O óxido nítrico (NO) é um radical livre gasoso que participa de uma série de processos biológicos fisiológicos sendo produzido por enzimas denominadas óxido nítrico sintases (NOS). Diversos estudos vem demonstrando sua participação na resposta inflamatória crônica, na qual as células inflamatórias, com destaque para os macrófagos, são estimuladas a sintetizarem NOS, que por esse motivo são denominadas induzíveis (iNOS) e passam a produzir o óxido nítrico que vai atuar na modulação do processo. A fim de comprovar sua participação filogenética na resposta granulomatosa, utilizou-se como modelo experimental a inoculação de onco-BCG na musculatura de tilápias-do-Nilo (Oreochromys niloticus) e de girinos de rã touro-gigante (Rana catesbeiana), na região plantar de tartarugas ?red ear? (Trachemys scripta elegans) e no coxim plantar de hamsters sírios (Mesocricetus auratus). Fragmentos da lesão foram colhidos aos 14, 28 e 42 dias pós-inoculação, fixados em Carnoy por quatro horas, sendo em seguida transferidos para álcool 70o GL. Procedeu-se a confecção de preparados histopatológicos segundo métodos de rotina que foram corados pelo método da hematoxilina e eosina. Imunoistoquímica foi realizada para a verificação da produção de óxido nítrico indiretamente através da marcação da iNOS com anticorpos anti-iNOS humana biotinilados produzidos em coelhos. Observou-se em todos os animais desenvolvimento de granulomas que mostraram tendência a maior organização aos 42 dias; as características celulares foram semelhantes, com algumas variações específicas. Constatou-se marcação imunoistoquímica em macrófagos presentes nas lesões produzidas pela inoculação de BCG em todos os grupos experimentais, exceto nos girinos aos 14 dias, cuja marcação foi irrelevante. Os resultados permitiram concluir que o óxido nítrico participa da resposta inflamatória granulomatosa, bem como a utilização de imunoistoquímica mostrou-se método eficiente para evidenciar sua produção em estudos filogenéticos. Pesquisas futuras deverão qualificar e quantificar mediadores químicos envolvidos na regulação da participação do óxido nítrico para melhor compreender sua fisiopatologia na modulação do granuloma inflamatório. / Nitric oxide (NO) is a gaseous free radical that takes part in a series of biological physiological processes. It is produced by enzymes called nitric oxide synthetases (NOS). Several studies have demonstrated its role in chronic inflammatory response, in which inflammatory cells, mainly macrophages, are stimulated to synthesize NOS, being called then inducible nitric oxide synthetases (iNOS). Nitric oxide is then produced and acts in the modulation of the process. In order to corroborate its phylogenetic role in granulomatous response, the inoculation of onco-BCG experimental model was used in the muscle of Nile tilapias (Oreochromys niloticus) and bullfrog tadpoles (Rana catesbeiana), in the plantar region of red eared sliders (Trachemys scripta elegans) and in the plantar pad of hamsters (Mesocricetus auratus). Fragments of the lesions were collected at 14, 28 and 42 days after inoculation, fixed in Carnoy for four hours, and then transferred to alcohol 70o GL. After that, histopathological slides were prepared following routine methods, and stained by hematoxylin-eosin. Immunohistochemical tests were performed in order to assess the production of nitric oxide indirectly by means of marking iNOS with biotinylated human anti-iNOS antibodies produced by rabbits. It was observed in all animals that the development of granulomas showed greater tendency of organization at 42 days; cell characteristics were similar, with some specific variations. Immunohistochemical marking was observed in macrophages present in lesions produced by BCG inoculation in all experimental groups, except in tadpoles at 14 days, which showed irrelevant marking. Results enabled the conclusion that nitric oxide takes part in granulomatous inflammatory response. Besides, the use of immunohistochemistry showed to be an efficient method for evidencing the production of nitric oxide in phylogenetic studies. Future research studies should qualify and quantify chemical mediators involved in the regulation nitric oxide role in order to better understand its physiopathology in the modulation of inflammatory granuloma.

Ao final da gestação de ratas se observa hiporeatividade a agentes constritores que tem sido atribuída à produção alterada de óxido nítrico (NO) e prostanóides. Nesse estudo foi observada a participação dos derivados da sintase de NO (NOS) e ciclooxigenase (COX) nas alterações de reatividade vascular à fenilefrina (FE) durante a gestação, bem como a interferência da tensão passiva inicial na importância relativa dessas enzimas. Foi avaliada a resposta vasoconstritora à fenilefrina em anéis de aorta de ratas não grávidas (NG, fase estro do ciclo estral) e grávidas (G, 19o e 20o dias de gestação) com o endotélio íntegro ou lesado, e após inibição da COX ou da NOS. Fixando a concentração de FE (10-7 M) e variando a tensão passiva inicial (0,25, 0,50, 0,75, 1 ou 2g) a que o anel foi submetido, foi observado aumento da magnitude da resposta vasoconstritora dependente do aumento do estiramento do tecido em G e NG, sendo anéis de aorta de G menos reativos à FE do que NG nas diferentes tensões. A retirada do endotélio, a inibição da NOS por L-NNA ou da COX por diclofenaco de sódio (DF) reverteram parcialmente essa hiporeatividade. A adição de concentrações cumulativas de FE em anéis de aorta de G e NG submetidos às tensões passivas de 0,5 e 1 g demonstrou, novamente, hiporeatividade associada à gestação. A retirada do endotélio foi capaz de igualar a resposta constritora à FE de G e NG. A inibição da via NOS/guanilato ciclase com L-NNA e ODQ aumentou a reatividade de G e NG não alterando as diferenças de ambos; no entando, utilizando 0,5 g de tensão passiva, a adição de L-NNA igualou a resposta constritora à FE de G e NG. A adição de DF diminuiu a reatividade de NG igualando os grupos nas tensões de 0,5 e 1,0 g. O relaxamento induzido por acetilcolina em vasos pré-contraídos com FE não foi alterado pela gestação. Os resultados sugerem que a hiporeatividade à fenilefrina em anéis de aorta de ratas ao término da gestação está relacionada a uma alteração da ação de fatores derivados do endotélio, da NOS e da COX, sendo que as condições iniciais determinam a importância relativa desses agentes. / Late pregnancy is associated with diminished reactivity to vasoconstrictor agents that may be mediated by altered production/release of nitric oxide (NO) and prostaglandins. In the present study the role of NO synthase (NOS) and cyclooxygenase (COX) derived products in the altered vascular reactivity to phenylephrine (PE) was investigated in the isolated aorta of late-pregnant rats at different basal conditions. The vasoconstrictor response to PE was recorded in aorta rings of non-pergnant (NP, estrous) and late pregnant rats (P, 19- to 20 day) in the presence and absence of the endothelium, and with COX or NOS inhibition. The contractile response to PE (10-7 M) augmented with increasing resting tension from 0.25 to 2.0 g in both P and NP aorta; however, the responses in aortic rings from P were smaller at all passive tension employed. Endothelium removal or NOS inhibition with L-NNA or COX inhibition with sodium diclofenac (DF) attenuated but did not abolished the hyporesponsivity of P aorta. Concentration-response curves induced by PE were also attenuated in aortic rings of P compared with those of NP at both 0.5 and 1.0 g of resting tensions. Endothelium removal potentiated the constrictor response induced by PE in both P and NP aortas and abolished the difference between the groups. The NOS/guanilato cyclase pathway inhibition enhanced the PE-induced responses in P and NP but aortas of P maintained at 1.0 g of passive tension still respond less to PE; at 0.5 g of resting tension, however, L-NNA abolished the differences between P and NP. DF blunted PE-induced contraction only in NP aorta at both resting tensions and abolished the difference between P and NP aorta responses to PE. The relaxant responses of aortic rings to acetylcholine were not influenced by pregnancy. These results suggest that the refractoriness to PE-induced contraction observed in aortic rings of late-pregnant rats is related to altered production of NOS and COX endothelial factors. In addition, the basal conditions determine the relative contribution of these factors to the observed refractoriness to vasoconstrictor agent.

A exposição ao estresse induz um aumento dos níveis de óxido nítrico (NO) e glutamato em estruturas do cérebro de ratos, as quais estão relacionadas com o transtorno de depressão maior (DM) em humanos. Ademais, o estresse está diretamente relacionado com o aumento da metilação do DNA, uma alteração epigenética repressiva, no hipocampo de animais. Estudos anteriores demonstraram o efeito tipo antidepressivo dos inibidores da enzima óxido nítrico sintase (NOS) em animais submetidos ao estresse. Porém não se sabe se há uma relação entre o aumento do NO e glutamato induzido pelo estresse e alteração na metilação do DNA em genes relacionado com a patofisiologia da DM. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos dos inibidores da NOS nas alterações comportamentais e nos mecanismos intracelulares relacionado com a metilação do DNA no cérebro de ratos submetidos ao teste do desamparo aprendido (learned helplessness - LH) e em cultura celular do hipocampo desafiadas com NMDA e dexametasona. Métodos: Estudo 1: Cultura primária de células do hipocampo ou cultura imortalizada HiB5 foram desafiadas/estressadas com NMDA (30µM,1h), L-arginina (500µM,1h) e/ou dexametasona (1µM, 1h ou 24h) e pré-tratadas com inibidor seletivo da nNOS (NPA, 100nM, 30min antes do desafio) ou com inibidor da DNMT (5-Aza, 10 µM, 30 min antes do desafio). A expressão dos genes para as enzimas DNMTs, BDNF, NT4, TrkB e nNOS foram avaliadas por RT-qPCR, a expressão proteica das enzimas DNMT3b e nNOS foram avaliadas por western blotting. Estudo 2: Ratos foram submetidos à choques inescapáveis (0,4 mA; 40 choques) na sessão de pré-teste do LH, após sete dias os animais foram submetidos a sessão de teste (choques escapáveis de 0,4 mA). Os animais foram tratados com inibidores da NOS 7-nitroindazole (7-NI;60mg/kg,i.p), aminoguanidina (AMG; 30mg/kg,i.p) ou veículo por 7 dias e submetidos a sessão de teste 1h, após a última injeção. A metilação global foi analisada por imunoensaio (ELISA) e a expressão dos genes DNMT3b, BDNF, nNOS e iNOS foram avaliadas por RT-qPCR, nas estruturas: cortex, hipocampo ventral e hipocampo dorsal. Resultados: Estudo 1: O pré- tratamento com NPA, atenuou o aumento da expressão do mRNA para a enzima DNMT3b, em cultura primária do hipocampo desafiada com NMDA, dexametasona e Larginina, e também em cultura HiB5 desafiada com dexametasona. Porém, o NPA não inibiu a diminuição da expressão do BDNF (exon 1, exon 4 e exon 9), em cultura primária de células do hipocampo desafiadas com NMDA. O pré tratamento com 5-Aza, não inibiu as alterações induzidas pelo NMDA em cultura primária de hipocampo. Estudo 2: Ratos submetidos ao estresse dos choques inescapáveis na sessão de pré-teste apresentaram aumento no número de falhas em escapar dos choques na sessão de teste (desamparo aprendido), um efeito que foi atenuado pelo tratamento com AMG ou 7-NI. Interessantemente, o efeito comportamental do estresse foi acompanhado por aumento nos níveis da metilação global do DNA e DNMT3b no hipocampo ventral (vHPC), que foi atenuado pelos pré-tratamentos com AMG e 7-NI, porém não houve diferença estatisticamente significante no córtex e no hipocampo dorsal dos ratos. Conclusão: Os dados apresentados demonstraram que tanto o estresse (in vivo) quanto o desafio com glicocorticóides, NMDA e L-arginina (in vitro) são capazes de modular a expressão daenzima DNMT3b e a metilação de DNA no hipocampo. O tratamento com inibidores da NOS reduzem os efeitos do estresse in vivo (comportamental e molecular) e in vitro. Em conjunto, os dados sugerem que a liberação de glutamato e NO durante o estresse pode modular a expressão da enzima DNMT3b, levando ao aumento da metilação do DNA em genes relacionados com a resposta de adaptação ao estresse. Essa é a primeira evidência de que o NO pode modular metilação do DNA induzida por estresse. / Stress exposure increases glutamate and nitric oxide (NO) levels, as well as DNA methylation in the hippocampus. However, it is not yet known if there is a causal relationship between these events. Moreover, both nitric oxide synthase (NOS) inhibitors and DNA methylation inhibitors counteract the behavioral effects of stress. Therefore, our aim was to investigate the effects of NOS inhibitors on stress-induced changes on behaviour, DNA methylation and genes expression in the hippocampus of rats submitted to learned helplessness - LH. Moreover, the effects of direct administration of dexamethasone (glucocorticoid), NMDA and L-arginine was investigated in hippocampal cell cultures. Methods: Study 1: Primary hippocampal cell culture was challenged with NMDA (30µM,1h), L-arginine (500µM,1h) or dexamethasone (1µM,24h) and pretreated with nNOS inhibitor (NPA, 100nM, 30min before the challenge) or with DNMT inhibitor (5-Aza, 10 µM, 30 min before the challenge). DNMTs, BDNF, NT4, TrkB and nNOS gene expression was assessed by RT-qPCR. DNMT3b and nNOS levels were assessed by western blotting. Study 2: Rats were submitted to inescapable footshocks and treated with the NOS inhibitors 7-nitroindazole (7-NI; 60 mg/kg, i.p) or aminoguanidine (AMG; 30 mg/kg, i.p], or vehicle for 7 days and tested 1h after the last injection with escapable footshocks. The number of escape failures during the test, global DNA methylation (ELISA) and DNMT3b, BDNF, nNOS and iNOS mRNA expression (RT-qPCR) was evaluated. Results: NPA pretreatment attenuated DNMT3b mRNA expression in hippocampus primary cell culture challenged with NMDA, dexamethasone or L-arginine. Similarly effects were observed in HiB5 cell challenged with dexamethasone. However, NPA pretreatment did not inhibit the decrease of BDNF (exon 1, exon 4 and exon 9) induced by NMDA. Moreover, pretreatment with 5-Aza did not inhibit the decreased of BDNF induced by NMDA in primary cell culture. Study 2: Stress exposure increased the number of escape failures in the test, which was attenuated by treatment with AMG or 7-NI, an antidepressant-like effect. Interestingly, the increased DNA methylation DNMT3b mRNA expression in the ventral hippocampus (vHPC) of stressed rats were also attenuated by treatment with both AMG and 7-NI. Conclusions: NOS inhibitors attenuated stress-induced depressive-like behavior, DNA methylation and DNMT3b mRNA expression in the vHPC. In vitro, selective nNOS inhibition also blocks corticosterone-, NMDA- and L-arginine-induced DNMT3b mRNA expression in hippocampal cell culture. Altogether, our results suggest that glutamate release, leading to NO production during stress may mediate intracellular mechanisms that regulate DNMT3b expression and DNA methylation. This is the first evidence indicating that NO modulates DNA methylation induced by stress.

O óxido nítrico além de poluidor ambiental, também desempenha diversas funções no organismo, por exemplo, trata-se de uma molécula sinalizadora em diversos processos metabólicos. Por causa disso, a detecção de NO é uma importante ferramenta para a medicina. Assim, existe um significante interesse tanto da indústria como da medicina no desenvolvimento de novos materiais que possam detectar oxido nítrico Os Nanotubos de Carbono de Paredes Múltiplas, intensivamente explorados desde sua descoberta em 1991, são considerados promissores em diversas aplicações devido a sua estrutura única e a possibilidade de realizar modificações as quais influenciam suas propriedades físicas e químicas. Já o ouro, conhecido por sua baixa atividade catalíca quando utilizado na forma cristalina, começou a ter seu poder catalítico explorado a partir de 1985, quando descobriu-se que, se utilizado na forma de pequenas partículas, este comporta-se mais como átomos individuais e torna-se mais catalítico que o ouro cristalino. Assim, o objetivo deste trabalho foi promover a funcionalização dos nanotubos de carbono, o que pode ser confirmado por MEV, FTIR e RAMAN, e, a partir dos grupos funcionais gerados, ancorar nanoparticulas de ouro em suas paredes, a fim de otimizar as propriedades catalíticas do material. O material gerado foi caracterizado morfologicamente e estruturalmente por MEV-FEG, EDX, Raio-X, RAMAN e UV-vis. Já a caracterização eletroquímica foi feita por voltametria cíclica frente ao K4[Fe(CN)6], com o qual foi possível mostrar um aumento na densidade de corrente de pico, o deslocamento do potencial de pico para valores menos positivos e também a diminuição do sobrepotencial, quando comparados o sensor Náfion®/AuNP/MWCNT/GC com o Náfion®/GC, Náfion®/MWCNT/GC e Náfion®/Ouro. O eletrodo proposto foi utilizado na determinação de Óxido Nítrico, em tampão PBS pH 4,4, utilizando a técnica de voltametria de pulso diferencial. A metodologia proposta apresentou um limite de detecção de 2,4x10-10 mol L-1 e um limite de quantificação de 7,9x10-10 mol L-1. Assim, este trabalho mostrou a potencialidade de utilização do eletrodo Náfion®/AuNP/MWCNT/GC como sensor eletroquímico para detecção e quantificação de óxido nítrico. / Nitric oxide (NO) is an environmental polluter, which also plays several roles in the body, for example, as a signaling molecule for many metabolic processes. Because this, detecting NO is an important tool in medicine. As a result, there was significant interest in both industry and medicine in developing new materials that can detect NO. Multiwall carbon nanotubes, that have been intensively explored since its discovery in 1991, are considered promising in many applications due to its unique structure and because it can be easily modified in order to tuning their physical and chemical properties. But the interest in using gold as the catalytic material appeared only in 1985, when was discovered that small particles form of gold behaves as individual atoms and it are more catalytic that crystalline gold. In this way, the objectives of this study were promoted the functionalization of carbon nanotubes - which could be confirmed by SEM, FTIR, Raman - and, with the functional groups generated, anchoring gold nanoparticles in their walls, in order to improve the catalytic properties of such material. The developed material was morphologically and structurally characterized by FEG-SEM, EDX, X-ray, Raman and UV-vis. As well, the electrochemical characterization was performed by cyclic voltammetry in K4[Fe(CN)6] solution. When Nafion®/AuNP/MWCNT/GC sensor was compared with Náfion®/GC, Náfion®/MWCNT/GC and Náfion®/Gold, its show an increase in current density peak, the peak potential displacement to less positive values and also decreased potential difference between the cathodic and anodic peak. The proposed electrode was used in the determination of nitric oxide in PBS buffer pH 4.4, which showed a detection limit of 2,4x10-10 mol L-1 and a quantification limit of 7,9x10-10 mol L-1 using the differential pulse voltammetry. Thus, this study demonstrated the potential use of Nafion®/AuNP/MWCNT/GC electrode as an electrochemical sensor in the nitric oxide detection and quantification.

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Neste contexto, parece existir um paradoxo relacionado aos critérios diagnósticos da SM, o que faz com que a presença da mesma seja subestimada em negros. Esta condição traz consigo a necessidade da busca de marcadores mais fidedignos das condições patológicas e do risco cardiometabólico destes indivíduos. Um possível biomarcador é o óxido nítrico (NO), cuja dosagem de metabólitos como nitrito/nitrato (NOx) tem se mostrado associada a alguns critérios da SM, como obesidade e diabetes, entretanto a literatura carece de trabalhos mais específicos para avaliar se níveis alterados de óxido nítrico estão associados com alterações metabólicas e doenças cardiovasculares na população negra. O objetivo deste estudo foi analisar os níveis de NOx como marcador de alterações cardiometabólicas em afrodescendentes, bem como sua relação com parâmetros laboratoriais na população negra. Participaram do estudo 202 indivíduos autodeclarados negros, a maioria mulheres, com idade média de 45 anos. A avaliação antropométrica demonstrou que a maioria da população estudada estava com IMC médio classificado como obesidade grau 1 e com cintura abdominal alterada. A SM foi verificada em 61% da amostra. Os níveis de nitrito/nitrato foram distribuídos em percentis, o percentil 50%=122,3μmol/L foi escolhido como ponto de corte. Valores de NOx<122,3 μmol/L foram associados com maiores Índices de Massa Corporal (p=0,015), circunferência abdominal (p=0,037) e circunferência de quadril (p=0,040). Quanto aos critérios bioquímicos, o NOx associou-se significativamente aos níveis de glicose (p=0049), triglicerídeos (p=0,046), albumina (p=0,034), ácido úrico (p=0,019) e uréia (p=0,052). Na avaliação inflamatória e de estresse oxidativo, apenas a carbonilação de proteínas (p=0,002) foi associada ao NOx, em que o dano foi maior nos indivíduos que tinham valores de NOx menor do que o percentil 50%. Não houve nenhuma associação entre o NOx e o perfil hematológico. Por estar relacionado principalmente com obesidade, dislipidemias, glicose e triglicerídeos, o NOx foi considerado um bom preditor de risco cardiometabólico na população negra, principalmente de progressão de doença, além de ser um teste adaptado facilmente à rotina laboratorial e possível de ser programado em analisadores automáticos e semi-automáticos, necessitando de pouca preparação da amostra. / The black population has a high cardiometabolic risk, however low incidence of metabolic syndrome (MetS). In this context, there seems to be a paradox related to the diagnostic criteria of MetS, which makes the presence of the same is underestimated in blacks. This condition shows the need to look for a more reliable markers of actual pathological conditions and cardiometabolic risk of these individuals. A possible marker is nitric oxide (NO). The dosage metabolic nitrite/nitrate (NOx) have been shown to be associated with certain criteria of the metabolic syndrome, such as obesity and diabetes, however the literature lacks more specific studies to assess whether altered levels of nitric oxide are associated with metabolic and cardiovascular disease among blacks. The aim of this study was to analyze the NOx levels as a marker of cardiometabolic alterations in Brazilian blacks, as well as its relationship with anthropometric, biochemical, inflammatory and oxidative stress in the black population. The study included 202 self-declared black people, mostly women, average age 45 years. Anthropometric assessment showed that most of the study population had an average BMI classified as grade 1 obesity and altered waist circumference. The metabolic syndrome was found in 61% of the sample. NOx levels were distributed in percentiles, the 50% percentile = 122,3μmol / L was chosen as the cutoff point. NOx values <122.3 μmol/L were associated with higher body mass index (p=0.01), waist circumference (p=0.03) and hip circumference (p=0.04). As to biochemical criteria, the NOx was significantly correlated to blood glucose levels (p=0.04), triglycerides (p=0.04), albumin (p=0.03), uric acid (p=0.01) and urea (p=0.05). In inflammatory and oxidative stress assessment, only protein carbonylation (p<0.01) was associated with the NOx, in which the damage was greater in subjects who had NOx values lower than the 50% percentile. There was no association between NOx and the blood profile. To be mainly related to obesity, dyslipidemia, glucose and triglycerides, the NOx was considered a good predictor of cardiometabolic risk in black population, mainly of disease progression as well as being an adapted easily to laboratory test routine and can be programmed in analyzers automatic and semi-automatic, requiring little sample preparation.

This thesis examines the overarching theme of inhaled corticosteroid (ICS) dose response effects on a variety of asthma outcome measures; with further importance placed on the application of these findings to personalising ICS dosing for the individual asthmatic. The introduction provides a detailed summary of the current recommendations for the treatment of adult asthma, with particular reference to the mechanism of action and clinical utility of ICS for the treatment of asthma. Current methods of assessing ICS dose response are presented, as well as the common influences that affect these responses. Novel therapeutic theories and the identification of specific asthmatic phenotypes are also introduced, in order to demonstrate the shift towards personalising treatment for asthma. The first two studies examine the dose response of ICS on two specific factors that influence asthma. The third study presents an examination of pharmacological manipulation of the ICS dose response using an additional agent. The following two studies address: how asthma outcomes relate to each other in patients receiving ICS; in addition to an overall assessment of the ICS dose response across a broad range of both ICS moieties and outcome measures. The final study examines for any detrimental effect of an ICS dose ramp on bone metabolism, an important potential long-term adverse effect of higher ICS dosing. The discussion draws together all the results obtained in relation to ICS dose response in asthma, and how these apply to current clinical practice for the individual patient. Furthermore, hypotheses are generated for areas of future study based on the findings from this work.

Pacientes submetidos à cirurgia cardiotorácica com circulação extracorpórea (CEC) apresentam reações inflamatórias, desencadeadas por este procedimento e pela isquemiareperfusão, que acarretam disfunção pulmonar e lesão do endotélio vascular no pósoperatório. Estes processos relativos à cirurgia cardíaca podem afetar a produção e o consumo do óxido nítrico (NO) no pulmão e no endotélio vascular, principalmente na sua participação no processo inflamatório. No pulmão, o NO se difunde com facilidade sendo detectado na via aérea na fase gasosa ou no fluído pulmonar como nitrito e o nitrato. A presença do NO na via aérea pode em algumas situações refletir a sua produção pelo epitélio da via aérea e pelo endotélio microvascular pulmonar. No entanto, os processos que envolvem a produção e o consumo do NO na via aérea ainda não estão totalmente esclarecidos. O condensado do exalado pulmonar (CEP) é um fluido obtido através do resfriamento do ar exalado através de um método totalmente não invasivo e que pode ser utilizado para a investigação do NO nas vias aéreas distais. No desenvolvimento deste estudo foi utilizado um aparato de coleta artesanal e de baixo custo para obtenção do CEP. Assim, foi coletado o CEP de pacientes coronariopatas e valvopatas submetidos à cirurgia cardíaca com CEC nos períodos pré- operatório e pós-operatório (4 horas após a CEC e 12, 24, 48 e 72 horas após a extubação). As concentrações plasmáticas de nitrito/nitrato destes pacientes também foram avaliadas através de amostras de sangue colhidas imediatamente após cada coleta do CEP. O CEP e o plasma foram analisados pela técnica de quimioluminescência para obter as concentrações de nitrito/nitrato. O aparato utilizado obteve utilização reprodutível na rotina clínica da cirurgia cardíaca nesta pesquisa em pacientes sob ventilação espontânea e ventilação mecânica. Não foram encontradas diferenças significativas (p>0,05) nas concentrações de nitrito/nitrato no CEP e plasma entre os pacientes coronariopatas e valvopatas no período pré-operatório. Concentrações significativamente maiores de nitrito/nitrato (p=0,017) foram encontradas no CEP, mas não no plasma, de pacientes que utilizaram nitrato por via oral (dinitrato de isossorbida) no período pré-operatório. Em pacientes que não utilizaram medicação contendo doador de NO (nitroglicerina ou nitroprussiato de sódio) por via endovenosa no pósoperatório ocorreu uma tendência à elevação das concentrações de nitrito/nitrato no CEP que foi numericamente significativa no período de 48 horas do pós-operatório (p=0,008). Em pacientes que receberam ou não doador de NO no pós-operatório as concentrações de nitrito/nitrato foram significativamente maiores nos períodos de 48 horas (p=0,005) e 72 horas (p=0,037) do pós-operatório. A utilização de nitroglicerina (NTG) no período pósoperatório elevou significativamente as concentrações de nitrito/nitrato no CEP nos períodos de 12 horas (p=0,022), 48 horas (p=0,015) e 72 horas (0,048) e no plasma nos períodos de 12 horas (p=0,045). As concentrações de nitrito/nitrato plasmáticos foram significativamente reduzidas (p=0,045) no pós-operatório imediato 4 horas após a CEC em pacientes que receberam ou não doador de NO. A partir destes resultados pode se observar que não houve diferenças significativas nas concentrações de nitrito/nitrato no CEP dos pacientes coronariopatas e valvopatas no período pré-operatório, exceto elevação significativa encontrada em pacientes que utilizaram dinitrato de isossorbida por via oral. As concentrações de nitrito/nitrato no CEP tendem a elevar-se no período pós-operatório principalmente com a utilização de NTG. As concentrações de nitrito/nitrato no plasma foram significativamente reduzidas após 4 horas da CEC no pós-operatório imediato. No entanto foi observado elevação nas concentrações de nitrito/nitrato no plasma de pacientes que usaram NTG. Os achados deste estudo poderão contribuir em futuras pesquisas fornecendo dados comparativos a respeito da participação do NO na via aérea e no plasma nos processos que envolvem a cirurgia cardíaca nos períodos pré e pós-operatório. / Patients undergoing cardiothoracic surgery with cardiopulmonary bypass (CPB) have inflammatory reactions triggered by this procedure and by ischemia-reperfusion, which cause lung dysfunction and injury of vascular endothelium in the postoperative period. These processes related to cardiac surgery may affect the production and consumption of nitric oxide (NO) in the lung and vascular endothelium, especially in their participation in the inflammatory process. In the lung, NO diffuses easily and can be detected in the airway in the gas phase or in the lung fluid as nitrite and nitrate. The presence of NO in exhaled air may reflect the airway epithelium and lung microvascular endothelium in some situations. However, processes involving the production and consumption of NO in the airway are not totally understood. The exhaled breath condensate (EBC) is a fluid obtained by cooling exhaled air wich can be used for the investigation of NO in the distal airways. For this study we used an apparatus homemade and with low cost for collecting and obtain the EBC. The EBC was collected from patients with coronary artery disease and heart valve disease undergoing cardiac surgery with CPB in the preoperative and postoperative period (4 hours after CPB and 12, 24, 48 and 72 hours after extubation). Plasma concentrations of nitrite/nitrate in these patients were also evaluated using blood samples taken immediately after each collection of the EBC. The EBC and plasma were analyzed by chemiluminescence method to obtain the concentrations of nitrite/nitrate. The apparatus used was reproducible in clinical routine of cardiac surgery in patients under spontaneous ventilation or mechanical ventilation. There were no significant differences (p> 0.05) in concentrations of nitrite/nitrate in EBC and plasma in patients with coronary artery disease and heart valve disease in the preoperative period. Significantly higher concentrations of nitrite/nitrate (p=0.017) were found in EBC, but not in plasma of patients who used oral nitrate (isosorbide dinitrate) in the preoperative period. In patients who did not use medication containing NO donor (nitroglycerin or sodium nitroprusside) intravenously in the postoperative period there was a tendency to high concentrations of nitrite/nitrate in EBC that was numerically significant in the period of 48 hours postoperative (p=0.008). In patients who received or not NO donor in postoperative period the concentrations of nitrite/nitrate were significantly higher in periods of 48 hours (p=0.005) and 72 hours (p=0.037) after surgery. The use of nitroglycerin (GTN) in the postoperative period significantly elevated concentrations of nitrite/nitrate in the EBC in periods of 12 hours (p=0.022), 48 hours (p=0.015) and 72 hours (0.048) and plasma in period of 12 hours (p=0.045). The concentrations of nitrite/nitrate were significantly reduced (p=0.045) in the immediate postoperative period 4 hours after CPB in patients who received or not NO donor. From these results we could observe that there were no significant differences in concentrations of nitrite/nitrate in the EBC of patients with heart valve disease and coronary artery disease in the preoperative period, but we found a significant increase in these concentrations in patients who used isosorbide dinitrate orally. The concentrations of nitrite/nitrate in EBC presented a tendency to increase in postoperative period especially in patients who used GTN. The concentrations of nitrite/nitrate in plasma were significantly reduced after 4 hours of CPB in the immediate postoperative period. However, was observed that GTN tended to increase the concentration of nitrite/nitrate in plasma. These findings could help in future research providing comparative data about the role of NO in the airway and plasma in processes involving cardiac surgery in the pre and postoperative periods.

Introdução: Em pacientes deprimidos, a mortalidade cardíaca devido à doença cardíaca coronária (CHD) é duas vezes maior do que em pacientes coronarianos nãodeprimidos, possivelmente devido à presença de disfunção endotelial. Pode haver uma associação entre a utilização de drogas antipsicóticas e doenças cardiovasculares, que são associadas à disfunção endotelial vasotônica. Os estudos relacionados aos efeitos das drogas antipsicóticas sobre a função endotelial vascular são praticamente inexistentes. Objetivo: Esse estudo foi delineado para avaliar os mecanismos envolvidos na reatividade vascular dependente do endotélio sob ação da droga antipsicótica atípica clozapina. Materiais e método: As curvas concentraçãoresposta em anéis pré-contraídos com PE (1 ?M), foram registradas na presença e na ausência de inibidores dos inibidores L-NAME e indometacina, os quais foram incubados, isolados e/ou em associação, por 30 minutos. Para estudar a participação dos canais para K+ foram realizados experimentos com os bloqueadores Tetraetilamonio e Cloreto de potássio (Kcl). Para finalizar o protocolo foram realizados experimentos com bloqueadores da guanilato ciclase (ODQ e azul de metileno) e os inibidores dos canais de K+ (apamina, paxilina e glibenclamida). Resultados: A clozapina causou relaxamento dependente do endotélio envolvendo as três vias de relaxamento (GMPc/NO, AMPc/PGI2 e hiperpolarização). Essa observação foi embasada na ineficiência dos bloqueadores, L-NAME, Indometacina e Tetraetilamônio (TEA), respectivamente. O relaxamento dependente do endotélio foi atenuado pela associação L-NAME/Indometacina e abolido em vasos contraídos por cloreto de potássio e incubados com glibenclamida. Conclusão: Estes resultados sugerem que há participação sinérgica, provavelmente através de um mecanismo de cross-talk, dos sistemas cAMP, cGMP e hiperpolarização. Portanto, mais estudos sobre possíveis funções endoteliais relacionadas aos efeitos colaterais dos antipsicóticos cardiovasculares seriam uma direção de pesquisa adequada. / Objective: In depressed patients, cardiac mortality due to coronary heart disease (CHD) is twice as high as in non-depressed coronary patients, possibly due to the presence of endothelial dysfunction. There may be an association between the use of antipsychotic drugs and cardiovascular diseases, which are associated with vasotonic endothelial dysfunction. Studies related to the effects of antipsychotic drugs on vascular endothelial function are practically non-existent. Aims: This study was designed to evaluate the mechanisms involved in endothelium-dependent vascular reactivity under the action of the atypical antipsychotic drug clozapine. Method: As concentration-response curves in pre-contracted rings with PE (1 ?M), they were recorded in the presence and absence of inhibitors of the L-NAME and indomethacin inhibitors, which were incubated, isolated and / or in association, for 30 minutes. To study the participation of the K + channels, experiments were performed with the tetraethylammonium and potassium chloride (Kcl) blockers. In order to obtain the protocol they were performed with guanylase cyclase blockers (ODQ and methylene blue) and K + channel inhibitors (apamina, paxilin and glibenclamide). Results: Clozapine caused endothelium-dependent relaxation as the three relaxation pathways (cGMP / NO, cAMP / PGI2 and hyperpolarization). This observation was based on the inefficiency of the blockers, L-NAME, Indomethacin and Tetraethylammonium (TEA), respectively. Endothelium-dependent relaxation was attenuated by the association LNAME / Indomethacin and abolished in vessels contracted by potassium chloride and incubated with glibenclamide. Conclusion: These results suggest that there is synergistic participation, probably through a cross-talk mechanism, of the cAMP, cGMP and hyperpolarization systems. Therefore, more studies of possible endothelium function related to cardiovascular antipsychotics side effects would be a proper research direction.

A destruição crônica do aparelho de inserção periodontal devido a uma intensa resposta inflamatória a bactérias conduz a uma condição clínica conhecida como doença periodontal. A inflamação periodontal geralmente provoca úlceras superficiais no sulco gengival, onde os capilares sanguíneos estão expostos a bactérias. Patógenos periodontais, assim como seus produtos podem ser translocados e liberados do sulco gengival para a corrente sanguínea e, portanto, ter efeitos periféricos. A bolsa periodontal é também importante reservatório de mediadores inflamatórios que podem atingir a corrente sanguínea. Diversos estudos avaliam a relação entre a doença periodontal e as doenças cardiovasculares. Sabe-se que muitas doenças cardiovasculares têm início em desordens vasculares, principalmente na camada endotelial dos vasos sanguíneos de grande condutância. Assim, o foco deste estudo foi investigar a reatividade vascular de aortas de animais com periodontite. Tanto a contração para a norepinefrina quanto o relaxamento para a acetilcolina estão diminuídos em animais com periodontite, mas os mecanismos para estes efeitos são diferentes. A diminuição da resposta contrátil à norepinefrina parece estar associada a um aumento da produção de óxido nítrico através da isoforma induzível da óxido nítrico sintase e a diminuição da resposta relaxante à acetilcolina parece estar associada a produção de prostanóides principalmente derivados da isoforma do tipo II da enzima ciclooxigenase. / The chronic destruction of the periodontal attachment apparatus due to an intense inflammatory response to bacteria leads to a condition known as periodontal disease. The periodontal inflammation usually causes superficial ulcers in the gingival sulcus, where blood capillaries are exposed to bacteria. Periodontal pathogens, as well as their products can be translocated and released into the gingival sulcus, subsequently into the bloodstream and thus have peripheral effects. The periodontal pocket is also an important reservoir of inflammatory mediators that can reach the bloodstream. Several studies have evaluated the relationship between periodontal disease and cardiovascular disease. It is known that many cardiac diseases begin as vascular disorders, especially in the endothelial layer of blood vessels of large conductance. Thus, the focus of this study was to investigate the vascular reactivity of aortas from animals with periodontitis. Both norepinephrine-mediated contraction and acetylcholine-mediated relaxation are decreased in animals with periodontitis, but the mechanisms are different for these responsess. The contraction appears to be associated with increased production of nitric oxide by inducible isoform of nitric oxide synthase and relaxation with prostanoids primarily derived type II isoform of the enzyme cyclooxygenase.

O objetivo deste trabalho foi investigar alterações comportamentais produzidas por etanol (ET) e estresse crônico imprevisível (ECI) em camundongos adolescentes (ADL) e adultos (AD), estudando a participação da enzima nNOS. Em camundongos AD também estudamos a atividade da nNOS via receptor NMDA na sensibilização cruzada entre estresse por imobilização (EI) e ET, utilizando dizocilpina (DZP) como pré-tratamento. Os resultados demonstraram haver sensibilização cruzada entre ECI e ET, tanto nos ADL quanto nos AD. Houve aumento da atividade da nNOS em hipocampo (HP) e córtex frontal (CF) de AD submetidos ao ECI. ET atenuou este efeito. A sensibilização cruzada em ADL aumentou atividade da nNOS em CF. O pré-tratamento com 7-nitroindazol inibiu sensibilização cruzada entre ECI e ET em ADL e AD, sinalizando a participação da nNOS. DZP potencializou sensibilização cruzada entre EI e ET e diminuiu a atividade da nNOS em HP e CF de animais submetidos ao EI. ECI e EI induzem sensibilização comportamental ao ET e nNOS participa na sensibilização cruzada entre ECI/EI e ET. / The objective of this work was to investigate behavioral alterations produced by ethanol (ET) and chronic unpredictable stress (CUS) in adolescent (ADL) and adult (AD) mice, studying the nNOS enzyme activity. In AD mice was also studied the nNOS activity through the NMDA receptor in the cross-sensitization between immobilization stress (IS) and ET, by using dizocilpine (DZP) as a pretreatment. The results demonstrate cross-sensitization between CUS and ET in the ADL and AD mice. There was an increase in the nNOS activity in hippocampus (HP) and frontal cortex (FC) of AD submitted to CUS. This effect was attenuated by ET. The cross-sensitization in ADL increased the nNOS activity in FC. The 7-nitroindazole pretreatment inhibit cross-sensitization between CUS and ET in ADL and AD, signaling the nNOS participation. DZP potentiates cross-sensitization between IS and ET and decreased the nNOS activity in HP and FC of animals submitted to IS. CUS and IS induce behavioral sensitization to the ET and nNOS participate in the cross-sensitization between CUS/IS and ET.