Orientador: Prof. Dr. Jorge Eduardo Fouto Matias / Co-orientadora: Profª. Drª. Maria de Lourdes Pessole Biondo-Simões / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 16/12/2016 / Inclui referências : f.49-50 / Resumo: A fim de abordar os efeitos da administração tópica do metronidazol na absorção local e neovascularização durante cicatrização experimental por segunda intenção, 108 ratos machos, Wistar, pesando entre 300-350g foram submetidos a uma ferida de pele de espessura total, circular, com 2cm de diâmetro. Os animais foram divididos em 5 grupos (18 cada grupo) de acordo com a concentração usada da solução de metronidazol (4%, 6%, 8%, 10% e 12%) durante todo o período do experimento os curativos foram realizados diariamente, cada subdividido em três tempos de análise ( após 3, 7 e 14 dias de observação). Amostras de sangue venoso para avaliação da concentração de metronidazol foram obtidas por punção cardíaca e manipuladas por cromatografia líquida de alta performance; neovasos formados foram demonstrados usando CD34 e vimentina por técnicas de imunoistoquímica. Análise estatística, incluindo comparações intergrupos e intragrupos foram calculados por testes não paramétricos de Kruskal-Wallis usando SSPS software e valor de "p" 0,05, significância estatística de 95%. O metronidazol esteve presente na corrente sanguínea em todos os grupos de metronidazol e momentos estudados mas não houve diferença estatística de acordo com a concentração de metronidazol usada ou o tempo de exposição da ferida à droga. Foi significante o número de neovasos formados (p=0,005) nas feridas tratadas com administração de solução de metronidazol tópico 6% e 8%. Concentrações séricas de metronidazol não foram afetadas pelo uso tópico das concentrações da solução de metronidazol topicamente ou pela duração do tempo de administração. O uso tópico de metronidazol em soluções de 6% e 8% em feridas com cicatrização experimental por segunda intenção melhorou significativamente a neovascularização local conforme avaliado pelas técnicas imunoistoquímicas CD34 e vimentina. Estes achados podem ser potencialmente usados em favor do processo de cicatrização de feridas. Descritores: Cicatrização. Metronidazol. Absorção cutânea. Neovascularização. Administração tópica. Fisiológica. Ratos. / Abstract: In order to address beneficial effects of metronidazole topical administration on local absorption and neovascularization during experimental second-intention healing, 108 Wistar male rats, weighing 300-350g were submmited to a circular, 2 cm diameter, total deep back skin wound. Animals were divided into five groups (18 each group) according to the metronidazole solution concentration used (4%, 6%, 8%, 10% and 12%) during the dressing performed daily all over the period of experiment which was subdivided into three times of analysis (after 3, 7 and 14 days of observation). Blood samples for metronidazole venous concentration were obtained from cardiac puncture and manipulated by High-Performance Liquid Chromatography; newly formed vessels were demonstrated using CD34 and vimentin immunohistochemistry techniques. Statistical analysis, including intergroups and intragroups comparisons was calculated by non-parametric Kruskal-Wallis test using SSPS software and p value of 0,05, statistical significance of 95%. Metronidazole was present at bloodstream in all metronidazole groups and moments studied but there was no statistical differences according to metronidazole solution concentration used or time of wound exposure to the drug. There was significantly more newly formed vessels (p=0,005) at the wounds treated by topical administration of 6% and 8% metronidazole solutions. Metronidazole serum concentrations are not affected by metronidazole solution concentration used topically or by the duration time of administration. Topical administration of metronidazole solutions at 6% and 8% in experimental second-intention skin wounds was able to improve significantly local neovascularization as assessed by CD34 and vimentin immunohistochemistry techniques. These findings can be potentially used in favor of the wound healing process. Keywords: Wound Healing. Metronidazole. Administration, Topical. Skin Absorption. Neovascularization, Physiologic. Rats.

Orientador: Luis Antonio Justulin / Resumo: Condições gestacionais adversas podem acarretar alterações morfofuncionais irreversíveis no embrião/feto, condição conhecida como Programação Fetal (PF). Dentre os modelos de estudos sobre PF, a restrição proteica intrauterina tem sido o mais utilizado. Considerando os resultados recentes que evidenciaram o atraso no desenvolvimento prostático de ratos submetidos à restrição proteica intrauterina, além do importante papel do suprimento vascular para a morfogênese prostática, o objetivo deste trabalho foi investigar os impactos da programação fetal induzida por restrição proteica materna sobre a próstata ventral da prole de ratos, com ênfase ao processo de angiogênese associado ao desenvolvimento glandular. Para tanto, foram utilizados ratos Sprague Dawley (n=15/grupo) nascidos de mães alimentadas com ração padrão (grupo controle-CTR, 23% de proteína) ou com ração hipoproteica (6% de proteína) durante a gestação (grupo RPG), ou durante a gestação e lactação (grupo RPGL). Após o período experimental, os animais foram pesados, eutanasiados e os complexos urogenitais (CUG) ou lobos prostáticos ventrais (PV) coletados nos dias pós-natal (DPN) 10 e 21, sendo ambos processados para análises histológicas e bioquímicas. Nossos resultados demonstraram redução do peso corpóreo, da distância ano-genital, além de atraso no desenvolvimento prostático na prole dos animais RPG e RPGL. Este atraso foi relacionado ao menor índice de proliferação e diferenciação celulares na próstata dos animai... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

A angiogênese é essencial no desenvolvimento neoplásico, associando-se às metástases à distância e recorrência em diversas neoplasias malignas. Em carcinomas colorretais, os parâmetros da análise digital de imagem e estereologia da angiogênese foram pouco estudados. Objetivo: avaliar parâmetros tridimensionais e a quantificação microvascular bidimensional nas diferentes apresentações morfológicas dos adenomas colorretais e no adenocarcinoma colorretal restrito à submucosa, a fim de determinar o papel da angiogênese nas diferentes etapas da seqüência adenoma-carcinoma e sua relação com as diferentes apresentações das lesões precursoras do carcinoma colorretal. Material e métodos: foi realizado estudo histórico de delineamento transversal, incluindo 115 lesões neoplásicas colorretais, ressecadas endoscópica ou cirurgicamente no período de 1997 a 2001, obtidas de pacientes do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e da Fundação Universitária de Gastroenterologia (FUGAST). Para análise da angiogênese foram utilizadas as técnicas de imuno-histoquímica, análise digital de imagem, quantificação microvascular e estereologia. Os resultados foram apresentados como mediana e intervalos interquartis. Resultados: a quantificação microvascular foi progressivamente mais elevada nas lesões polipóides com displasia de alto grau comparadas às de baixo grau. Quanto maior o grau de atipia observado, maior foi o número de microvasos (regressão linear, P < 0,05). O volume e extensão microvascular foram diferentes entre as fases evolutivas da neoplasia colorretal, resultando em aumento no volume 728 (416 - 1408) versus 178 (93 - 601) e extensão microvascular 242,4 (131,1 - 936,8) vs 24,0 (6,5 - 142,2) (P < 0,001) nas lesões polipóides com displasia de alto grau comparadas às de baixo grau, respectivamente. A quantificação microvascular foi progressivamente mais elevada, acompanhando a progressão neoplásica polipóide: displasia de baixo grau 41,8 (15,8 - 71,9), displasia de alto grau 60,0 (23,0 - 95,6) e carcinoma de submucosa 76,0 (37,5 - 132,6) (P < 0,001). Concomitante, o volume 956 (436 - 2188) vs 178 (93 - 601) e a extensão microvascular 534,6 (146,7 - 1262) vs 24,0 (6,5 - 142,2) foram mais elevados nos adenocarcinomas colorretais restritos à submucosa em relação às lesões polipóides com displasia de baixo grau, respectivamente (P < 0,001). Não foi encontrada diferença estatisticamente significativa na angiogênese entre os adenomas polipóides e não-polipóides através da quantificação 41,8 (15,8 - 71,9) vs 22 (16 - 40) e estimativa da extensão microvascular 24 (6,5-142,2) vs 17,5 (4,4-54,7), respectivamente. Conclusão: a utilização da análise digital de imagem e estereologia acrescentou maior objetividade e eficácia na metodologia de avaliação angiogênica, pois permitiu a precisa segmentação das áreas hipervasculares, a representação da morfologia tridimensional característica do suprimento vascular e a identificação de diferenças na microvascularização nas etapas evolutivas do câncer colorretal. / Angiogenesis is essential in the tumoral development, associating with metastasis at distance and recurrence in several malignant neoplasias. In colorectal carcinomas, the parameters of the digital image analysis and stereology of angiogenesis have been little studied. Objective: evaluate three-dimensional parameters and the bidimensional microvascular quantification in the different morphologic presentations of the adenomas and in the submucosal colorectal carcinoma, in order to determine the role of angiogenesis in the different stages of the sequence adenoma-carcinoma and its relationship with the different presentations of the precursory neoplastic lesions of the colorectal carcinoma. Material and methods: transversal historical study was carried out, including 115 colorectal neoplastic lesions, obtained by endoscopyc or surgical resection between 1997 and 2001, from the patients of the Hospital de Clínicas de Porto Alegre and of the Fundação Universitária de Gastroenterologia (FUGAST). For the analysis of angiogenesis, immunohistochemistry, digital image analysis, microvascular quantification and stereology were used. The results were presented as medium and interquartile range. Results: the microvascular quantification has gradually raised in the polypoid lesions with high degree dysplasia comparing to the ones of low degree. The bigger the degree of atipia, the higher was the number of microvessels (linear regression, P < 0,05). The volume and microvascular extension were different among stages of the colorectal neoplasia, resulting in an increase of the volume 728 (416 - 1408) vs 178 (93 - 601) and microvascular extension 242,4 (131.1 - 936,8) vs 24,0 (6,5 - 142,2) (P < 0.001) in the polypoid lesions with comparative high degree dysplasia to the ones of low degree, respectively. The microvascular quantification was gradually raised, following the polypoid tumoral progression: low degree dysplasia 41,8 (15,8 - 71,9), high degree dysplasia 60,0 (23,0 - 95,6) and submucosal carcinoma 76,0 (37,5 - 132,6) (P < 0.001). Concomitantly, the volume 956 (436 - 2188) vs 178 (93 - 601) and microvascular extension 534,6 (146,7 - 1262) vs 24,0 (6,5 - 142,2) were more elevated in the submucosal carcinoma in relation to the polypoid lesions with low degree displasia, respectively (P < 0.001). There was no significantly difference in angiogenesis between the poypoid and nonpolypoid colorectal adenomas through the quantification 41,8 (15,8 - 71,9) vs 22 (16 - 40) and estimate of microvascular extension 24 (6,5 - 142,2) vs 17,5 (4,4 - 54,7), respectively. Conclusion: the use of the digital image analysis and stereology added greater objectivity and effectiveness in the methodology of angiogenic evaluation, because it allowed the accurate segmentation of hypervascular areas, the representation of characteristic three-dimensional morphology of vascular supply and identification of differences in the microvascularization in the evolutive stages of the colorectal cancer.

Orientador: Cecilia Amelia Fazzio Escanhoela / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campínas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Segatelli_Vanderlei_M.pdf: 1173808 bytes, checksum: efbd82ac6962165e42a166dfef483327 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O carcinoma hepatocelular (CHC) destaca-se como uma das formas mais comuns de câncer no mundo, correspondendo a aproximadamente 90% das neoplasias primárias do fígado, sendo a cirrose seu mais importante fator de risco. A sua progressão, no entanto, depende de inúmeros fatores e, entre estes, a angiogênese assume papel fundamental, principalmente por ser o CHC um tumor altamente vascularizado. É sabido que tumores sólidos, ao atingirem volume de 1 a 2mm3, passam a ter seu crescimento dependente de neovascularização e no fígado esta se faz através de capilarização sinusoidal, processo pelo qual ocorrem alterações morfológicas nos sinusóides hepáticos, com perda das fenestrações e deposição de membrana basal. Neste estudo retrospectivo avaliamos a angiogênese, através dos marcadores imuno-histoquímicos CD34 e CD105 (Endoglina), com determinação da densidade microvascular (DMV) em 44 produtos de hepatectomia total, compreendendo 44 nódulos neoplásicos (CHC), 44 nódulos regenerativos (NR) e 15 nódulos com características microscópicas de lesões pré-malignas (ou Nódulos Displásicos - ND), sendo 8 de baixo grau e 7 de alto grau. A avaliação compreendeu a determinação da DMV no centro e na periferia de todos os nódulos. Para análise estatística foi utilizada análise descritiva com apresentação de medidas de posição e dispersão para variáveis contínuas; para a comparação dos grupos foi utilizada a ANOVA, considerando-se p<0,05 estatisticamente significante. O CD34 demonstrou positividade difusa no CHC, com valores médios da DMV de 38,3±12,6 e 34,2±11,2 no centro e periferia, respectivamente. Já o CD105 apresentou expressão sinusoidal predominantemente periférica no CHC, com valores médios da DMV de 6,2±4,1 e 10,7±4,4, com diferenças significativas entre os grupos (p<0,0001). Também foram observadas diferenças na imunoexpressão entre os marcadores em NR (p<0,0001) e ND (p<0,0019). Concluímos que existem diferenças na imunoexpressão do CD34 e CD105 entre os nódulos benignos e malignos, com gradual aumento da neovascularização, bem caracterizado pelo CD34, devido ao processo de capilarização sinusoidal. O CD105, expresso em "subset" de microvasos neoformados, pode ser um indicador de diferenciação diagnóstica entre NR e CHC / Abstract: Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common forms of cancer worldwide, accounting for about 90% of primary tumors of the liver. Cirrhosis is the most important risk factor for HCC. However, the progression of hepatocellular carcinoma is dependent on a number of factors. Among these factors, angiogenesis plays a major role, mainly because HCC is a highly vascular tumor. It is known that when solid tumors reach a volume of 1 to 2mm3 their growth depends on neovascularization. In the liver, this occurs through sinusoidal capillarization, a process by which morphologic alterations occur in the hepatic sinusoids, with loss of fenestrations and basement membrane depositions. In this retrospective study, we evaluated angiogenesis by using immunohistochemical markers CD34 and CD105 (Endoglin), with determination of tumor microvessel density (MVD) in 44 products of total hepatectomy, including 44 malignant nodules (HCC), 44 regenerative nodules (RN) and 15 nodules with microscopic characteristics of preneoplastic lesions (or Dysplastic Nodules-DN), 8 being low-grade and 7 high-grade. The evaluation encompassed measurement of MVD in the center and periphery of all nodules. For statistical analysis, a descriptive analysis with measurements of position and dispersion for continuous variables was used. ANOVA was used for group comparison, considering p<0.05 as statistically significant. CD34 demonstrated a diffuse positivity in HCC, with median MVD values of 38.3±12.6 and 34.2±11.2 in the center and periphery, respectively. On the other hand, CD105 exhibited sinusoidal expression predominantly in the periphery of the HCC, with median MVD values of 6.2±4.1 and 10.7±4.4, with significant differences between groups (p<0.0001). Differences in the immunoexpression between markers in RN (p<0.0001) and DN (p<0.0019) were also observed. In conclusion, there are differences in the immunoexpression of CD34 and CD105 between benign and malignant nodules, with a gradual increase in neovessel formation, well-characterized by CD34, due to a process of sinusoidal capillarization. CD105, expressed in a "subset" of newly formed microvessels may be an indicator of the diagnostic differentiation between RN and HCC / Mestrado / Anatomia Patologica / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: As feridas de pele apresentam alta prevalência no atendimento clínico de pequenos animais. Para o tratamento dessas lesões, por segunda intenção, inúmeros produtos já foram descritos buscando-se características como: melhor qualidade e redução no tempo do processo de cicatrização. O objetivo desse trabalho foi avaliar a solução de Tartarato de ketanserina (0,345%) e Asiaticosídeo (0,20%) como opção terapêutica, aplicada via tópica, no processo de cicatrização de lesões cutâneas em cães atendidos no Hospital Veterinário “Governador Laudo Natel” (Unesp-FCAV) de Jaboticabal-SP. Para isso, foi acompanhado o processo de cicatrização de dezenove feridas em cães, divididos em dois grupos de tratamento, o grupo controle (GC) com dez feridas e o grupo tratado (GT) com nove feridas. Os pacientes do GT receberam o produto teste, via tópica, e os pacientes do GC a solução salina 0,9% em momentos pré-determinados. As feridas foram avaliadas quanto às suas características macroscópicas e redução da área em diferentes momentos (T0: início do tratamento; T3: terceiro dia de tratamento; T7: sétimo dia de tratamento; T14: décimo quarto dia de tratamento). A mensuração da área foi realizada por planimetria digital do decalque das feridas, pelo programa computacional “ImageJ”. As variáveis da avaliação macroscópica foram analisadas por correspondência múltipla, com aplicação do teste qui-quadrado, com nível de significância P<0,05. Os dados obtidos da área nos diferentes momentos, foram submetid... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Skin wounds present high prevalence in the clinical care of small animals. For the treatment of these lesions, by means of second intention, numerous products have already been described looking for characteristics such as: better quality and reduction in the time of the healing process. The objective of this study was to evaluate the solution of ketanserin tartrate (0.345%) and Asiaticosídeo (0.20%) as a therapeutic option, applied topically, in the healing process of cutaneous lesions in dogs attended at the Veterinary Hospital "Governador Laudo Natel" (Unesp-FCAV) of Jaboticabal-SP. For this, the cicatrization process of nineteen wounds in dogs was divided into two treatment groups, the control group (GC) with ten wounds and the treated group (WG) with nine wounds. The GT patients received the test product, topical, and the patients of the GC received saline solution 0.9% at predetermined times. The wounds were evaluated for their macroscopic characteristics and reduction of the area at different times (T0: beginning of treatment, T3: third day of treatment, T7: seventh day of treatment, T14: fourteenth day of treatment). The measurement of the area was performed by digital planimetry of the wound decal, by the computer program "ImageJ". The variables of the macroscopic evaluation were analyzed by multiple correspondence, with application of the chi-square test, with significance level P <0.05. The data obtained from the area at the different moments were submitted to anal... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Denise Lopes / Resumo: O objetivo desse estudo é obter conhecimentos mais profundos sobre os mecanismos regulatórios da manutenção e principalmente do término da função lútea em cadelas gestantes e não gestantes. O perfil de P4 é muito semelhante em cadelas gestantes e não gestantes, porém começa a divergir aproximadamente no dia 60 da fase lútea. Nesse momento, evidencia-se um declínio abrupto de P4 nas cadelas gestantes, sinalizando a luteólise pré-parto,com aumento da PGF2α e grande atividade apoptótica no interior do corpo lúteo (CL). Diferente do mecanismo de cadelas não gestantes, em que a regressão lútea é passiva e pré-programada. No presente trabalho foi validada a expressão dos seguintes fatores angiogênicos - VEGFA, IGFBP5, Endotelina, THBS2 e TGFB1 em CLs de cadelas cíclicas e gestantes. Para tal, foi realizado o acompanhamento do ciclo estral de fêmeas em diestro cíclico (n=20) e as fêmeas do grupo gestante foram inseminadas artificialmente (n=20). Todas as fêmeas foram submetidas a ovariohisterectomia (OSH) nos dias 10, 20, 40 e 60 após a onda pré-ovulatória de LH. Os CLs coletados foram submetidos às técnicas de qRT-PCR e imunofluorescência. Para análise estatística, aplicou-se o teste t de student, sendo os dados analisados pelo programa GraphPadPrism 6 e considerado significativo quando p<0,05. Os resultados mostraram que os fatores angiogênicos selecionados foram diferencialmente expressos nos dias 40 e 60, especialmente no grupo das cadelas gestantes. Nos outros momentos avaliado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study is to obtain a deeper understanding of regulatory mechanisms of maintenance and especially of the end of the luteal function in pregnant and non-pregnant bitches. The profile of P4 is very similar in pregnant and non-pregnant bitches, but it begins to diverge approximately on day 60 of the luteal phase. At this moment, an abrupt decline of P4 is evidenced in the pregnant bitches, signaling the prepartum luteolysis: associated to an increase of the PGF2α and great apoptotic activity inside the corpus luteum (CL). Differently from non-pregnant bitches, where luteal regression is passive and preprogrammed. In the present work, it was validated the expression of the main angiogenic factors - VEGFA, IGFBP5, Endothelin, THBS2 and TGFB1 in CLs of cyclic and pregnant bitches. For this, the estral cycle of females in cyclic diestrus (n = 20) was monitored and the females of the pregnant group were artificially inseminated (n = 20). All females were submitted to ovariohysterectomy (OSH) on days 10, 20, 40 and 60 after the preovulatory LH surge. The collected CLs were submitted to qRT-PCR and immunofluorescence techniques. For statistical analysis, the student's t-test was applied, the data analyzed by the program GraphPadPrism 6 and it was considered significant when p <0.05. The results showed that the selected angiogenic factors were differentially expressed on days 40 and 60, especially in the group of pregnant bitches. No differences were observed in the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Andrigo Barboza De Nardi / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Carlos Henrique Maciel Brunner / Resumo: O carcinoma de células escamosas (CCE) é a segunda neoplasia maligna cutânea que mais acomete os cães. Apesar da cirurgia consistir na terapia de eleição, a eletroquimioterapia (EQT) vem sendo cada vez mais utilizada. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a resposta tecidual em CCE cutâneo em cães após 21 dias da EQT. Desta maneira, este é o primeiro estudo a avaliar as modificações nos fatores angiogênicos e reparação tecidual induzidas pela EQT em CCE cutâneo de em cães. Foram avaliados 11 cães, totalizando-se 18 lesões, antes da EQT (D0) e 21 dias após (D21). O protocolo de EQT consistiu na aplicação de sulfato de bleomicina seguida por cloridrato de doxorrubicina utilizando eletroporador LC BK-100. Foram determinados volume tumoral, índice mitótico, necrose microscópica, quantificação das fibras colágenas do tecido conjuntivo (pela coloração de Tricrômico de Masson) e a expressão imuno-histoquímica de fatores angiogênicos VEGF e CD31. Observou-se que a média do volume tumoral foi significativamente inferior ao 21º dia (D21: 21,99±37,55) após a realização da EQT (D0: 29,52±40,95) (p=0,044). Contudo, não foram encontradas diferenças para as demais variáveis (p>0,05). Conclui-se que, em CEC de cães, a EQT não foi capaz de alterar o índice mitótico, a necrose microscópica e as estruturas de colágeno, além dos fatores angiogênicos VEGF e CD31, após 21 dias do tratamento. Apesar disso, no mesmo momento de avaliação, redução significativa do volume tumoral pode ser observada. Su... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Squamous cell carcinoma (SCC) is the second most common cutaneous malignant neoplasm in dogs. Electrochemotherapy (ECT) is a recent technique in veterinary medicine that constitutes an alternative and effective form to treat SCC in dogs and cats. The aim of this study was to evaluate modifications in the angiogenic factors and tissue repair induced by ECT after 21 days of ECT. Eleven dogs were evaluated (18 lesions), before (D0) and after (D21) ECT. The ECT protocol consisted of the application of bleomycin sulfate followed by doxorubicin hydrochloride using the BK-100 LC electroporator. Tumor volume, mitotic index, microscopic necrosis, quantification of connective tissue collagen fibers (by Masson's trichrome staining) and immunohistochemical expression of angiogenic factors by VEGF and CD31 were determined. It was observed a significant reduction in size of the tumor volume after ECT (D0: 29.52 ± 40.95; D21: 21.99 ± 37.55) (p = 0.044). However, no differences were found in D0 and D21 for mitotic index, microscopic necrosis, collagen structures and angiogenic factors (p> 0.05). In conclusion, ECT is an effective technique to treat cutaneous SCC in dogs, however cell proliferation, necrosis and angiogenic factors were not affected after 21 days of ECT, suggesting a prior moment to be evaluated. Further studies on other angiogenic markers and tissue repair in cutaneous SCCs of dogs submitted to ECT are necessary. / Mestre

Tumores são definidos como microambientes compostos não só pelas células malignas, mas também por células endoteliais, fibroblastos e leucócitos, que promovem o crescimento tumoral e a angiogênese. Galectina-3, uma proteína que se liga a b- galactosídeos, é abundantemente expressa por monócitos/macrófagos, dentre outros leucócitos. Inúmeras evidências sugerem que galectina-3 atua como uma molécula reguladora da resposta inflamatória. Tendo em vista que o infiltrado inflamatório pode promover a progressão de tumores, o objetivo do presente trabalho foi avaliar se galectina-3, expressa tanto pela célula tumoral como pelas células estromais, modula o crescimento de melanoma. Para tal, células de melanoma murino Tm1 foram transfectadas com o gene de galectina-3. Ambos clones celulares (galectina-3 positivos e negativos) foram injetados na intrafáscia ou no subcutâneo de camundongos (fêmeas) C57BL/6 selvagens e/ou nocautes para o gene de galectina-3 para análise da implantabilidade e crescimento tumoral. Com relação à implantabilidade, não foi observado diferenças no estabelecimento de uma massa tumoral proliferativa em animais selvagens inoculados com células Tm1 transfectadas ou não com o gene de galectina-3 em animais selvagens. Em relação a taxa de crescimento dos tumores, nenhum animal nocaute inoculado com células Tm1 galectina-3 positivas apresentou tumores de dimensões mensuráveis até o 11º dia pós-inóculo. Independente do nível de expressão de galectina- 3 pela célula tumoral, os tumores originados nos animais nocautes apresentavam menor massa em gramas comparados ao grupo selvagem, sugerindo que galectina-3 expressa pelas células estromais promove o crescimento tumoral. Ainda, os tumores originados nos animais nocautes e no grupo selvagem inoculado com células Tm1 galectina-3 positivas apresentavam menor extensão de área necrótica do que os animais selvagens inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas. Interessantemente, os animais selvagens e nocautes inoculados com células Tm1 galectina-3 positivas apresentaram tumores com menor área vascular e menor número de estruturas vasculares funcionais quando comparados aos animais selvagens inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas. A análise de expressão gênica nos tumores mostrou que os níveis relativos de RNAm de VEFG (fator de crescimento de endotélio vascular) foram menores nos animais inoculados com células Tm1 galectina-3 positivas em relação aos inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas, indicando que galectina-3 expressa pelas células tumorais atua como uma molécula anti-angiogênica. Finalizando, o presente trabalho sugere que galectina-3 pode atuar como uma molécula pró- ou anti-tumoral, dependendo do tipo celular que a expressa no microambiente tumoral. / Tumors have been described as microenvironments composed not only by malignant cells, but also by endothelial cells, fibroblasts and leukocytes, which can promote tumor growth and angiogenesis. Galectin-3, a b-galactoside binding protein, is expressed by monocytes/macrophages and others leukocytes. In fact, several lines of evidence suggest that galectin-3 act as master regulators of the inflammatory response. Based on the fact that the inflammatory infiltrate can promote tumor progression, the proposal of this study was to evaluate if galectin-3, either from tumor or stromal cells could modulate melanoma growth. Tm1 murine melanoma cell line was transfected with the galectin-3 gene. Both clones (galectin-3 negative and positive) were injected in the foot pad or subcutaneous in female C57BL/6 wild-type (WT) and galectin-3 knock-out (KO) mice to tumor engraftment and growth analysis. There was no difference in the tumor engraftment between animas injected with Tm1 galectin-3 positive or negative cells. In addition, any knock-out mice injected with galectin-3 positive cells had measurable tumors up to day 11 post inoculation. Regardless the galectin-3 expression level in the melanoma cell, tumors from galectin-3 KO mice were smaller than those from WT animals, suggesting that galectin-3 expressed by stromal cells promotes tumor growth. Moreover, tumor necrotic area was smaller in KO mice and in wild-type animals injected with Tm1 galectin-3 positive cells compared to wild type animals injected with Tm1 galectin-3 negative cells. Interestingly, both vascular area and the number of functional vessels in animals injected with galectin-3 positive Tm1 cells were smaller in WT as well as in KO mice compared to the same animals injected with galectin-3 negative Tm1 cells. Gene expression analysis showed that VEGF (vascular endothelial growth factor) mRNA levels were smaller in wild type animals injected with Tm1 galectin-3 positive cells compared to those injected with Tm1 galectin-3 negative cells, indicating that galectin-3 expressed by tumor cells can act as an anti-angiogenic molecule. The present study suggests that galectin-3 can act either as a pro or antitumoral molecule, depending on which type of cell (tumoral or stromal) this lectin is expressed within tumor microenvironment.

INTRODUÇÃO: A propriedade de induzir angiogênese torna o omento um promissor pedículo para pré-fabricar retalhos. OBJETIVO: Estabelecer a área abdominal a ser pré-fabricada por um pedículo omental e analisar o potencial de pré-fabricação (PPF) conforme o tempo de espera entre a introdução do pedículo e a elevação do retalho. MÉTODOS: Foram utilizados 44 coelhos divididos em quatro grupos (A, B, C e D). No grupo A, um fragmento de pele, tecido subcutâneo e músculo cutâneo abdominal foi totalmente separado e ressuturado. Nos demais grupos, um pedículo omental, contendo os vasos gastromentais ligados distalmente, com área equivalente a 9 cm² foi transposto e suturado ao músculo cutâneo abdominal. Um segundo procedimento de incisão e elevação de um retalho contendo pele, subcutâneo e músculo cutâneo abdominal pediculado apenas pelo omento transposto, foi realizado, variando apenas o período de espera entre os dois procedimentos de 7, 21 e 56 dias para os grupos B, C e D respectivamente. Após 15 dias do último procedimento, os retalhos foram visualizados e as áreas viáveis foram calculadas através do programa de computador Image Tool®. Cortes de áreas viáveis foram imunocoradas pelo anti-CD31 para cálculo da densidade microvascular (DMV). RESULTADOS: Os valores médio e máximo das áreas viáveis no grupo D foram respectivamente 45,29 cm² e 99,37 cm² (PPF mediano = 5,03 e PPF máximo = 11,04). Não houve diferença significativa entre as áreas viáveis do grupo D e C. As médias da DMV dos grupos B, C e D foram respectivamente 24,54 vasos/mm², 33,20 vasos/mm² e 27,03 vasos/mm² e maiores do que as médias da DMV das áreas controles de 14,63 vasos/mm², 17,33 vasos/mm² e 18,12 vasos/mm². No grupo A, houve necrose total em todos os retalhos. CONCLUSÃO: O PPF mediano do pedículo omental foi de 5,03 vezes sua área e o tempo de espera para o segundo procedimento foi de, no mínimo, 21dias / INTRODUCTION: The angiogenic induction property of the omentum makes it a promising pedicle to prefabricate flaps. OBJECTIVE: To establish the abdominal area to be prefabricated by the omental pedicle and to analyze the prefabricate potential according to the time delay between the pedicle introduction and the flap release. METHODS: 44 rabbits were divided into four groups (A, B, C and D). In group A, a piece of skin, subcutaneous tissue and abdominal cutaneous muscle has been fully released and sutured again in its place. In other groups, a 9 cm2 omental pedicle containing the gastromental vessels distally tied has been transposed and sutured to abdominal cutaneous muscle. A second procedure, an incision and release of the flap that contained skin, subcutaneous and cutaneous abdominal muscle pediculated only by the omentum, has been carried out. The only variation was the time delay between the two procedures: 7, 21and 56 days for groups B, C and D, respectively. The flaps have been inspected 15 days after the last procedure, and the viable areas have been estimated using the software Image Tool®. The pieces of viable area have been immunostained using anti-CD31 allowing the estimation of the microvascular density. RESULTS: The mean and maximum viable areas in group D were 45.29 cm2 and 99.37 cm2 respectively (average prefabricate potential = 5.03 and maximum prefabricate potential = 11.04). There was no significant difference between the viable areas in groups C and D. The mean microvascular densities of groups B, C and D were 24.54 vessels/mm2, 33.20 vessels/mm2 and 27.03 vessels/mm2 respectively. This was higher than the mean microvascular densities of the control areas, which were 14.63 vessels/mm2, 17.33 vessels/mm2 and 18.12 vessels/mm2. In group A, there were total necrosis in all flaps. CONCLUSION: The prefabricate potential of the omentum was found to be 5.03 times its area and the delay time for the second procedure was, at least, 21 days

INTRODUÇÃO: As adaptações cardiovasculares decorrentes do treinamento físico aeróbio de natação são bem descritas na literatura, entre ela temos a angiogênese. O treinamento físico aeróbio é um dos estímulos que promove angiogênese. Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de RNA não codificadora de proteínas de diferentes células em diversos tecidos e estão envolvidos em processos angiogênicos, mas o papel dos miRNAs na angiogênese cardíaca decorrente ao treinamento aeróbico ainda não foi esclarecido. OBJETIVO: Analisar os efeitos de diferentes volumes de treinamento físico de natação sobre a expressão de microRNAs envolvidos na angiogênese cardíaca de ratos. MATERIAIS E MÉTODOS: Ratas Wistar (n=21) foram divididas em grupos Sedentário (SC), Treinado 1 (P1): natação 60min/dia, 5x/sem/10sem, com 5% de sobrecarga, Treinado 2 (P2): mesmo protocolo P1 até a 8ªsem, 9ªsem 2x/dia, e na 10ªsem 3x/dia. Após o período de treinamento, os corações foram retirados e o RNA total foi isolado para a análise da expressão de miRNAs no coração por microarray de miRNA e os miR-126, -let-7f, -221 e -222 foram confirmados por RT-PCR em tempo real. Analisamos ainda os alvos do miR-126, Spred-1 e PI3KR2, e a expressão de proteínas que compõem as vias de sinalização em que esses alvos interferem por Western Blotting. Avaliamos também: Frequência cardíaca (FC) e pressão arterial (PA) por pletismografia caudal, VO2 pico, hipertrofia cárdica (HC) pelo peso do Ventrículo esquerdo/Peso corporal (mg/g), razão capilar/fibra (C/F) por histologia, expressão proteica de VEGF e seus receptores. RESULTADOS: O treinamento aeróbico diminuiu a FC sem alterar a PA, VO2 pico aumentou 11% e 15% em P1 e P2, a HC foi de 17% e 30% em P1 e P2, a razão C/F aumentou 57% e 100% em P1 e P2, acompanhada de um aumento da expressão de VEGF (P1 =42%, P2 =109%). A expressão do miR-let-7f foi aumentada em P2 (140%) comparado aos outros dois grupos (SC = 100%; P1 = 113%), o miR- 221 teve sua expressão diminuida em ambos os grupos treinados comparados xiii ao grupo SC (SC = 100%; P1 = 71%; P2 = 74%), o miR-222 não apresentou diferença na sua expressão entre os grupos (SC = 100%; P1 = 76%; P2 = 81%) e a expressão do miR-126 foi aumentada em P1 (126%) e P2 (142%) comparados ao grupo SC, a expressão de ambos os alvos desse miRNA foi diminuida nos grupos treinados (Spred-1 SC = 100 ± 12,4; P1 = 60 ± 5,6; P2 = 61 ± 8,4; PI3KR2 100 ± 12,3; P1 = 61 ± 12,3; P2 = 21 ± 7,1). Essa diminuição da expressão dos alvos desse miRNA favoreceu um aumento da expressão de proteínas pertencentes as vias de sinalização da PIK3 e MAPKs. CONCLUSÃO: O treinamento aeróbico foi eficaz em promover um aumento da angiogênese cardíaca comprovada por uma maior razão capilar/fibra no coração dos animais treinados e por maior expressão proteica de VEGF, sendo ainda mais evidente nos animais que realizaram um maior volume de treinamento. Os miRNAs relacionados à angiogênese parecem estar envolvidos na regulação desse processo. Além disso, o miR-126 parece ser um dos principais miRNAs envolvidos nesse processo / INTRODUCTION: The cardiovascular adaptations resulting from aerobic physical swimming training are well described in the literature, between these adaptations we have the angiogenesis. The aerobic physical training is one of the stimulus that promotes angiogenesis. The micro RNAs are a class of non coding protein RNAs of different cells in different tissues and are involved in angiogenic processes, but the role of micro RNAs in cardiac angiogenesis due to aerobic training is not clear. OBJECTIVE: To analyze the effects of different volumes of swimming physical training on the expression of micro RNAs involved in angiogenesis in heart of rats. MATERIALS AND METHODS: Wistar female rats (n=21) were divided into groups Sedentary (SC), Trained 1 (P1): 60min/day swimming, 5x/week/10weeks with 5% overload, Trained 2 (P2): same protocol of P1 until the 8th week, 9th week 2x/day, and at 10th week 3x/day. After the training period, the hearts were removed and the total RNA was isolated to analyze the miRNAs expression in the heart by microarray of miRNA and the miRs-126, -let-7f, -221 and -222 were confirmed by real time RT-PCR. We also analyzed the targets miR-126, Spred-1 and PI3KR2, and the protein expression that form the signaling pathways that affect those targets by Western Blotting. We evaluated: heart rate (HR) and blood pressure (BP) by tail plethysmography, peak VO2, cardiac hypertrophy (CH) by weight left ventricle/ corporal weight (mg/g), capillary/fiber (C/P) ratio for histology, VEGF protein expression and its receptors. RESULTS: The aerobic training decreased the HR without change the BP, peak VO2 increased 11% and 15% in P1 and P2, the HR was 17% and 30% in P1 and P2, the ratio C/F increased 57% and 100% in P1 and P2, followed by an increase of VEGF expression (P1=42%, P2=109%). The miR-let-7f had its expression increased in P2 (140%) compared to the other two groups (SC = 100%; P1 = 113%), o miR-221 had its expression decreased in both trained groups compared to SC group (SC = 100%; P1 = 71%; P2 = 74%), the miR-222 showed no difference on its expression between the groups (SC = 100%; P1 = 76%; P2 = 81%) and the miR-126 expression xv was higher in P1 (126%) and P2 (142%) compared to SC group, the expression of both targets of this miRNA was decreased on trained groups (Spred-1 SC = 100 ± 12,4; P1 = 60 ± 5,6; P2 = 61 ± 8,4; PI3KR2 100 ± 12,3; P1 = 61 ± 12,3; P2 = 21 ± 7,1). This decrease of expression of this miRNA targets favor an increase of protein expression belonging to the PIK3 and MAPKs signaling pathways. CONCLUSIONS: The aerobic training was effective on promoting an increased of cardiac angiogenesis comproved by a higher ratio capillary/ fiber on the heart of trained animals and by a higher VEGF protein expression, being even more evident in animals that realized a higher volume training. The miRNAs related to angiogenesis seem to be involved in the regulation of this process. Besides that, the miR-126 seems to be one of the principal miRNA involved on this process