FIGUEIREDO, Jozi Godoy. Resposta inflamatória induzida pela lectina de sementes de Dioclea rostrata: mecanismos e mediadores envolvidos. 2007. 93 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2007. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-30T13:44:19Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_jgfigueiredo.pdf: 475156 bytes, checksum: 4a5e95b9694636cdf7236bcad874991c (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-11T23:42:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_jgfigueiredo.pdf: 475156 bytes, checksum: 4a5e95b9694636cdf7236bcad874991c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-11T23:42:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_jgfigueiredo.pdf: 475156 bytes, checksum: 4a5e95b9694636cdf7236bcad874991c (MD5) Previous issue date: 2007 / Lectins are proteins possessing a carbohidate moiety that are able to interact with biological systems eliciting a variety of effects. Vegetal lectins have been used as tools in the study of inflammation due to its ability to recognize carbohydrate residues in inflammatory cell membranes by means of its lectin domain. The present work studied the pro-inflammatory effects of the lectin from Dioclea rostrata seeds (Dros), a binder of α-methyl-D-manoside, on neutrophil migration ( NM ) [(in vivo and in vitro)]. The models of peritonitis, paw edema, and subcutaneous air pouch (in vivo), neutrophil chemotaxy and macrophage culture (in vitro) were utilized. It was found that Dros showed a pro-inflammatory activity in all of the above models. The increase in the number of macrophages by the pre-treatment of the animals with thioglycolate potentialized the Dros-induced NM. Also, the depletion of mast cells by the use of the substance 48/80 did not interfere in the lectin-induced NM. The above data suggest the involvement of macrophages but not mast cells in the mechanisms studied. The pre-treatment of the peritoneum with anti-inflammatory drugs like indomethacine, dexamethasone and thalidomide inhibited the NM. Dros induced chemotaxy in vitro and stimulated the synthesis / release of cytokines as TNF-α and IL-1 in addition to IL-10 and this way he/she suggests himself that more detailed studies are accomplished in continuities to this work to verify this lectin can be used in imunosupression models. In the paw edema model the lectin promoted an intense edema and a significant increase in the mieloperoxidase activity (when compared to the control group). The α-methyl-D-manoside reversted the Dros-induced NM and so it seems that Dros triggers the inflammatory response by means of the interaction of its lectin domain with sugars in the macrophage membrane. The present data suggest that Dros could be used as tools in biochemical and pharmacological studies. / Lectinas são proteínas que através de ligações a resíduos de carboidratos podem interagir com sistemas biológicos elicitando uma diversidade de efeitos. As lectinas vegetais têm sido utilizadas como ferramentas no estudo da inflamação devido a sua capacidade de reconhecer resíduos de carboidratos presentes nas membranas das células inflamatórias através de seus domínios lectínicos. Assim, investigou- se neste trabalho o possível efeito pró-inflamatório da lectina de sementes de Dioclea rostrata; ligadora de α-metil-D-manosídeo sobre a migração de neutrófilos (MN) [(in vivo e in vitro)]. Os modelos utilizados foram: peritonite, edema de pata e bolsa de ar subcutânea (in vivo), quimiotaxia de neutrófilos e cultura de macrófagos (in vitro). Foi verificado que a lectina apresentava atividade pró-inflamatória em todos os estudos realizados. O aumento do número de macrófagos através do pré-tratamento dos animais com tioglicolato potencializou a MN induzida por Dros; a depleção de mastócitos através do tratamento com o composto 48/80 não interferiu na MN da lectina. Sendo assim sugeriu-se o envolvimento de macrófagos e desconsiderou-se o de mastócitos. Na modulação farmacológica no modelo de peritonite feita através do pré-tratamento dos animais com drogas anti-inflamatórias, observou-se que indometacina, dexametasona e talidomida inibiram a MN. A lectina induziu quimiotaxia in vitro, estimulou a síntese/liberação de citocinas como TNF-α e IL-1, IL-10, desta maneira sugere-se que estudos mais detalhados sejam realizados em continuidades a este trabalho para verificar se esta lectina pode ser utilizada em modelos de imunosupressão. O α-metil-D-manosídeo reverteu a MN induzida por Dros, desta forma parece que a Dros desencadeia resposta inflamatória através da interação de seus domínios lectínicos com açucares presentes na membrana de macrófagos

A icterícia por hiperbilirrubinemia indireta afeta mais de 60% dos recém-nascidos a termo. O tratamento, quando necessário, é realizado através da fototerapia. Não existem estudos na literatura avaliando os efeitos da fototerapia na função dos neutrófilos de recém-nascidos. O melhor entendimento da função dos neutrófilos nos recém-nascidos antes e após a fototerapia seria importante para avaliar as possíveis repercussões na expressão dos neutrófilos desencadeadas pelo tratamento fototerápico. O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar a função dos neutrófilos, através da mensuração pela citometria de fluxo da expressão dos principais marcadores de superfície em recémnascidos ictéricos, antes e após 24 horas de fototerapia. Metodologia: Foram incluídos recém-nascidos com idade gestacional ≥ 35 semanas e peso de nascimento ≥ 2000g, que possuiam critérios da Academia Americana de Pediatria para tratamento fototerápico. Os critérios de exclusão foram: mal-formações congênitas, síndromes com alterações cromossômicas, erro inato do metabolismo, infecções do grupo STORCH, asfixia neonatal, sepse ou suspeita de sepse, exsanguineotransfusão, transfusão de hemocomponentes e uso de imunoglobulina. Foi realizada a avaliação de expressão da intensidade média de fluorescência (IMF) de CD10, CD11b, CD11c, CD15, CD16, CD18, CD62L, CD64 e CD66, antes do início e após 24 horas do início da fototerapia. Foram utilizados o teste T de Student para análise dos dados. Resultados: Foram incluídos 25 recém-nascidos no estudo, com idade mediana de 53 (27.5-75.5) horas de vida e bilirrubina média de 13.6±2.85 mg/dL. Não houve diferença estatística na expressão de CD11b, CD15, CD18, CD62L, CD64 e percentual de neutrófilos antes e após 24 horas de fototerapia. Ocorreu aumento da expressão de CD10 8 (p=0.038) e CD16 (p=0.017) e redução da expressão de CD11c (p=0.023) e CD66acde (p=0.004) após 24 horas de fototerapia. Conclusão: Os recém-nascidos submetidos ao tratamento fototerápico apresentaram aumento da expressão de CD10 e de CD16 e diminuição da expressão de CD11c e de CD66acde após 24 horas de exposição, que pode estar relacionado a um efeito antiinflamatório da fototerapia nos recém-nascidos expostos a este tratamento. / Jaundice due to indirect hyperbilirubinemia affects more than 60% of term neonates. The treatment when necessary is carried out using phototherapy. There are no studies in the literature evaluating the effect of phototherapy on the function of neonates' neutrophils. A better understanding of the function of neutrophils in neonates before and after phototherapy would be important in order to assess potential effects on the expression of neutrofils triggered by the phototherapy treatment. The aim of this study was to assess and compare the function of neutrophils by measuring the expression of the main surface markers in icteric neonates, using flow cytometry, before and after 24 hours of phototherapy. Methodology: Neonates at a gestational age ≥ 35 weeks and at a birth weight ≥ 2000g who met the criteria of the American Academy of Pediatrics for phototherapy were included. The exclusion criteria were: congenital malformations, syndromes with chromosomal alterations, inborn errors of metabolism, infections of the STORCH group, neonatal asphyxia, sepsis or suspicion of sepsis, exchange transfusion, transfusion of blood components, and use of immunoglobulin. The evaluation of the MFI expression of CD10, CD11b, CD11c, CD15, CD16, CD18, CD62L, CD64 and CD66 was performed before and 24 hours after the initiation of phototherapy. The chi-square and Student T tests were used for data analysis. Results: Twenty-five neonates were included in the study at the mean age of 53 (27.5- 75.5) hours of life and with a mean bilirubin level of 13.6±2.85 mg/dL. There was no statistical difference in the expression of CD11b, CD15, CD18, CD62L, CD64 and percentage of neutrophils before and after 24 hours of phototherapy. There was an increase in the expression of CD10 (p=0.038) and CD16 (p=0.017) and a reduction in 10 the expression of CD11c (p=0.023) and CD66acde (p=0.004) after 24 hours of phototherapy. Conclusion: The newborns submitted to phototherapy had increased expression of CD10 and CD16 and decreased expression of CD11c and CD66acde after 24 hours of exposure, which may be related to an anti-inflammatory effect of phototherapy on the neonates exposed to this treatment.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joao Carlos Santos Hocayen.pdf: 1596592 bytes, checksum: 1c59eade564ebfd74618e55ade223a6a (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Introduction. There are indications that an acute intoxication with ethanol has anti-inflammatory effects, reducing the exudation of neutrophils and increasing susceptibility to infections, especially with Streptococcus pneumoniae. However we do not know the time these inhibitory effects of cellular exudation and reduced microbicidal activity of leukocytes persist after one acute intoxication with ethanol. .Objective. To evaluate the time of duration of the inhibitory effects of exudation of neutrophils and reduction of microbicidal activity in a model of peritonitis induced by Staphylococcus aureus after an acute ethanol intoxication in mice. Methods. C57BL/6 mice received by gavage one dose of 7mg of ethane/g body weight. Control animals received the same volume of distillated water. One, 12, 24, 48 and 72 hours after ethanol intoxication all mice received intra-peritoneal injection of Staphylococcus aureus (0.5 ml containing 6 to 9x108 CFU/mL of ATCC 25923 strain). Six hours later the animals were euthanized, and the peritoneal cavity rinsed with PBS / EDTA 0.01 M; one aliquot was used CFU counts and the other for global and specific count of cells in the exudates, using a Neubauer chamber and a cytospin to obtain smears that were stained by fast staining method with Dipquick. CFU counts were made by the method of serial dilution. Results. All animals receiving ethanol showed signs of intoxication, which reached a state of profound lethargy and all animals were recovering 45 minutes later.The ethanol dose used induced thymic involution, evident 24 hours after alcohol ingestion, with recovery being evident after 120 hours. In animals that received ethanol a significant reduction in the number of cells in exudates was observed; this reduction was due to reduction of exudation of neutrophils up to 24 hours after ethanol intoxication. The number of mononuclear cells were similar in both groups. Microscopic analysis of the smears showed bacteria out of the cells, more frequently in the ethanol group and the number of CFU was lower in this group but the observed difference was not statistically significant. Conclusion. Results confirm the anti-inflammatory effects of an acute ethanol intoxication, with a significant reduction in exudates of neutrophils, but with no significant changes in exudates of mononuclear leukocytes. The microbicidal activity of peritoneal cavity against staphylococci was lower in the ethanol group although without statistical significance, possibly because the resident macrophages were less affected by the effects of ethanol / Introdução. Há demonstrações que uma intoxicação aguda pelo etanol tem efeitos antiinflamatórios, com redução da exsudação de neutrófilos e com aumento da susceptibilidade a bactérias, especialmente Streptococcus pneumoniae. No entanto não se conhece o tempo durante o qual persistem os efeitos inibidores da exsudação celular e da redução da atividade microbicida de leucócitos, após a intoxicação etílica aguda. Objetivos. Avaliar o tempo após uma intoxicação etílica aguda no qual persistem os efeitos inibidores da exsudação de neutrófilos e a redução da capacidade microbicida do exsudato inflamatório em um modelo de peritonite induzida por Staphylococcus aureus. Métodos. Camundongos C57BL/6 receberam, por gavagem, uma dose de 7mg de etanol/g peso corporal em solução a 40%. Uma, 12,24, 48 e 72 horas após, receberam uma inoculação intraperitoneal de Staphylococcus aureus (0,5 ml contendo 6 a 9x108 UFC/mL; cepa ATCC 25923). Seis horas depois, os animais eram eutanasiados e a cavidade peritoneal lavada com PBS/EDTA 0,01M; uma alíquota era utilizada para contagem do número de UFC e a outra para contagem global e específica das células do exsudato utilizando câmara de Neubauer e citocentrífuga para confecção de esfregaços, corados por corante hematológico rápido (Dipquick). A contagem de UFC foi feita pelo método de diluição seriada com semeadura em placas de ágar Müller-Hinton. Resultados. Todos os animais que receberam etanol apresentaram sinais de embriaguês, que chegou a um estado de letargia profunda do qual todos os animais se recuperavam em, no máximo, 45 minutos. A dose de etanol utilizada induziu involução do timo, evidente 24 horas após a alcoolização, mas com recuperação após 120 horas. Nos animais alcoolizados que receberam o inóculo do estafilococo houve redução significativa da exsudação celular, devido a redução da exsudação de neutrófilos, até 24 horas após a ingestão do etanol. A análise dos esfregaços mostrava maior quantidade de bactérias fora das células no grupo etanol e o número de UFC foi maior no período avaliado, mas a diferença não foi estatisticamente significativa. Conclusão. Confirma-se os efeitos antiinflamatórios da intoxicação etílica aguda, com redução significativa no exsudato de leucócitos, até 24 horas após a exposição ao etanol; essa redução decorre especialmente da redução da exsudação de neutrófilos, já que o número de mononucleares exsudados no período avaliado foi semelhante nos dois grupos experimentais. O poder microbicida da cavidade peritoneal frente aos estafilococos foi menor no grupo etanol embora sem significância estatística, possivelmente porque os macrófagos residentes foram menos afetados pelos efeitos do etanol

A periodontite é uma resposta inflamatória desencadeada por um complexo biofilme constituído por diversos microrganisnos, particularmente por bactérias anaeróbias, tais como Porphyromonas spp. e Fusobacterium spp. Essas bactérias produzem vários fatores de virulência capazes de atuar no início e progressão da doença. Cem amostras subgengivais foram analisadas, sendo 50 de cães com periodontite e 50 de cães sadios, obtendo-se 144 isolados bacterianos identificados como pertencentes aos gêneros Porphyromonas e Fusobacterium. A produção de hemolisinas e hemaglutininas, susceptibilidade aos soros humano, canino e equino, e susceptibilidade a dez antibióticos foram avaliadas, assim como a presença dos genes prtC (colagenase), fimA (fímbrias), tetQ e tetM (resistência à tetraciclina). Igualmente, a capacidade quimiotática de neutrófilos e a produção de IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945, IL-11 e IL-17, foram avaliadas. <font face=\"Symbol\">&#946-hemólise foi produzida por P. gulae, P. crevioricanis, P. cangingivalis, P. gingivicanis e P. circumdentaria. Dos 144 isolados, 21 P. gulae e 2 F. nucleatum aglutinaram eritrócitos humanos. A maioria dos isolados foi resistente à ação dos soros humano, equino ou canino. Todos os 144 isolados foram sensíveis à amoxicilina, clindamicina, tetraciclina, amoxicilina/clavulanato, cefoxitina e penicilina G. Três P. gulae, 2 P.macacae e 2 P. canifelinum abrigaram o gene tetQ e apenas um F. nucleatum e um P. catoniae foram positivos para a presença do gene tetM. As espécies P. gulae, P. cangingivalis e P. circumdentaria abrigaram o gene prtC. A maioria dos isolados abrigou o gene fimA tipo I e nenhum deles abrigou o gene fimA tipo V. Somente nas P. gulae foi observada a presença de cápsula pela microscopia eletrônica de transmissão. Todos os isolados estimularam quimiotaxia dos neutrófilos. Interleucinas IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 e IL-11 foram detectadas após estímulo com as espécies de Porphyromonas. As espécies de Fusobacterium não estimularam a produção de IL-11 e P. gulae induziu elevada concentração dessa citocina. Nenhum dos isolados estimulou a liberação de IL-17. / Periodontitis is an inflammatory response caused by a complex microbial biofilm, including anaerobic bacteria such as Porphyromonas spp. and Fusobacterium spp. Those species present several virulence factors which act on early step and during the disease evolution. One hundred of subgingival samples were analyzed, obtained from 50 dogs with and 50 without periodontitis. One hundred and forty four bacterial species were isolated belonging to both Porphyromonas and Fusobacterium genus. Hemolysin and hemagglutinin production, susceptibility to human, equine and canine sera, and antimicrobial susceptibility to 10 antibiotics were evaluated. In addition, the presence of gene prtC (collagenase), fimA (fimbriae), tetQ and tetM (tetracycline resistance), as well as neutrophils chemotaxis and IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945, IL-11 and IL-17 production were also determined. <font face=\"Symbol\">&#946-hemolysis was produced by P. gulae, P. crevioricanis, P. cangingivalis, P. gingivicanis and P. circumdentaria. Of the 144 isolates, 21 P. gulae and 2 F. nucleatum were able to agglutinate human erythrocytes. Most of the isolates were resistant to the action of human, equine or canine serum. All isolates were susceptible to amoxicillin, clindamycin, tetracycline, amoxicillin/clavulanate, cefoxitin and penicillin G. Three P. gulae, 2 P.macacae and 2 P. canifelinum harbored tetQ, and only one F. nucleatum and one P. catoniae were tetM positive. P. gulae, P. cangingivalis and P. circumdentaria harbored prtC. Most of the isolates harbored fimA I gene and none of them harbored fimA V. Only P. gulae showed capsule through transmission electron microscopy. All isolates induced neutrophils chemotaxis and IL-1<font face=\"Symbol\">&#946, IL-8, TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 and IL-11 were produced when neutrophils were stimulated by Porphyromonas spp. Fusobacterium spp. did not stimulate IL-11 production and P. gulae induced high concentration of cytokine. None of the isolates stimulated IL-17.

Orientador: Paulo César Ciarlini / Banca: Áureo Evangelista Santana / Banca: Aguemi Kohayagawa / Resumo: Embora a insuficiência renal ocorra com bastante freqüência na espécie canina, não se sabe se essa condição, a semelhança do que ocorre em humano, compromete o funcionamento dos poliformonucleares (PMN). O superóxido produzido pelo metabolismo oxidativo dos PMN exerce importante papel na resposta imune inata, destruído os patógenos fagocitados, entretanto, quando em excesso age de modo deletério promovendo a aceleração da apoptose. Testou-se a hipótese de que, a semelhança do que ocorrer em humanos, as toxinas presentes no soro de cães urêmicos alteram o metabolismo oxidativo e acelera a morte celular programada dos neutrófilos de cães normais. Para tal o sangue total e polimorfonucleares isolados de dez cães sadios foram incubados com soro urêmico. A produção de superóxido foi quantificada pelo teste de redução do tetrazólio nitroazul (NBT) e o índice apoptótico calculado pelo método morfométrico. A produção de superóxido gerada dos neutrófilos de sangue total tratados com soro urêmico apresentou significante redução (p < 0,05). Quando isolados e incubados com soro urêmico, apenas na metade das amostras os PMN apresentaram concomitantemente diminuição da produção de superóxido e aumento do índice apoptótico. Foi possível concluir que os componentes presentes no soro urêmico alteram ex vivo o metabolismo oxidativo e a apoptose dos PMN, fortalecendo a hipótese de que cães com de insuficiência renal têm sua imunidade inata comprometida. / Abstract: Although kidney failure occurs frequently on canine species, it is unknown if this condition, being similar to what occurs in human beings, jeopardized the functioning of the polymorphonuclear (PMN). The superoxide produced by the oxidative metabolism of the PMN plays an important role in the immune inherent answer, having destroyed the pathogenic phagocytized. However, when in excess it acts in a deleterious way promoting the acceleration of apoptosis. It was tested by the hypothesis that, similar to what occurs in humans, the toxins present in the serum of uremic dogs alter the oxidative metabolism and accelerates the programmed cellular death of the neutrophis of normal dogs. For that, the total blood and polymorphonuclears isolated from ten healthy dogs were incubated with uremic serum. The production of superoxide was quantified by nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) and the index apoptic was calculated by the morphometric method. The production of superoxide generated from the neutrophil of total blood treated with uremic serum presented significant reduction (P<0.05). When isolated and incubated with uremic serum, only on half of the sample the PMN presented concomitantly a reduction of production of superoxide and increase of apoptotic index. It was possible deduct that the components present in the uremic serum alter ex vivo the oxidative metabolism and the apoptosis of the PMN, consolidating the hypothesis that dogs having kidney failure have their inherent immunity jeopardized. / Mestre

Introdução: O adenocarcinoma pancreático é responsável pela maioria das neoplasias pancreáticas e está associado a um prognóstico extremamente pobre tanto devido à alta taxa de diagnósticos em estágio avançado quanto ao elevado índice de recidiva mesmo nos pacientes submetidos à ressecção com intenção curativa. Uma ferramenta que possa predizer adequadamente o prognóstico da doença é fundamental para uma melhor estratificação de risco. Evidências tem mostrado que a resposta inflamatória sistêmica está associada ao prognóstico de diversos tipos de câncer, sendo que a razão neutrófilos/linfócitos (NLR) e suas adaptações e a razão plaquetas/linfócitos (PLR) tem se mostrado promissores para este fim. Objetivo: O objetivo do presente estudo é avaliar o valor prognóstico das razões NLR, NLR derivada (dNLR) e PLR determinados por exames coletados no momento da internação e após tratamento quimioterápico paliativo numa população de pacientes com diagnóstico de adenocarcinoma pancreático, analisando ainda qual o valor de ponto de corte mais adequado para cada parâmetro. Além disso, pretendemos investigar se essas razões podem ter algum valor como fator preditivo de ressecabilidade no adenocarcinoma pancreático. Métodos: Foram coletados dados de pacientes com diagnóstico de adenocarcinoma pancreático confirmado por exame histopatológico atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre entre 2003 e 2013. As razões estudadas foram determinadas com base nos hemogramas coletados na internação dos pacientes e após dois ciclos de quimioterapia naqueles que foram submetidos a tratamento paliativo. Resultados: Na análise combinada de todos os pacientes incluídos no estudo, NLR basal, dNLR basal e PLR basal não mostraram evidência de ter impacto prognóstico na sobrevida (P= 0,394, P= 0,152, P= 0,177 respectivamente). No subgrupo de pacientes submetidos a quimioterapia paliativa, NLR, dNLR e PLR calculados pelos exames realizados após 2 ciclos de tratamento mostraram-se fatores prognósticos para sobrevida global (P=0,003, P=0,009 e P=0,001 respectivamente). Os pontos de corte mais adequados encontrados foram 4,11 para NLR (sensibilidade 83% e especificidade 75%), 362 para PLR (sensibilidade 91% e especificidade 62,5%) e 2,8 para dNLR (sensibilidade 87% e especificidade 62,5%). Nenhuma das razões se mostrou estatisticamente significativa como preditor para ressecabilidade (NLR, P=0,88; dNLR, P=0,99; PLR, P=0,64). Conclusões: As razões NLR, dNLR e PLR são úteis como marcadores prognósticos de sobrevida global em pacientes com adenocarcinoma pancreático submetidos a quimioterapia paliativa. Seu uso como preditor de ressecabilidade das lesões pancreáticas não foi demonstrado. / Background: Pancreatic adenocarcinoma is responsible for most of the pancreatic neoplasias and it is associated to an extremely poor prognosis due to diagnosis in advanced stage and the recurrence even among patients treated with curative intention. A prognostic tool is essential for a better risk stratification. Evidence has shown that systemic inflammatory response is associated to the prognosis of a variety of cancers and the neutrophil/lymphocyte ratio (NLR) and adaptations and the platelet/lymphocyte (PLR) ratio seem promising for this purpose. Objetive: The objective of this study is to evaluate the prognostic value of NLR, derived NLR (dNLR) and PLR determined by blood counts collected at hospital admission and after palliative chemotherapy in patients with pancreatic adenocarcinoma, analyzing the ideal cutoff value for each parameter. Also, we intend to investigate if those ratios have some role in predicting the resectability of pancreatic adenocarcinoma. Methods: Data were collected of patients who had diagnosis of pancreatic adenocarcinoma confirmed by histopathologic exam in Hospital de Clínicas de Porto Alegre between 2003 and 2013. The studied ratios were determined by blood counts collected at hospital admission and after two cycles of chemotherapy in patients submitted to palliative treatment. Results: In the combined analysis including all patients, basal NLR, dNLR and PLR did not have prognostic impact in overall survival (P=0,394, P=0,152, P=0,177 respectively). In subgroup analysis of patients submitted to palliative chemotherapy, NLR, dNLR and PLR determined by blood count collected after two cycles of chemotherapy were prognostic for overall survival (P=0,003, P=0,009, P=0,001 respectively). The ideal cutoff values found were 4,11 for NLR (sensibility 83%, specificity 75%), 2,8 for dNLR (sensibility 87%, specificity 62,5%) and 362 for PLR (sensibility 91%, specificity 62,5%). None of these ratios has shown to be able to predict resectability (NLR, P=0,88; dNLR, P=0,99; PLR, P=0,64). Conclusions: NLR, dNLR and PLR are useful as prognostic markers of overall survival in patients with pancreatic adenocarcinoma submitted to palliative chemotherapy. Its use as resectability predictor could not be demonstrated.

A icterícia por hiperbilirrubinemia indireta afeta mais de 60% dos recém-nascidos a termo. O tratamento, quando necessário, é realizado através da fototerapia. Não existem estudos na literatura avaliando os efeitos da fototerapia na função dos neutrófilos de recém-nascidos. O melhor entendimento da função dos neutrófilos nos recém-nascidos antes e após a fototerapia seria importante para avaliar as possíveis repercussões na expressão dos neutrófilos desencadeadas pelo tratamento fototerápico. O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar a função dos neutrófilos, através da mensuração pela citometria de fluxo da expressão dos principais marcadores de superfície em recémnascidos ictéricos, antes e após 24 horas de fototerapia. Metodologia: Foram incluídos recém-nascidos com idade gestacional ≥ 35 semanas e peso de nascimento ≥ 2000g, que possuiam critérios da Academia Americana de Pediatria para tratamento fototerápico. Os critérios de exclusão foram: mal-formações congênitas, síndromes com alterações cromossômicas, erro inato do metabolismo, infecções do grupo STORCH, asfixia neonatal, sepse ou suspeita de sepse, exsanguineotransfusão, transfusão de hemocomponentes e uso de imunoglobulina. Foi realizada a avaliação de expressão da intensidade média de fluorescência (IMF) de CD10, CD11b, CD11c, CD15, CD16, CD18, CD62L, CD64 e CD66, antes do início e após 24 horas do início da fototerapia. Foram utilizados o teste T de Student para análise dos dados. Resultados: Foram incluídos 25 recém-nascidos no estudo, com idade mediana de 53 (27.5-75.5) horas de vida e bilirrubina média de 13.6±2.85 mg/dL. Não houve diferença estatística na expressão de CD11b, CD15, CD18, CD62L, CD64 e percentual de neutrófilos antes e após 24 horas de fototerapia. Ocorreu aumento da expressão de CD10 8 (p=0.038) e CD16 (p=0.017) e redução da expressão de CD11c (p=0.023) e CD66acde (p=0.004) após 24 horas de fototerapia. Conclusão: Os recém-nascidos submetidos ao tratamento fototerápico apresentaram aumento da expressão de CD10 e de CD16 e diminuição da expressão de CD11c e de CD66acde após 24 horas de exposição, que pode estar relacionado a um efeito antiinflamatório da fototerapia nos recém-nascidos expostos a este tratamento. / Jaundice due to indirect hyperbilirubinemia affects more than 60% of term neonates. The treatment when necessary is carried out using phototherapy. There are no studies in the literature evaluating the effect of phototherapy on the function of neonates' neutrophils. A better understanding of the function of neutrophils in neonates before and after phototherapy would be important in order to assess potential effects on the expression of neutrofils triggered by the phototherapy treatment. The aim of this study was to assess and compare the function of neutrophils by measuring the expression of the main surface markers in icteric neonates, using flow cytometry, before and after 24 hours of phototherapy. Methodology: Neonates at a gestational age ≥ 35 weeks and at a birth weight ≥ 2000g who met the criteria of the American Academy of Pediatrics for phototherapy were included. The exclusion criteria were: congenital malformations, syndromes with chromosomal alterations, inborn errors of metabolism, infections of the STORCH group, neonatal asphyxia, sepsis or suspicion of sepsis, exchange transfusion, transfusion of blood components, and use of immunoglobulin. The evaluation of the MFI expression of CD10, CD11b, CD11c, CD15, CD16, CD18, CD62L, CD64 and CD66 was performed before and 24 hours after the initiation of phototherapy. The chi-square and Student T tests were used for data analysis. Results: Twenty-five neonates were included in the study at the mean age of 53 (27.5- 75.5) hours of life and with a mean bilirubin level of 13.6±2.85 mg/dL. There was no statistical difference in the expression of CD11b, CD15, CD18, CD62L, CD64 and percentage of neutrophils before and after 24 hours of phototherapy. There was an increase in the expression of CD10 (p=0.038) and CD16 (p=0.017) and a reduction in 10 the expression of CD11c (p=0.023) and CD66acde (p=0.004) after 24 hours of phototherapy. Conclusion: The newborns submitted to phototherapy had increased expression of CD10 and CD16 and decreased expression of CD11c and CD66acde after 24 hours of exposure, which may be related to an anti-inflammatory effect of phototherapy on the neonates exposed to this treatment.

A fita nasal é amplamente utilizada em equinos durante o exercício, porém seus resultados são controversos e pouco conhecidos em animais que disputam provas de resistência. Os objetivos desse trabalho foram verificar se o uso da fita nasal influencia parâmetros durante o exercício predominantemente aeróbico, como frequência respiratória, volume tidal, volume minuto, tempos de inspiração e expiração, população de células por meio de lavado broncoalveolar, frequência cardíaca e lactato sanguíneo. Foram utilizados seis equinos da raça Árabe que realizaram dois testes de longa duração em esteira, sendo um teste com fita e outro sem a fita nasal. Durante os testes eram realizadas coletas de sangue, espirometria com obtenção de curvas de fluxo e volume respiratório, e registro da frequência cardíaca por meio de frequencímetro. Duas horas após o término do exercício foi realizado lavado broncoalveolar para realização de citologia da secreção pulmonar. Não houveram diferenças entre os parâmetros ventilatórios analisados entre os animais quando correram com ou sem a fita nasal. Entretanto, a frequência cardíaca foi em média menor durante o exercício nos animais que se exercitaram com a fita nasal (p&lt;0,05), podendo indicar uma melhor oferta de oxigênio durante o exercício de longa duração com o uso da fita nasal, apesar de não encontrarmos alterações nos parâmetros de fluxo e volume respiratório. Na avaliação citológica do conteúdo do lavado broncoalveolar, foi verificada maior porcentagem de neutrófilos após o exercício nos animais que se exercitaram com a fita nasal (p&lt;0,05), indicando que o turbilhonamento na passagem do ar através da cavidade nasal pode ter diminuído permitindo que partículas maiores se depositassem em porções mais distais do sistema respiratório, induzindo uma resposta neutrofílica mais intensa. O uso da fita nasal parece influenciar alguns parâmetros durante e após o exercício em animais que realizam provas de longa duração. Outros estudos devem ser realizados para verificar se essa influência pode melhorar o desempenho desses animais em exercícios predominantemente aeróbicos / The nasal strip is widely used in horses during exercise, but the results are controversial and little known in animals that compete for endurance events. The aim of this study was to determine whether the use of nasal strips influence parameters during predominantly aerobic exercise, such as respiratory frequency, tidal volume, minute ventilation, inspiratory and expiratory times, population of cells by bronchoalveolar lavage, heart rate and blood lactate. Six Arabian horses were submitted to two low intensity tests on a treadmill, one of them with nasal strip and one without nasal strip. During the tests were carried out blood samples, airflow and volume curves with spirometry mask, and heart rate was recorded through heart rate monitor. Two hours after the exercise was performed bronchoalveolar lavage to perform cytology of pulmonary secretions. There were no differences among ventilatory parameters analyzed when the horses performed the exercise with or without the nasal strip. However, heart rate was lower on average during the exercise when the horses were exercised with nasal strip (p &lt;0.05), which may indicate a better supply of oxygen during the low intensity exercise with the use of nasal strip, despite we did not find changes in the airflow and respiratory volume parameters. In cytological evaluation of the content of bronchoalveolar lavage, increased percentage of neutrophils was observed after exercise in animals with nasal strip (p &lt;0.05), indicating that turbulence in the airflow through the nasal cavity may have diminished allowing larger particles to be deposited in distal portions of the respiratory system, inducing a more intense neutrophilic response. The use of nasal strips appears to influence some parameters during and after exercise in horses that perform low intensity and endurance tests. Further studies should be conducted to verify that this influence can improve the performance of these horses in predominantly aerobic exercises

Tempol (4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil piperidina-1-oxil) e outros nitróxidos cíclicos reduzem a injúria tecidual em modelos animais de inflamação por mecanismos que não são completamente entendidos. A mieloperoxidase (MPO) tem um papel fundamental na produção de oxidantes por neutrófilos e, portanto, é um importante alvo para anti-inflamatórios. Ao amplificar o potencial oxidativo do H2O2, a MPO produz HOCl e radicais livres através de seus intermediários oxidantes MPO-I [MPO-porfirina&#8226;+-Fe(IV)=O] e MPO-II [MPO-porfirina-Fe(IV)=O]. Esses fatos nos levaram a sintetizar e avaliar a capacidade inibitória sobre a atividade clorinante da MPO in vitro e in vivo do tempol e de três derivados hidrofóbicos substituídos na posição 4 do anel piperidina [(4-azido, 4-benzenosulfonil e 4-(4-fenil-1H-1,2,3-triazol-1-il)]. In vitro, todos os nitróxidos inibiram a clorinação da taurina mediada pela MPO a pH 7,4 com valores similares de IC50 (1,5-1,8 µM). As constantes cinéticas das reações do tempol com MPO-I (k = 3,5 x 105 M-1 s-1) e MPO-II, cuja cinética indicou um comportamento de saturação (K= 2,0 x 10-5 M; k = 3,6 x 10-2 s-1), foram determinadas. Modelagens cinéticas indicaram que, em presença de taurina, MPO não produz HOCl livre. Tomados conjuntamente, os resultados indicaram que o tempol age principalmente como um inibidor reversível da MPO por levar ao acúmulo de MPO-II e de complexo [MPO-II-tempol] que não participam do ciclo clorinante. Para examinar se nitróxidos inibem a atividade da MPO in vivo selecionamos como modelo a inflamação aguda induzida pela carragenina na pata de ratos. A atenuação da inflamação na pata mostrou correlação com a lipofilicidade do nitróxido em tempos iniciais, mas as diferenças nos efeitos foram pequenas (menor que 2 vezes) quando comparadas com as diferenças de lipofilicidade (maior que 200 vezes). Nenhuma inibição da atividade da MPO foi evidente in vivo porque os níveis de atividade nas patas dos ratos correlacionaram com os níveis de MPO. Do mesmo modo, em animais não-tratados ou tratados com nitróxidos, todos os parâmetros empregados para monitorar a inflamação (edema, níveis de proteínas oxidadas e nitradas e exsudação plasmática) correlacionaram com os níveis de MPO. Os efeitos dos nitróxidos in vivo foram também comparados com aqueles da hidrazida do ácido 4-aminobenzóico (ABAH) e da colchicina. Tomados conjuntamente, os estudos in vivo indicaram que os nitróxidos atenuam a inflamação induzida pela carragenina principalmente por inibirem a migração celular. De acordo com essa conclusão, estudos in vivo, mostraram que tempol diminuiu a migração de neutrófilos humanos e de cultura (HL-60 diferenciadas em neutrófilos) ativados com PMA ou fMLP com IC50 25 &#181;M. Nesse caso, a polimerização da actina é inibida apenas quando as células são pré-incubadas com tempol por 30 min. Nesse intervalo de tempo, o tratamento com tempol promove a formação de O2&#8226;- via flavoenzimas de maneira dependente da concentração. Subsequente ativação dos neutrófilos de cultura com PMA resulta também em produção intracelular de O2&#8226;- e H2O2 que é inibida pelo pré-tratamento com tempol (IC50 = 38 µM). Esses estudos preliminares sugerem que o tempol interfere na migração celular de neutrófilos por atenuar a formação intracelular de ROS. A importância da atividade peroxidásica da superóxido dismutase (hSOD1) in vivo é certamente muito mais restrita do que a da MPO em processos inflamatórios no geral. Todavia, essa atividade peroxidásica da hSOD1 pode ter um papel na na patogenia da esclerose lateral amiotrófica (ELA). Por essa razão, os efeitos do tempol sobre as consequências da atividade peroxidásica da hSOD1 (oxidação, dimerização, desenovelamento e agregação da enzima) também foram examinadas. Foi demonstrado que o tempol não interfere no ciclo catalítico da hSOD1, porém, inibe a dimerização da enzima, protegendo-a de desenovelamento e agregação. O nitróxido foi consumido no processo reagindo com o radical triptofanila no peptídeo 31VWGSIK36 como comprovado por MS. No conjunto, nossos estudos contribuem para esclarecer os múltiplos mecanismos pelos quais nitróxidos podem inibir processos oxidativos e inflamatórios. / Tempol (4-hydroxy-2 ,2,6,6-tetramethyl piperidine-1-oxyl) and other cyclic nitroxides reduce tissue injury in animal models of inflammation by mechanisms that are not fully understood. Myeloperoxidase (MPO) plays a key role in the production of oxidants by neutrophils and therefore is an important target for anti-inflammatory drugs. By amplifying the oxidative potential of H2O2, MPO produces HOCl and free radicals through its oxidizing intermediates MPO-I [MPO-porphyrin&#8226;+-Fe (IV)=O] and MPO-II [MPO-porphyrin-Fe (IV)=O]. In this context, we synthesized tempol and three more hydrophobic derivatives substituted in position 4 of the piperidine ring [(4-azido-4 benzenesulfonyl and 4-(4-phenyl-1H-1,2,3-triazol-1-yl)] and evaluated their ability to inhibit the chlorinating activity of MPO in vitro and in vivo. In vitro, all the nitroxides inhibited the chlorination of taurine mediated by MPO at pH 7.4 with similar IC50 values (1.5 to 1.8 &#181;M). The kinetic constants of the reactions of tempol with MPO-I (k = 3.5 x 105 M-1 s-1) and MPO-II, whose kinetic indicated a saturation behavior (K = 2.0 x 10-5 M; k = 3.6 x 10-2 s-1), were determined. Kinetic modeling indicated that in the presence of taurine, MPO does not produce free HOCl. Taken together, the results indicated that tempol acts primarily as a reversible inhibitor of MPO leading to accumulation of MPO-II and of the complex [MPO-II-tempol], which do not participate within chlorinating cycle. To examine whether nitroxides inhibit the activity of MPO in vivo, the acute inflammation induced by carrageenan in the rat paw was selected as model. The attenuation of inflammation in paws was correlated with the lipophilicity of the nitroxide in early times, but the differences in effects were small (less than 2-fold) when compared to the differences in lipophilicity (higher than 200 times). No inhibition of MPO activity was evident because the levels of activity in rat paws correlated with the levels of MPO. Similarly, in animals not treated or treated with nitroxides, all parameters used to monitor inflammation (swelling, levels of oxidized and nitrated proteins and plasma exudation) correlated with the levels of MPO. The effects of nitroxides in vitro were also compared with those of 4-aminobenzoic acid hydrazide (ABAH) and colchicine. Taken together, the in vivo studies indicated that nitroxides attenuate carrageenan-induced inflammation mainly by inhibiting cell migration. According to this conclusion, in vitro studies showed that tempol decreased migration of human and culture neutrophils (HL-60 differentiation to neutrophils) activated with PMA or fMLP with IC50 = 25 &#181;M. In this case, actin polymerization is inhibited only when cells are preincubated with tempol for 30 min. During this time interval, treatment with tempol promotes the formation of O2&#8226;- via flavoenzymes in a concentration-dependent manner. Subsequent activation of culture neutrophils with PMA also results in intracellular production of O2&#8226;- and H2O2, which is inhibited by pretreatment with tempol (IC50 = 38 &#181;M). These preliminary studies suggest that tempol interfere in neutrophil chemotaxis by attenuating the formation of intracellular ROS. The relevance of the peroxidase activity of superoxide dismutase (hSOD1) in vitro is certainly much narrower than that of MPO. Nevertheless, this peroxidase activity may have a role in the pathogenesis of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Therefore, the effects of tempol on the consequences of the hSOD1 peroxidase activity (oxidation, dimerization, unfolding and aggregation of the enzyme) were also examined. Tempol inhibited the dimerization of hSOD1, protecting it from unfolding and aggregation, but not interfered in its catalytic cycle. The nitroxide was consumed in the process by reacting with the tryptophanyl radical of the segment 31VWGSIK36 as evidenced by MS. Overall, our studies contribute to clarify the multiple mechanisms by which nitroxides can inhibit oxidative and inflammatory processes.

O exercício físico intenso está associado à mudanças na quantidade, na função e na morte de neutrófilos. Tem sido proposto que a suplementação com óleo de peixe minimiza os efeitos imunossupressivos do exercício físico e que a fosfatidilcolina também poderia exercer importantes efeitos sobre a função de leucócitos. O objetivo do estudo foi o de investigar os efeitos da meia maratona e da suplementação com lecitina de soja ou óleos de peixe ricos em EPA ou DHA na apoptose de neutrófilos de atletas amadores. Quarenta e seis atletas amadores, foram avaliados antes e após duas competições de meia maratona. Na primeira meia maratona, os atletas não foram suplementados. As coletas de sangue dos atletas foram realizadas nas seguintes condições: Em repouso e imediatamente após a competição. No primeiro dia, após a primeira meia maratona, iniciou-se a suplementação. Os indivíduos foram suplementados diariamente com 3g de óleo de peixe ou lecitina de soja, por 60 dias, e divididos em 3 grupos: 1) Lecitina, 2) DHA e 3) EPA. Os atletas foram reavaliados 8 semanas após o início da suplementação. Já na segunda meia maratona, com todos os atletas suplementados, as coletas de sangue foram realizadas nas mesmas condições da primeira corrida. Neste estudo avaliamos os receptores da apoptose de neutrófilos (Fas e TRAIL), as moléculas de adesão (L-selectina e ICAM-1), a fragmentação de DNA e a externalização de fosfatidilserina. Além disso, foi avaliada a concentração plasmática das citocinas TNF-alfa, IL-8, IL-6, IL-4, IL-10 e IL-1beta. As enzimas creatina quinase e lactato desidrogenase, a concentração de mioglobina, proteína C reativa e o número de leucócitos e neutrófilos também foi determinada. A meia maratona aumentou a atividade das enzimas CK e LDH e a concentração de mioglobina em todos os grupos estudados, sendo que a suplementação não apresentou nenhum efeito sobre estes parâmetros. Já o número de neutrófilos e leucócitos, aumentaram após a meia maratona em todos os grupos, e a suplementação provocou este aumento somente nos grupos EPA e Lecitina. Em neutrófilos de atletas, a meia maratona diminuiu a expressão dos receptores Fas e TRAIL e das móleculas de adesão ICAM-1 e L-selectina em todos os grupos, por outro lado, aumentou a fragmentação de DNA (somente no grupo DHA) e a externalização de FS (DHA, EPA e Lectina). A meia maratona também elevou a concentração das citocinas IL-8, IL-6 e IL-10 em todos os grupos. Já a suplementação (DHA, EPA ou lecitina de soja) diminuiu a fragmentação de DNA e a expressão do receptor Fas em neutrófilos. Além disso, aumentou a expressão de TRAIL, ICAM-1, L-selectina e a externalização de fosfatidilserina. Em relação a concentração plasmática de citocinas a suplementação reduziu a concentração de TNF-alfa e aumentou a de IL-10 em todos os grupos. Enquanto que, a concentração de IL-4 aumentou somente nos grupos DHA e EPA. Concluímos que a suplementação com lecitina de soja apresenta efeitos semelhantes aos dos óleos de peixe ricos em EPA ou DHA sobre a função de leucócitos em atletas amadores. / Intense physical exercise is associated with changes in the number, function and death of neutrophils. It has been proposed that supplementation with fish oil rich minimizes the immunosuppressive effects induced by intense physical exercise and phosphatidylcholine could also have significant effects on leukocytes function. The aim of this study was to investigate the effects of a half-marathon and fish oil suplemmentation rich in EPA or DHA or soy lecithin suplemmentation on neutrophils apoptosis of amateur athletes. Forty-six recreational athletes were evaluated before and after two half marathons. In the first competition the athletes did not receive supplementation. Blood samples were collected in the following conditions: In rest and immediately after competition. On the first day, after the first half-marathon, supplementation began. The subjects were supplemented with 3 g of fish oil or soy lecithin daily for 60 days and divided into 3 groups: 1) Lecithin 2) DHA 3) EPA. The athletes were assessed 8 weeks after the start of supplementation. In the second half-marathon, with all the supplemented athletes, blood samples were collected under the same conditions of the first competition. In this study were evaluated the receptors of neutrophils apoptosis (Fas and TRAIL), adhesion molecules (L-selectin and ICAM-1), DNA fragmentation and phosphatidylserine externalization. Moreover, the plasma concentration of TNF-alpha, IL-8, IL-6, IL-4, IL-10 and IL-1beta cytokines was evaluated. The enzymatic activity of creatine kinase and lactate dehydrogenase, plasma concentration of myoglobin, and C-reactive protein and blood counts was also determined. The half-marathon increased the enzymatic activity of CK and LDH and the myoglobin concentration in all groups studied, and the supplementation had no effect on these parameters. The number of neutrophils and leucocytes increased in all groups after half marathon, and the supplementation caused this increase only in the EPA and Lecithin groups. In athletes neutrophils, the half-marathon decreased the expression of Fas and TRAIL receptors and of ICAM-1 and L-selectin adhesion molecules. On the other hand, it increased DNA fragmentation (only in the DHA group) and phosphatidylserine externalization (DHA, EPA and Lecithin groups). The half-marathon also increased concentrations of IL-8, IL-6 and IL-10 cytokines in all groups. The Supplementation (DHA or EPA or soy lecithin) decreased DNA fragmentation and Fas receptor expression in neutrophils. Moreover, increased expression of TRAIL, ICAM-1, L-selectin and phosphatidylserine externalization. In relation to cytokines plasma concentration the supplementation decreased TNF-alfa and increased the concentration of IL-10 in all groups. Whereas, IL-4 concentration increased only DHA and EPA groups. In conclusion, supplementation with soy lecithin has similar effects to the fish oils rich in EPA or DHA on leukocyte function amateur athletes.