Submitted by Haroudo Xavier Filho (haroudo.xavierfo@ufpe.br) on 2016-04-14T19:07:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Gabriela Dissertação de Mestrado 2015.pdf: 2369379 bytes, checksum: 60202a9729a4a62daf765526ee8273b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-14T19:07:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Gabriela Dissertação de Mestrado 2015.pdf: 2369379 bytes, checksum: 60202a9729a4a62daf765526ee8273b5 (MD5) Previous issue date: 2015-05-28 / Morinda citrifolia Linn. é um arbusto de pequeno porte, que embora originado do sudoeste da Ásia e Austrália detêm poder de adaptação nas mais diversas condições geográficas e climáticas, o suco do fruto é utilizada para diversos fins terapêuticos. Considerando a preocupação com a frequente resistência microbiana principalmente em pacientes imunocomprometidos, além da alta incidência de neoplasias e baixa especificidade dos antineoplásicos disponíveis objetivou-se a triagem fitoquímica, investigação da toxicidade; propriedades antimicrobianas e antitumorais do extrato etanólico de Morinda citrifolia L. A avaliação da toxicidade seguiu a metodologia da Organização para Cooperação Econômica e Desenvolvimento (OECD 423), a triagem fitoquímica foi realizada em cromatografia de camada delgada, a microdiluição em placa de 96 poços, com posterior revelação com resaruzina foi utilizada para os ensaios antimicrobianos e a atividade antitumoral foi investigada in vivo frente ao Carcinoma de Ehrlich e ao Sarcoma 180. Os alcalóides, importante classe de metabólitos secundários, não foram detectados no extrato, por outro lado flavonóides, triterpenos, cumarinas e taninos foram detectados. Apesar da observação de reações de excitabilidade do SNC no screaming hipocrático, o estudo histopatológico dos fígados e rins dos animais só apresentaram leves sinais de toxicidade na dose de 5000 mg/kg, nesta mesma dose o animais apresentaram redução de peso. A mensuração de marcadores bioquímicos e hematológicos não apresentaram variação significativa entre os grupos teste e controle. Não houve óbito em nenhuma das doses nas vias de administração testadas, assim o extrato apresentou DL50 > 5000 mg/kg, tanto pela via oral quanto pela intraperitoneal sendo considerado como não tóxico e pertencente a classe 5, segundo a GHS: Globally Harmonized Classification Systen. No teste antimicrobiano em relação às bactérias, as cepas Gram positivas foram mais sensíveis que as Gram negativas, cepas de Staphylococcus aureus foram inibidas na dose de 512μg/mL, já as de Pseudomonas aeruginosa foram inibidas na dose de 1024 μg/mL. A maioria das cepas de leveduras foram sensíveis; o fungo filamentoso Aspergillus niger não apresentou sensibilidade nas doses testadas. A inibição do crescimento tumoral frente ao Carcinoma de Ehrlich foi mais proeminente na dose 200mg/kg/ip com percentual de inibição de 83,91%, por outro lado frente ao Sarcoma 180 o maior potencial de inibição foi detectado na dose de 100 mg/kg/ip com percentual de 85,86%. Assim conclui-se que o extrato etanólico de Morinda citrifolia possui baixa toxicidade, e resultados promissores como antimicrobiano e agente antitumoral, representando fonte promissora para isolamento de protótipos de novos fármacos para tais finalidades. / Morinda citrifolia Linn. is a small shrub, which though originated from Southeast Asia and Australia hold power of adaptation in diverse geographic and climatic conditions, the fruit juice is used for various therapeutic purposes. Given the concern about the frequent microbial resistance especially in immunocompromised patients, in addition to the high incidence of cancer and low specificity of available antineoplasic drugs aimed to phytochemical screening, investigation of toxicity; antimicrobial and antitumor properties of ethanol extract of Morinda citrifolia L. The evaluation of the toxicity followed the methodology of the Organization for Economic Cooperation and Development (OECD 423), the phytochemical screening was carried out in thin layer chromatography, in 96 well microdilution plate with subsequent development with resaruzina was used for antimicrobial testing and antitumor activity was investigated in vivo against Ehrlich carcinoma and sarcoma 180. Alkaloids, important class of secondary metabolites were not detected in the extract, moreover flavonoids, triterpenes, coumarins and tannins were detected. Despite the observation of excitability of reactions on the Nervous systen in the Hippocratic screening, histopathological study of animal livers and kidneys showed only slight signs of toxicity at the dose of 5000 mg / kg, in the same dose the animals showed weight reduction. The measurement of biochemical and hematological markers not showed significant variation between test and control groups. No deaths occurred in any of the doses tested routes of administration, thus the extract showed LD50> 5000 mg / kg, both orally and by intraperitoneal being considered not toxic and belonging to class 5, according to the GHS: Globally Harmonized Classification Systen . The antimicrobial testing against bacteria, Gram-positive strains were more sensitive than Gram-negative, Staphylococcus aureus were inhibited at a dose of 512μg/mL, the Pseudomonas aeruginosa have been inhibited in a dose of 1024 ug/mL. Most yeast strains were sensitive; the filamentous fungus Aspergillus niger showed no sensitivity in the tested doses. The inhibition of tumor growth compared to Ehrlich carcinoma was more prominent in the dose 200 mg/kg/ip with inhibition percentage of 83.91%, on the other hand against Sarcoma 180 the greatest potential inhibition was detected at the dose of 100 mg/kg/ip with a percentage of 85.86%. Thereforee it is concluded that the ethanol extract Morinda citrifolia has low toxicity, and promising results as an antimicrobial and antitumor agent and promising source for isolation of new drugs prototypes for such purposes.

Morindae Officinalis Radix (MOR), Bajitian in Chinese, is the dried root of Morinda officinalis F.C.How. (Rubiaceae). It is one of the most popular herbal medicines used in the southeast region of China. Various types of chemical constituents have been experimentally shown to be bioactive components of MOR, among which secondary metabolites and saccharides predominate. Pharmacological studies revealed MOR shows kidney tonifying, anti- osteoporosis, antidepressant, anti-inflammatory and antioxidant effect. Since 2002, MOR has been approved as a food supplement for daily healthcare, hence increasing consumption and demand for better quality of MOR. However, selection of MOR with superior quality is largely based on traditional experience which lacks scientific basis. For example, 3-4-year-old MOR is usually used without xylem; and processed MOR are believed to show different bioactivities. Therefore, to promote the rational utilization and ensure efficacy of MOR, overall qualitative and quantitative characterization of MOR in different traditional usage is needed. Anthraquinones, iridoid glycosides and oligosaccharides are the common reference compounds for chemical characterization of MOR. However, they are usually selectively characterized, which is not comprehensive enough in herbal quality evaluation. To deal with this, metabolomics targeting secondary metabolome and glycomics targeting glycome can be applied. And the integration of metabolomics and glycomics could be a promising approach to investigate overall chemical variations in MOR according to its traditional usage. Therefore, in this study, chromatographic methods for metabololmics and glycomics were firstly developed to study the traditional usage of MOR. In Chapter 2, they were applied for studying chemical variation and differences in growth year and plant tissue of MOR. In Chapter 3, chemical differences in processed products of MOR were also studied using the established metabololmics and glycomics methods. Further bioactivity differences of them were studied by cell metabolomics with HEK 293 cells under high glucose microenvironment. Besides that, in Chapter 4, consumption method of not only MOR, but other herbal medicines were studied. Conventional boiling water extraction (BWE) and ultrasound-assisted extraction (UAE) were compared to understand their effects on polysaccharides. For the study of growth year and tissues of MOR, the results showed that various types of bioactive components reached a maximum between 3-4 years of growth; and that xylem contained more potentially toxic constituents, but less bioactive components, than cortex. For the study of processing products, the results showed that secondary metabolome and glycome of raw MOR and other processing products was found qualitatively and quantitatively different. Contents of secondary metabolites were generally increased in processed products, while saccharides were decreased instead. Also, steamed MOR (F) seemed to show preventive effect of diabetic nephropathy and different MOR processing products had induced different metabolic changes on high glucose induced HEK 293 cells. In the study of extraction methods, the results showed that the polysaccharides from the herbal medicines by UAE were quantitatively and qualitatively different with those by BWE. The powerful extraction ability and polysaccharide degradation caused by ultrasound collectively contributed to these differences. It was revealed that not only the UAE conditions but also the polysaccharide structures could affect the extraction ability and polysaccharide degradation To conclude, metabolomics and glycomics were integrated in this study to investigate the variations in secondary metabolome and glycome in MOR. We had successfully applied these methods to study and provide scientific basis for traditional practice of MOR. We had proved that 3rd to 4th years of growth are the key period for the development of the biochemical signature of MOR. Xylem and cortex of MOR were qualitatively and quantitatively different and removing xylem could help to remove potentially toxic components. This study also provided scientific evidences for the justification of MOR and its processed products, as well as their metabolic effects on high glucose induced DN in HEK 293 cells. Besides, this study revealed both UAE parameters and structural properties of polysaccharides affects extraction recovery of polysaccharides in herbal medicines. Hence, we suggest UAE should be carefully considered before employing it in relevant chemical and pharmacological analysis.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / O cÃncer tem se configurado como um grande problema de saÃde pÃblica mundial. Como alternativa terapÃutica, muitos produtos naturais tÃm sido avaliados para seleÃÃo de compostos ativos com menos efeitos indesejÃveis e capazes de reduzir tumores malignos de modo mais eficiente. Morinda citrifolia, conhecida popularmente como noni, à uma espÃcie nativa do sudeste asiÃtico e da AustrÃlia que tem sido utilizada popularmente para diversos fins terapÃuticos e nutricionais. O polissacarÃdeo extraÃdo da polpa do fruto de Morinda citrifolia Linn (Noni-ppt 1) foi purificado por reprecipitaÃÃo em Ãlcool etÃlico, originando as subfraÃÃes: Noni-ppt 3 e Noni-ppt 5. O objetivo do presente trabalho foi investigar a atividade antitumoral in vitro e in vivo do Noni-ppt, bem como realizar sua caracterizaÃÃo fÃsico-quÃmica utilizando tÃcnicas de cromatografia lÃquida de alta eficiÃncia (CLAE), espectroscopia de infravermelho (FT-IR), cromatografia de permeaÃÃo em gel (GPC), anÃlise termogravimÃtrica (TGA), anÃlise elementar de nitrogÃnio e ressonÃncia magnÃtica nuclear de 13C (RMN). A atividade citotÃxica in vitro das trÃs fraÃÃes de Noni-ppt (50 μg/mL) foi avaliada sobre trÃs linhagens de cÃlulas tumorais (HCT-116; SF-295 e OVCAR-8) por meio do mÃtodo colorimÃtrico brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT). O efeito antitumoral in vivo do Noni-ppt 3 foi analisado em camundongos com tumor Sarcoma 180 nas doses de 25 e 50 mg/Kg/dia por via oral e intraperitoneal. As anÃlises fÃsico-quÃmicas demonstraram que o Noni-ppt à composto por 12,1-13,7% de proteÃnas, 44,2-58,8% de Ãcidos urÃnicos e 65,4-71,3% de carboidratos totais. A anÃlise da composiÃÃo monossacarÃdica demonstrou que o Noni-ppt à um heteropolissacarÃdeo constituÃdo, predominantemente, por ramnose, arabinose, galactose e Ãcido galacturÃnico. Os resultados da avaliaÃÃo da atividade antitumoral in vitro demonstraram que as amostras de Noni-ppt 1, 3 e 5 nÃo apresentam nenhuma atividade citotÃxica direta sobre as cÃlulas tumorais na concentraÃÃo testada. AlÃm disso, nÃo foi observada qualquer inibiÃÃo do tumor nos camundongos inoculados com as cÃlulas tumorais. / Currently, cancer is a global public health problem. As an alternative therapy, many natural products have been evaluated for selection of active and with less undesirable effects capable of reducing malignant tumors more efficiently compounds. Morinda citrifolia, commonly known as noni, is a species native to Southeast Asia and Australia that has been popularly used for many therapeutic and nutritional purposes. The polysaccharide extracted from the pulp of Morinda citrifolia Linn fruits (Noni-ppt 1) was purified by reprecipitation in ethanol, yielding the subfractions: Noni-ppt 3 and Noni-ppt 5. The objective of this study was to investigate the antitumor activity in vitro and in vivo of Noni-ppt and carry out their physico-chemical characterization by high performance liquid chromatography (HPLC), gas chromatography (GC), fourier transform infrared spectrometry (FTIR), gel permeation chromatography (GPC), thermal gravimetric analysis (TGA), elemental analysis and 13C nuclear magnetic resonance (NMR). The in vitro cytotoxic activity of the three fractions of Noni-ppt (50 μg/mL) was evaluated on three tumor cell lines (HCT-116, SF-295 and OVCAR -8) by colorimetric method bromide 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). The in vivo antitumor effect of Noni-ppt 3 was analyzed in mice with tumor Sarcoma 180 at doses of 25 and 50 mg/kg/day orally and intraperitoneally. The physico-chemical analyzes showed that Noni-ppt consists of protein (12.1-13.7%), uronic acids (44.2-58.8%) and of total carbohydrates (65.4-71.3%). The monosaccharide composition analysis showed that Noni-ppt is a heteropolysaccharide composed predominantly of rhamnose, arabinose, galactose and galacturonic acid. The Noni-ppt samples showed no direct cytotoxic activity against tumor cells in vitro. Moreover, the treatment with Noni-ppt 3 did not show any inhibition of tumor growth in mice inoculated with Sarcoma 180 cells.

Exposure to solar radiation, particularly its ultraviolet (UV), has a variety of harmful effects on human health. Some of these effects include sunburn cell formations, erythema, edema, melanoma, photoaging of the skin, and immune suppression. A plant that has been widely used in tropical folk medicine for a number of conditions is the Morinda citrifolia Linn. (Rubiaceae), commonly known as noni. The beneficial photoprotective effects of topical formulations based on extract from Morinda citrifolia leaves, have not yet been investigated. Thus, the present study aims to investigate the potential benefits of M. citrifolia topical application on the dorsal skin of mice, exposed to UVA-UVB light. Firstly, the absorption spectrum of the formulations extracts (10 and 15%) was evaluated by spectroscopy. The spectrum showed peaks at 200 nm and at 240 nm and absorption in the UVA and UVB regions. After 7 days of treatment and exposition to UVA-UVB light, the thickness, transepidermal water loss (TEWL), erythema and histological alterations were evaluated. The results from in vivo effectiveness showed that the thickness, TEWL values and erythema indexes were significantly decreased by treatment with formulations containing the extract. The histological measurements in hematoxilina eosin showed that in the non-irradiated group showed that the epidermis was represented by a thin, and continuous surface. No inflammatory infiltrate were found in the dermal tissues. Both irradiated and vehicle groups presented increased epidermal thickness associated to hyperorthokeratosis. The papillary dermis exhibited intense inflammatory infiltrate, mainly composed of lymphocytes, mild interstitial edema and prominent capillary and venular hyperemia. The treated groups presented remarkable reduction in the inflammatory content, as well as less expressive hyperemia. In the Sirius Red, the irradiated and vehicle groups, papillary dermis showed the presence of a gross, thick, parallel-arranged, collagen fibers. Both treated groups (10 and 15% formulations) presented similar features regarding the collagenization pattern, showing a mixture of yellowish type I and greenish type III collagen fibers. The interfibrillary spaces were more evident than in irradiated and vehicle groups. Such morphological appearances were very similar to that observed in non irradiated group. Areas treated with the formulation containing Morinda citrifolia extract (10% and 15%) have enhanced protection against UV radiation. Finally, the extract was evaluated on murine malignant melanoma (cell line B16F10) in order to examine their cytotoxic effects on malignany cells. The extract at concentrations of 0.05 to 12.8 mg/mL did not show any cytotoxic effects in the B16F10 cell line. These can suggest that the extract showed no potential anti cancer in melanoma cells, and the extract have only photoprotection effects. In conclusion, the results showed that the formulations containing the extract protected the skin against UV-induced damage. / A exposição à radiação solar, particularmente a radiação ultravioleta (UV), tem uma variedade de efeitos nocivos à saúde humana. Alguns destes efeitos incluem formações de queimaduras solares, eritema, edema, melanoma, fotoenvelhecimento da pele e da supressão imune. Uma planta medicinal que tem sido vastamente utilizada para as mais variadas formas de manutenção da saúde, tem sido a Morinda citrifolia Linn. (Rubiaceae), comumente conhecida como noni. Os efeitos fotoprotetores de formulações para uso tópico com o extrato aquoso das folhas da Morinda citrifolia não foram investigados previamente. Assim, o presente estudo teve como objetivo estudar os benefícios potenciais da M. citrifolia em aplicação tópica na pele dorsal de camundongos expostos à radiação UVA-UVB. Primeiramente, o espectro de absorção das formulações com extrato (10% e 15%) foi avaliada por espectroscopia. O espectro mostrou bandas a 200 nm e em 240 nm e em regiões de absorção no UVA e UVB. In vivo, após 7 dias de tratamento e exposição à radição UVA-UVB, a espessura, perda transepidérmica de água (TEWL), eritema e alterações histológicas foram avaliadas. Os resultados de eficácia in vivo mostraram que os valores de espessura, TEWL e índices de eritema foram significativamente reduzidos pelo tratamento com as formulações contendo o extrato, comparados aos grupos controle irradiado e veículo irradiado. As medições histológicas em hematoxilina eosina mostraram que no grupo não irradiado a epiderme foi representada por uma superfície delgada e contínua. Não foram encontrados infiltrados inflamatórios nos tecidos dérmicos. Ambos os grupos irradiados e veículo apresentaram aumento da espessura da epiderme e hiperortoqueratose. A derme papilar apresentou intenso infiltrado inflamatório, composto principalmente de linfócitos, edema intersticial leve e hiperemia capilar e venular proeminente. Os grupos tratados apresentaram redução notável no conteúdo inflamatório e da hiperemia. Na coloração picrossírius, nos grupos controle irradiado e veículo irradiado, a derme papilar mostrou a presença de feixe de fibras colágenas espessas, grosseiras, de comprimento variável e disposição paralela. Ambos os grupos tratados (formulações de 10% e 15%) apresentaram características semelhantes quanto ao padrão de colagenização, mostrando uma mistura de fibras de colágeno tipo I e fibras de colágeno tipo III. Os espaços interfibrilares nos grupos tratados foram mais evidentes que nos grupos irradiados e do veículo. Tais aspectos morfológicos foram semelhantes às observadas no grupo não irradiado. Ficou evidente, através da morfologia e histologia, que as áreas tratadas com a formulação contendo Morinda citrifolia (10% e 15%) tiveram uma maior proteção contra a radiação UV Finalmente, o extrato foi avaliado em melanoma (linha de células B16F10), a fim de examinar os seus efeitos citotóxicos em células malígnas. O extrato com concentrações de 0,05 a 12,8 mg/mL não mostrou quaisquer efeitos citotóxicos na linhagem de células B16F10. Estes podem sugerir que o extrato não combate danos já estabelecidos em células, tendos efeitos apenas de fotoproteção, dos quais os mecanismos ainda precisam de estudo mais aprofundado. Em conclusão, os resultados demonstraram que as formulações contendo o extrato protegem a pele contra danos induzidos por radiação UV.

Aim Morinda citrifolia L., commercially known as noni or the Indian mulberry plant, is morphologically variable and the only widely distributed member of the pantropical genus Morinda sensu stricto (Rubiaceae). This large distribution has been attributed partly to the ability of the seeds of the large-fruited M. citrifolia L. var. citrifolia L. to be transported by oceanic drifting. This form of M. citrifolia var. citrifolia has been predicted to be the progenitor colonizer of the island endemic Morinda species. Using a phylogenetic approach and large sampling of the widespread, large-fruited M. citrifolia var. citrifolia, we assessed the potential area of origin of M. citrifolia and tested the hypothesis that the large-fruited M. citrifolia var. citrifolia is an ancestral colonizer. Location Tropics. Methods We performed Bayesian analyses of 22 species of the tribe Morindeae (including 11 individuals of the three currently recognized varieties of M. citrifolia) based on combined nrETS, nrITS, rps16 and trnT-F sequence data. Geographic origins of the studied taxa were mapped onto the Bayesian majority rule consensus tree. Results Nine sequenced individuals of M. citrifolia from diverse geographic locations formed a highly supported clade, which was sister to the Australo-Micronesian clade that included M. bracteata var. celebica and M. latibracteata. These sister clades are part of the broader Asian, arborescent Morinda clade. We found no support for the current varietal classification of M. citrifolia. Main conclusions Our analyses suggest a Micronesian origin of M. citrifolia. This implies that the large-fruited M. citrifolia var. citrifolia might well have been present in the Pacific before the arrival of the Micronesian and Polynesian ancestors from Southeast Asia. The wide distribution of this form of M. citrifolia var. citrifolia is attributed partly to the trans-oceanic dispersal of its buoyant seeds, self-pollination and its ability to produce flowers and fruits year-round. The hypothesis that the widespread, large-fruited M. citrifolia var. citrifolia is the progenitor colonizer of the island endemic Morinda species is inconsistent with its derived position within the Asian, arborescent Morinda clade and with the fact that the nine sampled individuals of M. citrifolia form a clade.

nÃo hà / A salinidade e a radiaÃÃo em excesso sÃo estresses abiÃticos que podem afetar o crescimento e o metabolismo das plantas. Uma das alternativas para minimizar os efeitos deletÃrios desses estresses nas plantas, à a utilizaÃÃo de insumos orgÃnicos. Apesar da adaptabilidade intercontinental das plantas de noni, ainda sÃo escassas informaÃÃes sobre alternativas para minimizar os efeitos desse estresse, nestas plantas, em solo brasileiro. O objetivo do trabalho foi avaliar os efeitos da salinidade da Ãgua de irrigaÃÃo sobre o crescimento inicial e metabolismo das plantas de noni (Morinda citrifolia L.), cultivadas em dois ambientes, na ausÃncia ou presenÃa de matÃria orgÃnica. O delineamento estatÃstico adotado foi em blocos ao acaso disposto no esquema de parcelas subsubdivididas, com 5 repetiÃÃes. As parcelas foram constituÃdas pelos ambientes de cultivo (cÃu aberto e telado), as subparcelas pelos nÃveis de salinidade da Ãgua de irrigaÃÃo (CEa: 0,3; 1,5; 3,0; 4,5 e 6,0 dS m-1) e as subsubparcelas foram representadas pela ausÃncia e presenÃa de matÃria orgÃnica. A combinaÃÃo desses fatores resultou em 20 diferentes tratamentos, sendo que cada repetiÃÃo foi constituÃda de trÃs vasos (uma planta por vaso), totalizando 300 vasos. Para facilitar a descriÃÃo dos resultados, a tese foi dividida em quatro capÃtulos. O primeiro à referente ao crescimento e tolerÃncia, o segundo Ãs trocas gasosas e alteraÃÃes morfolÃgicas, o terceiro aos solutos orgÃnicos e danos de membrana e o quarto à nutriÃÃo mineral do solo e folha. As variÃveis utilizadas foram: altura, massa seca da parte aÃrea (MSPA), da raiz (MSR), do caule (MSC) e das folhas (MSF) determinadas aos 60, 90 e 110 DAT (Dias apÃs a aplicaÃÃo dos tratamentos). Com os dados de massas secas dos diferentes ÃrgÃos vegetais calculou-se a tolerÃncia destas plantas à salinidade e a qualidade das mudas. AlÃm disso, foram determinadas a condutÃncia estomÃtica (gs), a fotossÃntese lÃquida (A), a taxa de transpiraÃÃo (E), a eficiÃncia do uso da Ãgua (relaÃÃes A/E e A/gs), o Ãndice relativo de clorofila, os teores foliares de prolina, a proteÃna solÃvel, N-aminossolÃveis e carboidratos solÃveis aos 60 e 90 DAT. Aos 110 DAT foram determinados o diÃmetro do caule, a arÃa foliar, a massa especifica foliar, o grau de suculÃncia foliar, os teores foliares de cÃlcio, potÃssio, magnÃsio, nitrogÃnio, sÃdio, cloreto, relaÃÃo Na/K, no solo a condutividade elÃtrica do extrato de saturaÃÃo (CEes), os teores de cÃlcio, magnÃsio, potÃssio e sÃdio. De forma geral, a salinidade da Ãgua de irrigaÃÃo provocou incremento linear na CEes, nos solutos orgÃnicos, nos teores foliares de Ca, Mg, N, Na, Cl e na relaÃÃo Na/K sendo que o efeito observado a cÃu aberto foi mais expressivo do que no ambiente telado. Por outro lado, as variÃveis de crescimento, trocas gasosas e teor de clorofila tiveram decrÃscimo com o aumento da salinidade da Ãgua de irrigaÃÃo. No que diz respeito à tolerÃncia as plantas de noni se mostraram tolerantes ou moderadamente tolerantes à salinidade quando irrigadas com Ãgua de 1,5 e 3,0 dS m-1, independente do ambiente de cultivo. Observou-se forte interaÃÃo entre salinidade e o ambiente de cultivo para a maioria das variÃveis de crescimento, sendo que as plantas de noni sob condiÃÃes de telado se mostraram tolerantes à salinidade de atà 6,0 dS m-1, sendo este ambiente mais adequado para produÃÃo de mudas desta cultura quando irrigadas com Ãgua salina. Considerando os atributos de qualidade de muda verifica-se que o ambiente a cÃu aberto se mostrou superior, notadamente em valores baixos e moderados de salinidade / The salinity and radiation in excess are abiotic stresses that can affect the growth, productivity and plant metabolism. One alternative to minimize the deleterious effects of stress in plants is the use of organic inputs. Despite the intercontinental adaptability of noni plants are still scarce information on alternatives to minimize the effects of stress, these plants on Brazilian soil. The objective of this study was to evaluate the effects of salinity of irrigation water on the initial growth and metabolism of plants noni (Morinda citrifolia L.) grown in two environments, in the absence or presence of organic matter. The statistical design was a randomized block design arranged in split plot scheme, with 5 repetitions. The plots consisted of the cultivation environments (greenhouse and open sky), the subplots salinity levels of irrigation water (ECw: 0.3, 1.5, 3.0, 4.5 and 6.0 dS m-1), and the split were represented by the absence and presence of organic matter. The combination of these factors resulted in 20 treatments, each replicate consisted of three pots (one plant per pot), totaling 300 vessels. To facilitate the description of the results, the thesis is divided into four chapters. The first relates to the development and tolerance, the second gas exchange and morphological changes to the third organic solutes and the membrane damage and fourth mineral nutrition of soil and foliage. The variables used were: Height, dry mass of shoots (DMS), root (DMR), stem (DMS) and leaves (DML) determined at 30, 60, 90 and 110 DAT (Days after treatment application). With data from dried pasta of different plant organs calculated the salinity tolerance of these plants. Moreover, were determined stomatal conductance (gs), net photosynthesis (A), transpiration rate (E), water use efficiency (ratios A/E and A/g), relative chlorophyll content, leaf proline content, soluble protein, N-aminossolÃveis and soluble carbohydrates at 60 and 90 DAT. At 110 DAT were determined stem diameter, leaf area, leaf density, degree of leaf succulence, foliar concentrations of calcium, potassium, magnesium, nitrogen, sodium, electrical conductivity of soil saturation extract (CEes), the levels of calcium, magnesium, potassium and sodium. In general, the salinity of irrigation water caused a linear increase in CEs in organic solutes in Ca, Mg, N, Na, Cl and Na/K ratio and the effect observed in the open was more significant than in greenhouse atmosphere. On the other hand, the growth variables, gas exchange and chlorophyll content were decreased with increasing salinity of irrigation water. With regard to tolerance of plants tolerant noni showed moderate tolerance to salinity or when irrigated with water of 1.5 and 3.0 dS m-1, independent of the cultivation environment. A strong interaction between salinity and growth environment for most growth variables, and the noni plants under greenhouse conditions proved tolerant to salinity up to 6.0 dS m-1, which is more suitable environment for seedling production of this crop when irrigated with saline water. If the quality plants attributes are considered it is possible verify that the open sky environment was superior, main to low and moderate values of salinity

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / This work reports the biochemical characterization, cytotoxic and allergenic effects of a lipid transfer protein isolated from M. citrifolia seeds (McLTP1), with trypsin and alpha-amylase inhibition properties. McLTP1 was purified with a procedure involving trichloroacetic acid precipitation and gel filtration chromatography. This protein showed significant inhibitory activities against trypsin (767,10  8,36 TIU/mgP), chymotrypsin (25,36  0,86 IU/mgP), papain (65,419  0,152 IU/mgP) and alpha-amylase (24,40%). Atomic force microscopy displayed that McLTP1 oligomerized in tetramers showing a central channel. Fluorescence and CD assays revealed that the McLTP1 structure is highly stable, regardless of pH and temperature levels. In vitro, McLTP1 presented a selective cytotoxic effect to human ovarian cancer cells (OVCAR-8; IC50 of 16,6 μg/mL) and demonstrated hemolytic effect against fresh rabbit red blood cels. Similarly to other non-specific lipid transfer protein reported, McLTP1 showed allergenic properties in mice, being considered as a true food allergen since it was able to sensitize the animals via the gastrointestinal tract. / Morinda citrifolia L. à uma espÃcie nativa do Sudeste da Ãsia intensamente investigada em funÃÃo de suas propriedades terapÃuticas reportadas hà mais de 2.000 anos. Recentemente, uma proteÃna transferidora de lipÃdeos denominada McLTP1 (UniProt Accession Number: C0HJH5) foi isolada de sementes de noni pelo nosso grupo de pesquisa. McLTP1 à uma proteÃna termoestÃvel de massa molecular 9,4 kDa, resistente à proteÃlise e dotada de atividades moduladoras da inflamaÃÃo e da dor pela via oral, promissoras e inÃditas para esse grupo de molÃculas. Este trabalho objetivou caracterizar bioquimicamente McLTP1, bem como avaliar o seu potencial alergÃnico em camundongos, como etapas bÃsicas para o seu uso racional e seguro do ponto de vista farmacolÃgico. Em adiÃÃo, as propriedades terapÃuticas de McLTP1 foram tambÃm ampliadas, atravÃs da investigaÃÃo de seu efeito citotÃxico em diferentes linhagens de cÃlulas tumorais. A proteÃna em estudo foi isolada utilizando o protocolo jà estabelecido, envolvendo as etapas de precipitaÃÃo seletiva de proteÃnas do extrato total das sementes de noni com Ãcido tricloroacÃtico 2,5% e cromatografia de exclusÃo molecular. O ensaio de alergenicidade in vivo foi conduzido apÃs prÃvia aprovaÃÃo pelo Comità de Ãtica para Uso de Animais da Universidade Federal do Cearà e utilizou fÃmeas nulÃparas com massa corporal entre 25 e 30 g. McLTP1 apresentou in vitro atividades inibitÃrias de tripsina (767,10  8,36 UIT/mgP), quimotripsina (25,36  0,86 UI/mgP), papaÃna (65,419  0,152 UI/mgP) e alfa-amilase (24,40%). A atividade inibitÃria de tripsina de McLTP1 foi reduzida significativamente em temperaturas superiores a 37 ÂC, apresentando atividade residual de apenas 5,91% quando aquecida a 100 ÂC por 30 min. Essa atividade foi tambÃm influenciada pelo pH, sendo de apenas 30,13% e 39,05% quando a proteÃna foi incubada em tampÃes de pH 3,0 e 12,0. O padrÃo de oligomerizaÃÃo de McLTP1 demonstrou a formaÃÃo de agregados dimÃricos/tetramÃricos delimitando um canal central de diÃmetro de 4,4 nm. As anÃlises espectroscÃpicas mostraram que McLTP1 apresenta espectro de CD similar Ãquele apresentado por outras proteÃnas transferidoras de lipÃdeos e caracterÃstico de proteÃnas ricas em alfa-hÃlice. Espectro de CD de McLTP1 nÃo mostrou alteraÃÃes significativas em diferentes temperaturas e pHs, corroborando com os dados de estabilidade obtidos anteriormente. Diferentemente, em condiÃÃes redutoras (DTT 1 mM) o espectro de CD mostrou alteraÃÃo na estrutura secundÃria da proteÃna e os mÃnimos e mÃximos de elipticidade molar foram tambÃm alterados na presenÃa de micelas iÃnicas de SDS (10 mM). McLTP1 apresentou atividade citotÃxica seletiva contra cÃlulas de cÃncer de ovÃrio (Ovcar-8; CI50: 16,6 μg/mL), nÃo sendo citotÃxica para as cÃlulas tumorais de cÃlon humano (HCT-116), leucemia humano (HL-60) e glioblastoma humano (SF-295) testadas. McLTP1 foi capaz de promover hemÃlise significativa em hemÃcias de coelho a partir da concentraÃÃo de 0,005 mgP/mL. McLTP1 apresentou potencial efeito alergÃnico in silico e em camundongos imunizados pela via oral, induzindo a sÃntese de anticorpos IgG e IgG1. Tal como descrito na literatura para outras LTPs, anticorpos anti-McLTP1 produzidos em coelho foram tambÃm capazes de reconhecer proteÃnas presentes em extratos de Rosaceae, Cucurbitaceae e na polpa do fruto de noni. Os dados obtidos permitiram caracterizar parcialmente a proteÃna em estudo, bem como avaliar o seu potencial imunogÃnico apÃs administraÃÃo oral. Novos testes serÃo conduzidos objetivando avaliar a importÃncia clÃnica dessas respostas, uma vez que testes de toxicidade demonstraram que McLTP1 nÃo foi capaz de promover reaÃÃes adversas em camundongos, mesmo apÃs administraÃÃo da dose de 8 mg/kg por 28 dias.

published_or_final_version / Biological Sciences / Master / Master of Philosophy

Nous assistons durant ces trente dernières années à une croissance de la fréquence d'apparition des bactéries résistantes aux antibiotiques. Face à la récurrence des infections difficiles à traiter dues à ces bactéries pathogènes multi-résistantes, le renforcement de l'arsenal des antimicrobiens fait partir des préoccupations majeures de santé publique. À ce titre, une approche ethno-pharmacologique a été initiée dans le cadre d'une coopération entre le laboratoire de pharmacodynamie biochimique (Université Félix Houphouët-Boigny, Côte d'Ivoire) et le laboratoire universitaire de biodiversité et d'écologie microbienne(Université de Bretagne Occidentale, France). Dans cette approche, les habitudes traditionnelles d'automédication par les plantes médicinales ont été exploitées pour identifier de nouvelles sources de composés antimicrobiens. Dans une première partie de cette présente étude, une investigation sur les résistances bactériennes en Côte d'Ivoire a montré non seulement une évolution de la fréquence d'apparition des bactéries résistantes aux antibiotiques dans le temps, mais aussi une évolution de ces souches résistantes vers des différents types de multi-résistances. Dans la seconde partie, Morinda morindoides, une plante médicinale ivoirienne, a suscité notre attention pour la recherche de substances antimicrobiennes. À partir de 18 extraits des différents organes de cette plante, des tests d'activité antimicrobienne ont permis de justifier son utilisation en médecine traditionnelle. L'extrait à l'acétonitrile de la racine qui affiche l'activité la plus intéressante a servi pour isoler et caractériser 12 phytomolécules antimicrobiennes dont une se distingue par sa structure chimique originale, la morindoïdine. En plus de leurs paramètres antimicrobiens, d'autres propriétés biologiques de ces substances ont été évaluées telles que, leur pouvoir antioxydant, leur cytotoxicité, leur activité hémolytique et leur cible moléculaire. Cette évaluation a révélé un mode d'action sans doute proche de celui des quinolones.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-07-19T19:19:05Z No. of bitstreams: 1 MylenaTorres.pdf: 2864310 bytes, checksum: a7111bcb49d38339665fb9a2f9ef7055 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-19T19:19:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MylenaTorres.pdf: 2864310 bytes, checksum: a7111bcb49d38339665fb9a2f9ef7055 (MD5) Previous issue date: 2016-06-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Canine distemper and ehrlichiosis are two diseases affecting dogs, which have neurological symptomatology. The former is a contagious viral disease, with a high incidence and mortality that affects dogs and other canids; the latter is a bacterial disease highly frequent. The treatment of neurological diseases is based on drug administration, which may act both on etiologic agent as reducing the progression of the disease; or on supportive therapy, in cases of canine distemper. Looking for an alternative treatment for diseases with neurological conditions, low-cost, easy to administrate and with satisfactory effects in the remission of clinical signs, this study aimed to evaluate the effectiveness of Morinda citrifolia (noni) in the treatment of dogs with neurological symptoms caused by canine distemper virus and Ehrlichia canis. To evaluate the effect of M. citrifolia vegetable drug in animals with ehrlichiosis, ten animals were used, divided into two groups, one treated with the standard drug, doxycycline (10 mg/kg, BID, orally) and complex B vitamins (0.2 mg/kg, BID, orally), and the other treated with the experimental protocol (500 mg of M. citrifolia vegetable drug, SID, orally). Thirty days post-treatment, blood collection was made to evaluate hematological parameters. Although noni has led to the improvement of these parameters, especially platelets, animals did not show clinical cure, which demonstrated its inefficacy in the treatment of ehrlichiosis. To evaluate the effect of the vegetable drug in animals with canine distemper, fifteen animals were used, divided into two groups, one treated with the conventional drugs and the other with the experimental protocol. After thirty days, was observed that the animals treated with noni showed remission of clinical signs, demonstrating its efficacy against distemper neurological signs. As the last step of this work, were assessed the lesions in the central nervous system of dogs in an advanced stage of distemper, which were euthanized. Several brain areas of seven dogs were collected (cerebellum, rostral colliculus, caudal colliculus, obex, cerebellar peduncle and telencephalon), to perform histopathological and immunohistochemical analyses. In histopathological analysis was observed that the cerebellar peduncle was the most affected area and that inflammation and demyelination were the major findings. Immunohistochemistry confirmed histopathological results, with markings in all areas of the brain and, contrary to the literature; neurons were the cells that presented more viral particles. / A cinomose e erliquiose são duas doenças que acometem cães e que possuem sintomatologia neurológica. A primeira é uma doença viral contagiosa, de alta incidência e mortalidade, que acomete cães domésticos e várias espécies de carnívoros; já a segunda é de origem bacteriana, que apresenta alta frequência em cães. O tratamento de doenças neurológicas é baseado na administração de fármacos, que podem atuar tanto no agente etiológico como na diminuição da progressão da doença; ou na terapia de suporte, no caso da cinomose. Visando tratamentos alternativos para as doenças com quadros neurológicos, que sejam de baixo custo, fácil administração e com efeitos satisfatórios na remissão dos sinais clínicos, esta pesquisa teve como objetivo avaliar a eficácia de Morinda citrifolia (noni) no tratamento de cãescom sintomatologia neurológica causada pelo vírus da cinomose e pela Ehrlichia canis. Para avaliação do efeito da droga vegetal de M. citrifolia em cães com erliquiose, foram utilizados 10 cães, divididos em dois grupos, um tratado com a droga padrão doxiciclina (10 mg/kg, BID/PO) e complexo de vitaminas B (0,2 mg/kg, BID/PO), e outro tratado com o protocolo experimental (500 mg da droga vegetal de M. citrifolia, SID/PO). Após trinta dias, foi realizada coleta de sangue para avaliação dos parâmetros hematológicos. Foi observado que, embora o noni tenha levado à melhora dos parâmetros hematimétricos, principalmente das plaquetas, os animais não apresentaram cura clínica da doença, o que demonstrou a sua ineficácia no tratamento da erliquiose. Para a avaliação da droga vegetal de M. citrifolia em animais com cinomose, foram utilizados 15 animais, divididos em dois grupos, um tratado com as medicações convencionais e outro com o protocolo experimental. Após trinta dias, foi observado que os animais tratados com noni apresentaram remissão dos sinais clínicos, demonstrando sua eficácia no combate aos sinais neurológicos da cinomose. Como última etapa deste trabalho, buscou-se avaliar as lesões no sistema nervoso de cães com estado avançado de cinomose, que foram submetidos à eutanásia. Foram coletadas várias áreas do encéfalo de 7 cães (cerebelo, colículo rostral, colículo caudal, obex, pedúnculo cerebelar e telencéfalo) para análises histopatológicas e imunohistoquímicas. Após avaliação histopatológica, foi observado que a área mais afetada foi o pedúnculo cerebelar, e os principais achados foram processo inflamatório e desmielinização. A imunohistoquímica confirmou os resultados histopatológicos, com marcações em todas as áreas do encéfalo e, contrariando a literatura os neurônios foram as células que apresentaram mais marcações virais.