Quatro potros, filhos do mesmo pai, com idade média de 18 meses e peso aproximado de 270 kg, receberam dieta composta de feno de Coast-Cross (Cynodon dactylon L. Pers.) e concentrado experimental, ao qual foram adicionados diferentes tipos de óleo vegetal (soja, canola, palma ou linhaça), para analisar o efeito sobre a aceitabilidade, digestibilidade aparente da Matéria Seca (MS), Matéria Orgânica (MO), Proteína Bruta (PB), Extrato Etéreo (EE), Fibra Solúvel em Detergente Neutro (FDN), Fibra Solúvel em Detergente Ácido (FDA), valores plasmáticos de Colesterol, VLDL, LDL, HDL e Triglicérides. Foi utilizada metodologia de coleta total de fezes e coleta de sangue na veia jugular às 7 horas, em jejum. O delineamento experimental foi em Quadrado Latino (4 animais, 4 tratamentos, 4 repetições). A inclusão dos óleos não afetou significativamente (p<0,05) a aceitabilidade e a digestibilidade da MS, MO, PB, EE, FDN e FDA. Também não foram alterados (p<0,05) os valores plasmáticos de colesterol, LDL, VLDL, HDL e triglicérides, indicando que os óleos de soja, canola, palma e linhaça podem ser igualmente utilizados na dieta de eqüinos. / Four foals, same father sons, aged 18 months and average weight 320 kg, were fed a diet composed of Coast-cross hay (Cynodon dactylon L. Pers.) and concentrate, to analyze the effect of adding different types of vegetable oil (soybean, canola, palm and linseed) on acceptability, apparent digestibility of Dry Matter (DM), Crude Original Matter (CM), Crude Protein (CP), Ethereal Extract (EE), Neutral Detergent Soluble Fiber (NDF), Acid Detergent Soluble Fiber (ADF) and on cholesterol, VLDL, LDL, HDL and triglycerides plasma levels. Total fecal output collect methodology was used. Blood samples were collected at 7:00 a.m. during ingestion and cooled until sending to the laboratory. Experimental delineation was Latin Square (4 animals, 4 repetitions, 4 treatments). The inclusion of different vegetable oils in diet did not affect (p<0,05) acceptability nor DM, CM, CP, G, NDF and ADF digestibility. Cholesterol, VLDL, LDL, HDL and triglycerides plasma levels were not affected (p<0,05).

A LDL contitui-se de uma fase lipídica, uma esfera composta principalmente de um núcleo de colesterol esterificado envolto por uma camada de fosfolipídeos. A fase lipídica junta-se uma única molécula protéica, a polipoproteina B (apo B). A LDL é removida da circulação por mediação de receptores específicos, os receptores B. E, que reconhecem não só a apo B da LDL mas também a apo E, que está presente em outras lipoproteínas. Estudou-se neste trabalho a influencia da apo B no metabolismo da LDL, através de um modelo de emulsões semelhantes à fase lipídica da LDL, constituídas de oleato de colesterol (29%), fosfatidilcolina (69%) e trioleina (2%), preparadas por sonicação, seguida de ultracentrifugação. As emulsões, com seus componentes lipídicos marcados isotopicamente, foram associadas à apo B e injetadas no rato, determinando-se sua remoção plasmática e captação pelos diversos órgãos do animal. Os resultados foram comparados com o metabolismo da emulsão sem associação da apo B a sua estrutura e com o da LDL natural. Verificou-se que a presença de apo B retardou a remoção plasmática das partículas da emulsão. Por outro lado, o oleato de colesterol da emulsão com apo B foi removido do compartimento plasmático numa taxa semelhante à da LDL natural, o que demonstra a adequação do modelo utilizado à situação fisiológica. Tanto as emulsões quanto a LDL natural foram captadas principalmente pelo fígado. Entretanto, a captação hepática da emulsão sem apo B foi maior a da emulsão com apo B e a da LDL. A incubação das emulsões com HDL do plasma de rato mostrou que a emulsão sem apo B adquiriu mais apo E que a emulsão com apo B. Portanto, essas diferenças de comportamento metabólico provavelmente se devem à maior afinidade dos receptores B, E hepáticos por partículas que contem mais apo E, em comparação às que contêm a apo B. O aumento da atividade dos receptores B, E, induzido pelo tratamento com 17 &#945;-etinil estradiol, resultou no aumento da cinética plasmática das duas emulsões. Porém, à taxa de remoção plasmática da emulsão sem apo B também foi maior no grupo tratado com o estrógeno. Esses dados indicam que as emulsões com apo B associada a sua estrutura apresentam comportamento metabólico muito semelhante ao da LDL. Portanto, o modelo das emulsões análogas à LDL parece ser um instrumento eficiente no estudo do metabolismo daquela lipoproteína. / The effects of apolipoprotein B (apo B) on the metabolism of emulsions constituted of cholesteryl oleate (29%), phosphatidycholine (69%) and triolein (2%) were studied in rats. After intra-arterial injection of the radiolabelled emulsions, plasma removal of the emulsions was reduced in presence of apo B. On the other hand, the cholesteryl ester moiety of the apob B emulsion was removed at the same rate as native LDL. Emulsions and LDL were taken up mainly by the liver 24 h after the injection. However, the hepatic uptake of the apo B emulsion was similar to LDL and lower than that of the apo B-free emulsion. These differences in metabolic behaviour were probably due to the lower hepatic B, E, receptor affinity to apo B contained in the emulsions associated to apo B and in LDL, compared to the apo B-free emulsions. The latter, as confirmed in the in vitro experiments, is capable of adsorbing more apo E, and this apolipoprotein has higher affinity for the receptor. Enhanced receptor activity induced by pre-treatment of the rats with 17 &#945;-ehymylestradiol resulted in augmented plasma removal of both emulsions but nonetheless the cholesteryl ester plasma removal of the apo B-containing particles was still lower, compared to that of the apo B-free emulsion. These data indicate that apo B-containing emulsion exhibits metabolic behaviour similar to that of LDL, and this emulsion can be an adequate tool to test LDL metabolism.

A dieta cetogênica (DC) é um tratamento não farmacológico prescrito especialmente para crianças e adolescentes com epilepsia refratária. A composição da dieta cetogênica é baseada no alto teor de gorduras, baixo teor de carboidratos e teor proteico moderado, sendo a produção de corpos cetônicos o mecanismo provável envolvido no controle das crises epilépticas. Apesar dos benefícios clínicos, a relação entre DC e o risco cardiometabólico não está bem estabelecida, especialmente sob os fatores de risco não clássicos. Objetivo: comparar os efeitos da dieta cetogênica clássica com a dieta cetogênica modificada nas subfrações de LDL e HDL, nos marcadores oxidativos, no perfil de apolipoproteinas e no perfil lipídico de crianças e adolescentes com epilepsia refratária, além do efeito clínico no controle da epilepsia. Métodos: Estudo de intervenção com recrutamento de crianças e adolescentes com epilepsia refratária de 1 a 19 anos de ambos os sexos do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da FMUSP. O grupo controle recebeu DC clássica e o grupo caso recebeu a DC modificada com redução em pelo menos 20% de ácidos graxos saturados (AGS) e redução da relação w6/w3 em pelo menos 50% em comparação a DC clássica. Para ambos os grupos foram analisados os seguintes parâmetros bioquímicos no período basal, após 3 meses e 6 meses de DC: perfil lipídico clássico, concentração de ácidos graxos não esterificados (AGNEs), substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARs), subfrações de lipoproteina de baixa densidade (LDL) e lipoproteína de alta densidade (HDL), e perfil de apolipoproteínas (APOA-I e APOB). Além da avaliação clínica, antropométrica e de consumo alimentar. Resultados: A redução de crises e dos fármacos antiepilépticos foi semelhante entre os grupos. O aumento na concentração de colesterol total (CT) e LDL foi inferior no grupo caso, a Não-HDL manteve-se significativamente menor no grupo caso em comparação ao grupo controle e a relação LDL/APOB foi superior no grupo controle após 6 meses de DC. O percentual de partículas pequenas de LDL apresentou aumento superior em 208% no grupo controle comparado ao grupo caso, e consequentemente o tamanho de LDL apresentou maior redução no grupo controle. A incidência de dislipidemia foi significativamente inferior no grupo caso considerando os pontos de corte para LDL (>=130 mg/dL) e não-HDL (>=145 mg/dL). Não houve diferença entre os grupos na concentração de ácidos graxos não esterificados (AGNES) e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARs). Conclusão: A mudança do perfil de gorduras 10 contribuiu para melhora das concentrações de marcadores de risco cardiometabólico (CT, LDL e LDL pequenas) e consequentemente, perfil mais cardioprotetor nos pacientes do grupo caso. / The ketogenic diet (KD) is a non-pharmacological treatment especially prescribed to children and adolescentes with refractory epilepsy. The composition of the ketogenic diet is based on the high fat, low carbohydrate and moderate protein. The production of ketone bodies is the probable mechanism involved in the control of epileptic seizures. Despite the clinical benefits, the relationship between KD and cardiometabolic risk is not well established, especially under non-classical risk factors. Objective: to compare the effects of the classical KD with the modified KD on the LDL and HDL subfractions, in oxidative biomarkers, in apolipoprotein profile and lipid profile of children and adolescentes with refractory epilepsy, as well as the clinical effect on control of seizure. Methods: Dietary intervention study with recruitment of children and adolescentes with refractory epilepsy aged 1 to 19 years of both sexes from the Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP. The control group received classical KD and the case group received modified KD with a reduction of at least 20% saturated fatty acids (SFA) and a reduction of the w6/w3 ratio by at least 50% compared to classic KD. For both groups, the following biochemical parameters were analyzed at baseline and after 3 and 6 months of the KD: classical lipid profile, concentration of non-esterified fatty acids (NEFAs), thiobarbituric acid reactive substances (TBARs), low density lipoprotein (LDL) and high density lipoprotein (HDL) subfractions, size LDL, and apolipoprotein profile (APOA-I and APOB). In addition to clinical, anthropometric and food consumption assessment. Results: The reduction of seizures and antiepileptic drugs was similar between the groups. The increase in total cholesterol (TC) and LDL levels was lower in the case group, non-HDL remained significantly lower in the case group compared to the control group and the LDL/APOB ratio was higher in the control group after 6 months of KD. The percentage of small LDL particles showed a 208% higher in the control group than case group. Consequently, the LDL size showed a greater reduction in the control group. The incidence of dyslipidemia was significantly lower in the case group considering cut-off points for LDL (>=130 mg/dL) and non-HDL (>=145 mg/dL). There was no difference between the groups in the NEFAs and TBARs levels. Conclusion: The change in the fatty acids profile contributed to improvement the concentrations of cardiometabolic risk markers (TC, 12 LDL and small LDL), and consequently, a more cardioprotective profile in the patients of case group.

Este trabalho apresenta o processo para obtenção de partículas de sílica amino-funcionalizadas contendo complexos de TR3+ utilizando os métodos de Stöber e por micro-ondas. Os espectros de absorção no infravermelho das partículas TR-BTC-Si preparadas pelo método de micro-ondas exibiram bandas de absorção atribuídas aos modos vibracionais dos complexos TR-BTC e da rede de sílica, indicando a incorporação destes complexos na matriz SiO2. Por outro lado, os complexos Eu-(&#946;-dicetonatos) preparados pelo método Stöber mostraram apenas as bandas atribuídas à estrutura da rede de sílica, devido à dupla camada de revestimento de sílica. As morfologias das partículas de sílica amino-funcionalizadas contendo complexos de TR3+ foram visualizadas usando a técnica MEV. As diferenças nas morfologias entre o complexo precursor e o material amino-funcionalizado pode ser atribuído a presença da sílica na superfície do material. Além do mais, o método da ninidrina indicou a presença de grupos amina (-NH2) na superfície destes materiais. Os espectros de emissão dos materiais funcionalizados com os complexos de Eu3+ e Tb3+ apresentaram as bandas de emissão da transição intraconfiguracional dos íons Eu3+ (5D0&#8594;7FJ, J = 0-6) e Tb3+ (5D4&#8594;7FJ, J = 6-0), exibindo cores características de emissão vermelha e verde, respectivamente. É observado um decréscimo nos valores dos parâmetros &#937;2 dos materiais Eu-(&#946;-dicetonato)-Si e Eu-BTC-Si comparados com os respectivos complexos, devido a diminuição da intensidade da transição 5D0&#8594;7F2, indicando um maior caráter centrossimétrico. Conseqüentemente, os íons Eu3+ nos materiais com sílica estão em um ambiente químico menos polarizável do que nos complexos, sugerindo uma menor contribuição do mecanismo de acoplamento dinâmico. Os altos valores dos &#937;4 para os sistemas com sílica Eu-(&#946-dicetonato)-Si e Eu-BTC-Si comparados com os valores de &#937;2 reflete a intensidade extremamente alta da transição 5D0&#8594;7F4 observada nos espectros de emissão. Este resultado corrobora com o maior caráter centrossimétrico e evidencia a incorporação dos complexos de Eu3+ na rede de sílica. Foi realizado um fluoroimunoensaio usando os compostos amino-funcionalizados, que mostraram uma luminescência e propriedades físico-químicas eficientes para atuarem como marcadores biológicos. O marcador óptico foi conjugado com o anticorpo anti-oxLDL, que se liga a um suporte específico com o antígeno oxLDL. Portanto, estes materiais são candidatos promissores para conjugação molecular em clínicas de diagnóstico. / This work presents the process to obtain amino-functionalized silica particles containing complexes of trivalent rare earth ions (RE3+) using Stöber and microwave methods. Infrared spectra of the TR-BTC-Si particles prepared by microwave method exhibited absorption bands assigned to the vibrational modes of the TR-BTC complexes and silica network, indicating that the complexes have been incorporated in the SiO2 matrix. However, due to double coating of the silica network, the IR spectra of the Eu-(&#946;-diketonates) complexes prepared by Stöber method showed only bands assigned to the silica structure. The morphologies of the amino-functionalized silica particles containing RE3+ complexes were examined using SEM technique. The difference in morphology between the complex precursor and amino-functionalized material can be attributed to the silica network on the material surface. Besides, the ninhydrin method confirmed the presence of amine groups (-NH2) in the functionalized materials. The emission spectra of the functionalized materials containing Eu3+ and Tb3+ complexes showed the emission bands originated from the intraconfigurational transitions of the Eu3+ (5D0&#8594;7FJ, J = 0-4) and Tb3+ (5D4&#8594;7FJ, J = 6-0), exhibiting red and green color emission, respectively. It is observed decreasing values of experimental intensity parameters (&#937;2) of the Eu-(&#946;-diketonate)-Si and Eu-BTC-Si materials when compared with the complex precursors, owing to the decreased intensity of the 5D0&#8594;7F2 transition, indicating a higher centrosymmetric character. As a result, the Eu3+ ions in silica materials are located in a chemical environment less polarizable than in the complexes, suggesting a smaller contribution of dynamic coupling mechanism. On the other hand, an abnormally high intensity of the 5D0&#8594;7F4 transition was observed, which is reflected by the high values of &#937;4 of the silica systems, Eu-(&#946;-diketonate)-Si and Eu-BTC-Si, compared with the &#937;2 ones. These spectroscopic data corroborate with a higher centrosymmetric character, indicating the incorporation of the Eu3+ complexes in the silica network. A fluoroimmunoassay was developed using the amino-functionalized compounds that exhibit efficient luminescence and physical and chemical properties suitable for optical label. The biolabel was then chemically conjugated to anti-oxLDL antibody, which is linked in a specific support with oxLDL antigen. The result showed that it is a promising candidate for molecular conjugation in clinical diagnosis.

Background: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a multi-system autoimmune disease characterised by autoantibody production and variable clinical features, ranging from mild to severe disease. Patients with SLE are at increased risk of developing accelerated atherosclerosis. Biomarkers have potential utility in SLE as markers of disease or predictors of future clinical events and mortality. Objective The aim of this thesis was to identify serological biomarkers predictive for erosive arthritis (EA), cardiovascular events (CVEs), mortality and subclinical atherosclerosis in SLE. Methods: In chapters 2 to 4, study subjects were SLE patients from Bath. Anti-cyclic citrullinated peptide antibodies (ACPA) and HLA-DR and -DQ were studied for markers of EA, and anticardiolipin (aCL) and lipoprotein profiles for markers of CVEs and mortality. In chapters 5 and 6, study subjects were women with SLE from Manchester. B-mode ultrasound scans of subjects' carotid arteries were performed at baseline and follow-up time-points to detect atherosclerotic plaque. Baseline IgG and IgM antiphospholipid (aPL) antibodies and CV risk factors were studied for markers of subclinical atherosclerosis. Clinical data collected for all studies included SLE features and auto-antibody profiles. Results: ACPA was identified as a marker of a SLE phenotype with EA - "rhupus". Patients with major erosive arthritis were HLA-DQB1*0302 carriers. Increased aCL GPL levels and total cholesterol : high density lipoprotein-C (TC : HDL-C) ratio were markers for future CVEs, and increased TC : HDL ratio, aCL GPL and lipoprotein(a) concentrations were markers for increased mortality. Lower HDL-C concentrations and anti-annexin A5 (anti-AnxA5) GPL were markers of carotid plaque progression. Conclusion: This thesis identified new markers for EA, subclinical atherosclerosis and future CVE and mortality risk in SLE. Strategies to incorporate these new CV markers into clinical CV risk assessments may assist in distinguishing the subset of SLE patients most at risk of developing accelerated atherosclerosis.

Introdução: O sobrepeso e a obesidade representam um grave problema de Saúde Pública, tendo seu desenvolvimento associado à adolescência, impacto negativo na fase adulta, sobretudo, devido suas complicações metabólicas. Considerando que o caráter crônico e inflamatório de baixa intensidade presente na obesidade estimula a geração de radicais livres, torna-se relevante avaliar a relação entre as adipocitocinas e a oxidação das lipoproteínas. Objetivos: Avaliar a possível influência da obesidade sobre a LDL(-) e adipocitocinas. Material e Métodos: Foram recrutados 156 adolescentes de ambos os sexos, com faixa etária de 10 a 19 anos e regularmente matriculados em escolas públicas da cidade de São Paulo. Os adolescentes foram distribuídos em três grupos: Eutrófico, Sobrepeso e Obeso, segundo COLE et al. (2000). Após jejum (12-15h) foi coletada uma amostra de sangue e a partir do plasma realizamos as seguintes análises: perfil lipídico, glicose e insulina (kits comerciais), LDL(-) e seus auto-anticorpos (ELISA), leptina, resistina e adiponectina (ELISA). O perfil sócio-econômico e clínico dos adolescentes foi investigado por meio de questionários estruturados. Foram coletadas informações antropométricas (peso, altura, circunferência da cintura, porcentagem de gordura) e dados de consumo alimentar (3 x R24h). O consumo alimentar foi estimado por meio do programa NutWin®. As diferenças entre as variáveis qualitativas foram determinadas pelo teste c2. As variáveis quantitativas foram ajustadas pela idade por meio do General Linear Model, sendo as diferenças entre os grupos estabelecidas pelo teste post-hoc de Bonferroni (SPSS®, versão 15.0). Resultados: Dos 156 adolescentes incluídos no estudo, 76 (48,7 por cento ) foram meninos e 80 (51,3 por cento ) meninas, com idade média de 14,5 ± 2,3 anos. Os adolescentes foram distribuídos em três grupos: Eutrófico (n = 52 adolescentes; 33,3 por cento ), Sobrepeso (n = 53 adolescentes; 34,0 por cento ) e Obeso (n = 51 adolescentes; 32,7 por cento ). Estes grupos foram pareados quanto ao sexo, escolaridade da mãe, renda, maturação sexual e antecedentes familiares de doenças. Como previsto pelo critério de estratificação dos grupos, os valores médios de IMC foram diferentes entre os grupos, sendo confirmados pela CC e porcentagem de gordura. Em relação ao hábito alimentar, a análise dos dados brutos e ajustados pela energia e variabilidade intrapessoal não apresentou diferença entre 4 os grupos. As análises da glicemia de jejum, colesterol total, triacilgliceróis e LDL-C não apresentaram diferenças entre os grupos. A insulina plasmática no grupo Obeso apresentou valores superiores aos grupos Eutrófico (p< 0,001) e Sobrepeso (p< 0,001), e o índice HOMA-IR no grupo Obeso apresentou valores superiores aos grupos Eutrófico (p< 0,001) e Sobrepeso (p< 0,001), enquanto o HDL-C apresentou valores maiores no grupo Eutrófico, quando comparado ao Obeso (p=0,012). A LDL(-) e seus autoanticorpos apresentaram diferentes concentrações entre os grupos (p= 0,040; p= 0,026, respectivamente). A leptina no grupo Eutrófico apresentou valores menores que os grupos Sobrepeso (p< 0,001) e Obeso (p< 0,001), assim como o grupo Sobrepeso apresentou valores inferiores ao grupo Obeso (p< 0,001). Perfil inverso foi observado em relação à concentração de adiponectina, A resistina apresentou valores maiores no grupo Obeso (p= 0,006), que no grupo Eutrófico. A leptina apresentou correlações positivas com percentual de gordura (r= 0,540; p= 0,001), circunferência da cintura (r= 0,679; p= 0,003) e IMC (r= 0,670; p< 0,001). Em relação ao metabolismo de carboidratos, a leptina se correlacionou positivamente com a insulina (r= 0,578; p< 0,001) e o HOMA-IR (r= 0,570; p= 0,001), enquanto a adiponectina se correlacionou negativamente com insulina (r= -0,255; p= 0,001) e o HOMA-IR (r= -0,246; p=0,002). Em relação ao perfil lipídico, a leptina correlacionou-se com colesterol total (r= 0,496; p= 0,003), triacilgliceróis (r= 0,409; p= 0,016) e LDL-C (r= 0,416; p= 0,014), assim como a adiponectina correlacionou-se com LDL(-) (r= -0,428; p= 0,012) e a resistina com HDL-C (r= -0,337; p= 0,050). Portanto, os resultados obtidos demonstram que adolescentes com excesso de peso, mesmo ainda considerados clinicamente saudáveis, apresentam diversos parâmetros antropométricos e bioquímicos alterados, que sugerem a presença de um elevado número de fatores de risco cardiometabólico nessa população / Introduction: Overweight and obesity represent a serious Public Health issue. Their development associated with adolescence, generate a negative impact in adulthood, mainly because of metabolic complications. As the low and chronic inflammatory state present in obesity stimulates the generation of free radicals, it becomes relevant to assess the relationship between adipocytokines and the oxidation of lipoproteins. Objective: Evaluate the possible influence of overweight and obesity on the electronegative LDL and adipocytokines (leptin, adiponectin and resistin). Materials and Methods: Adolescents of both genders, aged 10 to 19 years old and regularly registered in public schools at the city of São Paulo were recruited for this research. They were divided into three groups: Healthy weight, Overweight and Obese, according to Cole et al. (2000), by gender and age. After fasting (12-15h) a blood sample was collected and the following tests were performed on each samples plasma: total lipid profile, glucose and insulin (commercial kits), leptin, resistin, adiponectin (ELISA), LDL(-) (ELISA) and its autoantibodies (ELISA). The socio-economic and health profiles of the adolescents were determined by structured questionnaires. Anthropometric (weight, height, waist circumference - WC, percentage of body fat) and food consumption data (3 x 24-hour recall) were collected. The 24-hour recall data was analyzed by the NutWin® software. Differences between qualitative variables were determined by c2 test. Quantitative variables were adjusted for age by means of General Linear Model, being the differences between the groups established by post-hoc Bonferroni test (SPSS ®, version 15.0). Results: Of the 156 eligible individuals, 76 (48.7 per cent ) were boys and 80 (51.3 per cent ) girls, with the average age being of 14.5 ± 2.3 years. The adolescents were divided into three groups: Healthy weight, n = 52 adolescents (33.3 per cent ), Overweight, n = 53 adolescents (34.0 per cent ) and Obese, n = 51 adolescents (32.7 per cent ). These groups were matched up by gender, mother\'s education, income, sexual maturation, and current medical history. As expected by the group inclusion criteria, there were statistical differences in BMI and this profile was confirmed by WC and body fat. Opposite profile was showed for lean body mass. In relation to food consumption, the analysis of crude data adjusted for energy and intrapersonal variability did 6 not differ between the groups. Analyses of fasting glucose, total cholesterol, triglycerides and LDL-C did not differ between the groups. There were higher levels of plasma insulin and HOMA-IR in the obese group than in the healthy weight (p <0.001; p <0.001) and the overweight (p <0.001; p < 0.001) groups. HDL-C in the healthy weight group showed increased values in comparison to Obese one (p = 0.012). The LDL (-) in plasma and its autoantibodies indicated different concentrations between the groups (p = 0.040, p= 0.026, respectively). There were lower values of leptin both in the healthy weight group in comparison with the overweight (p <0.001) and the obese (p <0.001) groups, as well as in the Overweight group in comparison with the Obese group (p <0.001). Opposite profile was observed for adiponectin levels, between the healthy weight group and the overweight (p = 0.019) and obese (p = 0.000) groups. Resistin showed higher values in the obese group (p = 0.006) than in the healthy weight group. Leptin showed positive correlations with body fat percentage (r= 0.540 and p= 0.001), waist circumference (r= 0.679 and p= 0.003) and BMI (r= 0.670 and p <0.001). In relation to carbohydrate metabolism, leptin correlated positively with insulin (r= 0.578 and p <0.001) and HOMA-IR (r= 0.570 and p= 0.001), and opposite profile was showed for adiponectin (Insulin: r= -0.255, p= 0.001; HOMA-IR: r= -0.246, p= 0.002, respectively). Regarding the lipid profile, leptin correlated with total cholesterol (r= 0.496 and p= 0.003), triglycerides (r= 0.409 and p= 0.016) and LDL-C (r= 0.416 and p= 0.014); adiponectin correlated with LDL (-) (r= -0.428, p= 0.012); and resistin with HDL-C (r= -0.337, p= 0.050). Therefore, the results show that overweight and obese adolescents, even those who are still considered clinically healthy, showed several anthropometric and biochemical changes, which suggest increased number of cardiometabolic risk factors in this population

En raison de leur contribution à la virulence bactérienne, les lipoprotéines et les membres de la voie de biogenèse des lipoprotéines représentent des cibles prometteuses pour la recherche de nouveaux antibiotiques. À la suite de translocation à travers la membrane interne la future lipoprotéine ancrée dans la membrane par l’intermédiaire de son peptide signal, va subir en premier lieu l’addition de sn-1,2-diacylglyceryle sur la fonction sulfhydryle de la future cystéine N-terminale de la lipoprotéine mature. Cette modification est catalysée par Lgt (prolipoprotéin diacylglycérol transférase) avant même que le peptide signal de la lipoprotéine ne soit clivé par Lsp (lipoprotéine signal peptidase). L’action de la peptidase permet de libérer l’amine terminale de la cystéine qui pourra alors, chez les bactéries à Gram-négatif, être acylée par Lnt (lipoprotéin aminoacyl transférase). La présence d’un apolipoprotéine N-acyltransférase (Ppm2-Ms) impliquées dans la N-acylation de LppX a récemment été montrée chez M. smegmatis. Ppm2-Ms fait partie de l'opéron ppm dans laquelle ppm1, une synthase polyprénol-monophosphomannose, a été révélée essentielle dans la synthèse lipoglycans mais dont la fonction dans la biosynthèse des lipoprotéines est totalement inconnue. Afin de clarifier le rôle de l'opéron ppm dans la biosynthèse des lipoprotéines, nous avons étudié les modifications post-traductionnelles de deux modèles (lipoprotéines AmyE et LppX) dans les mutants Δppm1 et Δppm2 chez C. glutamicum.Nos résultats montrent que les deux lipoprotéines modèles sont ancrées dans la membrane et que leurs extrémités N-terminales sont N-acylés par Ppm2-Cg. Le peptide N-teminal acylé de LppX a été également modifié par des groupements d'hexose. Cette O-glycosylation est localisée dans le peptide N-terminal de LppX mais absente dans le mutant Δppm1. Tandis compromise en l'absence de Cg-PPM2, O-glycosylation LppX pourrait être rétabli lorsque Cg-PPM1, Cg-PPM2 ou l'homologue Mt-ppm1 de M. tuberculosis a été surexprimée. Ensemble, ces résultats montrent pour la première fois que Ppm1-Cg (Ppm synthase) et Ppm2-Cg (Lnt) fonctionnent dans une voie de biosynthèse commune dans laquelle la glycosylation et la N-acylation des lipoprotéines sont étroitement couplés / Due to their contribution to bacterial virulence, lipoproteins and members of the lipoprotein biogenesis pathway represent potent drug targets. Following translocation across the inner membrane, lipoprotein precursors are acylated by lipoprotein diacylglycerol transferase (Lgt), cleaved off their signal peptides by lipoprotein signal peptidase (Lsp) and, in Gram-negative bacteria, further triacylated by lipoprotein N-acyl transferase (Lnt). The existence of an active apolipoprotein N-acyltransferase (Ms-Ppm2) involved in the N-acylation of LppX was recently reported in M. smegmatis. Ms-Ppm2 is part of the ppm operon in which Ppm1, a polyprenol-monophosphomannose synthase, has been shown to be essential in lipoglycans synthesis but whose function in lipoprotein biosynthesis is completely unknown. In order to clarify the role of the ppm operon in lipoprotein biosynthesis, we investigated the post-translational modifications of two model lipoproteins (AmyE and LppX) in C. glutamicum ∆ppm1 and ∆ppm2 mutants. Our results show that both proteins are anchored into the membrane and that their N-termini are N-acylated by Cg-Ppm2. The acylated Ntermina peptide of LppX was also found to be modified by hexose moieties. This O-glycosylation is localized in the N-terminal peptide of LppX and disappeared in the ∆ppm1 mutant. While compromised in the absence of Cg-Ppm2, LppX Oglycosylation could be restored when Cg-Ppm1, Cg-Ppm2 or the homologous Mt-Ppm1 of M. tuberculosis was overexpressed. Together, these results show for the first time that Cg-Ppm1 (Ppm synthase) and Cg-Ppm2 (Lnt) operate in a common biosynthetic pathway in which lipoprotein N-acylation and glycosylation are tightly coupled.

Proprotein convertase subtilisin / kexin type 9 (PCSK9) is a negative regulator of the low-density lipoprotein receptor, and PCSK9 inhibition has become an important cholesterol-lowering therapeutic strategy. PCSK9 also associates with LDL particles, and evidence suggests that the activity of PCSK9 may be regulated by LDL binding. We have investigated the biochemistry of the interaction between PCSK9 and lipoproteins. Through mutagenesis and in-vitro binding assays, we found conserved motifs in the PCSK9 N-terminus that play a role in LDL binding. Through secondary structure studies using circular dichroism and computational modelling, we determined that the N-terminal region of the PCSK9 prodomain undergoes an environment-dependent structural shift that affects the ability of PCSK9 to bind LDL. We also found that the commonly found loss-of-function polymorphism R46L is capable of modulating this structural shift. Importantly, we found a surface-exposed region of the PCSK9 prodomain that maps a cluster of gain-of-function mutations (L108R, S127R, and D129G) that severely disrupt LDL binding. Through gel shift assays and density gradient centrifugation, we observed that PCSK9 shows remodeling-dependent ability to bind different classes of lipoprotein particles in vitro, binding strongly to LDL and IDL but showing barely detectable association to VLDL. Further, in human plasma, we found that lipoprotein-bound populations of PCSK9 shifted in response to differences in lipoprotein profiles between normolipidemic and hypercholesterolemic or hypertriglyceridemic subjects. Overall, elucidation of how lipoproteins regulate PCSK9 activity will reveal new targets for designing cholesterol-lowering therapeutics.

Introdução A Síndrome Metabólica (SM) representa um conjunto de fatores que determinam maior risco para Doença Cardiovascular (DCV), devido principalmente à Resistência à Insulina (RI) e ao estado inflamatório promovido pelo tecido adiposo branco hipertrofiado. Nesse contexto, a condição de dislipidemia favorece o desenvolvimento da aterosclerose, devido a que maiores concentrações de lipoproteína de baixa densidade (LDL) no plasma podem propiciar modificações nessas partículas. Essas modificações podem ter origem oxidativa ou não oxidativa e impactar nas características aterogênicas da LDL. O ômega três tem mostrado efeitos hipolipemiantes e anti-inflamatórios, que podem reduzir o risco cardiovascular de indivíduos com SM. Objetivo:: avaliar o efeito da suplementação de 3g de &#969;-3 por um período de oito semanas sobre a concentração plasmática das partículas de LDL eletronegativas [LDL(-)] e seus anticorpos, assim como monitorar possíveis mudanças nas concentrações das subfrações das LDL. Metodologia: Foram incluídos 115 participantes de ambos os sexos, entre 30 e 74 anos, com SM, separados nos grupos de intervenção com &#969;-3 (n=58) e controle com &#969;-9 (n=57). Foram realizadas análises de perfil lipídico e por meio de ELISA foram avaliadas a concentração de LDL(-) e de antiLDL(-) no plasma dos participantes. O tamanho das subfrações de LDL foi realizado no sistema Lipoprint. O efeito do tempo e das intervenções foi testado por meio do programa SPSS versão 20.0, adotando-se o concentração de significância de p<0,05. Resultados: A suplementação de &#969;-3 teve efeito significativo na redução do % de massa grassa (%MG) e na pressão arterial sistólica (4%) e diastólica (5%). Em relação ao perfil lipídico, ambas intervenções tiveram efeitos significativos de redução de colesterol total (CT), LDL-c, não HDL (nHDL) e triacilglicerois (TG). As concentrações plasmáticas de LDL(-) dos participantes que tomaram ômega 3 apresentaram redução de 21%, enquanto que os que tomaram ômega 9 tiveram redução de 1%. Tal redução foi significativa em relação ao tempo de intervenção (p<0,05), mas não quando o efeito da internveção foi avaliado. Perfil semelhante foi observado para a razão LDL(-)/antiLDL(-), observou-se redução de 22% no grupo ômega 3 e redução de somente 3% no grupo ômega 9. Conclusão: A intervenção com ômega 3 promoveu redução na concentração plasmática de LDL(-), porém não modificou a concentração do anticorpo antiLDL(-) nem o tamanho das subfrações da LDL. / Introduction: The Metabolic Syndrome (MetS) is a combination of factors that determine increased risk for Cardiovascular Diseases (CVD), mainly because of Insulin Resistance (IR) and the inflammatory state promoted by the hypertrophied white adipose tissue. Under this background, the dyslipidemic condition goes together with the developing of atherosclerosis, meaning that higher concentrations of low density lipoprotein (LDL) in plasma promote modifications from different sources in these particles and may have an impact over LDL subfractions, turning them more atherogenic. Omega three has proved hypolipidemic and anti-inflammatory effects, which may reduce cardiovascular risk in MetS individuals. Objetive: evaluate the effect of 3g of fish oil supplementation, 60% EPA and DHA during an eight week period over plasma concentrations of electronegative LDL particles [LDL(-)] and its antibodies, as well as monitoring possible changes in LDL subfractions. Methods: A total number of 115 participants, both sexes, between 30 and 74 years of age, with MetS, were included and separated in the intervention group receiving omega 3 (n=58) and the placebo group with omega 9 (n=57). Biochemical analyses were carried out using ELISA for LDL(-) and antiLDL(-) in plasma. Particle sizes were measured using the Lipoprint system. The effects of time and intervention were analyzed using the statistical program SPSS 20.0, assuming p<0.05 as significant. Results: Omega 3 supplementation had a significant effect in the reduction of fat mass percentage (FM%) and blood pressure, showing a 4% decrease for systolic and 5% decrease for diastolic pressures respectively. Considering the lipid profile, both interventions had significant effects reducing total cholesterol (TC), LDL-c, not HDL (nHDL) and tryacylglycerides (TG). LDL(-) plasma concentrations from the omega 3 group showed 21% reduction while the omega 9 group had only 1% reduction. Such difference was significant considering time (p<0,05), but not while comparing the intervention effect. There was also a change in the antiLDL(-) antibodies; reducing 2% in the omega 3 group and increasing 1% in the omega 9 group. However, those differences were not significant. Similar effects were observed in LDL(-)/antiLDL(-) ratio, showing 22% decrease in the omega 3 group and only 3% in the omega 9 group. Conclusion: Omega 3 intervention promoted a significant reduction in plasmatic LDL(-), however, it didn\'t modify LDL subfraction distribution.

Introdução: a vasculopatia livedoide é uma doença cutânea rara que acomete principalmente mulheres adultas, cursando inicialmente com lesões purpúricas e necróticas intensamente dolorosas, acometendo extremidades inferiores, que podem evoluir com úlceras de tamanhos variados. Estas lesões costumam evoluir com cicatrizes atróficas, estreladas e com telangiectasias, denominadas cicatrizes de atrofia branca. Apesar da etiologia não estar totalmente esclarecida, os distúrbios da coagulação parecem ser o mecanismo fisiopatológico primário da vasculopatia livedoide. Inúmeras trombofilias já foram associadas à vasculopatia livedoide, porém cerca de metade dos casos permanece sem etiologia definida. Recentemente foi documentado aumento de lipoproteína(a) na vasculopatia livedoide. Níveis plasmáticos elevados de lipoproteína(a) são considerados um fator de risco causal independente para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares e trombóticas, devido à sua similaridade estrutural com o plasminogênio. A deposição tecidual da lipoproteína(a) em vasos ateroscleróticos é bem descrita, porém na vasculopatia livedoide a participação da lipoproteína(a) não é conhecida. Objetivos: analisar os níveis séricos da lipoproteína(a) e a sua expressão tecidual na pele dos pacientes com vasculopatia livedoide e comparar os resultados com um grupo controle. Métodos: amostras de pele obtidas através de biópsia de pele de 38 pacientes com vasculopatia livedoide (27 do sexo feminino e 11 do sexo masculino) e 9 indivíduos do grupo controle (5 do sexo feminino e 4 do sexo masculino) foram avaliados para a presença de lipoproteína(a) através de imuno-histoquímica utilizando anticorpo policlonal anti- lipoprotéina(a). Os níveis plasmáticos da lipoprotéeíina(a) foram analisados por imunoturbidimetria e comparados com setenta pacientes portadores de outras doenças dermatológicas. Resultados: utilizando anticorpo policlonal contra lipoproteína(a), observou-se que a pele perilesional em pacientes com vasculopatia livedoide apresentava dez vezes mais lipoprotéina (a) do que a pele controle. O coeficiente de correlação de Pearson (r = 0,02) mostrou que os níveis teciduais de lipoproteína(a) não se correlacionaram com os níveis plasmáticos nos pacientes com vasculopatia livedoide. Níveis plasmáticos elevados de lipoproteína(a) foram observados nos portadores de vasculopatia livedoide, no entanto não pode ser demonstrada diferença estatística em relação ao grupo controle. Conclusões: achados de aumento da expressão tecidual de lipoproteína(a) na pele lesionada e níveis plasmáticos elevados desta proteína em pacientes com vasculopatia livedoide podem corroborar com a hipótese de que a lipoproteína(a) possa contribuir para a patogênese da vasculopatia livedoide através dos seus efeitos antifibrinolíticos, pró- trombóticos e ação direta no endotélio vascular, induzindo a formação do trombo / Background: livedoid vasculopathy is a chronic disorder that usually presents as recurrent reticulated purpura on the lower limbs, with recurrent painful, purpuric and/or necrotic macules that may lead to ulcerative lesions. These lesions usually heal into atrophic white scars, with depigmentation and telangiectasias, known as \"atrophie blanche\". Although the etiology of the livedoid vasculopathy is not fully understood, coagulation disorders appear to be the primary pathophysiological mechanism. Hereditary thrombophilia has been associated with livedoid vasculopathy, but about half of the cases remain without defined etiology. Recently, high serum levels of lipoprotein(a) in livedoid vasculopathy patients have been documented. Elevated plasma levels of lipoprotein(a) are an independent risk factor for the development of cardiovascular and thrombotic diseases due to their structural similarity with plasminogen. Lipoprotein(a) deposition in atherosclerotic vessels is well described, but its role in livedoid vasculopathy is unknown. Objectives: To analyze the serum levels of lipoprotein(a) and tissue expression in the skin of patients with livedoid vasculopathy and to compare the results with a control group. Methods: Skin biopsy samples from 38 patients (27 women-11 men) with active lesions diagnosed with livedoid vasculopathy and 9 samples of normal skin (5 women-4 men) from control individuals without livedoid vasculopathy were evaluated for skin expression of lipoprotein(a) by immunohistochemistry using polyclonal anti-lipoprotein(a) antibody. Plasma levels of lipoprotein(a) were analyzed by immunoturbidimetry and compared with seventy patients with other dermatological diseases. Results: We found lesional skin in patients with livedoid vasculopathy expressed tenfold higher lipoprotein(a) immunostaining than controls. High plasma levels of lipoprotein(a) were observed in livedoid vasculopathy patients, but we cannot observed a positive correlation (p = 0.02) between skin expression of Lipoprotein(a) and plasma levels of Lipoprotein(a) in patients with livedoid vasculopathy. Conclusions: Increased of lipoprotein(a) tissue expression on lesioned skin and elevated plasma levels of this protein in patients with livedoid vasculopathy may corroborate the hypothesis that lipoprotein(a) may contribute to the pathogenesis of livedoid vasculopathy through its antifibrinolytic effects, prothrombotic and direct action on the vascular endothelium, inducing thrombosis