Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Dieta materna hiperlipídica (HF) em roedores ocasiona o desenvolvimento de resistência à insulina e o diabetes mellitus tipo 2 na prole adulta. Camundongos fêmeas foram alimentadas com dieta SC (standard chow) ou HF (hiperlipídica) durante oito semanas anteriores ao acasalamento, durante o período gestacional e metade da lactação. Os filhotes machos foram avaliados ao nascimento (0 dia) e aos 10 dias de idade. Nas progenitoras, foram avaliados o ganho de massa corporal (MC), a pressão arterial (PA), a eficiência alimentar (EA) e o teste oral de tolerância à glicose (TOTG). Na prole, foram avaliadas a evolução da massa corporal (MC), a glicemia, a estrutura da ilhota do pâncreas e a massa de célula-beta. Nas progenitoras, a ganho de massa corporal (MC) e a eficiência alimentar (EA) do grupo HF apresentaram um aumento de 50% em relação ao grupo SC durante o período pré-gestacional e um aumento de 70% do ganho de MC e 250% na EA, durante a gestação (P<0,0001). A pressão arterial e os níveis de corticosterona foram maiores no grupo HF quando comparados ao grupo SC (P=0,001). Em relação à massa corporal das proles, não houve diferença ao nascimento, contudo aos 10 dias de idade o grupo HF apresentou um aumento neste parâmetro, assim como um aumento dos níveis de glicemia e aumento do diâmetro da ilhota em relação ao grupo SC (P<0,001). Ao nascimento, a razão da massa de célula-beta/massa do pâncreas (MCB/MP), foi menor no grupo HF quando comparado ao grupo SC (-54%, P<0,0001), no entanto essa diferença não foi observada aos 10 dias de idade. A MCB/MP foi maior no grupo HF aos 10 dias de idade em relação ao grupo SC (+146%, P<0,0001). Desta forma, sugere-se que a administração de dieta materna hiperlipídica durante o período pré-gestacional, durante a gestação e metade da lactação, culmina em alterações precoces no pâncreas da prole, incluindo um remodelamento e uma hipertrofia da célula-beta, a qual apresenta uma recuperação da massa de célula-beta ao final da organogênese, podendo desta forma afetar a sua função na vida adulta.

Orientador: Sergio de Albuquerque / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T20:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Burgos_ValdeliceOliveira_D.pdf: 11304585 bytes, checksum: 032afa1c33cbed6073d88d23bc7f4788 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A avaliação fisiológica dos hospedeiros infectados pelo Trypanosoma cruzi sugere um desequilíbrio homeostático. A infecção pode estar relacionadas com a cepa, morfologia e inóculo do agente infectante ou mesmo fatores inerentes ao hospedeiro vertebrado, como características imunológicas, genéticas, nutricionais e ainda hormonais. Este trabalho teve como objetivo analisar duas cepas RAL e RC de T. cruzi verificando a patologia com a mesma linhagem genética o Linhagem 1. Os animais experimentais foram os camundongos Balb/c; infectados com 2 x 104 formas tripomastigotas das duas cepas. A cepa RAL foi originalmente isolada de triatomíneo Triatoma infestans, proveniente de Santa Rosa do Viterbo ¿ SP e a cepa RC isolada a partir da infecção natural do cachorro-do-mato Cerdocyon thous azarae, capturado na cidade de Cássia dos Coqueiros, no Estado de São Paulo. Para a avaliação bioquímica e histopatológica foram inoculados o protozoário T. cruzi em camundongos fêmeas e machos coletando-se o sangue e retirando-se o pâncreas e fígado nos respectivos dias 1.º (grupo controle), 6.º, 9.º, 12.º e 14.º. Após a inoculação foram analisados: peso, parasitemia, glicose, fosfatase alcalina, proteínas totais, uréia, creatinina, aspartato-transaminase (AST ou TGO), colesterol e triglicerídeos. Houve diminuição do peso, variação da parasitemia de acordo com o dia, reduzida taxa de glicose sangüínea bem como de todos os outros parâmetros bioquímicos já mencionados, exceto uréia. Verificou-se que a cepa RAL foi mais virulenta que a cepa RC, machos mais susceptíveis à infecção, pois houve maior parasitemia nesse grupo de camundongo. Os dois grupos apresentaram acentuadas alterações bioquímicas e histológicas. Na análise histológica, os tecido hepático e pancreático estavam acentuadamente desorganizados, com aparecimento granulomatoso e infiltrados celulares e presença de formas amastigotas ou ninhos de amastigotas. Os resultados encontrados nos camundongos inoculados pelas cepas RAL e RC de T.cruzi mostraram alguns parâmetros similares, outros alterados mesmo sendo de semelhante linhagem genética / Abstract: The physiologic evaluations of infected hosts by Trypanosoma cruzi undergo a homeostatic imbalance, which may be related to the parasite strain factors as well as to the morphology and inoculation of the T. cruzi infective agent or also to the inherent factors of a vertebrate host such as immunologic, genetic, nutritional and hormonal characteristics. This work aimed to analyze two strains from T. cruzi - RAL and RC - checking this protozoan pathology with the same phylogenetic line (Zidodema 1). The guinea pigs were Balb/c mice infected with 2 x 104 forms from tripoamastigotes of the two strains. Primarily, RAL strain was isolated from Trachoma infestans triatomineum, came from Santa Rosa do Viterbo /SP and RC strain was isolated from a bushdog natural infection -Cerdocyon thous azarae- caught in Cássia dos Coqueiros /SP. For a biochemical and histopathological evaluation T. cruzi was inoculated in female and male mice, collecting blood and removing their pancreas and livers at the 1st ?control group? 6th, 9th, 12th and 14th days respectively. After the inoculation, weight, parasitic index, glucose, alkaline phosphatise, total proteins, urea, creatinine, aspartate-transaminase (AST or TGO), cholesterol and triglycerides were analyzed. There were weight reduction, parasitic index variation according to the specific day, blood glucose rate diminished as well as all the biochemical parameters already mentioned, except urea. It was verified that RAL strain was more virulent than RC one because the males were more susceptible to the infection, since there was a great parasitic index in this group, in both strains. Biochemical and histological changes were more emphatic in both groups. In histological evaluation, the hepatic and pancreatic tissues were stressed disorganized, appearing granulomatous formations, infiltrated cellular and the presence of amastigotes. The finding results in mice inoculated by RAL and RC strains from T. cruzi presented some parameters so similar and others were changed although the genetic line was the same / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Objetivos: Comparar quantitativamente por técnicas de ressonância magnética (RM), a fração de gordura pancreática em indivíduos sadios, obesos e diabéticos (tipos 1 e 2). Secundariamente, buscou-se identificar diferença das medidas do ADC (difusão) no parênquima pancreático. Materiais e Métodos: Estudo retrospectivo com avaliação por dois radiologistas de imagens de RM abdominal de 89 indivíduos (56 controles; 33 diabéticos). Utilizadas três sequências: T1-GRE em fase e fora de fase; difusão (mapa ADC). Calculados e comparados frações de gordura e valores médios do ADC pancreáticos nos grupos. Resultados: Observaram-se diferenças significativas da fração de gordura pancreática entre diabéticos tipo 2 (DM2) e sadios e diabéticos tipo 1 (DM1), com valores de p de 0,01 e 0,02 para homens e 0,02 e 0,01 para mulheres, com confiabilidade interobservador ótima (coeficiente de correlação intraclasse > 0,8). Em obesos não diabéticos, observaram-se frações de gordura pancreática semelhantes às dos diabéticos tipo 2. Observou-se também diferença significativa nos valores de ADC entre DM2 e sadios e DM1 (p: 0,02 e 0,03 no sexo masculino; p: 0,002 e 0,001 no sexo feminino), menores nos DM2. Discussão: Observaram-se frações de gordura pancreáticas significativamente maiores em DM2, comparativamente a indivíduos sadios e DM1, achado que fomenta a hipótese da infiltração gordurosa do órgão como um fator causal associado para a falência de células beta pancreáticas. / Objectives: To compare, through quantitative MRI techniques, the pancreatic fat fraction in healthy, obese and diabetic (type 1 and 2) individuals. Secondarily, weve tried to identify differences in ADC (diffusion) values in the pancreatic parenchyma. Materials and Methods: A retrospective study, with review, by two radiologists, of abdominal MR images of 89 subjects (56 controls; 33 diabetics). Three sequences have been used: T1-GRE in-phase and out-of-phase; diffusion (ADC map). Fat fractions and average values of the ADC in pancreatic parenchyma have been calculated and compared. Results: We observed significant differences between pancreatic fat fractions of diabetics type 2 (DM2) and healthy and diabetic type 1 (DM1) individuals, with p values of 0.01 and 0.02 for men and 0.02 and 0.01 for women, with good interobserver reliability (intraclass correlation coefficients > 0.8). Obese nondiabetic sujects showed high pancreatic fat fraction similar to DM2. There was also a significant difference in ADC values between DM2 and DM1 and healthy individuals (p: 0.02 and 0.03 in males; p: 0.002 and 0.001 in females), lower in DM2. Discussion: We observed significantly higher pancreatic fat fractions in DM2, when compared to healthy and DM1 individuals. This finding favors the hypothesis of fatty infiltration of the organ as an associated causal factor to the pancreatic beta cells failure.

O projeto teve como objetivo avaliar o efeito do uso de enzimas exógenas sobre os grânulos de zimógenos no pâncreas. O projeto foi dividido em três experimentos, sendo o experimento I para avaliação do uso da protease via ração nas dosagens de 50, 100 e 150% das recomendações do fabricante. O experimento II, foi realizado avaliando-se o uso da enzima amilase nas dosagens de 50, 100 e 150% das recomendações do fabricante e o experimento III foi realizado avaliando-se as dosagens de amilase, amilase + fitase, protease e protease + fitase sobre os grânulos de zimógenos. Em cada experimento, foi utilizado delineamento inteiramente casualizado sendo um total de nove tratamentos com oito repetições. Aos 21 e 42 dias de idade, as aves foram sacrificadas por deslocamento cervical para coleta e processamento do pâncreas para análise histopatológica e posterior análise pelo programa Image Pro Plus&reg;. Este programa permitiu a mensurar a porcentagem dos grânulos de zimógenos nas imagens obtendo-se um índice matemático da presença dos grânulos de zimógenos no pâncreas, o qual pode ser avaliado estatisticamente e submetidos a regressão polinomial os experimentos I e II e ao teste de Tukey o experimento III. Uma redução significativa (P<0,05) com efeito quadrático na presença dos grânulos de zimógenos pode ser observada nos experimentos I e II. O experimento III apresentou diferença estatística (P<0,05) entre o uso de fitase 100% + Protease 100% quando comparado com o controle. / This research project was conducted in the poultryhouse of the Faculty of Veterinary Medicine USP - Department of Nutrition and Animal Production, Pirassununga Site. Thus, this present study aimed to evaluate the effect of exogenous enzymes on the zymogenes granules of pancreas. It was performed three experimental trials; the first experiment has evaluated the addition of 50, 100 and 150% of protease manufactory recommendation in the feed. The trial two was conducted to evaluate the addition of 50, 100 and 150% of amylase manufactory recommendation in feed, and the experiment three was conducted to evaluated the addition of amylase, amylase + phytase, protease and protease + phytase in the feed on the zymogens granules. Each experiment was designed totally randomized with a total of nine treatments with eight replicates each. The birds were killed by cervical dislocation at days 21 e 42 to collect the pancreas for histopathology analysis followed by the Image Pro Plus&reg; program analysis, this program allowed to transform the image into a mathematic number, which could be used in statistical analysis. At the experiments I and II, the statistical analysis were conducted by the polynomial regression method and the experiment three was evaluated by Tukey test. A significant reduction (P<0,05) with quadratic effect was observed on the zymogens granules at the experiments I and II. The experiment III show a significant difference between the treatment with phytase 100% + Protease 100% and the control group.

Orientadores: Maria Alice Roston de Mello, Antonio Carlos Boschero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T20:39:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Latorraca_MarciaQueiroz_D.pdf: 5299941 bytes, checksum: b0e3e2cc69f2d831a69c78427432010f (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Estudos epidemiológicos têm sugerido que a desnutrição intra-uterina e durante a infância é um dos principais determinantes da suscetibilidade a doenças como o diabetes do tipo 2 e a síndrome de resistência à insulina. Presume-se que a desnutrição materna afete o crescimento inicial da prole, altere a secreção de insulina e a sensibilidade a esse hormônio. No presente trabalho estudamos a influência da restrição protéica durante a vida intra-uterina e a lactação sobre a secreção e a ação da insulina em ratos recém-desmamados e em ratos adultos recuperados da desnutrição. A secreção de insulina e a homeostasia da glicose foram examinadas em crias recém-desmamadas (28 dias de vida) de ratas Wistar alimentadas durante a gravidez e a lactação com dieta contendo 17% de proteína (grupo NP) e 6% de proteína (grupo LP). Durante teste de tolerância à glicose oral, ratos do grupo LP apresentaram áreas sob as curvas de concentração de glicose e de insulina séricas menores em relação aos ratos do grupo NP. A velocidade de desaparecimento da glicose durante teste subcutâneo de tolerância à insulina (Kitt) foi maior no grupo LP do que no grupo NP, indicando aumento da sensibilidade à insulina. Ilhotas pancreáticas isoladas de ratos do grupo LP apresentaram redução da secreção de insulina frente à estimulação com glicose, arginina e leucina. Essas ilhotas apresentaram redução da primeira e segunda fases de secreção de insulina em resposta à glicose. Finalmente, nas ilhotas pancreáticas do grupo LP a incorporação de 45Ca após 5 ou 90 minutos de incubação em meio contendo glicose (que refletem principalmente a entrada e a retenção de Ca2+, respectivamente) foi menor em relação às ilhotas do grupo NP. A secreção de insulina e a sensibilidade ao hormônio foram avaliadas em ratos adultos (90 dias de vida) mantidos com uma dieta contendo 17% de proteína (grupo C) ou 6% de proteína (grupo LP) durante a vida intra-uterina, a lactação e após o desmame, e em ratos que receberam uma dieta contendo 6% de proteína durante a vida fetal e a lactação e uma dieta contendo 17% de proteína após o desmame (grupo R). Durante o teste de tolerância à glicose oral, as áreas sob as curvas de concentração de glicose sérica foram similares nos três grupos. Ratos dos grupo LP e R apresentaram áreas sob as curvas de concentração de insulina sérica significativamente reduzidas em relação aos ratos do grupo C. A velocidade de desaparecimento da glicose durante o teste intravenoso de tolerância à insulina (Kitt) foi maior nos ratos do grupo LP em relação aos ratos dos grupos C e R. Em ilhotas isoladas a secreção de insulina em resposta à glicose foi diferente entre os grupos testados, sendo maior no grupo C e menor no grupo LP. Em músculo gastrocnêmio de ratos do grupo LP foi observado aumento dos níveis de receptor de insulina, da fosforilação de substrato-l do receptor de insulina (IRS-l) e maior associação entre o substrato-l do receptor de insulina e fosfatidilinositol 3-quinase (PI 3-quinase) em relação aos animais do grupo C. No grupo R as alterações dos passos iniciais da ação da insulina foram parcialmente restauradas. Esses resultados tomados em conjunto sugerem que a desnutrição durante a vida intra-uterina e a lactação altera permanentemente a secreção de insulina. A resposta insulínica deficiente &ente à estimulação com glicose e aminoácidos pode estar associada à incapacidade das células beta pancreáticas em "manejar" adequadamente os íons cálcio. Em ratos desnutridos e recuperados, a homeostasia glicêmica é mantida, pelo menos em parte, pelo aumento da sensibilidade à insulina, resultante das alterações nos passos iniciais da via de sinalização do referido hormônio / Abstract: Epidemiological studies have suggested that fetal and infantil malnutrition are major factors determining susceptibility to type 2 diabetes and the insulin-resistance syndrome. It has been suggested that maternal malnutrition affect early growth and determine permanent alterations in insulin secretion and sensitivity of offspring. Therefore, we investigated the influence of protein deprivation during intrauterine and lactation phases on insulin secretion and action in weaned rats and in adult rats recovered from malnutrition. At weaning (28 days of age) glucose homeostasis was examined in offspring from dams fed a normal protein (17%) diet (NP group) or a diet containing 6% protein (LP group). The oral glucose tolerance test revealed less blood glucose and insulin concentration in the offspring from the LP group when compared to the NP group. The glucose disappearance rate (Kitt) was higher in the LP group than in the NP group, indicating increased sensitivity to insulin in target tissues. Isolated islets derived from LP rats displayed reduced insulin secretion in response to glucose, arginine and leucine. In LP islets, the first and second phases of glucose-induced insulin secretion were drastically reduced. Finally, in LP islets the 45Ca uptake after 5 or 90 min incubation in medium containing glucose (that reflects mainly the entry of Ca2+, and the retention of Ca2+, respectively) was lower than in NP islets. Insulin secretion and sensivity were also evaluated in adult rats (90 days of age) maintained on a diet of 17% protein (C group) or 6% protein (LP group) during fetal life, suckling and after weaning, and in rats receiving 6% protein during fetal life and suckling followed by a 17% protein diet after weaning (R group). In LP and R rats, the mean total areas under the glucose curves in response to an oral glucose load were not significant1y different from that in C rats. The mean total areas under the insulin curves were similar in the LP and R rats, and these values were lower than those of C rats. The glucose disappearance rate during an i.v. insulin tolerance test (Kitt) was greater in the LP group than in the C and R groups. In isolated islets glucose-induced insulin secretion was significant1y different among the three groups, LP islets showing the highest values and C islets the lowest. When hind-limb muscles were ana1yzed, LP rats showed greater insulin receptor levels, higher insulin receptor substrate 1 phosphorilation and greater association between insulin receptor substrate-l and phosphatidilinositol 3-kinase. In the R group, the changes in the early steps of insulin action were partially restored. In conclusion, these results suggest that malnutrition during early life produces pancreatic beta cell dysfunction, that is not completely restored by nutritional recovery. The poor secretory response to glucose and amino acids may occur through altered Ca2+ handling. Furthermore, in LP and R rats glucose homeostasis is maintained, at least in part, at the expense of increased insulin sensitivity that results from alterations in the early steps of the insulin signal transduction pathway / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Lício Augusto Velloso / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T15:03:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_CarinaSolon_D.pdf: 1769268 bytes, checksum: b8a449a504bd2aa54bb737ba42860093 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: / Resumo: A interleucina-17 (IL17) está envolvida na resposta imune contra agentes patogénicos intestinais, e a sua expressão anómala no intestino pode ocorrer em condições tais como diabetes do tipo 1 (DM1), encefalomielite auto-imune e doença de Crohn. Fatores dietéticos podem alterar a microbiota intestinal desencadeando doenças metabólicas. Nossa hipótese é de que IL17 poderia ser diretamente modulada por nutrientes e pode desempenhar um papel na obesidade e diabetes tipo 2 (DM2). Aqui, nós demonstramos que as gorduras da dieta induzem a expressão IL17, predominantemente no íleo. In vivo, ilhotas pancreáticas isoladas estimuladas com IL17 apresentaram um aumento na secreção de insulina quando comparado a ilhotas não estimuladas, enquanto que a sua inibição sistémica resultou em intolerância à glicose. Animais knockout para o receptor de IL17 (IL17RA) eram intolerantes à glucose devido ao desenvolvimento embrionário anómalo das ilhotas pancreáticos, que eram menores e foram depletados de células produtoras de insulina. Nos seres humanos, os níveis circulantes de IL17 aumentaram após uma refeição. Este aumento foi significativamente maior nos indivíduos obesos normoglicêmicos do que em indivíduos obesos com diabetes. Semelhantes aos roedores, as ilhotas humanos também foram estimulados a secretarem insulina na presença de IL17. Assim nós identificamos a IL17 como um sensor intestinal de gorduras alimentares, que exerceram um efeito semelhante a hormônios incretínicos. Além disso, a presença IL17RA é importante para o desenvolvimento normal das ilhotas pancreáticas. / Abstract: / Abstract: Interleukin-17 (IL17) is involved in the immune response against intestinal pathogens, and its anomalous expression in the gut can occur in conditions such as type 1 diabetes (T1D) 1, autoimmune encephalomyelitis 2 and Crohn¿sdisease 3. Because dietary factors can change the gut microbiota, impacting metabolic diseases 4, we hypothesized that IL17 could be directly modulated by nutrients and might play a role in obesity and type 2 diabetes (T2D). Here, we show that dietary fats induced IL17 expression, predominantly in the ileum. Both in vivo and in isolated pancreatic islets, IL17 stimulated insulin secretion, while its systemic inhibition resulted in glucose intolerance. Mice KO for the main IL17 receptor (IL17RA) were glucose intolerant due to anomalous embryonic development of the pancreatic islets, which were smaller and were depleted of insulin-producing cells. In humans, blood IL17 increased following a meal. This increase was significantly higher in obese normoglycemic individuals than in obese subjects with diabetes. Similar to those of rodents, human islets were also stimulated to secrete insulin in the presence of IL17. Thus, we identified IL17 as a gut sensor of dietary fats, which exerted an incretin-like effect. In addition, the presence IL17RA was important for normal development of the pancreatic islets / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutora em Ciências

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gisele_golghetto.pdf: 1021487 bytes, checksum: 2143f9bc567e25ae13a963bafe3cc100 (MD5) Previous issue date: 2013-12-17 / Introduction: Cadmium is a heavy metal, widely used in industry. It may give rise to the appearance of tumors in multiple organs. Objective: To evaluate the effect of the pH of the water in the genesis of cancer caused by cadmium. Material and methods: We used 98 Wistar rats were divided into seven groups: A - 15 rats that received solution of cadmium chloride (CdCl2 - 400mg / L) in drinking water with a neutral pH (pH 7.0), B - 15 rats that received CdCl2 (400 mg / L) in the drinking water at acidic pH (pH 5.0), C - 15 rats that received CdCl2 (400 mg / L) in drinking water with basic pH (pH 8.0), D - 15 rats that received water at acidic pH (pH 5.0), E - 15 rats that received water with basic pH (pH 8.0), F - 15 rats that received water at neutral pH (pH 7.0 ); G - 8 rats that received cyclophosphamide as a single dose (50mg/kg) on the first day of the experiment (positive control for micronucleus test). Rats of groups A-F were euthanized after 6 months and the group G, 24 hours after the start of the experiment. We removed liver, kidney, pancreas, prostate, seminal vesicles, testes, and bone marrow. Results: There were no pre-neoplastic or neoplastic in liver, kidney, pancreas, seminal vesicles and testes in all groups. Only animals exposed to cadmium showed prostatic intraepithelial neoplasia grade one, being more prevalent in group B (p<0.05), although there was no increase in micronuclei (p>0,05). Conclusion: The acidic pH contributed to the formation of precancerous lesions in the prostate gland of animals exposed to cadmium. / Introdução: O cádmio é um metal pesado, muito utilizado na indústria. Ele poder originar o aparecimento de tumores em múltiplos órgãos. Objetivo: Avaliar o efeito do pH da água ingerida na gênese do câncer provocado por cádmio. Material e métodos: Utilizou-se 98 ratos Wistar, divididos em 7 grupos: A 15 ratos que receberam solução de cloreto de cádmio (CdCl2 - 400mg/L) na água de beber com pH neutro (pH 7,0); B 15 ratos que receberam CdCl2 (400mg/L) na água de beber com pH ácido (pH 5,0); C 15 ratos, que receberam CdCl2 (400mg/L) na água de beber com pH básico (pH 8,0). D 15 ratos que receberam água com pH ácido (pH 5,0); E 15 ratos que receberam água com pH básico (pH 8,0); F 15 ratos, que receberam água com pH neutro (pH 7,0); G 8 ratos que receberam ciclofosfamida em dose única (50mg/kg) no primeiro dia do experimento (controle positivo do teste do micronúcleo). Ratos dos grupos A-F foram eutanasiados após 6 meses e os do grupo G, 24 horas após o início do experimento. Retirou-se fígado, rim, pâncreas, próstata, vesícula seminal, testículos e medula óssea. Resultados: Não foram observadas lesões pré-neoplásicas nem neoplásicas no fígado, rim, pâncreas, vesícula seminal e testículos em todos os grupos. Somente animais expostos ao cádmio apresentaram neoplasia intraepitelial prostática de grau um, sendo mais prevalente no grupo B (p<0,05), porém não houve aumento de micronúcleos (p>0,05). Conclusão: O pH ácido contribuiu para formação de lesões pré-neoplásicas na próstata dos animais expostos ao cádmio.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gisele_golghetto.pdf: 1021487 bytes, checksum: 2143f9bc567e25ae13a963bafe3cc100 (MD5) Previous issue date: 2013-12-17 / Introduction: Cadmium is a heavy metal, widely used in industry. It may give rise to the appearance of tumors in multiple organs. Objective: To evaluate the effect of the pH of the water in the genesis of cancer caused by cadmium. Material and methods: We used 98 Wistar rats were divided into seven groups: A - 15 rats that received solution of cadmium chloride (CdCl2 - 400mg / L) in drinking water with a neutral pH (pH 7.0), B - 15 rats that received CdCl2 (400 mg / L) in the drinking water at acidic pH (pH 5.0), C - 15 rats that received CdCl2 (400 mg / L) in drinking water with basic pH (pH 8.0), D - 15 rats that received water at acidic pH (pH 5.0), E - 15 rats that received water with basic pH (pH 8.0), F - 15 rats that received water at neutral pH (pH 7.0 ); G - 8 rats that received cyclophosphamide as a single dose (50mg/kg) on the first day of the experiment (positive control for micronucleus test). Rats of groups A-F were euthanized after 6 months and the group G, 24 hours after the start of the experiment. We removed liver, kidney, pancreas, prostate, seminal vesicles, testes, and bone marrow. Results: There were no pre-neoplastic or neoplastic in liver, kidney, pancreas, seminal vesicles and testes in all groups. Only animals exposed to cadmium showed prostatic intraepithelial neoplasia grade one, being more prevalent in group B (p<0.05), although there was no increase in micronuclei (p>0,05). Conclusion: The acidic pH contributed to the formation of precancerous lesions in the prostate gland of animals exposed to cadmium. / Introdução: O cádmio é um metal pesado, muito utilizado na indústria. Ele poder originar o aparecimento de tumores em múltiplos órgãos. Objetivo: Avaliar o efeito do pH da água ingerida na gênese do câncer provocado por cádmio. Material e métodos: Utilizou-se 98 ratos Wistar, divididos em 7 grupos: A 15 ratos que receberam solução de cloreto de cádmio (CdCl2 - 400mg/L) na água de beber com pH neutro (pH 7,0); B 15 ratos que receberam CdCl2 (400mg/L) na água de beber com pH ácido (pH 5,0); C 15 ratos, que receberam CdCl2 (400mg/L) na água de beber com pH básico (pH 8,0). D 15 ratos que receberam água com pH ácido (pH 5,0); E 15 ratos que receberam água com pH básico (pH 8,0); F 15 ratos, que receberam água com pH neutro (pH 7,0); G 8 ratos que receberam ciclofosfamida em dose única (50mg/kg) no primeiro dia do experimento (controle positivo do teste do micronúcleo). Ratos dos grupos A-F foram eutanasiados após 6 meses e os do grupo G, 24 horas após o início do experimento. Retirou-se fígado, rim, pâncreas, próstata, vesícula seminal, testículos e medula óssea. Resultados: Não foram observadas lesões pré-neoplásicas nem neoplásicas no fígado, rim, pâncreas, vesícula seminal e testículos em todos os grupos. Somente animais expostos ao cádmio apresentaram neoplasia intraepitelial prostática de grau um, sendo mais prevalente no grupo B (p<0,05), porém não houve aumento de micronúcleos (p>0,05). Conclusão: O pH ácido contribuiu para formação de lesões pré-neoplásicas na próstata dos animais expostos ao cádmio.

Introdução: O transplante de pâncreas é uma opção terapêutica para pacientes portadores de diabetes mellitus, quando bem indicado, com objetivo de restaurar a normoglicemia sem necessidade de uso de insulina, sendo que a técnica mais utilizada é o transplante simultâneo pâncreas-rim. Houve aumento da indicação e realização deste procedimento em todo o mundo nos últimos anos, crescendo a importância de se conhecer os aspectos de imagem no pré e pós-transplante de pâncreas. Objetivos: Avaliar e discutir o papel das diferentes modalidades de exames de imagem empregadas na avaliação no pré e pós-transplante de pâncreas enfatizando os achados normais e das possíveis complicações. Propor um fluxograma para realização de exames de imagem para o programa de transplante de pâncreas considerando a casuística apresentada. Metodologia: Levantamento retrospectivo dos métodos de imagem com as indicações e os achados pré e pós-procedimento em todos os pacientes submetidos a transplante de pâncreas no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, da Universidade de São Paulo. Resultados: Foram estudados 14 casos com indicação de transplante simultâneo pâncreasrim, 13 destes submetidos ao transplante no período 2010-2016, os quais apresentaram idade média de 37,6 +/- 6,2 anos (variando entre 24 e 51 anos), sendo 8 (57%) do sexo masculino e 6 (42%) do sexo feminino. Um (7,2%) paciente não pode receber o enxerto pancreático devido a procedimento cirúrgico frustro resultante de diagnóstico intra-operatório de placa ateromatosa extensa. As complicações pós-transplante mais comuns foram: coleções na 7 cavidade abdominal (6/13 casos (46,1%)), pancreatite (6/13 (46,1%)) e complicações vasculares (4/13 (30,8%)). O US com Doppler foi realizado no pós-operatório em todos os casos. Conclusões: há necessidade de avaliação vascular pré-operatória por imagem do receptor, de rotina, para evitar problemas no momento do transplante. O TSPR tem alto risco de complicações, sendo necessária a retirada do enxerto em número relativamente grande dos casos. A avaliação pelos métodos de imagem foi fundamental para o diagnóstico e planejamento do tratamento das complicações, sendo que o US com Doppler se mostrou suficiente como primeiro exame. A correlação com angioTC e(ou) angioRM foi necessária nos casos com suspeita de complicação vascular, permitindo confirmar a suspeita em todos os casos. / Introduction: Pancreas transplantation is a therapeutic option for patients with diabetes mellitus, when well indicated, to restore normoglycemia with no need of insulin, and the most commonly used technique is simultaneous pancreas-kidney transplantation. There has been an increase in the indication and performance of this procedure worldwide in recent years, increasing the importance of knowing the aspects of imaging in the pre- and posttransplantation of pancreas. Objectives: To evaluate and discuss the role of the different imaging modalities used in the assessment in the pre- and post transplantation of the pancreas emphasizing the normal findings and the possible complications. To propose a flowchart to perform imaging tests for the pancreas transplantation program considering the presented case series. Methodology: Retrospective survey of imaging methods with pre and post-procedure indications and findings in all patients undergoing pancreas transplantation at Hospital das Clínicas, Ribeirão Preto Medical School, University of São Paulo. Results: We studied 14 cases with simultaneous pancreas-kidney transplantation, 13 of them undergoing transplantation in the period 2010-2016, which presented a mean age of 37.6 +/- 6.2 years (ranging from 24 to 51 years), of which 8 (57%) were male and 6 (42%) were female. One (7,2%) patient could not receive the pancreatic graft due to the frustrating surgical procedure resulting from an intraoperative diagnosis of extensive atheromatous plaque. The most common post-transplant complications were collections in the abdominal 9 cavity (6/13 cases (46.1%)), pancreatitis (6/13 (46.1%)) and vascular complications (4/13 (30.8% )). The US with Doppler was performed postoperatively in all cases. Conclusions: There is a need for routine preoperative vascular imaging of the recipient to avoid problems at the time of transplantation. TSPR has a high risk of complications, requiring removal of the graft in a relatively large number of cases. The evaluation by the imaging methods was fundamental for the diagnosis and planning of the treatment of the complications, and the US with Doppler was sufficient as the first examination. Correlation with angioTC and (or) angioRM was necessary in cases with suspected vascular complications, allowing confirmation of suspicion in all cases.

As neoplasias induzidas pela forma oncogênica da KRAS são doenças muito comuns, para as quais não existem terapias efetivas. Uma inibição direta da KRAS falhou em ensaios clínicos e esforços intensos tem sido feitos para identificar alvos de KRAS importantes para a oncogênese. Uma via promissora regulada por KRAS, que tem sido pouco explora a é a via dos microRNAs (miRNAs). Nossa meta foi identificar miRNAs regulados pela KRAS em células pulmonares e pancreáticas, que possam contribuir para o fenótipo oncogênico. Para alcançar esta meta nós usamos duas abordagens: (1) Nós investigamos o miRNA 486-5p como um alvo de KRAS em câncer de pâncreas e de pulmão. A expressão deste miRNA havia sido correlacionada positivamente com a presença de mutações em KRAS em pacientes portadores de câncer de cólon; (2) Nós usamos uma plataforma de microarranjo para identificar miRNAs diferencialmente expressos entre células humanas primárias imortalizadas pulmonares ou pancreáticas e suas linhagens isogênicas transformadas por KRAS. Na primeira abordagem, conseguimos mostrar que a expressão do miRNA 486-5p está correlacionada ao status de KRAS em células primárias pulmonares, mas não em células primárias pancreáticas. Além disso, geramos células pulmonares tanto com ganho e perda de função de KRAS e demonstramos que KRAS regula a expressão do miRNA 486-5p. Também de terminamos uma correlação negativa entre a expressão de KRAS e a expressão do alvo do miRNA 486-5p FoxO1, um supressor tumoral. Para avaliar como o miRNA 486-5p afeta as propriedades oncogênicas induzidas por KRAS, nós transfectamos oligonucleotídeos inibitórios para o miRNA 486-5p em células pulmonares positivas para mutações em KRAS. A inibição da expressão do miRNA 486-5p levou a uma redução da clonogenicidade e viabilidade celulares. Esta redução não está associada a um aumento de morte celular, mas a uma redução da proliferação celular. Interessantemente, a transfecção de oligonucleotídeos mímicos do miRNA 486-5p em células pulmonares negativas para mutações em KRAS ou em células com perda de função de KRAS por RNAi levou a um aumento da proliferação e clonogenicidade. Estes dados indicam que o miRNA 486-5p, não só é um alvo de KRAS em câncer de pulmão, mas também age como um oncomiR contribuindo para a proliferação celular induzida por KRAS. Na nossa segunda abordagem, nós identificamos 17 miRNAs com expressão aumentada e 3 com expressão diminuída em células primárias pancreáticas expressando KRAS oncogênica. Destes, 9 miRNAs foram foram também identificados por metanálise de dados de microarranjo publicados comparando amostras tumorais pancreáticas com amostras não tumorais. Apesar do experimento de microarranjo com as linhagens primárias pulmonares não ter produzido resultados estatisticamente significativos após a correção por FDR, uma tendência à expressão diferencial foi observada para vários miRNAs e nós validamos por qPCR a expressão diferencial dos miRNAs 720 e 139-3p. Em conclusão, nós conseguimos identificar miRNAs regulados pela KRAS tanto em células pulmonares, quanto pancreáticas. Um melhor entendimento das suas funções biológicas, bem como dos alvos por eles regulados nestes contextos, pode revelar novas vias para a exploração terapêutica. / KRAS-induced lung cancer is a very common disease, for which there are currently no effective therapies. Direct targeting of KRAS has failed in clinical trials and intense efforts are underway to identify KRAS targets that play a crucial role in oncogenesis. One promising KRAS-regulated pathway that has so far been overlooked is the micro RNA (miRNA) pathway. Our goal was to identify miRNAs regulated by oncogenic KRAS in lung and pancreatic cells that could contribute to the oncogenic phenotype. In order to achieve this goal we used two different approaches: (1) We investigated miRNA 486-5p as a KRAS target in lung and pancreatic cancer. The expression of this miRNA had been correlated to the presence of KRAS mutations in colon cancer patients; (2) we used a microarray platform to identify differentially expressed miRNAs between immortalized human primary pulmonary or pancreatic epithelial cell lines and their isogenic K-Ras-transformed counterparts. In our first approach, we were able to show that mi486-5p expression correlates with KRAS status in lung primary cells, but not in pancreatic primary cells. Furthermore, we generated lung cancer cells with either gain-of-function or loss-of-function of KRAS and demonstrated that KRAS regulates miRNA 486-5p in these cells. We also found, in all lung cell models analyzed, a negative correlation between expression of KRAS and expression of miR-486-5p target FoxO1, a tumor suppressor. In order to evaluate how miR-486-5p affects KRAS-induced oncogenic properties, we transfected miR-486-5p inhibitor oligonucleotides into KRAS-positive lung cancer cell lines. Inhibition of miR-486-5p expression leads to reduced clonogenic growth and viability. This reduction is not associated with increased cell death, but with decreased cell proliferation. Interestingly, transfection of miR-486-5p double-stranded RNA mimic oligonucleotides in to KRAS negative lung cancer cell lines or into cells with loss-of-function of KRAS by RNAi leads to enhanced proliferation and clonogenicity. These results indicate, not only that miR-486-5p is a KRAS target in lung cancer, but also that miR-486-5p acts as an oncomiR contributing to KRAS-induced cell proliferation. In our second approach, we identified 17 upregulated microRNAs and 3 downregulated microRNAs in the primary pancreatic cell line expressing KRAS. Of these, 9 miRNAs were also identified by a metanalysis of published microarray datasets comparing pancreatic cancer patient samples to non-cancerous pancreatic tissues. Even though our array experiment in the primary pulmonary cells did not produce statistically significant results after FDR correction, differential expression trends were seen for many miRNAs and we validated miRNAs 720 and 139-3p as differentially expressed. In conclusion we were able to identify miRNAs regulated by KRAS both in lung and pancreatic cancer cells. Further understanding of their biological function, as well as the targets they regulate in these settings, could uncover novel pathways for therapy design.