Orientador: José Roberto Fioretto / Banca: Marcelo Barciela Brandão / Banca: Marcos Aurélio de Moraes / Resumo: Fundamentação/Objetivos: A Síndrome do Desconforto Respiratório Agudo (SDRA) cursa com altos índices de mortalidade apesar do melhor entendimento de sua fisiopatologia e avanços no tratamento. Existem várias terapias adjuvantes à ventilação mecânica (VM), dentre as quais se destaca a posição prona, que possibilita homogeneização da distribuição do volume corrente (VC) e promove recrutamento alveolar, e o óxido nítrico inalatório (NOi) que promove vasodilatação pulmonar seletiva direcionando o fluxo sanguíneo de áreas mal ventiladas para áreas bem ventiladas e com perfusão diminuída, otimizando a relação ventilação/perfusão e melhorando a oxigenação, com diminuição da resistência vascular pulmonar. Pela melhora da relação ventilação/perfusão, o gás pode permitir o emprego de VM menos agressiva, que, por sua vez, pode diminuir o risco de lesão pulmonar induzida pela VM e a morbidade. Objetivo: comparar os efeitos da posição prona com os do NOi sobre a oxigenação, mecânica respiratória, lesão histopatológica e inflamatória em modelo experimental de lesão pulmonar aguda (LPA). Métodos: Cinquenta coelhos foram instrumentados com traqueostomia e acessos vasculares e ventilados mecanicamente. A LPA foi induzida por infusão traqueal de salina aquecida (30mL/Kg, 38°C). Os coelhos foram submetidos à VMC protetora e distribuídos em quatro grupos: 1) animais com LPA em VMC protetora em posição supina (GVMS; n=15); 2) animais com LPA em VMC protetora + posição prona (GVMP; n=15); 3) animais com LPA em VMC protetora + NOi em posição supina (GVNO; n=15) e 4) animais sem lesão pulmonar submetidos à VMC protetora (sadio - GS; n=5). Os desfechos foram: oxigenação, avaliada pela relação PaO2/FiO2 e índice de oxigenação (IO); inflamação pulmonar, avaliada pela porcentagem de polimorfonucleares (PMN) no lavado broncoalveolar (BAL) e pelo nível de TNF-alfa medido no BAL e lesão... / Abstract: Background/Objectives: The Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS) is associated with high mortality rate despite better understanding of its pathophysiology and treatment advances. There are several adjuvant therapies that can be associated to mechanical ventilation (MV), among which stands out the prone position, which allows homogeneous tidal volume (VT) distribution and promotes alveolar recruitment; and inhaled nitric oxide (iNO) which promotes selective pulmonary vasodilation directing blood flow from areas poorly ventilated to well-ventilated areas and decreased perfusion, optimizing the ventilation/perfusion ratio and improving oxygenation with reduced pulmonary vascular resistance. Improved ventilation/perfusion ratio, allows the use of lesser aggressive mechanical ventilation (MV) treatment, which reduces the risk of lung injury induced by MV and morbidity. Objective: To compare the effects of prone position with iNO on oxygenation, respiratory mechanics, inflammatory and histological injury in an experimental model of acute lung injury (ALI). Methods: Fifty rabbits were instrumented with tracheotomy and vascular access and mechanically ventilated. ALI was induced by tracheal infusion of warm saline (30mL/kg, 38°C). Rabbits underwent protective conventional mechanical ventilation (CMV) were divided in four groups: 1) Animals with ALI in protective CMV + supine position (GVMS, n=15), 2) animals with ALI in protective CMV + prone position (GVMP, n=15) and 3) animals with ALI in protective CMV + iNO in supine position (GVNO, n=15). Additionally, there were five animals without lung injury submitted to protective CMV (Healthy group - GS, n=5). The outcomes were oxygenation, measured by PaO2/FiO2 ratio and oxygenation index (OI), lung inflammation assessed by the percentage of polymorphonuclear cells (PMN) in bronchoalveolar lavage (BAL) and TNF-alpha measured in BAL, and histological pulmonary injury determined by a injury ... / Mestre

Orientador: Anderson Saranz Zago / Resumo: Concomitantemente ao crescente número de idosos tem se observado o aumento de problemas de saúde, entre os quais, a hipertensão arterial (HA) se destaca como doença de maior prevalência na população idosa. Considerando que a variação genética tem alta influência sobre o desenvolvimento da HA, pesquisas vem sendo desenvolvidas com o objetivo de identificar os genes que participam de sua etiologia. Partindo desse pressuposto, alguns polimorfismos são estudados, dentre eles, os polimorfismos do gene da Sintase do Óxido Nítrico Endotelial (eNOS). Embora a maioria dos estudos demonstre os benefícios decorrentes da prática regular de exercícios físicos para contrapor os efeitos deletérios dos polimorfismos do gene da eNOS, bem como a produção de Óxido Nítrico (NO) e controle da pressão arterial (PA), ainda é pouco esclarecido o efeito agudo do exercício físico sobre tais variáveis. Desse modo, o objetivo deste estudo foi analisar o efeito agudo do exercício físico na concentração de NO e nos valores de PA em idosos com diferentes níveis de condicionamento físico (CF) e, também, verificar se os polimorfismos do gene da eNOS exercem influência sobre essas respostas. Após passarem pelos critérios de elegibilidade, 145 idosos de ambos os sexos, com idade entre 60 a 80 anos foram submetidos a avaliações hemodinâmicas, antropométricas, bioquímicas, genéticas e físicas. O protocolo de intervenção foi composto por uma caminhada de 40 min (40-60% VO2máx previamente determinado) realizada em... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Concomitantly with the increasing number of elderly people, it has been observed an increase of health problems, such as hypertension (HA) which stands out as the most prevalent disease in older population. Genetic variation has been associated with a high influence on development of HA, and scientific research has been developed with the objective to identify the genes that participate in its etiology. Based on this background, some polymorphisms are studied, such as the polymorphisms of Endothelial Nitric Oxide Synthase gene (eNOS). Although most studies point to the benefits of regular physical exercise to counteract the deleterious effects of the polymorphisms of eNOS gene, as well as nitric oxide (NO) production and blood pressure control (BP), the effect of acute exercise is still poorly understood. Thus, the purpose of this study was analyze the acute effect of physical exercise on NO concentration and BP values in elderly with different level of training status (TS) and also verify the influence of polymorphisms of eNOS gene on these variables. After passing the ellegibility criteria, 145 elderly men and women, aged 60 to 80 years old, underwent hemodynamic, anthropometric, biochemical, genetic and physical evaluations. The intervention protocol consisted of a 40 min walk (40-60% previously determined VO2max) performed on a treadmill, with blood collections at the pre and post-test moments, with the objective of measuring nitrite plasma (NO2-), oxidative stress biomar... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Renato de Toledo Leonardo / Banca: Celso Kenji Nishiyama / Resumo: Avaliou-se a citotoxicidade dos cimentos Topseal, EndoRez, Tubli-Seal e Kerr Pulp Canal Sealer E.W.T. quanto a liberação de derivados do oxigênio no contato cimento/cultura de macrófagos peritoneais de camundongos. Respectivamente os cimentos que mais liberaram H2O2 na concentração de 9 mg/ml foi o Topseal > Zimosan > EndoRez > Tubli-Seal = Kerr Pulp E.W.T. e na concentração de 18 mg/ml foi o Topseal > Zimosan = EndoRez > Tubli-Seal > Kerr Pulp E.W.T. Os que mais liberaram NO na concentração de 9 mg/ml foi o LPS > Topseal > Kerr Pulp E.W.T. > Tubli-Seal = EndoRez e na concentração de 18 mg/ml foi o LPS > Topseal = Kerr Pulp E.W.T. > Tubli-Seal > EndoRez. / Abstract: It was evaluated the citotoxicity of the sealers Topseal, EndoRez, Tubli-Seal and Kerr Pulp Canal Sealer after exposure to rat peritoneal macrophage culture, due to oxigen derivate liberation. Respectively, the sealer that, liberated more H2O2 at 9 mg/ml concentration were Topseal > Zimosan > EndoRez > Tubli-Seal = Kerr Pulp E.W.T. and in concentration of 18 mg/ml were Topseal > Zimosan = EndoRez > Tubli-Seal > Kerr Pulp E.W.T. The greatest liberation of in NO concentration of 9 mg/ml were LPS > Topseal > Kerr Pulp E.W.T. > Tubli-Seal = EndoRez and in concentration of 18 mg/ml were LPS > Topseal = Kerr Pulp E.W.T. > Tubli-Seal > EndoRez. / Mestre

Orientador: Renato de Toledo Leonardo / Banca: Celso Kenji Nishiyama / Banca: Abílio Albuquerque Maranhão de Moura / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Idomeo Bonetti Filho / Resumo: Analisou-se a citotoxicidade dos seguintes cimentos: Endofill, Sealapex e Polifil, quanto à liberação de óxido nítrico (NO) e peróxido de hidrogênio (H2O2) em culturas de macrófagos peritoneais de camundongos e também utilizamos um método de análise colorimétrica usando M.T.T. Concluiu-se que as considerações presentes após os resultados, discussão e constatação os cimentos que apresentaram o menor nível de citotoxicidade foi o Endofill, seguido da equivalência de liberação de Polifil e Sealapex, embora todos foram menos citotóxicos que o Grupo Controle Zimosan-A para H2O2 e o LPS para o NO. / Abstract: It was analyzed the citotoxicity of the following cements Endofill, Sealapex, and Poliol regarding the nitric oxide (NO) release and the hydrogen peroxide (H2O2) in the peritoneais macrophages medium of mice in different concentrations and we have also analyzed a colorimetric method using the M.T.T. It was concluded from the considerations which were present in the results, discussion, and verification that the cement which presented the lowest citotoxicity level was the Sealapex followed by the Polifil and the Endofill, although all of them were less citotoxic than the Zimosan-A control group for H2O2 and the LPS for the NO. / Doutor

Orientador: Hugo Hyung Bok Yoo / Resumo: A Hipertensão Arterial Pulmonar (HAP) é caracterizada pela elevação sustentada da pressão arterial nos capilares pulmonares, com vasoconstrição e remodelação vascular local. A HAP é definida hemodinamicamente através de valores da pressão arterial pulmonar média em repouso ≥ 25 mmHg, com pressão arterial capilar ≤ 15mmHg e resistência vascular pulmonar > 3 unidades de wood. A HAP é considerada como doença rara, cujos estudos epidemiológicos europeus descrevem a incidência de 1 a 2 casos e prevalência de 15 casos de HAP por milhão de habitantes, com predomínio do sexo feminino, na razão de 1,7: 1,0 e média de idade de 37 anos. Objetivo: Determinar a prevalência de Hipertensão Arterial Pulmonar e o possível impacto clínico em pacientes com a forma crônica indeterminada da Doença de Chagas. Estudo transversal e observacional, onde foram incluídos 99 pacientes com a Forma Crônica Indeterminada da Doença de Chagas e 08 controles com ausência da doença. Houve exclusão de doenças prévias que pudessem ocasionar HP. Três grupos foram formados: G1 (controle), G2 (Chagas) e G3 (Chagas com suspeita de HP), através de critérios clínicos e da realização de ecocardiograma.Os indivíduos foram classificados de acordo com a Classe Funcional(NYHA) modificada para HP e submetidos à Espirometria, Teste de Caminhada de Seis Minutos, Dosagem de Óxido Nítrico (NO) .Predominaram gênero masculino, com idade de 55,62 ± 8,71 anos, Classe Funcional de NYHA :I-II (93,45%) e Espirometrias normais: 88 (82,2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pulmonary Arterial hypertension (PAH) is characterized by sustained elevation of arterial pressure in pulmonary capillaries, with vasoconstriction and local vascular remodeling. PAH is defined hemodynamically by mean values of Pulmonary Arterial Pressure in repose ≥ 25 mmHg, capillary arterial pressure ≤ 15mmHg and pulmonary vascular resistance (PVR) >240 dynes/sec/cm-5. PAH is considered a rare disease, with European incidence of 1 to 2 cases and prevalence of 15 cases per million inhabitants, with predominance of females, at a 1.7-to-1.0 ratio, and mean age of 37 years. Objective: determine the prevalence of PAH and its clinical impact on patients with the indeterminate chronic form of Chagas Disease. Observational and transversal study of 99 patients with indeterminate chronic form of Chagas Disease (CD) and 08 control individuals without the disease. Patients with previous pathologies that could provoke Pulmonary Hypertension (PH) were excluded. After realization of echocardiographic exams three groups were formed: G1: control, G2: Chagas and G3: Chagas with suspicion of PH. The individuals were classified according to the Functional Class of the New York Heart Association (NYHA), and submitted to Spirometry, Six-Minute Walking Test and Serum Dosing of Nitric Oxide (NO). This was a predominantly male (54.20%), middle-aged (mean 55.62 ± 8.71 years) cohort of NYHA Functional Class I-II (93.45%) and normal Spirometries (82.24%). During echocardiograph, patients that presente... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientadores: Eliana Cotta de Faria, José Eduardo Tanus dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T16:38:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zago_VanessaHelenadeSouza_M.pdf: 4029424 bytes, checksum: 82a248a89f7f9c4b4bee67ad6c6f0d07 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O óxido nítrico (NO) é produzido no endotélio vascular pela óxido nítrico sintase endotelial (eNOS), enzima regulada negativamente pela presença do polimorfismo T- 786C, levando à disfunção endotelial. A lipoproteína de alta densidade (HDL) têm funções anti-aterogênicas bem estabelecidas, incluindo mecanismos que aumentam a atividade da eNOS. As estatinas são fármacos que possuem, dentre seus efeitos pleiotrópicos, a melhora na função do endotélio e na composição da HDL. Dada a importância tanto da expressão quanto da atividade da eNOS para a função endotelial, bem como dos efeitos pleiotrópicos das estatinas sobre estas duas variáveis, avaliamos os parâmetros bioquímicos e a composição das sub-frações de HDL (HDL2 e HDL3) após uso de placebo e atorvastatina em uma amostra populacional de 30 indivíduos, divididos em dois grupos: 15 indivíduos portadores do polimorfismo T-786C do gene da eNOS (CC) e 15 não portadores (TT). Duzentos indivíduos foram genotipados, e pareamos conforme idade e IMC 15 indivíduos TT e 15 indivíduos CC, que receberam placebo e/ou atorvastatina na dose de 10mg/dia, por 14 dias. Os parâmetros séricos analisados foram determinados através de métodos bioquímicos enzimáticos, radiométricos, nefelométricos e microultracentrifugação. Mediu-se lípides, lipoproteínas, composição das sub-frações da HDL (HDL2 e HDL3), apolipoproteínas, atividade da proteína de transferência de colesteril éster, metabólitos do NO e proteína C reativa. Após o uso da estatina, como esperado, drásticos efeitos redutores foram observados tanto nos lípides, lipoproteínas, apolipoproteínas e de forma independente do polimorfismo, além da redução de ácidos graxos livres nos portadores do genótipo CC. Nas sub-frações a relação lípides/proteínas foi reduzida tanto em HDL2 quanto em HDL3.O aumento da atividade da CETP nos portadores foi corrigido pela estatina e os níveis de ácidos graxos livres reduziram-se de maneira polimorfismo-dependente, em oposição à redução observada do nitrito, que foi polimorfismo-independente. usPCR e Lp(a) não se modificaram. A atorvastatina pode ter atuado sobre o transporte reverso de colesterol através da redução da atividade da lipase hepática e aumento de atividade da PLTP. Foram observadas interações genótipo/tratamento limítrofes para CETP e Lp(a). Estes resultados sugerem que o tratamento com estatinas pode ser relevante na prevenção primária da aterosclerose em portadores do polimorfismo, independentemente de modificações lipídicas séricas. Portanto estes indivíduos se beneficiariam com o uso de estatinas através da modulação da atividade da CETP e redução da concentração de ácidos graxos livres. / Abstract: Nitric oxide (NO) is produced in the vascular endothelium by endothelial nitric oxide synthase (eNOS), an enzyme negatively regulated by the presence of the T-786C polymorphism, leading to endothelial dysfunction. High-density lipoproteins (HDL) have well-established anti-atherogenic functions, for example mechanisms that enhance eNOS activity. Statins are drugs that have pleiotropic effects, such as the improvement in endothelial function and beneficial composition of HDL. Taking into account both the activity of eNOS on endothelial function, and the validity of the pleiotropic effects of statins, we evaluated the biochemical parameters and the composition of subfractions of HDL (HDL2 and HDL3) after use of placebo and atorvastatin at a dose of 10mg/day for 14 days, in a population sample of 30 individuals divided into two genotype groups of the T-786C polymorphism of the eNOS gene: CC (carriers) or TT (non-carriers). Two hundred individuals were genotyped, and the selected groups paired by age and BMI. The serum parameters analyzed were determined using biochemical enzymatic, radiometric, nephelometric and microultracentrifugation methods. We measured lipids, lipoproteins, the composition of sub-fractions of HDL (HDL2 and HDL3), apolipoproteins, activity of cholesteryl ester transfer protein, NO metabolites and hsCRP. After statin, as expected, drastic effects were observed both in lipids, lipoproteins, apolipoproteins, independently of the polymorphism. In HDL sub-fractions the ratio lipid/protein was smaller in both HDL2 and HDL3. CETP activity and free fatty acids were reduced in a polymorphism-dependent manner, and the reduction of nitrite was polymorphism-independent. hsCRP did not change. Atorvastatin may have acted on the reverse cholesterol transport by reducing the activity of hepatic lipase, increased PLTP activity and reducing CETP. There was a genotype/drug interaction effect on CETP and Lp(a). These results suggest that statin treatment may be relevant for primary prevention of atherosclerosis in patients with the polymorphism, irrespective of serum lipid changes. These individuals would benefit from the use of statins because of reduction of CETP activity and free fatty acids. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Maria Alice da Cruz-Höfling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T16:36:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_EdileneSiqueira_M.pdf: 11448561 bytes, checksum: 00aace7be2d8fec579aea2fd4166f813 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Neste trabalho investigamos a permeabilização da barreira hematoencefálica (BHE) pela peçonha da aranha Phoneutria nigriventer (PNV) através da via transcelular no cerebelo de ratos. As cavéolas foram analisadas nas células endoteliais pela expressão de proteínas associadas à sua formação (caveolina-1, Cav-1 e dinamina-2, Din2) e internalização (caveolina-1 fosforilada, pCav-1 e quinase da família Src, SKF), e nos astrócitos com avaliação da caveolina-3 (Cav-3) e da conexina-43 (Cx43) (formadora de junções comunicantes). A ação do PNV sobre o endotélio também foi avaliada pela ativação (acoplamento) ou inativação (desacoplamento) da enzima eNOS, produtora de óxido nítrico (NO). As estruturas que compõe a BHE foram avaliadas através de microscopia eletrônica de transmissão. Inicialmente, o estudo de Cav-1 contemplou sua localização, expressão gênica e proteica após o envenenamento em diferentes idades, ratos neonatos eram mais suceptíveis ao envenenamento do que ratos adultos. Após PNV, a imunomarcação para Cav-1 foi mais evidente na camada granular e molecular e em neurônios de Purkinje. A expressão Cav-1 e Din2 (foramdoras das vesículas e seu gargalo, respectivamente) aumentou em períodos de envenenamento agudo (1 h), de recuperação (5 h) e na ausência de sinais clínicos (24 h); em contrapartida SKF e pCav-1 envolvidas na internalização caveolar foram superexpressas em períodos opostos (às 2 h e 72 h). O PNV induziu aumento da metaloproteinase-9 da matriz (MMP9), importante mediadora de quebra da BHE e aumentou a formação e o tráfego de vesículas no endótelio após envenenamento. A análise de eNOS revelou desacoplamento (aumento de monômeros) nos períodos de envenenamento agudo (1-2 h) com progressivo retorno e super-expressão de dímeros (re-acoplamento) às 72 h; essas alterações foram relacionadas à ação do PNV sobre os níveis intracelulares de cálcio investigado pelo aumento na expressão de calmodulina e confimado pela localização de calbindina-D28. Os dados revelam a interferência do PNV sobre a homeostase endotelial e função vascular ao afetar o sistema eNOS/NO, importante controlador do tônus vascular. Nos astrócitos, as cavéolas são formadas por Cav-3 e sua superexpressão é associada a doenças neurológicas. O PNV aumentou significativamente os níveis basais de Cav-3 em astrócitos GFAP positivos (astrogliose reativa) em períodos de aumento de Cx43 (às 1, 5 e 24 h), e na vigência de edema citotóxico nos pés astrocitários e alterações nos contatos sinápticos axo-dendríticos e axo-somáticos. Em conjunto os resultados revelam que: (a) a quebra da via transcelular da BHE pelo PNV tem aumento da endocitose via cavéolas; (b) componentes da unidade neurovascular, como endotélio, astrócitos e neurônios estão intimamente envolvidos; (c) no endotélio, os efeitos são mediados pelo sistema eNOS/NO; (d) a SKF ativa o sistema endocítico e de transporte vesicular; (e) nos astrócitos, a dinamica expressão de Cx43 e Cav-3 e o retorno aos níveis basais em paralelo com a ausência de sinais de intoxicação nos animais (72 h) dá evidências de que ambas as proteínas interagem na resposta astrocitária. Os dados permitem sugerir que a presença de peptídeos neurotóxicos no veneno de Phoneutria nigriventer estão no centro dos efeitos aqui relatados / Abstract: In this work, we investigated the blood-brain barrier (BBB) permeabilization induced by Phoneutria nigriventer venom (PNV) in the transcellular route of rats¿ cerebellum. Caveolae was analyzed in endothelial cells accessing the expression of proteins involved in caveolae formation (caveolin-1, Cav-1 and dynamin-2, Dyn2) and internalization (phosphorylated Caveolin-1, pCav-1 and Src kinase family, SKF), in astrocytes caveolae role were evaluated with caveolin-3 (Cav-3) and connexin-43 (Cx43) (gap-junction main protein). PNV action on the endothelium was also investigated through activation (coupling) or inactivation (uncoupling) of eNOS enzyme, responsible for nitric oxide (NO) production. BBB components were evaluated using transmission electron microcopy. Initially, Cav-1 study addressed its localization along with Cav-1 protein and gene expression after envenoming in different age animals, neonate rats were more susceptible to envenoming than adult rats. After PNV, Cav-1 labeling was intense in granular and molecular layers and in Purkinje neurons. Cav-1 and Dyn2 (responsible for caveolae vesicles formation and scission, respectively) expression increased in periods of acute envenomation (1 h), recovery (5 h) and in the absence of clinical signals (24 h); in opposition SKF and pCav-1 involved in caveolae internalization were overexpress in opposite periods (at 2 h and 72 h). PNV induced increases in matrix metaloproteinases-9 (MMP9) an important BBB breakdown mediator, and increases in vesicles formation and traffic in the endothelium after envenoming. The study of eNOS activity revealed uncoupling (increasing in eNOS monomers) in acute periods after envenomation (1 h and 2 h) and progressive return followed by overexpression of dimers (re-coupling) at 72 h; those alterations were related to PNV action on calcium intracellular levels confirmed by Calmodulin increased expression and confirmed using Calbindin-D28 localization. Data revealed PNV interference on endothelial homeostasis and vascular function once affects the eNOS/NO system, an important vascular tonus controller. In astrocytes, caveolae are formed by Cav-3 and its overexpression is related to neurological disorders. PNV increased the basal levels of Cav-3 in GFAP-positive astrocytes (reactive astrogliosis) in the same periods as increased Cx43 (at 1, 5 e 24 h), during cytotoxic edema in astrocytes end-feet and alterations in axo-dendrites and axo-somatic synaptic contacts. Together, the results revealed that: (a) the BBB breakdown in transcellular route by PNV involves upregulation of caveolae endocytosis (b) the neurovascular unit components such as the endothelium, astrocytes and neurons are intimal involved (c) in the endothelium the effects are mediated by the eNOS/NO system and (d) SKF activates endocytic system and vesicular transport; (e) in the astrocytes, Cx43 and Cav-3 dynamic expression and their return to basal level in parallel with the absence of toxic signals in the animals (72 h) provides evidence that both protein interacts in astrocytes response. The data allows us to suggest that the neurotoxic peptides presented in Phoneutria nigriventer venom are in the center of the effects reported here / Mestrado / Biologia Tecidual / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Os mecanismos fisiopatológicos associados aos efeitos benéficos da reanimação guiada pela saturação venosa mista de oxigênio (SvO2) durante a sepse não são claros. Nosso objetivo foi avaliar os efeitos de um algoritmo de reanimação guiado pela SvO2 incluindo fluidos, noradrenalina e dobutamina na hemodinâmica, resposta inflamatória e estresse oxidativo cardiovascular durante um modelo experimental que se assemelha clinicamente ao choque séptico. Dezoito porcos anestesiados e cateterizados (35-45 kg) foram submetidos à peritonite por inoculação fecal (0,75 g/Kg). Depois de permanecerem hipotensos, antibióticos foram administrados e os animais foram randomizados em dois grupos: controle (n=9), com suporte hemodinâmico visando pressão venosa central de 8-12 mmHg, débito urinário de 0,5 ml/kg por hora, e pressão arterial média acima de 65 mmHg; e grupo SvO2 (n=9), com os objetivos acima referidos, além de SvO2 acima de 65%. As intervenções duraram 12 hs e incluíram Ringer Lactato e norepinefrina (ambos os grupos) e dobutamina (grupo SvO2). A resposta inflamatória foi avaliada pela concentração plasmática de citocinas, expressão de CD14 de neutrófilos, geração de espécies reativas de oxigênio e apoptose. O estresse oxidativo foi avaliado pelas concentrações de nitratos no miocárdio e no plasma, a atividade miocárdica e vascular de NAD(P)H oxidase, conteúdo de glutationa do miocárdio e expressão de nitrotirosina. A reanimação guiada por SvO2 foi associada com melhor índice sistólico, oferta de oxigênio e diurese. A sepse induziu em ambos os grupos um aumento significativo na concentração de IL-6, nas concentrações de nitrato de plasma e diminuição persistente na expressão de CD14 em neutrófilos. A apoptose e a geração de espécies reativas de oxigênio por neutrófilos não foram diferentes entre os grupos. As estratégias de tratamento não alteraram significativamente os parâmetros de estresse oxidativo. Assim, uma abordagem destinada a otimizar a SvO2 durante a sepse melhora a hemodinâmica, porém sem qualquer efeito significativo sobre a resposta inflamatória e estresse oxidativo. Os efeitos benéficos associados a esta estratégia podem estar relacionados a outros mecanismos. / The pathogenetic mechanisms associated to the beneficial effects of mixed venous oxygen saturation (SvO2)-guided resuscitation during sepsis are unclear. Our purpose was to evaluate the effects of an algorithm of SvO2-driven resuscitation including fluids, norepinephrine and dobutamine on hemodynamics, inflammatory response and cardiovascular oxidative stress during a clinically resembling experimental model of septic shock. Eighteen anesthetized and catheterized pigs (35-45 Kg) were submitted to peritonitis by fecal inoculation (0.75 g/Kg). After hypotension, antibiotics were administered, and the animals were randomized to two groups: control (n=9), with hemodynamic support aiming central venous pressure 8 to 12 mmHg, urinary output 0.5 ml/Kg per hour, and mean arterial pressure greater than 65 mmHg; and group SvO2 (n =9), with the goals above, plus SvO2 greater than 65%. The interventions lasted 12 h, and lactated Ringer\'s and norepinephrine (both groups) and dobutamine (SvO2 group) were administered. Inflammatory response was evaluated by plasma concentration of cytokines, neutrophil CD14 expression, oxidant generation, and apoptosis. Oxidative stress was evaluated by plasma and myocardial nitrate concentrations, myocardial and vascular NAD(P)H oxidase activity, myocardial glutathione content, and nitrotyrosine expression. Mixed venous oxygen saturation-driven resuscitation was associated with improved systolic index, oxygen delivery, and diuresis. Sepsis induced in both groups a significant increase on IL-6 concentrations and plasma nitrate concentrations and persistent decrease in neutrophil CD14 expression. Apoptosis rate and neutrophil oxidant generation were not different between groups. Treatment strategies did not significantly modify oxidative stress parameters. Thus, an approach aiming SvO2 during sepsis improves hemoynamics, without any significant effect on inflammatory response and oxidative stress. The beneficial effects associated with this strategy may be related to other mechanisms

Orientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Luiz Carlos de Mattos / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Paulo Caleb Junior de Lima Santos / Banca: Isabeth da Fonseca Estevão / Resumo: A doença falciforme (DF) é caracterizada por heterogeneidade clínica variando de pessoas com relativamente poucas complicações clínicas e expectativa de vida normal, até aqueles com complicações graves, como hipertensão pulmonar, priapismo, acidente vascular cerebral (AVC), úlceras de perna, episódios de dor, síndrome torácica aguda (STA) e osteonecrose. O tratamento com a hidroxiureia (HU) tem conquistado espaço na terapia adotada pelos clínicos e sua experiência na DF vem sendo acumulada ao longo dos últimos 25 anos. Porém, muitos estudos têm sido elaborados para investigar as variações genéticas que possam explicar o porquê de alguns pacientes tolerarem e respondem ao uso de HU, enquanto, outros ainda precisam ser tratados por terapias alternativas. Diante disso, nosso objetivo foi avaliar a resposta ao tratamento com a HU considerando a influência dos polimorfismos genéticos envolvidos na fisiopatologia da DF. Para isso, usamos a calculadora de gravidade da DF (CGDF); rastreamos os polimorfismos -509C/T (TGFB1), -308G/A (TNFA), 313 A/G (GSTP1), -786T/C (NOS3), nulos (GSTM1 e GSTT1); e avaliamos os marcadores de estresse oxidativo (catalase, glutationa peroxidase-GPx, glutationa S-transferase-GST, glutationa redutase-GR e as espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico-TBARS). O estudo envolveu 520 pacientes, acima de cinco anos de idade, provenientes do Instituto de Hematologia do Rio de Janeiro/RJ-HEMORIO. A CGDF foi validada para os pacientes brasileiros e os escores de gravidade foram relacionados com os marcadores de estresse oxidativo. Em relação aos polimorfismos, a presença do alelo nulo do gene GSTM1 aumentou a chance de ocorrência de priapismo em pacientes com a DF. A mutação do gene TGFB1 mostrou efeito protetor na ocorrência de STA e úlceras de perna, e à presença do alelo mutante para o gene NOS3 diminuiu a chance de ocorrência de retinopatia e priapismo. Para os marcadores bioquímicos,... / Abstract: Sickle cell disease (SCD) is characterized by a very heterogeneous clinical ranging from patients who have normal life expectancy with relatively few complications; others can have severe complications such as pulmonary hypertension, priapism, stroke, leg ulceration, recurrent painful episodes, acute chest syndrome (ACS) and avascular necrosis of bone (AVN). Treatment with hydroxyurea (HU) has become more adopted by medical and HU experience in DF has been accumulated over the last 25 years. However, many studies have been designed to investigate the genetic variations that may explain why some patients tolerate and respond to the use of HU, while others still need to be treated with alternative therapies. In view of this, we aimed to evaluate the response to HU treatment considering the genetic polymorphisms influence involved in the pathophysiology of SCD. For this, we used the calculator severity of DF (CGDF); detected the polymorphisms -509C/T (TGFB1), -308G/A (TNFA), 313 A/G (GSTP1), -786T/C (NOS3), null (GSTM1 and GSTT1), we assessed markers of oxidative stress (catalase, glutathione peroxidase-GPx, glutathione S-transferase-GST, glutathione reductase-GR and the thiobarbituric acid reactive species-TBARS). The study involved 520 patients older than 5 years, from the Instituto de Hematologia do Rio de Janeiro/RJ-HEMORIO. The CGDF was validated for Brazilian patients and severity scores were related to oxidative stress markers. The presence of the GSTM1 null allele increased the occurrence chance of priapism in SCD patients. TGFB1 gene mutation had a protective effect on the occurrence of STA and leg ulcers, and the presence of the mutant allele for the NOS3 gene decreased the occurrence chance of retinopathy and priapism. For biochemical markers, we found that the decreased of enzymes activity (catalase, Gpx and GR), and the increased in GST activity were associated with greater SCD severity. In addition, lipid peroxidation levels ... / Doutor

Os mecanismos fisiopatológicos associados aos efeitos benéficos da reanimação guiada pela saturação venosa mista de oxigênio (SvO2) durante a sepse não são claros. Nosso objetivo foi avaliar os efeitos de um algoritmo de reanimação guiado pela SvO2 incluindo fluidos, noradrenalina e dobutamina na hemodinâmica, resposta inflamatória e estresse oxidativo cardiovascular durante um modelo experimental que se assemelha clinicamente ao choque séptico. Dezoito porcos anestesiados e cateterizados (35-45 kg) foram submetidos à peritonite por inoculação fecal (0,75 g/Kg). Depois de permanecerem hipotensos, antibióticos foram administrados e os animais foram randomizados em dois grupos: controle (n=9), com suporte hemodinâmico visando pressão venosa central de 8-12 mmHg, débito urinário de 0,5 ml/kg por hora, e pressão arterial média acima de 65 mmHg; e grupo SvO2 (n=9), com os objetivos acima referidos, além de SvO2 acima de 65%. As intervenções duraram 12 hs e incluíram Ringer Lactato e norepinefrina (ambos os grupos) e dobutamina (grupo SvO2). A resposta inflamatória foi avaliada pela concentração plasmática de citocinas, expressão de CD14 de neutrófilos, geração de espécies reativas de oxigênio e apoptose. O estresse oxidativo foi avaliado pelas concentrações de nitratos no miocárdio e no plasma, a atividade miocárdica e vascular de NAD(P)H oxidase, conteúdo de glutationa do miocárdio e expressão de nitrotirosina. A reanimação guiada por SvO2 foi associada com melhor índice sistólico, oferta de oxigênio e diurese. A sepse induziu em ambos os grupos um aumento significativo na concentração de IL-6, nas concentrações de nitrato de plasma e diminuição persistente na expressão de CD14 em neutrófilos. A apoptose e a geração de espécies reativas de oxigênio por neutrófilos não foram diferentes entre os grupos. As estratégias de tratamento não alteraram significativamente os parâmetros de estresse oxidativo. Assim, uma abordagem destinada a otimizar a SvO2 durante a sepse melhora a hemodinâmica, porém sem qualquer efeito significativo sobre a resposta inflamatória e estresse oxidativo. Os efeitos benéficos associados a esta estratégia podem estar relacionados a outros mecanismos. / The pathogenetic mechanisms associated to the beneficial effects of mixed venous oxygen saturation (SvO2)-guided resuscitation during sepsis are unclear. Our purpose was to evaluate the effects of an algorithm of SvO2-driven resuscitation including fluids, norepinephrine and dobutamine on hemodynamics, inflammatory response and cardiovascular oxidative stress during a clinically resembling experimental model of septic shock. Eighteen anesthetized and catheterized pigs (35-45 Kg) were submitted to peritonitis by fecal inoculation (0.75 g/Kg). After hypotension, antibiotics were administered, and the animals were randomized to two groups: control (n=9), with hemodynamic support aiming central venous pressure 8 to 12 mmHg, urinary output 0.5 ml/Kg per hour, and mean arterial pressure greater than 65 mmHg; and group SvO2 (n =9), with the goals above, plus SvO2 greater than 65%. The interventions lasted 12 h, and lactated Ringer\'s and norepinephrine (both groups) and dobutamine (SvO2 group) were administered. Inflammatory response was evaluated by plasma concentration of cytokines, neutrophil CD14 expression, oxidant generation, and apoptosis. Oxidative stress was evaluated by plasma and myocardial nitrate concentrations, myocardial and vascular NAD(P)H oxidase activity, myocardial glutathione content, and nitrotyrosine expression. Mixed venous oxygen saturation-driven resuscitation was associated with improved systolic index, oxygen delivery, and diuresis. Sepsis induced in both groups a significant increase on IL-6 concentrations and plasma nitrate concentrations and persistent decrease in neutrophil CD14 expression. Apoptosis rate and neutrophil oxidant generation were not different between groups. Treatment strategies did not significantly modify oxidative stress parameters. Thus, an approach aiming SvO2 during sepsis improves hemoynamics, without any significant effect on inflammatory response and oxidative stress. The beneficial effects associated with this strategy may be related to other mechanisms