Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-23T17:34:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 248604.pdf: 837714 bytes, checksum: 019309fd773e7f81d605fc584437ac7a (MD5) / A proteína celular do prion (PrPC) é expressa em vários tipos celulares, especialmente em neurônios. Sua função fisiológica é desconhecida, no entanto, seu papel no desenvolvimento das doenças neurodegenerativas foi bem descrito, as quais resultam de uma mudança conformacional da PrPC para a forma scrapie (PrPSC). Vários estudos têm mostrado uma associação entre a PrPC, o metabolismo do cobre e a atividade antioxidante da superóxido dismutase (SOD). Contudo, os processos celulares envolvendo a PrPC, neste contexto, permanecem indefinidos. Considerando que o padrão de expressão protéica da SOD em vasos lesados foi similar ao verificado no cérebro de camundongos knockout para a PrPC, a hipótese do presente estudo foi que alterações da expressão da PrPC levariam à anormalidade da regulação do cobre e induziriam sub-atividade da SOD da parede vascular. Assim, nossos objetivos foram estudar se a expressão da PrPC sofre indução por agentes que desencadeiam o estresse do retículo endoplasmático (RE) e determinar seu envolvimento no que se refere à atividade da SOD. Análises de western blotting e RT-PCR foram usadas para determinar a ocorrência de alteração da expressão da PrPC na presença de estresse do RE. Células musculares lisas de aorta de coelho foram cultivadas por diferentes períodos de tempo (4, 8 e 18 horas), com agentes estressores do RE, angiotensina II (AngII, 100 nM), tunicamicina (Tn, 5 g/mL) e 7-cetocolesterol (7kc, 5 g/mL). A atividade da SOD foi determinada pelo método de inibição da redução do citocromo c, e a atividade basal da SOD foi 13,9 1,2 U/mg de proteína. O estresse do RE produziu diminuição significativa na atividade da SOD após incubação por 4 horas com Tn (29%) e 7kc (12%), 8 horas com Tn (37%), bem como, após 18 horas com AngII (42%) e 7kc (32%); inversamente, foi observado um aumento significativo na atividade da SOD nas células expostas a AngII (41%) durante 8 horas. A concentração celular de cobre, determinada através de espectroscopia de absorção atômica, foi cerca de 9 vezes maior nas células estimuladas com AngII por 8 horas. As análises de western blotting para as isoenzimas da SOD mostraram um perfil variado de expressão, em todos os tempos de incubação com os diferentes estímulos, que não se correlacionou com a atividade enzimática. A expressão da PrPC diminuiu após a exposição a todos os estímulos nos diferentes tempos de incubação. Os ensaios de RT-PCR mostraram aumento da expressão do mRNA para PrPC apenas nas células estimuladas durante 8 horas com os diferentes agentes estressores. A expressão do mRNA para PrPC também foi avaliada em fragmentos de artérias ilíacas de coelhos submetidos à lesão por cateter balão, com sobrevida de 7 e 14 dias, bem como logo após a lesão. Neste ensaio, a expressão do mRNA para PrPC apresentou aumento pronunciado no grupo avaliado logo após a lesão. Os resultados obtidos com os modelos de estresse do RE vascular aqui utilizados não demonstraram um perfil de atividade antioxidante para a PrPC. O que não descarta a hipótese desta proteína estar envolvida em outro tipo de resposta celular frente ao estresse oxidativo. Palavras-chave: superóxido dismutase, proteína celular do prion, estresse do retículo endoplasmático, células musculares lisas de aorta de coelho.

Orientador: Ellen Cristini de Freitas / Coorientador: Cleiton Augusto Libardi / Banca: Enrico Fuini Puggina / Banca: Hugo Tourinho Filho / Resumo: Sabe-se que o o treinamento de força (TF) promove aumento da massa muscular esquelética (i.e., hipertrofia muscular). Isso ocorre devido a frequentes aumentos na síntese proteica muscular (SPM) após cada sessão de TF. Quando a sessão de TF é sucedida pela ingestão de proteínas (PROT) de alto valor biológico, a SPM é ainda mais elevada, o que contribui também para maiores ganhos de força e massa muscular. Somado à esses efeitos, a associação do consumo de carboidrato (CHO) à PROT passou por especulações no campo científico, acreditando-se em efeitos aditivos do CHO nos processos de anabolismo muscular, além de mostrar-se determinante na recuperação muscular, como a ressíntese do glicogênio, que possui papel fundamental para a realização do exercício. Entretanto, esses achados foram investigados de forma aguda, fazendo-se necessário avaliar esses efeitos a longo prazo, visto que nem sempre as respostas agudas estão associadas as adaptações crônicas, ao menos no que diz respeito a hipertrofia muscular. Objetivo: Verificar o efeito da suplementação de PROT+CHO no VTT, hipertrofia e força muscular. Métodos: Participaram do estudo 22 indivíduos do sexo masculino, com idade entre 19 e 30 anos divididos em dois grupos: suplementação PROT e suplementação de PROT+CHO, os quais realizaram treinamento de força durante 8 semanas. A área de secção transversa muscular foi avaliada por meio de imagens de Ultrassonografia (US) e a força muscular através do teste de força máxima dinâmica (1RM... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Is well know that resistance training (RT) promotes an increase in a fat free body mass (i.e. muscular hypertrophy). It is due to frequents increase in muscle protein synthesis (SPM) after each RT session. When RT session is succeeded by high biological value protein ingestion (PROT), SPM is much more elevated, which also contributes to greater gains in strength and muscle mass. In addition to those effects, the association of carbohydrate consumption (CHO) to PROT has been speculated in a scientific field, believing in additive effects of CHO in muscle anabolism process, besides being determinant in a muscle recuperation, like glycogen resynthesis, which has a fundamental role to exercise realization. However, those founds were investigated in acute intervention, being necessary to evaluate such effects in a long term study, since not always the acute responses are associated to chronic adaptations, at least related to muscle hypertrophy. Objective: To evaluate the effect of PROT+CHO supplementation on VTT, hypertrophy and muscle strength. Methods: Twenty-two male subjects, between 19 and 30 years, divided into two groups: PROT supplementation and PROT + CHO supplementation, who underwent strength training for 8 weeks, participated in the study. The muscle cross-sectional area was assessed using Ultrasonography (US) images and muscle strength through the maximal dynamic force (1RM) test. Results: No significant difference (p> 0.05) in VTT was found between the groups. The two groups showed significant increases in strength (PROT + CHO: 33.44%, PROT: 35.88%) and AST (PROT + CHO: 14.73%, PROT: 13.37%) after 8 weeks of intervention (Pre). Conclusions: The CHO + PROT supplementation did not promote additional effect on performance (VTT), muscle hypertrophy and strength gain, when compared to PROT supplementation... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Sandra Leal Calais / Banca: Dagma Venturini Marques Abramides / Banca: Ana Cláudia M. Almeida Verdu / Resumo: Estudos com professores de escolas públicas indicam sintomas de estresse, de ansiedade e baixa qualidade de vida destes profissionais, porém, poucos apresentaram propostas de intervenção. A partir desta lacuna, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do Relaxamento Progressivo de Jabobson adaptado por Sandor nas medidas de estresse, ansiedade e qualidade de vida de professores de escolas públicas. Constituíram a amostra 105 professores de escolas públicas estaduais no desempenho de suas atividades de docência. Foram critérios de exclusão: presença de diagnóstico psiquiátricos, gravidez, estar em afastamento das atividades laborais como professor, ter tempo de função inferior a um ano. A amostra foi dividida em três grupos: intervenção (G1), palestra (G2) e passagem do tempo (G3). Para medidas da estresse, foram utilizados o ISSL e a EVENT; a qualidade de vida foi mensurada por meio do instrumento proposto pela Organização Mundial da Saúde: WHOQOL abreviado; para medida de ansiedade, utilizou-se o Inventário de Ansiedade Beck (BAI). As informações coletadas foram sintetizadas, quantitativamente, por meio das funções da estatística descritiva; utilizou-se teste ANOVA para análise interferencial e comparação entre mais de duas médias. Foi identificada melhora significativamente (p= 0,004) no pós-teste para medida de estresse com o ISSL. Verificaram-se melhoras na percepção do estresse no trabalho e na ansiedade no pós-teste para o G1, sem significância estatística, porém, claramente indicando uma tendência à melhora quando comparados os resultados com G2 e G3. A medida de qualidade de vida encontrada na amostra foi condinzente com o descrito na literatura e a diferença de avaliação entre os três grupos no pré e pós teste não foi estatisticamente significativa. Verificou-se, portante, ter havido alteração significativa nos sintomas de estresse apresentados para os participantes do G1 e, nas... / Abstract: Studies with public shocol teachers report symptoms of stress, anxiety and low life quality of these professionals, but few had intervention proposals. From this gap, the aim of this study was to investigate the effects of Jacobson's Progressive Relaxation adapted by Sandor in stress measures, anxiety and Quality of Life of public school teachers. This study smaple comprised 105 teachers from Brazil's public schools in their teaching activities. Exclusion criteria were: presence of pyschiatric diagnoses, pregnancy, being in removal of the activities as a teacher, or have less than one year working in this function. The sample was divided into three groups: intervention (G1), lecture (G2) and passage of time (G3). To stress measures, we used the ISSL and the EVENT; Quality of Life was measured using the instrumetn proposed by the World Helth Organizations. WHOQOL-bref, to measure anxiety, we used the Beck Anxiety Inventory (BAI). The data were summarized quantitatively by means of the functions of descriptive statistics; ANOVA was used for inferential analysis and comparison of more than two means. Significant improvement was found (p=0.004) in the post-test for stress measurement with ISSL. There have improvements in the perception of job stress and anxiety in the post-test for the G1, not statistically significant, however, clearly indicating a trend towards improvement compared the results with G2 and G3. The measure of quality of life in the sample were consistent with those described in the literature and the valuation difference between the three groups in the pre and post-test was not statistically significant. It is, therefore, there was a significant change in stress symptoms presented to the participants and the G1, the measures of anxiety and vulnerability of the participants before occupational stressors has been identified trend to improvement compared with the results of G2 and G3. It was found that comparing pre and... / Mestre

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:42Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10687.pdf: 1877074 bytes, checksum: a4c8dc96819854b6fe9209dc009690ba (MD5) / Tese em forma de artigo. Objetivo: Investigamos o efeito de dois protocolos de natação nas características morfológicas, contráteis e metabólicas dos diferentes tipos de fibras do músculo reto do abdome de rato. Métodos: Os ratos foram divididos em 3 grupos (N = 5 cada): a) grupo treinado 1h por dia (1h/dia), 2x por semana (2x/sem); b) grupo treinado 1h/dia, 5x por semana (5x/sem), ambos durante 9 semanas consecutivas; c) grupo controle: sedentário. Foram avaliados os pesos corporais, os diâmetros das fibras, pelo método de coloração HE, e a distribuição dos tipos de fibras pelas as propriedades metabólicas identificadas pela reação de NADH redutase e reação de ATP-ase miofibrilar. Resultados: O peso corporal aumentou no grupo treinado 2x/sem e diminuiu no grupo treinado 5x/sem em relação ao grupo controle. O diâmetro das fibras aumentou de 45,4 μm no grupo controle para 56,6 μm e 54,4 μm no grupo treinado 2x/sem e 5x/sem, respectivamente. Também foram observadas pequenas fibras angulosas atróficas. O exercício aeróbio remodelou a distribuição das fibras, aumentando a freqüência de fibras oxidativas lentas (SO) e oxidativas-glicolíticas rápidas (FOG) e diminuindo a freqüência de fibras glicolíticas (FG). Em resumo, a freqüência das fibras SO aumentou, enquanto a freqüência das FOG + FG diminuíram nos ratos treinados em comparação aos sedentários. Conclusões: Estes resultados mostram que os dois protocolos de exercício da natação aumentam prioritariamente o metabolismo aeróbio das fibras de contração lenta e intermediária, além de provocar grau variável de mudanças na morfologia das fibras. / TEDE

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:59:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 328682.pdf: 1289481 bytes, checksum: d3c73b57b619fdfc6698fa38bc425b09 (MD5) Previous issue date: 2014 / Doenças cardiovasculares são uma das principais causas de mortalidade em muitas partes do mundo, com a aterosclerose figurando como principal causa de oclusão coronariana, acidente vascular cerebral e aneurisma da aorta. A veia safena é a prótese vascular mais comumente usada para enxertos vasculares de pequeno calibre (< 6 mm). No entanto, 10% -40% dos pacientes não têm uma veia safena adequada para substituição de prótese devido à incompatibilidade de tamanho ou doença venosa. Abordagens de engenharia de tecidos estão sendo usadas para desenvolver métodos paliativos para essas patologias, como a construção de vasos sanguíneos artificiais. Este trabalho teve como objetivo a biossíntese de vasos artificiais a partir de celulose bacteriana (CB) produzida por Gluconacetobacter hansenii. Os vasos obtidos exibiram propriedades mecânicas comparáveis às dos vasos nativos e sua análise morfológica mostrou a presença de fases ligadas entre si, uma superfície densa e outra porosa, imitando a túnica íntima e média dos vasos nativos, respectivamente. A cultura in vitro das células musculares lisas de aorta humana no interior dos vasos de CB demonstrou a sua capacidade de suportar a colonização celular, tendo as células permanecido viáveis após 14 dias de cultura e apresentando uma morfologia alongada. Os vasos colonizados por sete dias seguiram para um reator de fluxo pulsante, onde permaneceram por mais sete dias em condição dinâmica. O vaso de celulose tecidual muscular apresentou a formação de uma monocamada confluente e direcionada paralelamente à direção do fluxo contínuo. Em condições de cultura dinâmica as células apresentaram maior viabilidade e capacidade de proliferação do que no controle estático, indicando que o ambiente celular propiciado pelo reator de perfusão mimetizam aqueles encontrados no sistema vascular natural. Estes vasos de CB constituem uma plataforma para aplicações como biorreator tecidual, permitindo ensaios com células e outros agentes terapêuticos, através de interações com a monocamada de células confluentes que responde à estimulação dinâmica de fluxo pulsante.<br> / Abstract : Cardiovascular diseases are one of the main causes of mortality in many parts of the world, with atherosclerosis figuring as the principal cause of coronary occlusion, stroke and aortic aneurysm. Saphenous vein is the most commonly used vascular prosthesis for small-caliber (< 6 mm) vascular grafts, however, 10%?40% of patients do not have a saphenous vein suitable for prosthetic replacement due to size mismatch or venous disease. Tissue engineering approaches are being used to develop palliative methods for these pathologies such as the construction of artificial blood vessels. Here we describe the biosynthesis of artificial blood vessels using Gluconacetobacter hasenii?s bacterial cellulose (BC) as scaffolding. The vessels obtained exhibited morphological and mechanical properties similar to native vessels and their morphology showed the presence of a dense and a porous phase, connected as a basis to mimic the intimal and medial layers of a blood vessel, respectively. In vitro cultures of human aortic smooth cells HASMCs in the presence of cellulose tubular scaffolds demonstrated their ability to support cell colonization, with cells remaining viable after 14 days of culture and showing an elongated morphology. Vessels colonized for seven days were placed in a pulsed flow reactor, where they remained for another seven days in dynamic condition. The cellulose muscle tissue vessel showed the formation of a confluent monolayer oriented parallel to direction in the continuous flow. In the interior of the vessels, cells in dynamic culture condition showed greater proliferation and cell viability compared to the static control. These BC vessels have proved to be a promising platform for the development of an in vivo-like bioreactor, allowing cell and drug assays on the confluent cell monolayer which responds to the dynamic stimulation of pulsatile flow.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 henrique_oliveira_ioc_mest_2014.pdf: 7127354 bytes, checksum: 38222c40296b518181621dea489e65c1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / T. gondii é parasito intracelular obrigatório, agente etiológico da toxoplasmose, doença com ampla distribuição mundial. Os transtornos mais severos (fase aguda) acometem pacientes imunocomprometidos. Hospedeiros imunologicamente sadios, uma vez infectados, apresentam cistos teciduais (fase crônica) de modo perene. Estudos sugerem que por possuírem um eficiente metabolismo energético, os principais tecidos eleitos para a cistogênese do T. gondii, são o nervoso e o muscular esquelético. O presente trabalho dedicou-se ao estudo das associações de mitocôndrias e do retículo endoplasmático (RE) à membrana do vacúolo parasitóforo (MVP) e à parede cística. Para tanto, foram utilizados bradizoítos e taquizoítos da cepa ME49 (tipo II) e culturas primárias de célula muscular esquelética (CME) e da linhagem C2C12. Nossas estratégias metodológicas contemplaram microscopia de fluorescência, microscopia eletrônica de transmissão, respirometria de alta resolução e ensaios de efeito de um inibidor da fosforilação oxidativa (ISA-34) sobre a cistogênese Os dados obtidos apontam a ocorrência de: (i) associações entre mitocôndrias com a parede cística; (ii) aspectos peculiares ultraestruturais decorrentes de associações entre mitocôndrias e RE (rugoso e liso) da CME com a MVP de vacúolos contendo bradizoítos; (iii) manutenção do metabolismo mitocondrial da CME pelo T. gondii, durante a fase crônica; (iv) efeito inibitório do composto ISA-34 sobre o desenvolvimento de cistos teciduais. Estes resultados, além de iniciarem uma linha de pesquisa inédita a respeito das respostas do metabolismo energético da CME frente à cistogênese de T. gondii, também abrem novas perspectivas para uma terapia alternativa voltada para a fase crônica da toxoplasmose / Toxoplasma gondii is an obligatory intracellular parasite, agent of toxoplasmosis, disease with a worldwide distribution. The most severe disorders (acute phase) affect immunocompromised patients. Immun ologically healthy individuals, once infected, develop tissue cysts (chronic phase) that can persist for the host life span. Studies suggest that an efficient energetic metabolism, as in nervous and skeletal muscle tissues, leads to the development of T. g ondii cystogenesis. The present work aims the study of the association of skeletal muscle cell (SkMC) mitochondria and endoplasmic reticulum (ER) to the parasitophorous vacuole membrane (PVM) and to the cyst wall (CW). Bradyzoites and tachyzoites from ME49 strain (type II) of T. gondii and SkMC cultures and C2C12 cell line were used. The methodological strategies employed were fluorescence microscopy, transmission electron microscopy, high - resolution respirometry and assay using ISA - 34, an inhibitor of oxid ative phosphorylation. Our data point out: (i) associations between mitochondria and CW; (ii) ultrastructural aspects of the association of SkMC mitochondria and ER (rough and smooth) with PVM of bradyzoite - containing vacuoles; (iii) m aintenance of SkMC mi tochondrial metabolism by T. gondii and, (iv) inhibitory effect of ISA - 34 on the tissue cysts development. These results stimulate further investigation concerning the response of SkMC energy metabolism during cystogenesis of T. gondii and also open novel perspectives for an alternative therapy against toxoplasmosis chronic phase

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-06. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:06Z : No. of bitstreams: 1 000858348.pdf: 597368 bytes, checksum: d4d5cee9a20d25ccaaea04e21adeec98 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Estudos com professores de escolas públicas indicam sintomas de estresse, de ansiedade e baixa qualidade de vida destes profissionais, porém, poucos apresentaram propostas de intervenção. A partir desta lacuna, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos do Relaxamento Progressivo de Jabobson adaptado por Sandor nas medidas de estresse, ansiedade e qualidade de vida de professores de escolas públicas. Constituíram a amostra 105 professores de escolas públicas estaduais no desempenho de suas atividades de docência. Foram critérios de exclusão: presença de diagnóstico psiquiátricos, gravidez, estar em afastamento das atividades laborais como professor, ter tempo de função inferior a um ano. A amostra foi dividida em três grupos: intervenção (G1), palestra (G2) e passagem do tempo (G3). Para medidas da estresse, foram utilizados o ISSL e a EVENT; a qualidade de vida foi mensurada por meio do instrumento proposto pela Organização Mundial da Saúde: WHOQOL abreviado; para medida de ansiedade, utilizou-se o Inventário de Ansiedade Beck (BAI). As informações coletadas foram sintetizadas, quantitativamente, por meio das funções da estatística descritiva; utilizou-se teste ANOVA para análise interferencial e comparação entre mais de duas médias. Foi identificada melhora significativamente (p= 0,004) no pós-teste para medida de estresse com o ISSL. Verificaram-se melhoras na percepção do estresse no trabalho e na ansiedade no pós-teste para o G1, sem significância estatística, porém, claramente indicando uma tendência à melhora quando comparados os resultados com G2 e G3. A medida de qualidade de vida encontrada na amostra foi condinzente com o descrito na literatura e a diferença de avaliação entre os três grupos no pré e pós teste não foi estatisticamente significativa. Verificou-se, portante, ter havido alteração significativa nos sintomas de estresse apresentados para os participantes do G1 e, nas... / Studies with public shocol teachers report symptoms of stress, anxiety and low life quality of these professionals, but few had intervention proposals. From this gap, the aim of this study was to investigate the effects of Jacobson's Progressive Relaxation adapted by Sandor in stress measures, anxiety and Quality of Life of public school teachers. This study smaple comprised 105 teachers from Brazil's public schools in their teaching activities. Exclusion criteria were: presence of pyschiatric diagnoses, pregnancy, being in removal of the activities as a teacher, or have less than one year working in this function. The sample was divided into three groups: intervention (G1), lecture (G2) and passage of time (G3). To stress measures, we used the ISSL and the EVENT; Quality of Life was measured using the instrumetn proposed by the World Helth Organizations. WHOQOL-bref, to measure anxiety, we used the Beck Anxiety Inventory (BAI). The data were summarized quantitatively by means of the functions of descriptive statistics; ANOVA was used for inferential analysis and comparison of more than two means. Significant improvement was found (p=0.004) in the post-test for stress measurement with ISSL. There have improvements in the perception of job stress and anxiety in the post-test for the G1, not statistically significant, however, clearly indicating a trend towards improvement compared the results with G2 and G3. The measure of quality of life in the sample were consistent with those described in the literature and the valuation difference between the three groups in the pre and post-test was not statistically significant. It is, therefore, there was a significant change in stress symptoms presented to the participants and the G1, the measures of anxiety and vulnerability of the participants before occupational stressors has been identified trend to improvement compared with the results of G2 and G3. It was found that comparing pre and...

Resumo: Na busca pela excelência sensorial de um produto, as características exigidas pelo consumidor são a maciez, a suculência e o odor, que estão diretamente ligadas a constituição proteica do produto, juntamente com os lipídeos e os carboidratos. Atualmente, o consumo de produtos cárneos no Brasil encontrase em constante crescimento, sendo que os de origem avícola são os principais expoentes. Para a análise da qualidade dos produtos, a avaliação da origem das proteínas musculares é fator de grande importância e algumas das técnicas que podem ser citadas para sua avaliação e quantificação são as técnicas eletroforéticas e densitométricas, muito utilizadas hoje como padrão para diversas pesquisas em alimentos. Para realização deste trabalho, partiuse de que as proteínas musculares de frangos, perus e avestruzes apresentam diferentes características estruturais devido à expressão gênica e suas estruturas primárias podem ser identificadas por técnicas eletroforéticas e, através da densitometria, quantificadas. Foram colhidos fragmentos de musculo peitoral de 10 aves de cada espécie abatidas em frigoríficos inspecionados. Realizou-se a extração proteica por maceração e centrifugação dos fragmentos, e posterior submissão a quatro técnicas eletroforéticas sendo elas a Eletroforese Nativa em Gel de Poliacrilamida, SDS-PAGE Não Denaturante, CELM-GEL® - Filme de Agarose Geral e Isoeletrofocalização em Phast-Gel. Os resultados obtidos demonstraram a obtenção de um padrão proteico para as espécies em estudo, podendo utilizá-las para diferenciação das espécies e com a densitometria demonstrou a ocorrência de variações quantitativas individuais que não comprometeram a padronização específica dos eletroferogramas / Abstract: In pursuit of a sensory product excellence, the characteristics required by consumers are tenderness, juiciness and smells, and all then linked directly to protein constitution of the product, along with lipids and carbohydrates. Currently, the consumption of meat products in Brazil is constantly growing, and the poultry origins are the main exponents. For the quality analysis of product, the evaluation of the origin of the proteins muscles is a factor of great importance and some of the techniques can be cited for their evaluation and quantification are the electrophoretic and densitometric techniques, widely used today as a standard for research on all food. For this study, we started with the muscle proteins of chickens, turkeys and ostriches have different characteristics due to structural gene expression and their primary structures be identified by electrophoretic techniques and by densitometry, it is quantified. Fragments from pectoral muscle were collected front of 10 birds of each species slaughtered in abattoirs inspected. The protein extraction was carried out by the maceration and centrifugation the fragments, and subsequent submission to four electrophoretic techniques with them: the Native Gel Electrophoresis, Polyacrylamide, SDS-PAGE not Denaturant, CELM-GEL ® - Film Agarose General and IEF in Phast-gel. The results obtained demonstrate the attainment of a standard protein for the species under review and may use them for differentiation of species and densitometry demonstrated the occurrence of individual quantitative variations did not affect the specific standardization of electropherograms / Orientador: Roberto de Oliveira Roça / Coorientador: Paulo Roberto Rodrigues Ramos / Banca: Germano Francisco Biondi / Banca: Nelson Massaru Fukumoto / Mestre

As Distrofias Musculares Progressivas constituem um grupo heterogêneo de doenças genéticas caracterizadas por uma degeneração progressiva e irreversível da musculatura esquelética. Recentemente, associaram-se defeitos do mecanismo de glicosilação da proteína &alpha;-DG com diversos tipos de distrofias musculares graves. Alterações nesse processo constituem, portanto um novo mecanismo patogenético nas doenças neuromusculares, abrindo novas possibilidades de estudo. Neste sentido, foram objetivos deste trabalho avaliar o perfil de expressão dos genes envolvidos na glicosilação da proteína &alpha;-DG em modelos murinos e em pacientes, e tentar relacionar com os diferentes processos distróficos. Verificamos que tanto camundongos normais como distróficos expressam os genes codificantes das glicosiltransferases na seguinte ordem: Pomgnt1>Large>Fkrp>Pomt1, em todas as idades e em todas as linhagens estudadas, sugerindo um mecanismo constante de regulação gênica, independente do crescimento, envelhecimento ou processo distrófico. Também observamos que a sua expressão não é influenciada pelo processo de degeneração/regeneração, uma vez que não houve concordância entre os animais com músculos mais afetados e degenerados (Largemyd e Lama2dy2J/J) e aqueles com músculos menos degenerados (Dmdmdx e SJL/J), e esse padrão se mantém quando se comparam músculos com graus de degeneração diferentes. Nos animais recém-nascidos, verificou-se um aumento de expressão significativo nas linhagens Dmdmdx e Largemyd e uma queda nas linhagens Lama2dy2J/J e SJL/J. Já nos animais adultos, verificou-se maior semelhança ao perfil dos camundongos controles normais da mesma idade, com exceção do gene Large que apresentou expressão diminuída em quase todos os animais em estudo. No músculo humano, observamos uma ordem do nível de expressão diferente do observado em camundongos, com POMT1>POMGnT1>FKRP>LARGE. Os pacientes com DMD apresentaram um aumento da expressão de todos os genes estudados, de forma similar ao observado no grupo de camundongos Dmdmdx recém-nascidos, sugerindo uma associação com a falta de distrofina. Os pacientes LGMD 2I não apresentaram redução significativa da expressão de FKRP, sugerindo que o processo de transcrição é normal, mas a tradução ou a função/atividade da enzima deve estar comprometida. Nos pacientes CMD 1A, onde a deficiência primária da &alpha;2-laminina não está associada a defeito de glicosilação da &alpha;-DG, observou-se redução na expressão de POMT1 e FKRP, sugerindo que, a deficiência dessas enzimas possivelmente não altera este processo. Na análise de proteínas, não se observou uma correlação direta com os resultados da expressão gênica das glicosiltrasferases, sugerindo mais uma vez que, por serem enzimas, essas proteínas funcionam de forma diferenciada quando comparadas a proteínas estruturais. Entretanto, nas reações com os anticorpos Anti-POMT1 e Anti-FKRP, os camundongos recém-nascidos apresentaram bandas adicionais de peso molecular maior, sugerindo que essas enzimas estão ligadas a outras proteínas ou entre si nos estágios iniciais de desenvolvimento muscular / Muscular Dystrophies (MD) are a heterogeneous group of genetic diseases characterized by progressive and irreversible degeneration of skeletal muscle. Recently, defects in &alpha;-DG glycosylation have been associated with different types of severe forms of muscular dystrophies. Therefore, alteration in this mechanism has been considered an important pathogenetic cause of muscle degeneration, opening new avenues for therapies. The main objective of this study is to evaluate the expression cascade of genes involved in the glycosylation of &alpha;-DG in murine models and in patients with different molecular defects causing MD. We found that both normal and dystrophic mice express the glycosyltransferases genes in the following quantitative order: Pomgnt1>Large>Fkrp>Pomt1, in all ages and in all studied strains, suggesting a constant mechanism of gene regulation, independent of growth, aging or dystrophic process. We also observed that this pattern of expression is not related to the degeneration/regeneration process, since there was no concordance between the animals with the most degenerated muscles (Largemyd and Lama2dy2J/J) or the less degenerated muscles (Dmdmdx and SJL/J). Additionally, both gastrocnemius (less degenerated in Dmdmdx) and diaphragm (more degenerated in Dmdmdx) presented the same pattern of expression. In newborn animals, a significant increased expression was observed in Dmdmdx and Largemyd and a decrease in Lama2dy2J/J and SJL/J. In adult animals, the expression profile of Pomt1, Pomgnt1 and Fkrp was similar in normal and affected mice, while Large showed a decreased expression in almost all affected animals. In human muscle, the quantitative order of expression of the 4 genes was: POMT1>POMGnT1>FKRP>LARGE, different from the mice. DMD patients showed an increased expression of all the studied genes, in a pattern similar as the observed in the newborns group of the murine Dmdmdx model, suggesting an association with the lack of protein dystrophin. LGMD 2I patients showed no significant reduction in FKRP expression, indicating a normal transcriptional process. In CMD 1A patients, there was a reduction in POMT1 and FKRP expression, in spite of a normal &alpha;-DG glycosylation observed in this disease, suggesting that the deficiency of these enzymes may not alter this process. At the protein level, we did not observe a direct correlation between protein quantities of glicosiltrasferases and gene expression, suggesting that enzymes regulation functions differently as compared with structural proteins. Interestingly, antibodies for POMT1 and FKRP detected, in newborn mice, additional bands of higher molecular weight, suggesting that these enzymes are linked to each other or with other proteins in the early stages of muscle development

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:57:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2785_1.pdf: 6843043 bytes, checksum: a6f702ab6c00652094883997742e770c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Insultos ocorridos em um período crítico no início da vida, como na gestação e/ou lactação, atuam como fator de impressão e podem repercutir em alterações fisiológicas na idade adulta, estabelecendo o futuro estado metabólico e hormonal da progênie, sendo este efeito denominado programação . A desnutrição materna parece reduzir a proliferação de mioblastos e a formação de fibras musculares do feto em desenvolvimento. Este estudo teve como objetivo verificar o efeito do treinamento físico moderado na morfologia de fibras dos músculos sóleo e extensor longo dos dedos (EDL) de animais submetidos à desnutrição por dieta baixa em proteína durante a gestação e lactação. Ratos machos Wistar (60 dias de idade) provindos de mães desnutridas durante a gestação e lactação (8% de caseína, n=5) ou controle (17% caseína, n=5), foram divididos em 4 grupos: controle (Cf, n=6), desnutrido (Df, n=6), controle treinado (CTf, n=6) e desnutrido treinado (DTf, n=6). O programa de treino consistiu em 8 semanas, 5 dias/semana, 60 min/dia a 70% do VO2max. O peso corporal e a taxa de crescimento foram avaliados diariamente durante o experimento. Após o período de treinamento, os músculos sóleo e EDL foram retirados para análise histológica dos tipos de fibras pelo técnica de ATPase. Os animais Df apresentaram uma diminuição de 60% na taxa de crescimento até os 60 dias de idade. A partir dos 60 dias, o grupo Df apresentou um aumento no ganho de peso corporal. No músculo EDL, o grupo CTf apresentou um aumento do percentual de fibras do Tipo IIa (CTf = 68,8 ± 0,7; Cf = 59,5 ± 1,1; p<0,05) e uma diminuição no percentual de fibras do Tipo IIb (CTf = 32,2 ± 0,6; Cf = 36,7 ± 1,1; p<0,05). Este mesmo resultado ocorreu para o grupo DTf quando comparado ao seu controle Df. No músculo sóleo, o grupo Df apresentou uma diminuição no percentual de fibras do tipo I (Df = 77,8 ± 0,5; Cf = 83,1 ± 0,5; p<0,05) e um aumento no percentual de fibras do tipo IIa (Df = 19,0 ± 0,4; Cf = 12,9 ± 0,4; p<0,05). Os animais do grupo DTf apresentaram um aumento no percentual de fibras do tipo I (80,3 ± 0,7) e uma diminuição no percentual de fibras do tipo IIa (17,2 ± 0,7) quando comparados ao grupo Df. Em conclusão, a desnutrição hipoprotéica durante a gestação e lactação tem efeito programador na proporção dos tipos de fibras musculares nos animais adultos. O treinamento físico moderado pode atuar como estímulo ambiental para as mudanças fenotípicas em fibras de músculos mantendo a proporção de fibras oxidativas e afetando minimamente a proporção de fibras glicolíticas mesmo em animais programados pela desnutrição