteno. Desta forma, sugere-se que o BaP induz o estresse oxidativo e que este aumento, isoladamente e/ou em conjunto com o metabólitos ativos do benzo[a]pireno, podem contribuir para o desfecho clínico do infarto agudo do miocárdio em indivíduos não-fumantes. / Diseases caused or aggravated by environmental pollutants are becoming increasingly worrisome, especially respiratory and cardiovascular diseases. Several studies have shown an association between air pollution and the development of cardiovascular diseases, considering the existence of particulate matter in the air pollution. Particulate matter presents various substances in its chemical composition, e.g. polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), which have been strongly associated with the inflammatory process in in vitro studies. Benzo[a]pyrene (BaP) is one of the most important PAHs, whose most commonly utilized biomarker of exposure is the urinary metabolite 1-hydroxypyrene (1-HP). Regarding cardiovascular diseases, acute myocardial infarction (AMI) is clinically relevant due to its high morbidity and mortality. In addition to air pollution effects, several other factors are determinant in the development of cardiovascular diseases, for instance, smoking, sedentary lifestyle, dyslipidemia, family history, etc. In this context, the present study evaluated the possible association of environmental exposure to BaP, inflammation and oxidative stress biomarkers in AMI patients. Patients diagnosed with AMI (N=58) and controls (N=41) were enrolled in this study and divided into smokers and non smokers. The urinary excretion of 1-hydroxypyrene (1-HP) was analyzed by HPLC and results were corrected by urinary creatinine values. Hematological and biochemical parameters, inflammatory (hsCRP) and oxidative stress (MDA, SOD, δ-ALA-D, CAT, GPx) biomarkers, exogenous non-enzymatic antioxidants (β-carotene, lycopene, vitamin E e retinol) and carboxyhemoglobin (COHb) were determined in blood samples. We report increases in 1-HP urinary excretion, hsCRP and MDA levels, in CAT and GPx enzymatic activities in post-infarction patients (smokers and non smokers) and also an inhibition of δ-ALA-D activity only in the post-infarction non smoker group, compared to the control groups (p<0.05). Furthermore, decreases in SOD enzymatic activity and β-carotene levels have been found in the post-infarction groups compared to controls. COHb levels did not change significantly in both groups, except for smokers which increased independently from the infarction. MDA (r=0.326, p=0.01) and CAT (r=0.474, p=0.001) were positively correlated with the levels of urinary 1-HP. On the other hand, δ-ALA-D (r=-0.353, p=0.01) and β-carotene (r=-0.309, p=0.05) were negatively correlated with 1-HP urinary excretion; correlations were obtained only with non smoker groups. Thus these results suggest that in order to better understand the exposure to BaP and cardiovascular events, smoking must be excluded. Moreover, BaP was shown to increase lipid peroxidation despite the increase in catalase activity; BaP was also able to inhibit δ-ALA-D enzymatic activity and deplete β-carotene levels. Therefore, our findings suggest that BaP increases oxidative stress by itself or in conjunction with its active metabolites, which may contribute to the clinical outcome of the AMI in non smokers.

Introdução: A Insuficiência Hepática Aguda Grave (IHAG) é uma síndrome clínica rara, caracterizada por uma disfunção grave e súbita das células do fígado. A tioacetamida (TAA) é uma hepatotoxina, cuja administração em ratos causa a morte de células hepáticas por necrose centro lobular e promove o aumento da formação de espécies reativas de oxigênio (ERO). A glutamina é um aminoácido precursor para a síntese de glutationa. Objetivo: Avaliar o efeito antioxidante da glutamina em modelo experimental IHAG induzida por TAA em ratos. Métodos: Foram utilizados ratos machos Wistar, divididos em 4 grupos por tempo de avaliação: controle, glutamina (25 mg/kg), tioacetamida (400 mg/kg) e animais que receberam tioacetamida e glutamina. Os animais foram avaliados em 24, 36 e 48 horas. Foi coletado sangue para análises de AST, ALT, FA, BT e CRE e amostras de fígado para avaliar a lipoperoxidação (TBARS), a atividade das enzimas antioxidantes (SOD, GPx, CAT e GST), avaliação histológica e análise imuno-histoquímica de NF-kB, TNF-a e iNOS. Resultados: Os níveis de TBARS e a atividade das enzimas antioxidantes SOD e GST mostraram-se significativamente diminuídos nos animais dos grupos tratados com glutamina quando comparados com os animais dos grupos TAA. A atividade da CAT mostrou-se aumentada nos animais que receberam a glutamina em comparação aos animais dos grupos TAA. A atividade da GPx diminuiu significativamente nos grupos tratados com glutamina quando avaliada em 36 e 48 horas quando comparada com os animais dos grupos TAA, nestes tempos. O dano tecidual e a expressão de NF-kB, TNF-a e iNOS foram significativamente menores nos animais tratados com glutamina. Conclusão: A tioacetamida causa alterações em alguns parâmetros bioquímicos, histológicos e no processo inflamatório, por sua vez a glutamina exerce ação protetora ao fígado dos danos gerados pela tioacetamida no modelo de IHAG. / Introduction: Severe acute liver failure (SALF) is a rare clinical syndrome characterized by severe and sudden dysfunction of liver cells. The administration of the hepatotoxin thioacetamide (TAA) in rats causes the death of liver cells by necrosis and lobular center promotes increased formation of reactive oxygen species (ROS). Glutamine is a precursor for the synthesis of glutathione amino acid. Objective: To evaluate the antioxidant effect of glutamine in IHAG experimental model in rats induced by TAA. Methods: Male Wistar rats were divided into 4 groups by evaluation period: control, glutamine (25 mg / kg), thioacetamide (400 mg / kg) and animals that received thioacetamide and glutamine. Animals were evaluated at 24, 36 and 48 hours. Blood was collected for analysis of AST, ALT, ALP, BT and CRE and liver samples to assess lipid peroxidation (TBARS), the activity of antioxidant enzymes (SOD, GPx, CAT and GST), histological and immunohistochemical analysis NF-kB, iNOS and TNF-a. Results: The levels of TBARS and the activity of antioxidant enzymes SOD and GST were significantly decreased in animals in groups treated with glutamine compared with those for groups TAA. CAT activity was shown to be increased in animals receiving glutamine compared to groups TAA. The GPx activity decreased significantly in the groups treated with glutamine when evaluated at 36 and 48 hours compared with those for groups TAA in these times. The tissue damage and the expression of NF-kB, iNOS and TNF-a were significantly lower in animals treated with glutamine. Conclusion: The thioacetamide causes changes in some biochemical, and histological parameters in the inflammatory process, in turn glutamine exerts protective of the liver damage caused by thioacetamide in IHAG model action.

A utilização de fatores hepatotróficos (FH) tem trazido importantes avanços no tratamento de algumas doenças hepáticas. A avaliação dos efeitos dessas substâncias pode ser feita com o uso de modelos in vivo, como a regeneração hepática após a hepatectomia parcial ou in vitro, como a cultura de hepatócitos, células estreladas ou outros tipos celulares do fígado. O modelo de cultura demonstra ser útil por possibilitar a análise individualizada de determinadas substâncias ou soluções diretamente nas células-alvo, facilitando o delineamento de seu mecanismo de ação. Dessa forma, o presente trabalho estudou in vitro os efeitos da administração de fatores hepatotróficos (FH) em hepatócitos isolados de fígados de ratos, avaliando seu metabolismo e proliferação celular. Trinta ratos Wistar fêmeas foram utilizados, o fígado retirado e, por digestão enzimática in situ, suas células foram dissociadas e os hepatócitos separados em gradiente de Percoll 45%; cultivados em meio DMEM/F12, tratadas com diferentes concentrações dos FH (1X, 5X e 10X) e analisadas em intervalos de 24, 48 e 72 horas. A viabilidade e a proliferação celular foram avaliadas pelo método colorimétrico MTT, a toxicidade pelo iodeto de propídeo, o potencial elétrico da membrana mitocondrial pela Rodamina 123 e a expressão da citoqueratina 8, 18 e desmina como marcadores do citoesqueleto. O metabolismo hepático foi avaliado pela depuração do verde de indocianina (VIC), pela quantificação de colágeno tipo I e pela formação de radicais lipídicos poliinsaturados peroxidados. A técnica utilizada para a obtenção de hepatócitos mostrou-se eficaz com viabilidade superior a 90%, sem apresentar toxicidade, com manutenção do potencial mitocondrial e com marcação positiva para citoqueratinas 8, 18 e desmina. A adição dos FH aumentou a proliferação dos hepatócitos nos três períodos analisados em relação ao grupo controle. Os FH não demonstraram toxicidade em cultura primária de hepatócitos em nenhuma das concentrações avaliadas ao longo de todos os períodos experimentais. A adição dos FH na concentração de 10X evitou a formação de radicais livres, protegendo os hepatócitos da lipoperoxidação. Por outro lado, a avaliação funcional das culturas primárias pelo teste VIC mostrou-se eficaz na determinação do metabolismo dos hepatócitos, como a manutenção dos níveis das transaminases e amilase. Os hepatócitos mantidos em cultura primária após a adição dos FH em todos os períodos analisados aumentaram a produção de colágeno, e também foram capazes de modificar a distribuição da população de células nas fases quiescentes, aumentando sua capacidade de síntese. A adição dos FH nas concentrações estudadas nas culturas de hepatócitos mostrou-se eficaz na manutenção dessas células, mantendo-se funcionalmente ativos, com a expressão dos marcadores de seu metabolismo e diferenciação. / The use of hepatrotophic hic factors (HF) has provided important advances in the treatment of several hepatic disorders. The evaluation of this treatment may be carried out by in vivo models, as experiments on hepatic regeneration after partial hepatectomy; or in vitro models as culture of hepatocytes, stellate cells or any other hepatic cell. This last model allows an individual analysis of the studied substances on their target cells, providing the possibility of further investigation on the mechanisms involved. Therefore, the present study evaluated the in vitro effects of the hepatotrophic factors administration on the metabolism and proliferation of cultured hepatocytes from normal rat liver. Liver from 30 Wistar rats were used, and after in situ enzimatic dissociation, hepatocytes were collected and separated by 45% Percoll density gradient, cultivated in DMEN/F12 media supplemented with different HF concentrations (1×, 5× and 10×) and finally analyzed at 24, 48 and 72hs intervals. Cell viability and proliferation were assessed by MTT colorimetric assay, cell toxicity by propidium iodide, mitochondrial membrane electrical potential by 123 rodamine test and cytokeratin 8, 18 and desmin as cytoskeleton markers. Hepatic metabolism was evaluated by infusion of indocianine green (ICG), by type I collagen quantification and by peroxided polyunsaturated lipid radicals production. The techniques used in order to collect hepatocytes proved to be efficient, with a viability higher than 90%, no toxicity, and the maintenance of the mitochondrial membrane potential and positive labeling for cytokeratins (CK) 8, 18 and desmin. The HF addition increased the proliferation of hepatocytes in the three periods analyzed, when compared to the control group. The HF did not show any toxicity in primary hepatocytes culture regardless of the concentration evaluated along the experimental periods. The HF addition impaired the production of free radicals, protecting the hepatocytes from the lipid peroxidation. On the other hand, the functional evaluation of primary hepatocytes cultures using the ICG test proved to be efficient in the determination of the hepatocytes metabolism, as the maintenance of the transaminase and amylase levels. The hepatocytes kept in primary culture after HF addition in all the analyzed periods increased the collagen production and were also able to shift the distribution of quiescent cells population of, thus increasing their synthesis capacity. The HF addition in the studied concentrations in hepatocytes cultures proved to be efficient in the maintenance of these cells, that remain functionally active and expressing their metabolism and differentiation characteristic markers.

Este trabalho centrou-se no desenvolvimento tecnológico e na caracterização de nanopartículas poliméricas (nanocápsulas ou nanoesferas) contendo melatonina, empregando diferentes composições, métodos de preparação e concentrações de melatonina. De uma maneira geral, as diferentes suspensões nanoparticuladas foram caracterizadas segundo a determinação dos teores totais de melatonina, a determinação das taxas de associação da melatonina aos nanocarreadores, a análise morfológica, a determinação dos diâmetros médios de partículas e polidispersões, além da determinação dos valores de potenciais zeta. As suspensões de nanocápsulas ou de nanoesferas foram preparadas pelos métodos de deposição interfacial ou de nanoprecipitação, respectivamente. Foram avaliadas as influências do tipo de polímero [Eudragit® S100, Eudragit® RS100, poli(ε-caprolactona) ou poli(lactideo)], de óleo (triglicerídeos dos ácidos cáprico e caprílico, óleo mineral ou Eutanol G®) e de tensoativos (polissorbato 80, poloxamer 188, monooleato de sorbitano, monoestearato de sorbitano ou lecitina) sobre as características físico-químicas das suspensões. Os resultados demonstraram que as nanopartículas apresentaram diâmetros inferiores a 350 nm, encapsulação parcial da melatonina e morfologia esférica. As suspensões de nanoesferas apresentaram eficiências de encapsulação similares, mas diâmetros inferiores às respectivas nanocápsulas. O tipo de polímero empregado influenciou nas taxas de associação da melatonina. De acordo com a maior eficiência de encapsulação (56 %), nanocápsulas preparadas com Eudragit S100® foram selecionadas para secagem por aspersão, empregando dióxido de silício coloidal (3 % m/V). As micropartículas nanorrevestidas obtidas apresentaram eficiência de encapsulação de 93 % e foram capazes de controlar a velocidade de liberação da melatonina, comparativamente ao fármaco puro. O estudo de estabilidade das suspensões de nanocápsulas, comparativamente à nanoemulsão e à nanodispersão dos tensoativos, mostrou que a composição dos sistemas e as condições de armazenamento influenciaram a estabilidade físico-química das formulações. Um delineamento fatorial 23 foi também realizado objetivando-se a comparação das características físicoquímicas de nanocápsulas de Eudragit RS100® contendo melatonina obtidas através de deposição interfacial ou de emulsificação-difusão. As taxas de associação da melatonina não foram influenciadas pela composição das formulações e nem pelo método de preparação empregado. Por outro lado, os diâmetros, as polidispersões, os potenciais zeta, os valores de pH e a estabilidade físico-química foram influenciados pelo método de preparação e/ou pela composição dos sistemas. As propriedades antioxidantes da melatonina associada a nanopartículas foram também avaliadas. Desta forma, experimentos in vitro de lipoperoxidação de microssomas hepáticos e de lipossomas de fosfatidilcolina, induzida pelo radical ascorbil, foram realizados. Nanocápsulas ou nanoesferas preparadas com Eudragit S100® foram selecionadas para o estudo, com base na maior eficiência de associação do fármaco. Nanoemulsão também foi testada para verificar a influência da presença do polímero. A presença da melatonina foi capaz de proteger os lipídios em comparação aos controles, com influência da formulação, da dose de melatonina e do modelo de membrana empregado. Apenas os nanocarreadores poliméricos (nanocápsulas ou nanoesferas revestidas com polissorbato 80) contendo melatonina foram capazes de aumentar significativamente a atividade antioxidante deste fármaco nos dois modelos de membrana empregados. Finalmente, nanocápsulas de Eudragit S100® revestidas com polissorbato 80 foram administradas, intraperitonealmente em camundongos sadios, e os efeitos antioxidantes agudos da melatonina in vivo foram avaliados no cérebro (córtex frontal e hipocampo) e no fígado. Os resultados demonstraram que as nanocápsulas contendo melatonina foram capazes de reduzir significativamente a lipoperoxidação no córtex, no hipocampo e no fígado, ao passo que a solução do fármaco não exerceu efeito significativo. O conjunto dos resultados demonstrou a viabilidade tecnológica da preparação de sistemas poliméricos nanoparticulados e microparticulados contendo melatonina, na forma de suspensão ou de pós, com potencial aplicação tanto no aumento da atividade antioxidante quanto no controle da liberação deste fármaco. / This work has been based on the development and characterization of the melatoninloaded polymeric nanoparticles (nanocapsules or nanospheres) employing different system compositions, methods of preparation and melatonin concentrations. In general, the different nanoparticle suspensions were characterized in terms of melatonin content and its association within the particles, morphology, mean size and polydispersity of the particles, as well as the zeta potentials. The nanocapsule or nanosphere suspensions were prepared by interfacial deposition or nanoprecipitation methods, respectively. The influences of the type of the polymer [Eudragit® S100, Eudragit® RS100, poly(ε-caprolactone) or poly(lactide)], of the oil nature (caprylic/capric triglyceride, mineral oil or Eutanol G®) and of the type of surfactants (polysorbate 80, poloxamer 188, sorbitan monooleate, sorbitan monostearate or lecithin) on the physicochemical characteristics of suspensions were evaluated. The results demonstrated that the nanoparticles presented mean size lower than 350 nm, partial encapsulation of melatonin and they were spherically shape. The nanosphere suspensions presented similar encapsulation efficiencies to nanocapsules, however, the former presented a lower mean size of particles. The type of polymer used in the formulations influenced the encapsulation efficiencies. The nanocapsules prepared with Eudragit S100® were selected to be spray-dried, using colloidal silicon dioxide (3 % w/v), due to the highest encapsulation efficiency (56 %). The nanoparticle-coated microparticles presented the encapsulation efficiency of 93 % and they controlled the release rate of melatonin when compared to the pure drug. The physicochemical stability evaluation of the melatonin-loaded nanocapsule suspensions compared to the nanoemulsion or the nanodispersion of surfactants showed that the composition of the melatonin-loaded system and the storage conditions influenced the physicochemical stability of the formulations. Melatonin-loaded Eudragit RS100®-nanocapsule suspensions prepared by interfacial deposition or by emulsification-diffusion techniques were also compared in terms of physicochemical characteristics using a 23 fatorial-design. The formulation composition or the preparation methods did not influence the encapsulation efficiencies. However, the mean size, polydispersity, zeta potential, pH and physicochemical stability were influenced by the formulation composition and/or by the preparation methods. The antioxidant properties of the melatonin-loaded nanoparticle suspensions were also evaluated. Hence, phosphatidylcoline liposomes or liver microsomes were used as model of the lipid membrane and in vitro lipid peroxidation was induced by free radical ascorbyl. The melatonin-loaded Eudragit S100® nanoparticles (nanocapsules and nanospheres) were selected to this study based on the highest encapsulation efficiencies. The nanoemulsion was also evaluated for studying the influence of the presence of the polymer The results demonstrated that the lipids were protected against peroxidation due to the presence of the melatonin, and this effect depended on the type of formulation, drug concentration and on the type of the membrane model. Only the melatonin-loaded polymeric nanocarriers (polysorbate 80-coated nanocapsules or nanospheres) were able to improve the antioxidant action of melatonin in both membrane model. Finally, the in vivo acute antioxidant capacities of melatonin-loaded polysorbate 80-coated Eudragit S100® nanocapsules in the brain (frontal cortex and hippocampus) and in the liver were compared to the effect of the drug solution, after 1 h of intraperitoneal administration in mice. It was verified that the melatonin-loaded nanocapsules significantly decreased the lipid peroxidation in the cortex, in the hippocampus and in the liver. On the other hand, the melatonin solution did not significantly decrease the lipid peroxidation. Briefly, the results demonstrated the technological viability of the preparation of melatonin-loaded polymeric nanoparticulated and microparticulated systems in the form of suspension or powder. These polymeric particulated systems presented potential applications in both to improve the antioxidant activity and to control the release profile of melatonin.

Introdução: A Insuficiência Hepática Aguda Grave (IHAG) é uma síndrome clínica rara, caracterizada por uma disfunção grave e súbita das células do fígado. A tioacetamida (TAA) é uma hepatotoxina, cuja administração em ratos causa a morte de células hepáticas por necrose centro lobular e promove o aumento da formação de espécies reativas de oxigênio (ERO). A glutamina é um aminoácido precursor para a síntese de glutationa. Objetivo: Avaliar o efeito antioxidante da glutamina em modelo experimental IHAG induzida por TAA em ratos. Métodos: Foram utilizados ratos machos Wistar, divididos em 4 grupos por tempo de avaliação: controle, glutamina (25 mg/kg), tioacetamida (400 mg/kg) e animais que receberam tioacetamida e glutamina. Os animais foram avaliados em 24, 36 e 48 horas. Foi coletado sangue para análises de AST, ALT, FA, BT e CRE e amostras de fígado para avaliar a lipoperoxidação (TBARS), a atividade das enzimas antioxidantes (SOD, GPx, CAT e GST), avaliação histológica e análise imuno-histoquímica de NF-kB, TNF-a e iNOS. Resultados: Os níveis de TBARS e a atividade das enzimas antioxidantes SOD e GST mostraram-se significativamente diminuídos nos animais dos grupos tratados com glutamina quando comparados com os animais dos grupos TAA. A atividade da CAT mostrou-se aumentada nos animais que receberam a glutamina em comparação aos animais dos grupos TAA. A atividade da GPx diminuiu significativamente nos grupos tratados com glutamina quando avaliada em 36 e 48 horas quando comparada com os animais dos grupos TAA, nestes tempos. O dano tecidual e a expressão de NF-kB, TNF-a e iNOS foram significativamente menores nos animais tratados com glutamina. Conclusão: A tioacetamida causa alterações em alguns parâmetros bioquímicos, histológicos e no processo inflamatório, por sua vez a glutamina exerce ação protetora ao fígado dos danos gerados pela tioacetamida no modelo de IHAG. / Introduction: Severe acute liver failure (SALF) is a rare clinical syndrome characterized by severe and sudden dysfunction of liver cells. The administration of the hepatotoxin thioacetamide (TAA) in rats causes the death of liver cells by necrosis and lobular center promotes increased formation of reactive oxygen species (ROS). Glutamine is a precursor for the synthesis of glutathione amino acid. Objective: To evaluate the antioxidant effect of glutamine in IHAG experimental model in rats induced by TAA. Methods: Male Wistar rats were divided into 4 groups by evaluation period: control, glutamine (25 mg / kg), thioacetamide (400 mg / kg) and animals that received thioacetamide and glutamine. Animals were evaluated at 24, 36 and 48 hours. Blood was collected for analysis of AST, ALT, ALP, BT and CRE and liver samples to assess lipid peroxidation (TBARS), the activity of antioxidant enzymes (SOD, GPx, CAT and GST), histological and immunohistochemical analysis NF-kB, iNOS and TNF-a. Results: The levels of TBARS and the activity of antioxidant enzymes SOD and GST were significantly decreased in animals in groups treated with glutamine compared with those for groups TAA. CAT activity was shown to be increased in animals receiving glutamine compared to groups TAA. The GPx activity decreased significantly in the groups treated with glutamine when evaluated at 36 and 48 hours compared with those for groups TAA in these times. The tissue damage and the expression of NF-kB, iNOS and TNF-a were significantly lower in animals treated with glutamine. Conclusion: The thioacetamide causes changes in some biochemical, and histological parameters in the inflammatory process, in turn glutamine exerts protective of the liver damage caused by thioacetamide in IHAG model action.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-25T11:36:05Z No. of bitstreams: 1 Lucia Cristina Pereira Arruda.pdf: 816795 bytes, checksum: 9fa61d0ae8d88b3e46fe1ef1a41a264d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T11:36:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucia Cristina Pereira Arruda.pdf: 816795 bytes, checksum: 9fa61d0ae8d88b3e46fe1ef1a41a264d (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / With the aim of identify the best method to assess lipid peroxidation in goat and sheep sperm, semen samples were diluted in skimmed milk (Glycerol 7%) and Tris-egg yolk (Glycerol 5%) extenders, respectively, and frozen (-196 °C). After thawing (37°C/30s), samples were analyzed to lipid peroxidation by spectrophotometry and high performance liquid chromatography – DAD (TBARS method) and flow cytometry (C11-BODIPY581/591). It was observed that peroxidation levels obtained by spectrophotometry were significantly higher than those found by HPLC method. C11-BODIPY581/591 complemented the data obtained by TBARS (HLPC) method, helping to better understand the results and providing an overview of damaged caused to cells. In conclusion, the dosage method of TBARS by HPLC and C11-BODIPY581 are more appropriated to assess lipid peroxidation in goat and sheep sperm, and it can be used with success together or separated,. After determine the best method to assess plasma membrane lipid peroxidation of goat and sheep sperm cryopreserved with Trolox, semen samples were diluted in skimmed milk (goat) or tris-egg yolk (sheep) extenders, without antioxidants (control group) or with Trolox at 20 μM or 40 μM/mL. After thawing at 37oC for 30 seconds, samples were submitted to assessment of lipid peroxidation by high performance liquid chromatography (HPLC) and flow cytometry (C11-BODIPY581/591), as well as plasma membrane integrity, acrosomal integrity and sperm kinematics. Semen extenders and fresh semen samples were also assessed by HPLC. No significant difference (P>0.05) was observed among experimental groups of both species to sperm kinematics, plasma membrane and acrosomal integrity. Significant difference also was not observed (P>0.05) among treatment groups to lipid peroxidation reductionIn conclusion, the cryopreservation process did not trigger lipid peroxidation on goat and sheep sperm plasma membrane, independent of Trolox addiction (20 e 40 μM). / Objetivando identificar o melhor método para avaliar a peroxidação lipídica em espermatozoides de caprinos e ovinos, amostras de sêmen foram diluídas em leite desnatado (Glicerol 7%) e Tris-gema de ovo (Glicerol 5%), respectivamente, e congeladas (-196 °C). Após descongelação (37 °C/30s), as amostras foram submetidas à avaliação da peroxidação lipídica por espectrofotometria e cromatografia líquida de alta performance - DAD (método de TBARS) e citometria de fluxo (C11-BODIPY581/591). Observou-se que as concentrações de malonaldeído obtidas por espectrofotometria foram significativamente maiores que as encontradas pelo método de HPLC. O C11-BODIPY581/591 complementou os dados obtidos pelo método do TBARS (HPLC), auxiliando na melhor compreensão dos resultados, evidenciando danos ocorridos às células. Concluindo-se que o método de dosagem de TBARS pelo HPLC e C11-BODIPY581/591 são os mais indicados para avaliação da peroxidação lipídica em espermatozoides de caprinos e ovinos podendo ser utilizados com sucesso juntas ou isoladamente. Determinados os melhores métodos, avaliou-se a ocorrência de peroxidação lipídica da membrana plasmática de espermatozoides caprinos e ovinos criopreservados com diluidor suplementado com Trolox, onde amostras de sêmen foram diluídas em leite desnatado (caprino) ou tris-gema de ovo (ovinos), sem antioxidante (grupo controle) ou adicionadas de Trolox nas concentrações de 20μM ou 40 μM /mL (tratamentos). Após descongelação a 37 °C/30s, as amostras foram submetidas à avaliação da peroxidação lipídica por cromatografia líquida de alta performance (HPLC-DAD) e citometria de fluxo (C11-BODIPY581/591). Analisou-se ainda a integridade de membrana plasmática, acrossomal e cinética espermática. Amostras dos diluidores e do sêmen fresco foram também avaliadas por HPLC. Não foi constatada diferença significativa (P>0,05) entre os grupos experimentais de ambas as espécies para os parâmetros de cinética espermática e integridade de membrana plasmática e acrossomal. Também não foi observada diferença significativa (P>0,05) entre os tratamentos para redução da peroxidação lipídica. Conclui-se que o processo de criopreservação não desencadeia a peroxidação lipídica da membrana plasmática de espermatozoides caprinos e ovinos independente da adição de Trolox (20 e 40 μM).

Orientador: Marcelo Ganzarolli de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-09T16:40:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simplicio_FernandaIbanez_D.pdf: 1516606 bytes, checksum: 8ee850e83207e6e98a9aec046efdba5d (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Óxido nítrico (¿NO) produzido endogenamente em humanos é considerado um antioxidante efetivo na inibição da peroxidação lipídica. Todavia, no plasma e em células mamíferas, ¿NO circula principalmente como S-nitrosotióis primários (RSNOs). Neste trabalho, a peroxidação in vitro de comicelas do ácido linoleico-SDS (AL-SDS) e da lipoproteína de baixa densidade (LDL) catalisada por lipoxigenase de soja (SLO), íons Fe (II) e Cu (II), foram monitoradas na presença e na ausência de três RSNOs primários: S-nitrosocisteína (CISNO), S-nitroso-N-acetilcisteína (SNAC) e S-nitrosoglutationa (GSNO) a 37ºC. Medidas cinéticas e espectrofotométricas baseadas na formação de duplas conjugadas, adutos fluorescentes oxidados AL-lisina e na detecção eletroquímica de ¿NO livre, foram utilizadas para mostrar que RSNOs são antioxidantes mais potentes que seus tióis livres correspondentes (RSHs) em codições equimolar. Esses resultados são consistentes com o bloqueio da peroxidação do AL-SDS e LDL por RSNOs através da inativação dos radicais peroxil/alcoxil (LOO¿/LO¿) e pela transnitrosação com hidroperóxidos de AL pré-formado, levando a produtos nitrogenados de AL oxidado, que foram mostrados pela liberação de ¿NO livre por redução com ácido ascórbico. A ação antioxidante de SNAC e GSNO contra a peroxidação da LDL é refletida na quantidade reduzida de ¿NO livre detectado pela decomposição de RSNOs catalisados por Cu (II) na presença da LDL. Esses resultados indicam que RSNOs primários endógenos podem participar no bloqueio da peroxidação lipídica in vivo, não somente através da inativação primária dos radicais alcoxil/peroxil mas também através da inativação dos hidroperóxidos lipídicos pré-formados. A administração oral de SNAC previniu o princípio e progressão da doença não alcoólica do fígado gorduroso (NAFLD) em ratos Wistar alimentados com dieta deficiente em colina e reverteu a NAFLD em diferentes dietas com camundongos ob/ob. Esses efeitos foram correlacionados positivamente com um decréscimo na concentração de hidroperóxidos lipídicos no homogenatos de fígado e com habilidade dos RSNOs em previnir a peroxidação lipídica do ácido linoleico e da LDL in vitro / Abstract: Nitric oxide (¿NO) produced endogenously in humans is considered an effective chain-breaking antioxidant in the inhibition of lipid peroxidation. However, in the plasma and cells of mammals, ¿NO circulates mainly as primary S-nitrosothiols (RSNOs). In this work, the in vitro peroxidation of linoleic acid-SDS comicelles (LA-SDS) and of low density lipoprotein (LDL) catalyzed by soybean lipoxygenase (SLO), Fe (II) and Cu (II) ions, were monitored in the presence and absence of three primary RSNOs: S-nitrosocysteine (CySNO), S-nitroso-N-acetylcysteyne (SNAC) and S-nitrosoglutathione (GSNO) at 37 ºC. Kinetic and spectrophotometric measurements based on the formation of conjugated double bonds, fluorescent oxidized LA-lysine adducts and the electrochemical detection of free NO, were used to show that RSNOs are more potent antioxidants than their corresponding free thiols (RSHs) in equimolar conditions. These results are consistent with the blockage of LA-SDS and LDL peroxidation by RSNOs through the inactivation of peroxyl/alkoxyl (LOO¿/LO¿) radicals and through the transnitrosation with preformed LA hydroperoxides, leading to nitrogen-containing products of oxidized LA, which were shown to release free ¿NO upon reduction with ascorbic acid. The antioxidant actions of SNAC and GSNO against LDL peroxidation are reflected in a reduced amount of free NO detected upon Cu (II)-catalyzed decomposition of RSNOs in the presence of LDL. These results indicate that endogenous primary RSNOs may play a major role in blocking lipid peroxidation in vivo, not only through the primary inactivation of alkoxyl/peroxyl radicals but also through the inactivation of preformed lipid hydroperoxides. Oral administration of SNAC prevented the onset and progression of nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) in Wistar rats fed a choline-deficient diet and reversed NAFDL induced by different diets in ob/ob mice. These effects were positively correlated with a decrease in the concentration of lipid hydroperoxydes in liver homogenate and with the ability of RSNOs to prevent lipid peroxidation of linoleic acid and LDL in vitro / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Orientador: Eros Antonio de Almeida / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T18:51:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taraborelli_Simone_M.pdf: 7158008 bytes, checksum: d0f4a8ee6fd688737f4070fd4a3082d6 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Objetivo: Este estudo teve por objetivo avaliar a ação da pravastatina em ratos infartados normocolesterolêmicos em relação aos lípides plasmáticos, colesterol e peroxidação lipídica tecidual e função endotelial. Métodos: Foram utilizados cinquenta ratos wistar machos com três meses de idade e pesando entre 300 a 400 gramas, divididos em cinco grupos (N=10) e divididos nos seguintes grupos: grupo ratos controle (G1), grupo ratos sham (G2), grupo ratos com infarto experimental do miocárdio (G3), grupo infarto experimental do miocárdio e pravastatina sete dias após o infarto (G4) e grupo infarto experimental do miocárdio e pravastatina sete dias antes e acrescido de sete dias após infarto experimental do miocárdio (G5). A pravastatina foi administrada na dose de 7,5mg/kg/dia via gavagem. Os grupos G3, G4 e G5 foram submetidos a infarto do miocárdio por meio da ligadura da coronária descendente anterior. No final do experimento de cada grupo ocorreu a canulação da artéria carótida para verificação da pressão arterial. Os animais foram sacrificados mediante anestesia com tiopental sódico 30 mg/kg e, após, foi realizado o estudo da função endotelial, dosagem dos lípides plasmáticos, colesterol e peroxidação lipídica tecidual. Para análise dos resultados utilizou-se o teste de Man Whitney e análise de variância. Resultados: Não houve diferenças significativas entre os grupos quando observado os valores de glicose e triglicérides. O colesterol total no grupo G4 foi significantemente menor quando comparado aos demais grupos (p<0,05). Em relação a HDL - colesterol houve significância quando comparado o grupo G5 aos grupos G3 e G4. A LDL - colesterol apresentou-se significantemente menor quando comparado os grupos G4 e G5 ao grupo G3. O colesterol tecidual nos grupos G4 e G5 foi significantemente menores quando comparado ao grupo G3. A diferença significativa em relação à peroxidação lipídica ocorreu no grupo G4 quando comparado ao grupo G2. O relaxamento dependente do endotélio foi significante maior quando comparado os grupos G4 e G5 aos grupos G1, G2 e G3. Em relação à pressão arterial a significância ocorreu entre os grupos G3 e G4. Conclusão: A pravastatina, quando administrada em ratos normocolesterolêmicos com infarto do miocárdio, diminuiu o colesterol total, LDL - colesterol, colesterol tecidual, peroxidação lipídica e aumentou HDL - colesterol. Quanto à função endotelial, a pravastatina quando administrada antes, durante ou após o infarto resultou em melhora da disfunção endotelial / Abstract: Objective: To evaluate pravastatin action in the experimental myocardial infarct regarding to the endothelial function, plasmatic lipid, tissue lipidic peroxidation and cholesterol in infarcted normocholesterolemic rats. Materials and Methods: Fifty wistar rats were used divided in 5 groups (n=10): control group (G1), sham group (G2), infarct group (G3), infarct group with pravastatin seven day after the infarct (G4) and infarct group with pravastatin 7 day before and 7 day after the infarction (G5). Pravastatin was administrated 7,5mg/Kg/day via gavage. The groups G3, G4 and G5 were infarcted through the anterior descendent coronary tying. The animals were sacrificed by means of anesthesia with sodium thiopental 30mg/Kg and after this the endothelial function (Rmax), total cholesterol dosage (CT), triglycerides (TG), high density lipoprotein (HDL - c), low density lipoprotein (LDL - c), tissue lipidic peroxidation (MDA) and (Cte) cholesterol were performed. In order to do the statistical analysis the Man Whitney Test and variance analysis were used (p? 0,05 significance). Results: There was no significant difference among the groups when compared the glucose values and triglycerides. The total cholesterol G4 groups it was smaller significant when compared to the other groups (p<0, 05). In relation to HDL - c there was significance when compared the G5 group to the G3 and G4 group. LDL - c presented - if smaller significantly when compared the G4 and G5 groups to the G3 groups. The tissue cholesterol in the groups G4 and G5 there was smaller significant when compared to G3 group. The significant difference in relation to lipidic peroxidation it happened in the group G4 when compared to group G2. The dependent relaxation of the endothelium it was significant larger when compared the G4 and G5 groups to the G1, G2 and G3 groups. In relation to blood pressure the significant happened between the G3 and G4 groups. Conclusion: Pravastatin when administered in normocholesterolemic with myocardial infarct, it reduces the total cholesterol, LDL - c, tissue cholesterol, lipidic peroxidation and it increased HDL - c. As the function endothelium, the pravastatin when administered in normocholesterolemic rats with myocardial infarct, before, during or after the infarct of the myocardium it resulted in improvement of the endothelium dysfunction / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Eros Antonio de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T12:06:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ozaki_MichikoRegina_D.pdf: 2408149 bytes, checksum: 859e32381ddd8c14c86054feca0e96a2 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A regressão da aterosclerose é ainda um campo muito amplo a ser pesquisado, com mecanismos a serem desvendados, sendo o coelho um animal utilizado internacionalmente para fins de pesquisa, nesta área. Este trabalho foi realizado com objetivo de verificar a evolução e involução da aterosclerose em coelhos hipercolesterolêmicos e sua relação com a função endotelial, lípides plasmáticos, colesterol e peroxidação tecidual e quantificação de aterosclerose. Foram utilizados 30 coelhos da raça Nova Zelândia, com peso inicial de 3,0 a 3,5 kg e divididos em 6 grupos (n=5): G1 - animais não hipercolesterolêmicos; G2 - animais hipercolesterolêmicos; G3 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 4 meses de dieta não hipercolesterolêmica; G4 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 1 mês de dieta não hipercolesterolêmica e tratamento com rosuvastatina (5,0mg/animal/dia); G5 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 2 meses de dieta não hipercolesterolêmica e tratamento com rosuvastatina (5,0mg/animal/dia); G6 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 4 meses de dieta não hipercolesterolêmica e tratamento com rosuvastatina. (5,0mg/animal/dia). Sendo que os animais dos grupos G2 a G6 foram alimentados com dieta hipercolesterolêmica composta de colesterol a 0,5% e 10% de gordura de coco por um período de 4 meses. Ao final do experimento foram dosados no plasma: colesterol total, triglicérides e HDL-c. A LDL-c foi estimada através da formula de Friedwald. Em segmentos de aorta, dosou-se colesterol e MDA, assim como foi medida a função endotelial utilizando-se de curvas de concentração/efeito com acetilcolina. A quantificação de aterosclerose foi verificada macroscopicamente na aorta corada pelo sudam IV, e microscopicamente em fragmentos corados com hematoxilina-eosina e estudados por microscopia óptica. A quantificação foi realizada por software especifico. Os valores do colesterol total, LDL-c, HDL-c, triglicérides, colesterol e peroxidação teciduais, nos diferentes grupos de animais, foram examinados por teste estatístico não paramétrico de Kruskall-Walls, seguido do teste de comparação múltipla de Dunn. As curvas que expressam a função endotelial foram comparadas por analise de variância (ANOVA) para medidas repetidas. Considerando-se valores significativos "p"<0,05. Os parâmetros, tanto bioquímicos, quanto teciduais estiveram aumentados no G2 em relação ao G1. A suspensão da dieta hipercolesterolêmica não foi suficiente para retornar os parâmetros teciduais aos do grupo G1. Os grupos tratados com rosuvastatina G4, G5 e G6, tiveram os lípides plasmáticos diminuídos significativamente; porem, em relação ao colesterol e peroxidação teciduais apenas nos animais do G6 ocorreu diminuição significativa. Em relação a função endotelial, somente, os animais do grupo G6 apresentaram melhora significativa. Apenas a suspensão da dieta não foi eficiente para melhorar os valores teciduais do colesterol, peroxidação lipídica, função endotelial e involuir a aterosclerose. O tratamento prolongado com rosuvastatina alem da suspensão da dieta hipercolesterolêmica, diminuiu o colesterol e peroxidação lipídica teciduais, melhorou a função endotelial e produziu involução da aterosclerose / Abstract: Regression of atherosclerosis is still a very broad field to be searched, with mechanisms to be explored, the rabbit is an animal used internationally for research in this area. This work was carried out aiming at checking the progress and regression of atherosclerosis in hypercholesterolemic rabbits and its relation to endothelial function, lipid peroxidation and plasma and tissue. We used 30 New Zealand white rabbits initially weighing 3.0 to 3.5 kg and divided into six groups (n=5): G1: not hypercholesterolemic animals, G2: hypercholesterolemic animals, G3: hypercholesterolemic animals, followed by four months of not hypercholesterolemic diet; G4: hypercholesterolemic rats, followed by a month of not hypercholesterolemic diet and treatment with rosuvastatin (5.0mg/animal/day), G5: hypercholesterolemic rabbits, followed by two months of diet does not hypercholesterolemic and treatment with rosuvastatin (5.0mg/animal/day) G6: hypercholesterolemic animals, followed by four months of diet does not hypercholesterolemic and treatment with rosuvastatin. (5.0mg/animal/day). The animals in groups G2 to G6 were fed a hypercholesterolemic diet composed by 0.5% cholesterol and 10% coconut oil for a period of four months. At the end of the experiment were measured in plasma: total cholesterol, triglycerides and HDL-C. The LDL-C was estimated by the Friedwald formula. In aortic segments dosed 0cholesterol and MDA, as well as measured endothelial function through curves of concentration-effect with acetylcholine. Quantification of atherosclerosis in the aorta was observed macroscopically stained sudam IV, and microscopic fragments stained with hematoxylin-eosin and studied by light microscopy. Quantification was performed by specific software. The values of total cholesterol, LDL-C, HDL-C, triglycerides, cholesterol and tissue peroxidation in different groups of animals were examined by nonparametric statistical test Kruskal-Walls, followed by multiple comparison test of Dunn. The curves expressing endothelial function were compared by analysis of variance (ANOVA) for repeated measures. Considering the significant values "p"<0.05. The parameters, both biochemical and tissue were increased for G2 compared to G1. The suspension of the hypercholesterolemic diet was not enough parameters to return the tissue to the G1. The groups treated with rosuvastatin G4, G5 and G6, plasma lipids were significantly decreased, but in relation to cholesterol peroxidation and tissue in animals only significant decrease in the G6. Regarding the endothelial function, only the animals of the G6 group showed significant improvement. Only the suspension of the diet was not effective for improving the tissue values of cholesterol, lipid peroxidation, endothelial function and regress atherosclerosis. Prolonged treatment with rosuvastatin, besides the suspension of hypercholesterolemic diet decreased cholesterol and tissue lipid peroxidation, improved endothelial function and produced regression of atherosclerosis / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

>Magister Scientiae - MSc / Salt stress is a major abiotic stress that accounts for huge agricultural losses worldwide, which in turn threaten food security and sustainable agriculture. Salt triggers the excessive production of reactive oxygen species (ROS) which accumulate to levels that become toxic to plants, resulting in cell death and reduced plant growth. Part of the plant’s mechanisms to counteract ROS-induced cell death involves the scavenging ability of the antioxidant defense system to maintain redox homeostasis. Gallic acid (GA) is an antioxidant that has been shown to reduce salt-induced ROS in legume plants. However, its effects on wheat plants have not been elucidated. This study thus investigated the role of exogenous GA (250 μM) on the physiological responses and antioxidant system of wheat plants under salt stress (150 mM). In addition, this study also investigated how GA and salt stress influenced changes in the membrane proteome of wheat plants using LC-MS proteomic analysis. / 2022