Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-13Bitstream added on 2014-06-13T20:05:17Z : No. of bitstreams: 1 bozzo_fr_dr_jabo.pdf: 619203 bytes, checksum: 6820d53fb990167e2aa609d317f21fee (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este ensaio teve como objetivo avaliar da cinética da inflamação aguda induzida na bexiga natatória de pacus, Piaractus mesopotamicus por Aeromonas hydrophila inativada e tioglicolato nos peixes que receberam suplementação dietética com as vitaminas C, E ou sua associação. A inflamação foi avaliada quatro, 24 e 48 horas depois dos estímulos. Um grupo mantido como controle recebeu salina e foi examinado após os mesmos períodos. Um outro grupo, não inoculado, foi avaliado para determinação dos tipos de células residentes. Nos tempos determinados os peixes foram sacrificados por aprofundamento do plano anestésico, o exsudato colhido e o componente celular avaliado. Os resultados demonstraram aumento ou diminuição gradativa do número de células totais acumuladas após quatro, 24 e 48 horas para os estímulos Aeromonas hydrophila e tioglicolato respectivamente. Esse fenômeno foi caracterizado pelo acúmulo dos trombócitos e linfócitos nos grupos inoculados com A. hydrophila e suplementados com a vitamina C seguidos pelos peixes tratados com a vitamina E. O contrário foi observado nos grupos inoculados com Tioglicolato, onde predominaram os linfócitos nos peixes alimentados com dietas contendo as vitaminas C e E e trombócitos nos que receberam a vitamina C demonstrando a eficácia das vitaminas independentemente dos estímulos inflamatórios utilizados. A citoquímica foi efetiva na identificação dos tipos celulares presentes. / The purpose of this test was to value the kinetics of acute inflammation induced by inactivated Aeromonas hydrophila and thioglycolate, which were inoculated into Piaractus mesopotamicus´ natatory bladder and supplemented with diet containing vitamins C, E or their associations. The inflammation was valued four, 24 and 48 hours after the stimulus. A considered control group received a saline solution and was examined after the same lapses of time. Another group, not inoculated, was valued to determine the types of resident cells. On the stipulated times, the fishes were sacrificed by a deepening on the anesthetic plane. The exudate was collected and the cellular component was valued. Results demonstrated a gradual increase or descrise in the total number of collected cells after four, 24 and 48 hours of the stimulus Aeromonas hydrophila and thioglycolate respectly. This phenomenon was characterized by the accumulation of thrombocytosis and lymphocytosis on those groups inoculated with A. hydrophila and supplemented with vitamin C, followed by those fishes treated with vitamin E. On those groups that received thioglycolate inoculated, It´s been observed a predominance of lymphocytosis in fishes submitted to vitamins C and E diet, as well as, thrombocytosis in those who received vitamin C, which demonstrates the vitamins efficacy, no matter what inflammatory stimulus is used. The citochemistry was effective for identification of cell types.

Resumo: O objetivo do trabalho foi acompanhar os efeitos durante o resfriamento, em quatro estádios de desenvolvimento embrionário de pacu, Piaractus mesopotamicus, em dois tempos de estocagem, seis e 10 horas. Embriões em quatro estádios de desenvolvimento (blastoderme, 64 células - 1,4-horas pós-fertilização, hpf; 25% do movimento de epibolia - 5,2-hpf; fechamento do blastóporo - 8-hpf e; aparecimento da vesícula óptica - 13,3-hpf) foram expostos a uma solução crioprotetora contendo metanol (10%) e sacarose (0,5M). A seguir, os embriões passaram por curva de resfriamento de 1°C por minuto até -8°C, onde foram mantidos nos dois períodos de estocagem. Utilizou-se delineamento inteiramente casualizado, as taxas de eclosão dos embriões foram avaliados para cada tratamento, com seis repetições, comparando-se com o controle que não foi resfriado. O número total de larvas estimadas para as duas primeiras fases do desenvolvimento ontogenético (1,4- e 5,2- hpf) foi estatisticamente menor que nas demais fases. Entretanto, os estádios de 8 e 13,3- hpf não diferiram entre si (49,90%±6,71 e 55,24%±6,71), respectivamente, encontrando-se mais próximas ao controle (90,67%±6,56). Além disso, a permeabilidade das membranas, estimada através do diâmetro dos embriões, variou estatisticamente do controle para seis e 10 horas de estocagem, quando utilizado os estádios de 1,4 e 5,2-hpf, enquanto para os demais não houve diferença. Da mesma forma, pode-se verificar que houve correlação negativa entre o número total de larvas e o diâmetro do embrião. Sendo assim, a utilização dos estádios embrionários de 8 e 13,3-hpf são os mais recomendados para o resfriamento de embriões de pacu estocados até 10 horas, a -8°C. / Abstract: The objective of this research was to verify the effects of cooling of embryos of pacu, Piaractus mesopotamicus, in four stages of development, for two stocking periods. The stages of embryo development were: at blastoderm, ~64 cells - 1.4 hours after fertilization (haf); at 25% of the epiboly movement - 5.2 haf; at blastoporous closing - 8.0 haf; and at optical vesicle appearing - 13.3 haf. Embryos were exposed to a cryoprotectant solution containing methanol (10%) and sucrose (0.5M). After that, embryos were submitted to a cooling curve (-1oC/min) until -8oC and then kept at -8oC for six or ten hours. Also, for each stage of embryo development a control group with not cooled embryos was used to compare the eclosion rates. The total number of larvae estimated for the first two stages of ontogenetic development (1.4 and 5.2-haf) was lower compared to the other stages. There was no difference for the total number of larvae between the stages 8.0 e 13.3-haf (49.90%±6.71 and 55.24%±6.71, respectively). Therefore, the utilization of the embryonary stages of 8.0 and 13.3-haf are recommended for cooling pacu embryos stored up to 10 hours at -8 ° C. / Orientadora: Elizabeth Romagosa / Coorientador: DaniloPedro Streit Junior / Banca: Luis David Solis Murgas / Banca: Sérgio Ricardo Batlouni / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-20Bitstream added on 2014-06-13T18:56:54Z : No. of bitstreams: 1 claudiano_gs_me_jabo.pdf: 778732 bytes, checksum: c2e3587b8838e9676707fe996742c881 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste trabalho, investigou-se a cinética das alterações vasculares e celulares na aerocistite, induzida pela inoculação da Aeromonas hydrophila inativada em Piaractus mesopotamicus e inibição da atividade enzimática da fosfolipase A2 e ciclooxigenase na inflamação aguda. Para tanto, foram utilizadas a indometacina, meloxicam e a dexametasona, aplicados por via parenteral, 30 minutos antes do estímulo lesivo. As alterações de permeabilidade vascular foram avaliadas nos tempos de 30, 90, 120, 180 e 240 minutos pós-estímulo, observando-se que o máximo da exsudação plasmática ocorre com 180 MPE. O pré-tratamento com indometacina ou meloxicam, neste tempo, inibiu significativamente o aumento de permeabilidade vascular e a dexametasona apresentou um bloqueio mais precoce e efetivo do que os outros AINES, inibindo nos tempos de 120 e 180 MPE. O exsudato celular inflamatório foi avaliado seis, 24 e 48 horas após estímulo, verificando-se que a inoculação da bactéria causou aumento progressivo do acúmulo de células, atingindo o máximo após 24 HPE, sendo maior que nos outros grupos estudados. Neste tempo, verificou-se que todas as drogas testadas foram efetivas para a redução significativa do acúmulo celular. A contagem diferencial das células presentes no foco inflamado demonstrou predomínio de linfócitos e trombócitos, seguida de macrófagos e granulócitos, com acúmulo mais tardio destas últimas. O pré-tratamento com indometacina e dexametasona causou bloqueio no acúmulo de todas as células identificadas. Os resultados demonstraram que, entre as diferentes doses de cada droga testada, não foram observadas diferenças significativas. As avaliações sugeriram que os eicosanoides, assim como acontece em mamíferos, participam ativamente dos fenômenos vasculares e têm papel relevante na quimiotaxia de leucócitos / In this teaching we investigated the kinetics of vascular and cellular changes in aerocistite induced by inoculation of inactivated Aeromonas hydrophila in Piaractus mesopotamicus and pharmacological effect of the enzymatic activity of phospholipase A2 and cyclooxygenase in acute inflammation. To this end, we used indomethacin, meloxicam and dexamethasone, applied intraparenteral 30 minutes before stimulation harmful. Changes in vascular permeability were evaluated in 30, 90, 120, 180 and 240 minutes post-stimulation, we observed that the maximum plasma exudation occurs with 180 MPE and pretreatment with indomethacin or meloxicam at this time significantly inhibited the increase vascular permeability and dexamethasone had a lock early and effective than other NSAIDs inhibited at 120 and 180MPE. The cellular inflammatory exudate was assessed with six, 24 and 48 hours after stimulation, verifying that the bacteria caused a progressive increase in accumulation of cells, peaking at 24 HPE, higher than the other groups analyzed, and this time all tested drugs were effective in significantly reducing the buildup. The differential count of cells present in the exudate showed a predominance of lymphocytes and thrombocytes, and granulocyte macrophage followed with a later accumulation of the latter. Pretreatment with indomethacin and dexamethasone caused a blockage in the migration of all cells evaluated. The results showed that among the different doses of each drug tested was not observed any significant difference. Analysis of those exposed, suggest that eicosanoids, with in mammals, participate actively in the vascular phenomena and has important role in chemotaxis of leukocytes in acute inflammatory process induced by A. hydrophila in pacu

Submitted by Alberto Vieira (martins_vieira@ibest.com.br) on 2017-10-18T19:59:59Z No. of bitstreams: 1 200848.pdf: 6629749 bytes, checksum: bee7ce6fed03b3a9af4d9641bc5937a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-18T19:59:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 200848.pdf: 6629749 bytes, checksum: bee7ce6fed03b3a9af4d9641bc5937a7 (MD5) Previous issue date: 1985-06-27 / Instituto Euvaldo Lodi / A alimentação do pacu, Colossoma mitrei (Berg, 1895), no Pantanal de Mato Grosso, foi investigada nos meses de fevereiro e março de 1977 e no período de fevereiro de 1981 a janeiro de 1982. Foi constatado que as variações dos graus de repleção dos estômagos e da composição da dieta da espécie em estudo estão relacionadas às flutuações do nível da água na região e à disponibilidade de alimento nos diferentes biótopos estudados. O espectro alimentar de C. mitrei compõe-se de elementos vegetais e animais. Os vegetais foram os itens mais importantes no regime alimentar da espécie, caracterizando-a como predominantemente herbívora, embora sua dieta possa também incluir itens secundários como peixes, crustáceos e, as vezes, moluscos. Dos recursos disponíveis no ambiente os frutos e sementes constituíram o item mais importante na dieta de Colossoma mitrei, sendo utilizados pela espécie nos períodos de enchente e vazante. Em razão disso, discute-se o que os desmatamentos das cabeceiras e das áreas inundáveis representam como ameaça à sobrevivência da espécie. / The feeding of “pacu”, Colossoma mitrei (Berg, 1895) in the Pantanal of Mato Grosso, was investigated in the months of February and March 1977 and in the period between February 1981 and January 1982. Stomach fullness and diet composition in this species were directly related to the variation of the water levels in the region and the availability of food in the different biotopes studied. The stomachs contained both plant and animal food. The predomination of plant items in the diet of this species characterized it as being mainly herbivorus, although its diet did include secondary items such as fish, crustaceans and occasional mollusks. Fruits and seeds were the most important items among the available food sources in the diet of C. mitrei and were utilized in both flooded and receding water periods. How the clearing of land at the headwaters of the river and in flooded areas threatens the survíval of this species is discussed.

Resumo: Neste trabalho, investigou-se a cinética das alterações vasculares e celulares na aerocistite, induzida pela inoculação da Aeromonas hydrophila inativada em Piaractus mesopotamicus e inibição da atividade enzimática da fosfolipase A2 e ciclooxigenase na inflamação aguda. Para tanto, foram utilizadas a indometacina, meloxicam e a dexametasona, aplicados por via parenteral, 30 minutos antes do estímulo lesivo. As alterações de permeabilidade vascular foram avaliadas nos tempos de 30, 90, 120, 180 e 240 minutos pós-estímulo, observando-se que o máximo da exsudação plasmática ocorre com 180 MPE. O pré-tratamento com indometacina ou meloxicam, neste tempo, inibiu significativamente o aumento de permeabilidade vascular e a dexametasona apresentou um bloqueio mais precoce e efetivo do que os outros AINES, inibindo nos tempos de 120 e 180 MPE. O exsudato celular inflamatório foi avaliado seis, 24 e 48 horas após estímulo, verificando-se que a inoculação da bactéria causou aumento progressivo do acúmulo de células, atingindo o máximo após 24 HPE, sendo maior que nos outros grupos estudados. Neste tempo, verificou-se que todas as drogas testadas foram efetivas para a redução significativa do acúmulo celular. A contagem diferencial das células presentes no foco inflamado demonstrou predomínio de linfócitos e trombócitos, seguida de macrófagos e granulócitos, com acúmulo mais tardio destas últimas. O pré-tratamento com indometacina e dexametasona causou bloqueio no acúmulo de todas as células identificadas. Os resultados demonstraram que, entre as diferentes doses de cada droga testada, não foram observadas diferenças significativas. As avaliações sugeriram que os eicosanoides, assim como acontece em mamíferos, participam ativamente dos fenômenos vasculares e têm papel relevante na quimiotaxia de leucócitos / Abstract: In this teaching we investigated the kinetics of vascular and cellular changes in aerocistite induced by inoculation of inactivated Aeromonas hydrophila in Piaractus mesopotamicus and pharmacological effect of the enzymatic activity of phospholipase A2 and cyclooxygenase in acute inflammation. To this end, we used indomethacin, meloxicam and dexamethasone, applied intraparenteral 30 minutes before stimulation harmful. Changes in vascular permeability were evaluated in 30, 90, 120, 180 and 240 minutes post-stimulation, we observed that the maximum plasma exudation occurs with 180 MPE and pretreatment with indomethacin or meloxicam at this time significantly inhibited the increase vascular permeability and dexamethasone had a lock early and effective than other NSAIDs inhibited at 120 and 180MPE. The cellular inflammatory exudate was assessed with six, 24 and 48 hours after stimulation, verifying that the bacteria caused a progressive increase in accumulation of cells, peaking at 24 HPE, higher than the other groups analyzed, and this time all tested drugs were effective in significantly reducing the buildup. The differential count of cells present in the exudate showed a predominance of lymphocytes and thrombocytes, and granulocyte macrophage followed with a later accumulation of the latter. Pretreatment with indomethacin and dexamethasone caused a blockage in the migration of all cells evaluated. The results showed that among the different doses of each drug tested was not observed any significant difference. Analysis of those exposed, suggest that eicosanoids, with in mammals, participate actively in the vascular phenomena and has important role in chemotaxis of leukocytes in acute inflammatory process induced by A. hydrophila in pacu / Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Coorientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: Rogério Salvador / Banca: Marileda Bonafim Carvalho / Mestre

Orientador: Dalton José Carneiro / Banca: Wilson Massamitu Furuya / Banca: Nilva Kazue Sakomura / Banca: Margarida Maria Barros / Banca: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Resumo: Neste estudo foram avaliados os coeficientes de digestibilidade aparente (CDA) dos aminoácidos (AA), proteína e energia de seis alimentos utilizados em dietas para o pacu. Os ingredientes apresentaram altos valores de digestibilidade para todos os aminoácidos e diferenças foram detectadas entre os CDA individuais dos aminoácidos dos alimentos (P<0,01). O glúten de milho, o farelo de soja e a farinha de peixe foram os alimentos que apresentaram os maiores CDA para os aminoácidos, mas seus CDA da proteína não devem ser usados como indicativo para a digestibilidade médias dos AA. Dentre os alimentos, o glúten de milho apresentou alto CDA da energia. O escore químico dos alimentos mostrou que a lisina é o primeiro aminoácido limitante para a farinha de peixe, glúten de milho, farelo de trigo e milho e o segundo limitante para o farelo de soja. A metionina apresentou-se como primeiro limitante para o farelo de soja e a levedura. No entanto, o farelo de soja revelou-se a fonte de proteína de melhor qualidade por apresentar o maior índice de aminoácidos essenciais digestíveis (133,1). Os resultados deste estudo demonstraram que os valores de aminoácidos digestíveis podem ser utilizados na formulação de rações balanceadas para o pacu. / Abstract: The apparent digestibility coefficients (ADCs) of amino acids (AA), protein, and energy in six feed ingredients (Brazilian fish meal, soybean meal, corn gluten meal, yeast, corn, and wheat meddling) were evaluated for pacu juveniles. In general, all ingredients showed high digestibility values for all AA, and differences among ADCs of individual amino acid were detected (P<0.01). Corn gluten, soybean, and fish meals had the highest ADCs of AA. The ADCs of protein in fish meal, yeast, and corn gluten meal should not be used as AA digestibility indicators, because those showed differences up to 6.7% between the ADCs of protein and AA. All ingredients had lower ADCs of energy than corn gluten meal (P<0.01). Lysine was the first limiting amino acid in fish meal, corn gluten meal, wheat meddling, and corn, and the second limiting amino acid in soybean meal, as methionine was the first limiting amino acid in soybean meal and yeast. However, the soybean meal was the best quality protein source, as it had the highest digestible essential amino acid index. This demonstrated that digestible amino acid values can be used to formulate practical diets for pacu, preventing potential deficiencies or excess that might cause environmental and economic losses. / Doutor

O aumento populacional e a elevação no consumo de alimentos tem aumentado a necessidade de intensificação da aquicultura objetivando maiores produtividades para atendimento à elevação na demanda. Consequentemente, aumentam as chances de ocorrência de surtos epizoóticos dentro dos sistemas de produção, devido ao maior estresse imposto aos animais densidade elevada, manejo constante, transporte, baixa qualidade da água, etc. Alterações no estado fisiológico dos animais fazem com que seu sistema imunológico não consiga combater agentes inócuos em situações normais, mas que se tornam patogênicos nos casos de imunodepressão, levando a grandes perdas econômicas, seja com mão de obra, mortandade, medicamentos, etc. Assim, este estudo avaliou o efeito da administração individual ou conjunta de -glucano e Bacillus subtilis na dieta de juvenis de pacu, Piaractus mesopotamicus. Em um primeiro ensaio, quantidades crescentes de -glucano (60; 120; 180; 240 e 300 mg kg-1 de ração) e de B. subtilis (109 UFC g-1 de B. subtilis; 0,025%, 0,050%, 0,075%, 0,100%, 0,125%) foram adicionados a uma dieta basal extrudada (32% de proteína bruta PB; 3200 kcal kg-1 de energia digestível ED) e administrados a juvenis de pacu (8,91 ± 0,30 g) até a saciedade aparente por 75 dias, em um delineamento inteiramente aleatorizado. Ao final do período experimental, os animais foram anestesiados, pesados, submetidos à coleta de sangue e tecidos, para determinação do ganho de peso, conversão alimentar, taxa de crescimento específico, proteínas totais, albumina e globulina séricas, índice albumina:globulina (A:G), atividade da lisozima sérica, explosão respiratória de leucócitos e morfometria intestinais. Em um segundo ensaio conduzido nas mesmas condições ambientais, juvenis de pacu (2,0 ± 0,1 g; 15 peixes/aquário) foram alimentados por 59 dias com rações suplementadas pelos aditivos em questão, mais um grupo controle: -glucano de levedura 240 mg kg-1 de ração; B. subtilis comercial (109 UFC B. subtilis g-1) 0,100% de inclusão; tratamento simbiótico 240 mg de -glucano kg-1 + 0,100% de B. subtilis. Ao final do período experimental os peixes foram amostrados para determinação dos mesmos parâmetros anteriormente descritos. A inclusão dos níveis de -glucano e de Bacillus subtilis na dieta não influenciou o desempenho (P>0,05) de juvenis de pacu, mas peixes alimentados com a dieta contendo o B. subtilis consumiram mais ração (P<0,05). Não houve alterações nos parâmetros de morfologia intestinal (P>0,05), nem nos valores de explosão respiratória, atividade de lisozima, proteínas totais séricas e globulinas séricas. Quando os dois imunoestimulantes foram adicionados às dietas em combinação, também não foi observado efeito sobre os parâmetros de desempenho, explosão respiratória e atividade de lisozima, mas as proteinas totais séricas e as globulinas séricas foram positivamente influenciadas pelos tratamentos (P<0,05). As alturas de microvilosidades da porção cranial do intestino dos pacus alimentados com o tratamento simbiótico (-glucano + B. subtilis) foram maiores se comparadas ao grupo controle (P<0,05). Apesar de algumas respostas terem indicado efeito positivo sobre alguns parâmetros imunológicos e morfologia intestinal de pacus alimentados por uma combinação de -glucano + B. subtilis, não houve clara evidência que a administração simbiótica é superior à administração individual de cada imunoestimulante. / Stimulation of immune response by dietary supplements has already been proven effective in aquaculture. This work evaluates effects of dietary supplementation with the prebiotic -glucan, the probiotic Bacillus subtilis and their synbiotic combination on growth performance, immune responses, and intestinal morphology of pacu Piaractus mesopotamicus. In a first trial, a basal diet (32% crude protein; 3200 kcal kg-1) was supplemented with either -glucan (60; 120; 180; 240 e 300 mg kg-1) and B. subtilis (109 UFC g-1 of B. subtilis; 0.025%, 0.050%, 0.075%, 0.100%, 0.125%) levels and fed to groups of juvenile pacu (eight fish; 8.91 ± 0.3 g) stocked in 33 glass aquariums (70 L) for 75 days, setting up a totally randomized design trial (n=3). Fish were then weighed and had their blood drawn for determination of leucocytes respiratory burst activity, serum lysozyme activity and serum immunoglobulin concentration; intestinal tissue was sampled from two fish from each unit for micromorphology analysis. The inclusion of -glucan and Bacillus subtilis in the diet did not affect growth (P>0.05) of pacu juvenile, but fish fed diet containing levels of B. subtilis showed higher feed consumption (P<0.05). Intestinal morphology, respiratory burst activity, lysozyme activity, total serum proteins and total globulins were not affected in either inclusion of -glucan and Bacillus subtilis (P>0.05). In a second trial, a basal diet (34% crude protein; 3400 kcal kg-1) was supplemented with either -glucan (240 mg kg-1), B. subtilis (0.1 %) and -glucan + B. subtilis mix and fed to groups of juvenile pacu (15 fish; 2.0 ± 0.1 g) stocked in 16 glass aquariums (70 L) for 59 days, setting up a totally randomized design trial (n=4). Fish fed diets supplemented with -glucan + B. subtilis mix presented better growth rate, but it was not significantly different from other feeding groups. Serum total proteins and serum globulins (serum total proteins serum albumin) were affected by dietary supplements (P < 0.05); fish receiving the synbiotic treatment had higher serum globulin contents, but respiratory burst and lysozyme activity were not significantly affected. Dietary synbiotic mix altered the micromorphology of anterior intestine (P < 0.05), but the same effect was not observed in the mid and posterior intestines (P > 0.05). Dietary -glucan + B. subtilis synbiotic mix affected the intestinal ultrastructure of pacu, improved responses of immune system but did not significantly affect growth rate.

Orientador: Maeli Dal Pai Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T13:18:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_FernandaLosiAlvesde_M.pdf: 1065788 bytes, checksum: 0b390cd2e5f289613db5ad2ca384e439 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Nos peixes, o crescimento do tecido muscular ocorre por hipertrofia e/ou hiperplasia a partir da proliferação e diferenciação de mioblastos adultos ou células miossatélites, processos regulados pela expressão diferencial dos fatores de regulação miogênica (MRFs). O objetivo desse trabalho foi avaliar os mecanismos de crescimento muscular hiperplasico e hipertrofico e a expressão do MRF MyoD, na musculatura branca do pacu (Piaractus mesopotamicus), durante o crescimento. Exemplares juvenis (n=5) e adultos (n=5) de pacu foram anestesiados, sacrificados e determinados o peso corporal (g) e o comprimento total (cm). Fragmentos musculares brancos da região dorsal de cada exemplar, em cada fase estudada, foram congelados e imersos em nhexano congelado em nitrogenio liquido. Cortes histológicos (10 µm), obtidos em criostato, foram submetidos à  coloração hematoxilina-eosina para avaliação da morfologia e morfometria das fibras musculares brancas. Foi calculado o menor diametro de 100 fibras musculares brancas em cada animal de cada fase estudada. As fibras musculares foram distribuídas em classes, na dependência do seu diametro (<20, 20-50, >50 µm), para avaliar o grau de crescimento hipertrófico e hiperplá¡sico da musculatura. A expressão do MRF MyoD na musculatura branca foi analisada por Reação em Cadeia da Polimerase apos Transcrição Reversa (RT - PCR). Todos os produtos visualizados em gel de agarose a 1% foram clonados e sequenciados. A morfologia da musculatura dos exemplares juvenis e adultos foi semelhante, apresentando um padrão em mosaico caracterizado por fibras de diferentes diâmetros. Nos exemplares juvenis, foi observado um predomínio de fibras com diametro menor que 20 µm, caracterizando intensa hiperplasia. Nos exemplares adultos, houve o predomínio de fibras musculares com diâmetro maior que 50 µm, caracterizando intensa hipertrofia da musculatura. A expressão do RNAm para o gene MyoD foi significativamente maior na fase juvenil, se comparada com a fase adulta. Foi obtida a sequencia consenso parcial do gene MyoD (338 pares de bases) expresso na musculatura branca do pacu. Essa sequencia apresentou similaridade com as sequencias de MyoD de varias especies de vertebrados, incluindo peixes teleósteos. A expressão diferencial do MRF MyoD, observada nas fases de crescimento juvenil e adulta do pacu, possivelmente seja responsavel pelas diferenças observadas no padrão de crescimento, com a hiperplasia predominando nos juvenis e a hipertrofia, nos adultos / Abstract: Skeletal muscle growth in fish occurs by hypertrophy and hyperplasia and is dependent of the proliferation and differentiation of myogenic progenitor cells, events regulated by the diferential expression of the myogenic regulatory factors (MRFs). The aim of this study was to analyze the hyperplasia and hypertrophy processes and the MRF MyoD expression in the white muscle in pacu (Piaractus mesopotamicus) during growth. Juvenile (n=5) and adult (n=5) fishes were anaesthetized, sacrificed and the weight (g) and the total length (cm) were determined. White muscle samples from dorsal region of each sample, in each growth phase, were collected and and immersed in n- Hexane cooled in liquid nitrogen. Transverse sections (10 µm thick), obtained in a cryostat, were stained with Haematoxilin-Eosin to morphological and morphometric analysis. We calculated the smallest diameter from 100 white muscle fibres per animal in each group. White muscle fibers were grouped in three classes: <20, 20-50 and >50 µm to evaluate hypertrophy and hyperplasia in pacu white skeletal muscle. MyoD gene expression was determined by using RT-PCR. All PCR products visualized in 1% agarose gels were cloned and sequenced. Juvenile and adult pacu fish skeletal muscle showed similar morphology, with mosaic pattern characterized by fibers with different diameters. The great number of muscle fibers with diameter inferior 20 µm observed in juvenile fish confirms the active hyperplasic process. In adult fish, most fibers were over 50 µm diameter and denote the more intense muscle fiber hypertrophy. MyoD mRNA level in the juvenile fish was higher compared to adult fish. A consensus partial sequence for MyoD gene (338 bases pairs) was obtained. This sequence showed similarity with various vertebrate species, including teleost fishes. Differential expression of MyoD gene observed in white muscle of pacu possibly is related to differences in growth patterns during the phases analysed, with predominance of hyperplasia in juveniles and hypertrophy in adult fish / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Sarah Arana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T12:36:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peterlini_MarianaFrem_M.pdf: 4643636 bytes, checksum: cd0d6e62df40edebf5ce8326f7c80cd0 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A agricultura intensiva no Brasil tem aumentado o risco de contaminação dos recursos hídricos e dos organismos aquáticos por agroquímicos. Esse é o caso da atrazina, detectada em alta frequência em rios e córregos da região. Assim, neste trabalho, o pacu (Piaractus mesopotamicus) foi escolhido como bioindicador por sua importância econômica e ecológica em Bacias do Pantanal. As brânquias e o tegumento foram aqui avaliados como biomarcadores da toxicidade induzida por atrazina, uma vez que estes órgãos se encontram em contato direto com o ambiente aquático. Para avaliar a sensibilidade de alevinos de pacu e determinar a Concentração Letal Média (CL50) à atrazina foram conduzidos experimentos, em duplicata, em sistema estático por 96 horas, com as seguintes concentrações: 0,0; 13,2; 17,6; 22,0; 26,4; 30,8; 35,2; 39,6 mgL-1. A CL50 obtida para a atrazina foi de 28,58 mgL-1 (96h). Foram realizadas análises anatomopatológica, histopatológica qualitativa e semi-quantitativa para brânquias e análises anatomopatológica e histopatológica qualitativa para o epitélio tegumentar. Amostras de brânquia e de pele dorsal e ventral foram fixadas em Bouin e incluídas em parafina. Para o grupo controle não foi registrada qualquer alteração com os métodos empregados. Os alevinos expostos à atrazina apresentaram alterações comportamentais como: escurecimento da pele, boquejamento intenso e distúrbios motores, além disso, nesses aquários houve constante presença de muco na água; e, alterações anatomopatológicas, como: hiperemia na pele, dilatação da região ventral, presença de líquido no estômago e ascite sanguinolenta. Nas brânquias dos grupos tratados foram observadas as seguintes alterações morfológicas: edema e afastamento na região interlamelar, hipertrofia e hiperplasia na região interlamelar, destacamento do epitélio respiratório, hipertrofia de células do epitélio respiratório, congestão, telangiectasia e fusão de lamelas secundárias. Na pele dorsal e ventral dos grupos tratados não se observou alteração histopatológica. As alterações motoras observadas são provavelmente decorrentes do efeito neurotóxico da atrazina. As análises branquiais confirmam o comprometimento respiratório e de osmoregulação nesse órgão, sendo que a análise semi-quantitativa indicou a hipertrofia de células do epitélio respiratório como a lesão mais severa. Finalmente, as brânquias mostraram-se biomarcadores adequados na avaliação dos efeitos tóxicos da atrazina em pacu e o valor da CL50 sugere que a atrazina é levemente tóxica para o pacu, porém pelos demais resultados observados, se infere que só analisar a mortalidade não é o suficiente para determinar o dano causado por agrotóxicos em peixes, assim, recomenda-se o emprego de vários biomarcadores, como por exemplo, análise de vários outros órgãos. Os resultados obtidos reforçam a importância de estudos desta natureza, para embasar medidas ambientais preventivas e reguladoras quanto ao uso desse herbicida / Abstract: The intensive agriculture in Brazil has caused growing increase of pollution risks of hydric resources and the aquatic organisms by agrochemicals. This is the case of atrazine, detected in high frequency in the rivers and streams. Therefore, in this research, the pacu (Piaractus mesopotamicus) was chosen by bioindicator because of its great economic and ecological importance to the water ecosystem of the Pantanal region. The gills and skin were assessed here as biomarkers of induced toxicity by atrazine, considering that these organs are in direct contact with the aquatic environment. To evaluate the sensitivity of pacu fingerlings and determine the Median Lethal Concentration (LC50) by atrazine, experiments were conducted, performed in duplicate, in static system for 96 hours, with the following concentrations: 0.0; 13.2; 17.6; 22.0; 26.4; 30.8; 35.2; 39.6 mgL-1. The LC50 for pacu was 28.58 mgL-1 (96h). Anatomopathological, qualitative histopathological and semiquantitative histopathological analyses were performed for the gills, and anatomopathological and qualitative histopathological analysis were performed for the skin epithelium. Gills and dorsal and ventral skin samples were fixed in Bouin and processed for the inclusion in paraffin. The control group did not register any other alterations with the methods used. The fingerlings exposed to atrazine presented behavioral changes, such as: darkening of the skin, an increase in the frequency of gasping and motor disturbances. Furthermore, these aquariums presented the constant presence of mucus in the water; and, anatomopathological alterations, such as: skin hyperemia, dilation of the ventral region, the presence of liquid in the stomach and bloody ascites. In the gills of treated groups were found the following morphological alterations: edema and spacing in the interlamellar region, hypertrophy and hyperplasia in the interlamellar region, epithelial lifting, hypertrophy of respiratory epithelium cells, congestion, telangiectasis and fusion of the secondary lamellae. For dorsal and ventral skin of treated groups no histological alterations were observed. The motor alterations observed are probably due to the neurotoxic effects of atrazine. The gills analysis confirm respiratory and osmoregulatory compromise in this organ, noting that semi-quantitative analysis indicated the hypertrophy of respiratory epithelium cells as the most severe lesion. Finally, the gills showed adequate biomarkers in the assessment of toxic atrazine effects in pacu and the LC50 value suggests that atrazine is lightly toxic to pacu. However, by other results observed, it is concluded that analyzing the mortality index alone is not enough to determine the damages caused by agrotoxics in fishes, so the use of other biomarkers is recommended, like for instance, analysis some other organs. The results obtained reinforce the importance of research of this nature, in order to establish preventive and regulatory environmental measures regarding the use of this herbicide / Mestrado / Histologia / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-19Bitstream added on 2014-06-13T19:00:41Z : No. of bitstreams: 1 abimorad_eg_dr_jabo.pdf: 424023 bytes, checksum: 1e6737277cac346bea282786846d4e06 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste estudo foram avaliados os coeficientes de digestibilidade aparente (CDA) dos aminoácidos (AA), proteína e energia de seis alimentos utilizados em dietas para o pacu. Os ingredientes apresentaram altos valores de digestibilidade para todos os aminoácidos e diferenças foram detectadas entre os CDA individuais dos aminoácidos dos alimentos (P<0,01). O glúten de milho, o farelo de soja e a farinha de peixe foram os alimentos que apresentaram os maiores CDA para os aminoácidos, mas seus CDA da proteína não devem ser usados como indicativo para a digestibilidade médias dos AA. Dentre os alimentos, o glúten de milho apresentou alto CDA da energia. O escore químico dos alimentos mostrou que a lisina é o primeiro aminoácido limitante para a farinha de peixe, glúten de milho, farelo de trigo e milho e o segundo limitante para o farelo de soja. A metionina apresentou-se como primeiro limitante para o farelo de soja e a levedura. No entanto, o farelo de soja revelou-se a fonte de proteína de melhor qualidade por apresentar o maior índice de aminoácidos essenciais digestíveis (133,1). Os resultados deste estudo demonstraram que os valores de aminoácidos digestíveis podem ser utilizados na formulação de rações balanceadas para o pacu. / The apparent digestibility coefficients (ADCs) of amino acids (AA), protein, and energy in six feed ingredients (Brazilian fish meal, soybean meal, corn gluten meal, yeast, corn, and wheat meddling) were evaluated for pacu juveniles. In general, all ingredients showed high digestibility values for all AA, and differences among ADCs of individual amino acid were detected (P<0.01). Corn gluten, soybean, and fish meals had the highest ADCs of AA. The ADCs of protein in fish meal, yeast, and corn gluten meal should not be used as AA digestibility indicators, because those showed differences up to 6.7% between the ADCs of protein and AA. All ingredients had lower ADCs of energy than corn gluten meal (P<0.01). Lysine was the first limiting amino acid in fish meal, corn gluten meal, wheat meddling, and corn, and the second limiting amino acid in soybean meal, as methionine was the first limiting amino acid in soybean meal and yeast. However, the soybean meal was the best quality protein source, as it had the highest digestible essential amino acid index. This demonstrated that digestible amino acid values can be used to formulate practical diets for pacu, preventing potential deficiencies or excess that might cause environmental and economic losses.